La p o r a n k a s u s
SEORANG PENDERITA HEPATITIS KRONIK B DAN C DENGAN M UTASI PADA GEN P5 3KODON 2 4 9 PADA J ARINGAN HATI IW a y a n Ek aSa p u t r a , St e p h a nu sGu na wa n, Za i nu l Mu t t a q i n, So e wi g nj oSo e mo h a r j o . Ba g i a n I l muPe ny a k i t Da l a m FK Unu d / RSUD M a t a r a m
ABSTRACT CHRONI C HEP ATI TI S B AND C CASE W I TH M UTATI ON OF GENE P5 3 CODONE 249I N THE LI VER TI SSUE
Ro l eo fg e neP5 3 a sat u mo rs u p p r e s s o rg e nei n g e ne r a t i ng p r i ma r yl i v e rc a nc e ri sv e r yi mp o r t a ntp r i ma r i l yi n c e l l g r o wt hr e g u l a t i o n a nda p o p t o s i s . Byu s i ngASPCR me t h o d , t h eg e nemu t a t i o n c a n b er e c o g ni z e d . I t h a sb e e n r e p o r t e dac h r o ni c h e p a t i t i sB a ndC c a s ewi t he x p e r i e nc i ngmu t a t i o n o fg e neP5 3 Co d o ne249i n l i v e rt i s s u eo fa33 y e a r so l dma l ewi t ha nt i HCV p o s i t i v e , HBs Agp o s i t i v e , o n t h el i v e rb i o p s yi nd i c a t e do fc h r o ni ch e p a t i t i swi t h o u tc i r r h o t i cf e a t u r e sa ndma l i g na nc ys i g ns . On ASPCR e x a mi na t i o n f o u nd mu t a t i o n o n g e ne P5 3 c o d o ne 249 .Th i sf i nd i ng wa se x p e c t e dt ob ea n e a r l y wa r ni ng s i g n f o r o c c u r r e nc eo fp r i ma r yl i v e rc a nc e r , s ot h a t , e a r l yi nt e r v e nt i o n c o u l db ep e r f o r me d .
Ke y wo r d: Ge neP5 3, Ch r o ni cHe p a t i t i s
Pe r a n d a r ig e n p 5 3 y a ng me r u p a k a n t umor
PENDAHULUAN
s up res s or g en d a l a mt e r j a d i ny aKHPs a ng a t p e nt i ngb a i k Me nu r u tp e ne l i t i a n s e k i t a r9 0 9 5 % d a r iKHP ( k a nk e rh a t ip r i me r ) d i s e b a b k a n o l e hi nf e k s iv i r u s h e p a t i t i sB d a n C.Di p e r k i r a k a n a d as e k i t a r45 0j u t a p e nd u d u ks e b a g a i k r o ni kk a r i e r h e p a t i t i sB d a n 20 0j u t a
2
d a r i p e ng a t u r a n p e r t u mb u h a n s e l d a n p r o s e sa p o p t o s i s . I nf e k s i v i r u sh e p a t i t i sB d a n C me ng h a mb a t g e nt e r s e b u t d a ns e r i ngt e r j a d i mu t a s i p a d ag e nt e r s e b u t . Kh u s u sp a d a KHPs e r i ngt e r j a d i mu t a s i p a d ak o d o n 249g e n p 5 3, h a l i ni d i d u g as e b a g a i s a l a hs a t up e mi c ut e r j a d i ny aKHP .
1, 2
s e b a g a i k a r i e rh e p a t i t i sC.
Pr o s e st e r j a d i ny aKHPp a d ai nf e k s i v i r u sh e p a t i t i s 3
Ba d at i g at i ng k a t y a i t u: I ni s i a s i , Pr o mo s i , d a n Pr o g r e s i . Pa d at a h a pi ni s i a s i t e r j a d i i nt e g r a s i a nt a r ag e no m v i r u s h e p a t i t i sB k e d a l a m g e no m h e p a t o s i t . Pa d at a h a p p r o mo s i mu l a i t e r j a d i e k s p a ns i k l o na l d a r i s e l s e l y a ng t e l a ht e r a ng s a ng d a l a m t a h a pi ni s i a s i . Pa d at a h a p p r o g r e s is e l s e ly a ng t e l a h me ng a l a mit r a ns f o r ma s i k e g a na s a n a k a n me ng a l a mi r e p l i k a s i l e b i hl a nj u t . Pa d a p e nd e r i t ad e ng a n h e p a t i t i sB k e j a d i a n KHPb i s al a ng s u ng t e r j a d it a np a me l a l u ip r o s e ss i r o s i s ,t e t a p iu nt u k 3, 4
h e p a t i t i sC s e l a l ume l a l u i p r o s e ss i r o s i s .
142
Ad a ny amu t a s i g e np 5 3b a ny a kd i d a p a t k a np a d aj a r i ng a n h a t iy a ng me ng a l a mik e g a na s a n.Du l ud e ng a n me t o d a SSCP ( s ing les t rand edc onf ormat ional p olymorp h is m) mu t a s ig e n p 5 3 h a ny ad i d a p a t k a n p a d aj a r i ng a n g a na s d a n t i d a kb i s ad i d e t e k s ip a d aj a r i ng a n y a ng b e l u m me ng a l a mik e g a na s a n.Na mu n d e ng a n me t o d ey a ng l e bi h c a n ggi h s e pe r t i ASPCR po l y m e r a s e
c ha i n
re a c t ion)
( alleles pe c if ic
be be r a pa pe ne l i t i
me l a p o r k a nt e r d e t e k s i ny amu t a s i g e np 5 3p a d aj a r i ng a n 5 7
h a t i y a ngb e l u m me ng a l a mi k e g a na s a n.
J
Peny Dalam, Volume 8
Nomor 2 Mei 2007
Dengan metode AS-PCR terbuka kemungkinan
seperti air teh. Penderita tidak pernah menderita penyakit
untuk melakukan deteksi dini dari keganasan hati den-
yang sama sebelumnya. Penderita mempunyai kebiasaan
gan cara mendeteksi adanya mutasi gen p53 pada
minum-minuman beralkohol, kebiasaan memakai
penderita-penderita sirosis hati dan penderita hepatitis
narkoba dengan jarum suntik serta narkoba jenis yang
kronis. sehingga terbuka kemungkinan untuk melakukan
diminum. Tetapi sejak penderita sakit, penderita sudah
intervensi lebih dini terhadap kejadian KHP seperti
berhenti minum-minuman keras dan memakai narkoba.
misalnya pemberian obat anti virus lebih awal.
Pada pemeriksaan fisik didapatkan penderita den-
Saat ini telah tersedia banyak obat-obatan yang
gan kesadaran kompos mentis, keadaan umum baik, pada
digunakan pada pasien hepatitis kronik B dan C,
lengan penderita tampak tatto, status gizi penderita baik,
misalnya dengan interferon (IFN) alfa dan PEG IFN alfa,
tekanan darah 120/8 0 mmHg, nadi 8 0 x/menit regular,
analog nukleosida (lamivudin, ribavirin), dan analog
isi cukup, respirasi 18x/mnt, dengan temperatur aksila
nukleotida (adefovir, entekavir) sehingga makin banyak
36 ,2 C. pada pemeriksaan mata pada konjungtiva palpe-
dilakukan pengobatan anti viral untuk penderita-
bra tidak ada anemi, sklera tidak icterus, tidak ada odema
1,8 -11
0
Pengobatan ini
palpebra. Pada pemeriksaan THT tidak ditemukan
terbukti bisa menghambat progresifitas penyakit serta
kelainan. Pemeriksaan dada tampak simetris, suara nafas
menurunkan viral load pada sebagian besar pasien.
vesikuler, ronchi tidak ada, wheezing tidak ada. Suara
penderita hepatitis kronik B dan C.
Berikut ini adalah suatu kasus dengan hepatitis
jantung
S1
dan
S2
tunggal,
murmur
tidak
ada.
kronik B dengan HBsAg (+) dan hepatitis C dengan
Pemeriksaan abdomen tidak tampak distensi, bising usus
HCV-RNA (+) yang pada pemeriksaan AS-PCR terdapat
normal, hepar dan lien tidak teraba. Pemeriksaan
mutasi pada gen p53 pada kodon 249 dimana pada
ekstremitas hangat dan tidak ditemukan edema.
biopsy dari liver belum ada tanda-tanda keganasan atau
Dari pemeriksaan laboratorium tanggal 23 Nopember 2005 didapatkan SGOT 16 5 U/l, SGPT 119
chirrosis.
U/l, bilirubin total 0,8 4 mg/dl, bilirubin direk 0,13 mg/ KASUS
dl, glukosa puasa 8 5 mg/dl, kolesterol total 179 mg/dl, kolesterol LDL 140 mg/dl, kolesterol HDL 34 mg/dl,
Seorang laki-laki 33 tahun ras Cina pekerjaan
TG 107 mg/dl, asam urat 8 ,4 mg/dl.
wiraswasta datang ke Internis dengan keluhan kepala
Pada tanggal 26 Nopember 2005 diperiksa
terasa berat sejak 1 bulan. Kepala terasa berat ini teru-
HBsAg (+),
tama dirasakan setiap pagi hari dan mulai berkurang pada
ureum 29 mg/dl. Dari pemeriksaan darah lengkap
siang dan malam hari. Tetapi akhir-akhir ini kepala ter-
didapatkan WBC 12,3 /ul, HGB 14,9 g/dl, PLT 18 2 x10
anti HCV (+), serum kreatinin 0,9 mg/dl,
3
asa berat dirasakan hampir setiap hari. Penderita juga
/ul. USG abdomen didapatkan hasil liver ukuran
mengeluh lemah pada badan yang juga dirasakan sejak
membesar, permukaan rata tepi tajam, echoparenchyme
1 bulan. Terasa pegal-pegal pada seluruh badan kadang
meningkat difuse, tidak tampak nodul, liv er k idney con-
disertai flu, dan badan sumer-sumer. Kadang-kadang
trast (+), lain-lain kesan normal. Kesan USG adalah fatty
penderita juga mengeluh mual-mual tapi tidak sampai
liv er. Dari pemeriksaan imunoserologi tanggal 28
muntah. Terasa tidak enak di bagian ulu hati seperti ter-
Nopember 2005 didapatkan anti HCV reaktif, anti HBc
asa penuh berisi makanan. Penderita juga mengeluh
IgM non reaktif, HBeAg reaktif, anti HBe non reaktif.
perut kanan atas terasa sebah, tidak pernah mengeluh
Pada
mata kuning, tidak pernah mengeluh kencing warna
protromb in time 11,7 detik, INR 0,7.
Seorang Penderita Hepatitis Kronik B dan C dengan Mutasi pada Gen P53 Kodon 249 pada J aringan Hati IWayan Ek a S aputra, S tephanus Gunawan, Zainul Muttaq in, S oewignj o S oemoharj o
tanggal
30
Nopember
2005
pemeriksaan HCV-RNA (+)
143
1,61 x 10
3
IU/ml, pada tanggal 2 Desember dilakukan
hasil dari biopsi liver didapatkan kesan hepatitis kronik
Biopsi hati pemeriksaan mikroskopis didapatkan
dan belum ada tanda sirosis dan keganasan. Pada
jaringan hepar dengan portal triads, sel hepar dengan
pemeriksaan AS-PCR dilaporkan terjadi mutasi pada gen
balloning degeneration dan focal necrosis, lobolus hepar
p53 di kodon 249. Dengan adanya mutasi pada gen p53
sebagian besar masih baik, pada daerah portal sudah ada
ini pada jaringan hati yang belum mengalami keganasan
moderate piece meal necrosis dan moderate portal
apakah bisa sebagai petunjuk bahwa ada suatu proses
infiltrate of inflamatory cells (grade 3), sudah ada
hepatocarsinogenik yang nantinya penderita ini akan
fibrosis periportal dan belum ada portal to portal fibrosis
mengarah ke KHP. Pengobatan pun telah dilakukan den-
(stage 1 ). Sirosis tidak ada, tidak ada tanda-tanda
gan pemberian antiviral dan imunomodulator seperti
keganasan. Kesimpulan diagnosis PA adalah kronik
PEG interferon alfa 80 mg/minggu, ribavirin 6 tablet/
hepatitis (B dan C) with moderate piece-meal necrosis
hari, 3TC 100 mg/hari. Dalam masa pengobatan satu
dan moderate portal infiltrate (inflamatori grade 3 ) with
setengah bulan terjadi konversi anti HCV dari (+)
fibrotic portal tracts ( stage 1 ).
menjadi (-) atau tidak terdeteksi.
Pada jaringan biopsi hepar telah dilakukan ASPCR
dengan hasil adanya mutasi pada gen p53 pada
Secara umum pengobatan hepatitis kronik B dan C dengan antiviral bertujuan untuk.
3,9,12
a.
Menghentikan replikasi virus
b.
HBsAg dan HCV RNA yang negatif
minggu, ribavirin 6 tablet/hari, 3TC 100 mg/hr. Terapi
c.
Keluhan yang menghilang
ini diberikan selama 6 bulan. Selama masa pengobatan
d.
Proses peradangan hati yang membaik
penderita tidak menunjukkan intoleransi terhadap obat-
e.
Tingkat penularan yang kurang
obatan anti virus tersebut.
f.
Mencegah terjadinya sirosis dan KHP
g.
Masa harapan hidup yang meningkat
kodon 249. Penderita diterapi dengan PEG INF alfa 80 mg/
Berdasarkan evaluasi ulangan dalam 1 bulan terapi dilakukan pemeriksaan pada tangal 11 Januari 2006
Pada saat ini dikenal 2 kelompok terapi untuk
dengan HCV-RNA virus tidak terdeteksi. Pada tanggal
hepatitis virus kronik yaitu: kelompok imunomodulasi
6 Juli 2006 dilakukan pemeriksaan HBsAg (+), HBeAg
dan kelompok terapi antiviral. Untuk kelompok imunomodulasi salah satunya
(+), SGOT 25 U/L, SGPT 32 U/L. HCV-RNA kualitatif (-), tapi HBsAg masih (+)
yang sering dipakai adalah IFN. IFN adalah kelompok
dengan SGPT dan SGOT masih dalam batas normal
protein intra seluler yang normal ada dalam tubuh dan
sehinga pada tanggal 6 Juli 2006 3TC di hentikan
diproduksi oleh berbagai macam sel. Beberapa kasiat
pemberiannya. Pada evaluasi ulangan tanggal 7 Agustus
IFN adalah khasiat antiviral, imunomodulator, anti
2006 didapatkan kadar SGPT 91,9 U/L, SGOT 51,3 U/
proliferatif dan anti fibrotik. IFN tidak memiliki khasiat
L. Pemeriksaan USG abdomen kesan tidak jauh berbeda
antiviral langsung tetapi merangsang terbentuknya
dengan USG sebelumnya yaitu fatty liver.
berbagai macam protein efektor yang mempunyai kasiat 8-10
antiviral.
Untuk kelompok terapi antiviral yang sering
PEMBAHASAN Pada kasus ini didapatkan penderita dengan
digunakan adalah golongan lamuvudin (3TC = 3’ 8-
infeksi kronik hepatitis B dan C. Pada pemeriksaan la-
thiacytidine) yang merupakan suatu analog nukleosida.
boratorium dengan anti HCV yang (+), dengan HBsAg
11
yang (+), USG didapatkan kesan fatty liver. Berdasarkan
144
Pengobatan dengan antiviral pada kasus ini telah
J
Peny Dalam, Volume 8
Nomor 2 Mei 2007
sesuai dengan beberapa rekomendasi terapi antiviral
adalah protein E6 oleh HPV tipe 16 pada kanker serviks
pada virus hepatitis B dan C.
dan protein X oleh virus hepatitis B pada karsinoma hati.
Terapi untuk hepatitis kronik B dari pasien ini dengan
antiviral
hanya
penderita
peranan mutasi gen p53 dalam proses karsinogenik. Hal
menunjukkan HBeAg yang positif dan kadar VHB yang
ini antara lain disebakan karena dengan metode deteksi
5
diberikan
bila
Namun sampai sekarang belum jelas benar
kopi/ml). Disamping itu obat-obatan
gen p53 yang lazim dipakai seperti SSCP hanya dapat
antiviral juga diberikan bila ALT > 2 kali harga normal
mendeteksi mutasi tersebut pada jaringan yang sudah
tinggi (diatas 10
12,13
tertinggi.
Pada kasus ini didapatkan dengan HBeAg
mengalami kanker.
(+), HBsAg (+), ALT > 2X normal.
Peng et al.
5
pada tahun 1999 melaporkan bahwa
Pertimbangan terapi anti viral pada pasien
dengan metode AS-PCR, mutasi gen p53 dapat dideteksi
hepatitis C hanya diberikan kalau penderita HCV RNA
pada jaringan yang belum mengalami KHP terutama
(+) serta peningkatan ALT diatas 2 kali harga normal.
pada kasus-kasus hepatitis kronik dan sirosis.
Pasien anti HCV (+) belum tentu HCV RNA nya juga
awal dari mutasi gen p53 pada kasus hepatitis kronik B
positif. Anti HCV yang positif dengan HCV RNA yang
dan C mungkin akan mengubah protokol pemberian obat
negatif menunjukkan adanya infeksi hepatitis C dimasa
anti virus yaitu dengan mempertimbangkan parameter
12-14
5
Deteksi
Pada kasus ini didapatkan
baru berupa status p53 disamping parameter biokimia
dengan Anti HCV (+), HCV RNA (+), ALT > 2X nor-
dan virologik. Sementara itu dengan mempelajari
mal.
hubungan antara mutasi dan ekspresi gen p53 dengan
lalu (post infection).
Adanya infeksi gabungan virus hepatitis B dan C
parameter-parameter virologik dan biokimia mungkin
1
akan dapat menjelaskan proses munculnya KHP pada
meningkatkan risiko kejadian sirosis hati dan KHP.
Risiko kejadian KHP pada penderita hepatitis kronik B
penderita hepatitis kronik B dan C.
5-7
sendiri 25 – 35 kali lebih tinggi dibanding akibat
Pada kasus ini secara histopatologi belum terjadi
keradangan non virus. Tapi dengan adanya gabungan
shirrossis dan KHP tapi sudah ada mutasi pada gen p53
infeksi ini kejadiannya bisa mencapai 130 kali lebih
di kodon 249. Apakah hal ini bisa sebagai peramal akan
tinggi.
mengarah ke kejadian KHP sehingga perlu dilakukan
1,2
Banyak penelitian yang menunjukan bahwa pada
intervensi lebih dini. KHP sangat berkaitan dengan viral load. Semakin
50-60% penderita KHP menunjukkan adanya mutasi gen p53 terutama dalam bentuk mutasi dari AGGAGT pada kodon 249 gen tersebut. Gen p53 mengkode protein p53 yang mempunyai 3 fungsi utama dalam sel yaitu reparasi DNA, apoptosis, dan penghambat pertumbuhan sel. Ketidak mampuan melaksanakan fungsi tersebut akan berakibat kacaunya pertumbuhan sel yang 5-7
selanjutnya menjelma menjadi sel kanker.
Terdapat 2
mekanisme tidak berfungsinya p53 yaitu pada level ge-
tinggi viral load kejadian KHP akan semakin meningkat. Maka viral load ini harus diturunkan dengan terapi antiviral yang efektif Pemberian kombinasi terapi antiviral pada hepatitis B yaitu pemberian IFN dan lamivudin tidak memberikan manfaat berlebih dibandingkan dengan terapi tunggal interferon saja. Tapi dengan adanya infeksi gabungan
protein
terjadi
inaktivasi
fungsi
p53
hepatitis
C
pemberian
terapi
kombinasi beberapa anti viral bisa dipertimbangkan.
netik terjadi mutasi titik dalam sekuens gen p53 dan pada level
dengan
Tujuan terapi antiviral pada kasus ini adalah untuk
oleh
mengurangi viral load secara cepat pada pasien yang
onkoprotein. Beberapa protein onkogen yang dihasilkan
sudah mengalami mutasi pada gen p53 di kodon 249
oleh virus dan diketahui mempengaruhi fungsi p53
dengan harapan kejadian KHP bisa di cegah.
Seorang Penderita Hepatitis Kronik B dan C dengan Mutasi pada Gen P53 Kodon 249 pada Jaringan Hati I Wayan Eka Saputra, Stephanus Gunawan, Zainul Muttaqin, Soewignjo Soemoharjo
9,10,12,14
145
RINGKASAN
4.
Wanless IR, Nakashima E, Sherman M. Regresion of human cirrhosis: morfologic features and the
Telah dilaporkan seorang laki-laki 33 tahun den-
genesis of incomplete septal cirrhosis. Arch Pathol
gan hepatitis kronik B HBsAg (+) serta HBeAg (+) dan hepatitis
C
dengan
HCV
RNA (+).
Ya n g
pada
Lab Med 2000; 124(11):15999-607. 5.
pemeriksaan Patologi Anatomi didapatkan gambaran
Peng XM, Yao CL, Chen XJ. Codon 249 mutations of p53 gene in non-neoplasticliver tissues.
berupa kronik hepatitis B dan C dengan moderate piece-
World J of Gastroenterology 1999; 5(4):324-6.
meal necrosis dan moderate portal infiltrate grade 3 dengan fibrotic portal tract stage 1 sesuai kriteria
6.
Metavir tetapi belum ada tanda-tanda sirosis atau
tocellular carcinomas from Korea. Experimental
keganasan.
and Molecular Medicine 1996; 28(4): 173-9.
Pada kasus ini dari sediaan beku biopsy hepar dengan metode AS-PCR telah tejadi mutasi pada gen p53
7.
di kodon 249. Penderita telah mendapatkan terapi PEG
hepatitis B viral gene expression. J Biol Chem.
Dengan dijumpai adanya infeksi gabungan hepatitis kronik B dan C, HBsAg (+), HBeAg (+), anti HCV (+), HCV RNA (+), adanya mutasi pada gen p53 diharapkan
bisa
sebagai
Lee H, Kim HT, Yun Y. Liver-spesific enhancer II is the target for the p53-mediated inhibition of
IFN, lamivudin dan ribavirin
ini
Park YM, Yoo YD, Paik SY, Kim BS, Tabor E. Mutation of tumor suppression gene p53 in hepa-
diagnosa
dini
1998; 31(273): 19786-91. 8.
hepatitis B focus: pegylated interferon alfa 2 a
dari
for treatment strategy and aiming sustained re-
kemungkinan akan terjadinya KHP. Karena viral load
mission. Denpasar: SUDEMA 2; 2006.p.58.
yang tinggi merupakan faktor risiko tinggi untuk terjadi KHP. Sehingga pencegahan bisa dilakukan lebih dini
9.
Abdurachman SA. Hepatitis virus kronik. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Jilid I. Edisi ketiga.
seperti pemberian anti virus yang efektip lebih awal
Jakarta: Balai Penerbit FKUI; 1996p. 262-70.
dengan harapan bisa mengurangi viral load dalam 10.
jaringan hati.
Poernomo BS. Interferon treatment for chronic
Hernomo K. Long-term treatment of chronic HVB with antiviral drug. Surabaya: Pusat Gastro Hepatologi Surabaya Fakultas Kedokteran Uni-
DAFTAR RUJUKAN
versitas Airlangga, RSUD Dr Sutomo Surabaya 1.
cinoma. The N Eng J Med 2004; 7(351):1567-0. 2.
SUDEMA 2; 2006.p.53-6.
Wands, Jack R. Prevention of hepatocellular car11.
Hauster SL, Fauci AS, Longo DL, Jameson JL,
Tao C, John ML. Evaluation of quantitative PCR
editors. Cirrosis and its complications. Harrison’s
and branched-chain DNA in sera from hepatocel-
th
principles of internal medicine 16
lular carcinoma and liver transplant patients. J
12. Soewignjo S, Gunawan S. Hepatitis virus B dan karsinoma hepatoseluler. Hepatitis virus B. Jak-
146
ed. New York:
Mc Graw Hill Co; 2005.p.1858-69.
Clin Microbiol. 2000; 38(5):1977-80. 3.
Chung RT, Podolsky DK. In: Braunwald E,
Dienstag JL, Isselbacher KJ. In: Braunwald E, Hauster SL, Fauci AS, Longo DL, Jameson JL, editors. Chronic hepatitis. Harrison’s principles
arta: Penerbit Buku Kedokteran EGC; 1999.p.86-
of internal medicine. 16
7.
Hill Co; 2005.p.1844-55.
th
J
ed. New York: Mc Graw
Peny Dalam, Volume 8
Nomor 2 Mei 2007
13.
14.
Soewignjo S. Kesalahan unum (common mistake) dalam pengobatan anti viral pada hepatitis kronik B dan C. Denpasar: SUDEMA2; 2006.p.101-5. Hu K. A practical approach to management of chronic hepatitis B. Int J M 2005;4:30-50.
A2 5’ GGGTC AGCGG CAAGC AGAGG
14175-
14156 Produk amplifikasi kemudian dianalisa pada 2% gel agarose dan diamati dengan pengecatan ethidium bromide dan penyinaran UV.
TATA CARA PERLAKUAN JARINGAN BIOPSI HATI DENGAN METODE AS-PCR Karakteristik kasus Bahan berupa biopsi hati beku yang merupakan biopsi hati dari pasien pengidap virus hepatitis kronik B dan C yang dilakukan di Klinik Biomedika Mataram. Ekstraksi DNA DNA jaringan hati diekstrak dengan menggunakan larutan TriZol (Invitrogen). Untuk jaringan dalam blok paraffin terlebih dahulu dilakukan deparafinisasi menggunakan xylol dan ethanol, kemudian diperlakukan dengan proteinase K (Peng, 1999).
Biopsi Hati dengan histokimia
PCR alela spesifik Prosedur AS-PCR merupakan modifikasi dari teknik semi nested PCR sebagaimana dilakukan oleh Peng (1999). Mula-mula dilakukan PCR menggunakan primer S1 dan A1. Kemudian produk dari PCR I tersebut direamplifikasi menggunakan nested primer S2 dan A2 atau S3 dan A2. Adapun urutan susunan primer dan posisinya adalah sebagai berikut S1 5’ GGCGA CAGAG CGAGA TTCCA 13890-13909 A1 5’ GATTC TCTTC CTCTG TGCGC 14534-14515 S2 5’ TGGGC GGCAT GAAACGGAGT 14055-14074 S3 5’ TGGGC GGCAT GAAACGGAGG 14055-14074
Seorang Penderita Hepatitis Kronik B dan C dengan Mutasi pada Gen P53 Kodon 249 pada Jaringan Hati I Wayan Eka Saputra, Stephanus Gunawan, Zainul Muttaqin, Soewignjo Soemoharjo
147
