Diagnostika infekce Chlamydia trachomatis pomocí molekulárně genetické metody real time PCR nejen u pacientek z gynekologických zařízení Mgr. Klára Vilimovská Dědečková, Ph.D. Synlab genetics s.r.o. Molekulární detekce patogenů
[email protected] www.synlab-genetics.cz
Chlamydia trachomatis • Intracelulární bakteriální patogen • Nejběžnější sexuálně přenosná bakterie • Příznaky infekce: bolest při močení uretritida horečka bolesti v podbřišku • Neléčení infekce může vést ke sterilitě • Obtížné laboratorní stanovení – – –
kultivace - neprovádí se z důvodu dlouhé inkubace na tkáňových kulturách serologické stanovení – nevypovídá o aktuálním stavu, přítomnosti/nepřítomnosti bakterie v buňkách, zkřížená reaktivita molekulárně genetické vyšetření – detekce DNA bakterie – metoda real time PCR (polymerázová řetězová reakce) – vyšší citlivost, rychlost, vyšší specificita
Metodika vyšetření Odběr klinického materiálu u lékaře
Kvantitativní detekce DNA C. trachomatis pomocí real time PCR
(moč, výtěr, ejakulát)
Izolace DNA C. trachomatis
Real time PCR cykler Rotorgene (Qiagen) BioRobot M48 (Qiagen) MagAttract Mini M48 kit (Qiagen) Odběrová sada: remel MicroTest (Thermo Scientific) Odběrová nádoba na moč: Sarstetd
Real time PCR C. trachomatis • Primery a sonda cílené na plazmid C. trachomatis • Zmožení úseku DNA (amplifikace) během 50 cyklů složených ze 3 kroků Standard o známé koncentraci • Amplifikace DNA se projeví změnou fluorescence v určitém cyklu Pozitivní záchyt • Kvantitativní výsledek – přepočet dle kalibrační křivky na počet genomických kopií v 1 ml vzorku Negativní Negativní • S každou reakcí provádíme: kontrola vzorek kontrolu odběru vzorku (gen albumin) kontrolu PCR reakce (standardní vzorek, pozitivní kontrola) kontrolu laboratorní kontaminace (negativní kontrola)
Cíl studie • Shrnout výsledky vyšetření detekce C. trachomatis pomocí real time PCR za období 1. ledna 2013 – 31.12.2015
Populace pacientů ve studii • • • • •
Gynekologické ambulance, nemocnice Urologické ambulance Dermatovenerologické ambulance Zdravotnická zařízení zabývající se léčbou neplodností Zařízení hledající potenciální dárce buněk a tkání – zákon ukládá každého potenciálního dárce vyšetřit na pohlavně přenosné onemocnění
• • • •
Celkem: 612 pracovišť, 213 pracovišť pouze 1x Věk: 5 – 82 let Průměr: 37 let Medián: 34 roků
Rozložení pracovišť dle krajů 12 153 vyšetření
14 IČP 33 IČP 619
2610
117 IČP 258
27 IČP
11 IČP
1699 vyšetření
291
7 IČP
2 30
9
21 IČP
937
14 IČP
2 IČP
1 IČP
651
98 IČP 1320
9 IČP 11
160 IČP interní číslo pracoviště
Výsledky 8000 7000 6000
5000 4000 3000 2000 1000
2013
2014
2015
6000
5000
4000
3000
2000
1000
2013
počet vyšetření real time PCR
počet vyšetření real time PCR
8000
počet vyšetření real time PCR
Výsledky
7569
7000 6351 6572
2014 2015
6000
5000
4000
3000
2000
1000
2013 6351
2014
počet vyšetřených pacientů
6688
počet vyšetření real time PCR
počet vyšetřených pacientů
počet vyšetření real time PCR
7000
počet vyšetřených pacientů
8000
počet vyšetření real time PCR
Výsledky
7569 6572
6074
5667
2015
6000
5000
4000
3000
2000
1000
2013 332 5667
2014 291 2015
pts s C. trachomatis
6351
počet vyšetřených pacientů
6688
počet vyšetření real time PCR
pts s C. trachomatis
počet vyšetřených pacientů
počet vyšetření real time PCR
pts s C. trachomatis
7000
počet vyšetřených pacientů
8000
počet vyšetření real time PCR
Výsledky
7569 6572
6074
264
6000
5000
4000
3000
2000
1000
2013
ženy s C. trachomatis
332 176 2014 291 162 2015
pts s C. trachomatis ženy s C. trachomatis
6351
počet vyšetřených pacientů
6688
počet vyšetření real time PCR
ženy s C. trachomatis
5667
pts s C. trachomatis
počet vyšetřených pacientů
počet vyšetření real time PCR
pts s C. trachomatis
7000
počet vyšetřených pacientů
8000
počet vyšetření real time PCR
Výsledky
7569 6572
6074
264 164
6000
5000
4000
3000
2000
121
ženy s C. trachomatis
pts s C. trachomatis
7000
počet vyšetřených pacientů
8000
počet vyšetření real time PCR
Pacienti s neplodností (2013-2015) 7602
6948
1000 70
1500
1000
500
ženy s C. trachomatis
1078
dárci s C. trachomatis
počet dárců
2000
počet vyšetření real time PCR
Vyšetřování dárců (2013-2015)
1879
73 62
Závěr • Každý rok jsme diagnostikovali infekci C. trachomatis téměř u 300 pacientů, více u žen. • Problémy s neplodností pacientů nebyly u většiny způsobeny infekcí C. trachomatis. • Ze zákona povinné vyšetřování potenciálních dárců na C. trachomatis má význam. • 73 potenciálních dárců mělo infekci C. trachomatis
Poděkování
Všem lékařům za projevenou důvěru. Pořadatelům za příležitost prezentovat naše výsledky.
