Biológiai laboratóriumok munkabiztonsága Dr Ujfalusi Anikó Laboratóriumi Medicina Intézet
Biobiztonság Biosecurity (biobiztonság) Olyan intézményes (pl. jogszabályok, kezelési útmutatók) és személyes biztonsági lépések együttese, amelyek az egészséget fenyegető biológiai veszélyek megelőzését vagy elhárítását szolgálják.
Részterületek • élelmiszerbiztonság
• ivóvíz biztonság • környezetbiztonság • járványbiztonság • biológiai laboratóriumok munkabiztonsága (vagy biosafety) • bioterror elhárítás • katonaorvosi tevékenység biológiai fegyverek háborús alkalmazása esetén
Biosafety szintek meghatározása Centers for Disease Control and Prevention (CDC) és a National Institutes of Health (NIH) határozta meg. World Health Organization (WHO) és Európai Unió (EU) is ezt használja.
A laboratórium besorolása az alábbi tényezőktől függ: • • • •
milyen biológiai ágenssel dolgoznak milyen munkafolyamatok és eljárások zajlanak milyen védőeszközök szükségesek milyen a laboratórium felszereltsége
Ezek alapján négy szintet határozunk meg: • • • •
basic - Biosafety Level 1 (BSL 1) basic - Biosafety Level 2 (BSL 2) containment - Biosafety Level 3 (BSL 3) maximum containment - Biosafety Level 4 (BSL 4)
Alapvető „biosafety” felszerelések
•pipettákhoz kiegészítők - a szájjal pipettázás elkerüléséhez •Biological safety cabinet (BSC) •csavaros kupakos csövek és üvegek •autokláv •műanyag eldobható pasteur pipetták
http://www.biologicalsafetycabinet.co.uk/
Biológiai biztonsági fülkék Bio Safety Cabinets (BSC) Fülke típusa
Védeni kívánt cél
Személyzet
Anyag
Laboratórium
Környezet
Class I.
Igen
Nem
Igen
BSL 1-3
Class II. (A1,A2,B1,B2)
Igen
Igen
Igen
BSL 1-3
Class III.
Igen
Igen
Igen
BSL 4
Class I.
Class II. • Class II. A1 • levegő be: laborból és recirkulálva HEPA szűrőn át • 30% levegő ki: HEPA szűrőn át • a beszívott levegő 70%-a recirkulál HEPA-n keresztül
• Class II. A2 különbség: • negatív nyomású munkatér a laborhoz képest • nem a laborba áramlik a levegő
Class II. • Class II B1 • levegő be: laborból és recirkulálva HEPA szűrőn át • levegő ki: HEPA szűrőn át • Beszívott levegő 30%-a cirkulál vissza HEPA-n keresztül
• Class II B2 • Beszívott levegő 0%-a cirkulál vissza HEPA-n keresztül
Class III.
Egyéni védelmet szolgáló felszerelések, intézkedések
• Laboratóriumi ruha vagy köpeny viselése szükséges a laboratóriumi • • • • • • • •
munkaterületeken Megfelelő kesztyűt kell viselni mindazon műveleteknél, ahol vérrel, testfolyadékokkal, potenciális fertőző anyaggal, fertőzött állatokkal való érintkezés lehetséges. A használat után a kesztyűt aszeptikusan kell lehúzni, és kezet kell mosni. A személyzet mindig mosson kezet a fertőző anyagokkal és állatokkal való műveletek után, valamint mielőtt elhagyják a laboratóriumi munkaterületeket Védőkesztyűt, arcvédő pajzsot, vagy egyéb védőeszközt kell viselni, amikor a szemet vagy arcot meg kell védeni fröcsköléstől, tárgyak hatásától, mesterséges UV sugaraktól Tilos a védőruházatot a laboratóriumon kívül használni (pl. irodában, étkezőben, könyvtárban, WC-n) A használatban lévő védőruházatot ne tartsuk együtt az utcai ruhával Csak zárt lábbeli használható a laboratóriumban Ételt, italt tárolni, enni, inni, dohányozni, kozmetikai szereket használni, kontaktlencsét ki-betenni tilos a laboratóriumban A laboratóriumi ruházatot, amely a laborban már használva volt, nem szabad együtt tárolni az utcai ruházattal
Laboratóriumi eljárások
• Szájjal pipettázni szigorúan tilos! • Semmit ne vegyünk a szánkba a laborban, a címkéket ne nyelvünkkel nedvesítsük! • Minden technikai lépést úgy végezzünk, hogy minimális legyen az aerosol és • •
• •
• •
cseppképződés Tűt és fecskendőt csak injektálásra és testnedv vételére használjunk Minden kiömlést, balesetet, a fertőző anyaggal történt valódi és potenciális expozíciót a vezetőnek jelenteni kell, az írásos dokumentumokat meg kell őrizni! Ki kell dolgozni (és szükség esetén alkalmazni kell) egy a szennyeződés feltakarítására szóló eljárást A folyékony hulladékokat fizikai, vagy kémiai úton fertőtleníteni kell, mielőtt a csatornába öntenénk Azokat a jegyzőkönyveket, papír alapú dokumentumokat, melyeket a kísérletsorozat végén kiviszünk a laboratóriumból, meg kell óvni a szennyeződéstől Autoklávok, BSC-k és hasonló felszerelések validálása, és annak rendszeres frissítése
A laboratórium tervezésének egyes szempontjai
• Legyen elegendő terület a munkavégzéshez, a tisztítási eljárások elvégzéséhez, a • • • •
•
műszerek, berendezések elhelyezéséhez, a napi használathoz szükséges anyagok tárolására A falaknak, mennyezetnek és padozatnak simának kell lennie, hogy könnyen tisztíthatók legyenek. Ne eressze át a folyadékokat és legyen ellenálló a laboratóriumban alkalmazott kémiai szereknek és fertőtlenítőknek. A padló legyen csúszásgátolt felületű. A laborasztalok legyenek vízállóak, rezisztensek savra, lúgra, szerves oldószerekre, fertőtlenítőkre, és mérsékelten a hőre Legyen kellő fényerejű megvilágítás, de kerüljük a vakító, tükröződő fényeket Legyen megfelelő vészvilágítás áramszünet esetére, a biztonságos menekülés biztosítására Kívánatos, hogy legyen tartalék áramforrás (generátor), hogy áramszünet esetén is megfelelő védelmet jelentsenek az inkubátorok, biobiztonsági fülkék, hűtő- és fagyasztószekrények
Laboratóriumi munkaterületek
•A laboratóriumot tartsuk tisztán, rendben, csak a munkavégzéshez szükséges anyagokat tartsuk bent A munkafelületeket meg kell tisztítani bármely veszélyes anyag kispriccelése után, valamint a munkanap végén Minden szennyezett anyagot, mintát, stb. fertőtleníteni kell kidobás, vagy újra felhasználás előtt A csomagolásnak és szállításnak meg kell felelnie az országos és/vagy nemzetközi előírásoknak Ha ablak van a laboratóriumon, gondoskodni kell a rovarok távoltartásáról
• •
• •
Oktatás Laboratóriumi dolgozók oktatása rendkívül fontos, melynek célja, hogy
• a dolgozó legyen jól informált a laboratóriumi veszélyek felismerésében és kezelésében (pl. aerosolok belélegzése, fertőzés szájon át, fertőzés bőrön át – szúró- és vágóeszközök, harapás és karmolás állatok kezelésekor, munkavégzés vérkészítményekkel, stb.)
• a dolgozó legyen kiképezve a biztonságos munkavégzési folyamatokra és alkalmazza azokat
• a dolgozó legyen kiképezve az egyéni védőeszközök használatára és legyen gyakorlata az alkalmazásukban
Laboratóriumi dolgozók orvosi felügyelete BSL-1 Kicsi az esély a fertőzésre, de ennek ellenére minden laboratóriumi dolgozónak át kell esnie egy foglalkoztatást megelőző egészségügyi ellenőrzésen, ahol a dolgozó egészségügyi történetét is rögzítik. Betegségek vagy laboratóriumi balesetek azonnali jelentése kívánatos.
BSL-2 A foglalkoztatás előtti egészségügyi ellenőrzés kötelező! A dolgozó egészségügyi történetét vezetni kell, és célzott foglalkozásegészségi értékelést kell végezni! A betegségeket és hiányzásokat nyilván kell tartani, ami a laboratórium vezetőségének feladata. Fogamzóképes korú nőket tájékoztatni kell arról, hogy milyen kockázatokat hordozhat a megszületendő gyermekekre egyes mikroorganizmusoknak való kitettség (pl. rubeóla vírus). A magzat védelmében hozott intézkedések nagymértékben függenek a mikroorganizmusoktól.
• •
BSL-3 A laboratóriumokban dolgozók rendszeres orvosi vizsgálata – a felvételkor végzett alkalmassági vizsgálaton túl – kötelező. A vizsgálatnak a munkakörre jellemző fizikális vizsgálatokra is ki kell terjednie. Javasolt egy orvosi kártya kibocsátása, mely „zseb-méretű” fényképes kártya tartalmazza azt a tényt, hogy az illető egy BSL-3 laboratóriumban, fertőzést okozó biológiai ágensekkel dolgozik. A kártya ugyancsak tartalmazza a munkáltató által kijelölt kapcsolattartó nevét, elérhetőségét is.
•
A biológiai laboratóriumok biztonságtechnikai szintjei Biosafety Level 1 (BSL-1) Alapszintű védelmet biztosító laboratórium (a legtöbb kutató és a klinikai laboratórium ). Olyan biológiai anyagok, amelyek egészséges embereknél nem okoznak betegséget.
Biosafety Level 2 (BSL-2) Olyan vizsgálatok kivitelezésére alkalmas laboratóriumok, melyek mérsékelt kockázatú kórokozók okozta emberi megbetegedések vizsgálatát végzik. A betegségek változó súlyosságúak lehetnek. Mérsékelt veszélyt jelentenek a dolgozók és a környezet számára. A legtöbb sejtkultúra laboratórium legyen legalább BSL-2, de a pontos követelmények függnek attól hogy milyen sejtvonalat használnak, és a végzett munka típusától is.
Biosafety level 3 (BSL-3) Azok a laboratóriumok, amelyek olyan őshonos és egzotikus kórokozókként ismert mikrobák, biológiai minták vizsgálatával foglalkoznak,amelyek inhalációval terjednek, ezáltal súlyos, potenciálisan halálos megbetegedéseket okozhatnak . BSL 1 és BSL 2-nél megfogalmazott irányelveken kívül:
• A bejárati ajtónál nem elegendő a biológiai veszély nemzetközi jelölését kitenni, hanem a részletes információt tartalmazó formát (kitöltve!) kell alkalmazni
• Védőruházatnak nem alkalmas az elölgombolós (alkart nem védi), csak olyan, ami teljes testfelületet védi, fejfedő, szakállvédő, cipővédő vagy dedikált cipő. Ha szükséges utcai ruha teljes eltávolítás, és dedikált munkavédőruha. Szennyezett ruhát fertőtleníteni kell mosás előtt.
• Potenciálisan fertőző anyaggal végzett minden nyitott műveletet biobiztonsági fülkében, vagy egyéb elsődleges elkülönítő eszközben kell végezni!
• Légzésvédő eszköz alkalmazás szükséges egyes munkafolyamatoknál, vagy állatokkal való munkavégzésnél.
BSL-3
Biosafety level-4 (BSL-4) A BSL-4 laboratóriumok olyan egzotikus kórokozókkal/ vizsgálati mintákkal dolgoznak, melyek nagy kockázatú, életet veszélyeztető, cseppfertőzéssel terjedő betegségeket okoznak, akár járvány formájában, ellenük semmilyen kezelés nem áll rendelkezésre. Ezek a minták nagyfokú elszigetelést igényelnek. • A laboratórium szeparált épületben vagy zónában helyezkedik el, külön levegőztető és dekontamináló rendszerrel. • Valamennyi laboratóriumi tevékenységet Class III BSC-ben kell végezni vagy Class I/II BSC-ben és teljes testet fedő, pozitív nyomású, levegővel felfújt védőruhában. High efficiency particulate air (HEPA) filters Efficiency from 99.95 % to 99.99 % are usually due to manufacturing techniques. Depending upon its quality, a HEPA filter is able to trap from 9,995 to 9,999 of every 10,000 particles Ultra low particulate air (ULPA) filters They are able to trap from 99,995 to 99,999 of every 100,000 particles ULPA - this is at least 10 times better than HEPA filtration !!!
BSL-4
Biosafety in microbiology laboratory By Dr, T.V.Rao
Hulladékkezelés Fertőzött anyagok és hulladékok kezelési és ártalmatlanítási eljárásai: o Nem kontaminált hulladék - újra használható, újrahasznosítható, vagy háztartási hulladékként kezelhető o Kontaminált “éles” (injekciós tű, szike, kés, üvegszilánk) lyukadás álló tárolóban o Kontaminált anyag autokláv általi fertőtlenítése után újra használható vagy újrahasznosítható o Kontaminált anyag autokláv általi fertőtlenítésre és eldobásra o Kontaminált anyag közvetlen elégetésre
Molekuláris genetikai laboratórium A munkafolyamat során a mintával csak „egyirányú” közlekedés lehet: Pre-PCR helyiség
PCR helyiség
Post-PCR helyiség
2 1
3
4
4
