LAMPI RAN
54
Lampiran 1 Dasar Pemilihan Bahan Baku Buah Nanas
Bahan baku dalam pembuatan sari buah nanas adalah buah nanas. Pemilihan bahan didasarkan pada ciri-ciri buah nanas, yang meliputi faktor bentuk, warna, rasa, dan kenampakan. Adapun ciri-ciri buah nanas adalah sebagai berikut: I. Bentuk
silindris dengan mata buah agak datar
2. Wama
hijau kekuning-kuningan
3. Rasa
agak asam
4. Kenampakan
buah utuh, tidak memar
Gam bar buah nanas tampak dalam Gambar 1 di bawah ini.
Gambar 1. Buah Nanas
55
Lampiran 2 Komposisi dan Cara Pembuatan Media dan Larutan
1. Media de Man, Rogosa, Sharpe bouillon (MRS) Broth Komposisi: 10 gram/liter Bacteriological peptone 8 gram/liter Meat extract 4 gram/liter Yeast extract 20 gram/liter Dextrose I gram/liter Tween 80 2 gram/liter Dipotassium phosphate 5 gram/liter Sodium acetate 2 gram/liter Amonium citrate 0,20 gram/liter Magnesium sulfate 0,05 gram/liter Manganese sulfate Cara pembuatan:
52 gram MRS Broth
t Dilarutkan da1am 1000 ml aquadest
Dipanaskan hingga larut
Sterilisasi (121°C, 15 lbs/inch2 , 15 menit) MRS Btoth Steril 2. Media de Man, Rogosa, Sharpe bouillon (MRS) Agar Komposisi: Bacteriological peptone 10 grarn!liter Meat extract 8 gram/liter Yeast extract 4 gram/liter Dextrose 20 gram/liter Tween 80 1 gram/liter Dipotassium phosphate 2 gram/liter Sodium acetate 5 gram/liter Amonium citrate 2 gram/liter Magnesium sulfate : 0,20 gram/liter Manganese sulfate 0,05 gram/liter Bacteriological agar 10 gram/liter
56
Cara pembuatan:
62 gram MRS Agar
•
Dilarutkan dalam 1000 ml aquadest
Dipanaskan hingga larut
2
Sterilisasi (121°C, 15lbs/inch , 15 menit)
MRS Agar Steril
3. Media Air Pepton 0,1% (dari meat peptic digested) Cara pembuatan:
1 gram Pepton
~ Dilarutkan dalam 1000 ml aquadest hingga larut Sterilisasi ( 121 °C, 15 lbs/inch2, 15 menit)
•
Air Pepton 0,1% Steril
4. Larutan Natrium Alginat 4% b/b; 6% bib; dan 8% bib Cara pembuatan:
40 gram (4% bib); 60 gram (6% bib) dan/atau 80 gram (8% bib) Na-alginat
•
Dilarutkan dalam 1000 ml aquadest
Dipanaskan hingga seluruh bahan terlarut
Sterilisasi (12l°C, 15lbs/inch 2, 15 menit) Larutan Na-Alginat Steril
57
5. Larutan CaClz 1% 10 gram CaCh
Cara pembuatan:
•
Dilarutkan dalam 1000 ml aquadest hingga larut Sterilisasi (115°C, 10 lbs/inch 2, 30 menit)
•
Larutan CaCh 1% Steril
6. Larutan NaCl 0,85% Cara pembuatan:
8,5 gram NaCI
•
Dilarutkan dalam 1000 ml aquadest hingga larut Sterilisasi (115°C, 10 lbs/inch 2, 30 menit)
•
Larutan NaCI 0,85% Steril
7. Larutan Natrium Sitrat 0,1 M Cara pembuatan:
29,41 gram Na-sitrat
•
Dilarutkan dalam 1000 ml aquadest hingga larut
Sterilisasi ( 115°C, 10 lbs/inch 2 , 30 menit)
•
Larutan Natrium Sitrat 0,1 M Steril
Lampiran 3 Skema Kerja Uji ALT Kultur L.plantarum FNCC 213
1 ml
Kultur Cair L. plantsrum FNCC 213
0,5- mf
0,6 ml
0,6 ml
0,6 ml
0,6 mf
~-~--~-~.. 4.fiml
0,15 ml
0,6 ml
0,6 ml
0,6 ml
0,6 mt
0,6 ml
0,6 ml
0,6 ml
0,6 ml
0,6 ml
0,6 ml
0,6 ml
0,6 mt
0,6 ml
[[]J[[]][~~~]]JL~
~-------~~-~-------- J;~~--1~:~ -J;~~-r:-t:--l~~~··~~r.ml
Air Pepton 0, 1•1.
88888888}
MRS Agar 10 ml
50°C, 5 menit
Dlhamogenkan
~ Rotasi anglui 8
~ Dlblarkan mernadat
~ lnkubasl 37°C, 24 jam
~
Hltung ALT
Gam bar 2. Skema Kerja Uji Angka Lempeng Total (ALT) Kultur L. plantarum FNCC 213
Vl
00
Lampiran 4 Skema Kerja Pemisahan Sel Imobil
Ji 0
"
Sari Buah Nanas Probiotik
~ Pemisahan beads dengan menggunakan sendok porselen
!
A Sari Buah Nanas Probiotik tanpa beads
!
·-· 0
!
oooo
oooooo
0 otfog,f
Seads
~
~
Uji ALT Sel Bebas
Uji ALT Sellmobil
Gam bar 3. Skema Kerja Pemisahan Sel I mobil Ul
'-0
Lampiran 5 Skema Kerja Uji ALT Sel L. plantarum FNCC 213 Terimobil 1 ml
1i,.
3 gram Beads yang dilarutkan dalam 27 ml Natrium Sitrat
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
0,6 ml
0,5 ml
0,5 ml
.--.r----t.--.~.--.,n.--.r---:lr---:lr----1
d:.~· W... W... W,.. W... W,.. 8... W,.. W,.. W,. W,. W,. l __ ~
4,5 ml Air Pepton 0,1%
I
!1ml
I
1ml
I
I
1 ml
I
1ml
1 ml
I
1ml
I
1ml
1
1
1ml
88888888 }~o~~.~g~~~~ml Dihomogenkan
! J Dibiarkan memadat ! lnkubasi 37°C, 24 jam J Rotasi angka 8
Hitung ALl
Gambar 4. Skema Kerja Uji ALT SelL. plantarum FNCC 213 Terimobil
0\
0
Lampiran 6 Skema Kerja Uji ALT SelL. plantarum FNCC 213 Bebas 1 ml
O,Sml
li ll~
Sari Buah Nanas Probiotlk tanpa beads
O,Sml
O,Sml
0,5ml
~,. ~,.. ~,..
lL
4,6 ml Air Pepton 0,1%
l1ml
11 ml
l1ml
l1ml
G G G G
MRS Agar 10 ml } 50°C, 5 menit
Dihomogenkan
~ Rotasi angka 8
~ Oiblarkan memadat
~ lnkubasi 37°C, 24 jam
~ Hitung ALT
Gam bar 5. Skema Kerja Uji ALT SelL. plantarum FNCC 213 Bebas
0\
......
Lampiran 7 Data Hasil Perhitungan Angka Lempeng Total (ALT) Set Imobil dalam Sari Buah Nanas Probiotik
1. Data Hasil Pengamatan ALT Viabilitas Set L. plantarum FNCC 213 Terimobil pada Sari Buah Nanas Probiotik Tabel -----Kons. Na-Alg (%)
Lama Penyimpanan (hari ke-) 0
------r_:----- - ·D - ----- LT
Ul ke-
I 2
3 4%
14
28
0
I 2 3 I 2 3 1 2
3
6% I
14 -~
1 2 ~
-
Viab·
[,
213 Terimobil (cfu/
Pengenceran AL T 10-6
10-7
TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUQ_
TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD_
10-8
10-9
TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD 134 TBUD I10 TBUD I61 TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD , TBUD
)
'
10-10
10-11
1o-12
10-13
ALT (cfu/3g)
TBUD TBUD TBUD 122 TBUD TBUD 86 100 120 TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD
284 246 TBUD 57 161 127 28
205 126 283 24 120 57 4 2 5 Ill 246 102 65 83 18
21 16 30 2 13 7 0 I 1 14 28 14 25 13
1,2. 10 14 7,5. 10 14 2,8. 10 14 3,5. IO'L 6,8. 10 13 3,5. 10 13 5,0. 10 11 5,6. 10 11 6,8. 10 11 14 1,1. 10 14 2 ,5. 10 14 I,O. 10 13 4,0. 10 13 4,8. 10 1,1. 10 13
11 24 TBUD TBUD TBUD 141 136 114
2
ALT (cfu/g) 4,0. 2,5. 9,3. 1,2. 2,3. 1,2. 1,7. 1,9. 2,3. 3,7. 8,3. 3,3. 1,3. 1,6.
Rerata ALT ( cfu/g)
IOU
10 13 10!3 10'10 13 10 13 10 11 11 10 11 10 IOU 10!3 10 13 lOU
10
13
~,6. 10~
5,3. 10 13
1,2. 10
13
2,0. 10 11
5 , 1. 10 13 1,1. 10 13 ---~
0\ N
-
Kons. Na-Alg
(%)
Lama Penyimpanan Chari ke-)
UI ke-
28
1 2 3
1 0
8%
14
28
2 3 1 2 3 I ')
3
--
-
'
Pengenceran AL T
10-6
w-7
w-s
TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD
TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD
TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD
~--
w-9
I o- 10
10
.11
TBUD 185 90 128 65 TBUD 46 TBUD 251 TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD 217 202 TBUD TBUD 160 TBUD TBUD TBUD TBUD 260 216 TBUD TBUD T_B(]D_ LTBUD_ 251
1o-12
.13
10 18 -- ,----3
25 12 244 202 201 163 116 96 14 73 55 --
4
1 25 24 22 17 I6 I2 I 12 16
ALT (cfu/3 g) 5,4. 3,9. 2,5. 2,4. 2,0. 2'0. 3,5. 6,8. 3,5. 50 ' . 5,6. 6,8.
10 12 12 10 12 10 10 14 14 10 14 10 10'L 10 13 13 10 11 I0 11 10 11 10
ALT (cfu/g) 1,8. 10 12 1,3. 10 12 8' 3 . 10 11 8,0. JOU 6,7. I0 13 13 6,7. 10 3, I. 10 13 2 ' 3 . 10 13 I,9. 10 13 8' 7 . lOlL 1,6. 10 13 I ,3. 10 13
Rerata ALT (cfu/g) 1' 3 . 10
12
7, 1. 10
13
2 ' 4 . 10 13 I,3. I0 13
"' \.;.J
2. Perhitungan ANA VA Hasil perhitungan ANA VA pengaruh konsentrasi Na-Alginat dan lama penyimpanan terhadap viabilitas L. plantarum FNCC 213 Terimobil pada sari buah nanas probiotik dapat dilihat pada Tabel Lampiran 2. Tabel Lampiran 2. Hasil ANA VA Konsentrasi Na-Alginat dan Lama Penyimpanan terhadap Viabilitas L. nlantarum FNCC 213 Terimobil oada Sari Buah Nanas Probiotik -
Sumber Keragaman
db
-
--
JK
RJK
Kelompok Perlakuan JK konsentrasi Na-alginat JK lama penyimpanan Interaksi Error
2 0,1292 16,5505 2,0688 8 2 3,2681 1,6341 2 11,1474 5,5737 4 2,1350 0,5338 16 0,0885 1,4167 34 L_To~l Keterangan: *) = ada beda nyata karena F hitung > F tabel (a = 5%) -
-
--
F hitung
F tabel
18,4644*) 62,9797*) 6,0316*)
3,63 3,63 3,01
--
-
I
------
0\
~
3. Hasil DMRT Pengaruh Konsentrasi Na-Aiginat dan Lama Penyimpanan terhadap Viabilitas L. plantarum FNCC 213 Terimobil pada Sari Buah Nanas Probiotik
Tabel Lampiran 3. Hasil DMRT Pengaruh Konsentrasi Na-alginat dan Lama Penyimpanan terhadap Viabilitas SelL. plantarum FNCC 213 Terimobil oada Sari Buah -- Nanas Probiotik Beda N_yata pada Jarak p Perlakuan Rerata Notasi I 4 5 7 2 3 6 8 9 11,30 a K4Hzs 12,11 0,81 *) b ~Hzs 13,04 0,93*) 1,74*) c K6Ht4 13,08 I ,78*) 0,04 0,97*) c ~Ht4 13,1 I 0,03 0,07 I ,81 *) I,OO*l c KsHzs 13,38 0,27 0,30 0,34 cd 2,08*) 1,27*) KRHI4 13,71 0,33 0,60*) 0,63*) 0,67*) 2,41 *) d 1 ,60*) ~Ho 13,72 0,01 0,34 0,61 *) 0,64*) 1,61 *) 2,42*) 0,68*) d ~Ho 13,85 0,13 0,47 1,74*) 2,55*) 0,14 0,74*) 0,77*) 0,81 *) d KsHo p (0,05;16) 3,15 3,23 3,30 3,34 3,37 3,39 3,41 3,00 DMRT=SExp 0,51 0,54 0,55 0,56 0,57 0,58 0,58 0,57 (0,0885/3)11< = 0,17 SE = (RJKErro/replikasi) ---
-
-
0\
v.
Lampiran 8 Data Hasil Perhitungan Angka Lempeng Total (ALT) Sel Bebas dalam Cairan Sari Buah Nanas Probiotik l. Data Hasil Pengamatan AL T Sel Bebas dalam Cairan Sari Buah Nanas Probiotik TabeiL ------------
--
Konsentrasi Na-Alginat (o/
Lama peny1mpanan (hari ke-) 0
4
14
28
0 6
14 L __ _ _
- - - - - L_ _ _
------
4.--------D L T Sel Be bas ( cfu/ml) Pengenceran ALT
Ulangan Ke-
10-2
10-3
10-4
10-5
ALT (cfu/ml)
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
56 TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD 277 TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD
11 TBUD 229 TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD 43 239 79 TBUD 195 TBUD
2 75 36 70 157 164 TBUD TBUD TBUD 11 33 25 107 60 93
0 11 5 15 20 24 94 66 73 2 1 3 16 6 24
s,6. 1o, 5 7,5. 10 5 2,3. 10 7,0. 10) 6 1,6. 10 6 1,6. 10 9,4. 10° 6 6,6. 10 6 7,3. 10 4 2,8. 10 5 2,4. 10 4 7,9 10 1,1. 10" 5 4,0. 10 5 9,3. 10
--
-
-
L
-
- - - - · --
Rerata ALT (cfu/ml) 3,3. 10 5
1,3. 106
6
7,8. 10
1,2. 10
5
8, 1. 10 5
0\ 0\
---
Konsentrasi Na-alginat
(%)
Lama Penyimpanan Chari ke-) 28
0
8%
14
28 ~
-
-
---
------- -----
Ulangan ke-
w-z
I 2 3 I 2 3 1 2 3 1 2 3
TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD 139 TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD TBUD
'
Pengenceran AL T 10-3 10-4
-
TBUD TBUD TBUD 118 50 19 71 126 108 TBUD TBUD 82
-
159 133 128 14 8 4 9 24 28 75 38 13
w-5
-
21 19 26 2 0 0 2 5 5 19 7 1
-----
ALT (cfu/ml) 1,6. I'3. 1,3. 1,2. 5,0. 1,4. 7,1. 1,3. 1,1. 7,5. 3,8.
RerataALT (cfu/ml)
10 6 I 06 106 10° 104 104 10" 5 10 10 5 10°
1,4. 10 6 -~-
6,1. 10
1,0. 10 5
w-'
'----8,2~--
4
4,0. 10 5 L__
-
-------
0\
-..J
2. Perhitungan ANA VA Basil perhitungan ANA VA pengaruh konsentrasi Na-Alginat dan lama penyimpanan terhadap jumlah sel bebas dalam sari buah nanas probiotik dapat dilihat pada Tabel Lampiran 5.
-
Tabel Lampiran 5. Basil ANA VA Konsentrasi Na-Alginat dan Lama Penyimpanan terhadap Jumlah Sel Bebas dalam Cairan Sari Buah Nanas Probiotik Sumber Keragaman
db
JK
RJK
Kelompok 2 0,3377 Perlakuan 8 1,6418 13,1347 2 4,2055 2,1028 JK konscntrasi Na-alginat 2 7,8950 3,9475 JK lama penyimpanan Interaksi 4 1,0342 0,2586 Error 16 3,7380 0,2336 Total 34 Keterangan: *)=ada beda nyata karena F hitung > F tabel (a= 5%)
F hitung
F tabel
9,0005*) 16,8967*) 1,1067
3,63 3,63 3,01
0\ 00
3. Hasil DMRT Pengaruh Konsentrasi Na-alginat dan Lama Penyimpanan terhadap Jumlah Sel Bebas · 3.1. Hasil DMRT Pengaruh Konsentrasi Na-alginat terhadap Jumlah Sel Bebas Tabel Lampiran 6. Basil DMRT Pengaruh Konsentrasi Na-alginat terhadap Jumlah Sel Bebas dalam Cairan Sari Buah Nanas Probiotik Beda Nyata pada Jarak p Notasi Perlakuan Rerata 2 3 8% a 5,27 6% 0,62 ab 5,89 4% 6,50 0,61 1,23*) b p (0,05;16) 3,00 3,15 0,84 0,88 DMRT= SExp_ SE = (RJKErro/replikasi)"L = (0,0885/3r'L = 0,17
3.2. Hasil DMRT Pengaruh Lama Penyimpanan terhadap Jumlah Sel Bebas Tabel Lampiran 7. Basil DMRT Pengaruh Lama Penyimpanan terhadap Jumlah Sel Bebas dalam Cairan Sari Buah Nanas Probiotik Beda Nyata pada Jarak p Notasi Perlakuan Rerata 2 3 5,23 a Bo 5,87 0,64 ab ~14 0,64 1,28*) 6,51 b B2s p (0,05;16) 3,00 3,15 DMRT= SExp 0,84 0,88 SE = (RJKErro/replikasi)"L = (0,0885/3)"L = 0,17
0\ \D
Lampiran 9. Data Perubahan Sifat Fisik Beads Alginat dalam Sari Buah Nanas Probiotik selama Penyimpanan
Tabel Lampiran 8. Data Perubahan Diameter Bead5 Algi nat dalam Sari Buah Nanas Probiotik selama P -' · -Diameter Bead~ Alginat (mm) Lama Ulangan Penyimpanan ke4% 6% 8% (Hari ke-) 0,42 0,45 1 0,49 2 0,36 0,40 0,43 Ho 3 0,42 0,43 0,46 0,40 0,43 0,46 Rata-rata 1 0,48 0,49 0,52 2 0,41 0,43 0,44 H14 0,46 3 0,43 0,47 0,46 0,48 Rata-rata 0,44 0,51 1 0,49 0,52 0,45 0,46 0,48 2 H2s 3 0,44 0,47 0,47 0,48 0,49 Rata-rata 0,46 Sumber: Johari (2005) -
- - -
!
i I
cl
Tabel Lampi ran 9. Data Perubahan Kekokohan Bead~ Alginat dalam Sari Buah Nanas Probiotik selama P · Lama Kekokohan Beads Alginat (mm/5 detik) Ulangan Penyimpanan ke4% 6% 8% (Hari ke-) I 1,48 0,31 0,29 0,96 0,69 2 0,38 Ho 3 1,20 0,35 0,31 Rata-rata 1,21 0,45 0,33 1 1,79 0,46 0,32 1,44 0,78 2 0,42 HI4 1,81 0,42 0,35 3 0,55 Rata-rata 1,68 0,36 1 2,39 1,30 0,34 2 2,23 1,49 0,66 H2s 0,87 0,48 3 2,77 ~iJ.t(l-rata. _____1,_1.6- _0,42 _____112Sumber: Johari (2005)
------- --
--
-
-..l ......
Lampiran 10. Data Perubahan Sifat Kimiawi Sari Buah Nanas Probiotik selama Penyimpanan
TabelL 10. Data P Lama Ulangan Penyimpanan ke(Hari ke-) 1 2 Ho 3 Rata-rata 1 2 H14 3 Rata-rata 1 2 Hzs 3 --------
_R_a~-ra~
p
H Sari Buah N Probiotik sel Penurunan pH
----
4%
6%
3,75 3,70 3,72 3,72 3,66 3,51 3,41 3,53 3,37 3,32 3,34 3,34
3,74 3,71 3,71 3,72 3,68 3,57 3,50 3,58 3,38 3,39 3,40 3,39 __
-
--
8%
----
3,75 3,71 3,71 3,72 3,72 3,61 3,58 3,64 3,41 3,41 3,51 3,44_
--
Sumber: Johari (2005)
' \...1'-"'"'"'"'
·•'
~
...
u
•t•
'
•J'' •. ~d.J..It..i4t.6i
i'- !1. ••• \ Y A
-..l
N
