Parasit, hung. 16. 1983.
Az indirekt immunfluorescens assay (IFA) alkalmazása a toxoplasmosis diagnosztikájában Dr. BÁNKI György — Dr. SZTOJKOVné Dr. MISLÓCZKY Margit Budapest Fővárosi KÖJÁL, Parazitológiai Laboratórium, Budapest
" T h e diagnostic value of i n d i r e c t immunofluorescent assay ( I F A ) i n toxoplasmo s i s " - B á n k i , G y . - S z t o j k o v n é M i s l ó c z k y , M . - P a r a s i t , h u n g . , 16: 2 3 - 3 0 . 1 9 8 3 . A B S T R A C T . Three different tests for toxoplasma antibodies, anti - IgGAM i m munofluorescence (IFA - IgGAM), anti - IgM immunofluorescence (IFA - IgM) and c o m p l e m e n t fixation (KKR) tests w e r e c o m p a r a t i v e l y studied in s e r u m s a m p l e s f r o m 315 p e r s o n s p r e s e n t i n g n e u r o l o g i c a l , o p h t h a l m o l o g i c a l a n d o t h e r s y m p t o m s suspected or c h a r a c t e r i s t i c to t o x o p l a s m o s i s . A m i c r o m e t h o d on t e f l o n - c o a t e d , m u l t i - s p o t s l i d e s adapted f o r the i m m u n o f l u o rescent assay is described. T h e f i r s t s c r e e n i n g w a s p e r f o r m e d i n e v e r y case by K K R and I F A - I g G A M . P e r c e n t a g e s o f p o s i t i v e r e s u l t s w e r e 3 1 . 7 % f o r t h e K K R t e s t ( t i t r e s 5 s 1:10) a n d 4 8 . 9 % f o r the I g G A M test ( t i t r e s 1 : 2 0 ) . R e - e x a m i n a t i o n o f 62 p a t i e n t s b y I F A - I g M , w h e r e t h e s y m p t o m s s e e m e d t o b e c h a r a c t e r i s t i c f o r t o x o p l a s m o s i s c o n f i r m e d the p r e s e n c e of I g M a n t i b o d i e s i n 36 cases ( t i t r e s ^ 1:20). I n 14 c a s e s w h e r e t h e c o n s e c u t i v e I F A - I g G A M a n d K K R r e a c t i o n s r e s u l t e d s i g n i f i c a n t r i s e i n t i t r e s , t h e I g M a n t i b o d y l e v e l w a s f o u n d t o be h i g h e r t h a n 1 : 1 0 0 , u p t o 1: 4 0 0 0 . A n I g G A M l e v e l o f 1:2 000 o r g r e a t e r , a n d a n I g M l e v e l o f 1:100 o r g r e a t e r t o gether w i t h c l i n i c a l signs might indicate recent active infection. The c o m p l e m e n t fixing antibodies v a r i e d from 1:10 t o 1: 5 1 2 0 i n t h e c o u r s e o f a c t i v e d i s e a s e . KEY WORDS: toxoplasmosis, IgM, C F T (KKR).
serodiagnosis,
micromethod,
IFA-IgGAM,
IFA-
A j e l z e t t a n t i g l o b u l i n m ó d s z e r e k k ö z ü l az I F A k ü l ö n ö s e n e l ő n y ö s a l k a l m a z á s i t e r ü l e t e a p a r tikuláris antigénekkel végzett szerodiagnosztika. A parazita egysejtűek - igy a Toxoplasma gondii trophozoit alakjai is - e g y s z e r ű e n f e l h a s z n á l h a t ó a k a n t i g é n k é n t a r e a k c i ó b a n . A z e l j á r á s t s z á m o s k ü l f ö l d i s z e r z ő ( 1 , 2 , 6, 7 , 9, 1 2 , 1 3 , 1 6 , 1 7 , 18) a l k a l m a z t a , a h a z a i h u m á n p a r a z i t o l ó g i a i d i a g n o s z t i k á b a n azonban eddig nem k e r ü l t b e v e z e t é s r e . P E J T S I K é s P Á C S A (14) v é g e z t e k u g y a n ö s s z e h a s o n l í t ó v i z s g á l a t s o r o z a t o t t e r h e s é s n e m t e r h e s n ő k ö n magzati k á r o s o d á s t okozó á g e n s e k - köztük toxoplasma - elleni antitestek k i m u t a t á s á r a I F A teszttel, a v i z s g á l a t azonban a m ó d s z e r diagnosztikus é r t é k é r e nem terjedt k i . Toxoplasmosis esetében, a populáció nagyfokú átvészelődése miatt ugyanis, é r z é k e n y m ó d s z e r e k k e l , a v i z s g á l t e g y é n e k j e l e n t ő s h á n y a d á b a n antitesteket lehet kimutatni. E m l í t e t t s z e r zők is a v i z s g á l t n ő p o p u l á c i ó 53%-át t a l á l t á k p o z i t í v n a k . H a z á n k b a n az e l s ő t o x o p l a s m o s i s s z e r o e p i d e m i o l ó g i a i v i z s g á l a t o t Z O L T A I N . é s C S A B A K . (20) v é g e z t e . S A B I N - F E L D M A N N r e a k c i ó é s F R E N K E L c u t a n p r ó b a f e l h a s z n á l á s á v a l 1 9 , 5 % - o s
p o z i t i v i t á s t é s z l e l t e k egy m e z ő v á r o s l a k o s a i k ö z ö t t . J A N K Ó é s m t s a i (11), átfogó e p i d e m i o l ó g i a i t a n u l m á n y u k b a n az á t v é s z e l t s é g e t - s z á m o s m á s o r s z á g é h o z h a s o n l ó a n - az é l e t k o r függvényében növekvőnek jelzik. F R E N K E L próba é s k o m p l e m e n t k ö t é s i reakció (KKR) alkal m a z á s á v a l v é g z e t t v i z s g á l a t a i k s z e r i n t a 60 é v e s é l e t k o r e l é r é s é i g a l a k o s s á g 5 2 , 9%-a e s i k át a fertőzésen. A z e m l í t e t t a d a t o k t ü k r é b e n é r t h e t ő , hogy a - p a t o l ó g i a i s z e m p o n t b ó l e l s ő s o r b a n jelentős akut-, illetve szubakut- toxoplasmosis f e l i s m e r é s é b e n h a s z n á l t m ó d s z e r e k diagnosztikus é r t é k e n e m e g y s z e r ű e n az ellenanyagok d e t e k t á l h a t ó s á g á n a k f ü g g v é n y e . A m ó d s z e r e k é r t é k é t é s f e l h a s z n á l á s i t e r ü l e t ü k e t az s z a b j a m e g , hogy m e n n y i b e n l e h e t k e l az " a k t í v " , i l l . " l a t e n s " t o x o p l a s m o s i s t f e l i s m e r n i é s e l k ü l ö n í t e n i . M u n k á n k s o r á n az I F A t e c h n i k á t é p p e n e m i a t t a K K R - v a l h a s o n l í t o t t u k ö s s z e , b e t e g s é g akut é s s z u b a k u t s z a k á t j e l z ő a l a p m ó d s z e r ( 2 , 13, 15, 18).
ANYAGOK ÉS
Vizsgált
ezek
mely utóbbi a
MÓDSZEREK
savók
A vérsavók zömmel neurológiai, szemészeti, belgyógyászati, valamint endokrinológiai osztá lyok beteganyagából s z á r m a z t a k , melyeket részint toxoplasmosis gyanúja, részint differen ciáldiagnosztikai okok miatt küldtek laboratóriumunkba. A vérsavókat leválasztásuk után, felhasználásig -20°C-on tároltuk. Toxoplasma törzs A z a n t i g é n k é s z í t é s é h e z spf. k a t e g ó r i á j ú , C F L P e g é r b e n , 3 n a p o n k é n t i i . p . o l t á s s a l virulens RH t ö r z s került felhasználásra.
passzált,
Solubilis antigén a KKR-hez A fertőzött egerek peritonealis exsudatumából J I R O V E C Z , Z O L T A I N . által módosított m ó d s z e r e a l a p j á n k é s z í t e t t ü k (19). A K K R kivitele c s ő r e a k c i ó b a n , K O L M E R s z e r i n t h i d e g k ö t é s s e l t ö r t é n t , 1:10 k i i n d u l ó h i g í t á s s a l .
L e m e z a n t i g é n k é s z í t é s e az
IFA-hoz
a) A m u l t i s p o t l e m e z e k e l k é s z í t é s e Zsírtalanított t á r g y l e m e z e k r e , a reakcióhelyeknek megfelelő s z á m ú , kis glicerincseppeket v i s z ü n k f e l . E g y l e m e z e n 8-10 r e a k c i ó h e l y e t k é p e z ü n k k i k é t s o r b a n , í g y e g y l e m e z r e k é t s a vó hígítási s o r á t vihetjük fel. A lemezeket ezután teflon sprayvel lefújjuk (Sprüh m i t TeflonD u P o n t ) , s a teflon bevonat m e g k ö t é s e után a g l i c e r i n t f o l y ó v i z e s , m a j d deszt. vizes ö b l í t é s s e l e l t á v o l í t j u k . A t e f l o n m e n t e s , k ö r a l a k ú r e a k c i ó h e l y e k l e h e t ő v é t e s z i k az e l j á r á s a n y a g takarékos, m i k r o m ó d s z e r k é n t történő kivitelét, meggátolják a reakcióelegyek keveredését, s a m i k r o s z k ó p o s é r t é k e l é s k o r j ó l a z o n o s í t h a t ó a k . A teflon bevonaton hegyes e s z k ö z z e l ( p l . bontótű) a lemezek s a r e a k c i ó h e l y e k j e l z é s e , s z á m o z á s a is k ö n n y ű s z e r r e l m e g o l d h a t ó , b) A t o x o p l a s m a s u s p e n s i o e l k é s z í t é s e A t o x o p l a s m á v a l oltott egerek h a s ü r e g é t (3.nap p . i . ) s t e r i l fiziológiás sóoldattal k i m o s s u k . A n t i g é n k é n t c s a k a v v t - t é s b a k t é r i u m o k a t n e m t a r t a l m a z ó , f e h é r v é r s e j t e k b e n s z e g é n y , de trophozoitokat d ú s a n t a r t a l m a z ó exsudatumot h a s z n á l j u k f e l . A m o s a d é k o t 60-90 p e r c i g szo b a h ő n á l l n i h a g y j u k , m a j d 1-2 p e r c i g m a x . 5ÓÖ r p m - e l c e n t r i f u g á l j u k , a s e j t h a l m a z o k é s egyéb összecsapódott rögök eltávolítása végett. A felülúszóban maradt trophozoitokat k é t s z e r m o s s u k p H 7 , 4 P B S - b e n , 1 0 - 1 0 p e r c i g 1 500 r p m - e l c e n t r i f u g á l v a . V é g ü l a m o s o t t ü l e d é k e t u g y a n í g y P B S - b e n s u s p e n d á l j u k , o l y a n m é r t é k i g h í g í t v a , h o g y l - l c s e p p m i n t e g y 500 t r o p h o zoitot tartalmazzon. c) A l e m e z a n t i g é n e l k é s z í t é s e é s t á r o l á s a A multispot lemezek reakcióhelyeire l - l csepp
toxoplasma
suspensiót
viszünk fel,
ezeket
s z o b a h ő n hagyjuk b e s z á r a d n i . A s z á r a d á s t h ű v ö s l e v e g ő r á f ú v a t á s á v a l s i e t t e t h e t j ü k . A z így e l k é s z i t e t t l e m e z a n t i g é n e k e t t á r g y l e m e z f e s t ő üvegdobozokban vagy s e l y e m p a p í r b a csomagolt a n t ö b b h ó n a p i g ( 4 - 6 h ó n a p i g ) t á r o l h a t j u k - 2 0 ° C - o n , az a n t i g e n i t á s k á r o s o d á s a n é l k ü l .
Az I F A reagensei a) F I T C - a n t i h u m a n I g G A M F I T C - antihuman IgM(H) konjugátumok (Human O l t ó a n y a g t e r m e l ő Int.). A konjugátumok munkahígítását előkísérletben, block t i t r á l á s s a l kell m e g á l l a p í t a n i , i s m e r t negatív, alacsony, i l l . magas t i t e r ű savók fel h a s z n á l á s á v a l . A s z ü k s é g e s h í g í t á s fokát e l é g g é v á l t o z ó n a k t a l á l t u k (1:15 - 1 0 0 ) , e z é r t a t i t r á lást minden charge-on el kell végezni. A t i t r á l á s s o r á n c h a r g e - o n k é n t m e g k e l l győződni a r r ó l i s , hogy a k o n j u g á t u m nem t a r t a l m a z - e toxoplasma antitesteket. E z t d i r e k t m ó d s z e r r e l v i z s g á l j u k , azaz a l e m e z a n t i g é n l - l r e a k c i ó h e l y é r e csak a v i z s g á l a n d ó k o n j u g á t u m o t v i s s z ü k f e l , s a v ó t n e m .
b) F o s z f á t p u f f e r o l t f i z i o l ó g i á s s ó o l d a t ( P B S ) p H 7 , 4 ( 0 , 1 5 M ) . c) F o s z f á t p u f f e r o l t g l i c e r o l p H 7 , 4 : g l i c e r o l é s P B S 10: 1 a r á n y ú
elegye.
d) E v a n s k é k k o n t r a s z t f e s t é k 1%-os E v a n s b l u e t ö r z s o l d a t o t k é s z í t ü n k P B S - b e n , s e z t 0 , 1 % n á t r i u m a z i d d a l k o n z e r v á l j u k . K o n t r a s z t f e s t é s a l k a l m a z á s a k o r a konjugátumot 0,2%-os Evans k é k oldatban hígítjuk.
Az I F A kivitele A z e l j á r á s t a k ü l ö n b ö z ő s z e r z ő k á l t a l l e í r t m ó d s z e r v á l t o z a t o k ( 1 , 7 , 8, tuk, kisebb m ó d o s í t á s o k k a l .
12) a l a p j á n
adaptál
1) A s a v ó h í g í t á s o k a t a T A K Á T S Y m i k r o t i t r á t o r U l e m e z e i n k é s z í t e t t ü k e l ő . A k e z d e t i k i s e b b l é p t é k ú h í g í t á s i s o r o k a t a k é s ő b b i e k b e n l O x l é p t é k ű r e m ó d o s í t o t t u k , az 1 . l é p c s ő k i v é t e l é v e l , í g y a v i z s g á l a t s o r o z a t b a n a z e l s ő t á j é k o z ó d á s t 1:5, 2 0 , 2 0 0 , 2 0 0 0 h í g í t á s i s o r r a l v é g e z t ü k . A végtiter m e g á l l a p í t á s á r a - s z ü k s é g esetén - újabb vizsgálatot végeztünk. 2) A l e m e z a n t i g é n t f r i s s e n k é s z í t h e t j ü k é s s z á r í t j u k . H a m é l y h ű t ő b e n t á r o l t a n y a g o t lunk, azt is s z á r í t a n i k e l l exsiccatorban vagy l e v e g ő r á f ú v a t á s s a l . 3) A l e m e z a n t i g é n t f i x á l j u k :
10 p e r c i g ,
haszná
metilalkohollal.
4) M o s á s : 5 p e r c i g , P B S - b e n . A z i s m é t l ő d ő m o s á s t c é l s z e r ű e n t á r g y l e m e z f e s t ő ü v e g d o b o z ban, a mosófolyadék t ö b b s z ö r i m o z g a t á s á v a l , esetenként c s e r é j é v e l , m é g hatékonyabban m á g neses k e v e r ő v e l v é g e z h e t j ü k . 5) A v i z s g á l a n d ó s a v ó m e g f e l e l ő h í g í t á s a i b ó l l - l c s e p p e t v i s z ü n k f e l a l e m e z a n t i g é n r e a k c i ó h e l y e i r e . N e d v e s k a m r á b a n i n k u b á l á s 3 7 ° C - o n 30 p e r c i g . E t t ő l a l é p é s t ő l k e z d ő d ő e n v i g y á z z u n k , h o g y a r e a k c i ó h e l y e k ne s z á r a d j a n a k k i ! 6) Ö b l í t é s P B S - e l . M o s á s 4 0 p e r c i g , l e g a l á b b h á r o m s z o r v á l t o t t
PBS-ben.
7) A n e d v e s , de f e l e s l e g e s f o l y a d é k t ó l m e g s z a b a d í t o t t r e a k c i ó h e l y e k r e l - l c s e p p k o n j u g á t u mot v i s z ü n k fel, a m e g f e l e l ő m u n k a h í g í t á s b a n , k o n t r a s z t f e s t é s e s e t é n Evans Blue oldatban h í g í t v a . N e d v e s k a m r á b a n i n k u b á l á s 30 p e r c i g , s z o b a h ő n . 8) Ö b l í t é s ,
m a j d m o s á s l e g a l á b b 60 p e r c i g , 4 - 5 í z b e n v á l t o t t
PBS-ben.
9) A f e l e s l e g e s lemezzel.
folyadék óvatos leitatása után,
l - l csepp pufferolt g l i c e r o l ,
majd fedés
fedő
Kontrollok M i n d e n v i z s g á l a t i sorozat m e l l é i s m e r t gyengén vagy k ö z e p e s e r ő s s é g g e l p o z i t í v , i l l . n e g a t í v s a v ó a z o n o s h í g í t á s a i t i s be k e l l á l l í t a n i . A k o n j u g á t u m k o n t r o l l t - m i n t m á r e m l í t e t t ü k - v i z s g á l a t s o r o z a t o n k é n t , de l e g a l á b b c h a r g e onként kell elvégezni. A konjugátum kontroll pozitivitása esetén a főkfsérlet nem értékelhető. E b b e n az e s e t b e n vagy m á s i k c h a r g e - o t k e l l a l k a l m a z n i , v a g y a k o n j u g á t u m o t t o x o p l a s m a s u s pensióval kimeríteni.
Az IFA leolvasása A r e a k c i ó e r e d m é n y é n e k l e o l v a s á s a t ö r t é n h e t a z o n n a l , de f é n y t ő l v é d e t t c s o m a g o l á s b a n , 4 ° C o n , h e t e k m ú l v a i s k i v á l t h a t ó a f l u o r e s c e n c i a . A z i n d u k á l ó TJV v a g y k é k f é n y a l k a l m a z á s a s o r á n é s után azonban a f l u o r e s c e n c i a g y e n g ü l é s é v e l , nagy f é n y e r ő e s e t é n á t m e n e t i k i o l t á s á v a l kell számolni. A leolvasást tehát a vizsgálandó, i l l . kontrollsavók reakcióhelyeinek viszony lag gyors áttekintésével kell végezni. A z é r t é k e l é s t F l u o v a l m i k r o s z k ó p p a l , 4 0 x o b j e k t i v é s 6 , 3x o k u l á r b e á l l í t á s á v a l , r á e s ő f é n y b e n v é g e z t ü k . A f é n y f o r r á s H B O 2 02 h i g a n y g ő z l á m p a , s i n d u k á l ó f é n y k é n t r ö v i d h u l l á m h o s z s z ú k é k f é n y t a l k a l m a z t u n k B 2 2 4 g ( 3 m m ) i n d u k t o r s z ű r ő v e l , s G 247 z á r ó s z ű r ő v e l .
A K K R é s az I F A - I g G A M ö s s z e h a s o n l í t ó
IFA
vizsgálata
- IgGAM Összesen
KKR Neg.
1: 20
Negativ 1 10 1 20 1 40 1 80 1 160 1 320 1 640 1 280
161
14
Összesen:
_
_
-
-
2
-
1: 200 39 19 11 2 4
-
-
-
-
161
16
75
--
^
1: 2 0 0 0 1 4 14 19 11 3 3 3 5
215 23 27 21 15 3 3 3 5
63
315
A r á e s ő m e g v i l á g í t á s s z ü k s é g t e l e n n é teszi a s ö t é t l á t ó t e r e s rendszer - kardioid kondenzor, s p e c i á l i s v é k o n y t á r g y l e m e z e k stb. - b e á l l í t á s á t . A k é k fény a l k a l m a z á s a pedig UV fény he l y e t t , k e v é s b é i g é n y e s o p t i k á k h a s z n á l a t á t is l e h e t ő v é t e s z i , v a l a m i n t E v a n s B l u e f e s t é s ese t é n e g y é b k é n t i s e l ő n y ö s e b b k o n t r a s z t o t a d . E b b e n a r e n d s z e r b e n i n d u k t o r k é n t a 495 n m i n terferencia s z ű r ő p á r is jól h a s z n á l h a t ó . A r e a k c i ó l e o l v a s á s a k o r p o z i t í v a n é r t é k e l e n d ő a k é p , ha a t e l j e s t r o p h o z o i t vagy annak m a r g i n á l i s z ó n á j a f é n y e s a l m a z ö l d f l u o r e s c e n c i á t m u t a t . N e g a t í v az e r e d m é n y , ha az a l m a z ö l d f l u o r e s c e n c i á t c s a k a t r o p h o z o i t e l ü l s ő p ó l u s a m u t a t j a ("cap f o r m a t i o n " , " p o l a r s t a i n i n g " 1. m e g b e s z é l é s ) v a g y n e m v i l á g í t , i l l e t v e v ö r ö s f l u o r e s c e n c i á t l á t u n k ( k o n t r a s z t f e s t é s e s e t é n ) .
EREDMÉNYEK
315 e g y é n v é r s a v ó j á n v é g e z t ü n k p á r h u z a m o s a n a n t i h u m a n I g G A M k o n j u g á t u m m a l I F A - t , i l l e t v e K K R - t . A z e r e d m é n y e k e t az 1 . t á b l á z a t s z e m l é l t e t i . A s a v ó k 1:5 h í g í t á s a i v a l e g y i k r e a k c i ó b a n sem tudtunk konzekvens, é r t é k e l h e t ő e r e d m é n y t n y e r n i , így ezt a t á b l á z a t b a n nem t ü n t e t t ü k f e l . A m i n d k é t r e a k c i ó b a n n e g a t í v 161 s a v ó m i n t a m e l l e t t K K R - v a l 100 ( 3 1 , 7 % ) , I F A - v a l 154 s a v ó b a n ( 4 8 , 9 % ) l e h e t e t t e l l e n a n y a g o t kimutatni. A z é s z l e l t l e g m a g a s a b b t i t e r é r t é k K K R - b e n 1: 5 1 2 0 , a z I F A - b a n 1: 16 000 v o l t . A m a g a s t i t e r é r t é k k e l pozitív esetek hányada a KKR-ben ^ 1 : 8 0 - a s k ü s z ö b e s e t é n : 9 , 2 % (29 e s e t ) , ^ 1: 1 6 0 - a s k ü s z ö b e s e t é n : 4 , 4 % ( 1 4 e s e t ) , m i g I F A - b a n = ^ 1 : 2 0 0 0 k ü s z ö b é r t é k k e l s z á m o l v a : 2 0 , 0% (63 e s e t ) . A h á r o m immunglobulin osztályra: IgG-re, IgA-ra, i l l . IgM-re kiterjedő első, tájékozódó v i z s g á l a t u t á n 62 e s e t b e n v é g e z t ü k e l a z I F A - I g M r e a k c i ó t , az I g M a n t i t e s t e k d e t e k t á l á s a v é g e t t . E z e k b e n az e s e t e k b e n a k l i n i k a i k é p m e g f e l e l h e t e t t a t o x o p l a s m o s i s a k u t v a g y s u b a k u t stádiumának. Az előzetesen tehát IFA - I g G A M - e l m á r pozitívnak talált savókon végzett vizs g á l a t o k e r e d m é n y e i t ö s s z e g e z i a 2. t á b l á z a t .
A z I g M g l o b u l i n t 36 e s e t b e n , a v i z s g á l t m i n t á k t ö b b m i n t f e l é b e n k i l e h e t e t t m u t a t n i , s ő t 4 e s e t b e n - l e g a l á b b i s a k é t r e a k c i ó t i t e r é r t é k é n e k a z o n o s s á g a a l a p j á n - ez k é p v i s e l t e a r e a k c i ó b a n r é s z t v e v ő teljes antitest k é s z l e t e t . Ez utóbbi esetek e g y i k é b e n , a magas I g M szint mellett a KKR negativitása, valamint a klinikai vizsgálatok során észlelt, immunopathiára u t a l ó j e l e k m i a t t , n e m z á r h a t ó k i az e r e d m é n y n e m s p e c i f i k u s v o l t a . 2
táblázat Az IgM titer vizsgálata IFA - IgGAM pozitív
esetekben
IFA - IgGAM IFA - IgM 1: 20 Negatív 1: 20 1: 100 1: 500 ^ 1:2 000 Összesen:
6 1
7
1: 2 0 0
àsl: 2
ooo
Összesen
-
2 2 11 6 7
26 9 14 6 7
27
28
62
18 6 3
A 2 . t á b l á z a t b a n f e l t ű n t e t e t t e r e d m é n y e k k ö z ö t t 14 o l y a n e s e t s z e r e p e l , a m e l y e k b e n a v i z s g á l a t o t 3 h é t - 10 h é t i d ő k ö z z e l m e g i s m é t e l v e , j e l e n t ő s I F A - I g G A M t i t e r e m e l k e d é s t é s z l e l t ü n k . E z e k b e n az e s e t e k b e n az I F A - I g M t i t e r 1: 100 é s 1: 4 000 k ö z ö t t m o z g o t t , s v a l a m e n y n y i esetben pozitív r e a k c i ó t kaptunk.
MEGBESZÉLÉS
A toxoplasmosis immundiagnosztikájában használatos módszereket, dinamikai szempontból két csoportra oszthatjuk. Az e l s ő csoportba t a r t o z ó m ó d s z e r e k - a S A B I N - F E L D M A N test ( S F T ) , a F R E N K E L f é l e b ő r p r ó b a ( D T ) , az I F A - I g G , s a z i n d i r e k t h a e m a g g l u t i n a t i o ( I H A ) a f e r t ő z é s k i á l l á s a után é v t i z e d e k i g p o z i t í v a k maradnak, e z é r t ezek a p r ó b á k ö n m a g u k b a n , r é s z i n t a latens f e r t ő z ö t t s é g f e l d e r í t é s é r e , r é s z i n t j á r v á n y ü g y i v i z s g á l a t o k v é g z é s é r e alkal m a s a k . Igen fontos d i f f e r e n c i á l d i a g n o s z t i k a i s z e m p o n t b ó l azonban, hogy n e g a t i v i t á s u k á l t a -
I á b a n k i z á r j a a b e t e g s é g t o x o p l a s m o s i s e r e d e t é t . S a v ó p á r v i z s g á l a t a k o r é s z l e l t j e l e n t ő s - 2-3 fokozatú - t i t e r e m e l k e d é s t e r m é s z e t e s e n minden s z e r o r e a k c i ó b a n a f e r t ő z ö t t s é g akut jellegét igazolja. A m á s o d i k c s o p o r t b a a K K R é s az I F A - I g M s o r o l h a t ó , a m e l y e k á l t a l á b a n az a k t í v t o x o p l a s m o s i s ! j e l z i k . A k o m p l e m e n t k ö t ő a n t i t e s t e k - az a l k a l m a z o t t a n t i g é n t ő l i s f ü g g ő e n - á l t a l á b a n 1-2 é v i g , i l l . a l a c s o n y v a g y k ö z e p e s t i t e r é r t é k k e l , m a x i m á l i s a n 2 - 4 é v i g p e r z i s z t á l h a t n a k ( 2 , 1 5 , 1 8 ) . A z I g M a n t i t e s t e k akut e s e t e k b e n m i n d i g k i m u t a t h a t ó a k , l a t e n s e s e t e k b e n v i s z o n t m á r n e m d e t e k t á l h a t ó a k . T o x o p l a s m o s i s b a n á l t a l á b a n 6-9 h ó n a p i g é s z l e l t é k az I g M a n t i t e s t e k j e l e n l é t é t a z i n f e c t i o u t á n ( 2 , 6, 1 3 , 1 8 ) . A z I g M antitestek különös jelentőséggel b í r n a k a konnatalis toxoplasmosis differenciáldiag n o s z t i k á j á b a n , m i v e l i t t az I g G a n t i t e s t e k m a t e r n a l i s e r e d e t ű e k l e h e t n e k , az I g M a n t i t e s t e k v i s z o n t k ó r j e l z ő é r t é k ű e k . H a z á n k b a n m é r v a d ó b e c s l é s a l a p j á n , é v i 300 k o n n a t a l i s t o x o p l a s m o s i s esettel k e l l s z á m o l n i (10). A z E L I S A e l j á r á s h e l y é t - m e l y n e k I g G v á l t o z a t á t m a g y a r s z e r z ő k i s a l k a l m a z t á k (4) - m é g n e m lehet pontosan m e g í t é l n i . A nagy é r z é k e n y s é g , s a k ü l ö n b ö z ő i m m u n g l o b u l i n o s z t á l y o k k i m u t a t á s i l e h e t ő s é g e azonban, í g é r e t e s m ó d s z e r t jelez a toxoplasmosis diagnosztikájában i s . Saját - a jelzett beteganyagon v é g z e t t - v i z s g á l a t a i n k b a n a K K R - v a l n y e r t p o z i t i v i t á s i a r á n y (31,7%), a hazai n o r m á l i s p o p u l á c i ó n v é g z e t t v i z s g á l a t o k é n á l magasabb. J A N K Ó é s m t s a i ( l l ) 1 4 % - o s , C S Ó K A (3) 2 6 , 8 % - o s e r e d m é n y t í r l e . U t ó b b i s z e r z ő s z e m é s z e t i b e t e g a n y a g o n , K K R v a l m á r 44,9%-os s z e r o p o z i t i v i t á s t kapott. M e g j e g y e z z ü k , hogy több s z e r z ő v e l m e g e g y e z ő e n ( 3 , 1 3 , 1 5 ) , c s a k a z 1: 10 v a g y m a g a s a b b t i t e r é r t é k e t v e t t ü k f i g y e l e m b e . A z a k u t e s e t e k r e k ó r j e l z ő t i t e r é r t é k e t egyesek 1 : 8 0 , i l l . 1: 1 6 0 - n a k t a r t j á k ( 2 ) , i g a z o l t , h e v e n y t o x o p l a s m o s i s b a n i s é s z l e l t e k a z o n b a n e n n é l a l a c s o n y a b b t i t e r é r t é k e t ( 1 3 ) . M a g u n k az I g M k i m u t a t á s sal igazolt aktív toxoplasmosis esetekben, a K K R titernek a teljes v i z s g á l t s k á l á n való s z ó r ó d á s á t t a p a s z t a l t u k : n e g a t í v t ó l a z 1: 5 1 2 0 t i t e r f i p o z i t i v i t á s i g . A z I F A antihuman IgG k o n j u g á t u m m a l végzett változatának dinamikája a S F T - e l p á r h u z a m o s ( 1 , 7 ) . S a j á t t a p a s z t a l a t a i n k s z e r i n t c é l s z e r ű b b az e l s ő , t á j é k o z ó d ó v i z s g á l a t o t a n t i h u m a n I g G A M k o n j u g á t u m m a l v é g e z n i , m e r t í g y r ö g t ö n , az e l s ő l é p é s b e n k i i k t a t h a t ó a k m i n d az I g G , m i n d az I g M n e g a t í v s a v ó k , s az I g M m e g h a t á r o z á s t c s a k k i s e b b s z á m ú , s z e l e k t á l t e s e t b e n kell elvégezni. A s a v ó p á r o k v i z s g á l a t a s o r á n é s z l e l t t i t e r e m e l k e d é s , az I g M m e g h a t á r o z á s , v a l a m i n t k l i n i k a i j e l z é s e k ö s s z e v e t é s e a l a p j á n , a z I F A - I g G A M r e a k c i ó b a n n y e r t =ä 1 : 2 000 t i t e r é r t é k , a z e s e t e k z ö m é b e n a k t í v t o x o p l a s m o s i s r a u t a l . 1 : 2 0 , d e f ő k é n t 1: 2 0 0 t i t e r é r t é k e s e t é n - h a a z I F A - I g M i s p o z i t í v - a v i z s g á l a t o t 2-3 h é t i d ő k ö z z e l , m e g k e l l i s m é t e l n i . A z I F A k i v i t e l é b e n - l e g a l á b b i s az e l s ő , o r i e n t a t í v v i z s g á l a t b a n - n e m t a l á l t u k e l ő n y ö s n e k a t ö b b s z e r z ő á l t a l a l k a l m a z o t t ( 7 , 8 , 14) k i s l é p t é k ű h í g í t á s i s o r t . A z 5x v a g y l O x g e o m e t r i a i hígítási sorban viszont m a r k á n s különbség észlelhető a végponton. A z I F A - I g M m e g h a t á r o z á s b a n a z Sä 1 : 1 0 0 t i t e r é r t é k e t m i n d e n e s e t b e n a z a k u t t o x o p l a s m o s i s r a k ó r j e l z ő n e k t a l á l t u k . E z az é s z l e l é s ü n k l é n y e g é b e n m e g e g y e z i k M Ü L L E R é s m t s a i ( 1 3 ) , v a l a m i n t W E L C H é s m t s a i (18) t a p a s z t a l a t a i v a l . A z I F A e r e d m é n y é n e k é r t é k e l é s é b e n é s l e o l v a s á s á b a n n é h á n y olyan j e l e n s é g e t is figyelembe kell venni, amelyek t é v e s pozitív, i l l . n e g a t í v e r e d m é n y t okozhatnak. T ö b b s z e r z ő e l e m e z t e a " c a p f o r m a t i o n " v a g y " p o l a r s t a i n i n g " j e l e n s é g e t ( 5 , 8, 1 7 ) . A j e l e n s é g l é n y e g e az, hogy a toxoplasma t r o p h o z o i t e l ü l s ő p ó l u s á n n e m - s p e c i f i k u s I g M a k k u m u l á lódhat. Antihuman IgM konjugátum a l k a l m a z á s a k o r , a parazita elülső pólusán, s a p k a s z e r ű a l m a z ö l d f l u o r e s c e n c i á t l á t u n k . E z t - m i n t az " A n y a g o k é s m ó d s z e r e k " f e j e z e t b e n e m l í t e t tük - negatívként kell értékelnünk. P Y N D I A H é s m t s a i ( 1 6 ) , v a l a m i n t F I L I C E é s m t s a i (6) k í s é r l e t e i a z I g G é s I g M a n t i t e s t e k e s e t e n k é n t i k o m p e t i c i ó j á t i g a z o l t á k az I F A r e a k c i ó b a n . A z a n t i t e s t t e r m e l é s n e k abban a s z a bii
k a s z á b a n , a m e l y b e n az I g M g l o b u l i n m e l l e t t , m á r n a g y m e n n y i s é g b e n t a l á l h a t ó I g G a n t i t e s t , az I g M k i m u t a t á s h a m i s n e g a t í v e r e d m é n y t a d h a t . A h i b a l e h e t ő s é g e t az I g M é s I g G e l ő z e t e s s z e p a r á l á s á v a l és k ü l ö n - k ü l ö n t ö r t é n ő m e g h a t á r o z á s á v a l lehet k i k ü s z ö b ö l n i . I s m e r t t é n y v é g ü l , hogy a r h e u m a t o i d f a k t o r t t a r t a l m a z ó s a v ó k I F A r e a k c i ó b a n fals p o z i t í v e r e d m é n y t adhatnak. Az I g M j e l l e g ű é s IgG-vei komplexet alkotó rheumatoid faktor aspecifikus r e a k c i ó t o k o z ó h a t á s a , P Y N D I A H é s m t s a i s z e r i n t (16), ugyancsak k i k ü s z ö b ö l h e t ő a s a v ó frakcionálása révén. Az IFA m ó d s z e r é t , a különböző immunglobulin o s z t á l y o k r a specifikus konjugátumok alkal m a z á s i l e h e t ő s é g e é s é r z é k e n y s é g e a l k a l m a s s á t e s z i m i n d az a k t í v , i l l e t v e l a t e n s t o x o p l a s m o sis e l k ü l ö n í t é s é r e , m i n d s z e r o e p i d e m i o l ó g i a i v i z s g á l a t o k v é g z é s é r e . A m ó d s z e r á l t a l u n k a d a p t á l t m i k r o t e c h n o l ó g i á j a igen g a z d a s á g o s reagens f e l h a s z n á l á s t , é s viszonylag k e v é s s é e s z k ö z i g é n y e s kivitelt tesz l e h e t ő v é .
gyors
ÖSSZEFOGLALÁS S z e r z ő k 315 - n e u r o l ó g i a i , s z e m é s z e t i , b e l g y ó g y á s z a t i é s e n d o k r i n o l ó g i a i o s z t á l y r ó l s z á r m a z ó - b e t e g e n v é g e z t e k t o x o p l a s m o s i s s z e r o l ó g i a i v i z s g á l a t o t , a K K R , i l l . az I F A - I g G A M é s az I F A - I g M d i a g n o s z t i k u s é r t é k é n e k ö s s z e h a s o n l í t á s a v é g e t t . A z I F A - t t e f l o n n a l b e v o n t t á r g y l e m e z e k e n , m i k r o m ó d s z e r r e l v é g e z t é k . K K R - v a l az e s e t e k 3 1 , 7 % - á b a n ( t i t e r ^ 1 : 1 0 ) , I F A - I g G A M - e l a z e s e t e k 4 8 , 9 % - á b a n ( t i t e r ^ 1: 20) k a p t a k p o z i t í v e r e d m é n y t , 62 o l y a n b e t e gen t ö r t é n t I F A - I g M v i z s g á l a t , a k i k k l i n i k a i l a g t o x o p l a s m o s i s r a j e l l e g z e t e s t ü n e t e k e t m u t a t t a k . 36 e s e t b e n v o l t az I F A - I g M ^ 1: 20 t i t e r b e n p o z i t i v , 14 b e t e g e s e t é b e n é s z l e l t e k s z e r z ő k a v i z s g á l a t o k s o r á n 2-3 f o k o z a t ú I F A - I g G A M t i t e r e m e l k e d é s t , s v a l a m e n n y i e s e t b e n a z I g M t i t e r 1: 100 é s 1: 4 0 0 0 k ö z ö t t m o z g o t t . A k l i n i k a i l a g é s s z e r o l ó g i a i l a g a k t í v n a k l á t s z ó e s e t e k b e n , az I g G A M t i t e r ^ 1:2 0 0 0 , t i t e r ^ l : 100 v o l t , m i g a K K R t i t e r é r t é k e 1: 10 é s 1: 5 120 k ö z ö t t v á l t a k o z o t t .
az
IgM
IRODALOM
1. B R A V E N Y , I . - D I S K O , R . ( 1 9 7 6 ) : D e r T o x o p l a s m a - I m m u n f l u o r e s z e n z t e s t : s i e r u n g u n d B e d e u t u n g . - Â r z t l . L a b . , 22} 1 6 - 2 0 .
Standardi
2. C A M A R G O , M . E . - L E S E R , P . G. - L E S E R , W . S . P . (1976): D i a g n o s t i c information f r o m s e r o l o g i c a l t e s t s i n h u m a n t o x o p l a s m o s i s . - R e v . I n s t . M e d . t r o p . Sao P a o l o , 18: 2 1 5 - 2 2 6 . 3.
C S Ó K A , R. (1978): T o x o p l a s m a antitestek v i z s g á l a t a s z e m é s z e t i betegeken. - O r v o s i t i l a p , 119: 2 4 2 5 - 2 4 2 7 .
4.
C S O N T O S , F . - P Á C S A , S. - B O R B Á S , I . ( 1 9 8 2 ) : T o x o p l a s m a g o n d i i s p e c i f i k u s a n y a g o k ö s s z e h a s o n l í t ó k i m u t a t á s a . - O r v o s i H e t i l a p , 123: 1 4 8 5 - 1 4 8 6 .
He
ellen
5. D Z B E N S K I , T . H . - M I C H A L A K , T . - P L O N K A , W . S . ( 1 9 7 6 ) : E l e c t r o n m i c r o s c o p i c a n d r a d i o i s o t o p i c s t u d i e s on cap f o r m a t i o n i n T o x o p l a s m a g o n d i i . - I n f e c t i o n and I m m u n i t y , 14: 1 1 9 6 - 1 2 0 1 . 6. F I L I C E , G . A . e t a l . ( 1 9 8 0 ) : D i a g n o s t i c s i g n i f i c a n c e o f i m m u n o g l o b i n M a n t i b o d i e s t o T o x o p l a s m a g o n d i i d e t e c t e d after- s e p a r a t i o n o f i m m u n o g l o b u l i n M f r o m i m m u n o g l o b u l i n G a n t i b o d i e s . - J . C l i n . M i c r o b i o l . , 12: 3 3 6 - 3 4 2 . 7. F U H R , R. (1974): T o x o p l a s m a - A n t i k ö r p e r - N a c h w e i s Z b l . B a k t . H y g . , I . A b t . O r i g . A 227: 2 9 4 - 2 9 7 .
m i t Hilfe der
Immunfluoreszenz.
-
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toxoplas
laboratóriumi
Népegészség
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j ú n i u s 6. Dr.
S Z T O J K O V n é dr.
Dr. BÁNKI, MISLŐCZKY,
Gy. M.
Budapest F ő v á r o s i K Ö J Á L Parazitológiai laboratórium H - 1 3 9 3 B u d a p e s t , V á c i ú t 174.
