Sample & Assay Technologies

2008 október

EZ1® DSP DNA Blood Kit Használati utasítás

48

2. verzió

Az EZ1 DSP DNA Blood Kit a QIAGEN BioRobot EZ1 DSP-vel vagy az EZ1 Advanced DSP-vel együtt egy olyan rendszer, amely mágneses gyöngy technológiát használ genomi DNS izolálásra és tisztításra humán eredetű teljes vérmintából diagnosztikai eljárásokban való felhasználáshoz.

In vitro diagnosztikai felhasználásra

62124 1050259HU QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, D-40724 Hilden R2

1050259HU

Sample & Assay Technologies

QIAGEN Sample and Assay Technologies A QIAGEN vezető gyártója különböző innovatív minta és analízis technológiának, mely lehetővé teszi bármilyen biológiai mintából azok összetevőinek izolálását és detektálását. A fejlett technológiát tartalmazó, kitűnő minőségű termékek és szolgáltatások biztosítják a sikert a mintától az eredményig. A QIAGEN etalon a következő technológiákban: DNS, RNS és fehérjék tisztítása Nukleinsav és fehérje assay-k microRNS kutatás és RNSi Minta és analízis technikák automatizálása Küldetésünk, hogy lehetővé tegyük a felhasználóink számára kiemelkedő sikerek és áttörő eredmények elérését. További információért kérjük, látogassa meg a www.qiagen.com honlapot.

Tartalomjegyzék Kit összetevõk

4

Jelölések

4

Tárolás

5

A felhasználás célja

6

A felhasználás korlátai

6

Termék és elégedettségi garancia

6

Technikai segítségnyújtás

7

Biztonsági információk

7

Minőségbiztosítás

9

Bevezetés

10

Elv és módszer

10

Az EZ1 DSP DNA Blood rendszer teljesítményjellemzői

10

Eszközök és Reagensek, amelyeket a felhasználónak kell biztosítania

25

Fontos megjegyzések

26

A vérminták tárolása

26

Csapadék a reagens kazettában (RCB)

26

Az EZ1 munkaállomásokkal történő munka

26

Protokoll: Genomiális DNS tisztítása teljes vérmintából

33

Hibakeresési útmutató

35

„A” Függelék: Kijelzett üzenetek

37

„B” Függelék: A DNS tárolása, mennyiségének és tisztaságának meghatározása

45

„C” Függelék: Minta adatlap a BioRobot EZ1 DSP használatához

47

„D” Függelék: Példa egy EZ1 Advanced Riport file-ra

48

Referenciák

49

Rendelési információk

50

EZ1 DSP DNA Blood Kit Kézikönyv 10/2008

3

Kit összetevõk

EZ1 DSP DNA Blood Kit

(48)

Katalógusszám

62124

Tesztek száma

48

RCB

Reagent Cartridge, Blood 350 µl * (Reagens kazetta)

48

DTH

Disposable Tip Holders (Eldobható pipettahegy tartó)

50

DFT

Disposable Filter-Tips (Eldobható pipettahegyek)

50

ST

Sample Tubes (2 ml) (Minta csövek)

50

ET

Elution Tubes (1.5 ml) (Elúciós csövek)

50

Q-Card†

1

Handbook (Kézikönyv)

1

* Tarósítószerként nátrium-azidot tartalmaz. Guanidin sókat tartalmaz. Nem kompatibilis fehérítőszereket tartalmazó fertőtlenítőkkel. További információért lásd a 7. oldalt. † A Q-Card-on található vonalkóddal kódolt információ szükséges a reagens adatkövetéshez az EZ1 Advanced munkaállomással történő használathoz.

Jelölések Összesen 48 minta kezeléséhez szükséges reagenst tartalmaz Felhasználásra …. által Orvosi eszköz in vitro diagnosztikához Katalógusszám Tétel szám Anyag szám Összetevők

4


Szám Térfogat Hőmérséklet határértékek

Jogos gyártó Fontos figyelmeztetés Csak …..-tal/val való használatra Tartalmaz Guanidin-izotiocianát Guanidin-hidroklorid Etanol Az áru beérkezése után nyissuk ki a dobozt; a reagens kazettákat (RCB) tároljuk 2-8°C-on A doboz felnyitásakor ez az oldal legyen lefele

Tárolás 2-8°C-on hűtve tároljuk a reagens kazettát (RCB). A reagens kazettában lévő (RCB) mágneses szemcsék aktívak maradnak, amennyiben ezen a hőmérsékleten történik a tárolás. Ne fagyasszuk le a reagens tartókat (RCB). Amennyiben 2-8°C-on tároljuk a reagens kazettákat (RCB), akkor azok a cimkén és a dobozon feltüntetett lejárati ideig stabilak maradnak. A hűtőből való kivétel után a reagens kazetta egyszer tárolható 15-25°C-on, de ekkor 4 héten vagy a lejárati határidőn belül fel kell használni, amelyik előbb elkövetkezik. A lejárati idő a cimkén, a Q-kártyán illetve a kit dobozán található meg. A reagens kazettában található pufferek (RCB) (1. lyuk) tárolás során kicsapódhatnak. Felhasználás előtt ellenőrizzük és oldjuk vissza a csapadékot, a „Csapadék a reagens kazettában (RCB)” című fejezetben elírtak szerint (26. oldal).


5

A felhasználás célja Az EZ1 DSP DNA Blood Kit a QIAGEN BioRobot EZ1 DSP vagy EZ1 Advanced géppel kombinációban olyan rendszer, amely mágneses gyöngy technológiát használ genomi DNS izolálására és tisztítására humán teljes vérmintából diagnosztikai célú felhasználásra. Friss és fagyasztott teljes vér használható kiindulási mintaként, amelyet az általános vérgyűjtő rendszerekkel vettek le és EDTÁ-val, citráttal vagy heparinnal kezeltek. A terméket csak képzett felhasználók használhatják, technikusok, orvosok, akik a molekuláris biológiai technikákban járatosak. Bármilyen a mintafeldolgozással kapcsolatos diagnosztikai eredmény a további alkalmazások eredményeivel egyetemben, csak az egyéb klinikai és laboratóriumi eredmények figyelembevételével történhet.

A felhasználás korlátai A rendszer nem alkalmas szöveti vagy széklet minták kezeléséhez. A kit nem alkalmas továbbá bakteriális, gomba eredetű vagy parazita nukleinsavak valamint RNS izolálására és tisztítására. A rendszer működését nem tesztelték genomi DNS izolálására és tisztítására buffy coat-ból, tenyésztett és izolált sejtekből, kenetből, száraz vérfoltokból vagy sejtmentes testfolyadékokból, mint pl. agy-gerincvelői folyadék (CSF), plazma, szérum vagy vizelet. Az EZ1 DSP DNA Blood rendszer teljesítményét DNS izolálással határozták meg egészséges egyénekből származó vérből (3,8 x 10 6 – 1,0 x 10 7 leukocita/ml). A felhasználó felelős azért, hogy megfelelő EZ1 DSP DNA Blood működési feltételeket állapítson meg a további DNS alapú alkalmazásokhoz. A diagnosztikai eredményt negatívan befolyásoló körülmények minimalizálása érdekében, megfelelő kontrollok használata ajánlott a további alkalmazások során. További validáláshoz az International Conference on harmonization of Technical Requirements (IHC) megjelent: ICH Q2A: Validation of analytical methods: Definitions and terminology and ICH Q2B: Validation of analytical methods: Methodology által meghatározott vezérfonal használata javasolt. A termék használata során a lehető legnagyobb figyelemmel járjunk el. Javasoljuk minden QIAGEN terméket használó részére az NIH rekombináns DNS kísérletekhez kifejlesztett vezérfonalához való ragaszkodást, vagy bármilyen vonatkozó szabvány betartását.

Termék és elégedettségi garancia A QIAGEN garantálja az összes termék működését úgy, ahogyan az a termék leírásában szerepel. A vásárló feladata meghatározni, hogy a termék egy bizonyos alkalmazásra megfelelő-e. Bármelyik termék nem megfelelő működése esetén – kivéve, ha nem a kézikönyvben leírtaknak megfelelő módon használták azt – a QIAGEN ellenszolgáltatás nélkül kicseréli vagy a vásárlási árat visszatéríti. A QIAGEN fenntartja a jogát arra, hogy lecserélje,

6


megváltoztassa vagy módosítsa bármelyik termékét annak érdekében, hogy azok minősége javuljon (akár kit működés, akár készülék tervezés). Ha egy QIAGEN termék nem felel meg az igényeknek egyszerűen hívja a helyi technikai segítségnyújtó helyet vagy forgalmazót (Biomarker Kft.). A termék árát – döntésétől függően – jóváírjuk számláján vagy kicseréljük a terméket. Más feltételek vonatkoznak a QIAGEN tudományos műszereire, szervíz termékeire és azokra a reagensekre, amelyeket szárazjégen szállítanak. További információért kérjük, érdeklődjön a helyi QIAGEN képviseletnél (Biomarker Kft.). A QIAGEN kondíciós lista másolata elérhető külön kérésre illetve szerepel számláink hátoldalán. Amennyiben a termék specifikációkkal és minőséggel kapcsolatos kérdései merülnek fel, hívja a QIAGEN technikai segítségnyújtás számát vagy a helyi forgalmazót (Biomarker Kft., valamint a kézikönyv hátoldala és a www.qiagen.com honlap).

Technikai segítségnyújtás A QIAGEN-nél büszkék vagyunk az általunk nyújtott technikai segítségnyújtás elérhetőségére és minőségére. A technikai segítségnyújtási osztályokon a mintakezelési és analízis technikákban kiterjedt gyakorlati és elméleti ismeretekkel rendelkező tapasztalt tudósok állnak rendelkezésre. Ha bármilyen kérdése merülne fel, az EZ1 DSP DNA Blood Kit-tel kapcsolatos probléma esetén vagy a QIAGEN termékekkel kapcsolatban lenne általános kérdése, észrevétele kérjük, vegye fel a kapcsolatot velünk. A QIAGEN felhasználók köre a legfőbb információs forrás termékeink fejlett szintű vagy speciális felhasználására. Ez az információ segítség más tudósok számára is éppúgy, mint a QIAGEN kutatói részére. Ezért mindenképp bátorítjuk felhasználóinkat arra, hogy bármilyen a termék felhasználásával, teljesítményével kapcsolatos tapasztalatát illetve termékeink új alkalmazásokra és technikákra való használatát, javaslataikat osszák meg velünk, azokat köszönettel fogadjuk. Technikai segítségnyújtáshoz kérjük keresse a QIAGEN technikai támogatási központot a www.qiagen.com/support oldalon vagy hívja a QIAGEN egyik technikai szerviz osztályát vagy a helyi forgalmazót (Biomarker Kft., lásd a hátoldalt vagy a www.qiagen.com honlapot).

Biztonsági információk Amennyiben kémiai anyagokkal dolgoznak, mindig viseljenek megfelelő védőköpenyt, egyszerhasználatos védőkesztyűt és védőszemüveget. További információért kérjük, tanulmányozza a megfelelő biztonsági adatlapot (MSDS). Ezek online elérhetők kényelmes és tömör PDF formátumban a www.qiagen.com/support/MSDS.aspx oldalról, ahol minden QIAGEN Kit és kit összetevő biztonsági lapját (MSDS) letöltheti. FIGYELMEZTETÉS: NE ADJUNK fehérítőszert vagy savas oldatokat közvetlenül a mintakezelés után maradt hulladékhoz.


7

A reagens kazettában (RCB) lévő pufferek guanidin-hidrokloridot/guanidinizotiocianátot tartalmaznak, amelyek veszélyes és nagymértékben reaktív elegyet képezhetnek a fehérítőszerekkel. Ha olyan folyadékot öntünk ki, amely ezeket a puffereket is tartalmazza, akkor a kiömlés helyét alkalmas laboratóriumi detergenssel és vízzel tisztítsuk fel. Ha fertőző ágenst tartalmazó folyadék kerül az EZ1 munkaállomásra, akkor fertőtlenítsük a készüléket az EZ1 készülékhez kapott kézikönyvben található fertőtlenítőszerek egyikével. A törött vagy szivárgó reagens kazettát (RCB) a helyi biztonsági előírásnak megfelelően kell kezelni és hulladékként eltávolítani. Ne használjunk sérült reagens kazettát (RCB) vagy más kit összetevőt, mert ezek használata rossz és megbízhatatlan eredményhez vezethet. A QIAGEN nem ellenőrizte az EZ1 DSP DNA Blood eljárás használatakor hulladékként keletkező folyadékokat a maradék fertőző ágens tekintetében. A visszamaradt hulladékban lévő fertőző anyag jelenléte nagyon valószínűtlen, azonban az ilyen folyadékokat, mindig fertőző folyadékként kezeljük és a helyi eljárási szabályok szerint kezeljük és távolítsuk el. A következő veszélyességi és biztonsági jelzések vonatkoznak az EZ1 DSP DNA Blood Kit összetevőire:

8


Reagens kazetta, Vér (RCB) F, Xn Etanolt, guanidin-hidrokloridot és guanidin-izotiocianátot tartalmaz: erősen gyúlékony, ártalmas és irritáló. Veszélyességi és biztonsági jelzők*: R1120/21/22-32-36/38, S13-26-36/37/39-46 24 órás elsősegély információ Sürgősségi orvosi információ Angolul, Franciául és Németül napi 24 órában érhető el a következő helyről: Mérgezési Információs Központ, Mainz, Németország T: +49-6131-19240

Minőségbiztosítás A QIAGEN ISO-minősített minőségellenőrzési rendszerének megfelelően az EZ1 DSP DNA Blood Kit minden egyes gyártási tételét leellenőrzik, hogy az megfelel-e az előírt paramétereknek, ezzel biztosítják a kit egyenletes és kifogástalan minőségét.

R11: Nagyon gyúlékony; R20/21/22: Ártalmas belélegzéssel, bőrre kerülve és lenyelve; R32: savakkal érintkezve nagyon erősen mérgező gázok keletkeznek; R36/38: szemre és bőrre irritáló hatású; S13: Tartsuk távol élelmiszertől, italtól és állati takarmányoktól; S26: Szembe jutás esetén azonnal bő vízzel öblítsük a szemet, majd forduljunk orvoshoz; S36/37/39: Viseljünk megfelelő védőköpenyt, védőszemüveget és arc/szemvédő szemüveget/maszkot; S46: ha lenyeltük azonnal forduljunk orvoshoz és mutassuk meg a doboz feliratát vagy a címkéjét az orvosnak.


9

Bevezetés Az EZ1 DSP DNA Blood Kit genomi DNS izolálására alkalmas teljes vérből. A mágneses gyöngy technológia jó minőségű DNS-t szolgáltat, amely a további alkalmazásokra alkalmas, mint pl. amplifikáció vagy más enzimes reakció. Az EZ1 Advanced vagy BioRobot EZ1 DSP a mintakezelés összes lépését végrehajtja, egyszerre maximum 6 mintán. A minta kiindulási térfogata 350 µl, a DNS leoldás 200 µl elúciós pufferben történik.

Elv és módszer A mágneses gyöngy technológia kombinálja a hatékony szilika bázisú DNS tisztítást és a gyors és kényelmes mágneses elválasztást (lásd a folyamatábrát a következő oldalon). A lizátumból a DNS-t egy lépésben lehet izolálni, úgy, hogy a DNS kaotróp sók hatására a gyöngyök felszínén lévő szilika mátrixhoz köt. A részecskéket a lizátumtól mágnessel lehet szétválasztani. A DNS-t ezután hatékonyan lehet mosni és leoldani az elúciós pufferrel.

Az EZ1 DSP DNA Blood rendszer teljesítményjellemzői Rendszer robosztusság Különböző primer vérvételi csöveket és antikoagulánst lehet felhasználni az EZ1 DSP DNA Blood Kit-hez való vérminta gyűjtésére. Az 1. táblázat (12. oldal) áttekintést ad a mintagyűjtő csövekről, amelyeket a rendszer kiértékeléséhez használtak. Azért ezeket a csöveket választották, hogy a piacon található antikoagulánsok és vérmintavételi csövek használhatóságát vizsgálják. Más gyártótól származó csövek is használhatók. A vérmintákból kinyerhető átlagos relatív kitermelést az 1. ábra (13. oldal) mutatja, különböző primer csövekkel.

10


EZ1EZ1 DNADNS Procedure Az procedúra Teljes vér, vértermékek vagy emésztett szövet

Whole blood, blood products, or digested tissue

Lízis Lysis

Mágnesesparticles részecskék kerülnek a mintába Magnetic added to samples

A DNSbinds köt a mágneses DNA részecskékhez to magnetic

particles

Mágneses elválasztás Magnetic separation

Magnet

Mosás Wash

Mágneses elválasztás Magnetic separation

Magnet

Leoldás Elute

Tiszta,high-quality jó minőségű DNS Pure, DNA


11

1. táblázat. Az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel vizsgált vérmintavételi csövek Cső

Rövidítés Gyártó

Katalógus szám*

Névleges kapacitás (ml)

BD Vacutainer® 9NC

BD 9NC

Becton Dickinson

366007

9

BD Vacutainer K3E

BD K3E

Becton Dickinson

368457

10

BD Vacutainer K2E

BD K2E

Becton Dickinson

367864

6

Monovette® EDTA

EDTA

Sarstedt

21.066.001

9

Monovette LH

LH

Sarstedt

21.065.001

9

Monovette CDPA1

CPDA1

Sarstedt

11.610.001

8,5

Vacuette® K3E

K3E

Greiner Bio-One

455036

9

Vacuette 9NC

V 9NC

Greiner Bio-One

454382

9

* A katalógusszámok változhatnak; kérjük ellenőrizze a gyártónál vagy a forgalmazónál.

12


Átlagos, relatív DNS kinyerés (%)

Gyűjtő cső 1. ábra A rendszer robosztussága különböző mintavételi csövek és antikoagulánsok használatával. Teljes vér 6 egészséges donorból levéve 8 különböző csővel, három ismétlésben donoronként és csövenként. A csöveket az 1. táblázatban soroltuk fel (12. oldal). 350 µl kiindulási anyagból (teljes vér) az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel történt az izolálás 200 µl-ben. Az elméleti DNS kinyerést minden egyes donor és cső esetén a fehérvérsejtszám alapján határoztuk meg. Az oszlopok az átlagos DNS kinyerést mutatják (az elméleti kinyeréshez viszonyítva) standard deviációt is megjelenítve.


13

Minták fagyasztása és visszaolvasztása Friss vagy fagyasztott humán teljes vérmintákat lehet használni (lásd „Vérminták tárolása”, 26. oldal). A fagyasztás és felolvasztás hatását a vérmintából történő DNS hozamra az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel határozták meg (2. ábra).

Átlagos relatív DNS kinyerés (%)

2. ábra A fagyasztás-felolvasztási ciklus hatása a DNS hozamra. Teljes vért gyűjtöttek 3 egészséges donorból a fent jelölt csövekbe, mindegyiket 6 ismétlésben. A felhasznált csöveket a 1. táblázatban soroltuk fel. Genomi DNS-t tisztítottak 350 µl mintából az EZ1 DSP DNA Blood módszerrel. Az átlagos relatív DNS kinyerést (Friss) kiszámolták minden donorra és csőre. A vért tartalmazó csöveket háromszori fagyasztási és felolvasztási ciklusnak tették ki. Genomi DNS-t izoláltak minden egyes fagyasztási/olvasztási ciklus (1 ciklus – 3 ciklus) után az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel és ezekből a relatív DNS kinyerést kiszámolták. Fagyasztott (és felolvasztott) vérmintákhoz javasolt az EDTA használata anti-koagulánsként.

A tisztítás DNS hozama Egészséges egyedekből származó 350 µl vérmintából genomi DNS-t izoláltak. Az EZ1 DSP DNA Blood módszerrel kinyert DNS mennyisége függ az egyes mintákban lévő fehérvérsejtek számától, ezért a kinyerés donorról-donorra változhat (3. ábra).

14


A

Átlagos abszolút hozam (µg)

Átlagos relatív hozam (%)

Relatív Abszolút

Donor

Átlagos DNS hozam (µg)

B

Fehérvérsejtek száma (x 10 3 sejt/µl)

3. ábra Átlagos abszolút és relatív DNS hozam különböző donorokból. 27 donorból gyűjtöttek teljes vért 3 ismétlésben. Minden egyes minta 350 µl-éből genomi DNS-t izoláltak az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel. A Az elméleti DNS kinyerést fehérvérsejt számolással határozták meg. Abszolút (Abszolút) és relatív (Relatív) (a kiszámolt elméleti hozamhoz viszonyítva) DNS hozam középérték látható minden donorra. B Az abszolút hozam középértéke látható minden egyes donorra a fehérvérsejtek számához viszonyítva.

Tiszta genomi DNS elúció A genomi DNS leoldása 200 µl kis sótartalmú eluáló pufferben történik. A leoldott DNS közvetlenül alkalmas az izolálást követő in vitro diagnosztikai elemzésekhez, mint pl. a CE-IvD jelöléssel ellátott artus PCR Kitek. Harminc véletlenszerűen kiválasztott vér donortól mintát gyűjtöttek és azokból az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel DNS-t tisztítottak. Az artus MTHFR LC PCR Kit, az artus DPD LC PCR Kit és az artus TPMT LC PCR kit használatával klinikailag releváns genetikai variánsokat kerestek a metiléntetrahidrofolát (MTHFR) a dihidro-pirimidin (DPD) és a tiopurin-Smetiltranszferáz (TPMT) génben. A mintákat LightCycler készüléken vizsgálták. Az adatok a 2. és 3. táblázatban (a 16. és 18. oldaltól) találhatók. Az olvadáspont analízist és a variánsok százalékos eloszlását az MTHFR génre a 4. és 5. ábra (18. és 19. oldal) mutatja (példaként).


15

2. táblázat. Az MTHFR gén 667. és 1298. nukleotid pozíciójában található polimorfizmusok az artus MTHFR LC PCR kittel kimutatva Minta száma

677. nukleotid

1298. nukleotid

Genotípus

1

heterozigóta var

homozigóta wt

wt677/var677 wt1298/wt1298

2

homozigóta wt

homozigóta wt

wt677/wt677 wt1298/wt1298

3

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

4

homozigóta var

homozigóta wt

var677/var677 wt1298/wt1298

5

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

6

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

7

heterozigóta var

homozigóta wt

wt677/var677 wt1298/wt1298

8

homozigóta wt

homozigóta wt

wt677/wt677 wt1298/wt1298

9

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

10

heterozigóta var

heterozigóta var

wt677/var677 wt1298/var1298

11

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

12

homozigóta wt

homozigóta wt

wt677/wt677 wt1298/wt1298

13

homozigóta wt

homozigóta wt

wt677/wt677 wt1298/wt1298

var: Módosult allél az MTHFR jelzett pozíciójában. wt: Vadtípusú allél az MTHFR jelzett pozíciójában

16


2. táblázat Folytatás Minta száma

677. nukleotid

1298. nukleotid

Genotípus

14

heterozigóta var

homozigóta wt

wt677/var677 wt1298/wt1298

15

heterozigóta var

homozigóta wt

wt677/var677 wt1298/wt1298

16

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

17

homozigóta var

homozigóta wt

var677/var677 wt1298/wt1298

18

heterozigóta var

homozigóta wt

wt677/var677 wt1298/wt1298

19

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

20

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

21

homozigóta wt

homozigóta var

wt677/wt677 var1298/var1298

22

heterozigóta var

homozigóta wt

wt677/var677 wt1298/wt1298

23

heterozigóta var

heterozigóta var

wt677/var677 wt1298/var1298

24

heterozigóta var

homozigóta wt

wt677/var677 wt1298/wt1298

25

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298

26

homozigóta wt

homozigóta var

wt677/wt677 var1298/var1298

27

homozigóta wt

heterozigóta var

wt677/wt677 wt1298/var1298



17

2. táblázat Folytatás Minta száma

677. nukleotid

1298. nukleotid

Genotípus

28

heterozigóta var

heterozigóta var

wt677/var677 wt1298/var1298

29

heterozigóta var

homozigóta wt

wt677/var677 wt1298/wt1298

30

homozigóta var

homozigóta wt

var677/var677 wt1298/wt1298


A

B

4. ábra Az amplifikációs termékek olvadáspont analízise az MTHFR gén 677. és 1298. nukleotidjánál. A DNS tisztítása 30 donor teljes vérmintájából történt az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel. Az eluátumokat a CE-IvD jelöléssel ellátott artus MTHFR LC PCR kittel olvadáspont vizsgálatnak vetették alá a LightCycler készüléken. A Analízis a 677. nuleotidnál. B Analízis az 1298. nukleotidnál.

18


35

Proportion (%)

Megoszlás (%)

30 25 20 15 10 5 0 wt677/var677 wt1298/wt1298

wt677/wt677 wt1298/var1298

var677/var677 wt1298/wt1298

wt677/wt677 wt1298/wt1298

wt677/var677 wt1298/var1298

wt677/wt677 var1298/var1298

5. ábra. Az MTHFR génben azonosított genotípusok százalékos megoszlása. A 2. táblázat és 4. ábra adatait foglalja össze grafikusan.

3. táblázat. A DPD és TPMT génekben detektált polimorfizmusok az artus DPD LC PCR Kit-tel és az artus TPMT LC PCR Kit-tel detektálva Mintaszám

DPD genotípus

TPMT genotípus

1

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

2

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

3

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

4

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

5

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

6

DPYD*1/*1

TPMT*1/*3A vagy TPMT*3C/*3B

7

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

8

DPYD*1/*1


9

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

10

DPYD*1/*1


A táblázat a következő oldalon folytatódik.


19

3. táblázat Folytatás Mintaszám

DPD genotípus

TPMT genotípus

11

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

12

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

13

DPYD*1/*2A

TPMT*1/*1

14

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

15

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

16

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

17

DPYD*1/*1


18

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

19

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

20

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

21

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

22

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

23

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

24

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

25

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

26

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

27

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

28

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

29

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

30

DPYD*1/*1

TPMT*1/*1

20


Gátlási teszt

10 µl luátum

5 µl luátum

2 µl luátum

A növekvő mennyiségű eluátum hatását vizsgálták a PCR hatékonyságára (6. ábra).

6. ábra az eluátum térfogatának hatása a PCR reakció teljesítményére. Egy egészséges donor vérét BD K2E csövekbe vették le, majd a mintákat összeöntötték. 24 db 350 µl-es mintából genomi DNS-t izoláltak 4 különböző futtatásban (run 1 – run 4), 6 ismétlésben az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel. A jelölt mennyiségű eluátumot használták fel 50 µl-es PCR reakcióban, amelyben a primer egy 1100 bp egykópiás humán gén fragmensre specifikus. +: Pozitív kontroll. -: Negatív kontroll. M: Kisméretű DNS molekulatömeg marker.


21

Precíziós vizsgálat

DNS hozam (µg)

A DNS kinyerését vizsgálták 350 µl humán vérminta felhasználásával az EZ1 DSP DNA Blood Kit rendszerrel a különböző futtatások során. A futások közötti különbségeket (pontosság és ismételhetőség) a DNS hozamok standard deviációjaként tüntették fel (7. ábra).

Run 1

Run 2

Run 3

Run 4

DNA Blood Protokoll a BioRobot EZ1 DSP-n

7. ábra Futáson belüli és futások közötti pontosság az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel. Egy egészséges donor vérét BD K2E csövekbe vették le, majd a mintákat összeöntötték. 24 db 350 µl-es mintából genomi DNS-t izoláltak 4 különböző futtatásban (run 1 – run 4), 6 ismétlésben az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel. A teljes DNS hozam középértékei és a standard deviáció látható minden futásra. Az egy futáson belüli pontosság 4,85% (1-es futtatás, Run 1), 6,10% (2-es futtatás, Run 2), 7,48% (3-as futtatás, Run 3), 6,59% (4-es futtatás, Run 4), az össz pontosság 6,33%.

Eluátum stabilitás A genomi DNS stabilitása az EZ1 eluátumokban. 10 hétig stabil 5°C-on tárolva, akár 24 hónapig is stabil -20°C-on vagy -80°C-on tárolva. Minta kereszt-kontamináció kizárása Annak kiértékelésére, hogy az EZ1 DSP DNA Blood rendszerben (az izolálás során és az izolálások között) milyen veszélye lehet a minta keresztkontaminációnak 12 futtatást végeztek. A minta keresztfertőzés detektálásához a 12 futtatásból 8-at 3 vérmintával és 3 vízmintával végeztek (váltakozó pozíciókkal) a 4. táblázat szerint. Minden 3. futtatás csak vízzel történt.

22


4. táblázat Kereszt-kontamináció kísérleti elrendezés Pozíció Futtatás

1

2

3

4

5

6

1

B

W

B

W

B

W

2

W

B

W

B

W

B

3

W

W

W

W

W

W

4

B

W

B

W

B

W

5

W

B

W

B

W

B

6

W

W

W

W

W

W

7

B

W

B

W

B

W

8

W

B

W

B

W

B

9

W

W

W

W

W

W

10

B

W

B

W

B

W

11

W

B

W

B

W

B

12

W

W

W

W

W

W

B: Vér. W: Víz. Minden vérminta pozitív volt a PCR reakcióban (8A ábra, 24. oldal). Minden vízminta negatív volt a vegyes futtatásokban és a csak vizes futtatásokban is (8B ábra, 24. oldal). Ezek a kísérletek demonstrálják, hogy az EZ1 DSP DNA Blood módszer a fenti körülmények között nem okoz minta kereszt-fertőzést.


23

A

B

8. ábra Az EZ1 DSP DNA Blood módszer közbeni és az egyes futtatások közötti minta keresztkontamináció kizárása. Egy egészséges donor vérét levették, a mintákat összeöntötték. 12 db 350 µl-es mintából genomi DNS-t izoláltak (12 futtatás, run 1 – run 12) az EZ1 DSP DNA Blood rendszerrel a 4. táblázat szerinti felállásban. Az izolált mintából PCR segítségével egy 1 kb-os egykópiás génre specifikus fragmenst mutattak ki. A pozitív és negatív mintákat egymástól elkülönítve használták az izolálás utáni PCR reakció összeállítása és végrehajtása alatti kereszt-kontamináció megelőzésére. A Minden vérminta pozitív a PCR-ben. B Minden negatív minta PCR-rel is negatív volt, 35 ciklus után nem volt detektálható fragmens. +: Pozitív PCR kontroll. -: Negatív PCR kontroll. M: Kis molekulatömegű DNS létra.

24


Eszközök és Reagensek, amelyeket a felhasználónak kell biztosítania Amennyiben kémiai anyagokkal dolgoznak mindig viseljenek megfelelő laboratóriumi védőköpenyt, egyszer használatos védőkesztyűt és védőszemüveget. További információért tanulmányozza a megfelelő biztonsági adatlapot (MSDS), amelyet a gyártótól vagy forgalmazótól szerezhet be. Minden protokollhoz Pipetták* és steril, RNáz-mentes pipettahegyek Lágy törlőpapír Víz 70% etanol Opcionális: rázó-inkubáló* (ha a reagens kazetták /RCB/ kicsapódott anyagot tartalmaznak a csövek alján) Opcionális: mikrocentrifuga* (ha a mágneses részecskéket el kell távolítani az eluátumból)

Az EZ1 Advanced felhasználóknak EZ1 Advanced munkaállomás * (kat. szám 9001411) EZ1 Advanced DSP DNA Blood Card (kat. szám 9018305) Minta követéshez az alábbiak közül az egyik szükséges: PC (monitorral) az EZ1 Advanced Communicator szoftverrel felszerelve (kat. szám 9017759) EZ1 Advanced Communicator szoftver az EZ1 Advanced géppel együtt szállítva (kat. szám 9018464) saját PC-vel való használatra Nyomtató (kat. szám 9018464) és nyomtató kiegészítők (kat. szám 9018465) BioRobot EZ1 felhasználóknak BioRobot EZ1 DSP munkaállomás* (kat. szám 9001360) EZ1 DSP DNA Blood Card (kat. szám 9017713)

* Biztosítsuk, hogy a készülékeket rendszeresen ellenőrzik, karbantartják és kalibrálják a gyártó utasításai alapján.


25

Fontos megjegyzések A vérminták tárolása EDTA-val, ACD-vel vagy heparinnal * kezelt teljes vérminták használhatók, friss illetve fagyasztott formában. A fagyasztott mintákat enyhe rázás mellett szobahőn (15-25 °C) kell felolvasztani, mielőtt a feldolgozást elkezdjük. Az izolált DNS hozama és minősége a vérminták tárolásától függ. Frissebb vérrel jobb eredményeket kaphatunk. Rövid idejű tárolás esetén (10 napig) EDTA-t, mint antikoagulánst tartalmazó csövekbe gyűjtsük a vért és 2-8 °C-on tároljuk. Azonban az olyan alkalmazások esetében, amelyek maximális fragmens hosszt igényelnek, mint pl. Southern blotting, a 2-8 °C-on való tárolást csak 3 napig ajánljuk, mivel ezt meghaladóan kismértékű degradáció léphet fel. Hosszú távú tárolás esetén a vért standard antikoagulánst (leginkább EDTA, ha nagy molekulasúlyú DNS-re van szükségünk) tartalmazó tubusokba gyűjtsük és -70 °C-on tároljuk. Ne használjon olyan vért, amelyben koaguláció jelei látszanak.

Csapadék a reagens kazettában (RCB) A reagens kazetta (RCB) 1. tubusában (az a tubus, amelyik a legközelebb helyezkedik el az EZ1 Advanced vagy a BioRobot EZ1 DSP elülső oldalához, amikor a reagens kazetta (RCB) be van töltve) töltött pufferben csapadék keletkezhet. Amennyiben szükséges, 30-40 °C-on történő finom rázogatással oldja fel a csapadékot.

Az EZ1 munkaállomásokkal történő munka Az EZ1 Advanced és BioRobot EZ1 munkaállomások legfőbb jellemzői: Futásonkénti 1-6 mintából történő kitűnő minőségű nukleinsav tisztítás Kis helyigényű, hogy spóroljon a laboratóriumi férőhellyel Az előre programozott EZ1 DSP Kártyák tartalmazzák a felhasználásra kész protokollokat a nukleinsav tisztításhoz Előre töltött és lezárt reagens kazetták a könnyű, biztonságos és gyors EZ1 munkaelőkészítéshez A nukleinsav tisztítás teljes automatizálása a reagens kazetták nyitásától a nukleinsavak eluálásáig, kézi centrifugálási lépések nélkül Az EZ1 Advanced további jellemzői: *

Amikor vegyszerekkel dolgozik, mindig viseljen megfelelő laborköpenyt, eldobható

kesztyűt és védőszemüveget. További információért tekintse meg a biztonsági adatlapokat (MSDS), amelyek a forgalmazónál rendelkezésre állnak. 26


Vonalkód olvasás és minta nyomkövetés Kit adat követés a kithez tartozó Q-Card segítségével UV lámpa a futásonkénti esetleges mintaátvitel kiküszöbölésére, valamint a munkafelület dekontaminálására Az

UV dekontamináció segít lecsökkenteni az esetleges patogén szennyeződéseket az EZ Advanced munkafelületekről. Az inaktiválás hatékonyságát mindegyik specifikus élőlényre meg kell határozni és függ pl. a mintatípustól és a rétegvastagságtól. A QIAGEN nem tudja garantálni a specifikus patogének teljes megsemmisítését. EZ1 DSP DNA Blood Kártya vagy EZ1 Advanced DSP DNA Blood Kártya Az EZ1 DSP DNA Blood protokoll az EZ1 Advanced DSP DNA Blood Kártyán és az EZ1 DSP DNA Blood Kártyán van tárolva (integrált áramkört tartalmazó kártya). A felhasználó egyszerűen behelyezi az EZ1 Advanced DSP Kártyát az EZ1 Advanced gépbe vagy az EZ1 DSP Kártyát a BioRobot EZ1 DSP gépbe és a munkaállomás készen is áll a protokoll futtatására (9. és 10. ábra).

9. ábra. A protokoll beállítás könnyedsége EZ1 Advanced DSP Kártyával. A protokollt tartalmazó EZ1 Kártya behelyezése az EZ1 Advanced gépbe.

A munkaállomást csak az EZ1 DSP Kártya behelyezése után kapcsoljuk be. Győződjön meg róla, hogy az EZ1 DSP Kártya teljesen be lett tolva a gépbe. Ellenkező esetben fontos gépadatok veszhetnek el, ami memóriahibához vezethet. Az EZ1 Advanced DSP Kártya ill. az EZ1 Kártya nem cserélhető ki, amíg a gép bekapcsolt állapotban van.


27

10. ábra. Az Advanced Kártya teljesen betolva az EZ1 Kártya nyílásba.

Reagens kazetták (RCB) Az egy mintából származó nukleinsavak izolálásához szükséges reagenseket egyetlen reagens kazetta (RCB) (11. ábra, 32. oldal) tartalmazza. A kazetta minden egyes tubusa sajátos reagenst tartalmaz, mint pl. mágneses gyöngyök, lízis puffer, mosó puffer vagy elúciós puffer (AVE). Mivel minden tubus csak a szükséges reagens mennyiséget tartalmazza, kiküszöböli az esetleges felesleges reagens maradványok keletkezését az izolálás végére.

28


A

B

11. ábra. A munkaállomás beállításának könnyedsége a reagens kazettákkal (RCB). A Egy lezárt és előre töltött reagens kazetta (RCB). A reagens kazetta (RCB) típusától függően a tubusok töltöttségi szintje változik. B A reagens kazetták (RCB) behelyezése a kazettatartóba. A kazettatartón nyíl formájában egy jelzés található, amely a reagens kazetták (RCB) behelyezésének irányát mutatja.


29

Munkaasztal Az EZ1 Advanced vagy a BioRobot EZ1 DSP munkaasztala az a hely, ahová a felhasználó a mintákat és az EZ1 DSP DNA Blood Kit komponenseit helyezi (12. ábra, 31. oldal). A munkaasztal beállításának részletei az EZ1 Advanced vákuum fluoreszcens kijelzőjén (VFD) ill. a BioRobot EZ1 DSP folyadékkristályos kijelzőjén (LCD) kerülnek feltüntetésre, amikor a felhasználó megkezdi a munkaasztal beállítását. A gép kijelzője a protokoll állapotát is jelzi az automatizált izolálási folyamat alatt.

30


12. ábra. Az EZ1 Advanced ill. a BioRobot EZ1 DSP munkaasztala 1. Az Elúciós tubusok (ET) (1,5 ml) az első sorba kerülnek. 2. Az eldobható pipettahegy-tartók (DTH), amelyek az eldobható filteres pipettahegyeket (DFT) tartalmazzák, a második sorba kerülnek. 3. Az EZ1 DSP DNA Blood protokoll esetében a harmadik sor üresen marad. 4. A Mintatubusok (ST) (2 ml) a negyedik sorba kerülnek. 5. Reagens kazetták (RCB) a kazettatartóban. 6. Az EZ1 DSP DNA Blood protokoll esetében a fűtőblokk üresen marad.


31

Az EZ1 Advanced ill. a BioRobot EZ1 DSP DNA Blood működtetésének folyamata Helyezze be az EZ1 Advanced DSP DNA Blood Kártyát vagy az EZ1 DSP DNA Blood Kártyát az EZ1 Kártyanyílásába

↓ Kapcsolja be az EZ1 Advanced vagy a BioRobot EZ1 DSP gépet

↓ Kövesse a kijelző üzenetét a mintakövetéshez*

↓ Kövesse a kijelző üzenetét a munkaasztal beállításához

↓ Indítsa el a protokollt

↓ Gyűjtse össze az izolált DNS-t

↓ UV dekontamináció* *Csak az EZ1 Advanced esetében

32


Protokoll: Genomiális DNS tisztítása teljes vérmintából A kezdés előtti fontos pontok Amennyiben először használja az EZ1 DSP DNA Blood Kitet, olvassa el a „fontos megjegyzések” részt a 25. oldalon A reagens kazetták (RCB) guanidin sókat tartalmaznak, ezért nem kompatibilisek fehérítőt (hypo) tartalmazó fertőtlenítő szerekkel. Használatukkor tegyen megfelelő óvintézkedéseket és használjon védőkesztyűt. A biztonsági információkért nézze meg a 7. oldalt. A protokoll minden egyes lépését szobahőmérsékleten végezze (1525 °C). Az összekészítés alatt gyorsan dolgozzon. Miután a kitet kézhez kapta, ellenőrizze, hogy az összetevők nem sérültek-e. Ha a reagens kazetták (RCB) vagy a kit egyéb összetevői sérültek, keresse meg a QIAGEN technikai szervízét vagy a helyi forgalmazót. Folyadék kiömlés esetén nézze meg a „biztonsági információk” részt (7. oldal). Ne használjon sérült reagens kazettákat (RCB) vagy egyéb kit összetevőket, ugyanis ezek alacsony kit hatékonysághoz vezethetnek. A folyamat néhány lépésénél 2 választás lehetséges. Válassza a S (kéket) ha az EZ1 Advanced gépet használja; válassza a z (pirosat) ha a BioRobot EZ1 DSP-t használja. A kezdés előtti teendők A reagens kazettákban (RCB) lévő lízis pufferben a tárolás során csapadék képződhet. Amennyiben szükséges, 30-40 °C-on történő melegítéssel oldja fel, majd tegye szobahőmérsékletre. Folyamat 1.

Ekvilibrálja az akár 6 db teljes vérmintát szobahőmérsékletre. Győződjön meg róla, hogy a lefagyasztott minták teljesen felolvadtak és elegendő ideig ekvilibráltuk őket szobahőmérsékleten. Amennyiben a mintákat 28 °C-on tároltuk, ugyanúgy szobahőmérsékletre ekvilibráljuk azokat is. Az optimális kinyerés és DNS tisztaság érdekében mindegyik minta hőmérsékletének 15-25 °C-nak kell lennie, mielőtt a folyamatot elkezdjük.

2.

3. 4.

Helyezze be S az EZ1 Advanced DSP DNA Blood Kártyát az EZ1 Advanced gép EZ1 Advanced kártyanyílásába vagy z az EZ1 DSP DNA Blood Kártyát a BioRobot EZ1 DSP gép EZ1 kártyanyílásába. Kapcsolja be az EZ1 munkaállomást. A be-/kikapcsoló gomb a gép hátulján található Nyomja meg a „START”-ot, hogy elkezdje a munkaasztal beállítását az EZ1 DSP DNA Blood protokollhoz.


33

5. 6.

7.

Nyissa fel a munkaállomás ajtaját. Fordítsa fel-le az 1-6 reagens kazettát (RCB) háromszor, hogy a mágneses részecskéket összekeverje. Azután kocogtassa meg a reagens kazettákat (RCB), hogy a reagensek összegyűljenek a tubusok aljába. Kövesse a kijelzőn olvasható utasításokat a munkaasztal beállításához, a protokoll kiválasztásához és a S mintakövetéshez. Miután becsúsztatta a reagens kazettát (RCB) a kazettatartóba, nyomja le a kazettát, amíg be nem pattan a helyére. Ha 6 reagens kazettánál (RCB) kevesebbet használ, bármilyen sorrendben behelyezheti őket. Ebben az esetben a többi laboreszköz behelyezésénél is kövesse a kazetták sorrendjét. S Amennyiben használja a mintakövetési opciót, győződjön meg róla, hogy a minta-azonosító is a minták sorrendjét követi a munkaasztalon, hogy elkerülje a minták összekeveredését.

8. Csukja be a munkaállomás ajtaját. 9. Nyomja meg a START-ot a protokoll kezdéséhez. 10. Amikor a protokoll befejeződött, a kijelzőn a „Protocol finished” felirat jelenik meg. SNyomja meg az „ENT” gombott, hogy riport file-t készítsen. SAz EZ1 Advanced akár 10 riport file-t is tud tárolni. Ezeket közvetlenül ki lehet nyomtatni egy hozzákapcsolt nyomtatóval, vagy továbbítani egy számítógépre. 11. Nyissa fel a munkaállomás ajtaját. 12. Gyűjtse össze az izolált DNS-t tartalmazó elúciós csöveket az első sorból. Dobja ki az elhasznált laboreszközöket.* 13. S Opcionális: Kövesse a kijelző utasításait a munkaasztal felületének UV dekontaminálásához. 14. Végezze el az EZ1 munkaállomáshoz csomagolt kézikönyvben szereplő időszakos karbantartási lépéseket. Az időszakos karbantartás minden protokoll futtatás után kötelező. Magában foglalja a lyukasztó egység és a munkaasztal felületek megtisztítását. A lyukasztó egység hegyes. Dupla védőkesztyű használatát javasoljuk. 15. Még egy protokoll futtatásához nyomja meg a „START”-ot, végezze el a protokoll 1. és 2. lépéseit és folytassa az 5. lépéssel. Egyéb esetben kétszer nyomja meg „STOP”-ot, hogy a kijelző nyitóképéhez visszatérjen, csukja be a munkaállomás ajtaját és kapcsolja ki az EZ1 munkaállomást. A 3. és 4. lépések elvégzése nem szükséges, ha másik protokollt futtatna. Ugorja át ezeket. * A minta hulladék guanidin sókat tartalmaz, ezért az nem kompatibilis a fehérítőszerekkel. Lásd a 8. oldalt a biztonsági információkért.

34


Hibakeresési útmutató Ez a hibakeresési útmutató az esetlegesen felmerülő problémák megoldásában segíthet. További információért, nézze meg gyakran feltett kérdések lapot a technikai segítség központunk honlapján: www.qiagen.com/FAQ/FAQList.aspx. A QIAGEN technikai szervíz kutatói szívesen segítenek a kérdései megválaszolásában, akár ebben a kézikönyvben található információkkal vagy protokollokkal, akár a minta és analízis technológiákkal kapcsolatban (további információért nézze meg a hátoldalt vagy keresse fel a www.qiagen.com oldalt). Észrevételek és javaslatok Általános működtetés Hibaüzenet a berendezés kijelzőjén

Hivatkozzon az EZ1 berendezéshez szállított kezelési útmutatóra.

Alacsony DNS kinyerés a) a mágneses részecskék nem teljesen feloldottak

b) nem elégséges reagens felszívása

c) a fagyasztott vérminták a kiolvasztás után nem megfelelően lettek összekeverve d) A reagens kazetta (RCB) tubusainak aljában kicsapódás látható

Győződjön meg róla, hogy a mágneses részecskéket felszuszpendálta, mielőtt a reagens kazettákat (RCB) a kazettatartóba csúsztatta. Miután fel-le fordította a reagens kazettákat (RCB) hogy felszuszpendálja a mágneses részecskéket, győződjön meg róla, hogy megkocogtatta a reagens kazettákat (RCB), hogy a reagenseket a tubusok aljába gyűjtse Olvassza fel a fagyasztott vérmintákat egy inkubátorban * vagy vízfürdőbe* 30-40 °C-on finom rázogatással, hogy az alapos összekeverést biztosítsa Helyezze a reagens kazettákat (RCB) rázóinkubátorba és akár 2 órán keresztül inkubálja finom rázás mellett 30-40 °C-on. Amennyiben a kicsapódás nem oldódott fel, ne használja a reagens kazettákat (RCB).

* Biztosítsa, hogy a készülékek szabályos időközönként ellenőrizve, karbantartva és kalibrálva legyanek a gyártó utasításai szerint.


35

A DNS nem megfelelően használható az izolálást követő enzimatikus reakciókban a) Nem elégséges DNS-t használ az alkalmazáshoz

b) Túl nagy mennyiségű DNS felhasználása az alkalmazáshoz

Mérje meg a DNS mennyiségét spektrofotométeres vizsgálattal 260 nm-en (tekintse meg a „DNS mennyiségi meghatározása” részt a 45. oldalon). A túlzott mennyiségű DNS gátolhatja az enzimatikus reakció működését. Mérje le az izolált DNS mennyiségét spektrofotométeres vizsgálattal 260 nm-en (tekintse meg a „DNS mennyiségi meghatározása” részt a 45. oldalon).

Alacsony A 260 /A 280 arány az izolált nukleinsavaknál A 320 nm-nél mért abszorbancia érték nem lett kivonva a 260 és 280 nm-nél mért abszorbancia értékből

36

Az eluátumban található mágneses részecskék miatt mérje le az eluátumot a 320 nm-nél is és ezt vonja ki a 260 és 280 nm-en kapott értékekből


„A” Függelék: Kijelzett üzenetek Az üzenetek, amelyeket a gép ad a munkaasztal összeállítás (7. lépés), a protokoll futtatása alatt és a futtatás után az 5. táblázatban foglaltuk össze az EZ1 Advanced és a 6. táblázatban az BioRobot EZ1 DSP készülékhez. Az üzenetek száma a táblázatban megfelel a készülék szoftvere által adott üzenet számának. Az általános hibaüzeneteket az EZ1 Advanced vagy a BioRobot EZ1 DSP készülékkel adott kézikönyvben találhatjuk meg. 5. táblázat Az EZ1 Advanced DNA Blood procedúra üzenetei Üzenet száma

Üzenet típusa

EZ1 Advanced üzenet szövege

Magyar megfelelő

Nincs

Útmutatás

Date/Time START: Run

Dátum/Idő START: futtatás 1: UV 2: Man 3: Teszt 4: Beállítás Bill.: START, 1, 2, 3, 4

1: UV 2: Man 3: Test 4: Setup Key: START, 1, 2, 3, 4 1

Útmutatás

EZ1 Advanced DSP DNA Blood Version 1.0

2

Adatkövetés

Scan/enter user ID

Vonalkód olvasóval vagy kézzel vigyük be a felhasználó azonosítót

3

Adatkövetés

Scan/enter Q-Card bar code

Vonalkód olvasóval vagy kézzel vigyük be a Q-Card vonalkódját

4

Útmutatás

Wrong kit! Please load EZ1 DSP DNA Blood

Rossz kit! Töltse be az EZ1 DSP DNA Blood kitet ENT: Vissza

ENT: back 5

Útmutatás

Kit expired ENT: Use new kit ESC: Stop protocol

6

Adatkövetés

Use Q-Card data with sample no. 1 to Enter 1 to 6


Kit lejárt ENT: Használjon új kitet ESC: Stop protokoll Használja a Q-Card adatokat az 1 mintától a . mintáig Vigye be 1 -6

37

Üzenet száma

Üzenet típusa


Magyar megfelelő

7

Útmutatás

Do you want to process more samples with another kit lot ENT: Yes, ESC: No

További mintákat is akar kezelni másik tételszámú kittel?

Akar hozzátenni minta azonosítót? ENT: Igen ESC: Nem

ENT: Igen, ESC: Nem

8

Adatkövetés

Do you want to add sample ID? ENT: Yes ESC: No

9

Adatkövetés

Scan/enter sample sample no. [x]

10

Adatkövetés

ID1: ID2: ID3: Next=ENT

Azonosító 1: 2: 3: ENT=Következő

11

Adatkövetés

ID1: ID2: ID3: Next=ENT, ID1-3=Up

Azonosító 1: 2: 3: ENT:Következő, UP/FEL=Azonosító 13

12

Adatkövetés

Do you want to add assay information? ENT: Yes, ESC: No

Hozzá akar adni vizsgálati info-t? ENT: Igen, ESC: Nem

13

Adatkövetés

Scan/enter assay sample no. [x]

14

Adatkövetés

Do you want to add notes? ENT: Yes ESC: No

Hozzáad megjegyzést? ENT: Igen ESC: Nem

15

Adatkövetés

Scan/enter notes sample no. [x]

Vonalkóddal vagy kézzel vigye be a [x.] mintához a megjegyzést

38

ID

ID

Vonalkóddal vagy kézzel vigye be a minta azonosítót az [x.] mintára4

Vonalkóddal vagy kézzel vigye be a [x.] mintához a vizsgálat azonosítót


Üzenet száma

Üzenet típusa


Magyar megfelelő

16

Útmutatás

The protocol use Sample Volume: 350μl Elution Volume: 200μl Next=Any

A protokollban: Minta térf.: 350μl Elúció térf.: 200μl Bármely gomb=Tovább

17

Útmutatás

Load cartridges at same positions as samples

Tegyük be a reagens kazettákat a mintáknak megfelelően Bármely gomb=Tovább, ESC=Előző

Next=Any, Prev=Esc

18

Útmutatás

Load elution tubes (ET) (1.5ml) into first row Next=Any, Prev=Esc

Tegyük be az elúciós csöveket (ET) (1,5 ml) az első sorba. Bármely gomb=Tovább, ESC=Előző

19

Útmutatás

Load tip holders (DTH) and tips (DFT) into second row Next=Any, Prev=Esc

Tegyük be a hegy tartókat (DTH) és hegyeket (DFT) a második sorba Bármely gomb=Tovább, ESC=Előző

20

Útmutatás

Leave third row empty

Hagyjuk a 3. sort üresen Bármely gomb=Tovább, ESC=Előző

Next=Any, Prev=Esc

21

Útmutatás

Load 2.0 ml tubes (ST) with sample in fourth row Next=Any, Prev=Esc

Tegyünk 2,0ml-es csövet (ST) a mintákkal a 4. sorba Bármely gomb=Tovább, ESC=Előző

22

Útmutatás

Loading finished. Close door and press START

Betöltés vége. Csukja be az ajtót és nyomja meg a START gombot. ESC=Előző (lépés)

Prev=Esc


39

Üzenet száma

Üzenet típusa


Magyar megfelelő

23

Útmutatás

Please close door!

Kérem csukja be az ajtót!

24

Státusz

Protocol started

Protokoll elkezdve

25

Státusz

Piercing Foil [x] of 23 min left

Fólia lyukasztás, [x] perc maradt a 23-ból.

26

Státusz

Collecting Elution Buffer [x] of 23 min left

Elúciós puffer felszívása, [x] perc maradt a 23-ból.

27

Státusz

Deliver at Heat Block [x] of 23 min left

A fűtőblokkba szállítás [x] perc maradt a 23-ból.

28

Státusz

Collecting Magnetic Beads [x] of 23 min left

Mágnesgyöngyök felszívása, [x] perc maradt a 23-ból.

29

Státusz

Resuspension of Magnetic Beads [x] of 23 min left

Mágnesgyöngyök felszuszpendálása [x] perc maradt a 23-ból.

30

Státusz

Adding Lysis Buffer [x] of 23 min left

Lízis puffer hozzáadása [x] perc maradt a 23-ból.

31

Státusz

Mixing Lysate [x] of 23 min left

Lizátum keverése [x] perc maradt a 23-ból.

32

Státusz

Adding Magnetic Beads [x] of 23 min left

Mágnesgyöngyök hozzáadása [x] perc maradt a 23-ból.

33

Státusz

DNA binding to Magnetic Beads Magnetic separation [x] of 23 min left

DNS kötés a mégnesgyöngyhöz, mágneses elválasztás [x] perc maradt a 23ból.

34

Státusz

Wash 1 Magnetic separation [x] of 23 min left

1. mosás, mágneses elválasztás, [x] perc maradt a 23-ból.

35

Státusz



36

Státusz



40


Üzenet száma

Üzenet típusa


Magyar megfelelő

37

Státusz



38

Státusz

Rinse [x] of 23 min left

Öblítés, [x] perc maradt a 23-ból.

39

Státusz

Checking Temperature Set: Cur:

Hőmérséklet ellenőrzés: Set: beállított Cur:aktuális

40

Státusz

Elution [x] of 23 min left

Elúció, [x] perc maradt a 23-ból.

41

Útmutatás

Protocol finished

Protokoll befejezve

42

Útmutatás

Transfer Report attempt no.

43

Útmutatás

Report file sent

file,

Jelentés file kísérlet (x).

átvitel

Jelentés file átküldve ENT=Következő

Next=ENT 44

Útmutatás

Report file could not be sent Resend=ENT

Jelentés file átküldése sikertelen ENT=Újraküldés

45

Útmutatás

Perform UV run? ENT: Yes ESC: No

UV tisztítás? ENT: Igen ESC: Nem

46

Útmutatás

UV DECONTAMINATION Set time min Key:0-9, ENT

UV FERTŐTLENÍTÉS

UV lamp expires soon

UV lámpa hamarosan lejár Maradék UV futtatás ENT=Folytatás

47

Útmutatás

UV runs left

Beállítás percben: 0-9-ig majd ENT

ENT= continue 48

Útmutatás

UV lamp is expired ENT=continue ESC=abort


UV lámpa lejárt ENT=Folytatás ESC=Leállít

41

Üzenet száma

Üzenet típusa


Magyar megfelelő

49

Útmutatás

UV DECONTAMINATION Time must be between 20-60 min Key:ESC

UV FERTŐTLENÍTÉS Az idő 20-60 perc között lehet.

UV DECONTAMINATION Total Time: min Time left: min

UV FERTŐTLENÍTÉS

50

Útmutatás

Tovább: ESC

Beállított idő: perc Idő maradt: perc

51

Útmutatás

Decontamination UV lamp cooling Please stand by

Fertőtlenítő UV lámpa hűtés folyamatban. Kérjük várjon!

52

Útmutatás

Perform regular maintenance before next run!

Végezze el a szokásos karbantartást a következő futtatás előtt. ESC=Főmenü

ESC=Main menu

6. táblázat A BioRobot EZ1 DSP DNA Blood procedúra üzenetei Üzenet száma

Üzenet típusa

EZ1 Advanced szövege

Nincs

Útmutatás

Choose button: START: Protocols 1 : Tools 2 : Tests

1

Útmutatás

EZ1 DSP DNA Version 1.0.0

2

Útmutatás

The protocol uses Sample Volume: [SampleVolume]ul Elution Volume: [ElutionVolume]ul Next=Any

42

üzenet

Magyar megfelelő Válasszon gombot START: Protokollok 1: Eszközök 2:Tesztek

Blood A protokoll következő térfogatokat használja: Minta térfogat: [Minta térf.] μl Elúciós térfogat: [Elúciós térf.] μl Bármely gomb=Következő

a


Üzenet száma

Üzenet típusa


üzenet

3

Útmutatás

Load sufficient cartridges (RCB) for samples Next=Any, Prev=ESC

4

Útmutatás

Load elution tubes (ET) (1.5ml) into first row Next=Any, Prev=ESC

Magyar megfelelő Tegyünk be a mintának megfelelő mennyiségű kazettát (RCB) Bármely=Következő, ESC=Előző Tegyük be az elúciós csöveket (ET) (1,5 ml). Bármely=Következő, ESC=Előző

5

Útmutatás

Load tip holders (DTH) and tips (DFT) into second row Next=Any, Prev=ESC

Tegyük be a hegy tartókat (DTH) és hegyeket (DFT) a második sorba Bármely gomb=Tovább, ESC=Előző

6

Útmutatás

Leave third row Empty

Hagyjuk a 3. sort üresen Bármely gomb=Tovább, ESC=Előző

Next=Any, Prev=ESC

7

Útmutatás

Load 2.0ml tubes (ST) with sample in fourth row Next=Any, Prev=ESC

8

Útmutatás

Start protocol Press START

Tegyünk 2,0ml (ST) a mintákkal a 4. sorba Bármely gomb=Tovább, ESC=Előző

Prev=ESC

Indítsa el a protokollt a START gomb megnyomásával. ESC=Előző (lépés)

9

Státusz

Protocol started

Protokoll elkezdve

10

Státusz

Piercing Foil

Fólia lyukasztás

11

Státusz

Collecting Elution Buffer

Elúciós puffer felszívása.

12

Státusz

Deliver at Heat Block

A fűtőblokkba.

13

Státusz

Collecting Beads

Mágnesgyöngyök felszívása.


Magnetic

43

Üzenet száma

Üzenet típusa


üzenet

Magyar megfelelő

14

Státusz

Resuspension Magnetic Beads

of

Mágnesgyöngyök felszuszpendálása.

15

Státusz

Adding Lysis Buffer

Lízis puffer hozzáadás.

16

Státusz

Mixing Lysate

Lizátum keverése.

17

Státusz

Adding Magnetic Beads

Mágnesgyöngyök hozzáadása.

18

Státusz

DNA binding to Magnetic Beads Magnetic Separation

DNS kötés a mégnesgyöngyhöz, mágneses elválasztás.

19

Státusz

Wash 1 Magnetic Separation

1. mosás, mágneses elválasztás.

20

Státusz



21

Státusz



22

Státusz



23

Státusz

Rinse

Öblítés.

24

Státusz

Checking Temperature

Hőmérséklet ellenőrzés: Set: beállított 65 [°C] Cur:aktuális [fok]

Set: 65 [deg] Cur: [deg] 25

Státusz

Elution

Elúció.

26

Útmutatás

Protocol finished! Press ESC to return to menu

Protokoll befejezve. Nyomja meg az ESC gombot a menühöz

44


„B” Függelék: A DNS tárolása, mennyiségének és tisztaságának meghatározása DNS tárolás A tisztított DNS-t 1 hónapig tárolhatjuk 2-8 °C-on vagy hosszabb időre -20 Con. Archiválás céljából az eluátumot -70 °C-on tároljuk. DNS mennyiségi meghatározása A DNS koncentrációjának meghatározása 260 nm-en (A 260 ) történő spektrofotométeres méréssel történik. 260 nm-en történő mérés esetén az abszorbancia értékek 0,1 és 1 közötti értéktartományba kell hogy essenek. 1 abszorbancia egység 260 nm-en 50 μg DNS-nek felel meg milliliterenként * (A 260 =1→50 μg/ml). Használjon semleges pH-jú (pl. 10 mM Tris·Cl , pH 7.0) puffert a minták higításához és a spektrofotométer † kalibrálásához. A mágneses részecskék átvitele az eluátumba befolyásolhatja a A 260 -as értékeket, de a DNS használhatóságára további reakciók során nincs hatással. Amennyiben a tisztított DNS-t fluoreszcens kapilláris szekvenálási vizsgálatnak vetjük alá, az eluátumot tartalmazó tubust egy megfelelő mágneses szeparátorra tegyük fel, és az eluátumot egy új csőbe vigyük át (lásd lejjebb). Az EZ1 Advanced vagy a BioRobot EZ1 DSP rendszerrel izolált DNS kvantifikálásához: A DNS-t tartalmazó tubust vigye fel egy megfelelő mágneses szeparátorra (pl. QIAGEN 12. Tube Magnet, kat. sz: 36912) 1 percre. Ha a mágneses szeparátor nem áll rendelkezésre, centrifugálja le a DNS-t tartalmazó tubust 1 percig teljes sebességen egy mikrocentrifugában, hogy a mágneses részecskéket leülepítse. Amikor a szeparálással elkészült, vegyen ki 10-50 µl izolált DNS-t és higítsa fel 100 µl-re semleges pH-jú pufferrel. Mérje meg az abszorbancia értékeket 320 és 260 nm-en. Vonja ki a 320 nm-en mért értéket a 260 nm-en mért értékből, hogy a mágneses részecskék jelenlétét korrigálja. A DNS minta koncentrációja = 50 μg/ml x (A 260 – A 320 ) x higítási faktor A teljes izolált DNS mennyiség = koncentráció x a minta ml-ben mért mennyisége

* Amennyiben kémiai anyagokkal dolgoznak, mindig viseljenek megfelelő védőköpenyt, egyszer használatos védőkesztyűt és védőszemüveget. További információért kérjük, tanulmányozza a gyártó által kiadott biztonsági adatlapot (MSDS). † Használjunk vizet a spektrofotométer kalibrálásához, ha a mintákat nem higítjuk.


45

A DNS tisztasága A tisztaságot a 260 nm-en és 280 nm-en mért és korrigált értékek aránya adja, azaz (A 260 – A 320 )/ (A 280 – A 320 ). A tiszta DNS A 260 – A 280 értéke 1.7-1.9 között van. Enyhén alkalikus puffert (pl. 10 mM Tris·Cl, pH 7.5) használjunk a minták higítására és a spektrofotométer kalibrálására * .

* Amennyiben kémiai anyagokkal dolgoznak, mindig viseljenek megfelelő védőköpenyt, egyszer használatos védőkesztyűt és védőszemüveget. További információért kérjük, tanulmányozza a gyártó által kiadott biztonsági adatlapot (MSDS).

46


„C” Függelék: Minta adatlap a BioRobot EZ1 DSP használatához Ez a mintalap sablon hasznos lehet a minták kezeléséhez az EZ1 DSP DNA Blood módszer használatakor. A lap fénymásolható és a minták leírása valamint a futtatás részletei feltüntethetők. EZ1 DSP Blood rendszer Dátum/idő:

Kit tételszám:

Kezelő neve:

Futtatás azonosító

Munkaállomás sorozatszáma: Pozíció

Minta

Betöltés ellenőrzése

1 (bal)

Reagens kazetta (RCB) (bal) Elúciós cső (ET) Pipettahegytartó (DTH) heggyel (DFT) Mintacső (ST) mintával

2


3


4


5


6 (jobb)



Megjegyzés

47

„D” Függelék: Példa egy EZ1 Advanced Riport file-ra Ez a függelék egy tipikus riport file-t mutat meg, amelyet az EZ1 Advanced gép készített. Minden paraméter értéke eltér majd a saját EZ1 Advanced gépével készített riport file-étól. Report File EZ1 Advanced: Serial No. EZ1 Advanced: .................."123456789" User ID: ........................................................"964" Firmware version: ....................................."V 1.0.0" Installation date of instrument: .........................." , " Weekly maintenance done on: ........ "Feb 26, 2008" Yearly maintenance done on:.........."Nov 06, 2007" Date of last UV-run:........................"Mar 03, 2008" Start of last UV-run: ...................................."14:48" End of last UV-run: ....................................."14:52" Status of last UV-run: .................... "UV run aborted" Protocol name: ............................ "DSP DNA Blood" ........................................................."Version 1.0" Date of run: ..................................."Mar 03, 2008" Start of run:................................................"14:54" End of run:................................................."15:40" Status run:...................................................... "o.k" Error Code: ..................................................... "---" Sample input Volume [ul]: .............................."350" Elution volume [ul]: ........................................"200" Channel A: Sample ID: ...................................................."717" Reagent Kit number: .............................."9801401" Reagent Lot number: ......................."1181234567" Reagent Expiry date: ...................................."1210" Assay Kit ID: .................................................."717" Note: ............................................................"717" Channel B: Sample ID: ...................................................."393" Reagent Kit number: .............................."9801401" Reagent Lot number: ......................."1181234567" Reagent Expiry date: ...................................."1210" Assay Kit ID: .................................................."393" Note: ............................................................"393" Channel C: Sample ID: ...................................................."163" Reagent Kit number: .............................."9801401" Reagent Lot number: ......................."1181234567" Reagent Expiry date: ...................................."1210" Assay Kit ID: .................................................."163" Note: ............................................................"163" Channel D: Sample ID: ...................................................."149" Reagent Kit number: .............................."9801401"

48


Reagent Lot number: ......................."1181234567" Reagent Expiry date: ...................................."1210" Assay Kit ID: .................................................."149" Note: ............................................................"149" Channel E: Sample ID: ...................................................."719" Reagent Kit number: .............................."9801401" Reagent Lot number: ......................."1181234567" Reagent Expiry date: ...................................."1210" Assay Kit ID: .................................................."719" Note: ............................................................"719" Channel F: Sample ID: ...................................................."407" Reagent Kit number: .............................."9801401" Reagent Lot number: ......................."1181234567" Reagent Expiry date: ...................................."1210" Assay Kit ID: .................................................."407" Note: ............................................................"407" [Checksum E95974AC]

Referenciák A QIAGEN nagy terjedelmű és naprakész online adatbázist tart fent a QIAGEN termékek használatával kapcsolatos tudományos értekezésekből. A széles körű keresési lehetőségek segítenek, hogy az ön által keresett cikket megtalálja akár egy egyszerű kulcsszó alapján, akár az alkalmazást, kutatási területet, címet pontosítva. A teljes referencia lista eléréséhez tekintse meg a QIAGEN Referencia Adatbázist online a www.qiagen.com/RefDB/search.asp oldalon vagy keresse fel a QIAGEN Technikai Szervízt vagy a helyi forgalmazót.


49

Rendelési információk Termék

Tartalom

Kat. szám

EZ1 DSP DNA Blood Kit (48)

48 DNS minta tisztításhoz: Előre töltött reagens kazetták, Egyszer használatos pipettahegy tartó, Egyszer használatos pipettahegy, minta csövek, elúciós csövek

EZ1 Advanced DSP DNA Blood Card

Előre programozott kártya az EZ1 DSP DNA Blood protokollal; az EZ1 Advanced munkaállomáson történő alkalmazásra

9018305

EZ1 DSP DNA Blood Card

Előre programozott kártya az EZ1 DSP DNA Blood protokollal; a BioRobot EZ1 DSP munkaállomáson történő alkalmazásra

9017713

EZ1 Advanced

Munkaállomás nukleinsavak automatikus tisztítására az EZ1 kitekkel, 1 év garancia alkatrészekre és javításra*

9001411

Kérjük látogassa meg a www.qiagen.com/products/assays QIAGEN további analízis technikáiért.

62124

lapot

a

* Ajánlott a Warranty PLUS 2 (Kat. szám. 9237720): 3 éves garancia, 1 megelőző karbantartás évente, 48 órás elsőbbségi válaszidő, minden munka, utazási és javításhoz szükséges alkatrész bennefoglalva.

50


Ez a lap szándékosan lett üresen hagyva


51

Ez a lap szándékosan lett üresen hagyva

52


Védjegyek: QIAGEN ® , artus ® , BioRobot ® , EZ1 ® , (QIAGEN Group); BD Vacutainer ® (Becton, Dickinson and Company); LightCycler ® (Roche Group); Monovette ® (Sarstedt AG & Co.); Vacuette ® (C.A. Greiner & Söhne GmbH). Korlátozott licensz egyezmény Ennek a terméknek a használatával bármely EZ1 DSP DNA Blood Kit beszerzője és használója egyetért az alábbi feltételekkel: 1.

Az EZ1 DSP DNA Blood Kit kizárólag az EZ1 DSP DNA Blood Kit kézikönyvében foglaltak alapján és a kitben található összetevőkkel használható. A QIAGEN valamennyi szellemi tulajdonjoga alapján nem járul hozzá, hogy felhasználják és beleépítsék a kitben lévő összetevőket a kitben nem megtalálható komponensekkel, kivéve abban az esetben, ha az szerepel az EZ1 DSP DNA Blood Kit kézikönyvben vagy a www.qiagen.com honlapon található további protokollok valamelyikében.

2.

Amennyiben az külön nem kerül megemlítésre a QIAGEN nem vállal garanciát arra, hogy kitjei vagy azok használata harmadik fél jogait nem sérti.

3.

Ezen kitnek és összetevőinek csak egyszeri használata engedélyezett újrahasznosítása, felújítása és újra eladása nem engedélyezett.

4.

A QIAGEN egyértelműen elutasít minden olyan engedélyt (kifejezett vagy szándék szintű) amelyet korábban nem nyilvánított ki.

5.

A kit beszerzője és felhasználója egyetértését adja, hogy sem ő maga nem teszi és senki másnak sem engedélyez semmilyen lépést, amely ahhoz vezet vagy elősegíti a fenti pontok megszegését. Ezen korlátozott licensz egyezményben foglalt korlátozásokat a QIAGEN bármely bíróságon keresztül érvényesítheti, a licensz megszegőjét a nyomozati és bírósági eljárás teljes költségének megtérítésére kötelezheti beleértve, az ügyvédi díjakat olyan eljárásban, amely a korlátozott licenszhez és a kithez és összetevőihez kapcsolódó szellemi tulajdonjoghoz fűződik.

A legújabb licensz feltételekről a www.qiagen.com oldalon tájékozódhat. © 2008 QIAGEN, minden jog fenntartva.


53

www.qiagen.com Australia Orders 03-9840-9800 Fax 03-9840-9888 Technical 1-800-243-066 Austria Orders 0800/28-10-10 Fax 0800/28-10-19 Technical 0800/28-10-11 Belgium Orders 0800-79612 Fax 0800-79611 Technical 0800-79556 Canada Orders 800-572-9613 Fax 800-713-5951 Technical 800-DNA-PREP (800-362-7737) China Orders 0086 21 3865 3865 Fax 0086 21 3865 3965 Technical 800 988 0325, 800 988 0327 Denmark Orders 80-885945 Fax 80-885944 Technical 80-885942 Finland Orders 0800-914416 Fax 0800-914415 Technical 0800-914413 France Orders 01-60-920-926 Fax 01-60-920-925 Technical 01-60-920-930 Offers 01-60-920-928 Germany Orders 02103-29-12000 Fax 02103-29-22000 Technical 02103-29-12400 Hong Kong Orders 800 933 965 Fax 800 930 439 Technical 800 930 425 Ireland Orders 1800-555-049 Fax 1800-555-048 Technical 1800-555-061 Italy Orders 02-33430411 Fax 02-33430426 Technical 800-787980 Japan Telephone 03-5547-0811 Fax 03-5547-0818 Technical 03-5547-0811 Luxembourg Orders 8002-2076 Fax 8002-2073 Technical 8002-2067 The Netherlands Orders 0800-0229592 Fax 0800-0229593 Technical 0800-0229602 Norway Orders 800-18859 Fax 800-18817 Technical 800-18712 Singapore Orders 65-67775366 Fax 65-67785177 Technical 65-67775366 South Korea Orders 1544 7145 Fax 1544 7146 Technical 1544 7145 Spain Orders 91-630-7050 Fax 91-630-5145 Technical 91-630-7050 Sweden Orders 020-790282 Fax 020-790582 Technical 020-798328 Switzerland Orders 055-254-22-11 Fax 055-254-22-13 Technical 055-254-22-12 UK Orders 01293-422-911 Fax 01293-422-922 Technical 01293-422-999 USA Orders 800-426-8157 Fax 800-718-2056 Technical 800-DNA-PREP (800-362-7737)

1050259HU 130182913

Sample & Assay Technologies

Sample & Assay Technologies

Recommend Documents