AKTIVITAS EKSTRAK CACING TANAH (Lumbricus rubellus) TERHADAP PENURUNAN KOLESTEROL DARAH PADA MENCIT (Mus musculus)
KARYA TULIS ILMIAH
OLEH IIN VANIA WIJAYA NIM 13.022
AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG AGUSTUS 2016
AKTIVITAS EKSTRAK CACING TANAH (Lumbricus rubellus) TERHADAP PENURUNAN KOLESTEROL DARAH PADA MENCIT (Mus musculus)
KARYA TULIS ILMIAH
Diajukan kepada Akademi Analis Farmasi Dan Makanan Putra Indonesia Malang Untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam menyelesaikan program D-3 bidang Analis Farmasi dan Makanan
OLEH IIN VANIA WIJAYA NIM 13.022
AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG AGUSTUS 2016
DAFTAR ISI
DAFTAR ISI ................................................................................................................ iii KATA PENGANTAR ................................................................................................... v BAB I ............................................................................................................................. 2 PENDAHULUAN.......................................................................................................... 2 1.1 Latar Belakang .................................................................................................... 2 1.2
Rumusan masalah .......................................................................................... 3
1.3
Tujuan penelitian ........................................................................................... 3
1.4
Ruang lingkup dan keterbatasan penelitian ................................................. 4
1.5
Definisi istilah................................................................................................. 4
BAB II ........................................................................................................................... 6 TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................................ 6 2.1 Kolesterol ............................................................................................................. 6 2.1.1 Kolesterol jahat (Low Density Lipoprotein) ...................................................... 6 2.1.3 Faktor resiko perubahan kadar kolesterol ....................................................... 7 2.1.4 Metabolisme kolesterol ................................................................................... 9 2.1.5 Mekanisme Transport Kolesterol Dalam Tubuh ............................................ 10 2.1.6 Biosintesis kolesterol .................................................................................... 10 2.2 Cacing tanah (Lubricus rubellus) ..................................................................... 12 2.2.1 Kandungan cacing tanah ............................................................................... 13 2.3 Ekstraksi ............................................................................................................ 14 2.3.1 Ekstraksi secara dekoktasi ............................................................................. 15 2.3.2 Faktor yang mempengaruhi ekstraksi ............................................................ 15 2.5 Pengujian in vivo ............................................................................................... 21 2.6
Hewan Coba ................................................................................................. 22
2.5.1
Mencit ................................................................................................... 22
2.7 Kerangka Konsep .............................................................................................. 26 2.8
Kerangka Teori ............................................................................................ 32
2.7
Hipotesis ....................................................................................................... 33
METODE PENELITIAN............................................................................................ 34
iv
3.1 Rancangan Penelitian ........................................................................................ 34 3.2 Populasi dan Sampel ......................................................................................... 35 3.3 Lokasi dan Waktu Pelaksanaan ........................................................................ 35 3.4 Definisi Operasional Variabel ........................................................................... 35 3.5 Instrumen Penelitian ......................................................................................... 36 3.6 Pengumpulan Data ............................................................................................ 36 3.6.1
Pembuatan tepung cacing tanah (TCT) ................................................... 36
3.6.2
Persiapan ekstrak cacing tanah ............................................................... 37
3.7 Perhitungan Bahan ............................................................................................ 37 3.8 Prosedur Pengujian ........................................................................................... 39 3.9 Analisis data....................................................................................................... 40 BAB IV ........................................................................................................................ 41 HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................................... 41 4.1
Hasil ............................................................................................................. 41
4.1.1
Hasil pembuatan tepung cacing tanah ..................................................... 41
4.1.2
Hasil dekoktasi ekstrak TCT .................................................................. 41
4.1.3
Hasil uji identifikasi protein ................................................................... 41
4.1.4
Hasil perlakuan penurunan kolesterol pada hewan uji ............................. 42
4.2
Pembahasan ................................................................................................. 43
BAB V.......................................................................................................................... 46 PENUTUP ................................................................................................................... 46 5.1
Kesimpulan .................................................................................................. 46
5.2
Saran ............................................................................................................ 46
DAFTAR RUJUKAN .............................................................................................. 47 LAMPIRAN ................................................................................................................ 50 Lampiran 1. Tabel konversi dosis ........................................................................... 50 Lampiran 2. Tabel timbangan mencit .................................................................... 51 Lampiran 3. Proses dekoktasi ekstrak TCT dan uji kualitatif protein ................. 51 Lampiran 4. Perlakuan pada mencit .................................................................... 54 Lampiran 5. ............................................................................................................. 55 Tabel hasil penurunan kolesterol dengan ekstrak cacing tanah pada mencit ....... 55
iii
v
KATA PENGANTAR Puji syukur kepada Tuhan yang Maha Esa karena berkat, rahmat dan karunia-Nya penulis dapat menyelesaikan penyusunan Karya Tulis Ilmiah ini. Penulisan Karya Tulis Ilmiah ini bertujuan sebagai persyaratan menyelesaikan program D-3 di Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. Judul yang penulis ajukan adalah “Aktivitas Ekstrak Cacing Tanah Terhadap Penurunan Kolesterol Darah Pada Mencit (Mus Musculus)” Sehubungan dengan terselesaikannya Karya Tulis Ilmiah ini, penulis mengucapkan terimakasih kepada pihak-pihak sebagai berikut : 1. Ibu Dra. Wigang Soelandjari selaku Direktur Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang serta selaku dosen penguji KTI. 2. Bapak Sugeng Wijiono, S.Si. Apt selaku dosen pembimbing. 3. Ibu Dyah Ratna Wulan, M.Si. selaku dosen penguji. 4. Bapak Ibu dosen Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang beserta staf. 5. Orang tua yang telah memberikan dukungan serta spiritual, materiil dan restunya dalam menuntut ilmu. 6. Teman-teman Akafarma angkatan Tahun 2013 serta semua pihak yang telah banyak membantu penulis dalam menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini. Penulis menyadari bahwa Karya Tulis Ilmiah ini masih mempunyai beberapa kekurangan. Oleh karena itu, saran dan kritik yang membangun sangat diharapkan. Semoga Karya Tulis Ilmiah ini bermanfaat.
Malang, 6 Agustus 2016
Penulis
iii
AKTIVITAS EKSTRAK CACING TANAH (Lumbricus rubellus) TERHADAP PENURUNAN KOLESTEROL DARAH PADA MENCIT (Mus musculus) EARTHWORM (Lumbricus rubellus) EXTRACTS ACTIVITY AGAINST A DECLINE IN BLOOD CHOLESTEROL IN MICE (Mus musculus)
ABSTRAK Penelitan ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak tepung cacing tanah (Lumbricus rubellus) terhadap kadar kolesterol total darah mencit (Mus musculus) metode yang digunakan merupakan eksperimental dengan kontrol positif dan negatif. Subjek penelitian berupa mencit berjumlah 15 ekor dengan berat badan 20-30g yang dibagi ke dalam 3 kelompok, masing-masing sebanyak 5 ekor. Perlakuan dimulai dengan pemberian pakan tinggi lemak selama 14 hari. Pada hari ke 15 seluruh mencit dilakukan tes kolesterol. Selanjutnya semua kelompok mendapat pakan tinggi lemak dengan perlakuannya, Kontrol (-) menggunakan aquades, Kontrol (+) menggunakan Simvastatin, Perlakuan dengan menggunakan ekstrak TCT 0,5 ml/hari. Setelah 7 hari perlakuan dilakukan tes kolesterol. Data dianalisis dengan SPSS, beda nyata setiap perlakuan diuji dengan one way Anova dan dilanjutkan dengan Post Hoc Tukey HSD. Hasil analisa statistika tidak memberikan berbedaan signifikan dimana ekstrak TCT tidak dapat menurunkan kolesterol secara signifikan dibanding dengan simvastatin. Kata Kunci : Lumbricus rubellus, Mus musculus, kolesterol.
ABSTRACT The study aims to find out the influence of extract earthworms flour (Lumbricus rubellus) on total blood cholesterol levels of neonatal mice (Mus musculus) is the experimental methods with positive and negative controls. The subjects in these research were 15 neonatal mice, which possess weight 20-30 g weight which are divided into 3 groups, each as much as 5 neonatal mice. The treatment starts with a high-fat feeding for 14 days. On the 15th the whole mice performed tests of cholesterol. Then all the groups got the feed high in fat with moderate, control (-) using aquades, control (+) using Simvastatin, Treatment using TCT extract 0.5 ml/day. After 7 days of treatment carried out tests of cholesterol. Data were analyzed with SPSS, unlike any real treatment tested by one-way Anova and Post Hoc Tukey HSD. The results of the statistical analysis does not provide significant difference TCT extracts which can't lower cholesterol significantly compared to simvastatin. Keyword : Lumbricus rubellus, Mus musculus, cholesterol
2
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Cacing tanah dikenal memiliki berbagai khasiat sebagai penyembuhan untuk penyakit typus, diare, dan deman akibat bakteri patogen karena kemampuan atibakteri yang dimiliki cacing tanah. Menurut Do TatLoi, MD, PhD, direktur Hanoi National Institute of Pharmaceutical di Vietnam ekstrak cacing tanah memiliki kemampuan menghancurkan gumpalan darah dan penurun kadar kolesterol. Studi ini telah banyak diteliti di Cina untuk mengembangkan kemampuan antikolesterol pada ekstrak cacing tanah. Di RRC, Korea, Vietnam, dan banyak tempat lain di Asia Tenggara, cacing tahah terutama dari jenis Lumbricus spp, bisa digunakan sebagai obat sejak ribuan tahun yang lalu. Cacing tanah telah dicantumkan dalam “Ben Cao Gang Mu “, buku bahan obat standar (farmakope) pengobatan tradisional China. Di China, cacing tanah akrab disebut ‘naga tanah’. Nama pasaran cacing tanah kering di kalangan pedagang obatobatan tradisional China adalah ti lung kam. Kolesterol tinggi atau hiperkolesterolemia merupakan salah satu manifestasi dari masalah gizi lebih, yang perlu mendapatkan perhatian karena prevalensi kolesterol meningkat dari tahun ke tahun, baik di negara maju maupun negara yang sedang berkembang (Satoto, 1988). Hiperkolesterolemia banyak diderita oleh lansia karena faktor usia yang menyebabkan penurunan metabolisme tubuh. Lemak yang dihasilkan oleh tubuh tidak diolah menjadi energi sehingga menumpuk dihati dan menyebabkan hiperkolesterolemia. Hiperkolesterolemia dapat memicu penyakit jantung dan berakibat fatal bagi manusia. Menurut data
3
WHO, sekitar 35% penduduk Indonesia mempunyai kolesterol yang lebih tinggi dari normal karena gaya hidup dan pola makan, kondisi-kondisi yang mendasari, genetika, serta faktor-faktor tetap seperti umur, riwayat keluarga, Hiperkolesterolemia perlu dilakukan pengobatan karena jumlah kematian akibat penyakit ini terus meningkat. Banyak metode pengobatan yang dilakukan untuk pengobatan hiperkolesterolemia salah satu contohnya terapi obat herbal. Namun, terapi dengan cara tradisional dengan cacing tanah masih dilakukan secara empiris dan belum dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai khasiat terhadap penyakit hiperkolesterolemia meskipun masyarakat mengkonsumsi air seduhan cacing tanah (Anonim), Oleh karena itu, peneliti bermaksud untuk melakukan pengujian khasiat ekstrak tepung cacing tanah terhadap penurunan kadar kolesterol darah pada mencit dengan penduga asam amino yang terkandung dalam ekstrak cacing tanah mampu mengikat kolesterol dalam darah.
1.2 Rumusan masalah Apakah penggunaan ekstrak tepung cacing tanah dengan dosis 0,52 ml dengan jangka waktu tujuh hari dapat menurunkan kolesterol pada mencit?
1.3 Tujuan penelitian Mengkaji ekstrak cacing tanah dapat menurunkan kadar kolesterol pada mencit
4
1.4 Ruang lingkup dan keterbatasan penelitian Pada penelitian ini terdapat dua variabel, yaitu variabel bebas dan variabel terikat. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah ekstrak cacing tanah (Lumbricus rubellus) dan variabel terikat adalah penurunan kadar kolesterol total dalam darah mencit. Populasi dalam penelitian ini adalah cacing tanah (Lumbricus rubellus) yang didapatkan dari perternakan cacing tanah di Desa Kepuharjo Kabupaten Malang. Sampel dalam penelitian ini adalah ekstrak cacing tanah (Lumbricus rubellus) yang telah melalui proses dekoktasi. Lokasi pelaksanaan penelitian ini di Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium Mikrobiologi Putra Indonesia Malang. Waktu pelaksanaan penelitian ini mulai bulan Desember 2015 hingga bulan Mei 2016, Keterbatasan penelitian ini meliputi cacing tanah (Lumbricus rubellus) diambil peternakan cacing tanah, sampel yang digunakan untuk uji aktivitas asam amino adalah hasil ekstraksi cacing tanah (Lumbricus rubellus), dan tidak dilakukan isolasi dan penetapan kadar asam amino.
1.5 Definisi istilah 1. Cacing tanah (Lumbricus rubellus) merupakan hewan tidak bertulang belakang dan hidup didalam tanah 2. Asam amino adalah kandungan protein dalam cacing tanah yang dapat menurunkan kolesterol darah dengan menghambat penyerapan kolesterol dalam usus. 3. Ekstrak adalah sediaan kering kental, atau cair yang dibuat dengan menyaring simplisia atau hewani menurut cara yang cocok, di luar pengaruh cahaya
5
matahari langsung. Simplisia ini merupakan bahan alami yang dipergunakan sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apapun. 4. Hiperkolesterolemia adalah suatu keadaan dimana keadaan kolesterol dalam darah melebihi batas normal. Batas kolesterol normal adalah <200 mg/dL 5. Mencit (Mus musculus) adalah anggota Muridae yang berukuran kecil dan berwarna putih. Merupakan hewan pengerat yang termasuk hewan mamalia. Berat badan 20-40 g.
6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Kolesterol Kolesterol merupakan salah satu jenis lemak yang diproduksi oleh hati dan sangat diperlukan oleh tubuh. Tetapi kolesterol berlebih akan menimbulkan masalah, terutama pada pembuluh darah jantung dan otak. Setiap orang memiliki kolesterol di dalam darahnya, di mana 50% diproduksi oleh tubuh sendiri dan 50% berasal dari makanan. Kolesterol tidak hanya menjadi komponen penting dari dinding dinding sel, ia juga penting untuk produksi hormon hormone tertentu. Bagi kebanyakan orang antara 70 sampai 75 persen kolesterol dalam darah diproduksi oleh hati mereka; 25 sampai 30 persen lainnya berasal dari makanan yang mereka makan. Kolesterol yang diproduksi terdiri atas 2 jenis yaitu kolesterol HDL dan kolesterol LDL. ( Santoso, 2011: 1) 2.1.1 Kolesterol jahat (Low Density Lipoprotein) LDL ialah lipoprotein pada manusia yang berguna sebagai pengangkut kolesterol ke jaringan perifer dan berguna untuk sintesis membran dan hormon steroid. LDL mengandung 10% trigliserida serta 50% kolesterol, dipengaruhi oleh banyak faktor misalnya kadar kolesterol dalam makanan, kandungan lemak jenuh, dan tingkat kecepatan sintesis dan pembuangan LDL dan VLDL dalam tubuh.
7
Tabel 2.1 Batas Kadar LDL Kolesterol Kadar LDL Kolesterol Normal
Agak
tinggi Tinggi
< 130 mg/dl
(Pertengahan) 130-159 mg/dl
>160 mg/dl
2.1.2 Kolesterol baik (High Density Lipoprotein) Kolestrol HDL disebut lemak yang baik karena bisa membersihkan dan mengangkut timbunan lemak dari dinding pembuluh darah ke hati. Kolestrol HDL yang ideal harus lebih tinggi dari 40 mg/dl untuk laki-laki, atau di atas 50 mg/dl untuk perempuan. Penyebab kolestrol HDL yang rendah adalah kurang gerak badan, terlalu gemuk, serta kebiasaan merokok. Selain itu hormon testosteron pada laki-laki, steroid anabolik, dan progesteron bisa menurunkan kolesterol HDL, sedangkan hormon estrogen perempuan menaikkan HDL. 2.1.3 Faktor resiko perubahan kadar kolesterol Kadar kolesterol HDL dipengaruhi oleh beberapa faktor: 1) Genetik Hiperlipidemia
familial
adalah
suatu
kelainan
gen
yang
berperan
pada metabolisme lemak yang menyebabkan penderita memiliki kadar lemak yang tinggi dan bervariasi sesuai jenis kelainan genetik. 2) Usia Usia
mempunyai
kadar kolesterol
pengaruh
yang
cukup
dalam tubuh. Semakin
besar
terhadap
bertambahnya
peningkatan
usia, metabolisme
dalam tubuh semakin berkurang termasuk efektivitas dalam metabolisme lema
8
3) Jenis kelamin Hormon estrogen pada wanita bermanfaat untuk memberi perlindungan terhadap kejadian penyakit kardiovaskuler. Wanita dan pria berisiko sama mengalami aterosklerosis setelah wanita tersebut mengalami menopause.
4) Diet (asupan karbohidrat, lemak, kolesterol, serat) Energi yang diperlukan untuk aktivitas fisik dan metabolisme basal sangat dipengaruhi oleh sekresi LVDL dari hati. Diet kolesterol yang kurang dari 200 mg/ hari untuk individu normal dan diet rendah lemak jenuh sebanyak 8% dari total kalori diet bisa mengurangi 10-15% kadar kolesterol dalam serum. Konsumsi
bahan
makanan
tinggi
karbohidrat
dapat
menyebabkan
hipertrigliseridemia yang akan muncul dalam 48-72 jam setelah diet diberikan . Konsumsi diet tinggi serat dapat bermanfaat baik untuk menurunkan kolesterol dalam darah. 5) Obesitas Kadar lemak yang tinggi dalam darah dapat ditemukan pada individu dengan obesitas terutama pada obesitas sentral. Menurut penelitian, kadar kolesterol LDL yang lebih tinggi juga dapat ditemukan pada individu yang berat badannya lebih dari normal (BMI > 27 kg/m) 6) Aktifitas fisik Aktivitas fisik merupakan gerakan otot rangka tubuh yang memerlukan energi untuk
melakukannya.
Aktifitas
fisik
yang
kurang
menyebabkan
penurunan kolesterol HDL, peningkatan kolesterol LDL, peningkatan tekanan darah, dan penurunan sensitivitas insulin yang merupakan faktor risiko
9
untuk terjadinya penyakit kardiovaskuler. 7) Merokok, alkohol, stres, dan obat- obatan Frammingham Heart Study menyatakan bahwa jumlah rokok yang dihisap per hari berhubungan erat dengan kadar kolesterol HDL yang rendah. Kadar kolesterol
ditemukan
berbanding
lurus
dengan
tingkat
stres
seseorang.. Metabolisme lemak juga dipengaruhi oleh konsumsi alkohol dan penggunaan obat–obatan seperti obat antihipertensi dan kontrasepsi. 8) Penyakit Penelitian mengungkapkan bahwa ada suatu keabnormalan profil lipid pada individu yang memiliki penyakit metabolik seperti diabetes mellitus, hipotiroid, penyakit ginjal dan aterosklerosis. 2.1.4 Metabolisme kolesterol Kolesterol diserap dari usus dan digabung ke dalam kilomikron yang dibentuk di dalam mukosa. Setelah kilomikron melepaskan Trigliseridanya di dalam jaringan adiposus, maka sisa kilomikron membawa kolesterol ke dalam hati. Hati dan jaringan lain juga mensintesis kolesterol. Sejumlah kolesterol di dalam hati di ekskresikan di dalam empedu, keduanya dalam bentuk bebas dan sebagai asam empedu. Sejumlah kolesterol empedu diserap kembali dari usus. Kebanyakan kolesterol di dalam hati digabung ke dalam VLDL dan semuanya bersirkulasi didalam komplek lipoprotein. Umpan balik kolesterol menghambat sintesisnya sendiri dengan menghambat hidroksi- metilglutaril -KoA reduktase, enzim yang mengubah β-hidroksi-β-metilglutaril-KoA ke asam mevalonat sehingga bila masukan kolesterol diet tinggi, maka sintesis kolesterol hati menurun serta
10
sebaliknya tapi kompensasi umpan balik tidak lengkap, karena diet yang rendah dalam kolesterol dan lemak jenuh menyebabkan penurunan dalam kolesterol darah yang bersirkulasi (William F.Ganong, 1995). 2.1.5 Mekanisme Transport Kolesterol Dalam Tubuh Lemak dalam tubuh diangkut dari satu tempat ke tempat lain karena lemak bersifat tidak larut dalam air, maka untuk mengangkut lemak tersebut diperlukan suatu alat pengangkut Apo-Protein yaitu suatu jenis protein. Apoprotein dengan lemak yang diangkutnya membentuk suatu ikatan yang disebut lipoprotein. Ada 4 jenis Lipoprotein : a. Kilomikron. Komponen utamanya trigliserida (90-95%) yang berasal dari makanan. Plasma yang banyak mengandung kilomikron akan berwarna seperti susu. b.Very Low Density Lipoprotein (VLDL)-Pre Beta Lipoprotein. Berfungsi terutama untuk mengangkut trigliserida yang dibentuk oleh hepar. c.Low Density Lipoprotein (LDL)-Beta Lipoprotein. Komponen terdiri dari protein 25% dan kolesterol 40%. Berfungsi terutama untuk mengangkut kolesterol. d.High Density Lipoprotein (HDL)-Alpha Lipoprotein. Komponen utama terdiri dari protein 50% dan kolesterol 20%. Berfungsi terutama untuk mengangkut kolesterol dan fosfolipid (Diktat Kimia Klinik, 1985). 2.1.6 Biosintesis kolesterol Kolesterol disintesa di dalam hati, korteks adrenal, usus, kulit, dan aorta. Sintesa berlangsung di sitosol dan mikrosom sel jaringan tersebut. Tahapannya sebagai berikut:
11
1. Pembentukan mevalonat dari asetil koA 2. Pembentukan squalene dari mevalonat 3. Perubahan dari squalene menjadi lanosterol yang selanjutnya berubah menjadi kolesterol Urutan reaksi: 1. Pembentukan asetil koA. Molekul asam asetat diaktifkan menjadi asetil koA dengan menggunakan energi yang berasal dari ATP dan dikatalisis oleh enzim asetil koA sintetase. Mg sebagai kofaktor. 2. Dua molekul asetil koA berkondensasi membentuk asetoasetil koA. Enzim yang bekerja di sini adalah tiolase. 3. Asetoasetil koA berkondensasi dengan molekul asetil koA membentuk HMG koA. Enzim yang mengkatalisis adalah HMG koA sintetase. Proses ini memerlukan air dan menghasilkan produk sampingan berupa koA-SH. 4. HMG koA direduksi oleh reduktase dengan bantuan NADPH dan H. Hasilnya akan terbentuk mevalonat. 5. Mevalonat mengalami 3 deretan reaksi yang menyangkut fosforilasi oleh 3 ATP dan menghilangkan 1 atom karbon mevalonat. Terbentuk unit isoprenoid. Produk sampingan berupa karbon dioksida dan air. 6. Dua unit isoprenoid berkondensasi membentuk geranil pirofosfat dengan 10 atom C. 7. Satu molekul isoprenoid berkondensasi lebih lanjut dengan geranil pirofosfat untuk membentuk farnesil pirofosfat. 8. Dua molekul farnesil pirofosfat bergabung membentuk squalene dengan 30 atom C.
12
9. Penutupan cincin untuk membentuk lanosterol. 10. Lanosterol diubah menjadi 14-desmetil lanosterol (kehilangan gugus metil) → zimosterol → desmosterol → kolesterol. Enzim yang penting dalam sintesa kolesterol adalah HMG koA reduktase. Enzim ini dihambat oleh makanan tinggi kolesterol dan inhibisi umpan balik. Pada jaringan ekstrahepatik, HMG koA reduktase dihambat oleh kolesterol dalam LDL. Di dalam jaringan usus, enzim ini dihambat oleh asam-asam empedu. Hormon tiroid dan insulin juga turut berperan dalam penghambatan kerja enzim ini.
2.2 Cacing tanah (Lubricus rubellus) Cacing tanah Lumbricus rubellus tergolong ke dalam hewan avertebrata (tidak bertulang belakang) sehingga sering disebut binatang lunak (Palungkun, 1999). Cacing tanah Lumbricus Rubellus ini bukan asli dari Indonesia melainkan dari Eropa, sehingga sering disebut cacing Eropa atau cacing introduksi. Di Indonesia, cacing ini disebut juga dengan nama cacing Jayagiri (Rukmana, 1999). Menurut Rukmana (1999), panjang tubuh Lumbricus rubellus antara 8 cm –14 cm dengan jumlah segmen antara 95 –100 segmen. Warna tubuh bagian dorsal cokelat cerah sampai ungu kemerah-merahan, warna tubuh bagian ventral krem, dan bagian ekor kekuning-kuningan. Bentuk tubuh dorsal membulat dan ventral memipih. Klitelium terletak pada segmen ke-27-32. Jumlah segmen pada klitelium antara 6-7 segmen. Lubang kelamin jantanterletak pada segmen ke-14 dan lubang kelamin betina pada segmen ke 13. Gerakannya lamban dan kadar air tubuh cacing tanah berkisar antara 70%-78%. Secara umum cacing tanah memiliki lender, prostamium, tidak bergigi, mengandalkan kulit sebagai alat pernafasan,
13
bersifat
hermaprodit
biparental,
nocturnal,
serta
peka
terhadap
cahaya,sentuhan,getaran minyak dan deterjen. (Palungkun,1999). Cacing tanah Lumbricus rubellus diklasifikasikan oleh Hegner dan Engemann (1968) sebagai berikut: Dunia
: Animalia
Divisi
: Vermes
Filum
: Annelida
Kelas
: Oligichaeta
Ordo
: Opisthopora
Family
: Lumbricidae
Genus
: Lumbricus
Species
: rubellus
Gambar 2.1 Cacing tanah (Lumbricus rubellus)
2.2.1 Kandungan cacing tanah Cacing tanah juga mengandung beberapa asam amino dengan kadar yang tinggi. Salah satunya, cacing Lumbricus Rubellus mengandung kadarprotein
14
sangat tinggi sekitar 76%. Kadar ini lebih tinggi dibandingkan daging mamalia (65%) atau ikan (50%). Cacing tanah termasuk binatang invertebrata (tidak bertulang belakang). Ia hidup di dalam tanah yang gembur dan lembab. Lumbricus rebellus memiliki kandungan nutrisi. Diantaranya mengandungkadar protein sangat tinggi yaitu, sekitar 76 %, protein asam amino berkadartinggi, 17 % karbohidrat, 45 % lemak dan abu 1,5 %. Tepung cacing tanah Lumbricus rubellus memiliki kadar protein kasar 65,63% dan asam amino prolin sekitar 15% dari total 62 asam amino. Hasil penelitian terhadap cacing tanah menyatakanbahwa cacing tanah memiliki senyawa aktif yang mampu melumpuhkan bakteripatogen, khususnya Eschericia coli berlebih penyebab diare. Dari hasil laboratorium cacing tanah mengandung : Protein Asam glutamat Treonin Lisin Glycine
68% 8.98 % 3.28% 5.16% 3.54%
2.3 Ekstraksi Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-zat aktif dari bagian tanaman obat, hewan dan beberapa jenis ikan termasuk biota laut. Zat-zat aktif terdapat di dalam sel, namun sel tanaman dan hewan berbeda demikian pula ketebalannya, sehingga diperlukan metode ekstraksi dengan pelarut tertentu dalam mengekstraksinya. Tujuan ekstraksi bahan alam adalah untuk menarik komponen kimia yang terdapat pada bahan alam. Ekstraksi ini didasarkan pada prinsip perpindahan
15
massa komponen zat ke dalam pelarut, dimana perpindahan mulai terjadi pada lapisan antar muka kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut (Harbone, 1987; Dirjen POM, 1986)
2.3.1 Ekstraksi secara dekoktasi Dekoktasi adalah ektraksi pada suhu 90°C-98°C menggunakan pelarut air selama 30 menit (Ditjen POM, 2000; Agoes 2007) 2.3.2 Faktor yang mempengaruhi ekstraksi Faktor-faktor yang berpengaruh dalam proses ekstraksi antara lain: 1. Jenis pelarut Jenis pelarut mempengaruhi senyawa yang tersari, jumlah solut yang terekstrak dan kecepatan ekstraksi. Dalam dunia farmasi dan produk bahan obat alam, pelarut etanol, air dan campuran keduanya lebih sering dipilih karena dapat diterima oleh konsumen. a.
Pemilihan pelarut dalam proses ekstraksi
Pelarut yang baik pada proses ekstraksi adalah berdasarkan pada interaksi antara solut-pelarut. Pemilihan pelarut ekstraksi ini dapat dipilih menggunakan :
Tabel Robin (Robin Chart)
Tabel Robin menyajikan sistem pemilihan pelarut bagi suatu solut berdasarkan komposisi kimianya. Tabel Robin menyajikakan deviasi negatif, positif, atau netral dari interaksi solut-pelarut terhadap larutan ideal. Deviasi negatif dan netral mengindikasikan interaksi yang bagus diantara kelompok solut dan pelarut, sehingga kelarutan solut dalam pelarut menjadi tinggi.
Parameter kelarutan Hildebrand
16
Penggunaan parameter kelarutan dalam pemilihan pelarut adalah berdasar aturan kimia yang telah dikenal yakni “like dissolved like”. Jika gaya antar molekul antara molekul pelarut dan solute memiliki kekuatan yang mirip, maka pelarut tersebut merupakan pelarut yang baik bagi solut tersebut. 2. Pertimbangan Kriteria Pelarut Selain menggunakan parameter kelarutan Hildebrand atau Tabel Robin, pemilihan pelarut juga dilakukan dengan mempertimbangkan beberapa kriteria pemilihan pelarut seperti : a. Selektivitas Pilih pelarut yang selektif sesuai polaritas senyawa yang akan disari agar mendapat ekstrak yang lebih murni. b.
Kestabilan kimia dan panas
Pelarut yang dipilih harus stabil pada kondisi operasi ekstraksi dan proses hilir. c. Kecocokan dengan solut Pelarut tidak boleh bereaksi dengan senyawa yang terlarut. d.
Viskositas
Jika viskositas pelarut yang rendah maka koefisien difusi akan meningkat sehingga laju ekstraksi pun juga meningkat. e. Recoveri pelarut Guna meningkatkan nilai ekonomis proses, pelarut perlu direcoveri sehingga dapat digunakan kembali. Pelarut yang mempunyai titik didih rendah, lebih ekonomis untuk direkoveri dan digunakan kembali. f. Tidak mudah terbakar Untuk kepentingan safety, perlu memilih pelarut yang tidak mudah terbakar
17
g.
Tidak beracun
Pilih pelarut yang tidak beracun untuk keamanan produk dan keamanan bagi pekerja. h.
Murah dan mudah diperoleh
Pilih pelarut yang harganya murah dan mudah diperoleh. 3. Temperatur Secara umum, kenaikan temperatur akan meningkatkan jumlah zat terlarut ke dalam pelarut. Temperatur pada proses ekstraksi memang terbatas hingga suhu titik didih pelarut yang digunakan. 3. Rasio pelarut dan bahan baku Jika rasio pelarut-bahan baku besar maka akan memperbesar pula jumlah senyawa yang terlarut. Akibatnya laju ekstraksi akan semakin meningkat. Akan tetapi semakin banyak pelarut, proses ekstraksi juga semakin mahal. digunakan maka proses hilirnya akan semakin mahal. 4. Ukuran partikel Laju ekstraksi juga meningkat apabila ukuran partikel bahan baku semakin kecil. Dalam arti lain, rendemen ekstrak akan semakin besar bila ukuran partikel semain kecil.
2.4 Pengujian Protein a.
Uji ninhidrin
Pereaksi ninhidrin merupakan oksidator lemah, asam amino dapat bereaksi dengan ninhidrin sebagai berikut.
18
Selanjutnya, ninhidrin bereaksi dengan hidrindantin dan amonia membentuk senyawa berwarna biru.
Uji Ninhidrin terjadi apabila ninhidrin dipanaskan bersama asam amino maka akan terbentuk kompleks berwarna. Asam amino dapat ditentukan secara kuntitatif dengan jalan menggunakan intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan konsentrasi asam amino tersebut. Pada reaksi ini dilepaskan CO2 dan NH4 sehingga asam amino dapat ditentukan secara kuantitatif dengan mengukur jumlah CO2 dan NH3 yang dilepaskan. Prolin dan hidroksi prolin menghasilkan warna kompleks yang berbeda warnanya dengan asam amino lainnya. Kompleks berwarna yang terbentuk mengandung dua molekul ninhidrin yang bereaksi dengan ammonia yang dilepaskan pada oksidasi asam amino. Hasil uji positif pada uji ninhidrin diberikan pada asam amino yang mengandung asam α-amino dan peptida yang memiliki gugus α-amino yang bebas.
b. Reagen Biuret Larutan protein memberikan hasil yang positif terhadap pereaksi biuret. Tes Biuret dilakukan dengan cara menuangkan larutan natrium hidroksida pekat ke
19
dalam larutan protein. Kemudian, larutan CuSO4 ditambahkan setetes demi setetes yang akan terbentuk warna ungu.
Reagen Biuret ialah suatu uji yang digunakan untuk membuktikan keberadaan gugus kimia ikatan peptida dalam protein. Uji ini memberikan warna ungu dengan adanya zat kimia ini. Reagen ini adalah campuran senyawa anorganik yang disebut kalium hidroksida, kalium natrium tartrat, dan tembaga sulfat. Tegasnya, uji Biuret ialah uji kimia yang digunakan untuk melacak adanya ikatan peptida. Dengan adanya peptida, ion tembaga(II) membentuk kompleks koordinasi berwarna-ungu dalam larutan alkalis atau basa. Beberapa varian tentang uji ini telah dikembangkan, seperti uji BCA dan uji Lowry yang dimodifikasi. Reaksi Biuret dapat di-gunakan untuk menentukan konsentrasi protein karena ikatan peptida terjadi dengan frekuensi yang sama per asan amino dalam peptida.
20
Inten-sitas warna, dan karena itu absorpsi pada panjang gelom-bang 540 nm, berbanding langsung dengan konsentrasi, sesuai dengan hukum Beer-Lambert. Terlepas dari namanya, reagen ini pada kenyataannya tidak mengandung biuret ((H2N-CO-)2NH). Uji ini dinamakan demikian karena juga memberikan reaksi positif terhadap ikatan peptida-seperti dalam molekul biuret. Sampel encer yang diperlakukan dengan basa kuat 1% (NaOH atau KOH) dengan volume yang sama diikuti dengan beberapa tetes tembaga(II) sulfat encer. Bila larutan berubah ungu, itu berarti adanya protein. 5–160 mg/mL dapat ditentukan. Suatu peptida dengan panjang rantai sekurang-kurangnya 3 asam amino diperlukan untuk pergeseran warna terukur signifikan dengan reagen ini. Reagen Biuret dibuat dari KOH/NaOH dan tembaga(II) sulfat hidrat, bersama dengan kalium natrium tartrat. Kalium natrium tartrat ditambahkan untuk kompleks dan menyetabilkan ion kupri. Reagen berubah dari biru ke ungu dengan adanya protein, biru ke merah jambu (pink) ketika bergabung dengan polipeptida rantai-pendek. Cara pembuatan larutan Biuret di laboratorium sebagai berikut: Larutan-A: Larutkan 440 gr NaOH dalam 1 liter akuades. Larutan-B: Larutkan 25 gr CuSO4.5H2O dalam 1 liter akuades. Untuk uji Biuret: Ke dalam larutan (sampel) yang diperiksa, tambahkan 1 mL
larutan-A, kemudian tambahkan 1 tetes larutan-B. Jika ada protein, maka terbentuklah warna ungu atau violet.
Varian Uji Biuret Sangat Sensitif Dua jenis utama uji biuret yang umum diterapkan dalam analisis peptida kolorimetrik modern: Uji Bicinchoninic Acid
21
(BCA) dan uji Lowry Modifikasi bergantung pada pembentukan kompleks kelat berwarna ikatan peptida dan ion tembaga.
Uji Biuret juga merupakan cara mengikat aluminium oksida dan mengubah supernatant kuning seperti dalam oksidasi gula dan melepaskan satu gugus alydmne. Cu+ adalah suatu zat pereduksi yang dapat bereaksi misalnya dengan Mo(VI) dalam reagen Folin-Ciocalteu untuk membentuk molibdenum biru. Dengan cara in, protein dapat terdeteksi dalam konsentrasi antara 0,005 dan 2 mg/mL. Molibdenum biru pada gilirannya dapat mengikat pewarna organik tertentu seperti hijau malakhit dan auramin O, sehingga selanjutnya penguatan sinyal. Lihat juga uji protein Lowry – cara lain untuk menentukan konsen-trasi protein dalam suatu larutan.
2.5 Pengujian in vivo Pengujian secara in vivo merupakan model pengujian menggunakan hewan percobaan, yaitu hewan yang sengaja dipelihara dan diternakkan untuk dipakai sebagai hewan model guna mempelajari dan mengembangkan berbagai macam bidang ilmu dalam skala penelitian atau pengamatan laboratorik. Penggunaan hewan percobaan banyak dilakkan dalam bidang fisiologo, farmakologi, biokimia, patologi, komperatif zoologi dan ekologi dalam arti luas. Hewan yang digunakan sebagai hewan percobaan ini antara lain kelinci, marmot, hamster, mencit, dan tikus. (Malole dan Purnomo 1989)
22
2.6 Hewan Coba 2.5.1 Mencit Mencit merupakan hewan yang paling umum digunakan pada penelitian laboratorium sebagai hewan percobaan, yaitu sekitar 40-80%. Mencit memiliki banyak keunggulan sebagai hewan percobaan, yaitu siklus hidup yang relatif pendek, jumlah anak per kelahiran banyak, variasi sifat-sifatnya tinggi dan mudah dalam penanganannya (Moriwaki, 1994). Mencit (Mus muculus) dan tikus (Ratus norvegicus) merupakan omnivora alami, sehat, dan kuat, profilik, kecil, dan jinak. Selain itu, hewan ini juga mudah didapat dengan harga yang relatif murah dan biaya ransum yang rendah (Peter, 1976). Mencit putih memiliki bulu pendek halus berwarna putih serta ekor berwarna kemerahan dengan ukuran lebih panjang dari pada badan dan kepala. Mencit memiliki warna bulu yang berbeda disebabkan perbedaan dalam proporsi darah mencit liar dan memiliki kelenturan pada sifat-sifat produksi dan reproduksinya (Nafiu, 1996). Mencit memiliki taksonomi sebagai berikut (Arrington, 1972): Kingdom : Animalia Filum : Chordata Klas : Mamalia Ordo : Rotentia Famili : Muridae Genus : Mus Spesies : Mus musculus
23
Mencit harus diberikan makan dengan kualitas tetap karena perubahan kualitas dapat menyebabkan penurunan berat badan dan tenaga. Seekor mencit dewasa dapat mengkonsumsi pakan 3-5 gram setiap hari. Mencit yang bunting dan menyusui memerlukan pakan yang lebih banyak. Jenis ransum yang dapat diberikan untuk mencit adalah ransum ayam komersial (Smith, 1988). Air minum yang diperlukan oleh setiap ekor mencit untuk sehari berkisar antara 4-8ml. Seekor mencit mudah sekali kehilangan air sebab evaporasi tubuhnya tinggi. Konsumsi air minum yang cukup akan digunakan untuk menjadi stabilitas suhu tubuh dan untuk melumasi pakan yang dicerna. Air minum juga dibutuhkan untuk menekan stress pada mencit yang dapat memicu kanibalisme (Malole & Pramono, 1989). Hewan ini memiliki karakter yang lebih aktif pada malam hari daripada siang hari dan memiliki kadar kolesterol normal sebesar 26,0-82,4 mg/dl (Diah. 2004) Tabel 2.6 Data biologi mencit (Diah. 2004) Berat badan (gram)
Keterangan
Jantan (gram)
20-40
Betina (gram)
18-35
Lama hidup (tahun)
1-3
Temperature tubuh (0C)
36,5
Kebutuhan air
Ad libitum
Kebutuhan makanan (g/hari)
4-5
Pubertas (hari)
28-49
Lama kebuntingan (hari)
17-21
Mata membuka (hari)
12-13
Tekanan darah Sistolik (mmHg)
133-160
24
Diastolik (mmHg)
102-110
Kolesterol (mg/dl)
26,0-82,4
Hewan percobaan yang dipelihara untuk tujuan penelitian, umumnya berada dalam suatu lingkungan yang sempit dan terawasi. Walaupun kehidupannya diawasi, namun diusahakan agar proses fisiologis dan reproduksi termasuk makan, minum, bergerak dan istirahat tidak terganggu. Hewan percobaan ditempatkan dalam kandang-kandang yang disusun pada rak-rak didalam suatu ruangan khusus. Kandang harus dirancang untuk dapat memberikan kenyamanan dan kesejahteraan bagi hewan tersebut (Anggorodi, 1973). Mencit-mencit yang dipergunakan untuk penelitian yang lama ditempatkan dalam kandang yang berukuran 22,5 cm X 10 cm untuk tiga ekor mencit (Peter, 1976). Penutup lantai kandang atau bedding, merupakan penyerap untuk menampung kotoran termasuk air kencing dan sisa-sisa makanan. Pemakaian bedding mempunyai tiga tujuan, yaitu untuk menyerap kotoran, melengkapi bahan sarang dan untuk isolasi panas (Green, 1968). Bahan untuk bedding ini dapat berasal dari bahan-bahan limbah industri atau hasil pasca panen, seperti serbuk gergaji kayu, tatal kayu, sekam padi, potongan jerami kering, tongkol jagung, ampas bit gula kering dan butiran tanah liat (Peter, 1976). Bak makanan berbentuk mangkok atau anyaman kawat yang disediakan dalam masing-masing kandang. Tempat minum berupa botol dengan ukuran tertentu diletakkan terbalik dengan mulut botol dipasang selang karet dan ujungnya disamping dengan pipa kaca (Anggorodi, 1973).
25
Penjagaan kesehatan dan kebersihan merupakan tindakan yang sangat penting dalam
suatu
pemeliharaan hewan
laboratorium dan saran
fisik
yang
menunjangnya. Ruangan, kandang serta kelengkapannya harus secara rutin dipelihara. Berbagai macam cara dapat diterapkan, tergantung kepada keperluan, materi dan biaya (Anggorodi, 1973). Cara ideal memegang mencit yaitu dengan memegang bagian tengah ekor mencit. Leher dipegang dengan tangan kanan dan jangan terlalu ditekan, jari telunjuk dan ibu jari memegang kuduk dan jari kelingking mengempit ekor (Moriwaki, 1994). Mus muculus jantan dan betina muda sukar untuk dibedakan. Mus musculus betina dapat dikenali karena jarak yang berdekatan antara lubang anus dan lubang genitalnya. Testis pada Mus musculus jantan pada saat matang seksual terlihat sangat jelas, berukuran relatif besar dan biasanya tidak tertutup oleh rambut (Muliani, 2011). Rute penggunaan obat dengan cara (Anief, 1990): a. Melalui rute oral b. Melalui rute parenteral c. Melalui rute inhalasi d. Melalui rute membran mukosa seperti mata, hidung, telinga, vagina, dsb e. Melalui rute kulit f. Melalui rute intra muscular
26
2.7 Kerangka Konsep Kolesterol
Menyebabkan penyakit degeneratif: Jantung Stroke Asam urat dll Tumbuhan Cara mengatasi: 1. Olahraga 2. Mengatur pola makan 3. Terapi
Herbal
Simplisia Hewan Kandungan berkhasiat:
Obat tradisional
Cacing tanah
1. Asam amino 2. Antibakteri 3. Enzim peroksidase dan katalase
Efektif Kolesterol dapat meningkat
Perlu pengujian karena belum diuji secara klinis
Obat sintetis Mekanisme:
Efek samping:
Menghambat penyerapan kolesterol pada usus
1. Mengatasi sesaat 2. Menimbulkan residu pada tubuh
Diuji secara in vitro pada mencit dengan ekstrak cacing tanah yang diperoleh menggunakan metode dekoktasi
Analisis data menggunakan Anova dan dilanjutkan Post Hock Test.
32
2.8 Kerangka Teori Kolesterol merupakan penyakit yang banyak diderita oleh masyarakat. Kolesterol menyebabkan berbagai penyakit degeneratif seperti diabetes, jantung koroner, asam urat dan lain-lain. Banyak cara digunakan untuk mengobati ataupun menurunkan kadar kolesterol dengan mengatur pola makan dan berolahraga untuk membakar klesterol atau lipid dalam tubuh. Cara ini dapat digunakan untuk penderita kolesterol ringan. Pada usia lanjut, penderita biasanya mengalami kenaikan kadar kolesterol yang cukup parah sehingga dengan cara olahraga dan mengatur pola makan tidak dapat menurunkan kadar kolesterol sehingga digunakan obat untuk mengatasinya. Pada penelitian ini, peneliti menggunakan cacing tanah yang mengandung asam amino, enzim peroksidase dan katalase dan zat aktif lainnya untuk diteliti aktivitas antihiperkolesterolemianya karena penggunaan cacing tanah masih dilakukan secara empiris. Cacing tanah diproses menjadi tepung cacing tanah kemudian diekstraksi dengan metode dekoktasi dan disaring kemudian diberikan pada mencit perlakuan dengan metode sonde selama 7 hari. Data yang diperoleh dianalisa dengan metode Anova dan dilanjutkan dengan Post Hock menggunakan SPSS 15.0
33
2.7 Hipotesis Ho
: tidak ada perbedaan penurunan kadar kolesterol antara kelompok uji dan
kelompok kontrol Ha
: ada perbedaan penurunan kadar kolesterol antara kelompok uji dan
kelompok kontrol
34
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Rancangan Penelitian Rancangan penelitian merupakan semua proses dalam perencanaan dan pelaksanaan penelitian. Penelitian ini bertujuan untuk melihat aktivitas ekstrak cacing tanah sebagai penurun kadar kolesterol pada mencit. Penelitian dilakukan dengan metode eksperimen yang merupakan metode penelitian dengan melakukan percobaan terhadap kelompok eksperimen. Pemilihan metode ini didasarkan pada objek analisis yaitu aktivitas ekstrak cacing tanah dan penurunan kadar kolesterol pada mencit putih. Adapun tahap-tahap dalam penelitian ini adalah tahap persiapan, tahap pelaksaan dan tahap akhir. Tahap persiapan yang dilakukan yaitu menentukan populasi dan sampel penelitian menentukan lokasi dan waktu penelitian, serta menghitung kebutuhan bahan dan menimbangnya, kemudian mempersiapkan peralatan yang diperlukan sesuai dengan kebutuhan. Tahap pelaksanaan yang dilakukan yaitu proses ekstraksi tepung cacing tanah (Lumbricus rubellus) dengan metode dekoktasi pada suhu 90°C dengan pelarut air selama 30 menit kemudian ekstrak disaring. Filtrat ekstrak disondekan pada mencit kelompok uji yang telah memiliki kadar kolesterol tinggi selama seminggu. Setelah seminggu dicek kolesterol totalnya menggunkan uji kolesterol testpek Easy Touch.
35
3.2 Populasi dan Sampel Populasi dalam penelitian ini adalah cacing tanah (Lumbricus rubellus) yang didapatkan dari perternakan cacing tanah di Kabupaten Malang. Sampel dalam penelitian ini adalah cacing tanah (Lumbricus rubellus) yang telah melalui proses ekstraksi dekoktasi.
3.3 Lokasi dan Waktu Pelaksanaan Lokasi pelaksanaan penelitian ini di Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium Mikrobiologi Putra Indonesia Malang. Waktu pelaksanaan penelitian ini mulai bulan Desember 2015 hingga bulan Mei 2016
3.4 Definisi Operasional Variabel Pada penelitian ini terdapat dua variabel, yaitu variabel bebas dan variabel terikat. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah ekstrak cacing tanah (Lumbricus rubellus) dan variabel terikat adalah penurunan kadar kolesterol total dalam darah mencit.
36
Tabel 3.1 Devinisi Operasional Variabel Variabel
Definisi
Operasional Alat Ukur
Hasil Ukur
Skala Ukur
mL
Nominal
Kadar
Nominal
Variabel Ekstrak
Ekstrak
cacing
diperoleh Spuit
cacing
dengan
metode
dekoktasi
tanah
tepung cacing tanah
Kadar
Kolesterol total merupakan Tespeck
kolesterol kadar keseluruhan kolesterol kolesterol
kolesterol
total
yang beredar dalam tubuh (mg/dl)
normal
manusia. Menurut WHO
adalah 100 – 129 mg/dl
3.5 Instrumen Penelitian Instrumen penelitian adalah semua alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian. Peralatan yang digunakan adalah botol coklat, test peck kolesterol merk Easy Touch, jarum sonde, stick kolesterol gelas ukur dan timbangan analitik,. Bahan yang digunakan adalah tepung cacing tanah yang diperoleh dari peternakan cacing tanah di desa Kepuharjo Kabupaten Malang, air, pakan mencit.
3.6 Pengumpulan Data 3.6.1 Pembuatan tepung cacing tanah (TCT) 1. 250 gram cacing tanah dicuci dengan air untuk menghilangkan kotoran pada kulit luar dan kotoran pada pencernaan cacing (fecal mud).
37
2. Cacing dikeringkan dengan oven dengan suhu 50°C selama 12 jam. Hasil cacing yang sudah dikeringkan diblender dan diayak (nomor ayakan 40) untuk mendapatkan ukuran partikel yang homogen. 3.6.2 Persiapan ekstrak cacing tanah 1. 200 gram TCT ditambahkan air pH netral sebanyak 10 bagian (2 l) 2. Panci tersebut dipanaskan di atas penangas air selama 30 menit terhitung sejak suhu air dalam panci 90°C. 3. Air dipisahkan dari sisa TCT dengan cara disaring.
3.7 Perhitungan Bahan Bahan-bahan yang digunakan adalah sebagai berikut : a. Pakan tinggi lemak (kuning telur puyuh) Menurut American Heart Association da US National Institute of Health, asupan kolesterol yang aman tidak lebih dari 300 mg per orang per hari (Indomendia, 2001). Untuk asupan kolesterol, hewan uji diberikan telur puyuh, dalam 10 g telur puyuh terdapat 3640 mg kandungan kolesterol. Dalam penelitian ini hewan uji akan diberikan asupan kolesterol dua kali lipat dari anjuran diatas, yaitu: 600 mg x 0,0026 = 1,56 mg kolesterol 10 𝑔 3640 𝑚𝑔
TP =
=
𝑇𝑃 1,56
10.000 𝑥 1,56 3640 𝑚𝑔
= 4,2857 mg
TP (telur puyuh) = berat telur puyuh untuk 1 mencit (20 g)
38
Untuk 1 ekor mencit diberi 4,2857 mg telur puyuh dalam 0,5 mL larutan sediaan. Agar menghindari terjadinya kekurangan pada 15 ekor mencit maka dibuat larutan sebanyak 0,5 mL x 150 = 75 mL. Oleh karena itu untuk membuat larutan telur puyuh dalam 75 mL dibutuhkan telur burung puyuh sebanyak: 4,2857 mg 0,5 𝑚𝐿
a=
=
𝑎 75 𝑚𝐿
4,2857 mg x 75 mL 0,5 𝑚𝐿
= 642,855 mg
dimana a = telur puyuh yang dibutuhkan dalam 75 mL larutan. Penimbangan telur puyuh dapat dilakukan dengan timbangan digital dan pengambilan telur puyuh dapat menggunakan pipet tetes. b. Simvastatin Simvastatin sebagai kontrol positif dalam penurunan kolesterol darah. Dosis simvastatin 10 mg/hari yang diberikan pada sore hari. Jika dikonversikan dalam mencit, yaitu: (lampiran 1) = 10 mg x 0,0026 = 0,026 mg/20 gram BB c. Ekstrak TCT Tepung cacing tanah yang diperoleh dari pengalaman empiris untuk manusia dengan berat badan 70 kg satu genggam setara dengan 16 g pada 200 ml. Jika dikonversikan untuk mencit menurut faktor konversi adalah sebagai berikut : = 16 g x 0,0026 ~ 200 ml x 0,0026 = 0,04 g ~ 0,5 ml/20 g BB
39
3.8 Prosedur Pengujian Adapun prosedur penelitian dalam pengujian kolesterol elstrak cacing tanah melalui langkah sebagai berikut: 1. Persiapan hewan uji Sebanyak 15 ekor mencit dengan berat rata-rata 20 g, dikelompokkan menjadi 3 kelompok dengan masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor mencit melalui metode randomisasi. Randominsasi dilakukan sebelum dilakukan perlakuan pada hewan coba. Hal ini bertujuan untuk mengkelompokan, memilih dan memberi kode pada hewan coba yang selanjutnya akan diberi perlakuan. Cara randomisasi dilakukan dengan memilih secara acak. Penelitian ini terdapat 3 perlakuan atau kelompok mencit dan replikasi sebanyak 5 kali sehingga total penggunaan mencit dalam penelitian ini yaitu 15 mencit. Masing-masing mencit diukur kadar kolesterolnya lalu dicatat. 2.
Pengukuran Kadar Kolesterol
1. Sebelum pengambilan darah, ekor tikus dicelupkan ke dalam air hangat atau digosok dengan aseton. Kemudian diambil sampel darah mencit sebanyak ± 1 cc, Penyayatan dilakukan pada vena ekor. Dipastikan alat multicheck sudah di stel pada alat cek kolesterol. Sebelum sampel darah yang sudah diambil diteteskan pada chip strip 33 cek kolesterol sampai merata pada chip, tunggu hingga 150 detik dan baca kadar kolesterolnya. Hasil dimasukkan dalam data. 2. Mencit percobaan kelompok I diberi aquadest dan kelompok II diberi asupan kolesterol tinggi dengan menggunakan telur puyuh, masing-masing kelompok
40
diberi asupan per oral dengan jumlah yang sama, pemberian asupan kolesterol dilaksanakan selama 7 hari berturut-turun 3. Pada hari ke-8 masing-masing mencit diukur kadar kolesterolnya 4. Mulai hari ke-8 kelompok I diberi aquadest, kelompok II diberi sampel sesuai dosis yang ditentukan dan kelompok III diberi asupan simvastatin 5. Perlakuan ini dilakukan selama 7 hari berturut-turut diberikan secara penyondean dan ditest kadar kolesterolnya. 3. Permberian ekstrak cacing tanah 1. Ekstrak cacing tanah 0,52 ml diberikan pada mencit perlakuan dengan metode sonde 2. Ekstrak cacing tanah diberikan secara sonde selama 7 hari berturut-turut 3. Mencit yang diperlakukan dengan penambahan ekstak cacing tanah dihitung kadar kolesterol total dalam darah l secara teratur hingga kadar kolesterol menurun dengan tespack kolesterol
3.9 Analisis data Untuk menganalisis apakah ekstrak cacing tanah dapat menurunkan kadar kolesterol total digunakan uji statistik menggunakan ANOVA kemudian dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tests Tukey HSD menggunakan program SPPS 15,0.
41
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil 4.1.1 Hasil pembuatan tepung cacing tanah Cacing tanah yang diperoleh dari peternakan dibersihkan terlebih dahulu untuk menghilangkan kotoran kemudian di keringkan di oven pada suhu 50 °C selama 12 jam. Kemudian cacing tanah kering diblender dan diayak hingga mendapatkan serbung yang homogen. Tepung cacing tanah yang diperoleh berwarna coklat muda dan berbau amis serta memiliki tekstur halus. 4.1.2 Hasil dekoktasi ekstrak TCT Tepung cacing tanah didekoktasi selama 30 menit pada suhu 90°C. Ekstrak yang diperoleh kemudian disaring untuk memisahkan residu dan filtratnya. Hasil filtrat berwarna coklat muda dan berbau amis khas cacing tanah. 4.1.3
Hasil uji identifikasi protein Hasil identifikasi protein yang meliputi uji biuret dan ninhidrin
menunjukkan hasil positif yang berarti di dalam ekstrak memiliki kandungan protein, hasil identifikasi metabolit sekunder terdapat pada tabel 1.
Pereaksi
Tabel 1 Hasil Identifikasi Protein Teoritis Hasil Kesimpulan Pengamatan
Ninhidrin
Warna biru tua
Warna biru tua
+
Biuret
Warna biru tua
Warna biru tua
+
42
4.1.4 Hasil perlakuan penurunan kolesterol pada hewan uji Perlakuan mencit pada minggu pertama adalah perlakuan aklimatisasi yang bertujuan untuk menyesuaikan mencit yang belum diinduksi pada lingkungan baru agar tidak mudah stress. Pada hari ke-8 mencit diukur kadar kolesterol totalnya. Kemudian mencit diberi pakan tinggi lemak yaitu kuning telur puyuh 0,5 ml pada pagi dan sore untuk mencapai kadar kolesterol tinggi dan diperoleh data sebagai berikut: Tabel 4.1 Data kolesterol awal, kenaikan dan penurunan pada mencit perlakuan Kelompok Perlakuan
Kontrol negatif
Replikasi
Kadar Kolesterol Awal
Kadar Kolesterol Tinggi Lemak (mg/dl)
Kadar Kolesterol perlakuan (mg/dl)
Penurunan kadar kolesterol
1 2 3 4 5
146 128 131 148 150
181 154 167 190 215
176 149 162 184 209
160 170 150 174 168
138 147 127 158 150
213 160 203 162 172
205 154 200 146 166
5 5 5 6 6 5,4 22 23 23 16 18 20,4 8 6 3 16 6 7,8
Rata-rata Kontrol positif (simvastatin)
1 2 3 4 5
127 135 126 138 124 Rata-rata
Ekstrak tepung cacing tanah
1 2 3 4 5
151 129 134 127 128 Rata-rata
Hasil setelah induksi pakan tinggi lemak menunjukan kadar kolesterol dengan rata-rata 175,93 mg/dl dan standar deviasi 20,54426. Batas kadar kolesterol normal pada mencit adalah 26,0-82,4 mg/dl sehingga data yang telah diperoleh
43
menunjukkan bahwa mencit telah hiperkolesterolemia dan dapat digunakan sebagai hewan penelitian. Hewan mencit yang telah diinduksi pangan tinggi lemak dan dibagi dalam 3 kelompok diberi asupan akuadest sebagai kontrol negatif, simvastatin dengan dosis 0,026 mg sebagai kontrol positif dan ekstrak TCT dengan dosis 0,04 g/0,5 ml untuk kelompok uji selama 7 hari. Penurunan kadar kolesterol pada kelompok kontrol negatif, kontrol poditif dan kelompok uji ditunjukkan dengan pengurangan kadar kolesterol setelah perlakuan dan kadar kolesterol setelah induksi pakan tinggi lemak. Penurunan kadar kolesterol diperoleh data sebagai berikut: Data penurunan yang diperoleh dianalisis
menggunakan metode Anova program SPSS.
4.2 Pembahasan Kadar kolesterol pada mencit telah mengalami peningkatan melebihi batas normal kolesterol total, hal ini menunjukkan induksi kuning telur puyuh 7 ml/20 gramBB mencit melalui sonde 0,5 ml pada pagi dan sore pada minggu pertama dapat meningkatkan kadar kolesterol total di dalam darah mencit. Kuning telur puyuh terdapat 3640 mg kandungan kolesterol sehingga jika diduakalikan akan sangat efektif untuk menaikkan kolesterol total. Kadar kolesterol mencit kelompok negatif mengalami penurunan dengan nilai rerata 5,4 mg/dl dengan diberikan perlakuan aquades saja. Faktor yang mempengaruhi penurunan pada kelompok kontrol negatif adalah proses metabolisme mencit, kondisi faal serta asupan pakan yang tidak mengandung lemak.
44
Kelompok positif dengan menggunakan obat simvastatin dengan dosis 0,026 mg/20 g BB setelah dikonversikan untuk mencit sebagai menurun kolesterol mengalami penurunan dan memiliki nilai rerata 20,4 mg/dl. Obat simvastatin merupakan obat kimia penurun kadar kolesterol dengan mekanisme kerja yang cepat sehingga kolesterol dapat turun dalam jumlah yang banyak. Obat simvastatin dapat membantu menaikkan kadar HDL (lemak baik) dan menurunkan LDL (lemak jahat). Sedangkan untuk kelompok perlakuan ekstrak TCT memiliki nilai penurunan yang berbeda untuk tiap mencit pada kelompok tersebut. Penurunan ini diduga disebabkan oleh kandungan protein dan enzim yang terdapat pada ekstrak TCT. Penurunan yang berbeda pada tiap mencit disebabkan karena kendala pada proses penyondean sehingga dosis yang diberikan untuk tiap mencit tidak sama. Adapun faktor lain yang mempengaruhi penurunan kolesterol total pada mencit hiperkolesterolemia adalah mekanisme obat penurun kolesterol kimia seperti simvastatin lebih cepat jika dibandingkan dengan sifat obat herbal yang memiliki khasiat jika dikonsumsi dalam kurun waktu yang lama. Pada uji normalitas SPSS data yang diperoleh memiliki data distribusi normal (p>0,05) sehingga dapat dilanjutkan uji Anova. Pengujian Anova untuk menguji apakah rata-rata dari beberapa sample berbeda atau tidak menunjukan nilai F = 27,983 dan nilai Sig = 0,000 (<0,05) , maka dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan antara kelompok perlakuan dengan ekstrak TCT dan kontrol, hal ini ditunjukan adanaya penurunan kolesterol darah pada mencit. Pada uji Post Hoc terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol positif (0,000) dan kelompok perlakuan ekstrak TCT (0,524) hal ini menunjukan kelompok kontrol
45
positif memiliki beda nyata terhadap kelompok perlakuan ekstrak TCT dan kontrol positif memiliki beda nyata terhadap kontrol negatif (sig. <0,05). Sedangkan untuk kontrol negatif tidak memiliki perbedaan yang signifikan terhadap kelompok perlakuan ektrak TCT sehingga dapat disimpulkan ekstrak TCT belum menunjukan khasiat ditunjukan dengan tidak dapat menurunkan kolesterol
total
pada
mencit
dengan
dosis
0,5
ml
(lampiran
5)
46
BAB V PENUTUP 5.1 Kesimpulan Berdasarakan hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak tepung cacing tanah dengan dosis 0,04 gram setelah dikonversikan untuk BB mencit tidak dapat menurunkan kolesterol jika dibandingkan dengan obat simvastatin dengan dosis 0,026 mg sebagai kontrol positif.
5.2 Saran 1. Perlu dilakukan penyondean secara benar agar dosis ekstrak yang diberikan pada mencit rata dan tidak terjadi berbedaan penurunan dalam satu kelompok. 2. Perlu diberikan penambahan dosis ekstrak dan waktu perlakuan diperpanjang. 3. Perlu diperhatikan stabilitas protein agar tidak merusak kandungan protein sehingga dapat memberikan efek terapi. 4. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap protein pada tepung cacing tanah untuk penurunan kolesterol.
47
DAFTAR RUJUKAN
Agoes, G. (2007). Teknologi Bahan Alam. Bandung: ITB Press. ANONIM.
(2009,
10 30).
Lord Broken. Retrieved
from Wordpress:
https://lordbroken.wordpress.com/2009/10/30/44 Anonim. (n.d.). Review Impact-Excercise-Cholesterol-Levels. Retrieved from www.ideafit.com: http://www.ideafit.com/files.pdf/fitness-library/ReviewImpact-Excercise-Cholesterol-Levels/akses 6/30/14 Anggorodi, R. (1973). Ilmu Makanan Ternak Umum.Jakarta: Gramedia.
Arry M, Lanny S. Kurniawan. B. Stephen I. (2011). Ekstraksi Antiokidan dari Kulit Buah Manggis (Garcina mangostana L.). Bandung: Universitas Katolik Parahyangan. Carroll, K.K. (1991). Cholesterol-Lowering Response to Soy Protein, J. Am Diet Ass. Cho, J.H., C.B Park, Y.G Yoon & S.C Kim. (1998). Lumbricin I, a Novel ProlineRich Antimicrobial Peptide from the Earthworm: Purification, cDNA Cloning and Molecular Characterization. Biochim. Biophys. Acta. 1408 (1). Ditjen POM, Depkes RI. (1986). Sediaan Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Green, E. (1968). Biology of The Laboratory Mouse.New York: Hill Book
48
Hegner, R.W & J.G Engeman. (1978). Invertebrate Zoology. New York: Mac Milan Inge Kurniawati Adipratama. (2014). Pengaruh Pemberian Ekstrak Kulit Manggis (Garcinia mangostana) dan Simvastatin Terhadap Kadar Kolesterol HDL Tikus Sprague Dawley Dengan Pakan Tinggi Lemak. Josepine Widya. (2011, 12 08). Josephine Widya. Retrieved from wordpress: https://josephinewidya.wordpress.com/2011/12/08/metabolisme-lipidbiosintesis-kolesterol/akses 22/12/15 Karyadi, E. (2006). Kiat Mengatasi Diabetes, Hiperkolesterolemia, Stroke. Jakarta: PT. Intisari Mediatama. Kusumawati, Diah, Bersahabat dengan Hewan Coba, Yogyakarta: Gadjah Mada University Press, 2004 Malole, M.B.M and Pramono, C.S.U. (1989). Pengantar Hewan-Hewan Percobaan
di
Laboratorium.
Bogor:
Pusat
Antara
Universitas
Bioteknologi IPB. Moriwaki,K, T.Shiroishi, H Yonekawa. 1994. Genetic in Wild Mice. ItsAplication to Biomedical Research. Tokyo: Japan Scientific Sosieties Press. Karger. Nur Hayati Septi, Hendra Herdian, Ema Damayanti, Lusty Istiqomah & Hardi Julendra. (2011). Profil Asam Amino Ekstrak Cacing Tanah (Lumbricus rubellus) Terenkapsulasi Dengan Metode Spray Drying. Lipi Press.
49
Palungkun, R. (1999). Sukses Berternak Cacing Tanah Limbricus rubellus. Jakarta: Penebar Swadaya. Potter,
S.
(1995).
Overview
of
Possible
Mechanisms
for
for
the
Hypocholesterolemic Efferct of Soy Protein. j. Nurt. Pusat Pendidikan Tenaga Kesehatan Depkes RI. (1985). Diktat Kimia Klinik Jilid 1. Jakarta: Buku Kesehatan Depkes RI. Rukmana, H.R. (1999). Badi Daya Cacing Tanah. Kanisius (Anggota IKAPI): Yogyakarta. Santoso Urip. (2011). Pentingnya Kesehatan Bagi Kesehatan Kita. Santoso, Budi Nawan. (2011). Kolesterol. Dunia Kesehatan. Satoto, K. S. (1998). Kegemukan, Obesitas dan Penyakit Degeneratif epidemiologi dan Strategi Penanggulannya. Jakarta: LIPI. Smith, B. J. B dan S. Mangkoewidjojo.1998. Pemeliharaan Pembiakan dan Penggunaan Hewan Percobaan di Daerah Tropis. Universitas Indonesia. Jakarta. Wahyuni Farida Ari Nurul. (2013). Efektifitas Yoghurt Sari Jagung Manis (Zea mays saccharata Sturt.) Sebagai Alternatif Pangan Fungsional Untuk Mengatasi Hiperkolesterolemia. Malang: Akademi Analis Farmasi dan Makanan. William F. Ganong. (1995). Fisiologi Kesehatan Edisi 14. Jakarta: EGC.
50
LAMPIRAN
Lampiran 1. Tabel konversi dosis 20 g mencit
200 g tikus
400 g marmot
1,5 kg kelinci
2,0 kg kucing
4,0 kg kera
70,0 kg manusia
20 g mencit 200 g tikus
1,0
7,0
12,29
27,8
29,7
6,1
387,9
0,14
1,0
1,74
3.0
4,2
9,2
56,0
400 g marmot 1,5 kg kelinci
0.08
0,57
1,0
2,25
2,4
5,2
31,5
0,04
0,25
0,44
1,0
1,06
2,4
14,2
2,0 kg kucing 4,0 kg kera
0,03
0,23
0,41
0,92
1,0
2,2
13,0
0,016
0,11
0,19
0,42
0,45
1.0
6,1
12,0 anjing
0,008
0,06
0,10
0,22
0,52
1,0
3,1
70,0 kg manusia
0,0026
0,18
0,031
0,07
0,013
0,16
1,0
(sumber : Eryca Ayu, 2013) Cara perhitungan dosis
:
Bila diinginkan dosis absolut pada manusia 70 kg dari dosis 10 mg per kg maka dihitung terlebih dari dosis absolut pada kera (4,0 kg) yaitu 4,0 kg 10 mg/kg = 40 mg. Kemudian diambil faktor konversi 3,1 dari tabel, diperoleh dosis untuk anjing 40 x 3,1 = 124 mg. Dengan demikian dapat diramalkan efek farmakologi suatu obat yang timbul pada manusia dengan dosis 124mg/70 kg BB adalah sama dengan yang timbul pada anjing dengan dosis 120 mg/12 kg BB daru suatu obat yang sama. (erica Ayu, 2013)
51
Lampiran 2. Tabel timbangan mencit Kelompok 1 (kontrol -)
Kelompok 2 (perlakuan)
Kelompok 3 (+)
23 g
20 g
26 g
19 g
22 g
21 g
21 g
20 g
22 g
26 g
24 g
21 g
25 g
21 g
20 g
Lampiran 3. Proses dekoktasi ekstrak TCT dan uji kualitatif protein
Uji positif Biuret
52
Uji positf ninhidrin
53
Tepung cacing tanah
Proses Dekoktasi
54
Filtrasi ekstrak TCT Lampiran 4. Perlakuan pada mencit
Cek darah pada menci
55
t
Penyondean pada mencit
Lampiran 5. Tabel hasil penurunan kolesterol dengan ekstrak cacing tanah pada mencit Kelompok Perlakuan
Replikasi
Kadar Kolesterol Awal
Kadar Kolesterol Tinggi Lemak (mg/dl) 181 154 167 190 215 Rata-rata 160 170 150 174 168 Rata-rata 213 160
Kadar Kolesterol perlakuan (mg/dl)
Penurunan kadar kolesterol
Kontrol negatif
1 2 3 4 5
146 128 131 148 150
176 149 162 184 209
Kontrol positif (simvastatin)
1 2 3 4 5
127 135 126 138 124
Ekstrak tepung
1 2
151 129
5 5 5 6 6 5,4 22 23 23 16 18 20,4 8 6
138 147 127 158 150 205 154
56
cacing tanah
3 4 5
134 127 128
203 162 172
200 146 166
Rata-rata
Hasil Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
N Normal Parameters a,b Most Extreme Dif f erences
Mean Std. Dev iat ion Absolute Positiv e Negativ e
Kolmogorov -Smirnov Z Asy mp. Sig. (2-tailed)
Kelompok_ Perlakuan 15 2,00 ,845 ,215 ,215 -,215 ,833 ,492
Nilai_ Penurunan_ Kadar_ Kolesterol 15 11,20 7,504 ,289 ,289 -,139 1,120 ,163
a. Test distribution is Normal. b. Calculated f rom data.
Pada uji normalitas diperoleh nilai signifikan (p) untuk semua kelompok perlakuan > 0,05 maka dapat diambil kesimpulan bahwa “distribusi data
3 16 6 7,8
57
Descriptives Nilai_Penurunan_Kadar_Kolesterol
Meanmemenuhi Std. Dev iat ion Std. Error normal”.N Sehingga syarat untuk Kontrol Negatif 5 5,40 ,548 ,245 Kontrol Posit if 5 20,40 3,209 1,435 Homogity Variance Ekstrak Tepung Cacing 5 7,80 4,919 2,200 Total 15 11,20 7,504 1,938
95% Conf idence Interv al f or Mean Lower Bound ujiUpper Bound Minimum melakukan selanjutnya yaitu 4,72 6,08 5 16,42 24,38 16 1,69 13,91 3 7,04 15,36 3
ujiMaximum
Hasil Homogenity of Variance
Test of Homogeneity of Variances Nilai_Penurunan_Kadar_Kolesterol Levene Statistic 3,076
df1 2
df2 12
Sig. ,083
Hasil homogenitas variasi menunjukan nilai 3,076 dengan nilai Sig = 0,083 (sig >0,05) maka diambil kesimpulan bahwa terdapat dua kelompok yang mempunyai varians data yang berbeda secara bermakna. Yang berarti terdapat perbedaan dari masing-masing perlakuan dan dapat dilanjutkan uji ANOVA. Hasil Pengujian Anova Penurunan Kolesterol Total Pada Mencit Dengan Ekstrak Cacing Tanah ANOVA Nilai_Penurunan_Kadar_Kolest erol
Between Groups Within Groups Total
Sum of Squares 649,200 139,200 788,400
df 2 12 14
Mean Square 324,600 11,600
F 27,983
Sig. ,000
Hasil uji Anova pada between groups (antar kelompok) dan within groups (dalam kelompok) memiliki nilai yang berbeda sehingga terdapat perbedaan pada kelompok perlakuan dengan nilai F = 27,983 dan Sig = 0,000 (<0,05) , maka terdapat perbedaan dari setiap kelompok perlakuan ditunjukan dengan adanya penurunan kadar kolesterol total pada darah mencit.
6 23 16 23
58
Hasil Uji Post Hoc Multi ple Comparisons Dependent Variable: Nilai_Penurunan_Kadar_Kolesterol Tukey HSD
(I) Kelompok_Perlakuan Kontrol Negatif Kontrol Posit if Ekstrak Tepung Cacing
(J) Kelompok_Perlakuan Kontrol Posit if Ekstrak Tepung Cacing Kontrol Negatif Ekstrak Tepung Cacing Kontrol Negatif Kontrol Posit if
*. The mean dif f erence is signif icant at the .05 lev el.
Mean Dif f erence (I-J) -15,000* -2,400 15,000* 12,600* 2,400 -12,600*
St d. Error 2,154 2,154 2,154 2,154 2,154 2,154
Sig. ,000 ,524 ,000 ,000 ,524 ,000
95% Conf idence Interv al Lower Bound Upper Bound -20,75 -9,25 -8,15 3,35 9,25 20,75 6,85 18,35 -3,35 8,15 -18,35 -6,85
Pada uji Post Hoc Tukey HSD menunjukkan kontrol positif memiliki beda signifikan terhadap kontrol negatif dan kelompok perlakuan ekstrak TCT ditandai dengan nilai Sig = 0,000 (<0,005). Sedangkan kontrol negatif tidak memiliki beda signifikan terhadap kelompok perlakuan ekstrak cacing tanah. Sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak cacing tanah tidak dapat menurunkan kolesterol darah pada mencit.
59
