AHP MINGGU KE-3 Prof. Simon B W Ph.D.
TOTAL PROTEIN PRINSIP: BHN ORGANIK DIDESTRUKSI DGN H2SO4, TERBENTUK NH4SO4, LAR. DIDESTILASI DLM NaOH, UAP NH3 DITANGKAP ASAM BORAT, NITROGEN DLM LAR. DITETAPKAN DGN HCL ENCER. METODE INI UTK SAMPEL PDT & CAIR SPT: KONSENTRAT IKAN, ISOLAT DGN PERLAKUAN PENDAHULUAN TERTENTU.
TAHAP DESTRUKSI/DISTILASI
DESTRUKSI AUTOMATIS
TAHAP DISTILASI PROT.
PROT. METODE FORMOL. • PRINSIP ANALISA: FILTRAT (PROT) YG TLH DINETRALKAN, BILA DI+KAN FORMALDEHIDE + REACT WITH GUGUS BASA (LYSINE), KEASAMAN FILTRAT NAIK, DITITER LAGI DGN NaOH & INDIKATOR PP, NAIKNYA KEASAMAN TSB SEIRING DGN KDR PROT BHN. % PROT = T X 0,17
NON PROT-NITROGEN = ASAM AMINO TERLARUT PRINSIP ANALISA: sampel esktrak dgn air, protein endapkan dgn 5% TCA, saring filtrat isi NPN tetapkan dgn Kjeldahl.
ELECTRIC MANTLE
PENGUKURAN TVBN & TMA KHUSUS UTK Produk IKAN & Produk olahannya
TOTAL VOLATILE BASE NITROGEN (TVBN) & TRIMETIL AMIN (TMA) • PRINSIP ANALISA: sampel ekstrak 5% TCA, filtrat distilasi dgn NaOH 2M, destilat tangkap dgn HCl 0,01M, titer destilat dgn NaOH 0,01 M, hitung TVBN. • UTK TMA, destilat hsl titrasi TVBN +kan formaldehid 16%,shg slrh komponen NH2 terikat formaldehid, titer kembali dgn NaOH 0,01M, hitung TMA.
PRINSIP KERJA • TVN: Haluskan sampel (ikan/daging) +kan TCA 5%, sentrifus, filter. Destilat kumpulkan • Distilasi destilat dgn NaOH 2M, tangkap dgn HCl 0,01 M • +kan bbrp tetes merah fenol dlm destilat, TITER dgn NaOH 0,01M sampai titik akhir titrasi (LAR A) • Hitung: TVN (mg/100g) : • 14(300 +W)X (15 – V1) X 0,01 X 100/4 • 5 • TMA: +kan 1 ml formaldehid 16% utk setiap 10 ml Lar. A, kocok, TITER lagi dgn NaOH 0,01 M sampai akhir titrasi. • Hitung TMA (mg/100 g): • 14(300 +W)X V2 X 0,01 X 100/4 • 5 • NOTE: 14 = BA Nitrogen, V1 = vol NaOH, V2 = vol NaOH ke2, W = jumlah air (g) dlm bhn/sampel; M = berat sampel.
METODE BIURET • SAMPEL CAIR/LARUTAN: KECAP, SUSU DLL • PRINSIP: Cu2+ MEMBENTUK kompleks dgn ikatan peptida (-CO-NH-) suatu protein terlarut menghslkan warna ungu diukur pada absorbans maks. 540 nm.
• Peraksi biuret: larutan CuCO4.5H2O dlm basa (NaOH) dll. • Lar. Protein STD. lar. Bovine serum albumin 5 mg/ml • PRINSIP KERJA: • Buat lar. STD 0; 0.1;0.2;0.4;0.6;0.8 dan 1 ml lar. Prot. STD. buat sampai 4 ml dgn aquades.
• Tahap reaksi: 6 ml lar. Biuret campur ke dlm msg-2 lar. STD & blanko • Inkubasi 37oC, 10 mnt, atau suhu kamar 30 mnt. Sampai warna ungu terbentuk. • Ukur ABS 540 nm • SAMPEL • Jika sampel berupa cairan spt. lar. Prot. Konsentrat/ isolat protein yg tdk keruh cukup pengenceran saja.
• Bila sampel berupa cairan keruh (ada endapan glukosa dsb), bahan hrs diendapkan dgn penambahan 1 ml TCA 10%. Prot mengendap, sentrifuse 300 rpm 10 mnt, endapan protein dikumpulkan, supernatan dibuang. • Endapan di+kan etil eter 2 ml, campur rata, sentrifuse lagi, buang sisa TCA dgn dibiarkan kering @ suhu kamar.
• Endapan protein di+kan 4 ml air, campur rata. • +kan 6 ml lar. Biuret lakukan spt pada lar. STD protein. • Ukur pada 520 nm. • INGAT PERHITUNGKAN PENGENCERAN, HITUNG KADAR PROT, SPT PADA GULA REDUKSI.
Analisa PROT. DGN ALAT KJELTEC. • • • •
• • • • •
Prinsip analisa: sama dgn metode kyeldahl. Prinsip kerja: Persiapan sample: timbang tepat sampel. Tahap detruksi: sampel masukkan labu kyeldahl, + kan 2 tablet kjeldahl & as. Sulfat pekat, destruksi selama 30 mnt suhu 420 0C sampel lar. Jernih. Bila berbuih, +kan lar. H202 5 ml. panaskan lagi. CARE/HATI-2. TAHAP DESTILASI; filtrat jernih masukkan dlm labu destilasi berisi 40%NaOH, distilasi selama 4 mnt, tangkap distilate dgn asam borat 25 ml berisi indikator. Tahap titrasi: titer lar ammo. Borate dgn as. Khlorida atau as. Sulfat 0,1 M sampel t.a.t, lar. Berwarna purplish-grey- end point. Tahap perhit: % N = 0,14 X A/ w. utk titer dgn lar. HCl. % N = 0,28 X B/w utk titer dgn lar. H2SO4. %Prot = % N X 100/%Nitrogen dlm prot. Mis: % N dlm prot utk beras = 16,81; F = 100/16,81 = 5,95. F umum = 6,25.
Exercise: self study • If you have been asking to analyse sample, like: fruit milk drinks ( banana flavoured milk drinks. How to determine the amount of its protein content. • And how about which the best method to analyse a protein content of samples like cheese and meat • And how about sample such as: liquid waste from fish canning manufactures, explain.
