ABSTRAK PERBEDAAN EKSPRESI PROTEIN 53 (p53) PADA STADIUM I, II DAN III KANKER SERVIKS TIPE SEL SKUAMOSA Kanker serviks merupakan keganasan yang paling banyak ditemukan dan merupakan penyebab kematian utama pada perempuan dalam tiga dasa warsa terakhir. Semakin dini stadium kanker serviks ditemukan, maka semakin tinggi angka harapan hidup dari penderita kanker serviks Salah satu gen yang diperkirakan mengambil peranan penting di dalam etiopatogenesis serta progresi kanker serviks adalah p53. Protein p53 merupakan faktor transkripsi terhadap gen-gen yang terlibat dalam regulasi siklus sel, induksi apoptosis, repair DNA, stabilitas genom. Mutasi gen p53 merupakan abnormalitas molekuler tersering pada lebih dari 50% kasus keganasan. Hilangnya fungsi p53 akibat dari mutasi dapat menimbulkan transformasi keganasan, metastase tumor dan resistensi terhadap kemoterapi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui perbedaan ekspresi p53 pada stadium I, II, dan III kanker serviks tipe skuamosa. Penelitian ini merupakan studi cross-sectional analitik untuk menilai korelasi antara p53 dengan kanker servik stadium I, II dan III di Bagian Obstetri dan Ginekologi RSUP Sanglah Denpasar dan Laboratorium Patologi Anatomi RSUP Sanglah pada bulan Juni 2015 sampai dengan November 2015. Sampel adalah 30 pasien dengan kanker serviks stadium I, II, III tipe sel skuamousa. Semua blok parafin dilakukan pemeriksaan imunohistokimia untuk mengetahui ekspresi p53 masing-masing sampel. Dilakukan Chi-squaer dengan SPSS 17 for windows® version. Didapatkan hasil yang berhubungan antara ekspresi p53 dengan stadium I dan III kanker serviks tipe sel skuamousa dengan nilai p=0,046 (p<0,05). Disimpulkan bahwa terdapat hubungan positif antara ekspresi p53 dengan stadium kanker serviks tipe sel skuamousa. Kata kunci: p53,stadium, kanker serviks.
i
ABSTRACT
DIFFERENCE OF PROTEIN 53 (p53) EXPRESSION IN TYPE OF SQUAMOUS CELL CERVICAL CANCER STAGE I, II AND III Cervical cancer was the most common malignancy and the leading cause of death in women in the last three decades. The earlier stages of cervical cancer that we found, the higher life expectancy of patients with cervical cancer. One of the genes was expected to take a key role in etiopathogenesis and progression of cervical cancer was p53. Protein p53 was a transcription factor against genes involved in cell cycle regulation, apoptosis induction, DNA repair, genome stability. P53 gene mutation was the most common molecular abnormality in more than 50% of cases of malignancy. Loss of p53 function as a result of mutations can cause malignant transformation, tumor metastasis and resistance to chemotherapy. The purpose of this study was to determine differences in p53 expression in stage I, II, and III cervical cancer squamous types. This study was an analytic cross-sectional study to assess the correlation between p53 with stage I, II and III of cervical cancer in the Department of Obstetrics and Gynecology Sanglah Hospital and Sanglah Hospital Anatomy Pathology Laboratory in June 2014 to November 2015. The sample was 30 patients with cervical cancer stage I, II, III with squamous cell types. All paraffin blocks was examined p53 immunohistochemistry to determine the expression of each sample. Performed Chi-square with SPSS version 17 for Windows. Result of this study, there was relationship between the expression of p53 in cervical cancer stage I and III squamous cell types with a value of p = 0.031 (p <0.05). It can be concluded that there was a positive correlation between the expression of p53 in cervical cancer stage squamous cell types. Keywords: p53, stage, cervical cancer.
ii
DAFTAR ISI Halaman SAMPUL DALAM .................................................................................................. i PRASYARAT GELAR. .......................................................................................... ii LEMBAR PENGESAHAN …………………………………………………… .. iii PENETAPAN PANITIA PENGUJI ..................................................................... iv SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT …………………………………....v UCAPAN TERIMA KASIH …………………………………………………… . vi ABSTRAK ………………………………………………………………………viii ABSTRACT ……………………………………………………………………. . ix DAFTAR ISI ............................................................................................................x DAFTAR TABEL ................................................................................................ xiii DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ..........................................................................................xv DAFTAR SINGKATAN ..................................................................................... xvi BAB I PENDAHULUAN ........................................................................................1 1.1 Latar Belakang ...................................................................................................1 1.2 Rumusan Masalah ..............................................................................................4 1.3 Tujuan Penelitian ...............................................................................................4 1.4 Manfaat Penelitian .............................................................................................5 BAB II TINJAUAN PUSTAKA..............................................................................6 2.1 Kanker Serviks ..................................................................................................6 2.1.1 Histologi Serviks …………………………………………………………… 7 2.1.2 Etiologi….. .....................................................................................................8 2.1.3 Patologi. .........................................................................................................9 2.1.4 Jenis Histopatologi Kanker Serviks ..............................................................12 2.1.5 Stadium Kanker Serviks................................................................................15 2.2 Protein 53 (p53) ...............................................................................................17 2.2.1 Struktur…......................................................................................................18 2.2.2 Peran p53 ……………………………………………………………..........21
iii
BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN ...................32 3.1 Kerangka Berpikir ............................................................................................32 3.2 Konsep Penelitian.............................................................................................34 3.3 Hipotesis Penelitian ……………………………………………………….....34 BAB IV METODE PENELITIAN ........................................................................35 4.1 Rancangan Penelitian .....................................................................................35 4.2 Tempat dan Waktu Penelitian ........................................................................35 4.3 Populasi Penelitian .........................................................................................36 4.4 Sampel Penelitian ...........................................................................................36 4.4.1 Kriteria inklusi .............................................................................................36 4.4.2 Kriteria eksklusi ...........................................................................................36 4.4.3 Perhitungan besar sampel .............................................................................37 4.4.4 Cara pengambilan sampel ............................................................................37 4.5 Variabel Penelitian .........................................................................................38 4.5.1 Identifikasi variabel ......................................................................................38 4.5.2 Definisi operasional variabel........................................................................38 4.6 Prosedur Penelitian .........................................................................................39 4.7 Instrumen Penelitian dan Metode Pemeriksaan .............................................40 4.7.1 Instrumen penelitian .....................................................................................40 4.7.2 Metode pemeriksaan ...................................................................................41 4.8 Pengumpulan dan Analisis Data ....................................................................43 4.8.1 Pengumpulan data ........................................................................................43 4.8.2 Analisis data .................................................................................................43 BAB V HASIL PENELITIAN………………………………………………… ..44 5.1 Distribusi Karakteristik Umur dan Paritas pada Kelompok Kanker Serviks Tipe Skuamosa Stadium I, II, III………………………………… .....44 5.2 Perbedaan Ekspresi p53 pada Pasien kanker Serviks Tipe Skuamosa Stadium I, Stadium II dan Stadium III …………………………………… ....45 BAB VI PEMBAHASAN ……………………………………………………... ..47 6.1 Karakteristik Sample Penelitian ………………………………………….. ....48
iv
6.2 Ekspresi p53 ………………………………………………………………. ...49 6.3 Kelemahan Penelitian ……………………………………………………......53 BAB VII SIMPULAN DAN SARAN ………………………………………… . 54 7.1 Simpulan ………………………………………………………………...… ..54 7.2 Saran ………………………………………………………………………....54 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................55 LAMPIRAN……………………………………………………………………. ..59
v
DAFTAR TABEL Halaman 2.1
Klasifikasi HPV ……………………………………………………….. ....8
2.2
Mekanisme Inaktivasi Gen p53 ……………………………………….. ...17
4.1
Interpretasi Pulasan Imonohistokimia p53…………………………… .....43
5.1
Distribusi Karakteristik Umur dan Paritas pada Kelompok Stadium I, Stadium II dan Stadium III …………………………………………........44
5.2
Perbedaan Ekspresi p53 pada Pasien kanker Serviks Tipe Skuamosa Stadium I dan Stadium II…………………………………….. 45
5.3
Perbedaan Ekspresi p53 pada Pasien kanker Serviks Tipe Skuamosa Stadium I dan Stadium III ………………………………….. .46
5.4
Perbedaan Ekspresi p53 pada Pasien kanker Serviks Tipe Skuamosa Stadium II dan Stadium III ………………………………….. 46
vi
DAFTAR GAMBAR Halaman 2.1
Patofisiologi virus HPV pada siklus sel .....................................................10
2.2
Struktur p53 …………………………………………………………...... 18
2.3
Peran p53 dalam Mempertahankan Integritas Genom ..............................23
2.4
Mekanisme Intrinsik dan Ekstrinsik pada Apoptosis ................................25
2.5
Peran p53 dalam Proses Apoptosis ............................................................26
2.6
Proses Karsinogenesis Akibat Kegagalan Peran p53 .................................27
2.7
Skema Dasar Sederhana Molekuler Kanker ..............................................29
3.2
Konsep Penelitian.......................................................................................34
4.1
Rancangan Penelitian .................................................................................35
4.2
Alur Penelitian ...........................................................................................40
vii
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 3 Ethical clearance ................................................................................59 Lampiran 4 Surat Ijin Penelitian ...........................................................................60 Lampiran 1 Lembar Pengumpulan Data ................................................................61 Lampiran 2 Hasil Analisis Statistik …………………………………………….. 62 Lampiran 5 Anggaran Biaya Penelitian ………………………………………. ...66
viii
DAFTAR SINGKATAN
APAF-1
:
Apoptosis Inducing Factor-1
ATP
:
Adenosine-Triphospat
CCRC
:
Cancer Chemoprevention Research Center
CDC
:
Center of Diseases Control
CDK
:
Cycline D Kinase
DAB
:
Diaminobenzinidine
DMBA
:
Dimethylbenzanthrene
DNA
:
Deoxyribonucleic Acid
DR
:
Death Reseptor
EGF receptor :
Epidermal Growth Factor receptor
FADD
:
Fas-Associative Death Domain
FIGO
:
International Federation of Gynecology and Obstetrics
FITC
:
Fluorescein isothiocyanate
FSH
:
Follicle Stimulating Hormone
G1
:
Gap 1
G2
:
Gap 2
GTP
:
Guinidine-Triphospat
IMT
:
Indek Massa Tubuh
kb
:
kilobasa
kDa
:
kilo Dalton
LH
:
Luteinizing Hormone
M
:
Mitosis
MDM2
:
Murine Double Minute 2
miRNAs
:
mikroRNAs
PBS
:
Phospate Buffer Saline
RSUP
:
Rumah Sakit Umum Pusat
S
:
Sintesis
ix
TGF-α
:
Transforming Growth Factor-α
TNF
:
Tumor Necrotic Factor
TVS
:
Transvaginal Sonografi
WHO
:
World Health Organization
x
BAB I PENDAHULUAN
I.I Latar belakang Kanker dapat menyerang semua lapisan masyarakat tanpa mengenal status sosial, umur, dan jenis kelamin. Kanker memiliki dampak fisik, psikologis serta dampak sosial. Salah satu kanker yang menjadi perhatian dibidang kedokteran maupun masyarakat umum adalah kanker serviks. Saat ini di seluruh dunia diperkirakan lebih dari 1 juta perempuan menderita kanker serviks dan 3-7 juta orang perempuan memiliki lesi prakanker derajat tinggi (high grade dysplasia). Diperkirakan sebanyak 7,8 kasus baru per 100.000 wanita pertahun dengan angka kematian sebanyak 2,4 per 100.000 wanita per tahun (National Cancer Institute, 2013). Di Inggris, pada tahun 2010, sebanyak 2.851 orang didiagnosis dengan kanker serviks dan pada tahun 2011 sebanyak 972 orang meninggal karena kanker serviks (Cancer Research UK, 2011). Penelitian WHO tahun 2005 menyebutkan, terdapat lebih dari 500.000 kasus baru dan 260.000 kasus kematian akibat kanker serviks, 90% diantaranya terjadi di negara berkembang. Angka insiden tertinggi ditemukan di negara-negara Amerika bagian Tengah dan Selatan, Afrika Timur, Asia Selatan, Asia Tenggara. Di Indonesia, diperkirakan 40-45 kasus baru perhari dimana terjadi satu kematian setiap satu jam. Sementara di Bali, insiden kanker serviks adalah 0,98% dimana terjadi satu kematian setiap 48 jam (Suwiyoga, 2012).
xi
Tingginya angka kematian dan rendahnya harapan hidup selama lima tahun pada kanker serviks sangat ditentukan oleh seberapa dini ditemukannya stadium kanker serviks tersebut. Semakin dini stadium kanker serviks ditemukan, maka semakin tinggi angka harapan hidup dari penderita kanker serviks (Ari, 2009). Sebagian besar penderita kanker serviks datang berobat atau memeriksakan diri ke pelayanan kesehatan pada stadium lanjut. Prognosis kanker servik adalah buruk, hal ini dihubungkan dengan 85-90% kanker servik terdiagnosis pada stadium invasive, bahkan stadium terminal. Umumnya 5-years survival rate untuk stadium I lebih dari 90%, stadium II 60-80%, stadium III 50% dan untuk stadium IV kurang dari 30% (Kartikawati, 2013). Prognosis kanker servik juga dipengaruhi oleh tipe sel dan faktor pengobatan (Andrijono, 2009). Tipe sel skuamosa merupakan jenis terbanyak dari kanker servik, yaitu sekitar 70%, tipe adeno karsinoma sekitar 25% dan sisanya tipe lain (Monga, 2012). Dengan semakin majunya ilmu pengetahuan, sekarang telah diketahui penyebab terjadinya kanker serviks adalah infeksi dari Human Pappiloma Virus (HPV). Meskipun saat ini telah diketahui penyebab kanker serviks adalah infeksi dari HPV, tetapi angka kejadian dari kanker serviks ini masih banyak. Hal ini tidak terlepas dari faktor risiko yang mempermudah terjadinya kanker serviks tersebut. (Daniel et al, 2010). Melihat fenomena di atas, maka para ahli mulai memikirkan berbagai metode dalam melakukan deteksi dini terhadap prognosis dari kanker serviks melalui pendekatan genetik, yaitu dengan mendeteksi kelainan genetik pada pasien kanker serviks. Berbagai penelitian terhadap peran genetik telah dikembangkan dalam
xii
rangka memahami etiologi dan patofisiologi kanker serviks, baik melalui pemeriksaan secara langsung terhadap mutasi pada gen atau pun tidak langsung melalui abnormalitas ekspresi protein yang dihasilkan oleh gen termutasi. Salah satu gen yang diperkirakan mengambil peranan penting di dalam etiopatogenesis serta progresi kanker serviks adalah p53, merupakan Tumor Suppressor Gene yang mengkode atau mengekspresikan protein p53. Protein p53 merupakan faktor transkripsi terhadap gen-gen yang terlibat dalam regulasi siklus sel, induksi apoptosis, DNA repair, stabilitas genom dan mutasi gen p53 merupakan abnormalitas molekuler tersering pada lebih dari 50% kasus keganasan terutama pada kanker serviks, kanker kolorektal dan kanker paru. Pada penyakit kanker, sebagian besar mutasi p53 adalah missense mutations yang menimbulkan substitusi asam amino pada protein wild-type. Mutasi ini selalu berakibat pada terjadinya sintesis protein mutant yang dapat meningkatkan stabilitas seluler akan tetapi cacat secara fungsi. p53 mutant terakumulasi di dalam sel, mencapai level hingga 10 sampai 100 kali lipat lebih tinggi daripada protein wild type (Martinez et al. 2013). Protein 53 juga dapat digunakan sebagai biological marker kanker serviks terhadap prediksi dan prognosis setelah dilakukan pengobatan. Seperti halnya gen p53, derajat diferensiasi karsinoma serviks sebagai salah satu karakteristik histopatologi juga memiliki nilai prognostik yang signifikan dan relevansi terapi (Min, 2011). Penelitian yang dilakukan di Lithuania juga medapatkan perbedaan kadar p53 yang signifikan pada pasien yang didiagnosa dengan kanker serviks dan wanita sehat (Zivile, 2012).
xiii
Sehubungan dengan hal tersebut di atas, maka melalui penelitian ini akan dilakukan penilaian adanya perbedaan antara ekspresi p53 dengan derajat stadium kanker serviks. Penelitian ini diharapkan menjadi masukan atau tambahan pemikiran dalam rangka mendukung pengembangan ide pemanfaatan gen P53 dan ekspresi p53 sebagai deteksi derajat kanker serviks.
I.2 Rumusan Masalah Berdasarkan uraian tersebut di atas, maka rumusan masalah pada penelitian ini adalah sebagai berikut: 1.
Apakah ada perbedaan ekspresi p53 pada kanker serviks tipe skuamosa stadium I dan II ?
2.
Apakah ada perbedaan ekspresi p53 pada kanker serviks tipe skuamosa stadium I dan III ?
3.
Apakah ada perbedaan ekspresi p53 pada kanker serviks tipe skuamosa stadium II dan III ?
I.3 Tujuan Penelitian I.3.1 Tujuan Umum Adapun tujuan yang ingin dicapai melalui penelitian ini adalah untuk mengetahui perbedaan ekspresi p53 pada stadium I, II, dan III kanker serviks tipe skuamosa.
xiv
I.3.2 Tujuan Khusus 1. Untuk mengetahui perbedaan ekspresi p53 pada kanker serviks tipe skuamosa stadium I dan II. 2. Untuk mengetahui perbedaan ekspresi p53 pada kanker serviks tipe skuamosa stadium I dan III. 3. Untuk mengetahui perbedaan ekspresi p53 pada kanker serviks tipe skuamosa stadium II dan III.
I.4 Manfaat Penelitian I.4.1 Manfaat Ilmu Penelitian ini diharapkan menjadi masukan atau tambahan pengetahuan dalam rangka mendukung pengembangan ide pemanfaatan ekspresi p53 sebagai prognosis dari derajat kanker serviks. I.4.2 Manfaat Praktis Penelitian ini juga diharapkan dapat memperkaya khasanah medis dalam menentukan prognosis dari kanker serviks.
xv
