A laboratóriumi haematológiai vizsgálatok lehetőségei, algoritmusai, szinergizmusa a pathológiai és radiológiai leképező diagnosztikával Synlab továbbképzés oktatási anyag készítette: Dr.Magyarlaki Tamás PTE ÁOK LMI 2011
Haematológiai betegségek diagnosztikája 1. Klinikai tünetek 2. Laboratóriumi vizsgálatok 3. Pathológia - csontvelő aspirátum vagy biopszia - nyirokcsomó FTAB vagy rezekció 4. Képalkotó eljárások (Rtg, UH, CT, PET&SPECT CT)
Pathologia Acut leukaemia típusok (FAB) AML M0 differenciálatlan M1 érés jelei nélkül M2 granulocyta irányú érés jelei M3 akut promyelocytás M4 granulocyta és monocyta irányú M5 monoblastos vagy monocytás
ALL L1 kis, egyforma blastok, nagy sejtmag : citoplazma arány L2 nagyobb, heterogénebb blastok, kisebb sejtmag : citoplazma arány L3 a blastok citoplazmája vakuolizált, basophil (rendszerint B-ALL) Megjegyzés: A c-ALL, pre-ALL, null-ALL,
M6 erythroleukaemia
és L1 és L2 képét és hagyományos
M7 megakaryoblastos
(May-Grünwald-Giemsa) morfológia alapján nem különíthetők el egymástól
I. táblázat. Az acut leukaemiák FAB osztályozása {12}
Pathologia Chronicus myeloproliferatív syndroma (CMPD) típusok 1/ Policythaemia rubra vera
CMPD, PV
erythroid proliferáció
2/ Essentialis thrombocythaemia
CMPD, ET
thrombocyta szaporulat
3/ Chronicus Granulocytás leukaemia
CGL
4/ Chronicus granulocytás megakariocytás myelosis
CMGL
Általában a Ph+ chronicus granulocytás leukaemia Myelofibrosissal, thrombocythaemiával járó CML
# 1-3 típusoknál : chronicus fázis (1% alatti blast)- acceleráció (1-5%) - blastos crisis (5% feletti blast) # # 4. Típusnál : általában myelofibrosis alakul ki a terminális fázisban
Pathologia . Hodgkin's disease in the WHO Classifications •
Classical Hodgkin's disease o Nodular sclerosis o Mixed cellularity o Lymphocyte depletion o Lymphocyte-rich
•
Lymphocyte predominance Hodgkin's disease
Pathologia Non-Hodgin lymphomák B-sejtes differenciálódás és leukaemiák (B)
Lymphopoiesis
Lymphatic T stem cell Lymphoplasmacytoid cell B-immunoblast
NK cells Stem cell
Plasma cell AG
B1-lymphocyte Lymphatic B-stem cell
Centroblast
Centrocyte
B2-lymphozyte
Pathologia Lymphopoiesis AG T2-lymphocyte
T1-lymphocyte T-immunoblast
Lymphatic T stem cell
NK cells Stem cell
Lymphatic B-stem cell
Non-Hodgin lymphomák és leukaemiák (T)
Labor+Pathologia Myeloma multiplex
M komponens SPEP képe és serum IFIX + csontvelő IHC monoclonalitás
Radiologia
MDR(+) tumor(A)
Choroid plexus epithelial expression of MDR1 Pglycoprotein and MRP contribute to the blood-cerebrospinal-fluid drug-permeability barrier Proc Natl Acad Sci, USA 1999; 96:3900-5
MDR(-) tumor(B)
F-18 FDG PET Fluorine-18 Fluorodeoxyglucose PET-CT (Positron EmissionTomography) Clin Cancer Res 2007;13:427-433. DOI:10.1158/1078-0432.CCR-06-1357
Laboratóriumi vizsgálatok a haematologiai diagnosztikában - Vérkép (1 db EDTA cső) - Vérkenet - Vörösvérsejt süllyedés, CRP, PCT - Serum protein elfo, Ig-ok, Immunfixáció - B12, Fólsav, Haptoglobin - Tumor markerek: LDH, béta-2- MG - Véralvadási vizsgálatok - Áramlási cytometria (FCM) - Genetika: kromoszóma (metafázis) FISH (interfázis) molekuláris biológia (PCR)
Vérkép automaták (5part diff)
RBC és PLT paraméterek mérése Impedance PLT/RBC counting with hydrodynamic focussing.
MICRO
DC
-
MACRO
RBC cytogram és hisztogram
Fsc
RBC Volume (fL)
Macro
0 120fL
60 120 RBC Volume (V)
200 fL
60fL 28g/dL
41g/dL
0
Micro
Hypo
28 41 50 g/dL Hgb Concentration (HC)
Hyper
Hgb Concentration (g/dL)
Ssc
0
100 pg Hgb Content (CH)
Thalassaemia (Hgb-pathia) •XE result : Order CBC
Thalassaemia α (3.7 & 4.2 & del) β-major,intermedia,minor,minima
Céltáblasejtek
Mentzer index MCV/RBC <11
HUN:β minor és minima
Capillaris zona electrophoresis
14
Reticulocyta (acridine orange,oxazin750)
(Fragments)
SYSMEX
Low angle scatter (2º to 3 º)
PLT optikai mérés Large Platelets Microcytes
RBC Ghosts
Platelets Debris RBC Fragments
High angle scatter (5º to 15 º)
kenet: Brillant-cresyl-kék
ADVIA (CD4000/Saphire)
Hematológiai automaták – mérési elvek 1. Elektromos impedancia változás – Coulter elv (WBC=3part diff csak Coulter!, RBC, Thr) 2. Optikai mérés – sejtek fényszórása alapján (WBC, RBC, Thr) 3. Peroxidáz festés – WBC 4. Fluoreszcens festés után fényszórás alapján – WBC 5. Basophil/mag lobularitás - WBC
Vérkép direkt optikai mérési elv (488 nm Argon laser) 0o:
Egyenes szögű fényszórás (1o–3o): a sejtek nagyságának mérésére szolgál.
10o:
Kis szögű szórás (7o–11o): a sejt szerkezetének és felépítésének relatív indikátora.
90o:
Derékszögű fényszórás (70o–110o): elsődlegesen a sejtek belső granuláltságát és lebenyezettségét méri.
WBC/Baso channel
90 DEP:
90 fokos depolarizált fényszórás (70o–110o): az eosinophiloknak
2. ábra. Fényszórási paraméterek {15}
a neutrophiloktól és a többi sejttől való elkülönítését teszi lehetővé, az eosinophil sejtek
CellDyn,
azon egyedülálló tulajdonsága alapján, hogy azok granulumai az eredetileg derékszögben polarizált lézer fényét depolarizálják.
Coulter +CONDUCTIVITÁS
eo
Fehérvérsejt peroxidase analysis High angle detector (5o - 15o)
TungstenHalogen Lamp
Absorbance Peroxidase
5 2 ADVIA
4
1 3
Fehérvérsejkép basophiliával DNA fluorescent dye (polymethine)
FLUORESCENCE
SYSMEX
BASO
Basophil / Nuclear Lobularity Flow Cytometric Analysis High angle detector (5o - 15o) 670 nm Laser Diode
Low angle detector (2o-3o)
ADVIA és SYSMEX STROMATOLYSER OLDATTAL
DIFFDIFFChannel channel
Balratoltság vérképben
Imm gran !
Left shift !
4
Variáns lymphocyta szaporulat DIFF channel
Atypical lymph
Abnorm. lymph / L-blast
Lymphoid LEUKAEMIÁK
ESETBEMUTATÁS
22 éves fiatalember: asthma, 2008 dec: splenomegalia, preB-ALL(Ph-), chemoth. Hoelzer: indukció, halasztott konszolidációs kezelés,infectio, PTX, pneumonia (2009.03-05) Aplasia(2009.07),Sepsis - Th megszakítás,obs. MLDT Kongresszus 2010.
Kenetfestés 2010.05. – RELAPSUS (perif=5%, cs.v.=91%)
Sepsis, légzési elégtelenség, pitvarfibrilláció, cardioverzió(4x) 2010.06.19 – Exitus letalis MLDT Kongresszus 2010.
Áramlási cytometria CD19+ CD10+ preB-sejt
cALLA+ leukemia
CD13 myeloid Normál Gran-Ly-Mo arány
CD34 őssejt
•B- és T-CLL •PLL •FL •MCL és MZL •NK/T-sejtes ML 10. sz. ábra:
CLL
11. sz. ábra: Perifériás vérkenet CLL-ben
FWBC (fragilis fvs-ek) KWOK (kineticus optikai fvs szám) Gumprecht rögök CLL-ben cell count
time (sec) cell count
time (sec)
Acut myeloid leukaemia
diff.dg.: CML
THM – take home message FONTOS ! - rutin laboratóriumok szintjén – szűrés, vérkép, gyanús esetben kenet -
kis vérkép, 3 part diff helyett nagy vérkép, 5 part diff
-
normál sejtszám esetén is találkozhatunk gyanús felhőképekkel (dot plot) – minden esetben kenetfestés
-
laboratórium – konzultatív szakma, fontos a klinikussal való kapcsolatfelvétel és az eset megbeszélése gyanús esetben, ,,van amit csak a laboros lát,,
-
betegség súlyosságának megítélésére esteleges követésére alkalmas más rutin paraméterek mérése pl. LDH – labor feladat
