A Immorális ellenanyagok tanulmányozása nyulakban kísérletileg létesített Cysticercus pisiformis (Bloch, 1780)-fertőzöttség esetén

Parasit. Hung. 5. 99-134. 197?.

A Immorális ellenanyagok tanulmányozása nyulakban kísérletileg létesített Cysticercus pisiformis (Bloch, 1780)-fertőzöttség esetén I I I . A primer és' szekunder fertőzöttségre adott ellenanyagválasz jellegzetessége

Dr. NÉMETH István A Magyar Tudományos Akadémia Állategészségügyi Kutató Intézete, Budapest

A Taenia

pisiformis /Bloch,

Cysticercus

1780/ Gmelin,l790

pisiformis /Bloch,

l780/-szal

fertőzött n y u l a k vérsavójában

a

lárvaformák

ellen

antigénkomponensei

meg, a m e l y e k e t

kifejlett

galandférgek

ható e l l e n a n y a g o k

az e d d i g végzett vizsgálatok

direkt

hemagglutinációs próbával / 5 1 , 7 7 / m u t a t t a k k i .

l a s z jellemzőiről a z o n b a n a r r a vonatkozóan, h o g y ellenanyagok

kialakuló

m i l y e n immunglobulin-osztályba

adatok.

Mesterségesen

jával korábban végzett s i formis-oncosphaerák

anti-nyul

tartozó nincsenek

fertőzött n y u l a k

vérsavó­

vizsgálatok kiderítették, h o g y a T. p i ­ a

nyulakban

indukálnak / 5 3 , 5 4 / . A p r e c i p i t i n

komplex

kecskeimmunsavóval,

illetve

i m m u n e l e k t r o f o r e t i k u s analízisének következtetni,

immunglobulin-osztályba

hogy a

precipitin-választ

aktivitású vérsavók

C. p i s i f o r m i s - " s o m a t i c u s " és "me t a b o l i c u s "

hetett

ellenanyagvá­

még i g e n hiányosak az i s m e r e t e i n k , s

termelődnek a fertőzés lefolyása során,

az i r o d a l o m b a n

zett

agargéldiffuziós-

komplementumkötési / 7 7 / , v a l a m i n t i n ­

E féregfaj inváziója nyomán a n y u l a k b a n

fikus

és a

jelennek

során gyürüs-preci-

pitációs / 1 4 , 7 7 / , lárvaprecipitációs / 7 0 , 7 1 / , precipitációs / 5 1 , 5 3 , 5 4 / ,

lárvaalakjával, a

/Cestoda: Taeniidae/

1

polispeci-

T. p i s i f o r m i s -

antigénekkel

eredményeiből a r r a l e ­

precipitálo e l l e n a n y a g o k

t a r t o z n a k /55/.

és

elvég­

az I g G

A T. pisiformis-oncosphaerákkal lakuló humorális

történő

fertőzések nyomán

kia­

ellenanyagválasz további tanulmányozása érde­

kében u j a b b kísérleteket fertőzött n y u l a k b a n

végeztünk, a m e l y e k

a p r i m e r és s z e k u n d e r

során

mesterségesen

fertőzésre

jelentkező

ellenanyag-termelés lefolyását, v a l a m i n t a képződött e l l e n a n y a ­ gok

és az i m m u n g l o b u l i n o k

Ez a közlemény e z e k n e k

közti k a p c s o l a t o t vizsgáltuk.

a vizsgálatoknak

a z eredményeit i s m e r t e ­

ti.

A n y a g o k és módszerek

Antigének

Az agargéldiffuziós-precipitációs

próbában antigénekként T. p i ­

si formis-kivonatot

/TpK/ és

kalmaztunk,

az előző közleményben l e i r t a k

tottunk

amiket

elő

/53, 54/.

használt antigén p e d i g

Az

C. p i s i f o r m i s - k i v o n a t o t

indirekt

/CpK/ a l ­

szerint

állí­

hemagglutinációs

próbában

LANCEFIELD / 4 1 / eljárásával T.

pisifor-

misból készült a korábban l e i r t

módosítással / 5 1 / .

I A T. pisiformis-petéket mesterségesen tött g r a v i d kifejlett tesen

féregizekből izoláltuk,

cysticercusokat

fertőzött

fertőzött kutyákból a vándorló

lárvákat

p e d i g T. pisiformis-petékkel

nyulakból a

korábban l e i r t a k

szerint

gyűj­ és a

kísérle­ gyűjtöt­

tük / 5 2 , 5 6 / .

Antiserumok

A vizsgálatokhoz /anti~Tp/,

serumfehérjéket ti-nyul

felhasznált.

a bispecifikus

a monospecifikus

monospecifikus

anti-nyul

100

pisiformis-nyulimmunsavó

precipitálo p o l i s p e c i f i k u s

kecskeimmunsavó/,

juhimmunsavó,

albumin

anti-T.

az anti-C.pisiformis-nyulimmunsavó / a n t i - C p / , a n y u l

anti-nyul

kecskeimmunsavó / a n anti-nyul

I g G és IgM

I g G juhimmunsavó,

a

I g M juhimmunsavó, a z a n t i - b o v i n - s e r u m -

nyulimmunsavó / a n t i - B S A / ,

v a l a m i n t az anti-humán-serum-

albumin irtuk

nyulimmunsavó

/ a n t i - H S A / előállítását már korábban l e -

/53,54,55,56/.

E z e k e n kivül még a következő vérsavókat

Fertőzött n y u l a k

vérsavója

A vérsavók T« pisiformis-petékkel lakból származtak. hér uj-zélandi

dán át közvetlenül

az állatok

petével szolgált.

be.

A

összes n y u l a t leöltük,

a kontrollcsoport

fertőzött

a z agargéldiffuziósprecipitációt

A fertőzés

ala­

intenzitásának

meghatá­ spontán

minden n y u l a t f e l b o n c o l t u n k .

Az első fertőzés időpontjától k e z d v e v a l a m e n n y i folyamatosan

konzerválószer nélkül -20 °C-on

kisérlet

eredményének

esetében az e s e t l e g e s

kideritése érdekében

jóból 7-10 naponként

szon­

3 0 . napon elvéreztettünk, a 6 0 .

a Cysticercus-fertőzöttség

rozása, i l l e t v e fertőzöttség

500

15 n y u l a t 10 000 petével ujrafertőztünk. A

napján az

elbirálása,

gyomrába a d t u k

CpK-val k i f e j e z e t t

a fertőzést követő

nyu­

fecskendőre s z e r e l t

a m e l y e k vérsavója

precipitációs próbában a

100.

egyedenként

fertőzött kontrollként

5 m l térfogatban

csoportból 10 állatot,

k i ,

nem

fertőzött

korú, 5 0 0 - 1 0 0 0 g s u l y u , f e ­

n y u l közül n e g y v e n e t

A fertőző p e t e a d a g o t

napon p e d i g

mesterségesen

ötven 5-7 h e t e s

fertőztünk, 10 állat p e d i g

kitott

alkalmaztuk.

vért

állat

vettünk,

megfagyasztva

fülvéná-

A vérsavókat

tároltuk a

fel­

használásig, A sófrakcionáláshoz,

a preparativ

agargél-elektroforézishez

az anioncserélő kromatográfiához a fertőzések pontban v e t t

vérsavókat

vizsgálatot

egyedi

egyenlő arányban kevertük.

vérsavókkal

végeztünk.

fertőzött c s o p o r t állataiból v e t t

Féregantigénekkel képzett

és a

után e g y a z o n

velük

vérsavókat

más

Kontrollként a nem használtuk.

reakcióba lépő

antigén-antitest k o m p l e x e k e l l e n

Minden

és

idő­

ellenanyagokkal

ható immunsavók

terme-

lése K a k a s o k a t immunizáltunk T a e n i a -

és C y s t i c e r c u s p i s i f o r r n i s - a n t i -

génekből és az ellenük ható antitest

A

nyul-ellenanyagokból

álló antigén­

precipitátumokkal.

precipitátumok

előállításához

háromféle

vérsavókeveréket

használtunk :

I.

keverék:

az első

vérsavója,amelynek

fertőzést követő 3 0 . n a p o n leölt

hemagglutinációs / H A / - t i t e r e

titatív precipitációval meghatározott t a l m a 0,19 mg/ml II.

keverék:

származó

nyulak

1:128, k v a n ­

ellenanyag-fehérje-tar­

volt;

ráfertőzés

után a

vérsavó, H A - t i t e r e

4 0 . napon leölt

1:2048,

nyulakból

ellenanyagfehérje-tar­

t a l m a 0,96 mg/ml; III.

keverék:

egyenlő

nyulimmunsavó, je-tartalma

kevert

amelynek H A - t i t e r e

4,9 mg/ml

Az antigén-antitest előtt

arányban

anti-Cp

1:16384,

és

anti-Tp

ellenanyagfehér­

volt.

komplexek

a vérsavókeverékeket

képzéséhez történt

zsirtalanitottuk

felhasználás

és dekomplementál-

tuk.

A komplexek

1.

előállítása kétféle módon

A vérsavókeverékbe

történt:

fertőzőképes élő c y s t i c e r c u s o k a t

helyez­

tünk, 50 m l vérsavóra 200 lárvát számitva, és a vérsavót 4 órán át 37 °C-on,

m a j d e g y éjszakán át

cysticercusokat 15

a

p e r c i g 3 0 0 0 - e s percenkénti

és izotóniás konyhasóoldatban a vérsavóhoz f r i s s nos

fordulat

mellett

a d t u n k és a procedúrát

A müvelet során k a p o t t

precipitátumot 4-5-szörö-

3000-es

centrifugáltuk. Az utolsó mosást és

gálást követően a precipitátumot izotóniás konyhasóoldatban felhasználásig.

azo­

2-4 °C-os izotóniás konyhasóoldattal 5-6-

s z o r a l a p o s a n m o s t u k és a mosás után 15 p e r c i g kénti f o r d u l a t t a l

lecentrifugáltuk

a felhasznált vérsavó térfogatának

sét kitevő mennyiségű

Másnap a

a precipitátumot

szuszpendáIva megőriztük. Ezután

cysticercusokat

módon megismételtük.

összegyűjtöttük,

4 °C-on t a r t o t t u k .

vérsavóból eltávolítottuk,

0 , 0 1 % mertiolátot

percen­

centrifutartalmazó

szuszpendáltuk és 4 °C-on tároltuk a

2. Az előző bekezdésben leírttal ticercusokat tumot

inkubáltunk

összegyűjtöttük

e k v i v a l e n s arányban ana 4

partes C-on

teljesen

a z o n o s módon élő c y s ­

a vérsavóban,és a képződött

és megőriztük. hoztuk

össze

keverékével és

a CpK és TpK

2 órán át

t a r t o t t u k . A két p r o c e d u r a

precipitá­

E z t követően

a vérsavót

antigénoldatok

37 °C-on, m a j d

során k a p o t t

másnapig

precipitátumot

összekevertük és a f e n t i e k k e l megegyező módon m o s t u k és

tárol­

tuk.

A két különböző eljárással m i n d e g y i k tottunk

antigén-antitest

lön i m m u n i z e I t unk /összfeherje/ vánsban

+

vérsavókeverékből

precipitátumokat és e z e k k e l

3-3 fehér

Leghorn

kakast.

tartalmazó precipitátumot

emulgeálva

bőr

alá

oltottunk

majd

négy hét múlva az oltást u g y a n e z z e l

tük.

Egy hónap múlva

cipitátumot

kaptak

az állatok 5 mg

9-12.

fehérjét

F r e u n d - a d j u-

helyre

az adaggal

elosztva,

megismétel­

fehérjének megfelelő

i z o m b a konyhasóoldatban

ponként három a l k a l o m m a l .

külön-kü­

T i z mg

komplett több

előállí­

A kakasokat

pre­

szuszpendálva, ötna-

a z utolsó

oltást

követő

napon véreztettük e l , és a vérsavókat 0 , 0 1 % mertioláttal

és 0,25 % f e n o l l a l konzerválva 4 °C-on

Az e l l e n a n y a g o k

A féregantigének

tároltuk.

kimutatása

e l l e n ható a n t i t e s t e k e t

i n d i r e k t hemagglutiná-

ciós / I H A / , agargéldiffuziós-precipitációs ós próbával

mutattuk k i

és lárvaprecipitáci-

más közleményeinkben

leirtak

szerint

/51,53,54,56/.

Az e g y e s kisérleti c s o p o r t o k b a n titerét

a

vérsavók átlagos e l l e n a n y a g -

a vérsavók e g y e d i vizsgálatával

kapott titerek

kettes

alapú logaritmusával számitottuk k i / 3 9 / .

A vérsavók sófrakcionálását, sát,

+

Difco

zsirtalanitását, dekomplementálá-

e l l e n a n y a g - t a r t a l m u k meghatározását, továbbá a p r e p a r a t i v

Laboratories, D e t r o i t , Michigan,

USA

agargél-elektroforézist, immunelektroforézist valamint

az

és a

anioncserélő

kromatográfiát,

2-merkapto-stanol

a fehérjemegnatározásokat

további

írtakkal megegyező módon h a j t o t t u k

az

/2-ME/-kezelést, közleményünkben l e ­

végre / 5 5 , 5 6 / .

Eredmények

A parazitológiai boncolás

Az első nem

fertőzést

fertőzött

sem l e z a j l o t t

eredménye

követő 1 0 0 . napon

vagy folyamatban

ló kórbonctani elváltozásokat petékkel fertőzött c s o p o r t b a n ban

fordultak

lévő Cysticercus-fertőzésre nem

találtunk.

volt.

A T.

átlagosan 397

Az előbbi

fertőzött

a 6 0 . napon

állataiban az

végleges tartózkodási helyükön, zömmel a c s e p l e s z e n ceüreg hashártyáján betokozódott és t e l j e s e n

kifejezett

zött állatokban sen

még meg

előfordultak

nem

ujra-

142-438/ élősködők

és a meden­

állapotban v o l t a k találhatók,

scolexszel rendelkeztek.

Az ujrafertő-

a teljesen

kifejlett

borsókákon kivül véglege­

telepedett,

fiatal,

vándorló c y s t i c e r c u s o k i s

szabadon

fekció során b e v i t t részt a már

szám­

állatok­

/szélső értékek:

csoport

uta­

pisiformis-

v i s z o n t m i n d e n nyúlban n a g y

/szélső értékek: 7 8 - 3 7 7 / ,

fertőzöttekben p e d i g

során a

sem c y s t i c e r c u s o k a t ,

elő c y s t i c e r c u s o k . Az e g y s z e r

ban átlagosan 2 1 1

Cysticercus

végzett boncolás

k o n t r o l l c s o p o r t állataiban

a hasüregben. Ezek kétségtelenül a oncosphaerákból

fejlődtek

betokozódott cysticercusoknál

és f e j l e t l e n e b b e k v o l t a k ,

k i , mivel

lényegesen

másrészt a májban talált

elváltozások jellegéből i s e r r e l e h e t e t t

A kisérleti C. pisiformis-fertőzésre

reinegy­

kisebbek

kórbonctani

következtetni.

jelentkező

ellenanyagválasz

A hemagglutináló /HA/

A h e m a g g l u t i n i nek

ellenanyagok

dinamikája

a fertőzöttség első

vérsavókban, és már a 7. n a p o n m i n d e n

hetében j e l e n t e k fertőzött állat

meg a

vérsavója

tartalmazott,

bár a l a c s o n y ,

1:2-1:16/ t i t e r b e n , lési idő végéig,

átlagosan 1:5,9

/szélső értékek:

H A - a n t i t e s t e k e t * Ezután egészen a

valamennyi

megvizsgált

vérsavóban

megfigye­

k i lehetett

hemagglutinineket mutatni.

0

20 40 days after fertőzés

60 infection

utáni

80

100

napok

1 . ábra Az e l l e n a n y a g o k titerének alakulása 500 T. pisiformis-petével e g y s z e r fertőzött n y u l a k vérsavójában. átlagos H A - t i t e r ........ átlagos p r e c i p i t i n - t i t e r A n y i l a fertőzés időpontját jelöli. Antibody

Fig. 1. p a t t e r n i n serum o f r a b b i t s a f t e r a s i n g l e w i t h 500 T. p i s i f o r m i s e g g s . mean HA t i t r e mean p r e c i p i t i n titre Arrow i n d i c a t e s t h e time of t h e i n f e c t i o n .

infection

Az e g y s z e r i fertőzés nyomán termelődött H A - a n t i t e s t e k dinamiká­ ját az 1 . ábra szemlélteti, a m e l y 10 állatból különböző időpon­ tokban

vett

vérsavók

átlagértékeit

a n y a g o k mennyisége átlagtiter az

egyedenkénti vizsgálatával

tünteti

fel.

Az első héttől

fokozatosan

5 0 . napon 1:512

emelkedett

kapott

kezdve a

a vérsavókban,

/szélső értékek:

titerek

HA-ellenés az

1:128-1:1024/

értékkel maximumot ért e l . Ezután némileg csökkent, és a vérsa-

vók a megfigyelési idő végén / 1 0 0 n a p p a l gosan

a fertőzés u t á n / átla­

1:207,9 /szélső értékek: 1 : 6 4 - 1 : 5 1 2 / t i t e r b e n

hemaggluti-

náltak.

A kétszer

fertőzött állatokban k i a l a k u l t

a 2. ábra demonstrálja, val

k a p o t t átlagos

hemagglutinin-választ

a m e l y 15 n y u l vérsavójának

HA-titer

alakulását

tünteti

vizsgálatá­

f e l . Az ábrán

12

days

after

fertőzés

infections utáni

napok

2. ábra Az e l l e n a n y a g o k titerének alakulása 5 0 0 , m a j d 10 0 0 0 T . p i s i f o r mis-petével fertőzött n y u l a k vérsavójában. -átlagos H A - t i t e r ..... átlagos p r e c i p i t i n - t i t e r A n y i l a k a fertőzés időpontját jelölik. F i g . 2. A n t i b o d y p a t t e r n i n serum o f r a b b i t s i n f e c t e d first with 500 and l a t e r w i t h 10 0 0 0 T. p i s i f o r m i s e g g s . mean HA t i t r e mean p r e c i p i t i n t i t r e Arrows i n d i c a t e time o f i n f e c t i o n s .

jól látható, h o g y a 6 0 . n a p o n 10 0 0 0 T. pisiformis-petével vég­ zett let

reinfekció után a H A - t i t e r 1 0 0 . napján / 4 0 n a p p a l

lagosan

1:3743

tovább,emelkedett,

és a kisér-

a z ujrafertőzés után/ a vérsavók á t ­

/szélső értékek: 1 : 1 0 2 4 - 1 : 8 1 9 2 / t i t e r b e n

adtak

reakciót.

A

p r e c i p i t á l o

ellenanyagok

Precipitálo a n t i t e s t e k e t héten

lehetett

a

dinamikája

legkorábban a fertőzést követő második

vérsavókban

agargéldiffuziós-precipitációs

próbával k i m u t a t n i . A vizsgált 25 állat közül a 1 4 . napon 1 1 , a 20.

napon 1 6 ,

a 3 0 . naptól k e z d v e p e d i g egészen a megfigyelési

idő végéig m i n d e n állat vérsavója precipitációt agargélben a C p K - v a l m i n t

Amint

az 1 . és 2. ábrán

görbéjének lefutása

antigénnel

szemben.

látható, az

átlagos

n a g y o n hasonló v o l t

Az átlagos p r e c i p i t i n - t i t e r

azonban

m i n d az

kapott

volt,

mint

görbéjéhez.

egyszer,

vizsgált

az a z o n o s

mind

a

időpontban vérsavókkal

HA-titer.

A reinfekciót követően a precipitálo melkedett, után/

k i az

precipitin-titer

a HA-titer

kétszer fertőzött állatcsoportban m i n d e g y i k 2,8-5,3 kitevővel a l a c s o n y a b b

alakitott

ellenanyagok

és a megfigyelési idő végére

mintegy

3-3,5-ször

titere

/ 4 0 . nap a

i s e-

ráfertőzés

n a g y o b b értéket ért e l , m i n t

a primer

fertőzés után észlelt átlagtiter maximuma. Az ujrafertőzött á l ­ latok kek:

vérsavója ebben az időpontban átlag 1:116,7 /szélső érté­ 1:32-1:512/ t i t e r b e n

fertőzöttekével, titerben

précipitait,

a m e l y átlag 1:5,3

a d o t t reakciót.

szemben a c s a k

/szélső értékek: 1 : 2 - 1 : 1 6 /

Ezenkivül a reinfekció után v e t t

savók által a C p K - v a l szemben az agargélben létesitett tációs

sávok s o k k a l

markánsabbak v o l t a k ,

több antigénkomponens e l l e n a primer tatva

ható p r e c i p i t i n t

fertőzöttségből származók.

őket u g y a n i s

tációs v o n a l a t

vér­

precipi­

sőt e z e k a vérsavók t a r t a l m a z t a k , mint

Agargélben C p K - v a l reagál­

r e n d s z e r i n t három, esetenként négy

lehetett

egyszer

megfigyelni,

m i g az e g y s z e r

precipi­ fertőzött

nyulak

vérsavója

többnyire c s a k e g y ,

maximum

pedig

két v o n a l a t

alakitott k i .

A hiperimmunizált

nyulak

vérsavójának

ellenanyag-aktivitása

A T. p i s i f o r m i s - , teljes

illetve

kivonattal

ségben t e r m e l t e k illetve

anti-Cp

C. p i s i f o r m i s — h o m o g e n i z á t u m m a l

mesterségesen

immunizált n y u l a k

e l l e n a n y a g o k a t . Az általuk 13 immunsavók H A - t i t e r e

1:2

z o t t . Agargéldiffuziós-precipitációs CpK-val lat

nagy

produkált 18

-1:2

és

mennyi­ anti-Tp,

között

ingado­

próbában T p K - v a l ,

illetve

reagáltatva őket 6-9 jól k i f e j e z e t t precipitációs

vona­

alakitottak k i .

Az i m m u n g l o b u l i n o k fertőzött,

jellemzése e g y s z e r ,

illetve

kétszer

v a l a m i n t a mesterségesen immunizált

nyulak

vé rsavój ában

Só frakcionálás

A vérsavókat

"egyharmad"

frakcionáltuk.

Az elkülönített

n y u l immunsavóval, anti-IgM sel

ammóniumszulfát-telitéssel

valamint

frakciókat p o l i s p e c i f i k u s

monospecifikus

anti-IgG,

részre antiilletve

immunsavókkal immundiffúzióval és immunelektroforézis-

analizáltuk,

Az " e g y h a r m a d "

majd e l l e n a n y a g o k

jelenlétére

ammóniumszulfát-telitéssel

lin-frakció az i m m u n g l o b u l i n o k o n lin

két

kivül 2-4 béta- és

motilitásu k o m p o n e n s t i s t a r t a l m a z o t t .

savófrakcióban

IgM g l o b u l i n t

IgG

pedig

globulint

vagy

megvizsgáltuk.

précipitait

egyáltalán

Az

euglobulin-mentes

nem l e h e t e t t

egyáltalán nem,

euglobu-

alfa-globu-

vagy csak

kimutatni, nyomokban

tartalmazott.

A szerológiai vizsgálatok látható, h o g y a megvizsgált az

eredményét

agargéldiffuziós-precipitációs

adtak,

feltüntető 1 . táblázatból

t e l j e s vérsavók m i n d az próbában

pozitiv

s ezenkivül a z élő lárvákkal i s k i f e j e z e t t

IHA-, mind reakciókat

precipitációt

alakitottak ugyanolyan

k i .

Az euglobulin-frakció minimális

erősségű

reakciókat a d o t t , m i n t

euglobulintól m e g f o s z t o t t rológiai próbában

A vérsavók

különbségekkel

a teljes

savófrakcióval v i s z o n t

minden esetben

frakcionálása

negativ

vérsavó. Az

mindhárom s z e -

reakciókat

kaptunk.

preparativ

agargél-zónaelektroforézissel

A vérsavókat 25 frakcióra frakciókban illetve ki

az I g G és

anti-IgM

immunsavókkal

és lokalizáltuk a

egyes

anti-IgG,

mikroimmundiffúzióval

jelenlétére

végzett

elkülönített

monospecifikus

ferogrammokbah, majd minden

próbával e l l e n a n y a g o k böző, vérsavóval

szeparáltuk. Az

IgM g l o b u l i n t

mutattuk

frakciót I H A -

megvizsgáltunk. Három

egy-egy.

ilyen

vizsgálat

külön­

eredményét

szemlélteti a 3. á b r a .

Az e g y s z e r

fertőzött nyulakból

anyag-aktivitást

egyetlen

származó vérsavókban az

troforétikus motilitásu I g G területére lokalizálódott. A t e r maximuma

az I g G

görbéjének csúcsával

területén

egyetlen

anyagokat

kimutatni

megvizsgált

helyzet,

akár a fertőzöttség

esett

vérsavóban sem

/ 3 . ábra, felső d i a g r a m / .

ból származó vérsavókat

kiterjedően

Az I g M

tudtunk

ellen­

Ugyanez v o l t

a z I g G lokalizáció

csaknem

vérsavók e-

teljes

ellenanyagokat

a

meg,

a kisebb viszont terjedt

a gyorsabb e l e k t r o f o r e t i k u s m o t i l i ­ és a z I g M lokalizációval e s e t t

be / 3 . á b r a , középső d i a g r a m / .

talmú

mutatott,

a n a g y o b b a lassúbb vándorlásu I g G csúcsának f e ­

tásu I g G területére

zett

területére

ferogramokban.

Az antitest-hatás e z e k b e n a vérsavókban két maximumot

lelt

a

korábbi, akár a későbbi időszaká­

vizsgáltunk.

k i tudunk mutatni

a m e l y e k közül

elekHA-ti­

egybe.

Az ujrafertőzés után a 20., 3 0 . és 4 0 . n a p o n l e v e t t setében v i s z o n t

ellen­

csúcs képviselte, a m e l y a lassú

Különösen pregnánsan

ez a mesterségesen immunizált vérsavójának vizsgálata

n y u l a k magas

során

egy­

jelentke­

ellenanyag-tar­

/ 3 . ábra, alsó

diagram/.

1. táblázat Table 1 .

Ammoniumszulfátos kisózással elkülönített serumfrakciókkal végzett szerológiai próbák eredménye R e s u l t s o f s e r o l o g i c a l t e s t w i t h serum f r a c t i o n s separated by ammonium s u l p h a t e p r e c i p i t a t i o n

Napok a (Days a f t e r ; p r i m e r szekunder (pri­ (seconda­ mary) ry) f e r t o z e s után ( i n f e c t ion ) 20 40 60 80 100

T e l j e s vérsavó (whole serum) +

HA-

titer ( t i tre)

192

Magyarázat ;

HA-

prec.

64 384 512 256 10 20 30 40

Euglobulin (euglobulin)

512 1024 2048 2560

. 4 24 32

16 8 32

64 128 128

lppt*

+

prec.

titer ( t i t re )

+ + + + +

64 256 512 192 128

4 16

+ + + +

256 1024

2048 2048

Szupernatáns (supernatant) HA-

lppt*

prec. titer ( t i t re )

8 6

+ + + + +

0 0 0 0 0

0 0 0 0 0

16 64 96 128

+ + + +

0 0 0 0

0 0 0 0

32

agargéldiffuziós-precipitációs próbával végzett titrálással meghatározva i n v i t r o lárvaprecipitáció: + p o z i t i v , - n e g a t i v reakció

Explanation:

lppt

d e t e r m i n e d by t i t r a t i o n i n agar g e l d i f f u s i o n in v i t r o larval precipitin test: + positive,

precipitin

test

- negative r e a c t i o n

_

_ _

_ _ _

-

E vizsgálatok

elvégzése

után, f i g y e l e m b e m

véve

lokalizációját, a 25 frakcióból 3 keveréket frakciókeverék részéből, globulin

a

ferogramnak

a csak

az I g G

IgG g l o b u l i n t

Az 1 .

e

tartalmazó

az 1-7. / 8 . / frakciókból, a 2. frakciókeverék és a

g y o r s vándorlásu I g G területére eső

/8./

9-16. frakciókból állt, a 3. frakciókeverék

radt

többi részt,

rés után a eredeti

és IgM

készitettünk

1 7 - 2 5 . frakciókat

térfogatára

foretikus

koncentráltuk, m a j d

szerint

a megma­

a frakcionált

vérsavó

immunelektroforézissel

és e l l e n a n y a g o k r a megvizsgáltuk. Az

vizsgálatok

pedig

t a r t a l m a z t a . Az összekeve­

frakciókat pervaporizációval

analizáltuk,

az I g M

részéből, a

/ 4 . ábra/ az

immunelektro-

1 . frakciókeverék

kizárólag lassú e l e k t r o f o r e t i k u s vándorlásu I g G g l o b u l i n t , a 2. frakciókeverék non

a g y o r s e l e k t r o f o r e t i k u s vándorlásu I g G g l o b u l i -

és a z I g M g l o b u l i n o n

talmazott,

kivül a l f a -

a 3. frakciókeverék

és béta-globulinokat

pedig

albuminból és

tar­

alfa-globu-

linokból állt.

Ellenanyagokat giai

az 1 . és 2. frakciókeverékben

állatokból származó vérsavók ban

kalmazott nyert

időpont­

ellenanyag-aktivitást

tel­

t a r t a l m a z t a . A reinfekció u-

tán v e t t vérsavók vizsgálatakor e z z e l rékben i s k i l e h e t e t t

fertőzött

esetében m i n d e n vizsgált

a frakcionálás során v i s s z a n y e r t

j e s egéezében az 1 . frakciókeverék

ben,

l e h e t e t t szeroló-

módszerekkel k i m u t a t n i / 2 . táblázat/. Az e g y s z e r

szemben a 2. frakciókeve­

ellenanyagokat mutatni

szerológiai módszerrel. E vérsavók

ellenanyag-aktivitás 7 0 - 8 0 %-a v o l t

m i n d a három a l ­ esetében a

vissza­

az 1 . frakciókeverék­

a m e l y kizárólag I g G g l o b u l i n t t a r t a l m a z o t t . Az 1 . frakció­

keverékben levő

ellenanyagok

rezisztensek

voltak

a

2-ME-keze-

léssel s z e m b e n . A 2. frakciókeverék ellenanyaghatását v i s z o n t 2-ME-kezelés

A vérsavók

lényegesen

frakcionálása DEAE-Sephadex

anioncserélő

A-50

kromatográfiával

E z z e l a módszerrel 5. és 6. ábra

a

csökkentette.

végzett e g y - e g y

szemlélteti.

frakcionálás

A vérsavók eluciós

eredményét görbéjén

az

négy

csúcsot l e h e t e t t megkülönböztetni.Az I g G g l o b u l i n a t e l j e s e l u -

25

20

15

FRAKCIÓK

T

10

5

0

SZAMA

3. ábra Ta e n i a- és C y s t i c e r c u s p i s i formis-antiqének e l l e n ható a n t i t e s ­ t e k e t tartalmazó nyulvérsavók preparativ zónaelektro forézise agargélben Felső d i a g r a m : A fertőzés után a 4 0 . n a p o n v e t t vérsavóminta. / H A - t i t e r 1:256/. Középső d i a g r a m : A reinfekciót követő 4 0 . napon v e t t vérsavó­ m i n t a / H A - t i t e r 1:2 0 4 8 / . Alsó d i a g r a m : A n t i - T p h i p e r i m m u n nyulvérsavó / H A - t i t e r 1 : 1 6 3 8 4 / - - - -

fehérjeeloszlás HA-titer

P r e p a r a t i v e zone electrophoresis i n agar g e l o f r a b b i t serum c o n t a i n i n g a n t i b o d i e s t o T a e n i a and C y s t i c e r c u s p i s i f o r m i s an­ tigens . T o p : serum c o l l e c t e d on d a y 4 0 o f p r i m a r y i n f e c t i o n /HA titre: 1:256/. M i d d l e : serum c o l l e c t e d 40 d a y s a f t e r r e i n f e c t i o n /HA t i t r e : 1 : 2 048/. B o t t o m : a n t i - T p h y p e r i m m u n e r a b b i t serum /HA t i t r e : l i : 1 6 3 8 4 / .

4. ábra A p r e p a r a t i v agargél-zónaelektroforézissel szeparált hé r j e - f rakciók i m m u n e l e k t .~of orézises a n a l i z i s e .

serumfe-

1 . T e l j e s vérsavó; 2, 3. és 4. a szeparált 1 . , 2., i l l e t v e 3. frakciókeverék. A precipitációs i v e k e t p o l i s p e c i f i k u s a n t i - n y u l kecskeimmunsavóval /A/ és a n t i - n y u l I g G és I g M immunsavóval /B/ h i v t u k elő. Fig.

4.

I m m u n o e l e c t r o p h o r e t i c a n a l y s i s o f serum p r o t e i n f r a c t i o n s s e p a ­ r a t e d by p r e p a r a t i v e zone e l e c t r o p h o r e s i s i n agar g e l 1 . w h o l e s e r u m ; 2, 3 and 4. s e p a r a t e d f r a c t i o n s 1 , 2 a n d 3 r e ­ spectively. P r e c i p i t i n bands d e v e l o p e d w i t h g o a t a n t i s e r u m t o r a b b i t whole serum /A/ and w i t h a n t i - r a b b i t I g G + I g M immune serum /B/.

5, ábra C. p i s i f o r m i s s z a l fertőzött n y u l a k vérsavójának frakcionálása ioncserélő' oszlóp-kromatográ fiával DEAE-Sephadex A-50 anion­ cseré lőn . G r a f i k o n : az első fertőzést követő 3 0 . napon v e t t vérsavóminta / H A - t i t e r 1:256/ o s z l o p - k r o m a t o g r a m j a . Az e g y e s frakciók H A - t i terét az o s z l o p o k tüntetik f e l . fehérjeeloszlás Immunelektroforézis: a l y u k a k számozása a frakciók számát jelö­ l i . A precipitációs i v e k e t p o l i s p e c i f i k u s ; a n t i - n y u l kecskeim­ munsavóval /A/ és a n t i - n y u l I g G és I g M immunsavóval /B/ hivtuk elő . 1

F r a c t i o n a t i o n o f serum f r o m r a b b i t s i n f e c t e d w i t h C . p i s i f o r m i s by a n i o n e x c h a n g e c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y on DEAE-Sephadex A - 5 0 . G r a p h : C o l u m n c h r o m a t o g r a m s h o w i n g d i s t r i b u t i o n o f HA a n t i b o d i ­ es i n a s e r u m s a m p l e /HA t i t r e 1 : 2 5 6 / c o l l e c t e d on d a y 30 o f p r i m a r y i n f e c t i o n . The HA t i t e r s o f t h e f r a c t i o n s a r e r e p r e s e n ­ t e d by t h e b a r g r a p h s . protein distribution I m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s : w e l l numbers i n d i c a t e f r a c t i o n numbers. P r e c i p i t i n bands d e v e l o p e d w i t h g o a t a n t i s e r u m t o r a b b i t whole serum /A/ a n d a n t i - r a b b i t I g G a n d I g M immune serum /B/.

6. ábra C. p i s i f o r m i s s z a l fertőzött n y u l a k vérsavójának szeparálása i o n ­ cserélő o s z l o p - k roma tográ fiával DEAE-Sephadex A-50 anioncseré­ lőn. G r a f i k o n : a ráfertőzést követő 3 0 . napon v e t t vérsavóminta /HAt i t e r 1 : 2 0 4 8 / o s z l o p - k r o m a t o g r a m j a . . Az e g y e s frakciók HA-titerét az o s z l o p o k tüntetik f e l . 1

fehérjeeloszlás

Immunelektroforézis: a l y u k a k számozása a frakciók számát jelö­ l i . A precipitációs v o n a l a k a t p o l i s p e c i f i k u s a n t i = n y u l kecske­ immunsavóval /A/ és a n t i - n y u l I g G és I g M immunsavóval /B/ hiv­ t u k elő. Fig.

6.

F r a c t i o n a t i o n o f serum f r o m r a b b i t s i n f e c t e d w i t h C. p i s i f o r m i s by a n i o n e x c h a n g e c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y on D E A E - S e p h a d e x A - 5 0 • G r a p h : C o l u m n c h r o m a t o g r a m s h o w i n g d i s t r i b u t i o n o f HA a n t i b o d i ­ es i n a serum s a m p l e /HA t i t r e 1 : 2 0 4 8 / c o l l e c t e d 30 d a y s after r e i n f e c t i o n . The HA t i t e r s a r e r e p r e s e n t e d b y the bar graphs. •

protein distribution

I m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s : w e l l numbers i n d i c a t e f r a c t i o n numbers. P r e c i p i t i n bands d e v e l o p e d w i t h g o a t a n t i s e r u m t o r a b b i t whole serum /A/ a n d a n t i - r a b b i t I g G + I g M immune serum /B/.

7. ábra T a e n i a - és C y s t i ce r e u s p i s i f o r m i s ~ a n t i g e nékkel mesterségesen i m ­ munizált n y u l a k vé'rsa'vó jábó'l képzett antigén-ellenanyag k o m p l e ­ xek e l l e n k a k a s o k b a n t e r m e l t immunsavók immunelektroforétikus analizise. K e v e r t normál nyulvérsavó e l e k t r o f o r e t i k u s szétválasztása után a csatornákba t e l j e s nyulsavó e l l e n ható kecskeimmunsavót /A/, a TpK, CpK és CpSE segítségével képzett antigén-ellenanyag p r e cipitátum e l l e n t e r m e l t kakasimmunsavót / D / , i l l e t v e c s a k a CpSE segítségével képzett antigén-ellenanyag precipitátum e l l e n h a ­ tó kakasimmunsavót^ /E/ töltöttünk. Fig.

7.

Immunoelectrophoretic a n a l y s i s o f immune c o c k s e r a t o a n t i g e n a n t i b o d y c o m p l e x e s made f r o m serum o f r a b b i t s a r t i f i c i a l l y im­ m u n i z e d w i t h T a e n i a and C y s t i c e r c u s p i s i f o r m i s a n t i g e n s . After e l e c t r o p h o r e t i c s e p a r a t i o n o f pooled normal r a b b i t serum t h e t r o u g h s were f i l l e d w i t h g o a t a n t i s e r u m t o r a b b i t whole serum /A/, w i t h c o c k a n t i s e r u m t o a n t i g e n - a n t i b o d y p r e c i p i t a t e s made w i t h TpE, CpE a n d CpSE /D/, a n d w i t h a c o c k a n t i s e r u m t o a n t i ­ g e n - a n t i b o d y p r e c i p i t a t e s made w i t h o n l y CpSE /E/.

8. ábra C y s t i c e r c u s p i s i f o r m i s s z a l fertőzött n y u l a k vérsavójából előál­ lított antigén-ellenanyag k o m p l e x e k ellen kakasokban termelt immunsavók i m m u n e l e k t r o f o r e t i k u s a n a l i z i s e . K e v e r t normál nyulvérsavó elektroforézise után a csatornákba a következő immunsavókat töltöttük. A TpK, CpK és CpSE segítségé­ v e l a fertőzés után a 3 0 . n a p o n , i l l e t v e a ráfertőzést követő 4 0 . napon n y e r t vérsavómintákból előállitott antigén-ellenanyag precipitátumok e l l e n . t e r m e l t kakasimmunsavók / I , i l l . H/.Csupán a CpSE segítségével a fertőzés után a 3 0 . n a p o n , i l l e t v e a rá­ fertőzést követő 4 0 . napon v e t t vérsavómintákból képzett anti­ gén-ellenanyag precipitátumok e l l e n t e r m e l t kakasimmunsavók /G, i l l e t v e F/. 1

Fig.

8.

I m m u n e l e c t r o p h o r e t i c a n a l y s i s o f immune c o c k sera t o a n t i g e n a n t i b o d y c o m p l e x e s made f r o m serum o f r a b b i t s infected with Cysticercus p i s i f o r m i s . i

A f t e r e l e c t r o p h o r e s i s o f p o o l e d n o r m a l r a b b i t serum t h e t r o u g h s were f i l l e d w i t h cock a n t i s e r a t o a n t i g e n - a n t i b o d y p r e c i p i t a t e s made w i t h TpE, CpE a n d CpSE f r o m serum p o o l s o b t a i n e d 30 d a y s a f t e r t h e p r i m a r y i n f e c t i o n / I / a n d 40 d a y s after reinfection /H/, a n d w i t h c o c k a n t i s e r u m t o a n t i g e n — a n t i b o d y precipitates made w i t h o n l y t h e CpSE f r o m serum p o o l s o b t a i n e d on d a y 30 o f t h e p r i m a r y i n f e c t i o n /G/ a n d 4 0 d a y s a f t e r t h e r e i n f e c t i o n / F / ,

ciós térfogat 9 0 - 9 5 %-ában j e l e n

volt,

az I g M g l o b u l i n p e d i g

eluciós térfogat 58 %-a és 9 4 % - a között f o g l a l t

A vérsavókat kus

négy frakcióra szeparáltuk. Az immunelektroforéti-

analizisek szerint

IgG-ből á l l t . az

Ez a frakció t a r t a l m a z t a a

vándorlásu

IgG-t

összes I g M g l o b u l i n t lalt

magába.

tisztán

serum I g G zömét, ami

IgG g l o b u l i n t

t a r t a l m a z o t t , A 3, frakció albuminból,

és béta-globulinokból állt,

retikus

frakció

eluálódott, A 2 , frakció a z e-

luciós görbe második csúcsában eluálódott ta-globulinokat

1,

/ 5 . és 6, ábra/ a z

eluciós görbe első csúcsában

alfa-

az

helyet,

s ezenkivül g y o r s

és b é valamint

elektrofo-

i s t a r t a l m a z o t t . A 4. frakció p e d i g

és e m e l l e t t s o k más

se r u m k o m p o n e n s t

Ez a frakció i s s z e n n y e z e t t

volt

gyors

az fog­

vándorlásu

IgG-vei.

A szerológiai vizsgálatok eredményét a 3. táblázat tünteti f e l . Az e g y s z e r

fertőzött

frakcionálás részét a z tiv

reakciók

vérsavók

esetében a

ellenanyag-aktivitás

3-7 %-át t e t t e

k i .

teljes

talált

ellen­ csupán

szerológiai

esetben

sem

módszerek egyikével sem e l ­

kimutatni.

teljes

ujrafertőzés

után

levett

hemagglutinin-aktivitás

magába foglaló

a szennyezésként j e l e n zált m o n o s p e c i f i k u m

levő I g G - t

anti-IgG

frakcióban l e h e t e t t

kimutatni.

inszolubili-

adszorbeáltuk AVRA-

P r e c i p i t i n e k e t csak az 1 .

Agargéldiffuziós-precipitációs

próbában e z a frakció u g y a n o l y a n precipitációs v o n a l a t alakitott

s ezenkivül

tátumot h o z o t t

az IgM

n o h a e frakcióból

glutáraldehiddel

immunsavóval

vérsavókban a

10-15 %-a

4. frakcióban v o l t ,

MEAS és TERNYNCH / 3 / leirása s z e r i n t .

vó,

pozi-

antitest-hatásnak

A 3. és 4. frakcióban e g y e t l e n

E z z e l ellentétben az visszanyert

Ebben a frakcióban

a visszanyert

az a l k a l m a z o t t

lenanyagokat

nalakat

túlnyomó

az< eluciós görbe második csúcsában eluálódott I g G tulajdonithatók.

anyag-aktivitás

globulint

származó

visszanyert

1 . frakció t a r t a l m a z t a . A 2. frakcióval k a p o t t

globulinnak

tudtunk

nyulakból

során

k i a CpK-val szemben, m i n t a z élő c y s t i c e r c u s o k k a l

vagy v o ­

a z e r e d e t i vérsa­

i skifejezett

precipi­

létre. A 4. frakció sem a z agargéldiffuziós-pre­

cipitációs, sem a lá rvaprecipitációs próbával nem a d o t t

pozitiv

2. táblázat Table 2.

P r e p a r a t i v agargél-zónaelektroforézissel szeparált serumfehérjefrakciókkal végzett szerológiai próbák eredménye R e s u l t s of s e r o l o g i c a l t e s t s w i t h serum p r o t e i n f r a c t i o n s sepa­ r a t e d by p r e p a r a t i v e zone e l e c t r o p h o r e s i s i n agar

Napok (Days a f t e r ) p r i m e r szekunder (pri­ (seconda­ mary; ry) fertőz és utána (infe ction)

20 30

pr ec. t i t e :r ( t i t i •e)

40 Magyarázat :

+

HA-

prec. t i t er ( t i tre )

lppt*

2 4

+

320

32 32

128 64

16 4

+ + +

256 512 512

32

+

64 64

+ +

96 256

20 30

+

HA-

32

40 60 80 100

2. f :rakcióke verek (P r a c t i o n 2)

1. f r a k e i ókeve rék (Prac i t i o n l )

+

+

0 0 0 0 0 0

0 0 0

196 192 128

8 16

0 0 0

32

3. í'rakciókev erek 0f r a c t i o n 3 ) +

HAlppt*

prec. titc- sr ( t i t ] re )

-

+ + +

lppt*

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0

0 0

0 0 0

0

agargéldiffuziós-precipitációs próbával végzett titrálással meghatározva ff

y

i n v i t r o lárvaprecipitáció: + p o z i t i v , - n e g a t i v reakció +

E x p l a n a t i o n : d e t e r m i n e d by t i t r a t i o n i n agar g e l d i f f u s i o n p r e c i p i t i n t e s t i n v i t r o l a r v a l p r e c i p i t i n t e s t : + p o s i t i v e , - negative r e a c t i o n s

--

-0 0 0

reakciót. Az 1 . frakcióban k i m u t a t o t t voltak

a 2-ME-kezeléssel

vitását v i s z o n t

ellenanyagok, reziszteneek

s z e m b e n , a 4. frakció

a 2-ME-kezelés

teljesen

ellenanyag-akti­

megszüntette / 4 . táblá­

zat/.

Az e l l e n a n y a g o k

2-merkaptoetanol-érzékenysége

A vérsavók ellenanyag-aktivitását ME-kezelés előtt és után.

IHA-próbával vizsgáltuk

A 2-ME-kezelt

és a

által a d o t t H A - t i t e r e k e t összehasonlító 5. táblázatból hogy a p r i m e r

fertőzés után v e t t

vérsavók HA-titerét

zelés c s a k minimálisan változtatta meg.

Ezzel

fertőzés után l e v e t t vérsavók által a d o t t kezelés következetesen

2-3 kitevővel

a 2-

kontrollvérsavók kitűnik,

a 2-ME-ke­

szemben a z u j r a -

HA-titereket a

2-ME-

redukálta a k o n t r o l l o k h o z

viszonyi tva.

Az antigén-antitest immunsavók

komplexek

ellen

A különböző antigén-ellenanyag reprezentáns zisek

komplexek

ellen

termelt

eredményeit a 7. és 8. ábra szemlélteti.

c s a k az i m m u n g l o b u l i n o k a t egyetlen

immunsavó sem

excretum"

antigénjeinek

gén-antitest

komplexek

precipitációs ivét

antiserumok

precipitálták,

reagált.

/CpSE/ felhasználásával ellen

termelt

alakitották

vérsavójából tigén-antitest

v a g y akár a

készitettük, a mesterségesen

képződtek, a m e l y e k

az

az immunelektroforézis előállitása a p r i m e r vett

vérsavókból nyulak

s z e m b e n , a m i k o r az a n ­

a TpK, CpK és CpSE segítségével

immunizált

zött állatok vérsavójából előállitott tiserumok

és

anti­

kizárólag

mesterségesen immunizált

/ 7 , ábra E/ történt. E z z e l precipitátumokat

"secretum

képzett

immunsavók

k i

vizsgálatok

a nyulvérsavóból

A cysticercusok

után v a g y a s z e k u n d e r fertőzés után

/ 8 . ábra G és F/,

E

más se r u m k o m p o n e n s s e l

során, függetlenül a t t ó l , h o g y a k o m p l e x e k fertőzés

egy-egy

immunsavóval végzett i m m u n e l e k t r o f o r e t i k u s analí­

kiderítették, h o g y az a n t i - k o m p l e x

IgG

ható

analizise

nyulak

komplexek

az I g G g l o b u l i n

és az ujrafertőellen

o l y a n an­

ivén kivül még e g y

3. táblázat T a b l e 3.

A nyulvérsavókból DEAE-Sephadex A-50 anioncserélő kromatográfiával parált frakciók ellenanyag-aktivitása Antibody

primer (pri­ mary ;

a c t i v i t y o f p r o t e i n f r a c t i o n s s e p a r a t e d f r o m r a b b i t serum by a n i o n exchange c h r o m a t o g r a p h y on DEAE-Sephadex A-50

].. f r a k c i 6 (F r a c t i o r

Napol c a ( D a y s ii f t e r ) szekunder (seconda­ ry)

után fertői'jée (infíse t i o n )

14 20

HA-

30

40 60 80 100

2.

HAi 1)

_

0

lppt* + + + + + +

2 8 16

10 20

12 8 128 64 128 192

8 2 16 24

30

256

32

+ + +

40

512

64 •

+

32

f r a k c :.6

3. f r a k c ió 'Fraction 3)

(F r a c t i o n 2)

prec.+

t i t er ( t i t re )

16 32 256 256

sze­

+

t i t er ( t i t re )

0

0

0 4 16 8 4 0 8 16 16 16

0 0 2 0 0 0 0 0 0 2

+

HA-

prec.

lppt

prec. t i t er ( t i t re )

Ä

_

0 0 0 0 0 0 0 0

-

-_ -

_ -

32 32

-

64

-

Ippt*

0 0 0 Ó 0 0 0 0' 0 0 0

_

— -

-_

-

+

Magyarázat : agargéldiffuziós-precipitációs próbával végzett titrálással meghatározva (Explana( d e t e r m i n e d by t i t r a t i o n i n a g a r g e l d i f f u s i o n p r e c i p i t i n test) tion)

Ä i

n

y i t r o lárvaprecipitációs próba: + p o z i t i v ,

(in

vitro larval

precipitin

test:

+ positive,

°anti-nyul I g G immunsavóval abszorbeált serum)

- negativ

reakció

- negative

(absorbed

with

reaction)

anti-rabbit

I g G immune

további precipitációs i v e t linnak

felelt

meg

fertőzöttségből származó képzett k o m p l e x e k e l l e n globulint

i skialakitottak,

/ 7 . ábra D, 8. ábra H/. vérsavókból termelt

e z e k k e l az

antiserumok

antigénekkel

szintén c s a k a z I g G

precipitálták / 8 . ábra I / .

Az I g G és I g M g l o b u l i n o k a t

egyaránt

precipitálo

antiserumokból a z I g G e l l e n e s a n t i t e s t e k e t szolubilizált

tiszta

nyul-serum

savók továbbra i s megtartották bulinnal. lex

a m i az I g M g l o b u Ugyanakkor a primer

A

tisztitott

immunsavók v i s z o n t

IgG-vel

anti-komplex

glutáraldehiddel i n -

abszorbeálva, az immun­

reagáló képességüket a z I g M g l o -

IgM g l o b u l i n n a l

nem mutatták

abszorbeált

anti-komp­

k i e z t a komponenst.

Megbeszélés Az e l l e n a n y a g o k

dinamikája a p r i m e r és s z e k u n d e r

C. pisiformis-fertőzöttség

során

A T. pisiformis-oncosphaerák alakuló igen

inváziójával szemben n y u l a k b a n k i ­

ellenanyagválasz sajátosságaira

vonatkozó i s m e r e t e i n k

hiányosak. E z i d e i g csupán SUL'C és ISZMAGILOVA / 7 7 / közölt

a fertőzés lefolyása során képződő humorális e l l e n a n y a g o k nyiségi változásairól a d a t o k a t . nek k i t e t t

nyulakon

végzett kísérletekben

hez CAMPBELL /13/-féle letve

szerzők tattak

tisztitott

gyürüs-precipitációs

leirása s z e r i n t

Különböző erősségű

készitett

meny-

fertőzések­

IHA-próbával, a m e l y ­

poliszacharid-antigént, i l ­

próbával,

amelyhez

TRAWINSKI / 8 4 /

lárvakivonat-antigént

e l l e n a n y a g o k a t már néhány n a p p a l

használtak, e

a fertőzés után

kimu­

a vérsavókban. A precipitációs próba már a második

napon

pozitiv

volt,

esetenként

reakció dinamikája követett.

gyengültek

10-30. n a p j a

Mindkét

szerológiai

n a g y o n hasonló

nélkül

reakciók

mintát

fordultak

reakciók, ettől k e z d v e a reakciók

Tekintet

szerológiai

során hasonló között

és a fertőzés utáni 6 0 - 9 0 . n a p r a

tivvá váltak. sokra, a

a fertőzés lefolyása

A fertőzöttség

legki fejezettebb

7

1:10 t i t e r b e n .

elő a

fokozatosan

r e n d s z e r i n t nega-

a fertőzésre használt petedózi­ dinamikája a z

lefolyást m u t a t o t t ,

a maximális

egyes

állatoknál

titerek

azonban

4. táblázat Table 4.

A fertőzött n y u l a k vérsavójából anioncserélő krómatográfiával szeparált 1. és 4. frakció hemagglutinációs t i t e r e a merkaptoetanol-kezelé s után H a e m a g g l u t i n a t i o n t i t r e s o f c h r o m a t o g r a p h i c f r a c t i o n s 1 and 4 o f serum from i n f e c t e d r a b b i t s a f t e r treatment w i t h mercaptoethanol

Napok a ráfertozés után (Days a f t e r i n f e c ­ tion )

10

20^

30

40

1. Kontroll (Control)

f r a k c i ó (Fraction l ) ME-kezelt (ME-treated)

4.

f r a k c i ó (Fraction 4 ) Ä

Kontroll (Control)

128 192 256

128 160 256

0 4

0 0 0

128 128 256

128 128 256

12 16 24

0 0 0

256

256

32

320 384

320 320

48 64

0 0 0

512 640 640

512 640 512

64 64 80

0 0 0

m o n o s p e c i f i k u s a n t i - n y u l IgG immunsavóval abszorbeált (absorbed w i t h a n t i - r a b b i t IgG immune serum)

0

ME-kezelt (ME-treated)

Ä

a precipitációs mint

az

próba esetében

IHA-próbával k a p o t t

összefüggést

sem

tudtak

lényegesen m a g a s a b b a k

titerek.

Vizsgálataikban

megállapítani a

gok

titere,

v a l a m i n t kimutathatóságuk

rafertőzések

dózissal,

csak

rendszerint

hamar

az e l l e n a n y a ­

átmeneti

a m i a z o n b a n egyáltalán nem v o l t

követő 6 0 - 9 0 . n a p r a mindkét

peteadagok

időtartama között. Az u j -

a reakciók intenzitásában

idéztek elő,

semmiféle

fertőző

nagysága és az e l l e n a n y a g o k megjelenésének i d e j e ,

voltak,

eltűnt,

erősödést

arányos a fertőző

és a s z e k u n d e r

fertőzést

reakció éppúgy negativvá vált, m i n t

a p r i m e r fertőzés után.

Az agargéldiffuziós-precipitációs ellenanyagok zölt

és a z IHA-próbával

dinamikájára vonatkozóan

vizsgálataink

eredményei

agglutininek vókban,

a fertőzöttség

ket v i s z o n t setben

sem

jelentek

valamennyi

tartalmazott

nyul

halvány precipitációs v o n a l a t ,

kimu­

Precipitine­

tációs sávok a 3 0 - 6 0 .

Tizenöt-husz nap múlva i s c s a k k i ,

többnyire

a 3 0 . naptól k e z d v e

nap között

gyengültek, de

e-

agargéldiffuziós-precipitáció-

m i n d e n n y u l vérsavója précipitait.

ja

a vérsa­

vérsavója

HA-antitesteket.

az állatok e g y részének vérsavója a l a k i t o t t

/az

meg

a hem-

a fertőzés utáni 1 1 - 1 4 . napnál korábban e g y e t l e n t u d t u n k a vérsavókban

v a l CpK segítségével k i m u t a t n i .

fokozatosan

ellentmondanak

megállapításainak.Igy

első hetében

és a 7. naptól k e z d v e

tatható mennyiségben

e b b e n a d o l g o z a t b a n kö­

több t e k i n t e t b e n

SUL'C és ISZMAGILOVA / 7 7 / e m i i t e t t

kimutatott

A legki fejezettebb fordultak

elő.

még 100 n a p p a l a

igen

viszont

már

precipi­

E z t követően

fertőzés után i s

utolsó vizsgált időpontban/ m i n d e n kisérleti állat vérsavó­ precipitációt

erősségében

hozott

létre agargélben. A precipitációs

a fertőzés

párhuzamos v o l t titerü vérsavók

különböző időszakában

a vérsavók

észlelt

sávok

eltérés

precipitin-titerével : a l e g m a g a s a b b

alakították

k i

a legmarkánsabb

precipitációs

sávokat, és m e g f o r d i t v a .

A h e m a g g l u t i n i n e k és a

precipitinek

átlagos éllenanyagtiterek

görbéinek

fertőzés lefolyása során m i n d zött állatcsoportban minden esetben

mennyiségének lefutása

az e g y s z e r , m i n d

hasonló v o l t ,

m i n t e g y 3-5 kitevővel

alakulása a z

tekintetében

a

a kétszer fertő­

a p r e c i p i t i n - t i ter alacsonyabb

volt,

azonban mint a

5. táblázat Table 5.

Napot: a (Days Êi f t e r ) p r i m e r szekunder (pri(seconda­ mary) ry) fertőd és után (infec,tion

Az állatok száma N° of a n i ­ mal s

7

10

14

12 10

20 30

14

40 60 80

15 13 10 10

100

10 20 30 40

x

A merkaptoetanol-kezélés hatása a p r i m e r és szekunder fertőzés után v e t t nyulvérsavók hemagglutinációs titerére E f f e c t of m e r c a p t o e t h a n o l t r e a t m e n t o f h a e m a g g l u t i n a t i o n t i t r e s o f whole r a b b i t sera o b t a i n e d a f t e r p r i m a r y and secondary i n f e c t i o n

15 15 15 15

Átlag HA-iïiter ( - l o g g ) az ME--kezelés (mean HA t :. t r e / - l o g / ) ME-tríîatment után előtt (bef ore) (after) 2

2,7 3,6

5,4 7,2 8,6 8,7 8,1 7,7 9,1

10,4 11,3 11,9

ME-érzékenység

x

(ME-sensitivity)

Ä

0,2

2,5 3,2 5,1 7,0 8.3 8,6 7,7 7,5

0,3 0,2. 0,3 0,1

7,2 8,0

1,9

8,4

2,9 3,1

8,8

az ME-kezelés előtt és után k a p o t t átlagtiterek különbsége ( d i f f e r e n c e s between mean HA t i t r e b e f o r e and a f t e r ME-treatment)

0,4

0,4 0,2

2,4

HA-titer. A precipitin-

és a H A - t i t e r e k nagyságában észlelt kü­

lönbségeket és a z t a megfigyelésünket, h o g y az IHA-próbával jó­ val

korábban,

tatni

már az első héten k i l e h e t e t t

a vérsavókban,

érzékenysége

ellenanyagokat

magyarázza.

Az e g y s z e r i fertőzés után az átlagos e l l e n a n y a g t i t e r r a jellemző v o l t ,

alakulásá­

h o g y a fertőzöttség második hetétől k e z d v e a

vérsavók e l l e n a n y a g - t a r t a l m a f o k o z a t o s a n

emelkedett,

és a m a x i ­

mumot a 4 0 - 7 0 . nap között érte e l . Ebben az időszakban tak

elő a l e g m a g a s a b b

ellenanyagtiterek,

10 mg/ml fehérjetartalmú CpK

ban a d t a k

pedig

teljes

esetében

használt

1:128-as higitását, az

a vérsavók maximálisan az 1 : 1 0 2 4 - e s higitás-

hemagglutinációt.

az e l l e n a n y a g t i t e r tin-titer

törzsoldat

fordul­

a m e l y e k a precipitáci­

ós próba esetében s o h a nem haladták meg az antigénként

IHA-próbában

mu­

a két szerológiai próba jól i s m e r t eltérő

A fertőzöttség 7 0 . napjától

csökkenni k e z d e t t , a m i volt

különösen a

n a g y o n határozott,

precipi­

a z o n b a n még a 1 0 0 .

napon i s m i n d e n n y u l vérsavója mindkét szerológiai próbával k i ­ mutatható mennyiségben anyagok

tartalmazott

ellenanyagokat.

titerének a 9-10.héttől bekövetkező

csökkenése

tően a c y s t i c e r c u s o k fejlődésével áll s z o r o s mint

ellen­

feltehe­

összefüggésben, a-

a z t az előző közleményünkben kifejtettük / 5 4 / .

Az ujrafertőzött

nyulak

vérsavójával k a p o t t eredmények

SUL'C és ISZMAGILOVA / 7 7 / megállapításaival telműen a r r a támadása

következtethettünk,

nyomán a n y u l a k b a n

lés i n d u l meg,

fokozott

a vérsavókban,

nappal

és a

Az ujrafertőzésre

átlagos

tanúsága s z e r i n t

antigénkomponens e l l e n

jelentkező

mennyisége

legutolsó vizsgált

értéket ért e l , m i n t

észlelt maximális átlagtiter.

csak e g y s z e r

ellenanyag-terme­

az e l l e n a n y a g o k

a reinfekció után/ az

n y e g e s e n magasabb lízisek

mértékű

egyér­

ismételt

a m i nyilván a reinfekció szolgáltatta u j a b b a n -

"másodlagos immunválasz" során emelkedett

alapján

ellentétben

h o g y a z oncosphaerák

tigénstimulusra vezethető v i s s z a .

/40.

Az

időpontban

ellenanyagtiter

a primer

ható e l l e n a n y a g o k a t

fertőzött á l l a t o k é .

nyulak

lé­

fertőzés után

Ezenkivül az immundiffúziós

az ujrafertőzött

újra

vérsavója

ana­ több

t a r t a l m a z o t t , mint a

Az e l l e n a n y a g o k

dinamikáját illetően SUL'C és

megállapításai

és a saját

n a g y a z eltérés, a m i eltérő e g y e d i

az a l k a l m a z o t t

a felhasznált

lényegesen

peteanyag

szerint

első­

szerológiai módszerek eltérő érzékenysé­ az eltérő antigénpreparátumok

a

vérsavók

használatá­

korától és a

fertőzések számától

vezethető v i s s z a , latokban, zett

amint

és t e l e p e d e t t

cus-populációk

mellett

elsősorban

h o g y a fertőzések eredményeként a z t a p r i m e r fertőzést

követő 1 0 0 . napon

különböző számú élősködő

nyilván eltérő mennyiségű kvantitative

arra

az e g y e s á l ­

meg. A különböző számú egyedből álló

produkálhattak, ami v i s z o n t

vég­

fejlődött Cysticer-

antigénhatásu

anyagot

eltérő e l l e n a n y a g

ter­

vérsavók C p K - v a l

mint

vezetett.

A fertőzések után különböző antigénnel elvégzett

időben v e t t

agargéldiffúziós

analízisének

alapján a z a következtetés vonható l e , h o g y a T. cosphaerák inváziója káli

nyulanként fertőzöttség

függően erősen változott, a m i

reagálóképessége

boncolás k i d e r i t e t t e ,

melődésére

ellenanyag-aktivitása

eltért, sőt a z o n o s állat esetében i s a

a n y u l a k eltérő e g y e d i

nyulakban

eredményei

pisiformis-on-

k o m p l e x ellenanyagválaszt

indu-

a m i megerősiti korábbi megfigyeléseinket / 5 3 , 5 4 / és össz­

h a n g b a n v a n más állapításokkal fertőzött ellen

féregfertőzöttségek /lásd

ható a n t i t e s t

tőzött n y u l a k

esetében

fordul

minimum

szemben az

tény, h o g y a

négy

esetek

A

antigénkomponens

reagált, e m e l l e t t az

az e g y s z e r

leg­ fer­

agargéldiffuziós-precipitációs

próbában maximálisan két, a reinfekciót ezzel

hasonló meg­

elő. V a l a m e n n y i állat vérsavója

vérsavójában

négy antigén-ellenanyag

tett

p l . 6,31,32,33,34,35,42,50,73,88,89/.

állatok vérsavójában

alább e g y antigénkomponenssel

kal

igen

állatok

keresendő.

Vizsgálatainkban

ki

láthatóan

a kisérleti

Ennek o k a m i n d e n valószinüség

gében, de legfőképpen ban

ISZMAGILOVA / 7 7 /

között

nem magyarázható meg

reagálóképességével és

különbözőségével. sorban

észleleteink

követően v e t t

többségében három,

rendszert

sikerült

vérsavók­

maximum

kimutatni.

pedig Az

a

fertőzés különböző stádiumaiban a vérsavókban e l ­

térő számú antigénösszetevővel

reagáló e l l e n a n y a g o k

fordultak

elő, és h o g y a z ujrafertőzött állatok szélesebb ellen vel

ható a n t i t e s t e k e t

összefüggésben

antigénspektrum

produkáltak, a c y s t i c e r c u s o k

levő k v a l i t a t i v

fejlődésé­

antigénkülönbségekre

utal­

h a t . Lehetséges u g y a n i s , h o g y az e g y s z e r fertőzött állatok vér­ savójában k i nem m u t a t o t t indításáért

lán nem képződnek, előző

hanem

lehetséges a z o n b a n ,

annak

bizonyos

elpusztuló

v a n szó, a m e n n y i b e n zés folyamán i s

a primer

h o g y pusztán k v a n t i t a t i v

ugyan,

jabb

bizonyítékokkal. vizsgálatokat

Végleges

különbségekről a primer

de mennyiségük

fertő­

alatta

marad

termelődésének

kiváltásához

c s a k a reinfekcióból származó u -

rendelkezünk

tisztázásuk még

s e m m i l y e n közvetlen további

részletes

igényel.

Az i m m u n g l o b u l i n o k

és az e l l e n a n y a g o k

s z e k u n d e r C. pisiformis-fertőzöttség

A nyulakban j e l e n l e g és I g A i s m e r t ,

három

a p r i m e r és esetén

immunglobulin-osztály, az I g G ,

a m e l y e k a nehéz polipeptid-láncaik

ezáltal antigén-differenciái

tattak

/2,15,57,58,59,63,

Általában a z t tartják, válaszként

a nyulak

globulin-osztályba szituációk

szerkezeti

anyagok

kimu­

66/86/.

hogy a p r i m e r

antigénstimulusra

bármelyik antigén e l l e n

m i n d a három

adott immun­

termelhetnek,

de az a-

speciális körülményeitől

függően e g y i k

v a g y má­

dominál

elsősorban

dése j e l l e m z i ,

és

tartozó a n t i t e s t e k e t

ellenanyag-tipus

immunválaszt

IgM

alapján különíthetők e l / 1 6 , 1 8 , 1 9 ,

7 4 / . E l l e n a n y a g o k a t m i n d a három immunglobulin-osztályban

sik

Az

antigénstimulussal érjük e l . M i n d e z e k r e a kérdésekre v o ­

natkozóan a z o n b a n egyelőre nem

dott

tett

agargéldiffuziós-precipitációyal

ellenanyag-mennyiség

szükséges. E z t a küszöbértéket

és a meg­

szabadulnak f e l .

e z e k az antigénkomponensek

képződnek

meg­

fokú immunitásra s z e r t

parazitákból

a küszöbértéknek, a m i az

kimutatható

termelődésének

fertőzés során egyálta­

c s a k a reinfekcióval b e v i t t

fertőzés nyomán már

gazdaszervezetben is

antitest-tipusok

felelős antigének

/2,27,57,61,66,86/.

IgG t i p u s u

ellenanyagok

A másodlagos gyors

de a n a m n e s z t i k u s reakciót az I g M - és

termelő­

IgA-ellen-

képződésében i s megállapítottak / 1 , 8, 1 2 , 3 6 , 6 6 , 8 5 / .

A r r a vonatkozóan, h o g y a C. pisiformis-fertőzöttséqre munválasz folyamán

termelődő e l l e n a n y a g o k

osztályba t a r t o z n a k ,

az i r o d a l o m b a n

nincsenek

A fertőzött n y u l a k vérsavójával végzett gálataink

eredményei világosan

frakció t e l j e s

egészében

melyik

sófrakcionálásos

mutatják, h o g y

ziós-precipitációs és a lárvaprecipitációs

elveszítették

eredeti

adatok.

t a r t a l m a z z a az I H A - ,

e l l e n a n y a g o k a t . Az e u g l o b u l i n

volt

próbával

ben a szerológiai próbák kapcsolatos

A preparativ gráfiával valamint

t i tercsökkenés a

globulin-veszteségnek

t u l a j donitható.

legalábbis

módszerekkel,

lenanyagválaszt

végzett

vizsgálataink,

az e l l e n a n y a g o k

h o g y a z I g M - és

kimutatására általunk a l ­

ellenanyagválasz szá­

az I g G - e l l e n a n y a g o k

hanem szimultán megy v é g b e , sőt az

máskor v i s z o n t

és az adagjától

ellenanyag-termelés IgG-ellenanyagok

az

antigén kémiai

függően

észlelhető,

a m i t egyáltalán

képződése / 8 , 6 7 , 7 8 , 7 9 , 8 0 , 8 5 , 8 7 / .

mutatott

e l l e n a n y a g o k a t az I g G g l o b u l i n n a l

A p r i m e r fertőzöttség

su e l l e n a n y a g o k

/1,2,9,27,

természetétől,

nem

követ

l e h e t e t t azonosíta­

agargéldiffuziós-precipitációs

és a

mint

kimutathatók,

A-50 anioncserélő

az

első hetében k i ­

későbbi időszakában i s c s a k I g G

egyaránt

IgM-

Vizsgálataink

f o r d u l t a k elő, a m e l y e k r e jellemző v o l t ,

a z IHA-próbával

nem

IgG-anti-

kizárólag prolongált

során a vérsavókban legkorábban a fertőzöttség

ni.

i sbizonyitja

termelődése

az I g M tipusuaknál korábban i s m e g j e l e n h e t n e k

formájától

nem

e g y " k o r a i I g M " és e g y "késői I g G " e l ­

mos antigén esetében / 7 , 8 , 1 0 , 7 5 , 7 9 , 8 1 / . Több a d a t

60,63,68,86/;

pisi-

fertőzött n y u l a k b a n

k i m u t a t n i , ami a t i p i k u s

szekvenciálisan,

kromato-

eredményei s z e r i n t a T.

mesterségesen

kalmazott

rész­

részben p e d i g a

és az immunelektroforézissel

lehetett,

teljes

ez a z o n b a n

agargé1-elektroforézissel, az ioncserélő

formis-oncosphaerákkal

testek

teljesen

euglobulin-

módszeres hibájának,

a merkaptoetanol-kezelés

azonban,

kimutatható

kisózása után a vérsavók

u g y a n némi

vizs­

euglobulin-

az agargéldiffu­

vérsavó ellenanyag-aktivitásához viszonyítva,

kisózással

az

szerológiai aktivitásukat. Az

frakcióban észlelhető

adott im­

immunglobulin­

lárvaprecipitációs,

kromatográfia során csaknem

a

tipu­

hogy az vala­

DEAE-Sephadex

teljes

egészükben

az

eluciós görbe első csúcsát alkotó

a m e l y e k kizárólag vitásukat a primer

IgG g l o b u l i n t

redukálás és az

fertőzöttségből

sem t u d t u n k I g M t i p u s u

A szekunder tak

fertőzés

a vérsavóban,

frakciókban

jelentek

meg,

tartalmaztak; ellenanyag-akti­

alkilezés nem

változtatta meg. A

származó vérsavókban e g y i k antitesteket

után i s I g G t i p u s u

ellenanyagok

dominál­

követő 2 0 . naptól a z o n b a n

egé­

s z e n a megfigyelési idő végéig / 4 0 . nap a rá fertőzés után/

min­

den

a reinfekciót

módszerrel

kimutatni.

vizsgált vérsavóban

IgM t i p u s u

ellenanyagokat i s

sikerült

kimutatni.

Az I g M - e l l e n a n y a g o k igazolta. nek

eredményei.

2-ME-érzékenységét

2-ME-stabilitását

ellenanyagok

a két

elkülönítésére

gálataink során a

és

az I g G g l o b u l i n

alkalmas

módszernek

Az I g G és az I g M

A

selték,

tipusu

után v e t t

ellenanyagokat

ellenanyagok,

amelyek

ellenanyag-aktivitásnak

dorlásu I g G - t

i s kiderítették,

is

tást t e l j e s e n

tartalmazó

zömét képviselték, ben. 128

elkülöníteni. során képvi­

frakciókban e-

e z t az i m m u n e l e k t r o f o r e ­

gyors

elektroforétikus ván­

abszorbeáltuk.

2-ME-kezelés

megszüntette.

lódott e l l e n a n y a g o k ,

mini­ ellen­

ellenanyag-ak­

megtartották, ha az IgG-molekulákat

a n t i - I g G immunsavóval

lást követően végzett

vérsavók

a frakcionálás

i s t a r t a l m a z t a k k i s mennyiségben,

tivitásukat a k k o r specifikus

csak

mindössze 1 0 - 1 5 %-át

az anioncserélőről az I g M - e t

analizisek

Vizs­ fertő-

DEAE-Sephadex A-50 a n ­ egymástól

luálódtak. Noha e z e k a frakciók, a m i n t tikus

primer

redukálta.

kromatográfiával sikerült

2-ME-érzékeny

visszanyert

kifejezetten

tartozó

tekintik.

ellenanyag-aktivitását

málisan változtatta meg, a reinfekció anyaghatását v i s z o n t

ugyanis viszony­

immunglobulin-osztályba

2-ME-kezelés /alkilezéssel/ a

zöttségből származó vérsavók

ioncserélő

több eredménye i s

merkaptoetanol-kezelésé-

DEUTSCH és MORTON / 2 3 / vizsgálatai óta

az I g M g l o b u l i n lagos

jelenlétét vizsgálataink

E z t bizonyította a vérsavók

Ezzel

pedig

mono-

Az abszorbeá-

a szerológiai

aktivi­

ellentétben az I g G - v e l eluá­

a m e l y e k a vérsavó rezisztensek voltak

ellenanyag-aktivitásának a 2-ME-kezeléssel

szem­

Az I g M - e l l e n a n y a g o k

jelenlétét

gítségével a z ujrafertőzött

igazolták

nyulak

tigén-antitest

komplexek

redmények i s .

Az i l y e n a n t i - k o m p l e x

retikus cercus

analíziséből

ellen

ugyanis

a féregantigének s e ­

vérsavójából előállított a n ­

termelt

immunsavókkal

immunsavók

kiderült, h o g y

pisiformis-antigének

ellen

immunelektrofo-

a Taenia-

nyulakban

k o m p l e x formájában heterológ

oltva

produkcióját

antitestek

normál nyulvérsavó

váltották

immunelektroforézise

és

Cysti­

képződő e l l e n a n y a ­

gok antigén-ellenanyag olyan

k a p o t t e-

állatokba

k i ,

amelyek

kivül még e g y másik s e r u m k o m p o n e n s s e l i s reagáltak, a m i t globulinnal

lehetett

a z o n o s i t a n i az

és a következő megfontolások rummal

kimutatott

komplementum

ez a második

előtt a vérsavókat y\ig övalbuminnak

mi

pedig

komponens

ennek

nem

és 288 yUg a n t i - o v a l b u m i n n a k

a

lehetett

m i v e l a komplexek

dekomplementáltuk. Megállapították,

savóhoz való adása

teljesen

eltávolitja

mennyiségnek

közel

az IgM

i m m u n e l e k t r o f o r e t i k u s kép

alapján. A z a n t i - k o m p l e x

v a l a m e l y i k összetevője,

immunsea

globulin

vetkezménye

könnyü-láncai e l l e n

hogy

abszorbeáltuk, ponenst.

Tisztitott

az a n t i - k o m p l e x ezzel

antitesteket

az immunsavók IgM-mel

1 ml a n t i - B S A n y u l -

kétszeresét

a komponenssel.

antigén-antitest globulinnal cifikus

alkalmaztuk

Mindezek pedig

komplexekkel

antitestek

gyetlen het

Az IgM g l o b u l i n t esetben

sem

lenanyagokat. anti-komplex vitatott

tiszta

IgG-vel

e z t a kom­ viszont

reagálóképességüket

a z t bizonyitják,

hogy

az

folyamán az I g G

kivül az I g M g l o b u l i n r a

spe­

i s termelődtek.

tartalmazó

az IHA-próbával

kö­

immunserumok-

abszorbeálás után

való immunizálás

reagáló e l l e n a n y a g o k o n

globulint

tigént.

immunkémiailag

elveszítették

vitt

ellenanyagok

továbbra i s kimutatták

Az agargéldiffuziós-precipitációs IgG

termelődött

történt

immunsavók

32

a komplementumot / 8 3 / ,

sem l e h e t e t t , m e r t ha az a n t i - k o m p l e x

ból az I g G - e l l e n e s

nyul-

képzése

vizsgálatainkban, és a kezelést megismételtük. A k o m p l e x b e IgG

a

során az I g G g l o b u l i n o n

módszert

alkalmazva

c s a k az

frakció precipitálta

a CpK-t m i n t an­

tartalmazó

e z z e l szemben e-

hoztak

frakciók

létre látható precipitációt, jólle­

kimutatható

Ez az észleletünk

mennyiségben ellentétben

tartalmaztak e l ­ látszik

állni az

immunsavók

vizsgálatával k a p o t t és a f e n t e b b meg­

eredményekkel,

a m e l y e k a z t mutatták, h o g y az u j r a f e r -

tőzött állatok vérsavójából a

parazitaantigénekkel

tigén-antitest precipitátumok gokat kapott

i s magukba f o g l a l t a k . eltérő

eredmények

nyiség elégséges v o l t

ja,

mennyisége a l a t t a m a r a d t a n n a k

ahhoz, hogy

az antigénnel

h o g y a z I g G - és az I g M - e l l e n a n y a g o k

tipusu

amely v i s z o n t

szenzibilizált

adat

i s bizonylt­

egyaránt képesek

a precipitációs próbával a z o n b a n

ellenanyagok

mutathatók

az I g M t i p u s u

a kü­

precipitá-

U g y a n a k k o r ez az e l l e n a n y a g - m e n y -

agglutinálja. Több i r o d a l m i

pitációt előidézni, IgG

módszerrel

a z agardiffuzió során a látható

ció előidézéséhez szükséges.

vörös vérsejteket

precipitálo e l l e n a n y a ­ szerológiai

legvalószínűbb magyarázata a z , h o g y a

képződött I g M - e l l e n a n y a g o k szöbértéknek, a m e l y

IgM t i p u s u A kétféle

képzett a n ­

preci­

főleg az

k i , szemben az IHA-próbával,

ellenanyagok

iránt érzékenyebb / 1 ,

9,29,30,46,58,60,62,63,69,87/.

Korábbi vizsgálataink nyulak

folyamán megfigyeltük,

vérsavójába élő

egy idő múlva p e l y h e s

cysticercusokat csapadék

keletkezett.

mesterséges i m m u n i z e lássál előállitott munsavókban i s gadjuk

kialakult

antigénhatásu

adekvát e l l e n a n y a g o k

u g y e precipitátum

antigénjei I g G t i p u s u somaticus

ellen

globulinnal tipusu

után l e h e t e t t véve ebben

a

precipitinek gálataink

e féregfaj

a

a

az élő

lévő

eredményeként

jött

állatokban

"secretum

és

termelt

eredmények excretum"

termelődését indukálják. A szimultán

alkalmazásával

termelődését idézték e l ő . I g M

e z e n a módon szintén c s a k az ujrafertőzés

vérsavókban k i m u t a t n i .

dolgozatban

közölt

eredményeiből l e v o n t

f o r m is-oncosphaerák

cys­

vérsavóban

Mindezeket

figyelembe

megfigyeléseink megerősitik a

lokalizációjára vonatkozóan korábban végzett

főleg I g G t i p u s u

im­ elfo­

k o m p l e x e k i s elsősorban a n y u l I g G

reagáló e l l e n a n y a g o k

precipitineket

heterológ

antigének

létrehozott antigén-antitest

és

analízisével k a p o t t

precipitinek

és m e t a b o l i c u s

precipitátum

reakciójának

antisavók i m m u n e l e k t r o f o r e t i k u s alapján megállapithatjuk,hogy

csapadék a

és a n t i - C p

közölt megfigyelések/. Ha

metabolitjai

közvetlen

a vérsavóban

Ilyen

anti-Tp

a z t a feltételezést, h o g y e z a

ticercusok

létre,

/nem

h o g y a fertőzött

helyezve

következtetést, h o g y a T.

inváziójára a d o t t

precipitinek

ellenanyagválasz

termelődnek / 5 5 / .

vizs­ pisi­ során

Vizsgálatainknak

az az eredménye, h o g y a C.

pisiformisszal

tőzött n y u l a k b a n

az IgG t i p u s u

dominálnak, az I g M -

ellenanyagokat ban

ellenanyagok

c s a k az ujrafertőzést

követően l e h e t

fer­

a vérsavók­

kimutatni,

összhangban v a n CRANDALL e t a l . / ^ l / megállapí­

tásaival, a k i k

T r i c h i n e l l a s p i r a l i s s z a l fertőzött n y u l a k b a n a z t

találták, hogy

bár

nyálkahártyájában

az

növekedett, a vérsavóban dultak

elő.

IgM t i p u s u

kában és a ban,

produkáló s e j t e k

többszöri

korai

kizárólag I g G t i p u s u

ellenanyagok

a n t i t e s t e k a fertőzöttség

fertőzések

után

aránya a bél

szakaszában erősen meg­

a nyirokcsomókban észlelt

f o r m is-petékkel tően azért mert i l y e n e k vagy

kalmazott

egyszer

a vérsavók­

a primer

képződnek módszerek

arányának a

növekedésével. A T.

fertőzött n y u l a k

nem sikerült I g M

tipusu

vérsavójában

ellenanyagokat

fertőzöttség során egyáltalán u g y a n , de mennyiségük által

kimutatható

for­

késői idősza­

j e l e n t e k meg

párhuzamosan az I g M g l o b u l i n t termelő s e j t e k

lépben és

nek,

IgM-et

a fertőzöttség

pisi­

feltehe­

kimutatni, nem

képződ­

a l a t t a m a r a d az a l ­

minimális

ellenanyag­

mennyiségnek .

összefoglalva az i t t közölt vizsgálatok ható,

eredményeit

h o g y a T. pisifprmis-oncosphaerák

k o m p l e x és heterogén folyása, során e

ellenanyagválaszt

parazitának

nensével szemben termelődnek ző immunglobulin-osztályba

legalább négy eltérő ellenanyagok,

ellenanyagok

ciót követően i s az I g G - e l l e n a n y a g o k antitesteket

i s sikerült

lensége m i a t t

nyomán kialakuló

nyulakban

antigénkompo­ két különbö­

fertőzésre

adott

képződnek; a r e i n f e k de I g M

tipusu

az e l l e n a n y a g o k

kimu­

kimutatni.

módszerek

korántsem

amelyek

dominálnak,

Hangsúlyozandó, h o g y a közölt vizsgálatok tatására a l k a l m a z o t t

a

indukál. A fertőzés l e ­

tartoznak. A primer

immunválasz során I g G t i p u s u

megállapít­

inváziója

tárták

tipusa f e l a C.

és v i s z o n y l a g o s

humorális ellenanyagválaszt

Ennek érdekében még további

érzéket­

pisiformis-fertözöttség teljes

részletes vizsgálatok

egészében.

szükségesek.

ÖSSZEFOGLALÁS

A Taenia

pisiformis

Cysticercus szekunder

/Bloch,

pisiformis

1780/

/Bloch,

fertőzés nyomán kialakuló humorális

tanulmányoztuk

s i formis-petével csoportját

fertőztünk,

lenlétére megvizsgáltuk.

m a j d 60 n a p p a l

később

az állatok

A kisérlet

100.

leöltük és c y s t i c e r c u s o k j e ­

A fertőzések után időnként vért

tünk és a vérsavókat e l l e n a n y a g o k r a

produkált,

amelyek

lárvaprecipitációs és

indirekt

vet­

megvizsgáltuk.

valamennyi

A fertőzésre a d o t t válaszként

ránt

egyedenként 5 0 0 T. p i ­

10 0 0 0 petével ujrafertőztük.

napján az összes kisérleti állatot

anyagokat

p r i m e r és

ellenanyagválaszt

nyulakban.

öt-hét h e t e s , 5 0 0 - 1 0 0 0 g s u l y u n y u l a k a t

egy

1 7 9 0 lárvaalakja, B

Gmelin,

1 7 8 0 / által létesített

kisérleti n y u l

ellen-

agargéldiffuziós-precipitációs, hemagglutinációs próbával

egya-

kimutathatók.

A hemagglutináló minden voltak.

A hemagglutininek

lemző v o l t , lagtiter

ellenanyagok

állatban m e g j e l e n t e k

a fertőzést

és a

követő második

kisérlet végéig

felhalmozódásának

dinamikájára

h o g y a fertőzöttség második hetétől

fokozatosan

emelkedett

hétre

kimutathatók jel­

k e z d v e az át-

és az 5 0 . n a p o n érte e l a csú­

c s o t , m a j d ezután némileg csökkent.

A precipitálo e l l e n a n y a g o k gyanazt

a mintát követte, m i n t

Precipitin-aktivitást először k i m u t a t n i , erősen

kifejlődésének

csökkent,

a

időbeli lefolyása u-

hemagglutináló

a fertőzés után

ellenanyagoké.

a második héten

lehetett

a csúcsát a 6-10. hét között érte e l , de még

a fertőzöttség

majd

1 0 0 . napján i s j e l e n

volt.

A fertőzöttség hirtelen

6 0 . napján

emelkedést

ellenanyagok

10 0 0 0 petével

végzett

ráfertőzés

idézett elő a hemagglutináló és precipitálo

mennyiségében.

A fertőzés lefolyása során képződött e l l e n a n y a g o k a t munglobulinok tiv

tipusát

agarblokk-elektroforézissel, DEAE-Sephadex A-50 anioncseré-

lő kromatográfiával, val,

valamint

a merkaptoetanol-érzékenység

a fertőzött n y u l a k

és a C. p i s i f o r m i s s o m a t i c u s képzett antigén-ellenanyag immunelektroforetikus tok

hordozó i m ­

sófrakcionálásos kísérletekkel, p r e p a r a -

során k i m u t a t t u k ,

sa a n y u l a k b a n

vizsgálatá­

vérsavójából a T. p i s i f o r m i s

és/vagy m e t a b o l i c u s

komplexek

ellen

antigénjeivel

termelt

immunsavók

analízisével határoztuk meg. E vizsgála­ hogy a T. pisiformis-oncosphaerák

k o m p l e x és

támadá­

heterogén ellenanyagválaszt indukál.

A fertőzés lefolyása során e parazitának legalább négy antigén­ komponensével szemben termelődnek e l l e n a n y a g o k , lönböző immunglobulin-osztályba adott

tartoznak:

immunválasz során I g G t i p u s u

ellenanyagok

infekciót követően az I g G - e l l e n a n y a g o k su a n t i t e s t e k e t

i s sikerült

a m e l y e k két kü­

a primer

fertőzésre

képződnek,-a r e -

dominálnak, de I g M t i p u ­

kimutatni.

NÉMETH, I . : Studies on Humoral Antibodies in Experimental Infections of Kabbits with Cysticercus pisiformis (Bloch, 1780) I I I . Characteristics of the Antibody Response to Primary and Secondary Infections

The

humoral

a n t i b o d y response

dary i n f e c t i o n s larval

form

with

of

of rabbits

Taenia

pisiformis

/ C e s t o d a : T a e n i i d a e / has b e e n

/Bloch,

aged 5 t o 7 w e e k s , w e i g h i n g

infected

with

of

response

table

and a g r o u p

each

of the

10 0 0 0 e g g s 60 d a y s l a t e r . On t h e 1 0 0 t h d a y

a l l animals

were k i l l e d

and examined

samples were c o l l e c t e d

and t h e serum t e s t e d

produced

gel diffusion precipitin,

i n d i r e c t haemagglutination

f o r the

a t frequent

f o r antibodies.

to infection a l l rabbits

by t h e a g a r

1780/ Gmelin, 1790

5 0 0 t o 1000 g, w e r e

T. p i s i f o r m i s ,

o f c y s t i c e r c i . Blood

intervals,

and

with

the experiment

presence

In

5 0 0 eggs o f

and s e c o n ­ 1780/, t h e

studied.

Rabbits,

was r e i n f e c t e d

to primary

Cysticercus p i s i f o r m i s /Bloch,

tests.

antibodies detec­

larval

precipitin,

Haemagglutinating c o n d week

a n t i b o d i e s appeared

and p e r s i s t e d

mics o f a c c u m u l a t i o n

throughout

of haemagglutinins

g r a d u a l i n c r e a s e o f t h e mean t i t r e fection

The

vity

to that was f i r s t

infection, rably

elicited tating

in

from

reached

with

on t h e

present

rise

of both

preparative

of i n f e c t i o n

carrying

zone e l e c t r o p h o r e s i s i n a g a r ,

and by

with

2-mercaptoethanol,

a n a l y s i s o f immune s e r a

made w i t h

sera

of i n f e c t e d

to

s i f o r m i s . I t was f o u n d induced

that

formed

immunoglobulin i n secondary

two d i s t i n c t

activity

DEAEafter

precipitates

and t h e whole e x t r a c t

different

of

T.

pisiformis i n t h e rab­ compo­

and were

immunoglobulin

to primary i n f e c t i o n

shown

classe s : a n t i -

belonged

were

a small proportion

and/or

and C . p i -

antigenic

of infection,

c l a s s ; and w h i l e t h e s e responses

from

immunoelectrophoreti-

a n t i b o d y response

four

i n t h e course

i n responses

antibody

produced o u t , by

o f b o t h T. p i s i f o r m i s

a compex a n d h e t e r o g e n o u s

be a s s o c i a t e d w i t h

by e l u t i o n

the oncosphaeres

Antibodies to at least

n e n t s were p r o d u c e d

nant

precipi­

by s a l t i n g

antigen-antibody

rabbits

" s e c r e t i o n s and e x c r e t i o n s "

IgG

infection

the a n t i b o d i e s

were d e t e r m i n e d

of

to

acti­ after

conside­

h a e m a g g l u t i n a t i n g and

treatment

bodies

week

on t h e 1 0 0 t h d a y .

S e p h a d e x A - 5 0 , by t h e a l t e r a t i o n

bits.

Precipitin

second

antibodies.

classes of immunoglobulins

the

a n t i b o d i e s was s i ­

10 0 0 0 eggs on d a y 60 o f t h e p r i m a r y

an a b r u p t

the course

cal

week o f i n ­

a peak b e t w e e n w e e k s 6-10, a n d f e l l but s t i l l

dyna­

decline.

of p r e c i p i t a t i n g

detected i n the sera

The

t h e second

of haemagglutinating a n t i b o d i e s .

there after

Reinfection

The

development

by t h e se­

was c h a r a c t e r i z e d b y a

t o a peak on d a y 5 0 , t h e n a s l i g h t

time-course

milar

i n a l l animals the experiment.

still

to the predomi­

/10-15 %/ o f IgM

a n t i b o d i e s was a l s o d e t e c t a b l e .

Érkezett: 1 9 7 2 . I I . 1 0 .

Dr. MTA

NÉMETH

István

Állategészségügyi Kutató Intézete

B u d a p e s t X I V , Hungária k r t . 2 1 .