A immorális ellenanyagok tanulmányozása nyulakban kísérletileg létesített Cysticercus pisiformis (Bloch, 1780)-fertőzöttség esetén

Parasit. Hung. 5. 83-98. 1972.

A immorális ellenanyagok tanulmányozása nyulakban kísérletileg létesített Cysticercus pisiformis (Bloch, 1780)-fertőzöttség esetén II. A precipitálo ellenanyagok lokalizációjának vizsgálata immunelektroforézissel

Dr. NÉMETH István A Magyar Tudományos Akadémia Állategészségügyi Kutató Intézete, Budapest

A Taenia

i

pisiformis

/Bloch,

1780/ Gmelin,

1790 / C e s t o d a : T a e n i -

i d a e / lárvaalakjával,

a Cysticercus pisiformis-

szal

vérsavójában e l l e n a n y a g o k

Ezt

fertőzött

nyulak

egyrészt a fertőzésen

p a s s z i v immunizálási

átesett

i s k i m u t a t t a k e parazitával

végzett

/4,14,37,38,43,44,

szérodiagnosztikai

módszerek­

fertőzött n y u l a k vérsavójában a

galandférgekből v a g y a cysticercusokból gítségével

1780/-

j e l e n n e k meg.

vérsavójával

kísérletekkel igazolták

4 5 , 5 2 , 7 2 / , másrészt a n t i t e s t e k e t kel

nyulak

/Bloch,

preparált antigének s e ­

/14,51,70,71,77/.

T. pisiformis-petékkel ban végzett

kísérletesen

vizsgálataink

során a

fertőzött n y u l a k k a l koráb­ fertőzött állatok

vérsavója

precipitációt h o z o t t létre agargélben a galandférgek, i l l e t v e cysticercusok

sóoldatos kivonatával / 5 1 / .

precipitációs próbával

folytatott

tették, h o g y e féregfaj inváziója tin-választ

indukál / 5 3 / .

böző időpontokban v e t t c i p i t á l o

kel

ellenanyagot

az a n t i t e s t e k k e l

fejlett

vérsavókban

galandférgek és

komplex

fertőzések

kiderí­ precipi-

után külön­

négy eltérő specifitásu

kimutatni.

reakcióba lépő

vizsgálatok

a nyulakban

A mesterséges

lehetett

-wban oldódó frakciója

további

Kiderült, hogy

antigénkomponenseket

a c y s t i c e r c u s o k sóoldatos tartalmazza /53/

a

Az agargéldiffuziós-

pre­ ezek­ a k i ­

kivonatának

Az i r o d a l o m b a n hogy m i l y e n testek,

nem található

a z o n b a n közlés

immunglobulin-osztályhoz

s i g ytipusuk

kapcsolatot lak

n a t i v vagy

precipitin-

és a

végez­

precipitinek

közti

immunelektroforézissel. A fertőzött

koncentrált szérumát a l k a l m a z v a , többféle segítségével sikerült

a tipusát meghatározni. Ez nak

ezek az a n t i ­

s z o r u l . Ezért a T» p i ­

u j a b b kísérleteket

az i m m u n g l o b u l i n o k

vizsgáltuk

génpreparátum

vonatkozóan,

támadásával szemben kialakuló

válasz további jellemzése érdekében tünk, a m e l y e k b e n

kapcsolódnak

még meghatározásra

s i formis-oncosphaerák

arra

az eredményeit

a

nyu­ anti­

ezeknek az e l l e n a n y a g o k n a k

közlemény e z e k n e k a vizsgálatok­

tartalmazza.

A n y a g o k és módszerek

Antigének

A vizsgálatokhoz antigénként T. p i s i f o r m i s - k i v o n a t o t /TpK/, pisiformis-kivonatot

/CpK/, T. p i s i f o r m i s - " s e c r e t u m

antigént" /TpSE/, v a l a m i n t

C. p i s i f o r m i s - " s e c r e t u m

antigént" /CpSE/ használtunk, állitottunk

amelyeket

C.

és e x c r e t u m és e x c r e t u m

a korábban l e i r t

módon

elő / 5 3 / .

Antiserumok

Az a n t i - T . p i s i f o r m i s -

nyulimmunsavó

s i f o r m i s - nyulimmunsavó / a n t i - C p / , polispecifikus lamint

a nyul

nyulglobulin történt / 5 3 ,

az a n t i - C . p i ­

nyulsavó e l l e n

ható

kecskeimmunsavó /anti-nyul-kecskeimmunsavó/, v a ­ serumglobulinokat

precipitálo juhimmunsavó

juhimmunsavó/ termelése a korábban l e i r t a k

/antiszerint

55/.

Fertőzött nyulakból származó Husz 6-7 h e t e s korú, egyedenként

/anti-Tp/,

a teljes

500

vérsavók

700-900 g s u l y u ,

T. pisiformis-petével

fehér, uj-zélandi fertőztünk.

nyulat

A petéket

mesterségesen

fertőzött kutyákból származó g r a v i d

rábban l e i r t a k

szerint

izoláltuk / 5 2 / ,

szondával közvetlenül az állatok után a 6 0 , napon a z állatok majd

a 1 0 0 , napon

gyomrába a d t u k

folyamatosan

szerelt fertőzés

ujrafertőztük,

állatot elvéreztettük

c o l t u k . Az első fertőzéstől k e z d v e az állatok naponként

be. A

felét 10 0 0 0 petével

valamennyi

izekből a k o ­

és fecskendőre

és

felbon­

fülvénájából t i z -

vért vettünk, és a vérsavókat

konzervé-

lószer nélkül -20°C-on meg f a g y a s z t v a tároltuk a felhasználásig.

Immunelektroforézis

Az immunelektroforézis analíziseket

0 , 0 1 % mertiolátot

mazó veronálnátrium-nátriumacetát-sósav-pufferben erősség= 0,05/ o l d o t t

agargélben

+

tünk, és a l e m e z e k e t

réteget

képez­

másnapig 4°C-on nedveskamrában való

tartás

fel.

szültségesés m e l l e t t

1,5 mm

Az elektroforétikus szobahőmérsékleten

zió szobahőmérsékleten gensektől

nedveskamrában

m o s t u k , szárítottuk, és a m i d o f e k e t e

Az

futtatás

4 V/cm

fe­

történt. Az i m m u n d i f f u történt

a vizsgált

lemezeket

rea­

kiala­

a szokásos módon

10 B - v e l

vagy savanyu f u k -

radiális

kettős

megfestettük / 5 / .

agargéldiffuziós-precipitációt

módszerrel, a fertőzött n y u l a k koncéntrálását leirtak

vastag

függően különböző i d e i g . A precipitációs i v e k

kulása után az immunelektroforézises

szinnal

/pH 8,6; i o n -

végeztük. Az 1,5 % - o s a g a r o l -

datból 6,5 x 9 cm-es üveglemezeken

után használtuk

tartal­

szerint

gyengén precipitálo

diffúziós

vérsavójának

ammóniumszulfátos kisózással végeztük a korábban /53/,

a fehérjemeghatározások

pedig

Biuret-re-

akcióval történtek / 1 7 / .

Eredmények A T. pisiformis-peték

+

S p e c i a l Agar-Noble,

beadását

követő 1 0 0 . napon végzett

bonco-

Difco Laboratories, D e t r o i t , Michigan,

USA

lás k i d e r i t e t t e , egyszer kek:

h o g y m i n d a két

fertőzés

eredményes v o l t . Az

fertőzött n y u l c s o p o r t b a n átlagosan 228,6 /szélsóV.érté­

82-391/

kifejlett

Cysticercus volt

a

c s e p l e s z e n és a me­

denceüreg savóshártyáján betokozódott állapotban. tőzést követő 6 0 . n a p o n san

ujrafertőzött

nyulakban viszont

394 /szélső értékek: 1 3 8 - 4 2 7 / c y s t i c e r c u s t

ben az állatokban a dett

kifejlett

Az első

átlago­

találtunk. E z e k ­

végleges tartózkodási helyükön

borsókákon

kivül a hasüregben

megtelepe­

szabadon

fiatal

vándorló lárvák i s előfordultak, a m e l y e k a reinfekcióval oncosphaerákból

vérsavók

agargéldif-

fuziós-precipitációval

végzett vizsgálata során a 1 2 - 1 5 .

korábban nem

precipitineket

lehetett

antigénekkel.

részének vérsavója

pitációs v o n a l a t , a 3 0 - 4 0 . naptól

gyengébbek l e t t e k ,

preci-

kezdve v i s z o n t

minden

állat

hozott

azonban

illetve

a

szer

egyazon

fertőzött n y u l a k

z o n b a n két jól

erősségében,

lehetett

másrészt

vizsgálata

ugyanis

vett

CpK-

az e g y ­

többségének vérsavója c s a k e g y e t l e n

között

során

megfigyelni. A

diffundáltatva

a l a k i t o t t k i , az

zöttség 3 0 - 7 0 . n a p j a

időpontjában n y u ­

h o g y az e g y e s vérsavók

T p K - v a l szemben

cipitációs v o n a l a t

létre agargélben.

a m i egyrészt a vérsavók által lé­

eltérő számú precipitációs v o n a l a t val,

for­

ezután

nemcsak a fertőzés l e ­

precipitációs sávok különböző

nyilvánult meg,

majd

de még a megfigyelési idő végén

hanem a fertőzöttség

lanként i s erősen változott,

abban

n y u l a k egy

gyenge

precipitációs sávok,

A vérsavók precipitin-aktivitása

tesített

a C p K - v a l és a

igen

m i n d e n n y u l vérsavója precipitációt

folyása során,

napnál

A fertőzöttség 3 0 - 7 0 . n a p j a között

elő a l e g k i f e j e z e t t e b b

fokozatosan is

kimutatni

E z t követően i s c s a k a

a l a k i t o t t k i rendszerint

vérsavója précipitait. dultak

bevitt

fejlődtek k i .

A fertőzöttség különböző időpontjában v e t t

TpK-val mint

fer­

pre­

e g y e s állatokból a fertő­

vérsavók vizsgálata

k i f e j e z e t t precipitációs sávot

során a-

lehetett

megfi­

10 0 0 0 petével végzett

ráfer-

gyelni .

Az első fertőzés után a 6 0 . n a p o n

tőzést követően észrevehetően megnövekedett tin-aktivitása. Az ujrafertőzött erősebb precipitációt

nyulak

alakitott ki,

a vérsavók

precipi­

vérsavója u g y a n i s

mint

jóval

a c s a k e g y s z e r fertő-

zötteké, e m e l l e t t nap

többségük vérsavója a ráfertőzést

után három, egyeseké p e d i g

sített,

amikor a CpK-val, i l l e t v e

A precipitineket

követő 2 0 .

négy precipitációs v o n a l a t TpK-val v o l t a k

hordozó se rumkomponensek

léte­

reagáltatva.

elektroforetikus

mo-

tilitását és tipusát immunelektroforézissel állapítottuk meg. A vérsavókat zis

agargélben elektroforetizáltuk, m a j d az elektroforé-

befejezése

után

csatornákból a gyik

annak

tengelyével párhuzamosan

szétválasztott

komponensekre

merőlegesen az e-

oldalról a CpK, TpK, CpSE v a g y TpSE különböző

ójú o l d a t a i t , cipitálo

a másik oldalról p e d i g

anti-nyul

juhimmunsavót

nyul

kecskeimmunsavót,

diffundáltattunk. E z z e l

tásu vérsavókat

egyedenként,

vagy

gáltuk n a t i v a n ,

anti-nyulglobulin

precipitin-aktiviidőpontban v e t t és

egyenlő arányban

keverve v i z s ­

a gyengén precipitálo vérsavókat

umszulfátos kisózással végzett előzetes vizsgálatok

során k a p o t t

legtipikusabb

pedig

TpK, CpSE és a TpSE antigénkészitmények

globulin

szemben

kifejlődött

ivmaximumával e s t e k

lokalizációja

a fertőzöttség

az 1 . , 2.,

különböző

gének és a n e k i k pitációs i v e k

bármelyik

ciós i v e k kultak

időpontjában

nyert

vér­

A különböző a n ­ a serum

képével u g y a n i s összevetve, a féreganti­

megfelelő e l l e n a n y a g o k

különbségeket

az

által létesített hanem c s a k

preci­

erősségükben

e g y e s vérsavók

precipitálo

függően. Az antigénoldatokkal szemben a precipitá­

mindig

az IgG g l o b u l i n

k i , és sohasem

terjedtek

tilitás egész területére. primer,

az I g G

antitestek

precipitációs i v e k e t

helyeződésében s o h a s e m ,

figyelhettünk meg képességétől

koncentráció­

e g y b e . A precipitálo

esetében kifejlődött

immunelektroforetikus

hogy a CpK,

precipitációs i v e k

savók vizsgálata során egységes képet m u t a t o t t . tigénoldatok

ammóni-

bekoncentrálás után. A eredményeket

3. és 4. ábra szemlélteti. Az ábrákon jól látható,

jú o l d a t a i v a l

pre­

a módszerrel a fertőzött­

vagy az azonos

reaktivitásu vérsavókat

koncentráci­

serumfehérjéket

ség különböző időszakából származó különböző

azonos

létesített

mind a

ivmaximumának megfelelően k i az

Ugyanezt

szekunder

IgG e l e k t r o f o r e t i k u s

a z eredményt

fertőzöttségből

ala­ mo-

kaptuk mind a

származó

vérsavók

vizsgálata során, akár a galandférgek v a g y a c y s t i c e r c u s o k " s o m a t i c u s " kivonatát, akár a " m e t a b o l i c u s " antigénjeit a precipitálo a n t i t e s t e k

kimutatására.

használtuk

1.

ábra

T. p i s i f o r m i s precipitinek zissel

l >

és C. p i s i f o r m i s - " s o m a t i c u s ' lokalizációjának

a C, p i s i f o r m i s s z a l

antigének e l l e n

demonstrálása

fertőzött n y u l a k

ható

immunelektroforévérsavójában.

A fertőzöttség 3 0 . napján v e t t vérsavóminta elektroforézise után / l y u k a k / a v i z s z i n t e s csatornákat a következők szerint töltöttük meg: A: T e l j e s nyulsavó e l l e n ható kecskeimmunsavó; L : N y u l s e r u m g l o b u l i n o k e l l e n ható juhimmunsavó; TpK: T. p i s i f o r m i s - k i v o n a t /3 mg fehérje/ml/; CpK: C. p i s i f o r m i s ' - k i v o n a t /4 mg fehérje/ml/. A precipitációs v o n a l a k a TpK- és C p K - v a l szemben egyaránt a z I g G g l o b u l i n pozíciójában fejlődtek k i . Fig.

1.

Precipitins

to "somatic"

Immunoelectrophoresis

a n t i g e n s o f T. p i s i f o r m i s

i n t h e serum

of rabbits

localized

infected

with

by C.

p i s i formis. A f t e r e l e c t r o p h o r e s i s o f a serum s a m p l e / w e l l s / c o l l e c t e d on d a y 30 o f t h e i n f e c t i o n , t h e h o r i z o n t a l t r o u g h s w e r e filled as f o l l o w s : A: Goat a n t i s e r u m t o r a b b i t w h o l e s e r u m ; L: Sheep a n t i s e r u m t o r a b b i t g l o b u l i n s ; TpE : T. p i s i f o r m i s w h o l e s a l i n e e x t r a c t /3 mg protein/ml/; CpE: C. p i s i f o r m i s w h o l e s a l i n e e x t r a c t /4 mg protein/ml/. P r e c i p i t i n l i n e s w e r e f o r m e d a g a i n s t b o t h TpE and CpE i n t h e p o s i t i o n o f IgG i m m u n o g l o b u l i n s .

2. ábra T. p i s i f o r m i s

és C. p i s i f o r m i s

gének e l l e n ható

precipitinek

immunelektroforézissel savójában.

"secretiós és excretiós" lokalizációjának

a C.pisiformisszal

antir

demonstrálása

fertőzött n y u l a k

vér­

A fertőzöttség 3 0 . napján v e t t vérsavóminta elektroforézise után / l y u k a k / a v i z s z i n t e s csatornákat a következők s z e r i n t töltöttük meg; A: T e l j e s nyulsavó e l l e n ható kecskeimmunsavó; TpSE: T. pisiformis-""secretiós és excretiós" antigén /3 mg fehérje/ml/; CpSE: C. p i s i f ormis-"secr_etiós és excretiós" antigén /2,5 mg fehérje/ml/. A precipitációs v o n a l a k a TpSE- és C p S E - v e l szemben egyaránt az I g G g l o b u l i n pozíciójában fejlődtek k i .

Fig.

2.

Precipitins

to "secretions

f o r m i s and C. p i s i f o r m i s the

serum o f r a b b i t s

and e x c r e t i o n s "

localized

infected

with

antigens

o f T.

pisi-

by I m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s C.

in

pisiformis.

After electrophoresis o f a serum s a m p l e / w e l l s / c o l l e c t e d on day 30 o f t h e i n f e c t i o n , t h e h o r i z o n t a l t r o u g h s w e r e filled as f o l l o w s : A: Goat a n t i s e r u m t o r a b b i t w h o l e serum ; TpSE: " S e c r e t i o n s a n d e x c r e t i o n s ' " a n t i g e n o f T. p i s i f o r m i s /3 mg protein/ml/; CpSE: " S e c r e t i o n s and e x c r e t i o n s " a n t i g e n o f C. p i s i f o r m i s / 2 , 5 mg protein/ml/. P r e c i p i t i n l i n e s w e r e f o r m e d a g a i n s t b o t h TpSE a n d CpSfc i n the p o s i t i o n o f IgG i m m u n o g l o b u l i n s .

3. ábra Nyulvérsavó immunelektroforézise, siformis-^somaticus" zációját m u t a t j a

a m i a T. p i s i f o r m i s

és C « p i -

antigének e l l e n ható p r e c i p i t i n e k

lokali­

a reinfekciót követő 4 0 . n a p o n .

A vérsavó elektroforézise után / l y u k a k / a v i z s z i n t e s nákba a következő r e a g e n s e k e t töltöttük: A: T e l j e s nyulsavó e l l e n ható kecskeimmunsavó; TpK: T. p i s i f o r m i s - k i v o n a t /4 mg fehérje/ml/; CpK: C. p i s i f o r m i s - k i v o n a t /5 mg fehérje/ml/.

csator­

Fig.

3.

Immunoelectrophoretogram ion

of p r e c i p i t i n s

o f r a b b i t serum

t o "somatic*" a n t i g e n s

C. p i s i f o r m i s 40 d a y s a f t e r

showing the l o c a l i z a t ­ o f T. p i s i f o r m i s

and

reinfection.

A f t e r e l e c t r o p h o r e s i s o f t h e serum s a m p l e / w e l l s / t h e h o r i ­ z o n t a l t r o u g h s w e r e f i l l e d as f o l l o w s : A: Goat a n t i s e r u m t o r a b b i t w h o l e serum ; TpjE: T. p i s i f o r m i s w h o l e s a l i n e e x t r a c t /4 mg p r o t e i n / m l / ; CpE: C. p i s i f o r m i s w h o l e s a l i n e e x t r a c t /5 mg p r o t e i n / m l / .

4. ábra Nyulvérsavó immunelektroforézise, a m i a T. p i s i f o r m i s és C. p i siformis-"secretiós tinek

és excretiós" antigének e l l e n ható

lokalizációját m u t a t j a

a reinfekciót

precipi-

követő 4 0 . n a p o n .

A vérsavó elektroforézise után / l y u k a k / a v i z s z i n t e s c s a t o r ­ nákba a következő r e a g e n s e k e t töltöttük: A: T e l j e s nyulvérsavó e l l e n ható kecskeimmunsavó; TpSEs T. pisiformis-"secretiós és excretiós" antigén /4 mg fehérje/ml/; CpSE: C. pisiformis-"secretiós és excretiós" antigén / 4 mg fehérje/ml/. Fig.

4.

Immunoelectrophoretogram ion

of p r e c i p i t i n s

p i s i f o rmis

o f r a b b i t serum

to "secretions

showing t h e l o c a l i z a t ­

and e x c r e t i o n s "

and C. p i s i f o r m i s 4 0 d a y s a f t e r

antigen

o f T^

reiafection.

A f t e r e l e c t r o p h o r e s i s o f a serum s a m p l e / w e l l s / t h e h o r i z o n ­ t a l t r o u g h s were f i l l e d as f o l l o w e s : A: Goat a n t i s e r u m t o r a b b i t w h o l e serum ; TpSE: " S e c r e t i o n s a n d e x c r e t i o n s ' " a n t i g e n o f T . p i s i f o r m i s /4 mg p r o t e i n / m l / ; CpSE: " S e c r e t i o n s a n d e x c r e t i o n s " a n t i g e n o f C . p i s i f o r m i s /4 mg p r o t e i n / m l / .

Hangsúlyoznunk

kell

azonban,

g y e s vérsavók esetében erősen változott

-

idő a l a t t a l a k u l t a k

-

h o g y a precipitációs csikók az e-

m i v e l a vérsavók

precipitin-tartalma

más-más antigénkoncentrációknál k i optimálisan az

és más-más

immundiffúzió során. En­

nélfogva az összes precipitációs v o n a l a t , a m i az előzetes géldiffuziós-precipitációs vizsgálat kalmazott

immunelektrofore tikus

immunelektroforetikus

folyamán k i a l a k u l t , az a l ­

módszerrel nem sikerült a serum

képével együtt

demonstrálni e g y e t l e n l e ­

mezen. Az általában a l k a l m a z o t t 1 0 - 1 5 m i k r o l i t e r elek t r o f o r e t i k u s kelt ki

vizsgálata

ábrák szemléltetik,

vérsavó immun­

folyamán u g y a n i s , miként

egyetlen

precipitációs

a mellé­

i v fejlődött

a különböző antigénkészitményekkel szemben még az o l y a n vér­

savók esetében i s ,

amelyek p e d i g

agargéldiffuziós-precipitációs ziós módszerrel hoztak

létre.

zált 1 0 - 1 5 volt

reagáltatva

mikroliter

ahhoz,

nekkel

a szóbanforgó antigénekkel

próbában

vérsavóban

hogy v a l a m e n n y i

precipitációs

an tigénösszetevővé 1

antitest

szemben

illetőleg a s e r u m -

k o m p o n e n s e k n e k megfelelő precipitációs i v e k optimális déséhez különböző inkubációs idő v o l t

nyi

litert

valameny-

felelős p r e c i p i t i n e k e t

ugy

lokalizálni, h o g y ugyanabból a vérsavóból 2 0 - 3 0 m i k r o -

elektroforetizáltunk

tően a szétválasztott

egyidejűleg

l e m e z e n a n y u l serumfehérjéket lemezeket

diffun-

antigénoldatokat, és külön

precipitálo immunsavókat, m a j d a

a precipitációs i v e k optimális kialakulásáig inkubál-

Ilyenkor

alakult

több l e m e z e n . E z t köve­

se rumkomponensek r e külön l e m e z e n

dáltattuk a különböző koncentrációjú

tuk.

kifejlő­

szükséges.

próbában k i m u t a t o t t

precipitációs i v kialakításáért

sikerült

jól

k i . Másrészt a féregantigé­

szemben kialakuló precipitációs i v e k ,

Az agargéldiffuziós-precipitációs

sávot

h o g y az e l e k t r o f o r e t i -

kevés féregellenes

alakulhasson

az

radiális kettős diffú­

két v a g y több

Ennek o k a elsősorban a z ,

látható precipitáció

iv

agar-

az antigénoldatokkal szemben a n n y i

k i , mint

precipitációs

ahányat az e-lőzetes aga rgéldi f fúziós

vizs­

gálatok során megfigyeltünk. Exek a precipitációs i v e k az a n t i génvályuk hogy a génvályu

között egymással

legki fejezettebb szomszédságában

párhuzamosan

helyeződtek o l y módon,

precipitációs i v fejlődött k i ;

közvetlenül az a n t i -

ettől befelé

foglaltak

helyet

a többiek,

videbbek

voltak.

a m e l y e k az előbbinél jóval gyengébbek és rö­ A precipitációs

immunelektroforetikus

Különösen

nehéz v o l t

csak

többszöri

helyeződését

képével e g y b e v e t v e

hogy a z o k az I g G g l o b u l i n

cipitin-aktivitásu

ivek

a precipitineket

volt,

egybe.

lokalizálni a g y e n g e p r e -

Ezekben

próbálkozás után sikerült

precipitációs i v e t

megállapítható

ivmaximumával e s t e k

vérsavókban.

a vérsavó

az

esetekben ugyanis

egy-egy i g e n

halvány

é s z l e l n i . A vérsavók ammóniumszulfátos

zással végzett bekoncentrálása után a z o n b a n i l y e n k o r telenül meg l e h e t e t t állapitani,

h o g y a precipitálo

az elektroforézis során az I g G g l o b u l i n n a l

kisó-

i s kétség­ antitestek

vándoroltak.

A mesterségesen immunizált nyulakból n y e r t

anti-Tp,

illetve

an-

ti-Cp

elektroforetikus

mo-

immunsavók vizsgálata a p r e c i p i t i n e k

tilitását illetően

a fertőzött nyulakból származó

k a p o t t a k k a l megegyező

eredményekre v e z e t e t t .

gas ellenanyag-titerü

immunsavók /precipitációs

fehérje/ml TpK, i l l e t v e li _í 4 rint

1:2

CpK

CpK/

a homológ

az I g G g l o b u l i n

titrálás

oldataival

szemben kizáró­

ivmaximumánál alakítottak

nem

terjedt

k i precipitációt.

tigéncsatornától

az a n ­

helyeződött, és

precipitálo immunsavók

esetében

motilitás egész területére. Az a n ­

távolabb esetenként

előbbinél jóval rövidebb sal

csatorna mellett

k i , még a l e g j o b b a n

sem, az I g G e l e k t r o f o r e t i k u s

sze­

folyamán u g y a n i s

A legerősebb és l e g h o s s z a b b precipitációs i v közvetlenül tigénoldat számára létesített

ma­

15 mg

antigénkészitmények

különböző koncentrációjú

végzett i m m u n e l e k t r o f o r e t i k u s a n a l i z i s lag

titerük

törzsoldattal végzett

között változott/

/TpK, i l l e t v e

vérsavókkal

E meglehetősen

4-5 változó erősségű, a z

precipitációs i v fejlődött k i egymás­

párhuzamosan.

Megbeszélés

Először CAMPBELL / 1 4 / /Bloch,

1780/

állapitotta

G m e l i n , 1790

/Bloch,

l780/-szal

anyagok

fordulnak

meg,

hogy

lárvaalakjával,

a

fertőzött n y u l a k vérsavójában e l ő , a m e l y e k e féregfaj

a T.

pisiformis

C.

pisiformis

olyan

ellen­

antigénkomponenseivel

precipitációt

hoznak létre. A precipitálo e l l e n a n y a g o k

tét később különböző antigének alkalmazásával giai

módszerrel i s igazolták / 5 1 , 7 0 , 7 1 , 7 7 / ,

gálatokat közöltek az e l l e n a n y a g o k folyásáról / 5 3 , 7 7 / , parazita

és részletes

termelődésének

v a l a m i n t a fertőzött

rendszerek

Nincsenek

n y u l a k vérsavójában e

próbában kimutatható

antigén-ellenanyag

számáról / 5 3 / .

adatok

azonban

mis-oncosphaerák

arra

vonatkozóan, h o g y a

inváziójára a d o t t

termelődő precipitálo a n t i t e s t e k

anyagokról v i s z o n t rendelkeznek,

tudjuk,

nyomán képződő

ellenanyagok

C.

jelenleg

és I g A i s m e r t ,

i s rendelkeznek

betöltenek.

három immunglobulin-osztály,

mellett

az I g G , I g M

közös fizikó-kémiai, specifikus

egyedi

szerkezeti

tulajdonságok­

és a nehéz polipeptid-láncaik

ezáltal antigén-differenciái

szempont­

az oncuSphaerák inváziójával szem­

amelyek b i z o n y o s

és antigén-sajátságok

fon­

p o n t o s a b b értel­

g j o b b megismerése

ben irányuló védekező m e c h a n i z m u s b a n

A nyulakban

szerepük i s

pisiformis-fertözöttséq

osztályának i s m e r e t e egyaránt

mezése, v a l a m i n t annak a s z e r e p n e k ellenanyagok

ellen­

sajátságokkal

betöltött

e féregfaj által kiváltott immunjelenségek

jából, a m i t az

folyamán

tartozó

h o g y más-más biológiai

ennélfogva a

pisifor-

immunglobulin-osztályba

s az e g y e s immunreakciókban

különböző / 1 8 , 1 9 , 7 4 / ,

T.

ellenanyagválasz

milyen

t a r t o z n a k . A különböző immunglobulin-osztályokba

kal

vizs­

időrendi l e ­

" s o m a t i c u s " és " m e t a b o l i c u s " antigénjeivel az agargél-

diffuziós-precipitációs

tos

jelenlé­

többféle szeroló-

szerkezeti,

alapján különíthetők e l / 1 6 , 1 8 , 1 9 ,

74/.

A különféle antigénekre a d o t t

immunválasz során a n y u l a k m i n d a

három immunglobulin-osztályba

tartozó e l l e n a n y a g o k a t t e r m e l h e t ­

nek,

speciális körülményeitől, i g y

de az a d o t t

antigén kémiai

szituációk

természetétől, f i z i k a i

applikálásának módjától és m á s , nyezőktől

állapotától,

még közelebbről nem i s m e r t té­

függően, h o l az e g y i k , h o l a másik

tályba tartozó a n t i t e s t e k

az

adagjától,

immunglobulin-osz­

dominálnak a vérsavóban

/lásd p l . 7,

8 ,9,12 , 1 5 , 2 7 , 3 0 , 3 6 , 5 7 , 5 8 , 5 9 , 6 0 , 6 1 , 6 2 , 6 3 , 6 6 , 6 7 , 6 8 , 6 9 , 7 8 , 7 9 , 8 0 , 8 1 , 85,86,87/.

A rendelkezésre álló amelyekkel

irodalomban

e dolgozatban

szehasonlithatnánk.

nem találtunk o l y a n

közölt vizsgálataink

Arról u g y a n i s , h o g y a

szemben a n y u l a k b a n

termelődő

adatokat,

eredményeit ö s z -

Taenia-antigénekkel

precipitinek

milyen

immunglobu­

lin-osztályba t a r t o z n a k , a l e g j o b b tudomásunk s z e r i n t lomban

az i r o d a ­

n i n c s a d a t . M á s féregantigének által indukált

és az i m m u n g l o b u l i n o k

viszonyáról i s csupán néhány féregfaj e-

setében végeztek e z i d e i g ralisszal

antitestek

vizsgálatokat. I g y a T r i c h i n e l l a s p i -

fertőzött n y u l a k vérsavóját

zással és ultracentrifugálással

ammóniumszulfátos

kisó-

frakcionálva MAUSS / 4 8 / megál­

lapította, h o g y a komplementumkötő és a precipitálo, v a l a m i n t a protektiv

hatású a n t i t e s t e k e t ,

g l o b u l i n - f rakcióban tartalmazza.

i s jelen

bár k i s mennyiségben a vannak,

A Trichinella-antigének

a gammaglobulinban /90/,

pseudo-

elsősorban az e u g l o b u l i n ellen

ható

precipitineket

a béta-2- és a g a m m a g l o b u l i n b a n / 1 1 / ,

az I g G g l o b u l i n b a n / 2 2 , 4 7 / ,

illetve

az I g G és a z I g M g l o b u l i n -

ban / 4 0 / mutatták k i ; a f l u o r e s z c e n s z - e l l e n a n y a g o k a z I g G és az IgM

g l o b u l i n h o z kapcsolódnak / 2 1 , 6 5 / . U j a b b a n CRANDALL és ríOORE

/22/

anti-Trichinella

e l l e n a n y a g o k a t az I g G ,

globulinban

egyaránt k i t u d o t t

savójában,

KWAN / 4 0 / p e d i g

titestek

zömét a z

a z I g M és c z -yA

m u t a t n i a fertőzött n y u l a k

vér­

a z t közölte, h o g y a precipitálo a n ­

IgG hordozza,

a protektiv

antitestek

viszont

az I g M osztályba t a r t o z n a k .

A Dirofilaria reszcensz

uniformisszal

ellenanyagok

fertőzött

nyulakban

az I g G és az I g M

képződő

S c h i s t o s o m a mansoni-fertőzés nyomán termelődő

flokkuláló

a n y a g o k p e d i g az I g G g l o b u l i n h o z kapcsolódnak / 9 1 / . loides

papillosus

filariform

vójában a p r e c i p i t i n e k e t mutatta

k i . Egyesek

nyulakban

feltételezik,

h o g y a férgekkel

ellenanyagok

közölt vizsgálataink

fertőzött

a z I g G és a z I g M

tartoznak/64,65,91/.

eredményei alapján egyértel­

műen megállapítható, h o g y a T. pisiformis-oncosphaerák nyomán kialakuló

immunválasz

precipitálo a n t i t e s t e k e t

vérsa­

GEYER / 2 8 / a béta- és g a m m a g l o b u l i n b a n

globulintól eltérő immunglobulin-osztályba

ja

ellen­

A Strongy-

lárváival immunizált n y u l a k

termelődő h o m o c y t o t r o p

E dolgozatban

fluo-

g l o b u l i n h o z /64/, a

folyamán a n y u l a k

produkálnak. A vérsavók

invázió­

IgG tipusu

precipitin-ak-

tivitásában és a k i m u t a t o t t mában n a g y e g y e d i ható, h o g y

különbségeket

a z eltérő

egyedi

faktorokból adódóan a z lenanyagválasza zekre

nem

primer

galandférgek

szekunder

fertőzésre a d o t t e l ­ T e k i n t e t nélkül e-

lehetett

azonosítani, akár a cysticercusok

antigénjeiket

kifej­

sóoldatos

használtuk a z e l ­

eredményei összhangban v a n n a k

LUPASCO e t a l . / 4 7 /

megállapításaival, a k i k a T r i c h i n e l l a - e l l e n e s általunk i s a l k a l m a z o t t szintén c s a k nyulak

idő­

kimutatására.

Vizsgálataink

/28/

hordozó s e -

fertőzöttség bármelyik

v a g y a fertőzőképes

kivonatát, akár a " m e t a b o l i c u s " lenanyagok

a

a precipitálo e l l e n a n y a g o k a t és

szá­

észleltünk, a m i a z z a l magyaráz­

egyes n y u l a k n a k

szakában a z I g G g l o b u l i n n a l lett

rendszerek

reagálóképességből és ' talán más

szükségszerűen a z o n o s .

a különbségekre

rumfehérjét a

antigén-ellenanyag

az I g G g l o b u l i n b a n

vérsavójának

analizise

a Stronqyloides

geser. immunizált béta-globulinok

során.

Ezzel

vérsavójában a

területén

módszerrel úgy­

tudták lokalizálni a fertőzött

papillosus filariform

nyulak

p r e c i p i t i n e k e t az

immunelektroforetikus

i sk i tudott

ellentétben

GEYER

lárváival mestersé­

g a m m a g l o b u l i n o n kivül a precipitineket

mutatni

az I g G - és az I g M - e l l e n a n y a g o k

egyaránt

u g y a n e z z e l a technikával.

Irodalmi

adatok

szerint

képesek precipitációt előidézni, az I g G t i p u s u a k hatásosabb p r e c i p i t i n e k , pl.

mint

azonban

sokkal

az IgM t i p u s u e l l e n a n y a g o k

/lásd

9,30,46,49,58,61,62,63,69,82,87/.

vérsavókban kimutatható

mennyiségben

tipusu

ugy

precipitinek

kettős d o m b o r u l a t u ,

is,

azonos

fordultak

z o n b a n s o h a nem t u d t u n k magas precipitin-titerü

volna

i v e k képződtek v o l n a

során. I l y e n

elő I g M esetén pedig

a vérsa­

szemben végzett immun­ precipitációs i v e k e t a-

- még a mesterségesen immunizált

nyulak

vérsavóinak vizsgálatakor sem - m e g f i ­

IgM t i p u s u p r e c i p i t i n e k e t

rült a vérsavókban k i m u t a t n u n k ,

valószinüleg azért nem s i k e ­

m e r t i l y e n e k a fertőzés

lyása során egyáltalán nem,

v a g y csak o l y a n

ben

maradt

termelődtek,

vizsgált

antigénspecifitás

e g y e s antigénkészitményekkel

e l e k t r o f orézises a n a l i z i s e

gyelni.

általunk

különböző antigénspecifitás esetében

egymást keresztező precipitációs vóknak a z

Ha a z

ami a l a t t a

kicsiny

az a l k a l m a z o t t

lefo­

mennyiség­ módszerrel

kimutatható l e g k i s e b b

ellenanyag-mennyiségnek. Ennek

a z o n b a n még további vizsgálatokat

tisztázása

igényel.

össze foglalás A Taenia

p i s i f o r m i s /Bloch,

a Cysticercus

1 7 8 0 / , G m e l i n , 1 7 9 0 lárvaalakjával,

pisiformis /Bloch,

l780/-szal

kísérletileg

tőzött n y u l a k b a n a fertőzésre a d o t t immunválasz folyamán lődő i m m u n p r e c i p i t i n e k

lokalizációját vizsgálták

elektroforézissel a p r i m e r fertőzöttség

fertőzöttség

agargél-immun-

első 100 és a s z e k u n d e r

első 40 napján á t .

Hat-hét h e t e s

korú, 7 0 0 - 9 0 0 g s u l y u n y u l a k a t

p i s i f o r m i s - p e t ével

fertőztek

csoportját 60 nap múlva

szájon á t ,

géldiffuziós

vett

technikával p r e c i p i t i n e k

a T. p i s i f o r m i s és a C. p i s i f o r m i s

antigén"-jeit

egyedenként

majd

500 T.

az állatok e g y

10 0 0 0 petével ujrafertőzték. A fertő­

zések után különböző időpontokban

ták,

fer­ terme­

és a sóoldatos t e l j e s

vérsavókat

kettős

agar-

jelenlétére megvizsgál­ "secretiós és

excretiós

kivonatát a l k a l m a z v a

anti­

génekként .

Ismert

precipitin-aktivitásu

tizáltak, m a j d vérsavó e l l e n

e z t követően

vérsavókat

agargélben

féregantigénekkel és t e l j e s

ható kecskeimmunsavóval,

juhimmunsavóval

szemben diffundáltattak.

gált vérsavóban

az I g G g l o b u l i n

kultak

k i precipitációs i v e k

nyekkel

szemben.

Ugy látszik, h o g y dott gok

válaszként

vagy

nyul­

anti-nyulglobulin

Valamennyi

megvizs­

pozíciójának megfelelően

az a l k a l m a z o t t

a T. pisiformis-oncosphaerák

a nyulak

elektrofore-

által produkált

az I g G immunglobulin-osztályhoz

ala­

antigénkészitmé-

inváziójára

p r e c i p i t á l o

kapcsolódnak.

a-

ellenanya­

NÉMETH, I . : Studies on Humoral Antibodies in Experimental Infections of Rabbits with Cysticercus pisiformis (Bloch, 1780) I I . Localization of Precipitating Antibodies by Immunoelectrophoresis Localization

of

immunoprecipitins

immune r e s p o n s e t o e x p e r i m e n t a l s i fo r m i s /Bloch,

/Bloch,

the f i r s t

Rabbits, orally

6-7 weeks o l d ,

with

collected

form

of

first

500 eggs o f with

weighing

Taenia

pisiformis

100 d a y s o f p r i m a r y

infection

infection. 7 0 0 - 9 0 0 g w e r e each

infected

a n d a g r o u p o f them

60 d a y s l a t e r .

by a g a r g e l d o u b l e

diffusion

a n d e x c r e t i o n s " and w h o l e s a l i n e

pisiformis

and C y s t i c e r c u s

S e r a o f known p r e c i p i t i n

Serum s a m p l e s

r e s i s i n agar,

and s u b s e q u e n t l y to rabbit

antiserum

technique

a g a i n s t worm

bit

g l o b u l i n s . With

the

antigenic preparations at the position

appears that response

precipitin

the p r e c i p i t a t i n g

associated with

lines

developed

antigens,

pisiformis

t h e IgM immunoglobulin

to rab­ against

o f IgG g l o b u l i n . I t

a n t i b o d i e s produced

to i n v a s i o n t o Taenia

Tae­

to electropho­

w h o l e serum o f sheep a n t i s e r u m

a l l sera

"sec­

as a n t i g e n s .

were s u b m i t t e d

diffused

using

e x c t r a c t s o f both

pisiformis

activity

goat

in

i n the

b y a g a r g e l immuno-

Taenia p i s i f o r m i s ,

10 0 0 0 e g g s

rabbits

Cysticercus p i -

a t f r e q u e n t i n t e r v a l s were t e s t e d f o r t h e presence o f

precipitins

nia

during the

40 d a y s o f s e c o n d a r y

was r e i n f e c t e d

retions

1780/, t h e l a r v a l

with

1 7 8 0 / G m e l i n , 1 7 9 0 , was s t u d i e d

electrophoresis and

produced by

infection

by

rabbits

oncosphaeres

are

D r . NÉMETH

István

class.

Érkezett: 1 9 7 2 . I I . 1 0 . MTA

Állategészségügyi Kutató Intézete

B u d a p e s t , X I V . Hungária k r t . 2 1 .