DR. GAÁL KRISZTINA DE-OEC I.BELGYÓGYÁSZATI KLINIKA
A DISZFUNKCIONÁLIS HDL MEGHATÁROZÁSA ÉS JELENTŐSÉGE KRÓNIKUS GYULLADÁSBAN
A PROTEKTÍV HDL ÁTALAKULÁSA PROINFLAMMATORIKUS HDL MOLEKULÁVÁ I. NORMÁL HDL
PROINFLAMMATORIKUS HDL
Reverz koleszterin transzport:
Károsodott reverz koleszterin transzport:
- A HDL molekulán található apoA-I és más lipoproteinek az érfalban, macrophagokban és a perifériás sejtekben lévő felesleges koleszterint transzportálják más lipoproteinekre és a májba újrahasznosítás illetve kiürítés céljából.
- Klorin-, nitrogén-, és oxigén gyökök hatására az ApoA-I funkciója károsul. - A gyulladás miatt csökken a lipoprotein szintézis.
Antioxidatív hatás:
Prooxidatív hatás:
- Elsősorban a PON 1, LCAT, PAF-AH és a glutationperoxidáz fejti ki.
- A módosult ApoA-I inaktiválja a PON 1-t. - Az enzimek szintézise a gyulladás miatt csökken. - A HDL-hez prooxidáns hatású SAA és cöruloplazmin kötődik.
Antiinflammatórikus hatás:
Proinflammatórikus hatás:
-Megakadályozza az oxLDL és más proinflammatórikus lipidek oxidációját. - Megakadályozza az endothel sejtek MCP-1 és más kemotaktikus molekulák expresszióját. - Csökkenti a T-sejtek és a monocyták közti kölcsönhatást.
- Elsősorban az LDL oxidációt segíti elő.
A PROTEKTÍV HDL ÁTALAKULÁSA PROINFLAMMATÓRIKUS HDL MOLEKULÁVÁ I.
A PROINFLAMMATÓRIKUS HDL KIMUTATÁSA – AZ LDL LAG TIME-JÁNAK MÉRÉSE RÉVÉN I.
LAG TIME - LDL
Abszorbancia (405 nm)
0,35 0,3 0,25 0,2
Lag time = 68 perc
Vmax
0,15 0,1 0,05 0 0
30
60
90 Idő (perc)
120
150
180
A PROINFLAMMATÓRIKUS HDL KIMUTATÁSA – AZ LDL LAG TIME-JÁNAK MÉRÉSE RÉVÉN II.
Abszorbancia (405 nm)
LAG TIME - EGÉSZSÉGES HDL 0,35 0,3 0,25 Lag time HDL = 125% (86 perc) Vmax HDL 0,2 Lag time LDL = 100% (68 perc) Vmax LDL 0,15 0,1 0,05 0 0
30
60
90
120
Idő (perc) LDL
Egészséges HDL
150
180
A PROINFLAMMATÓRIKUS HDL KIMUTATÁSA – AZ LDL LAG TIME-JÁNAK MÉRÉSE RÉVÉN III. LAG TIME - DISZFUNKCIONÁLIS HDL Abszorbancia (405 nm)
0,4 0,35 0,3 0,25 0,2
Lag time HDL = 102% (70 perc) Lag time LDL = 100% (68 perc)
Vmax HDL Vmax LDL
0,15 0,1 0,05 0 0
30
60
90
120
Idő (perc) LDL
Diszfunkcionális HDL
150
180
A PROINFLAMMATÓRIKUS HDL KIMUTATÁSA – AZ LDL LAG TIME-JÁNAK MÉRÉSE RÉVÉN IV. LAG TIME - PROINFLAMMATÓRIKUS HDL
Abszorbancia (405 nm)
0,4 0,35 0,3
Vmax HDL Lag time HDL = 73,5% (50 perc)
0,25 Lag time LDL = 100% (68 perc)
Vmax LDL
0,2 0,15 0,1 0,05 0 0
30
60
LDL
90 Idő (perc)
120
Proinflammatórikus HDL
150
180
A MÓDSZER MEGBÍZHATÓSÁGA: LAG TIME ÉS KONJUGÁLT DIÉN KÉPZŐDÉS MÉRÉSE 0.36
1.7
0.34 0.32
1.6
0.30 1.5 0.28 1.4 0.26 1.3
Lag time LDL – 133 perc (100%)
0.24
1.2 0.22 1.1
0.20
1.0
0.18
0.9
0.16 200
0
20
40
60
80
100
120
Idő (perc)
140
160
180
Hem degradáció (abszorbancia 405 nm)
Konjugált dién (abszorbancia 234 nm)
LDL oxi dáci ó m agában 1.8
konj ugál t di én hem degradáci ó
KONJUGÁLT DIÉN KÉPZŐDÉS ÉS LAG TIME EGÉSZSÉGES HDL JELENLÉTÉBEN 3.0
0.40
2.8
0.38
Konjugált dién (abszorbancia 234 nm)
2.6
0.36
2.4 0.34 2.2 0.32 2.0 0.30
1.8 Lag time egészséges HDL – 152 perc (114,3%)
0.28 1.6 0.26
1.4 1.2
0.24
1.0
0.22 200
0
20
40
60
80
100
120
Idő (perc)
140
160
180
Hem degradáció (abszorbancia 405 nm)
LDL oxi dáci ó egészséges HDL j el enl étében
konj ugál t di én hem degradáci ó
KONJUGÁLT DIÉN KÉPZŐDÉS ÉS LAG TIME PROINFLAMMATÓRIKUS HDL JELENLÉTÉBEN LDL oxi dáci ó RA beteg HDL j el enl étében 4.5
0.38 0.36 0.34
3.5 0.32 3.0
0.30
2.5
0.28
Lag time proinflammatórikus HDL – 118 perc (88,7%)
0.26
2.0 0.24
Hem degradáció (abszorbancia 405 nm)
Konjugált dién (abszorbancia 234 nm)
4.0
1.5 0.22 1.0 0
20
40
60
80
100
120
Idő (perc)
140
160
180
0.20 200
konj ugál t di én hem degradáci ó
A LAG TIME ÉS A HDL KONCENTRÁCIÓ KAPCSOLATA I.
Abszorbancia (405 nm)
LAG TIME KÜLÖNBÖZŐ HDL KONCENTRÁCIÓK MELLETT 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 0
30
60
90
120
150
Idő (perc) LDL
200 ug/ml
150 ug/ml
100 ug/ml
50 ug/ml
180
A LAG TIME ÉS A HDL KONCENTRÁCIÓ KAPCSOLATA II.
Lag time (%)
LAG TIME A HDL KONCENTRÁCIÓ FÜGGVÉNYÉBEN 140 120 100 80 60 40 20 0
R2 = 0,8904
R2 = 0,9764
0
50
100
150
200
Koncentráció (ug/ml) Egészséges HDL
RA beteg HDL
Lineáris (RA beteg HDL)
Lineáris (Egészséges HDL)
250
A PROINFLAMMATORIKUS ILLETVE A DISZFUNKCIONÁLIS HDL ELŐFORDULÁSA KÜLÖNBÖZŐ MEGBETEGEDÉSEKBEN Krónikus szisztémás gyulladással járó állapotokban:
Akut szisztémás gyulladással járó állapotokban:
• •
• •
• • • • • • • •
Koronáriabetegség Rosszul kontrolált 2. típusú diabetes mellitus Metabolikus szindróma Szisztémás lupus erythematosus Rheumatoid arthritis Szisztémás sclerosis Crohn-betegség Krónikus veseelégtelenség Alvási apnoe Szívtranszplantáción átesettek
Sebészeti beavatkozás Influenza vírus infekció
Proinflammatorikus HDL és gyulladásos paraméterek vizsgálata rheumatoid arthritisben
• • •
Betegek: 10 fő (8 nő és 2 ffi) Kezelés: havonta sc. inj. formájában 6 hónapig TNF- gátló (golimumab) Kezelés eredményességének követése: 0., 1., 3., 6. hónapban laboratóriumi vizsgálatok és a betegségaktivitást értékelő klinikai tesztek (DAS28, ACR20, ACR50, ACR70)
• Célok: - TNF- gátló kezelés hatásának vizsgálata a betegség aktivitásra - A betegség aktivitás és a proinflammatorikus HDL előfordulása valamint a PON1 aktivitás közötti kapcsolat vizsgálata - A proinflammatorikus HDL és a kialakulásában szerepet játszó tényezők (myeloperoxidáz – MPO; szérum amyloid A – SAA) közötti asszociáció meghatározása
Beteg és kontrol karakterisztika I. Betegek
Kontrolok
P
Létszám (fő)
10
12
-
Átlagéletkor (év)
45,3
46,6
NS
BMI
25,1
25,8
NS
dohányzik (fő)
1
3
NS
hypertonia (fő)
4
4
NS
diabetes (fő)
1
1
NS
0
0
NS
Sys RR (Hgmm)
133
124
NS
Dias RR (Hgmm)
84,9
75,8
0,007
anamnézisben cardiovascularis ill. cerebrovascularis történés (fő)
Beteg és kontrol karakterisztika II.
Betegek
Kontrolok
P
Összkoleszterin (mmol/l)
5,05
5,03
NS
LDL (mmol/l)
3,12
2,83
NS
HDL (mmol/l)
1,71
1,55
NS
TG (mmol/l)
1,08
1,23
NS
ApoA1 (g/l)
1,85
1,55
0,057
ApoB (g/l)
0,76
0,76
NS
Lp(a) (mg/l)
397,57
218,36
NS
CRP (mg/l)
8,40
1,87
0,002
anti-CCP (U/l)
212,33
7,72
NS
vWF Ag (%)
169,80
122,40
0,044
Betegek és kontrolok általunk mért paraméterei Betegek
Kontrolok
P
PON aktivitás (U/l)
116,24
117,16
NS
Só stimulált PON aktivitás (U/l)
221,55
209,98
NS
Aryl-észteráz aktivitás (U/l)
122,04
123,77
NS
PON/aryl
0,94
0,89
NS
Só/aryl
1,8
1,6
NS
PON fenotípus
AA
AA
NS
MPO aktivitás
1136,28
606,37
0,118
MPO/PON
14,25
7,47
NS
MPO/aryl
9,7
4,87
0,081
PON/HDL-C
76,217
78,76
NS
PON/aryl/HDL-C
0,616
0,6002
NS
Trendvonalak meredeksége
0,0016
0,0125
NS
LAG TIME (%)
100,75
103,09
NS
SAA (ng/ml)
73,79
56,28
0,030
A gyulladás klinikai és laboratóriumi paramétereinek változása a kezelés során DAS28 változása a kezelés során
25
6
20
5
15
4
DAS28
CRP (mg/l) ill. We (mm/óra)
CRP és We a kezelés során
10
3 2
5
1
0 0
1
2
3
4
5
6
7
0
Kezelési hónap CRP
0
1
3
4
5
6
7
6
7
Kezelési hónapok
We
ACR változása a kezelés során
HAQ-DI változása a kezelés során 1,4 ACR kritériumot teljesítő betegek aránya (%)
90
1,2 1
HAQ-DI
2
0,8 0,6 0,4 0,2
80 70 60 50 40 30 20 10 0 0
0 0
1
2
3
4
Kezelési hónapok
5
6
7
1
2
3
4
5
Kezelési hónap ACR20
ACR 50
ACR70
A HDL antioxidáns kapacitásának változása a kezelés során PON1 aktivitás változása a kezelés során
A PON1 specifikus aktivitásának változása a kezelés során
250
Specifikus aktivitás
150 100 50
0,95 0,9 0,85 0,8 0,75 0,7 0,65 0,6
0 0
1
2
3
4
5
6
0
7
1
2
PON aktivitás
3
4
5
Kezelési hónapok
Kezelési hónapok Sóval stimulált PON aktivitás
Aryl-észteráz aktivitás
PON/aryl
Trendvonalak meredekségének változása a kezelés során Trendvonalak meredeksége
Enzimaktivitás (U/l)
1 200
0,025 0,02 0,015 0,01 0,005 0 0
1
2
3
4
Kezelési hónapok
5
6
7
PON/aryl/HDL-C
6
7
A HDL funkciót befolyásoló tényezők változása a kezelés hatására MPO aktivitás változása a kezelés során
SAA mennyiségének változása a kezelés során 80 70
1000
60 800
SAA (ng/ml)
MPO aktivitás (ng/ml)
1200
600 400
50 40 30 20
200
10 0
0 0
1
2
3
4
5
6
0
7
1
2
4
5
6
7
Egységnyi HDL-en levő SAA mennyiségének változása a kezelés során
Pro- és antioxidáns enzimek arányának változása a kezelés során 18 SAA/HDL-C (ug/mmol)
16 14
MPO/PON
3
Kezelési hónapok
Kezelési hónapok
12 10 8 6 4 2
50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
0 0
1
2
3
4
Kezelési hónapok
5
6
7
0
1
2
3
4
Kezelési hónapok
5
6
7
Korrelációk I.: Betegség aktivitás és gyulladásos markerek DAS28 és SAA - Betegek
DAS28 és vWF Ag - Betegek
90
300
80
250
60
vWF Ag (%)
r = 0,4889
50 40 30 20
200 r = 0,4398
150 100 50
10
0
0 0
1
2
3
4
5
6
7
0
8
2
4 DAS28
DAS28
CRP és SAA - Betegek 120 100 r = 0,4687
SAA (ng/ml)
SAA (ng/ml)
70
80 60 40 20 0 0
10
20 CRP (mg/l)
30
40
6
8
Korrelációk II.: HDL funkció, szerkezet és enzimek PON és Trendvonalak meredeksége - 3. hó
PON/Aryl/HDL és trendvonalak meredeksége - 3. hó
0,08
0,1
0,06
0,08
0,04
0,06
0,02 r= 0,6216
0 -0,020,00
50,00
100,00
150,00
200,00
Trendvonalak meredeksége
Trendvonalak meredeksége
0,1
-0,04
0,04
r= 0,4398
0,02 0 -0,02 0
0,5
1
1,5
2
-0,04 -0,06
-0,06
PON/Aryl/HDL
PON (U/l)
PON/HDL és MPO - 1. hó
PON/HDL és SAA - 1.hó 250
85
200
75 70
PON/HDL
SAA (ng/ml)
80
r = -0,7760
65 60 55 50
r= -0,9272
150 100 50
45 40
0
0
50
100
150 PON/HDL
200
250
0
500
1000 MPO (ng/ml)
1500
2000
Korrelációk III.: Betegség aktivitás és HDL funkció
DAS28 és PON/aryl/HDL-C - Betegek
3,5
1,4
3
1,2
PON/Aryl/HDL
HDL-C (mmol/l)
DAS28 és HDL-C - Betegek
2,5 2
r= 0,01
1,5 1
1 r =- 0,4743
0,8 0,6 0,4 0,2
0,5
0
0 0
2
4 DAS28
6
8
0
2
4 DAS28
6
8
A terápiára adott válasz: responderek és non-responderek
Responderek
Non responderek 2
1,4
1,8
1,2 1,6 1,4 PON/aryl/HDL
PON/aryl/HDL
1
0,8
0,6
1,2 1 0,8 0,6
0,4
0,4
0,2 0,2
0
0
0
1
2
3
4
5
R4
R5
R8
R10
7
0
1
2
3
4
Kezelési hónap
Kezelési hónap R1/2
6
R11
R3
R6
R9
R12
5
6
7
Összefoglalás
•
•
•
Rheumatoid arthritisben a TNF- gátló golimumab alkalmazása eredményesen csökkentette a gyulladás hagyományos klinikai és laboratóriumi paramétereit továbbá az MPO és SAA szintjét. Az aktív gyulladásos tüneteket mutató RA-s betegeknél a HDL a betegek közel felében diszfunkcionális és a funkcionális deficit mértéke korrelál a gyulladás súlyosságával. A golimumab kezelés hatására a gyulladás csökkenésével párhuzamosan javult a HDL antioxidáns aktivitása.
Köszönöm a figyelmet!
