A CYP3A7*1C-polimorfizmus hatása a csont ásványanyag-tartalmára posztmenopauzás nôkben

10pt_OH_2007_27_1tordelt

6/26/07

7:43 AM

Page 1273

n

EREDETI KÖZLEMÉNYEK

n

A CYP3A7*1C-polimorfizmus hatása a csont ásványanyag-tartalmára posztmenopauzás nôkben BÁCSI KRISZTIÁN DR., KÓSA JÁNOS, LAZÁRY ÁRON DR., BALLA BERNADETT, HORVÁTH HENRIK DR., TAKÁCS ISTVÁN DR., NAGY ZSOLT DR., SPEER GÁBOR DR.* és LAKATOS PÉTER DR.* Semmelweis Egyetem, Általános Orvostudományi Kar, I. Belgyógyászati Klinika, Budapest

A CYP3A7-enzim részt vesz a dehidroepiandroszteron-szulfát metabolizációjában. Kimutatták, hogy CYP3A7*1C-mutáció esetén férfiakban alacsonyabb a dehidroepiandroszteron-szulfát-szint, és ismert az is, hogy a dehidroepiandroszteronszulfát-koncentráció csökkenése csontritkuláshoz vezethet. Célkitûzés: A szerzôk a CYP3A7*1C-polimorfizmus, a dehidroepiandroszteron-szulfát-szérumszint és a csont ásványanyag-tartalmának együttes vizsgálatát tûzték ki célul, 319 posztmenopauzás nôben. Eredmények: A homozigóta CYP3A7*1C-genotípus esetén a vad típushoz képest szignifikánsan alacsonyabb lumbális gerinccsontdenzitást tapasztaltak (homozigóta mutáns T-score: –3,27 ! 1,02, vs vad típus: –1,35 ! 1,53; p = 0,041). Szignifikáns maradt a kapcsolat a menopauzális kor, szérum-dehidroepiandroszteron-szulfátszint, az alkoholfogyasztás, a korábbi szteroidkezelés, dohányzás és megelôzô csonttörés figyelembevétele után is. Nem volt viszont összefüggés a CYP3A7-genotípus és a dehidroepiandroszteron-szulfát-koncentráció között. Következtetés: A CYP3A7 polimorfizmusa a lumbális gerincen mért csontsûrûség csökkenéséhez vezet, mely hatás független a szérumdehidroepiandroszteron-szulfát-szinttôl. Kulcsszavak: osteoporosis, dehidroepiandroszteron-szulfát, CYP3A7, polimorfizmus

Impact of CYP3A7*1C polymorphism on bone mineral content in postmenopausal women. Introduction: CYP3A7*1C polymorphism has been shown to be associated with lower levels of serum dehydroepiandrosterone sulphate in men. The age-related decline of dehydroepiandrosterone sulphate levels is believed to contribute to the development of osteoporosis. We hypothesized that CYP3A7*1C may lead to bone loss through decreased levels of dehydroepiandrosterone sulphate in postmenopausal women. Patients and methods: 319 postmenopausal women were studied and divided into two subgroups: 217 women with osteoporosis and 102 aged-matched women without osteoporosis. The CYP3A7*1C polymorphism was genotyped. Serum dehydroepiandrosterone sulphate levels and bone mineral density were measured. Results: Homozygous CYP3A7*1C carriers had significantly lower bone mineral density at lumbar spine than that of wild type (T-score with CYP3A7*1C mutant type: –3,27 ! 1,02, T-score with wild type: –1,35 ! 1,53, p = 0.041) after adjusting for age and DHEAS levels. No association was found between genotypes and dehydroepiandrosterone sulphate levels. Conclusion: Our data suggest that CYP3A7 polymorphism might have an influence on bone mass at the lumbar spine independently of serum dehydroepiandrosterone sulphate concentrations. Keywords: osteoporosis, DHEAS, CYP3A7, bone mineral density, genetic polymorphism (Beérkezett: 2007. február 14.; elfogadva: 2007. április 23.)

Rövidítések ANOVA = varianciaanalízis; BMD = csontásványanyag-sûrûség; BMI = testtömegindex; CV = variációs koefficiens; DHEA = dehidroepiandroszteron; DHEAS = dehidroepiandorszteron-szulfát; SD = szórás; TAE = Tris-acetát-EDTA

* a két szerzô szerepe egyenértékû

DOI: 10.1556/OH.2007.28102

n

A citokróm P450-enzimcsalád exogén és endogén szubsztrátok oxidációjáért és a szteroid hormonok metabolizmusáért felelôs [1, 2]. Legjelentôsebb tagja a CYP3A, amely az összes hepaticus P450-enzim 30%-át teszi ki [3]. A 7q21-q22-es kromoszómarégióban lokalizálódik, több izoformája ismert, a CYP3A4, CYP3A5, CYP3A7 és CYP3A43 [5, 6, 7, 8]. A CYP3A7 elsôsorban a foetalis májban expresszálódik, és az életkor elôrehaladtával szintje fokozatosan csökken. A felnôttkorban mérhetô CYP3A7 mRNS mennyisége a foeta-

1273

n

2007 n 148. évfolyam, 27. szám n 1273–1280.


6/26/07

7:43 AM

Page 1274

n


lisnak csupán 1,7%-a [9]. Kimutatták, hogy a CYP3A7*1C mutáció esetén az enzim expressziója nem csökken, egész életen át magasabb szinten marad [10]. A CYP3A7 katalizálja mind a dehidroepiandroszteron (DHEA), mind a dehidroepiandroszteron-szulfát (DHEAS) 16α-hidroxilációját [1]. Gyengébb, a 17β-ösztradiolt és az ösztront 2-hidroxiláló, míg jelentôsebb az ösztron 16α- és 6βhidroxiláló aktivitása. Egyéb szubsztrátjai a tesztoszteron (2βhidroxiláció, 6β-hidroxiláció) [12] és az androszténdion (6βhidroxiláció) [6]. Smit és munkacsoportja [13] szignifikáns különbséget talált a szérum-DHEAS-szintekben a CYP3A7 vad típusa és a mutáns allélt (CYP3A7*1C-) hordozók között, azaz a felnôttkorban is megmaradt magasabb CYP3A7-expresszió (CYP3A7*1C-allél esetén, a fokozott hormon-metabolizmus miatt) alacsonyabb DHEAS- (és ösztron-) koncentrációt eredményezett. Hasonló összefüggést más CYP3A7-szubsztráttal – mint az ösztradiollal, illetve a tesztoszteron és az androszténdion esetén – nem tudtak igazolni. A DHEAS a legjelentôsebb ösztrogén- és androgénforrás posztmenopauzás nôkben [14]. Az életkor elôrehaladtával a DHEAS progresszív csökkenése a csontanyagcsere megváltozását, csontritkulás kialakulását eredményezheti [15]. Feltételeztük, hogy a mutáns CYP3A7-variáns (a CYP3A7*1C), a csökkent DHEAS-szinten keresztül fokozott kockázatot jelent

n

az osteoporosis kialakulására. Kutatásunk célja ezért, hogy jellemezze a kapcsolatot a CYP3A7*1C-allél, a DHEAS-szint és a csontásványianyag-tartalom (bone mineral density, BMD) között posztmenopauzás nôkben.

Résztvevôk és módszerek Betegek Munkánkban két csoportba osztva 319 posztmenopauzás nôt vizsgáltunk. A betegcsoportba osteoporosisban szenvedô nôk kerültek (n = 217, átlagéletkor 68 év (47–87), femoralis nyak vagy lumbális gerinc-T-score < –2,5). A kontrollcsoportot normális lumbális gerinc és femoralis nyaki csontdenzitással (T-score > –1,0) rendelkezô résztvevôk alkották (n = 102, átlagéletkor 55 év (40–75)). Vizsgáltuk a csontritkulást befolyásoló tényezôket, mint a menopauzális kort, dohányzást, alkoholfogyasztást, napi kalciumbevitelt, szteroidkezelést és a korábbi csonttörés meglétét (1. táblázat). Kizártuk a résztvevôt a csontmetabolizmust befolyásoló gyógyszerek szedése vagy betegségek esetén. Mind a beteg-, mind a kontrollcsoport tagjai klinikánk Endokrin Ambulanciájáról kerültek ki. A résztvevôk tájékoztatás után írásban adták hozzájárulásukat a vizsgálathoz, amelynek kivitelezésére etikai engedéllyel rendelkeztünk.

1a. táblázat Klinikai jellemzôk, BMD, CYP3A7 genotípusok a beteg- és kontrollcsoportban Betegek (n = 217)

Kontrollok (n = 102)

Teljes (n = 319)

p*

átlag ! szórás vagy esetszám (%)

Klinikai jellemzôk Kor (év)

68,84 ! 6,76

55,59 ! 8.52

64,62 ! 9.60

< 0,005

Menopauzális kor (év)

19,05 ! 9,52

5,27 ! 7,07

14,83 ! 10,88

< 0,005

Magasság (cm)

155,58 ! 7,04

162,88 ! 6,44

157,68 ! 7,62

< 0,005

Testtömeg (kg)

68,49 ! 11,13

74,78 ! 13,82

70,30 ! 12,27

< 0,005

30,93 ! 10,04

35,44 ! 13,66

32,23 ! 11,36

< 0,005

Dohányzás

30 (14%)

21 (21%)

51 (16%)

NS

Alkoholfogyasztás

23 (11%)

19 (19%)

42 (13%)

0,027

Korábbi szteroid

5 (2%)

11 (11%)

16 (5%)

< 0,005

Napi kalciumbevitel (mg)**

628 ! 75

636 ! 90

631 ! 95

NS

Korábbi csonttörés

70 (32%)

22 (22%)

92 (28%)

NS

Lumbalis gerinc Z-score

–0,60 ! 1,13

1,03 ! 0,81

–0,08 ! 1,29

< 0,005

Lumbalis gerinc T-score

–2,15 ! 1,15

0,27 ! 0,76

–1,37 ! 1,54

< 0,005

Femorális nyak Z-score

–0,23 ! 0,74

0,89 ! 0,80

0,13 ! 0,93

< 0,005

Femorális nyak T-score

–1,66 ! 0,85

0,28 ! 0,79

–1,04 ! 1,23

< 0,005

3,9

1,5

3,2

NS

2,04 ! 1,20

3,67 ! 2,48

2,57 ! 1,88

< 0,005

2

BMI (kg/m )

BMD

Genotípus és hormonszint CYP3A7*1C allél frekvencia (%) DHEAS (µmol/l)

* p = group 1. vs group 2., ** osteoporosis kezelése elôtt; NS = nem szignifikáns; BMI = testtömegindex, BMD = csontásványanyag-sûrûség, DHEAS: dehidroepiandroszteron-szulfát

2007 n 148. évfolyam, 27. szám

n

1274

n

ORVOSI HETILAP


6/26/07

7:43 AM

Page 1275

n


n

1b. táblázat Klinikai jellemzôk, BMD, DHEAS szint a különbözô CYP3A7 genotípusokban CYP3A7/ CYP3A7 (n = 300)

CYP3A7*1C/ CYP3A7 CYP3A7*1C/ CYP3A7*1C (n = 14) (n = 3)

p

átlag ! szórás vagy esetszám/ vizsgált résztvevô

Klinikai jellemzôk Kor (év)

64,54 ! 9,77

64,71 ! 7,71

70,33 ! 1,16

NS


14,75 ! 11,05

14,13 ! 5,87

23,67 ! 3,52

NS

Magasság (cm)

157,58 ! 7,68

161,58 ! 6,32

153,33 ! 2,52

NS

Testtömeg (kg)

70,44 ! 12,49

69,04 ! 8,68

64,10 ! 7,10

NS

BMI (kg/m2)

32,39 ! 11,58

29,90 ! 7,34

26,96 ! 5,67

NS

Dohányzás

48/261

3/8

0/3

NS

Alkoholfogyasztás

40/261

1/8

1/3

NS

Szteroid kezelés

15/261

1/8

0/3

NS

Csonttörés

87/261

3/8

2/3

NS

Lumbális gerinc Z-score

–0,06 ! 1,27

–0,03 ! 1,54

–1,60 ! 0,96

0,047*

Lumbális gerinc T-score

–1,35 ! 1,53

–1,43 ! 1,70

–3,27 ! 1,02

0,038*

Femorális nyak Z-score

–0,15 ! 0,93

-–0,01 ! 0,81

–0,4 ! 0,26

NS

Femorális nyak T-score

–1,01 ! 1,24

–1,21 ! 1,02

–1,93 ! 0,21

NS

2,61 ! 1,92

1,93 ! 0,99

2,51 ! 1,25

NS

BMD

HormonszintDHEAS (µmol/l)

* menopauzális kor, DHEAS koncentráció, alkoholfogyasztás, korábbi szteroidkezelés, dohányzás, csonttörés figyelembevétele után, NS = nem szignifikáns; BMI = testtömegindex, BMD = csontásványanyag-sûrûség, DHEAS = dehidroepiandroszteron-szulfát

CYP3A7*1C genotipizálás

Szérum-DHEAS-szint mérése

Genomiális DNS izolálásához Magnesil KF rendszert (Promega, Madison, WI, USA) használtunk. A T167G-variánst Smit és munkacsoportja [13] nyomán a következô módosításokkal a restrikciós fragmentumok hosszának elemzésével vizsgáltuk. Oligonukleotid forward primert (5’-TCTCCTCTTGTCTCTATGG-3’) és reverz primert (5’-CTGAGTCTTTTTTTCAGCAGC-3’) használtunk a 370 bp-t tartalmazó CYP3A7 gén amplifikálásához. PCR-reakciót végeztünk 25 µl végtérfogatban a következôk szerint: 2 µl genomikus DNS (50 ng/µl), 12,5 µl 2 # PCR Master Mix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), 0,5 µl reverz és 1 µl forward primer (10 pmol/µl) (Sigma-Genosys, Woodlands, Texas, USA) és 9 µl „ultra pure” víz. Kezdeti denaturáló ciklus (94 °C, 5 perc) után 40 amplifikáló ciklust (94 °C, 30s; 50 °C, 30 s; 72 °C, 30s) és egy befejezô polimerizációs ciklust végeztünk (72 °C, 5 perc). 17,5 µl PCR terméket 2 órán át, 37 °C-on emészttettünk 20 µl végtérfogatban 10 # restrikciós puffer és 5 egység SspI (Promega, Madison, WI, USA) restrikciós enzim segítségével. Az eredményeket horizontális Tris-acetát-EDTA (TAE)-agaróz gélelektroforézis és Fluorochem 8900 imaging system (Alpha Innotech, San Leandro, CA, USA) útján kvantifikáltuk. A vad típusú allél esetén egy SspI hasítási hely két, 244 és 126 bp hosszúságú fragmentet eredményezett. Ugyanakkor a CYP3A7*1C-allél esetén a hasítási hely hiányában megmaradt a 370 bp nagyságú DNS-szakasz.

A DHEAS-koncentrációt elektrokemilumineszcens immunoassay-el (Roche, Mannheim, Németország) határoztuk meg laboratóriumunkban. A méréssorozaton belüli (intraassay) és méréssorozatok közötti (interassay) variációs koefficiensek (coefficient of variation, CV) 3,2% és 2,7% alatt voltak az alacsony, normális és emelkedett szérumszintek esetén egyaránt. A DHEAS életkor szerinti referenciatartományai a következôk: 15–44 év: 1,6–11,0 µmol/l; 45–74 év: 0,3–7,0 µmol/l; > 75 év: 0,3–4,2 µmol/l.

ORVOSI HETILAP

n

Oszteodenzitometria A gerinc (lumbális gerinc 2–4) és femorális nyak csontásványianyag-sûrûséget (BMD) dual energy X-ray abszorpciometriával (Lunar Prodigy, GE Medical Systems, Diegem, Belgium) határoztuk meg. A variációs koefficiensek 1% alatt voltak mindkét mérési helyen. Az osteoporosist a WHO-kritériumok szerint, Tscore < –2,5 szórással (standard deviation: SD) definiáltuk. Az adatokat T-score és Z-score egységekben tüntettük fel.

Statisztikai analízis Az adatokat SPSS for Windows 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) programmal értékeltük. Folytonos, normál eloszlású vál-

1275

n



6/26/07

7:43 AM

Page 1276

n


tozók átlagait varianciaanalízissel (ANOVA) hasonlítottuk össze. A normál eloszlást Kolmogorov–Smirnov–Lilieforsteszttel elemeztük. Ordinális és nem normális eloszlású változók esetén Mann–Whitney párosítatlan t-tesztet vagy Kruskal–Wallis-tesztet végeztünk. Folytonos változók esetén Pearson-korrelációt, ordinális vagy ferde eloszlás esetén Spearman-rangkorrelációt vizsgáltunk. A lehetséges befolyásoló tényezôket, mint az életkor, menopauzális kor, szérum-DHEASszint, alkoholfogyasztás, szteroidkezelés, dohányzás, elôzô csonttörés és testtömegindex (body mass index, BMI) többszörös regresszió vagy kovarianciaanalízis útján vettük figyelembe. Az allélfrekvenciák elemzésénél Hardy–Weinberg-tesztet alkalmaztunk.

n

A CYP3A7*1C-genotípus esetén a lumbális gerinc-BMD szignifikánsan alacsonyabb volt a vad típust hordozókéhoz képest (CYP3A7*1C homozigóta mutáns T-score: –3,27 ! 1,02, vad típus T-score: –1,35 ! 1,53, p = 0,041; CYP3A7*1C mutáns Z-score: –1,60 ! 0,96, vad típus Z-score: –0,05 ! 1,25, p = 0,048). Szignifikáns maradt a kapcsolat továbbá a CYP3A7genotípus és a BMD között a menopauzális kor, alkoholfogyasztás, korábbi szteroidkezelés, dohányzás és elôzô csonttörés (T-score esetén p = 0,038, Z-score esetén p = 0,047) vagy BMI- és DHEAS-szintek (T-score esetén p = 0,03, Z-score esetén p = 0,046) figyelembevétele esetén egyaránt. Nem találtunk összefüggést a femuron mért BMD és a genotípusok között.

CYP3A7*1C-genotípus és szérum-DHEAS

Eredmények CYP3A7*1C-genotípus A CYP3A7 heterozigóták aránya a beteg- és a kontrollcsoportban 5,1% (n = 11) és 2,9% (n = 3) volt. Homozigóta genotípust csak a betegcsoportban találtunk, 1,4%-ban (n = 3). A mutáns allél frekvenciája a két csoportban (betegcsoport vs kontrollcsoport) 3,9% és 1,5% volt. A csoportok közötti allélfrekvencia-különbség nem volt szignifikáns. A CYP3A7-genotípus a vizsgált csoportokban Hardy–Weinberg-egyensúlyban volt (χ2 = 1,95, p = 0,16).

A CYP3A7*1C-genotípus és a DHEAS-koncentráció között nem volt összefüggés a 319 résztvevôben (2. ábra). Hasonlóan nem volt szignifikáns a kapcsolat, ha a két csoportot külön elemeztük. Ugyan a CYP3A7*1C heterozigóta hordozóknak a kontrollmintában szignifikánsan, 58,4%-kal volt alacsonyabb a DHEAS-koncentrációjuk a vad típushoz képest (1,55 ! 0,56 vs. 3,73 ! 2,49 µmol/l; p = 0,05), de az életkor figyelembevétele után ez a szignifikancia eltûnt. Az életkor és a szérum-DHEAS-szint negatívan korrelált a betegcsoportban (r = –0,28; p < 0.005), a kontrollcsoportban (r = –0,49; p < 0,005) és a teljes mintában egyaránt (r = –0,52, p < 0,005) (3. ábra). Szignifikáns volt a kapcsolat a menopauzális kor és a DHEASkoncentráció között mind a kontroll- (r = –0,43, p < 0,005), mind az összes résztvevôt tekintve (r = –0,40, p < 0,005).

CYP3A7*1C-genotípus és BMD

Lumbális gerinc BMD (T-score)

A CYP3A7*1C-polimorfizmus és a lumbális gerinc-BMD között a 319 résztvevôben szignifikáns kapcsolatot tudtunk kimutatni. Ez a reláció szignifikáns maradt az életkor és DHEAS-szint figyelembevétele után is (1a. és 1b. ábrák).

Szérum-DHEAS és BMD A szérum-DHEAS-szint és a lumbális gerinc-BMD (T-score) között az életkor figyelembe vétele mellett pozitív korrelációt

2,0

0,0

–2,0

–4,0

–6,0 CYP3A7/CYP3A7

CYP3A7*1C/CYP3A7 CYP3A7*1C/CYP3A7*1C CYP3A7 Genotípus

1a. ábra A CYP3A7-genotípus és lumbális gerinc-BMD (T-score) szignifikáns kapcsolata a menopauzális kor, DHEAS-szint, alkoholfogyasztás, szteroidkezelés, dohányzás és korábbi csonttörés figyelembevétele után az összes résztvevôben (* p = 0,038)


n

1276

n

ORVOSI HETILAP


6/26/07

7:43 AM

Page 1277

n


n

Lumbális gerinc BMD (Z-score)

3,0 2,0 1,0 0,0 –1,0 –2,0 –3,0 –4,0 CYP3A7/CYP3A7


1b. ábra A CYP3A7-genotípus és lumbális gerinc-BMD (Z-score) szignifikáns kapcsolata a menopauzális kor, DHEAS-szint, alkoholfogyasztás, szteroidkezelés, dohányzás és korábbi csonttörés figyelembevétele után az összes résztvevôben (* p = 0,047). A medián, az elsô és harmadik interquartilesek alkotják a box plotokat. A kapcsok az interquartilis tartomány 1,5-szeres értékével vannak a 75 és 25 percentilis felett és alatt. A kapcsokon túl a „kilógó értékek” vannak. BMD: csontásványanyag-sûrûség

találtunk a teljes mintában (r = 0,59, p = 0,042) és a kontrollcsoportban (r = 0,36, p = 0,04). Ugyanakkor, a betegcsoportban nem volt szignifikáns ez az összefüggés. A 319 résztvevôben a lumbális gerinc (r = 0,23, p < 0,005) (4. ábra) és a combnyak (r = 0,17, p = 0,003) Z-score egyaránt korrelált a DHEAS-koncentrációval. Szignifikáns kapcsolat volt a lumbális gerinc-BMD (Z-score és T-score) és az életkor (r = –0,29 és –0,58, p < 0,005), illetve a menopauzális kor (r = –0,32 és –0,55, p < 0,005), a BMI (r = 0,22, p < 0,005), az alkoholfogyasztás (p = 0,02 és 0,005) és a korábbi szteroidkezelés között (p = 0,02 és < 0,005). A szérum-DHEAS-koncentráció korrelált az alkoholfogyasztással is (p < 0,005) (2. táblázat).

Megbeszélés Munkánkban a CYP3A7-polimorfizmus lehetséges szerepét vizsgáltuk az osteoporosis kialakulásában, melyet – a feltevések szerint – az alacsonyabb DHEAS-szinteken keresztül fejt ki. Magunk nem találtunk szignifikáns kapcsolatot a szérum-DHEAS-koncentráció és a CYP3A7*1C-genotípus között a 319 posztmenopauzás nôben, annak ellenére, hogy Smit és munkacsoportja [13] szignifikáns összefüggést mutatott ki a CYP3A7*1C-genotípus és a DHEAS-koncentráció között heterogén populációban. Közel 50%-os DHEAS-szint-csökkenésrôl számolt be a CYP3A7*1C-allél jelenléte esetén. Azonban két

DHEAS koncentráció (µmol/l)

14,00 12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 CYP3A7/CYP3A7

2. ábra


A CYP3A7*1C-polimorfizmus és a szérum-DHEAS-szint között nincs szignifikáns kapcsolat az összes résztvevôben. A medián, az elsô és harmadik interquartilesek alkotják a box plotokat. A kapcsok az interquartilis tartomány 1,5-szeres értékével vannak a 75 és 25 percentilis felett és alatt. A kapcsokon túl a „kilógó értékek” vannak. DHEAS: dehidroepiandroszteron-szulfát

ORVOSI HETILAP

n

1277

n



6/26/07

7:43 AM

Page 1278

n


n

10,00

DHEAS koncentráció (µmol/l)

r = –0,52, p < 0,005 8,00

6,00

4,00

2,00

0,00 40

3. ábra

50

60 70 Életkor (év)

80

90

A szérum-DHEAS-koncentráció és az életkor között negatív korrelációt tapasztaltunk a teljes mintában (r = –0,52, p < 0,005). DHEAS: dehidroepiandroszteron-szulfát

csoportot vizsgáltak, egy 208 személybôl (110 nô, 98 férfi), és egy 345 öregedô férfiból álló csoportot, és a nôk szeparált analízise esetén ôk sem tudtak szignifikáns kapcsolatot kimutatni a CYP3A7-mutáció és a DHEAS-szint között. Vizsgálatunkban szignifikáns kapcsolatot találtunk a CYP3A7-mutáció és a lumbális gerinc-BMD (T-score, Z-score egyaránt) között. A homozigóta CYP3A7*1C-genotípus alacsonyabb csonttömeget eredményezett. A lehetséges befolyásoló tényezôk, mint menopauzális kor, szérum-DHEAS-kon-

centráció, alkoholfogyasztás, korábbi szteroidkezelés, dohányzás, illetve elôzô csonttörés figyelembevétele után is szignifikáns maradt az összefüggés a genotípus és a BMD között. Eredményeink azt mutatják, hogy a CYP3A7*1C-allél a nôkben befolyásolja a csontsûrûséget, azonban hatását nem a csökkent DHEAS-szinten keresztül fejti ki. A CYP3A7*1C egyéb, csontanyagcserére anabolikus szubsztrátok, mint az ösztron, ösztradiol, androszténdion vagy tesztoszteron felgyorsult eliminációjával befolyásolhatja a csontsûrûséget.

Lumbális gerinc BMD (Z-score)

10,00

r = 0,23, p < 0,005

8,00

6,00

4,00

2,00

0,00 0,00

4. ábra

2,00

4,00 6,00 8,00 DHEAS koncentráció (µmol/l)

10,00

A szérum-DHEAS-koncentráció és a lumbális gerinc-BMD (Z-score) között pozitív korrelációt tapasztaltunk az összes résztvevôben (Z-score: r = 0,23, p < 0,005). DHEAS: dehidroepiandroszteron-szulfát, BMD: csontásványanyag-sûrûség


n

1278

n

ORVOSI HETILAP


6/26/07

7:43 AM

Page 1279


n

n

2. táblázat BMD és független változók szignifikáns kapcsolata az összes résztvevôben

Változók

Pearson’s koefficiens (r)

p

Lumbális gerinc BMD

Lumbális gerinc BMD

Z-score

T-score

Z-score

T-score

Kor (év)

–0,29

–0,58

< 0,005

< 0,005


–0,32

–0,55

< 0,005

< 0,005

0,22

0,22

< 0,005

< 0,005

BMI (kg/m2) Alkoholfogyasztás

0,02

0,005

Szteroidkezelés

0,02

< 0,005

< 0,005

< 0,005

DHEAS

0,23

0,39

BMI = testtömegindex, BMD = csontásványanyag-sûrûség, DHEAS = dehidroepiandroszteron-szulfát

Ezen elképzelésünket támasztja alá az is, hogy Smit és munkacsoportja [13] alacsonyabb ösztronszintet talált a mutáns allél jelenléte esetén. A nem fontos tényezô lehet a CYP3A7*1C-polimorfizmus és a DHEAS-koncentráció kapcsolatában. Munkacsoportok eltérô CYP3A7-expresszióról számoltak be a férfi és a nôi nemi szervekben. A legmagasabb CYP3A7-mRNS-szintet a prosztatában találták, ugyanakkor a herékben, méhben és petefészkekben a gén expressziója alacsony volt [16, 17, 18]. Hasonlóan, a keringô DHEAS-koncentrációban is különbséget lehet tapasztalni, férfiaknál magasabb a DHEAS szérumszintje, mint nôk esetén. A nemi különbség a CYP3A7*1C jelenléte és a DHEAS-szérumszint eltérései között azt mutatja, hogy a CYP3A7-polimorfizmus hatása a DHEAS-koncentrációra férfiakban erôsebb, mint nôkben. Feltevésünket alátámasztja, hogy Smit és munkacsoportja [13] sem talált nôkben szignifikáns kapcsolatot a CYP3A7-polimorfizmus és a DHEAS-szint között, míg férfiakban igen. A DHEAS-koncentráció progresszív csökkenése az életkor elôrehaladásával számos „korral járó” betegséghez, mint például csontritkuláshoz vezethet [15]. Hasonlóan más munkacsoportok eredményeihez, a DHEAS-szérumszint nálunk is szignifikánsan összefüggött a csökkent BMD-vel. Az alacsonyabb DHEAS-koncentráció miatt kevesebb ösztrogén és androgén alakul ki lokálisan, másrészt ennek hatására csökken az IGF-1, és emelkedik az IL-6 koncentráció is, amelyek együttesen vezetnek a csontritkulás kialakulásához [15, 19]. Összefoglalva, elmondható, hogy nôkben a CYP3A7*1Cmutáció alacsonyabb lumbális gerinc-BMD-vel járt, mely hatás független a szérum-DHEAS-koncentrációtól, vagyis más CYP3A7 hormonális szubsztrát fokozott eliminációján keresztül valósulhat meg.

Köszönetnyilvánítás A kutatási munkát az NKFP-1A/007/2004, az NKFP1A/002/2004 és az ETT-55059 pályázatok anyagi forrásai támogatták.

ORVOSI HETILAP

n

Irodalom [1] Kitada, M., Kamataki, T., Itahashi, K. és mtsai: P-450 HFLa, a form of cytochrome P-450 purified from human fetal livers, is the 16 alpha-hydroxylase of dehydroepiandrosterone 3-sulfate. J. Biol. Chem., 1987, 262, 13534–13537. [2] Gonzalez, F. J.: The molecular biology of cytochrome P450s. Pharmacol. Rev., 1988, 40, 243–288. [3] Shimada, T., Yamazaki, H., Mimura, M. és mtsai: Interindividual variations in human liver cytochrome P-450 enzymes involved in the oxidation of drugs, carcinogens and toxic chemicals: studies with liver microsomes of 30 Japanese and 30 Caucasians. J. Pharmacol. Exp. Ther., 1994, 270, 414–423. [4] Brooks, B. A., McBride, O. W., Dolphin, C. T. és mtsai: The gene CYP3 encoding P450pcn1 (nifedipine oxidase) is tightly linked to the gene COL1A2 encoding collagen type 1 alpha on 7q21-q22.1. Am. J. Hum. Genet., 1988, 43, 280–284. [5] Molowa, D. T., Schuetz, E. G., Wrighton, S. A. és mtsai: Complete cDNA sequence of a cytochrome P-450 inducible by glucocorticoids in human liver. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, 83, 5311–5315. [6] Aoyama, T., Yamano, S., Waxman, D. J. és mtsai: Cytochrome P-450 hPCN3, a novel cytochrome P-450 IIIA gene product that is differentially expressed in adult human liver. cDNA and deduced amino acid sequence and distinct specificities of cDNA-expressed hPCN1 and hPCN3 for the metabolism of steroid hormones and cyclosporine. J. Biol. Chem., 1989, 264, 10388–10395. [7] Kitada, M., Kamataki, T., Itahashi, K. és mtsai: Purification and properties of cytochrome P-450 from homogenates of human fetal livers. Arch. Biochem. Biophys., 1985, 241, 275–280. [8] Westlind, A., Malmebo, S., Johansson, I. és mtsai: Cloning and tissue distribution of a novel human cytochrome p450 of the CYP3A subfamily, CYP3A43. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2001, 281, 1349–1355. [9] Greuet, J., Pichard, L., Bonfils, C. és mtsai: The fetal specific gene CYP3A7 is inducible by rifampicin in adult human hepatocytes in primary culture. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1996, 225, 689–694. [10] Kuehl, P., Zhang, J., Lin, Y. és mtsai: Sequence diversity in CYP3A promoters and characterization of the genetic basis of polymorphic CYP3A5 expression. Nat. Genet., 2001, 27, 383–391.

1279

n



6/26/07

7:43 AM

Page 1280

n


[11] Lee, A. J., Cai, M. X., Thomas, P. E. és mtsai: Characterization of the oxidative metabolites of 17beta-estradiol and estrone formed by 15 selectively expressed human cytochrome p450 isoforms. Endocrinology, 2003, 144, 3382–3398. [12] Kitada, M., Kamataki, T., Itahashi, K. és mtsai: Significance of cytochrome P-450 (P-450 HFLa) of human fetal livers in the steroid and drug oxidations. Biochem. Pharmacol., 1987, 36, 453–456. [13] Smit, P., van Schaik, R. H., van der Werf, M. és mtsai: A common polymorphism in the CYP3A7 gene is associated with a nearly 50% reduction in serum dehydroepiandrosterone sulfate levels. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2005, 90, 5313–5316. [14] Hammer, F., Subtil, S., Lux, P. és mtsai: No evidence for hepatic conversion of dehydroepiandrosterone (DHEA) sulfate to DHEA: In vivo and in vitro studies. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2005, 90, 3600–3605. [15] Haden, S. T., Glowacki, J., Hurwitz, S. és mtsai: Effects of age on serum dehydroepiandrosterone sulfate, IGF-I, and IL-6 levels in women. Calcif. Tissue Int., 2000, 66, 414–418.

n

[16] Koch, I., Weil, R., Wolbold, R. és mtsai: Interindividual variability and tissue-specificity in the expression of cytochrome P450 3A mRNA. Drug Metab. Dispos., 2002, 30, 1108–1114. [17] Nishimura, M., Yaguti, H., Yoshitsugu, H. és mtsai: Tissue distribution of mRNA expression of human cytochrome P450 isoforms assessed by high-sensitivity real-time reverse transcription PCR. J. Pharm. Soc. Jap., 2003, 123, 369–375. [18] Downie, D., McFadyen, M. C., Rooney, P. H. és mtsai: Profiling cytochrome P450 expression in ovarian cancer: Identification of prognostic markers. Clin. Cancer Res., 2005, 11, 7369–7375. [19] Földes J., Lakatos P., Zsadányi J. és mtsa: Decreased serum IGF-I and dehydroepiandrosterone sulphate may be risk factors for the development of reduced bone mass in postmenopausal women with endogenous subclinical hyperthyroidism. Eur. J. Endocrinol., 1997, 136, 277–281.

(Bácsi Krisztián dr. Budapest, Korányi S. u. 2/a, 1083 e-mail: [email protected])

Tisztelt Olvasónk! Kórházak, egészségügyi intézmények, tudományos társaságok szakmai programjait, valamint az egészségüggyel, az orvostudománnyal kapcsolatos pályázatok, ösztöndíjak felhívásait és a pályázati hirdetményeket

szavanként 20 Ft-os áron tudjuk közölni lapunkban.

Elôfizetôink hirdetéseit 70 szó terjedelemig térítésmentesen jelentetjük meg. Az összeget postai csekken kérjük feladni. A csekk másolata a hirdetés szövegével együtt faxon vagy e-mailen küldhetô el szerkesztôségünknek. Fax: (06-1) 464-5525, e-mail: [email protected]


n

1280

n

ORVOSI HETILAP

A CYP3A7*1C-polimorfizmus hatása a csont ásványanyag-tartalmára posztmenopauzás nôkben

Recommend Documents