Zkumavky Leucosep LTK.615
PŘÍBALOVÁ INFORMACE Pro diagnostické použití in vitro
PI-LT.615-CZ-V3
Informace pro použití Použití Zkumavky Leucosep jsou určeny k odběru a separaci periferních mononukleárních buněk (PBMC) z plné krve. Zkumavky usnadňují separaci PBMC z plné krve při použití postupu s médiem FICOLLPAQUE* PLUS předtím, než budou tyto buňky použity v testech ELISPOT. Úvod Testy ELISPOT využívají T buňky v PBMC separovaných z plné krve. Jedna metoda separace těchto buněk vyžaduje použití média FICOLL-PAQUE PLUS. Tento postup zahrnuje řadu kroků, které je nutno provést pečlivě, aby byly zajištěny optimální výsledky. Při použití zkumavek Leucosep se snižuje počet kroků, metoda je důkladnější a doba potřebná k provedení separace je kratší. Princip metody Zkumavky Leucosep byly vyvinuty k dosažení optimální separace PBMC z lidské plné krve pomocí hustotní centrifugace. Zkumavky Leucosep obsahují porézní bariéru v průhledné polypropylénové zkumavce. Tato biologicky inertní bariéra sestává z vysoce jakostního polyetylénu. Zkumavka Leucosep vylučuje nutnost časově náročného a pracného vrstvení materiálu vzorku na médium FICOLL-PAQUE PLUS. Antikoagulovaná plná krev se smísí s kultivačním médiem a pak se nalije do zkumavky Leucosep. Porézní bariéra brání smísení krve se separačním médiem (FICOLL-PAQUE PLUS). Během centrifugace se následkem rozdílné hustoty separují PBMC od nežádoucích erytrocytů a shromáždí se na rozhraní nad separačním médiem. Když je separace dokončena, bariéra brání rekontaminaci vrstvy PBMC při jejím odebírání. Upozornění a bezpečnostní opatření 1. 2. 3. 4.
5. 6. 7.
8. 9. 10. 11. 12. 13.
Pouze k diagnostickému použití in vitro. Pouze k použití odbornými pracovníky; provádějící pracovník musí být proškolen v této metodě. Vzorky krve je nutno považovat za potenciálně nebezpečné. Při manipulaci s materiálem lidského původu je nutno dbát opatrnosti. Manipulace se vzorky plné krve a součástmi testu během jejich používání, skladování a likvidaci musí být v souladu s postupy stanovenými v příslušných národních předpisech a nařízeních týkajících se ochrany před biologickým nebezpečím. Jakékoli odchylky od doporučených postupů při pipetování, technikách promývání, odchylky od doby centrifugace či teploty mohou narušit izolaci PBMC a ovlivnit výsledky testů. Neodebírejte krev do zkumavek pro přípravu buněk (CPT™, Becton Dickinson) ani do zkumavek na odběr krve s EDTA, protože ty nejsou se zkumavkami Leucosep kompatibilní. Vzorky plné krve neuchovávejte v chladničce, ani je nezmrazujte. Uchovávejte je a přepravujte při teplotě od 18–25°C, resp. 10–25°C, pokud mají být vzorky krve zpracovány činidlem T-Cell ® Xtend . Krev nesmí být skladována déle než 8 hodin, anebo 32 hodin, pokud budou později zpracovány činidlem T-Cell Xtend. K odběru vzorků venózní krve používejte pouze nádobky k jednorázovému použití. Nepoužívejte po uplynutí doby použitelnosti. Při používání tohoto produktu používejte aseptický postup. Zkumavky Leucosep neskladujte na přímém světle. Zkumavky Leucosep nepoužívejte, pokud jsou poškozeny nebo pokud je médium FICOLLPAQUE PLUS znehodnoceno, o čemž svědčí jasně žlutá barva nebo přítomnost pevných částic v čiré tekutině.
Dodávaný materiál Každá krabička obsahuje: 50 zkumavek Leucosep předem naplněných médiem FICOLL-PAQUE PLUS. CD s příbalovou informací a bezpečnostním listem.
Příbalová informace Leucosep
2z6
PI-LT.615-CZ-V3
Uchovávání a stabilita Uzavřené zkumavky uchovávejte při teplotě 4–30°C až do data použitelnosti uvedeného na krabičce. Otevřený produkt uchovávejte při pokojové teplotě (18–25°C) a použijte do 12 týdnů po otevření vnějšího obalu nebo před uplynutím data použitelnosti na krabičce podle toho, co nastane dříve. Potřebné vybavení a materiály, které nejsou součástí dodávky 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
Heparinizované zkumavky na odběr krve. ® Buněčná kultivační média AIM V a RPMI. Centrifugační zkumavky 15ml. Centrifuga k frakcionaci periferních mononukleárních buněk dosahující nejméně 1000 RCF (g), ve které je možno uchovat vzorky při pokojové teplotě (18–25°C). Skříň úrovně biologické bezpečnosti 2 (BL 2) (doporučena). Pipety a sterilní špičky na pipety. Souprava ELISPOT. Může být potřebné činidlo T-Cell Xtend, pokud jsou použity vzorky starší než 8 hodin.
Postup Poznámka: Následující kroky je nutno provádět s uplatněním zásad správné laboratorní praxe: 1. 2.
3.
4. 5.
6. 7. 8. 9.
Zajistěte, aby před použitím byl potřebný počet zkumavek Leucosep při pokojové teplotě (18– 25°C). Pokud je médium FICOLL-PAQUE PLUS soustředěno nad porézní bariérou (škraloup), centrifugujte zkumavky Leucosep při 350 xg po dobu jedné minuty, aby se médium FICOLLPAQUE PLUS dostalo pod škraloup. Vzorek plné krve převraťte a pak nařeďte v 15ml centrifugační zkumavce v poměru 5 dílů krve ke 3 dílům buněčného kultivačního média AIM V nebo RPMI. Několikrát centrifugační zkumavku převraťte, aby se obsah promíchal. Nalijte naředěnou krev přímo do zkumavky Leucosep a centrifugujte při 1000 xg po dobu 10 minut při teplotě 18–25°C bez použití brzdy. Aspirujte zkalenou vrstvu periferních mononukleárních buněk a doplňte v 15ml centrifugační zkumavce do ~10ml médiem AIM V nebo RPMI. Převraťte centrifugační zkumavku, aby se obsah promíchal. Centrifugujte při 600 xg po dobu 7 minut. Supernatant zlikvidujte. Buněčnou peletu resuspendujte s AIM V nebo s RPMI, doplňte AIM V nebo RPMI do ~10ml a centrifugujte při 350 xg po dobu dalších 7 minut. Zlikvidujte supernatant a resuspendujte buněčnou peletu v objemu AIM V (ne RPMI) potřebném pro test ELISPOT. Pokud jsou buňky potřebné pro antigenní stimulaci v testu ELISPOT, nařeďte buňky příslušným způsobem pomocí AIM V (ne RPMI).
Omezení 1.
Jako u jiných separačních metod mohou i zkumavky Leucosep změnit podíl některých podskupin periferních mononukleárních buněk (např. T a B buněk) oproti neseparované plné krvi. Soudí se, že tato změna je v normálních případech relativně nevýznamná.
Kontrola kvality Interní testování neprokázalo významné snížení získaných periferních mononukleárních buněk v porovnání média FICOLL-PAQUE PLUS se zkumavkami Leucosep. Metoda počítání buněk musí být navržena a validována jako součást činnosti při kontrole kvality laboratoře, aby bylo zajištěno, že příslušným testovacím systémem bude získán dostatečný počet periferních mononukleárů. Dále je nutno, aby při kontrole kvality laboratoře byly použity pozitivní a negativní kontroly vyvinuté k zajištění předpokládané výkonnosti T buněk v příslušném testovacím systému.
Příbalová informace Leucosep
3z6
PI-LT.615-CZ-V3
Výkonnostní charakteristika Skladovaná krev s použitím činidla T-Cell Xtend Od 46 dárců byly získány dva vzorky po 6 ml krve. Jeden vzorek od každého dárce byl zpracován během 8 hodin po venepunkci s manuálním vrstvením média FICOLL*. Druhý vzorek byl zpracován ve zkumavce Leucosep po 29–32 hodinovém skladování s použitím činidla T-Cell Xtend. Pomocí obou metod bylo získáno dostatečné množství buněk pro metodu ELISPOT a buňky získané ze všech vzorků byly v testu funkční. Čerstvá krev Od 52 dárců byly získány dva vzorky po 6 ml krve. Oba vzorky od každého dárce byly zpracovány do 8 hodin po venepunkci. První vzorek byl zpracován manuálním vrstvením média FICOLL. Druhý vzorek byl zpracován s použitím zkumavky Leucosep. Pomocí obou metod bylo získáno dostatečné množství buněk pro metodu ELISPOT a buňky získané ze všech vzorků byly v testu funkční.
Příbalová informace Leucosep
4z6
PI-LT.615-CZ-V3
Návod k řešení problémů při odběru a separaci periferních mononukleárních buněk pro test ELISPOT Možná příčína
Problém Zisk malého počtu buněk
Kontaminace erytrocyty
Možné řešení
Leukopenie
Přidat další zkumavku na odběr krve
Nesprávný odběr krve
Zkumavky CPT a zkumavky na odběr krve s EDTA nejsou kompatibilní s Leucosep
Zkumavka na odběr krve nemá pokojovou teplotu (18–25°C)
Nechte zkumavku na odběr krve temperovat na pokojovou teplotu
Krev není uchovávána požadované teplotě
při
Zajistěte, aby byla krev přepravována při 18–25°C nebo 10–25°C, pokud je použito činidlo T-Cell Xtend
Použité objemy nebo ředění jsou jiné než doporučené
Zajistěte, aby byly dodržovány správné pokyny
Krev není uchovávána požadované teplotě
při
Zajistěte, aby byla krev přepravována při 18–25°C nebo 10–25°C, pokud je použito činidlo T-Cell Xtend
Zkumavka na odběr krve nemá pokojovou teplotu (18–25°C)
Nechte zkumavku na odběr krve temperovat na pokojovou teplotu
Krev není naředěna
Zajistěte, aby byla krev naředěna podle postupu
Převrácení vzorku zkumavce Leucosep
krve
ve
Zajistěte, aby byla zkumavka Leucosep před centrifugací ve svislé poloze Zajistěte, aby byly pokyny k centrifugaci
Nesprávná centrifugace
dodrženy
Zkontrolujte, zda může centrifuga chladit při teplotě 18–25°C Zkontrolujte, zda centrifugy vypnuta
nezřetelná
Neúplná separace vzorku Centrifuga kalibrovaná
Nevalidní výsledky
Příbalová informace Leucosep
není
správně
Proveďte kalibraci centrifugy
Nesprávná centrifugace
Zajistěte, aby byly pokyny k centrifugaci
Hyperlipidemický vzorek Nevalidní výsledky mohou být způsobeny řadou problémů při nesprávné manipulaci se vzorky
Odebrat vzorek na lačno Viz výše uvedené oddíly
5z6
brzda
Prodlužte krok centrifugace o 10 min. Prodlužte krok centrifugace o 10 min.
Neúplná separace vzorku Neohraničená nebo vrstva mononukleárů
je
dodrženy
PI-LT.615-CZ-V3
Vysvětlení symbolů Použít do/Datum exspirace (rok-měsíc-den) Číslo šarže Katalogové číslo Pozor, viz návod k použití Výrobce Stačí pro „n” testů Prostředek pro diagnostiku in vitro Teplotní omezení / Skladovat při teplotě mezi Viz návod k použití Loga T-Cell Xtend a Oxford Immunotec jsou ochrannými známkami společnosti Oxford Immunotec Limited. AIM V je obchodní známka společnosti Invitrogen. CPT obchodní známka společnosti Becton Dickinson. * FICOLL a FICOLL-PAQUE jsou obchodní známky společností GE. Použití činidla T-Cell Xtend je chráněno následujícími patenty a patenty v řízení: EP2084508; US13/253,598, CN101529221, AU2007-303994, JP2009-530943, IN2165/DELNP/2009, CA2665205 © Oxford Immunotec Limited, 2013. Všechna práva vyhrazena.
Výrobce: Oxford Immunotec Ltd 94C Innovation Drive, Milton Park, Abingdon Oxfordshire, OX14 4RZ, Spojené království +44(0)1235 442796 www.oxfordimmunotec.com Obchodní zastoupení pro Českou republiku: EWOPHARMA, spol. s r. o. Korunní 2206/127 130 00 Praha 3 Tel.: 267 311 613 Fax: 267 317 247 E-mail:
[email protected]
Příbalová informace Leucosep
6z6
PI-LT.615-CZ-V3
