Welkom
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd Universiteit Leiden
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Eiwitstructuur niveaus
Eiwitvouwing zorgt voor eiwitstructuur Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Een vouwtje verkeerd… Hersenschors
Hersenkamers
Hersenplooi
Cystische fibrose (CF)
Kanker
De ziekte van Alzheimer
Verkeerde eiwitvouwing
Verkeerde eiwitvouwing
Verkeerde eiwitvouwing
Instabiel eiwit
Inactief eiwit
Te stabiel eiwit
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd 180cm
● Eiwit ● Eiwitvouwing ● Eiwit in de cel
10-15cm 20µm
● Experimenten
5-100nm
● Aantonen eiwit in cellen ● Immunofluorescentie
●Eiwitstructuurbepaling ● Röntgendiffractie
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Aantonen eiwit in de cel (fluorescentiekleuring) Observatie met lichtmicroscoop
Immunofluorescentiekleuring Cellen met “stabiel eiwit” Observatie met fluorescentiemicroscoop
Resultaat: verschil tussen eiwitten Cellen met “instabiel eiwit”
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Aantonen eiwit in de cel (fluorescentiekleuring) Observatie met lichtmicroscoop
Immunofluorescentiekleuring Cellen met “stabiel eiwit” Observatie met fluorescentiemicroscoop
Resultaat: verschil tussen eiwitten Cellen met “instabiel eiwit”
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Immunofluorescentiekleuring Specifieke antistof
Gekoppelde fluorescente stof
Microscopisch Antilichamen Wassen toevoegen Bekijken
Cel
Eiwitten in of op de cel Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Experiment A: Immunofluorescentie De verschillen tussen eiwitten van gezonde en zieke mensen ● Immunofluorescentiekleuring ● Goed gevouwen eiwit: kleur/lichtsignaal aanwezig ● Niet goed gevouwen eiwit: geen of minder kleur/lichtsignaal
Tubuline Fibronectine
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Röntgendiffractie De vier stappen van röntgendiffractie:
● Eiwitkristallen maken ● Kristal bestralen met röntgenstraling ● Afgebogen röntgenstraling meten ● Constructie 3D eiwitstructuur
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Röntgendiffractie
● Kristallisatie ● Bijzondere vorm ● Specifiek voor elk eiwit
● Experimenten ● Eiwitstructuurbepaling ● Röntgendiffractie Kristalrooster van NaCl
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Röntgendiffractie Kristal bestralen met röntgenstraling De kristallen buigen de straling af in een specifieke richting, die afhankelijk is van de ruimtelijke oriëntatie van de kristallen
Röntgenstralen
Kristal Bron
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Röntgendiffractie Afgebogen röntgenstraling meten
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Röntgendiffractie Opgevangen patroon Berekeningen
3D structuur
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Experiment B: Essentieel onderdeel van Röntgendiffractie Eiwitkristallen maken van het eiwit lysozym Geconcentreerde eiwitoplossing + Kristallisatiemix
Microscopische observatie
Resultaat: vorming van kristallen
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Proeven doen! Werken met kleine hoeveelheden vloeistof!
Pipetmannen Werken met µl volumes P20 = maximaal 20 µl P200 = maximaal 200 µl ALLES VOLGENS VOORSCHRIFT!
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
Succes!
Tot ziens bij Universiteit Leiden!
Universiteit Leiden Universiteit Leiden
Gezond of ziek: Een vouwtje verkeerd
Universiteit Leiden
ERROR: stackunderflow OFFENDING COMMAND: ~ STACK:
