VYŠETŘENÍ FETOMATERNÁLNÍ HEMORRHAGIE POMOCÍ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE

VYŠETŘENÍ FETOMATERNÁLNÍ HEMORRHAGIE POMOCÍ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE

Zajíc T.1 , Kamenická H.2, Kuťková D.2, Veselá I.2, Bydžovská I.3, Zemanová D.3, Gavendová H.3, Procházková R.2 Krajská nemocnice Liberec, a.s. 1 – Oddělení klinické mikrobiologie a imunologie; 2 – Transfuzní oddělení 3 – Gynekologicko-porodnické oddělení


Co to je FMH Fetomaternální hemorrhagie = Průnik fetálních erytrocytů (krve) do oběhu matky Příčiny o porod o instrumentace (amniocentéza, kordocentéza, obrat zevními hmaty, …) o úraz, infekce, poruchy placenty

o

v řadě případů je však příčina nejasná


Co to je FMH Důsledky: - anemie (objem uteroplacentárního řečiště, časový faktor, stáří plodu, …)

- možná aloimunizace matky - hemolytické onemocnění novorozence (plodu) u RhD antigenu stačí 0,1ml plné krve k imunizaci Antigeny AB0 systému jsou na fetálních erytrocytech exprimovány velmi slabě AB0 inkompatibilita při RhD inkompatibilitě může být i výhodou – destrukce fetálních erytrocytů přirozenými protilátkami matky

Klinicky významná (excesivní) FMH 10ml plné krve = 0,25% fetálních erytrocytů


K čemu je vyšetření FMH o Primárně k určení dávky anti-D IvIg – ač se standardně

neprovádí • V ČR paušální doporučení vaginální porod 250µg anti-D, císařský řez 500µg anti-D • Přibližně v 1% porodů je dávkování anti-D IgG nedostatečné • ve většině ostatních případů naopak dávka zbytečně vysoká • Dostatečná dávka anti-D je 10µg na 1ml plné krve o Jinak objektivizace a kvantifikace FMH – možnosti dalšího sledování, …


Jak se dá vyšetřovat FMH • Rozetový test – nepřímý antiglobulinový test • Kleihauer-Betke test – kyselá eluce • Průtoková cytometrie • PCR, FISH, stanovení AFP, placentární alkalické fosfatázy, …


Vyšetření FMH metodou průtokové cytometrie Fluorescenční značení: RhD – (RhD inkompatibilita) HbF (fetální hemoglobin) exprese ve fetálních erytrocytech nižší exprese v mateřských erytrocytech = „F-cells“ (poruchy tvorby globinových řetězců) CA (karbonická anhydráza) exprese postnatálně, v malé míře i v pozdní fázi prenatálního vývoje


Studie v KNL a.s. Iniciativa transfuzního oddělení Cíle: identifikace a kvantifikace FMH vyšetření aloimunizace matky

Vyšetření FMH Souprava: FetalCellCount Kit (IQ Products) Cytometr: Cytomics FC500 (Beckman Coulter) Protokol: úvodní promytí, fixace, promytí, permeabilizace, promytí, barvení protilátkami, promytí, měření na cytometru Celkový čas přípravy cca 3 h


Nastavení cytometru FSC, SSC - Log


Nastavení cytometru FSC, SSC - Log


Nastavení cytometru FL1 – CA – nízké zesílení

Pupečník

Matka

Směs


Nastavení cytometru FL1 – CA – vyšší zesílení


Nastavení cytometru FL2 - HbF

Nižší zesílení

Vyšší zesílení


Nastavení cytometru Kompenzace

FL1 – FL2 = 3%

FL2 – FL1 = 6,3%


Použití směsi – mateřská a pupečníková krev






FetalTrol Level 1 – 0 – 0,07 Level 2 – 0,1 – 0,24 Level 3 – 1,44 – 1,78


Výsledky vyšetření FMH ZKOUMANÝ SOUBOR 94 ŽEN ZÁKROK

Porod 66x

Potrat 25x

AMC 2x

Úmrtí plodu 1x

5x

2x

0x

1x

-

1,06

FMH EXCESIVNÍ (VÍCE NEŽ 0,25 %)

HODNOTY FMH %

4,9

0,44

0,55

0,72

6,9

0,46

0,26

TÝDEN GRAVIDITY

40.

38.

41.

41.

39.

8.

?

19.

21.

32.


Výsledky vyšetření protilátek 1. VYŠETŘENÍ PROTILÁTEK Zkoumaný soubor 94 žen Pozitivní protilátky 8x anti-E 2x

anti-M 1x

anti-Cw 1x

anti-Lea 1x

Negativní protilátky 86x nespec. 3x

5 x se jednalo o 1. vyšetření protilátek v současně probíhající graviditě (vyšetření nebyla v graviditě provedena anebo údaje o vyšetření nejsou dostupné)

-

2. VYŠETŘENÍ PROTILÁTEK Zkoumaný soubor 62 žen Pozitivní protilátky 11x

anti-D 8x (IvIg) 4x po porodu - 2x FMH < 0,1 %, 1x 0,1 %, 1x 0,44 % 2x po AMC, FMH < 0,1 %, 2x po potratu, FMH < 0,1 %

anti-Lea+Leb 1x po porodu, FMH 0,1 %

Negativní protilátky 51x

nespecifická 2x po porodu, 2xFMH < 0,1 %,

-


Výpočet objemu fetální krve při FMH


Kasuistika č.1 Spontánní porod ve 40. tt Vše bez komplikací, včetně poporodního vývoje

Porod Týden po porodu 3 týdny po porodu


Kasuistika č.2 Bez barvení FL1 – CA FL2 – HbF Komplet


Kasuistika č.2

Matka

Směs 5%


Kasuistika č.2 o Akutní SC ve 38 + 5 o Matka přestala cítit pohyby plodu, do té doby těhotenství zcela bez komplikací o Dle USG těžká bradykardie plodu oPři vybavení plodu již asystolie o Úspěšná resuscitace novorozence , překlad do ÚnL o Hematokrit pupečníkové krve 7%, Hb 20g/l o V Ústí dle Kleihauer-Betke testu masivní FMH (orientačně 7%) o Imunohematologická příčina anemie vyloučena o Příčina FMH neobjasněna


Závěr Objektivizace a kvantifikace FMH – možné použít k úpravě dávky anti-D IvIg Vyšetření neobjasní příčinu FMH CA – nedostatečné rozlišení mateřských a fetálních erytrocytů

Další plán – standardizace (FetalTrol), identifikace kritických míst přípravy vzorku


Děkuji za pozornost …

VYŠETŘENÍ FETOMATERNÁLNÍ HEMORRHAGIE POMOCÍ PRŮTOKOVÉ CYTOMETRIE

Recommend Documents