Vérbiztonság növelése: HIV, HCV, HBV szőrés NAT módszerrel Dr. Barabás Éva, Péterfi Zsuzsanna OVSzK Konfirmáló Laboratórium
Vérbiztonság és szőrıvizsgálatok Az allogén vér potenciálisan fertızı, a legnagyobb fokú
biztonságra kell törekedni. Standardizált módszerekkel elıállított vérkészítmények. Egyre érzékenyebb szőrıtesztek alkalmazása. Globális standard: HBsAg, anti-HIV, anti-HCV Regionális rendelkezések: anti-HBc, HIVp24 antigén, nukleinsav alapú technika (NAT) Magyarország: HBsAg, a-HIV, a-HCV, a-HBc Cél: a maradék rizikó csökkentése.
A szőrıvizsgálati rendszerek kritériumai 1)
Vérszőrésre kifejlesztett (nagy érzékenységő, kvalitatív)
2)
Minısített kitek (CE)
3)
Nagyfokú (lehetıleg teljes) automatizáltság
Kimutatási eljárások a vérszőrésben Vírus antigén és ellenanyag kimutatása: EIA
(MEA, ChLIA) Nukleinsav detektálás (NAT):
-target amplifikációs módszerek: PCR (polimeráz-láncreakció) TMA (transzkripció-mediálta-amplifikáció)
A PCR módszer elve: Hőtés 40-60 ºC-ra
Ciklikus hımérséklet változás. Enzim: Taq DNS polimeráz Target: DNS Termék: DNS 1 templát 2
Melegítés 72 ºC-ra
A PCR technika fejlıdése Tradicionális: Végpont analízis. Gél-
elektroforézis, biotin-avidin-tormaperoxidáz rendszer a termék detektálására. Kvalitatív (igennem) válasz esetén jól alkalmazható. Valós idejő (real-time): Jel: fluoreszcens molekula. Minden ciklusban történik mérés. Az így kapott adatokból meghatározható a minta mennyisége. Kvantitatív, kvalitatív.
A TMA módszer elve: Izotermális reakció, 41,5 ºC. Enzim: RT-áz, RNS polimeráz Target: RNS, DNS Termék: RNS 1 templát 100-1000
A vérszőrés globális helyzete 80 millió E véradás
évente NAT (vírus nukleinsav teszt) több, mint 25 országban 40 millió E-et szőrnek évente NAT módszerrel NAT
NAT nélkül
NAT vérszőrı rendszerek Vizsgálat
Teszt rendszerek
PROCLEIX® (TMA) ULTRIO® és DUPLEX® Chiron Novartis 55% Taqscreen MPX Roche (valós idejő PCR) <40% Házi kivitel (PCR) <10%
Procleix® Tigris® rendszer: teljesen automatizált, egy gépben Procleix® Optiva® rendszer: fél-automata, elemekbıl áll Cobas s 201: minden lépés automatizált, de manuális transzfer szükséges, elemekbıl áll elemekbıl álló rendszerek
Chiron TIGRIS automaták Európában 12 országban
Dánia
1 hely / 1 Tigris
Franciaorsz Franciaorszáág
2 hely / 2 Tigris
Görögorszá gország
2 hely / 4 Tigris
Írorszá rország
1 hely / 1 Tigris
Olaszorszá Olaszország
16 hely / 23 Tigris
Litv Litvánia
1 hely / 2 Tigris
Lengyelorszá Lengyelország
3 hely / 4 Tigris
Portugá Portugália
2 hely / 2 Tigris
Szlová lovákia
1 hely / 2 Tigris
Szlové lovénia
1 hely / 2 Tigris
Spanyolorsz Spanyolorszáág
7 hely / 12 Tigris
Svájc
1 hely / 3 Tigris
FSE TSS Buffer Stocks Tigris Site
Roche s201 rendszer Európában 8 országban Magyarország: kipróbálás, OVSzK Konfirmáló Laboratórium 1
2 1 15
2
7
4 1
1
Chiron PROCLEIX® család termékei PROCLEIX® TIGRIS ® rendszer PROCLEIX® ULTRIO ® assay PROCLEIX® OPTIVA™ rendszer
PROCLEIX® NAT TRACKER® szoftver
PROCLEIX®
PROCLEIX® HIV-1/ HCV assay
PROCLEIX® WNV Assay PROCLEIX® rendszer (hardver és szoftver)
Procleix® UltrioTM : HCV, HIV-1, HBV detektálás egy csıben A célszekvencia elfogása • Elfogó próbák • Mágneses mikropartikulákon fogja el a vírus specifikus nukleinsav szekvenciákat
HIV-1 HCV HBV
Mágneses mikropartikula
IC
Transzkripció mediálta amplifikáció (TMA) • Amplifikálja a nuklein savak target régióját Detektálás _ Akridinium-észterrel jelölt próba – Hibridizációt védı eljárás (HPA) Inaktiválja a nem-hibridizált próbákat, így minimalizálja a hátteret – Kettıs kinetikus eljárás (DKA) • Párhuzamosan detektálja az IC és az RNS amplikon szignált
HIV-1 HCV HBV IC
HIV-1 HCV HBV IC
Amplifikált RNS
A TIGRIS organizációja és a munkafolyamat Automated System Design Goal Automatizált minta preparálás 1,000 minta 14 óra alatt Elsı eredmények 4 órán belül 100 eredmény: 5 óra múlva, majd 100/óra Belsı/ külsı futtatási kontroll Magas szintő folyamat ellenırzés Koncepció:1 személy 2 gépet tud üzemeltetni TIGRIS: 1 személy Fél- 1 személy automata:
1,000 csı
14 óra
188 csı
7 óra
X 2 TIGRIS
2,000 csı
= tesztelése = 376 csı vizsgálata 14 óra alatt
A vírus markerek kimutathatósága a fertızés után (Chiron Ultrio) Szerológiai szőrés ea+ag
NAT (egyedi)
HIV-1
20,3 nap
5,6 nap
HCV
58,3 nap
4,9 nap
HBV
53,3 nap
35,4 nap
Chiron NAT szőrıvizsgálatok
1. 2. 3. 4. 5. 6.
1,2,3
6Össz
Vírus
Procleix®
Nem specif.
Más / Nem spec.
kiszőrt
HIV-1
51
4
18
73
HCV
223
12
87
322
HBV
154
-
272
426
Szőrt véradások
50.4 Mó
1.8 Mó
19.3 Mó
71.5 Mó
Szőrések kb. 1999-2006. feb. 18 ország adatai Nem specifikált a nem definiáltProcleix® assay-re vonatkozik. Konfirmált, nem-konfirmált, mini-pool és egyedi minták adatainak keveréke. Néhány absztrakt nem specifikálta. Az adatokat a 2005. and 2006. évi ISBT és a 2006. évi AABB kongresszusokon közölték. Szeronegatív, NAT pozitív minta
A NAT szőrıvizsgálat bevezetése Költség/nyereség arány Epidemiológiai helyzet: országos, véradó
populáció • Prevalencia: a szeropozitív összes eset a vizsgált populációban • Incidencia: az új esetek gyakorisága a vizsgált idıtartam alatt a szeronegatív populációban Magas I: ablak periódus átviteli kockázata nı, NAT jelentısége nagy
A fertızöttek száma Magyarországon Általános populáció
Véradó populáció 2006. 1/450 000 E
HBV
P=0,01%, 1385 (2007.03.31.) I (?) =81 fı (2006) Kf<2%
HCV
P=0,6-1% HCV
1/2000 E
HIV-1
1/100 000 E HBsAg 1/2500 a-HBc+HBsAg 1/1360 a-HBc
(AP~1/1 000 000 E)
Donor populáció: alacsony szero-
prevalencia és incidencia A jelenleg alkalmazott szőrı módszerek
illeszkednek a magyar epidemiológiai helyzethez. Cél: a vérbiztonság további növelése a
technológiai fejlıdés követésével.
KÖSZÖNÖM A MEGTISZTELİ FIGYELMET!
