UJI EFEK ANTIHIPERGLIKEMIA EKSTRAK n-heksan DARI LUMUT HATI(Mastigophora diclados) DENGAN METODE INDUKSI ALOKSAN

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

UJI EFEK ANTIHIPERGLIKEMIA EKSTRAK n-HEKSAN DARI LUMUT HATI(Mastigophora diclados) DENGAN METODE INDUKSI ALOKSAN

SKRIPSI

ARESTYA OTARI NIM. 109102000035

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA 2013

ABSTRAK

Nama Program Studi Judu

: Arestya Otari : Farmasi : Uji Efek Antihiperglikemia Ekstrak n-heksan dari Lumut Hati Mastigophora diclados dengan Metode Induksi Aloksan

Tumbuhan lumut Mastigophora diclados telah diketahui mengandung senyawasenyawa fenolik seskuiterpen yang memiliki aktivitas sistotoksik, antioksidan dan antimikrobial. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak n-heksan dari Mastigophora diclados dalam menurunkan kadar glukosa darah pada tikus. Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan metode induksi aloksan secara intraperitoneal dengan dosis 100mg/kg BB. Penelitian ini dibagi menjadi 6 kelompok yaitu kelompok I (kontrol normal) tanpa perlakuan, kelompok II (kontrol negatif) yang hanya diinduksikan aloksan, kelompok III (kontrol positif) diberikan glibenklamid, kelompok IV dosis 1mg/kg BB Mastigophora diclados, dosis sedang (10mg/kg BB) dan dosis tinggi (100mg/kg BB). Obat yang digunakan adalah glibenklamid sebagai pembanding dari ekstrak n-heksan Mastigophora diclados. Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan sebelum pemberian ektrak dan sesudah pemberian ekstrak pada hari ke 7, 14, 21 dan 28. Pada dosis 100mg/kg BB menunjukkan efek penurunan glukosa tertinggi dengan presentase sebesar 64,2%. Dengan uji statistik ANOVA menunjukkan bahwa dosis 100mg/kg BB tidak berbeda secara bermakna dengan kontrol positif (p≥0,05).

Kata kunci : Mastigophora diclados, aloksan, glukosa dan glibenklamid.

iv

ABSTRACT

Name Program Study Title

: Arestya Otari : Pharmacy : Antihyperglycemic effect of n-hexane Extract of the Liverwort Mastigophora diclados on alloxan-induced.

The liverwort Mastigophora diclados has been reported to contain phenolic sesquiterpene, which have cytotoxic, antioxidant, and antimicrobial properties. The purpose of this research was to discover the effect of n-hexane-extract of Mastigophora diclados in lowering blood glucose levels in rats. The method used in this research is alloxan inducing intraperitoneally a dosage of 100mg/kg BB. The experiment consisted of three control and three treatment groups: group I (normal control), group II (negative control), in which diabetes was induced with alloxan but to which no further treatment was given, group III (positive control) which was given glibenclamide, and groups IV-VI, which were given low (1mg/kg BB), medium (10mg/kg BB), and high (100mg/kg BB) doses of Mastigophora diclados extract, respectively. Glibenclamide was used in group III as standard treatment against which to compare the effectiveness of n-hexane extract of Mastigophora diclados. Measurements of blood glucose levels were taken before and after administration of the extract on days 7, 14, 21, and 28 of the experiment. The high (100mg/kg BB) dosage proved most effective in reducing glucose levels, reducing them by 64.2%. ANOVA analysis reveals that results for the high-dosage (100mg/kg BB) group did not differ significantly from that of the positive control group (p≥0,05). Keywords: Mastigophora diclados, alloxan, glucose, glibenclamide.

v

KATA PENGANTAR

Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT atas segala nikmat dan karuniaNya sehingga saya dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi. Serta shalawat dan salam untuk baginda Nabi Muhammad SAW yang membawa petunjuk bagi umat manusia, semoga kelak kita mendapatkan syafaat beliau. Skripsi dengan judul “Uji Antihiperglikemia Ekstrak n-heksan dari Lumut Hati Mastigophora diclados dengan Metode Induksi Aloksan” ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi di Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Saya menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa perkuliahan hingga penyusunan skripsi ini terasa sangat sulit bagi penulis untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1. Ibu Dr. Azrifitria, M.Si Apt selaku pembimbing pertama dan Ibu Ismiarni Komala, M.Sc.,Ph.D.Apt selaku pembimbing kedua, yang memiliki andil besar dalam proses penelitian dan penyelesaian skripsi saya ini, semoga segala bantuan dan bimbingan bapak dan Ibu mendapat imbalan yang lebih baik di sisi-Nya. 2. Prof. Dr. (hc) dr. M.K. Tadjudin, Sp. And. selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 3. Drs. Umar Mansur, M.Sc.,Apt selaku Ketua Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 4. Bapak dan Ibu staf pengajar dan karyawan yang telah memberikan bimbingan dan bantuan selama saya menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitar Islam Negerri Syarif Hidayatullah Jakarta. 5. Bapak Soesetyo Adie, MM panutan dalam keluarga dan Ibu Siti Aminah wanita terhebat dalam hidup ini yang selalu memberikan doa, dukungan serta

vi

nasihat. Serta Kakak - kakaku tercinta kk ida dan mba diat yang selalu memberikan doa dan motivasi. 6. Reza indra yang selalu memberikan semangat, motivasi, doa dan keceriaan kepada penulis. 7. Teman-teman Farmasi 2009, teman-teman “GK”, terkhusus untuk sahabatsahabat terbaik Nida, Migi, Ummu, Qori, Tuty A, Ayu, Isti, Liza, Agung, Dina, Asiffa, Desi, Devi yang selalu memberikan keceriaan, semangat, bantuan yang luar biasa tanpa pamrih kepada penulis. 8. Dan kepada seluruh pihak yang telah membantu penulis selama penyusunan skripsi ini yang tidak dapat disebutkan namanya satu persatu.

Saya menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih banyak kekurangan dan jauh dari kesempurnaan. Oleh Karena itu, dengan segala kerendahan hati, saya sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Saya berharap semoga skripsi ini bermanfaat dan dapat member sumbangan pengetahuan khususnya di Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu kesehatan, Universtas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta dan pembaca pada umumnya.

Jakarta, 16 September 2013

Penulis

vii

DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL .......................................................................................... HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS .............................................. HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .............................................. HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ ABSTRAK ........................................................................................................... ABSTRACT ........................................................................................................ KATA PENGANTAR ........................................................................................ HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ................... DAFTAR ISI ....................................................................................................... DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... DAFTAR TABEL ............................................................................................... DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................

ii iii iv v vi vii viii x xi xiii xiv xv

BAB 1 PENDAHULUAN .................................................................................. 1.1 Latar Belakang Masalah .................................................................... 1.2 Perumusan Masalah ........................................................................... 1.3 Hipotesis ............................................................................................ 1.4 Tujuan Penelitian .............................................................................. 1.5 Manfaat Penelitian .............................................................................

1 1 2 2 2 2

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................... 4 2.1 Lumut hati (Mastigophora diclados) ................................................ 4 2.1.1 Klasifikasi.................................................................................. 4 2.1.2 Sinonim ..................................................................................... 4 2.1.3 Kandungan Kimia ..................................................................... 4 2.1.4 Aktifitas Biologis ...................................................................... 5 2.2 Simplisia ............................................................................................ 5 2.3 Ekstrak ............................................................................................... 5 2.3.1 Ekstraksi .................................................................................... 6 2.3.2 Penyaring/Pelarut ...................................................................... 6 2.3.3 Frezze drying ............................................................................. 8 2.4 Diabetes Mellitus ............................................................................... 8 2.4.1 Definisi ...................................................................................... 8 2.4.2 Klasifikasi.................................................................................. 9 2.4.3 Gejala Klinik ............................................................................. 10 2.4.4 Diagnosis ................................................................................... 10 2.4.5 Terapi ........................................................................................ 11 2.4.5.1 Terapi Non Farmakologi ............................................... 11 2.4.5.2 Terapi Farmakologi ....................................................... 12 2.5 Aloksan .............................................................................................. 13 2.6 Glibenklamid ..................................................................................... 14

ix

2.7 Metode Pengujian Diabetes............................................................... 15

2.7.1 Metode Induksi Aloksan .......................................................... 15 2.7..2 Metode toleransi Glukosa ............................................... 15 2.8 Metode Pemeriksaan Kadar Glukosa darah ..................................... 16 BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ........................................................... 3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................... 3.2 Alat dan Bahan .................................................................................. 3.2.1 Alat ............................................................................................ 3.2.2 Bahan ......................................................................................... 3.3 Cara Kerja ......................................................................................... 3.3.1 Pembuatan Simplisia ................................................................ 3.3.2 Ekstraksi ................................................................................... 3.3.3 Penapisan Fitokimia ................................................................. 3.3.4 Pengujian Parameter Non Spesifik ........................................... 3.3.5 Pengujian Parameter Spesifik ................................................ 3.4 Rancangan Percobaan ........................................................................ 3.5 Pembuatan Sediaan Dosis Uji ............................................................ 3.6 Pengambilan Darah dan Pengaruh Kadar Glukosa ............................ 3.7 Uji Statistik Glukosa Darah................................................................

17 17 17 17 17 18 18 18 18 20 21 21 22 22 22

BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 4.1 Penyiapan Bahan ............................................................................... 4.2 Ekstraksi .............................................................................................. 4.3 Hasil Penapisan Fitokimia................................................................... 4.4 Pengukuran Kadar Glukosa Darah ..................................................... BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... LAMPIRAN .........................................................................................................

23 24 24 24 25 31 32 35

x

DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Struktur Aloksan . ............................................................................... .... 13 Gambar 2. Struktur Glibenklamid ........................................................................ .... 14 Gambar 3. Grafik Pengukuran Darah ................................................................. .... 28 Gambar 4. Penyuntikan Secara Intraperitoneal ..................................................... .... 35 Gambar 5. Pengukuran Glukosa Darah Pada Hewan Uji. .................................... .... 35 Gambar 6. Pemberian Sediaan Uji Secara Oral .................................................... .... 35 Gambar 7. Alkaloid ( Dragendroff) . ................................................................... .... 36 Gambar 8. Alkaloid ( Mayer ) . ............................................................................ .... 36 Gambar 9.Fenolik . ................................................................................................ .... 36 Gambar 10.Flavonoid . .......................................................................................... .... 36 Gambar 11 Saponin . ............................................................................................ .... 37 Gambar 12.Terpenoid .......................................................................................... .... 37

xi

DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Perlakuan Metode Induksi Aloksan ..................................................... Tabel 2. Hasil Karateristik Ektrak n-Heksan ....................................................... Tabel 3. Hasil Penapisan Fitokimia ...................................................................... Tabel 4. Nilai Rerata dan Standar Deviasi ............................................................ Tabel 5. Hasil Presentase Penurunan Kadar Glukosa Darah ................................ Tabel 6. Uji Normalitas ....................................................................................... Tabel 7. Uji Homogenitas ..................................................................................... Tabel 8. Uji Kruskal Wallis ................................................................................ Tabel 9. Uji ANOVA ............................................................................................ Tabel 10.Uji BNT. ................................................................................................

xii

21 25 25 26 27 48 49 50 51 52

DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Perlakuan Hewan Uji .................................................................. Lampiran 2. Penapisan Fitokimia ................................................................... Lampiran 3. Sertifikat Glibenkamid ............................................................... Lampiran 4. Determinasi ................................................................................. Lampiran 5. Alur Pembuatan Ekstrak ............................................................. Lampiran 6. Alur Aklimatisasi Hewan Uji ..................................................... Lampiran 7. Alur Kerja Uji Metode Aloksan ................................................. Lampiran 8. Perhitungan Dosis ....................................................................... Lampiran 9. Perhitungan Perolehan Kembali Ekstrak Yang Didapat ............. Lampiran 10. Hasil Pengukuran Pada Metode Induksi Aloksan .................... Lampiran 11. Perhitungan Presentase Kadar Glukosa Darah ......................... Lampiran 12. Hasil Statistik Dosis Ekstrak Mastigophora diclados ..............

xiii

35 36 38 39 40 41 42 43 45 46 47 48

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang Diabetes mellitus (DM) adalah suatu penyakit atau gangguan metabolisme

kronis dengan multi etiologi yang ditandai dengan tingginya kadar gula darah disertai dengan gangguan metabolisme karbohidrat, lipid dan protein sebagai akibat insufisiensi fungsi insulin. Insufisiensi fungsi insulin dapat disebabkan oleh gangguan atau defisiensi produksi insulin oleh sel-sel β Langerhans kelenjar pankreas, atau disebabkan oleh kurang responsifnya sel-sel tubuh terhadap insulin (Depkes RI, 2005). Penyakit diabetes mellitus memerlukan pengobatan jangka panjang dan biaya yang mahal, sehingga perlu mencari obat antidiabetes yang relatif murah dan terjangkau masyarakat. Sebagai salah satu alternatif adalah penggunaan obat tradisional yang mempunyai efek hipoglikemia. Pada tahun 1980 WHO merekomendasikan agar dilakukan penelitian terhadap tanaman yang memiliki efek menurunkan kadar gula darah karena pemakaian obat modern kurang aman (Kumar. et al, 2005). Telah dilaporkan bahwa tumbuhan lumut Mastigophora diclados yang tumbuh di Tahiti mengandung senyawa-senyawa fenolik seskuiterpenoid herbetan.

Senyawa-senyawa

golongan

fenolik

seskuiterpenoid

herbetan

dilaporkan memiliki aktivitas sistoksik, antioksidan, dan antimikrobial (Komala et al, 2010). Antioksidan bekerja dapat menghambat radikal bebas yang diketahui sebagai mediator dari berbagai penyakit diantara lain karsinogenesis, jantung koroner, inflamasi, artritis, diabetes dan penuaan (Ali et al. 2011). Berbagai penelitian sebelumnya menyatakan bahwa tumbuhan yang mengandung antioksidan dapat menekan terjadinya stress oksidatif dan mampu menurunkan kadar gula darah pada diabetes antara lain jahe (Zingiber officinale), kumis kucing (Orthosiphon aristatus), jeruk purut (Citrus aurantiifolia) (Miyake et al. 1998). Antioksidan dan komponen polifenol dapat menangkap radikal bebas yang

mengurangi

stres

oksidatif.

Senyawa

1

fitokimia

ternyata

mampu

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2

memanipulasi

dengan

berbagai

mekanisme

sehingga

dapat

mengurangi

komplikasi pada diabetes melalui pengurangan stres oksidatif (Widiowati, 2008). Berdasarkan uraian diatas memberikan alasan bahwa senyawa antioksidan yang mencegah atau menghambat radikal bebas dapat menurunkan kadar gula darah pada penderita diabetes. Hal tersebut mendasari penelitian uji efek antihiperglikimia dari ekstrak n-heksan lumut hati Mastigophora diclados pada hewan coba tikus dengan metode induksi aloksan.

1.2

Rumusan Masalah Apakah pemberian ekstrak n-heksan dari Mastigophora diclados dapat

menurunkan kadar gula darah tikus putih jantan.

1.3

Hipotesis Ektrak n-heksan dari lumut hati Mastigophora diclados dapat menurunkan

kadar gula darah pada tikus jantan yang telah diinduksi aloksan.

1.4

Tujuan Penelitian Untuk mengetahui pengaruh dan potensi pemberian ekstrak n-heksan

Mastigophora diclados terhadap kadar gula darah tikus putih jantan diabetes yang diinduksi dengan aloksan.

1.5

Manfaat Penelitian

1.

Secara Teoritis Hasil penelitian ini dapat memberikan masukan dalam pengembangan

ilmu pengetahuan tentang tubuhan lumut Mastigophora diclados yang ada di Indonesia dan digunakan sebagai antihiperglikemia. 2.

Secara Metodologi Hasil penelitian ini dapat digunakan untuk mengetahui pengujian aktivitas

penurunan kadar gula dengan menggunakan metode induksi aloksan yang menyebabkan peningkatan kadar gula pada darah tikus.


3

3.

Secara Aplikatif Tumbuhan alam yang ada di Indonesia khususnya lumut hati sebagai

bahan obat.


BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1

Tanaman Lumut Hati (Mastighopora diclados)

2.1.1

Klasifikasi Tanaman Klasifikasi tanaman lumut hati adalah sebagai berikut (J Nat Med, 2010)

Kingdom

: Plantae

Phylum

: Marchantiophyta

Class

: Jungermanniopsida

Order

: Jungermanniales

Suborder

: Lophocoleineae

Family

: Mastigophoraceae

Genus

: Mastigophora diclados Nees

Species

: Mastigophora diclados (Brid.) Nees

2.1.2

Sinonim Mastigophora Mastigophora diclados f. confertta (nees) sciffin, Mastigophora diclados f.

nana (nees) sciffin, Mastigophora diclados f. rhizobola (nees) sciffin, f. tenerior schiffin (Konrat, 2010) 2.1.3

Kandungan Kimia Mastigophoraceae dan Herbertaceae memiliki kandungan kimia yang

sama karena sama-sama menghasilkan senyawa seskuiterpenoid herbetan sebagai komponen utamanya (Asakawa, 1995; 2004; Harinantenaina & Asakawa, 2007). Dari pemeriksaan GCMS ekstrak eter Mastigophora disclados (Brid. ExF. Weber) Ness dari Borneo menunjukkan adanya senyawa herbertene, herbertenol, herbertene-2,3-diol dan herbertene-1,2-diol. Dalam koleksi sebelumnya dari Mastigophora diclados Malaysia Timur selain herbertane, herbertane dimer juga ditemukan pada mastigophorenes A-D (Asakawa et al,1991). Koleksi Jepang menjabarkan herbetene dan α-herbetenol dengan siklik diklorinasi bis-bibenzyl, dimana tidak ada diterpenoid dan dimer herbertane yang telah telah terditeksi

4


5

(Hashimoto et al, 2000). Data ini menunjukkan bahwa setidaknya ada tiga ras geografis Mastigophora diclados di Asia; tipe bis-bibenzyl di Jepang, jenis mastigoporene di Borneo (Malaysia Timur) dan jenis pimarane serta turunan pimarane trachylobane diterpenoid di Taiwan dan Malaysia Barat (Harinantenaina & Asakawa, 2004) (Agnieszka & Asakawa, 2010). 2.1.4

Aktivitas biologis Mastighopora diclados memiliki aktivitas sitotoksik terhadap HL-60 dan

sel KB, antioksidan dan aktivitas antimikrobial terhadap bacillus subtilis (Komala, 2010; Komala, et al ,2010 ). 2.2

Simplisia Simplisia adalah bentuk jamak dari kata simpleks yang berasal dari kata

simple, berarti satu atau sederhana. Istilah simplisia dipakai untuk menyebut bahan-bahan obat alam yang masih berada dalam wujud aslinya atau belum mengalami perubahan bentuk. Departemen kesehatan RI membuat batasan tentang simplisia sebagai berikut. Simplisia adalah bahan alami yang diguakan untuk obat dan belum mengalami perubahan proses apapun, kecuali dinyatakan lain umumnya berupa bahan yang telah dikeringkan. Berdasarkan hal itu maka simplisia dibagi menjadi tiga golongan, yaitu simplisia nabati, simplisia hewani, dan simplisia pelikan/mineral (Depkes RI, 1979). 2.3

Ekstrak Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi

senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan. Sebagian besar ekstrak dibuat dengan mengekstraksi bahan baku obat secara perkolasi. Seluruh perkolat biasanya dipekatkan secara destilasi dengan pengurangan tekanan, agar bahan sedikit mungkin terkena panas (Farmakope Indonesia, 1995). Faktor yang mempengaruhi ekstrak yaitu faktor biologi dan faktor kimia. Adapun faktor biologi meliputi: spesies tumbuhan, lokasi tumbuh, waktu pemanenan, penyimpanan bahan tumbuhan, umur tumbuhan dan bagian yang digunakan. Sedangkan faktor kimia meliputi beberapa hal, yaitu: faktor


6

internal (Jenis senyawa aktif dalam bahan, komposisi kualitatif senyawa aktif, komposisi kuantitatif senyawa aktif, kadar total rata-rata senyawa aktif) dan faktor eksternal (metode ekstraksi, perbandingan ukuran alat ekstraksi, ukuran, kekerasan dan kekeringan bahan, pelarut yang digunakan dalam ekstraksi, kandungan logam berat, kandungan pestisida) ( Depkes, 2000). 2.3.1 Ekstraksi Ekstraksi adalah proses penarikan zat pokok yang diinginkan dari bahan mentah obat dengan menggunakan pelarut yang dipilih di mana zat yang diinginkan larut. Bahan mentah obat yang berasal dari tumbuh-tumbuhan atau hewan tidak perlu diproses lebih lanjut kecuali dikumpulkan dan dikeringkan. Karena tiap-tiap bahan mentah obat, berisi sejumlah unsur yang dapat larut dalam pelarut tertentu, hasil dari ekstraksi, disebut ekstrak (Ansel H, 1985). 2.3.2 Ekstraksi Dengan Menggunakan Penyari ( Depkes RI, 2001). Cairan penyari yang digunakan dalam proses pembuatan ekstrak adalah penyari yang baik untuk senyawa kandungan yang berkhasiat atau aktif. Penyari tersebut harus dapat dipisahkan dari bahan dan dari senyawa kandungan lainnya, serta ekstrak hanya mengandung sebagian besar seyawa kandungan yang diinginkan. Faktor utama yang menjadi pertimbangan dalam pemilihan penyari adalah selktifitas, ekonomis, dan kemudahan bekerja. Macam-macam metode penyarian dalam ekstraksi yang dapat dilakukan diantaranya: 1.

Ekstraksi Cara dingin

a.

Maserasi Maserasi adalah proses pengekstrakkan simplisia dengan menggunakan

pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar) secara teknologi termasuk ekstraksi dengan metode pencapaian konsetrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinyu, sedangkan remaserasi berarti dilakukan pegulangan penambahan pelarut setelah dilakukana penyaringan meserat pertama dan seterusnya.


7

b.

Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai

sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Prinsip perkolasi adalah dengan menentukan serbuk simplisia pada suatu bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari akan menarik zat aktif dalam sel-sel yang terdapat dalam simplisia. 2.

Ekstraksi Cara panas

a.

Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut sampai dengan pada temperatur

titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama 3-5 kali seingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna. b.

Sokletasi Soklet adalah ekstraksi menggunakan penyari yang selalu baru yang

umumnya dilakukakan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi berlanjut sampai jumlah penyari relatif konstan dengan adanya pendingin balik. c.

Digesti Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinyu) pada

temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, secara umum dilakukan pada temperatur 400C-500C. d.

Infus Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air

mendidih, temperature terukur 960C-980C selama waktu tertentu (15-20 menit). Infus pada umumnya digunakan untuk menarik atau mengekstraksi zat aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Hasil dari ekstraksi ini akan menghasilkan zat aktif yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang, sehingga ekstrak yang diperoleh dengan infus tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam.


8

e.

Dekok Dekok adalah infus yang waktunya lebih lama sampai 30 menit dan

temperatur sampai titik didih air.

2.3.3

Freeze Drying Pengeringan-beku atau lyophilization adalah proses pengeringan dimana

pelarut atau media suspensi yang dapat mengkristal pada temperatur rendah dan sesudahnya mensublimasi dari padat langsung ke fase uap. Pengeringan beku mengubah es atau air dalam fase amorf menjadi uap. Karena tekanan uap es rendah, maka volume uap menjadi besar. Tujuan pengeringan beku adalah untuk memproduksi suatu substansi dengan stabilitas yang baik dan tidak berubah setelah rekonstitusi dengan air, meskipun hal ini sangat tergantung juga pada langkah terakhir proses yaitu pengemasan dan kondisi penyimpanan. Keuntungan dari proses pengeringan beku adalah : 1.

Pengeringan dengan suhu rendah dapat mengurangi penurunan produk sensitif panas.

2.

Produk cair dapat secara akurat terdosiskan.

3.

Kandungan air dari produk akhir dapat dikontrol selama proses.

4.

Produk obat dapat memiliki bentuk fisik yang menarik.

5.

Produk obat dengan luas permukaan spesifik yang tinggi dengan cepat kembali (Oetjen dan Haseley, 2004).

2.4

Diabetes Mellitus

2.4.1

Definisi Diabetes mellitus (DM) adalah suatu penyakit atau gangguan metabolisme

kronis dengan multi etiologi yang ditandai dengan tingginya kadar gula darah disertai dengan gangguan metabolisme karbohidrat, lipid dan protein sebagai akibat insufisiensi fungsi insulin. Insufisiensi fungsi insulin dapat disebabkan oleh gangguan atau defisiensi produksi insulin oleh sel-sel β Langerhans kelenjar pankreas, atau disebabkan oleh kurang responsifnya sel-sel tubuh terhadap insulin. Diabetes melitus merupakan suatu sindroma klinik yang ditandai oleh poliuri, polidipsi dan polifagi, disertai dengan peningkatan kadar glukosa darah


9

atau hiperglikemia (glukosa puasa ≥ 126 mg/dL atau postprandial ≥ 200 mg/dL atau glukosa sewaktu ≥ 200 mg/dL) (Depkes RI, 2005). 2.4.2

Klasifikasi Diabetes Mellitus

1.

Diabetes Mellitus Tipe 1 DM tipe 1 merupakan diabetes yang jarang atau sedikit populasinya,

diperkirakan kurang dari 5-10% dari keseluruhan populasi penderita diabetes. Gangguan produksi insulin pada DM Tipe 1 umumnya terjadi karena kerusakan sel-sel β pulau Langerhans (Depkes RI, 2005). Destruksi dari sel-sel β pulau Langerhans kelenjar pankreas langsung mengakibatkan defisiensi sekresi insulin. Defisiensi insulin inilah yang menyebabkan gangguan metabolisme yang menyertai DM Tipe 1. Sekitar 20% dan 40% dari pasien mengalami diabetes ketoasidosis setelah beberapa hari dari poliuria, polidipsi, polifagia, dan penurunan berat badan (Dipiro et al. 2009). Secara normal, hiperglikemia akan menurunkan sekresi glukagon, namun pada penderita DM Tipe 1 hal ini tidak terjadi, sekresi glukagon tetap tinggi walaupun dalam keadaan hiperglikemia. Hal ini memperparah kondisi hiperglikemia. Salah satu manifestasi dari keadaan ini adalah cepatnya penderita DM Tipe 1 mengalami ketoasidosis diabetik apabila tidak mendapat terapi insulin (Depkes RI, 2005). 2.

Diabetes Mellitus Tipe 2 Diabetes Tipe 2 merupakan tipe diabetes yang lebih umum, lebih banyak

penderitanya dibandingkan dengan DM Tipe 1. Penderita DM Tipe 2 mencapai 90-95% dari keseluruhan populasi penderita diabetes. Pada DM tipe 2 terjadi letargi, poliuria, nokturia, polidipsia dapat terjadi pada diagnosis, penurunan berat badan yang signifikan dapat terjadi (Dipiro et al. 2009). DM Tipe 2 bukan disebabkan oleh kurangnya sekresi insulin, tetapi karena sel-sel sasaran insulin gagal atau tak mampu merespon insulin secara normal. Keadaan ini lazim disebut sebagai “Resistensi Insulin”. Disamping resistensi insulin, pada penderita DM Tipe 2 dapat juga timbul gangguan sekresi insulin dan produksi glukosa hepatik yang berlebihan. Namun demikian, tidak terjadi pengrusakan sel-sel β Langerhans secara otoimun sebagaimana yang terjadi pada DM Tipe 1. Dengan demikian


10

defisiensi fungsi insulin pada penderita DM Tipe 2 hanya bersifat relatif, tidak absolut (Depkes RI, 2005). 3.

Diabetes Mellitus Gestasional Diabetes Mellitus Gestasional (GDM = Gestational Diabetes Mellitus)

adalah keadaan diabetes atau intoleransi glukosa yang timbul selama masa kehamilan, dan biasanya berlangsung hanya sementara atau temporer. Sekitar 45% wanita hamil diketahui menderita GDM, dan umumnya terdeteksi pada atau setelah trimester kedua. Diabetes dalam masa kehamilan, walaupun umumnya kelak dapat pulih sendiri beberapa saat setelah melahirkan, namun dapat berakibat buruk terhadap bayi yang dikandung. Akibat buruk yang dapat terjadi antara lain malformasi kongenital, peningkatan berat badan bayi ketika lahir dan meningkatnya risiko mortalitas perinatal. Disamping itu, wanita yang pernah menderita GDM akan lebih besar risikonya untuk menderita lagi diabetes dimasa depan. Kontrol metabolisme yang ketat dapat mengurangi risiko-risiko tersebut (Depkes RI, 2005). 2.4.3

Gejala Kilinik Gejala yang sering dirasakan penderita diabetes antara lain poliuria (sering

buang air kecil), polidipsia (sering haus), dan polifagia (banyak makan/mudah lapar) (Depkes RI, 2005). 1.

Pada DM Tipe 1 gejala klasik yang umum dikeluhkan adalah poliuria, polidipsia, polifagia, penurunan berat badan, cepat merasa lelah (fatigue), iritabilitas, dan pruritus

2.

Pada DM Tipe 2 gejala yang dikeluhkan umumnya hampir tidak ada. DM Tipe 2 seringkali muncul tanpa diketahui, dan penanganan baru dimulai beberapa tahun kemudian ketika penyakit sudah berkembang dan komplikasi sudah terjadi. Penderita DM Tipe 2 umumnya lebih mudah terkena infeksi, sukar sembuh dari luka, daya penglihatan makin buruk, dan umumnya menderita hipertensi, hiperlipidemia, obesitas, dan juga komplikasi pada pembuluh darah dan syaraf .


11

2.4.4

Diagnosis Diagnosis klinis DM umumnya dipikirkan apabila ada keluhan khas DM

seperti poliuria, polidipsia, polifagia, dan penurunan berat badan yang tidak dapat dijelaskan penyebabnya . Jika terdapat keluhan khas serta hasil pemeriksaan kadar glukosa darah sewaktu ≥ 200 mg/dL, maka hal tersebut sudah cukup untuk menegakkan diagnosis DM. Selain itu, jika hasil pemeriksaan kadar glukosa darah puasa ≥ 126 mg/dL, maka hasil ini juga dapat digunakan sebagai patokan diagnosis DM (Depkes RI, 2005). Apabila tidak terdapat keluhan yang khas, hasil pemeriksaan kadar glukosa darah yang abnormal tinggi satu kali saja tidak cukup kuat untuk menegakkan diagnosis DM. Diperlukan pemastian lebih lanjut dengan mendapatkan minimal satu kali lagi kadar gula darah sewaktu yang abnormal tinggi (> 200 mg/dL) pada hari lain dan kadar glukosa darah puasa yang abnormal tinggi (> 126 mg/dL) (Depkes RI, 2005).

2.4.5

Terapi Diabetes Mellitus

2.4.5.1Terapi Non Farmakologi (Depkes RI, 2005). a.

Pengaturan Diet Pengaturan diet merupakan salah satu kunci keberhasilan penatalaksanaan

DM. Diet yang dianjurkan ialah makanan dengan kecukupan gizi baik yang terdiri dari karbohidrat 60-70%, protein 10-15%, lemak 20-25%. Penurunan berat badan telah dibuktikan dapat mengurangi resistensi insulin dan memperbaiki respon sel-sel β terhadap stimulus glukosa. Selain jumlah kalori, masukan kolesterol tetap diperlukan, namun jangan melebihi 300 mg per hari. Masukan serat diusahakan paling tidak 25 g per hari yang dapat menolong menghambat penyerapan lemak, membantu mengatasi rasa lapar yang kerap dirasakan penderita DM b. OlahRaga Olah raga secara teratur dapat menurunkan dan menjaga kadar gula darah tetap normal. Olahraga akan memperbanyak jumlah dan meningkatkan aktivitas reseptor insulin dalam tubuh dan juga meningkatkan penggunaan glukosa


12

2.4.5.2 Terapi Farmakologi (Depkes RI, 2005). a.

Terapi Insulin Insulin merupakan obat utama untuk penderita DM tipe 1. Pada DM tipe 1,

sel-sel β Langerhans kelenjar pankreas penderita rusak, sehingga tidak lagi dapat memproduksi insulin, sebagai penggantinya maka penderita DM tipe 1 harus mendapatkan insulin eksogen untuk membantu agar metabolisme karbohidrat tetap berjalan dengan normal. b.

Terapi Obat Hipoglikemik Oral

1.

Golongan Sulfonilurea Obat hipoglikemik oral golongan sulfonilurea merupakan obat pilihan

untuk diabetes mellitus. Bekerja dengan merangsang sekresi insulin di kelenjar pankreas, sehingga hanya efektif bila sel-sel β Langerhans pankreas masih dapat berproduksi. Penurunan kadar glukosa darah yang terjadi setelah pemberian sulfonilurea terjadi karena perangsangan sekresi insulin oleh kelenjar pankreas. Adapun yang termasuk kedalam golongan sulfonilurea yakni glibenklamida, glipizida, glikazida, glimepirida, serta glikuidon. 2.

Golongan Meglitinida dan Turunan Fenilalanin Bekerja dengan meningkatkan sekresi insulin oleh kelenjar pankreas.

Umumnya senyawa obat hipoglikemik oral golongan ini dipakai dalam bentuk kombinasi dengan obat-obat antidiabetik oral lainnya. Obat hipoglikemik oral golongan meglitinida dan turunan fenilalanin meliputi repaglinida, serta nateglinida. 3.

Golongan Biguanida Golongan ini bekerja langsung pada hati (hepar), menurunkan produksi

glukosa hati. Senyawa-senyawa golongan biguanida tidak merangsang sekresi insulin, dan hampir tidak pernah menyebabkan hipoglikemi. Satu-satunya senyawa biguanida yang masih dipakai sebagai obat hipoglikemik oral saat ini ialah metformin.


13

4.

Golongan Tiazolidindion (TZD) Golongan tiazolidindion bekerja dengan meningkatkan kepekaan tubuh

terhadap insulin dengan jalan berikatan dengan PPARγ (peroxisome proliferator activated receptor-gamma) di otot, jaringan lemak, dan hati untuk menurunkan resistensi

insulin.

Senyawa-senyawa

TZD

juga

menurunkan

kecepatan

glikoneogenisis. Obat hipoglikemik oral golongan TZD meliputi rosiglitazone serta pioglitazone. 5.

Golongan Inhibitor α-Glukosidase

Golongan inhibitor α-glukosidase bekerja dengan menghambat enzim alfa glukosidase yang terdapat pada dinding usus halus. Enzim-enzim α-glukosidase (maltase, isomaltase, glukomaltase, dan sukrase) berfungsi untuk menghidrolisis oligosakarida pada dinding usus halus. Inhibisi kerja enzim ini secara efektif dapat mengurangi pencernaan karbohidrat kompleks dan absorbsinya, sehingga dapat mengurangi peningkatan kadar glukosa post prandial pada penderita diabetes. Senyawa inhibitor α-Glukosidase juga menghambat enzim α-amilase pankreas yang bekerja menghidrolisis polisakarida di dalam lumen usus halus. Obat hipoglikemik oral golongan ini meliputi akarbose dan miglitol. 2.5

Aloksan

Gambar 1. Struktur Aloksan Sinonim

: Alloxan; 2,4,5,6-Tetraxohexahydropyrimidine;mesoxalyurea; Mesoxalylcarbamide

Rumus molekul

: C4H2N2O4

Berat molekul

: 142,07


14

Injeksi aloksan ke dalam hewan menyebabkan penurunan dari sel β pada pulau langerhans yang sangat kecil. Sejak sel ini disintesis oleh hormon insulin, aloksan sering digunakan untuk induksi diabetes pada percobaan hewan (Halliwel et al, 1999). Aloksan terdapat dalam tiga bentuk senyawa yaitu aloksan anhidrat, aloksan monohidrat dan aloksan tetrahidrat. Aloksan mempunyai bentuk hablur kristal, tidak berair, warna merah muda pada suhu 2300C dan tidak stabil pada suhu 2560C. LD50 pada dosis 200 mg/kg BB secara intravena. Sebagai diabetogenik, aloksan dapat digunakan secara intravena, intraperitoneal dan subkutan. Dosis intravena yang digunakan biasanya 65mg/kg BB, sedangkan intraperitoneal dan subkutan adalah 2-3 kalinya (Szkudelsi, 2001). Mekanisme aksi dalam menimbulkan perusakan yang selektif belum diketahui dengan jelas. Beberapa hipotesis tentang mekanisme aksi yang telah diajukan antara lain adalah pembentukan kelat terhadap Zn, interfersi dengan enzim-enzim sel β pulau langerhans pankreas secara selektif oleh aloksan belum banyak diketahui (Suharmiati, 2003). Penelitian terhadap mekanisme kerja aloksan secara in vitro menunjukan bahwa aloksan menginduksi pengeluaran ion kalsium dari mitokondria sel β pankreas sehingga proses oksidasi sel tersebut terganggu. Keluarnya ion kalsium dari mitokodria menyebabkan gangguan homeostatis yang merupakan awal dari matinya sel β pankreas sehingga tidak dapat memproduksi insulin (Suharmiati, 2003). 2.6

Glibenklamid (Paffitt, 1983)

Gambar 2. Struktur glibenklamid Sinonim

: Glibenklamid, glyburide, glybenclamide

Rumus molekul

: C23H28CIN3O5S


15

Berat molekul

: 494.01

Deskripsi

: Bewarna putih atau hampir putih, berbentuk serbuk kristal.

Dosis

: Dosis 5 mg/hari selama 7 hari, dosis 2,5 mg - 5 mg/hari sampai 15 mg/hari.

Absorpsi

: Glibenklamid diabsorpsi dari lambung dan sangat bagus di protein plasma, dikeluarkan lewat feses dan di metabolisme di urin. Glibenklamid adalah golongan sulfonilurea yang mempunyai aksi sama dengan kloporpamid. Setelah diberikan dosis tunggal dari glibenklamid, gula darah turun 3 jam dan konsentrasi berkurang kira-kira 15 jam. Pasien yang usia lanjut membutuhkan dosis yang lebih kecil. Sebagian pasien dikontrol dengan insulin dan dapat juga dikontrol dengan glibenklamid.

2.7

Metode Pengujian Diabetes

2.7.1

Metode Induksi Aloksan Keadaan diabetes pada hewan uji ini dapat dilakukan dengan cara

pankreotomi dan juga secara kimia. Zat-zat kimia sebagai induktor diabetogen antara lain aloksan dan steptrozosin yang pada umumnya dapat diberikan secara parenteral. Zat diatas mampu menginduksi hiperglikemi yang permanen dalam waktu dua sampai tiga hari (Depkes, 1993). Prinsip metodenya adalah kepada hewan uji dilakukan dengan memberikan suntikan aloksan monohidrat secara intravena dengan dosis 65 mg/kg BB. Perembangan hiperglikemia diperiksa setiap hari. Pemberian antidiabetes secara oral dapat menurunkan kadar glukosa darah dibandingkan terhadap hewan uji positif (Depkes, 1993). 2.7.2

Metode Toleransi Glukosa Kemampuan tubuh untuk menggunakan karbohidrat disebut toleransi

karbohidrat (toleransi glukosa). Dengan memberikan glukosa secara oral, kadar glukosa darah akan naik, tetapi tetap dalam keadaan normal tidak pernah melebihi


16

170mg/100 mL. Puncak kadar glukosa dalam ½ atau 1 jam dan kembali normal setelah 2-3 jam. Prinsip metodenya adalah kepada hewan uji yang telah dipuasakan lebih kurang 20 sampai 24 jam, diambil darah melalui intravena lalu diberikan bahan uji obat antidiabetes dan diberi larutan glukosa per-oral. Kemudian cuplikan darah diambil lagi setelah interval waktu tertentu ( Depkes RI, 1993). 2.8

Metode Pemeriksaan Kadar Glukosa Darah (Widijanti, 2009) Pemeriksaan kadar glukosa darah dapat ditentukan dengan 4 macam

metode , yaitu metode oksidasi reduksi, metode kondensasi, metode enzimatik, metode dengan glukometer. a.

Metode Oksidasi Reduksi Pengukuran glukosa berdasarkan pada sifatnya sebagai zat pereduksi

dalam larutan alkali panas. Metode ini tidak spesifik karena adanya zatzat non glukosa lain juga bersifat mereduksi. b.

Metode Enzimatik Metode ini menggunakan enzim-enzim yang bekerja secara spesifik pada

glukosa, sehingga memberikan hasil yang relatif lebih tepat dibandingkan metode lainnya. Beberapa metode enzimatik yang digunakan antara lain metode glukosa oksidase dan metode heksokinase c.

Glucose Test (glukometer) Pengukuran kadar glukosa darah tikus putih dilakukan dengan glucose test

(glukometer). Alat ini merupakan alat yang digunakan untuk memonitor tingkat glukosa didalam darah. Tes ini merupakan spesifik untuk glukosa. Tes tersebut menggunakan oksidasi glukosa dan berdasarkan pada kemajuan teknologi biologi sensor.


BAB 3 METODE PENELITIAN

3.1

Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Penapisan

Fitokimia dan Laboratorium Hewan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Berlangsung mulai dari bulan Maret 2013 sampai dengan Juli 2013. 3.2

Alat dan Bahan

3.2.1

Alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut :

Timbangan hewan, kandang tikus beserta tempat makan dan minum, sonde oral, jarum suntik, blender, glukometer (easy touch), vacuum rotary evaporator, oven, timbangan analitik, kertas saring, kapas, sarung tangan, masker, alumunium foil, lumpang, label dan alat-alat gelas. 3.2.2

Bahan

1.

Hewan Uji Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih jantan

galur Wistar yang berumur 2 – 3 bulan dengan berat badan 150 – 250 g yang diperoleh dari Institut Pertanian Bogor. 2.

Bahan Uji Bahan uji yang digunakan adalah ekstrak n-heksan dari lumut hati

Mastigophora diclados (Mastigoporaceae), glibenklamid (BPOM) sebagai obat pembanding dan aloksan monohidrat sebagai penginduksi. 3.

Bahan Kimia Bahan-bahan yang diperlukan dalam penelitian ini adalah n-heksan

(Brataco), NaCMC, Kloroform, H2SO4 pekat , amonia encer, etil asetat, FeCl3, pereaksi Mayer, pereaksi Dragendroff, asam klorida, NaOH, aquadest.

17


18

3.3

Cara Kerja

3.3.1

Pembuatan Simplisia Pembuatan simplisia yang memenuhi standar terdiri dari tahap-tahap

sebagai berikut : pengumpulan simplisia yang diambil dari Gunung Slamet Purwokerto pada bulan September 2012, kemudian disortasi bertujuan agar memudahkan pencucian dan agar dapat memisahkan simplisia dengan pengotornya,

pencucian dilakukan dengan menggunakan air yang mengalir,

setelah itu dilakukan pengeringan dengan cara diangin-anginkan setelah benarbenar kering dilakukan kembali sortasi untuk memastikan simplisia bebas dari pengotor, kemudian simplisia ditimbang dan digiling hingga menjadi serbuk lalu dilakukan pengayakan. 3.3.2

Ekstraksi Ditimbang serbuk simplisia 2100 gram, kemudian dimasukkan ke dalam

wadah, lalu diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut non polar, semi polar, dan polar yaitu pelarut n-heksan, etil asetat dan metanol sampai seluruh serbuk terendam oleh pelarut, disimpan ditempat yang gelap dan sesekali diaduk hingga tidak ada lagi senyawa yang terekstrak dengan ditandai warna pelarut yang jernih. Filtrat yag diperoleh diuapkan dengan rotary evaporator hingga didapat ekstrak yang kental. Jika masih ada air yang tersisa dikentalkan menggunakan freeze dryer. 3.3.3 Penapisan Fitokimia Penapisan fitokimia dilakukan dengan menguji adanya golongan senyawa alkaloid, flavonoid, terpenoid, saponin, tanin dan fenolik. Prosedur pengujiannya adalah sebagai berikut. a.

Identifikasi Alkaloid Untuk mengidentifikasi alkaloid, ekstrak dilarutkan dengan etanol 96%

kemudian ditambahkan asam klorida encer 2N. Filtrat yang diperoleh disaring kemudian diidentifikasi menggunakan pereaksi Mayer LP, Bouchardat LP, Dragendorff

LP. Pada penambahan Mayer LP, hasil positif ditandai dengan

terbentuknya endapan berwarna putih atau kuning. Hasil positif Dragendorff LP ditunjukkan dengan terbentuknya endapan berwarna merah bata. Penambahan


19

Bouchardat LP memberikan hasil positif jika terbentuk endapan coklat sampai hitam (Ayoola et al, 2008). b.

Identifikasi Saponin Ekstrak ditambahkan 5 ml aquadest panas, didinginkan kemudian dikocok

kuat-kuat selama 10 menit. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil selama tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-10 cm dan pada penambahan 1 tetes asam klorida 2 N buih tidak hilang (Ayoola et al, 2008). c.

Identifikasi Flavonoid Tiga metode yang digunakan untuk menguji flavonoid. Pertama, amonia

encer (5 mL) ditambahkan ke sebagian filtrat encer dari ekstrak. Kemudian asam sulfat pekat (1 mL) ditambahkan. Hilangnya warna kuning menunjukkan adanya flavonoid. Kedua, beberapa tetes larutan aluminium 1% ditambahkan ke sebagian dari filtrat, terbentuknya warna kuning menunjukkan adanya flavonoid. Ketiga, sebagian dari ekstrak dipanaskan dengan 10 mL etil asetat yang telah diuapkan selama 3 menit. Campuran kemudian disaring dan 4 mL filtrat dikocok dengan penambahan 1 mL larutan amonia encer, terbentuknya warna kuning menunjukkan adanya flavonoid (Ayoola et al, 2008). d.

Identifikasi Terpenoid Sejumlah 0,5 g ekstrak masing-masing ditambahkan

dengan 2 mL

kloroform. Kemudian dengan hati-hati ditambahkan (3 mL) H2SO4 pekat sampai membentuk lapisan. Terbentuknya warna merah kecoklatan pada permukaan menunjukkan adanya terpenoid (Ayoola et al, 2008). e.

Identifikasi Tanin Sebanyak 0,5 g ekstrak dipanaskan dalam 10 ml air dalam tabung reaksi

dan kemudian disaring. Ditambahkan beberapa tetes FeCl3 0,1% dan diamati perubahan warna menjadi hijau kecoklatan atau biru kehitaman (Ayoola et al, 2008). f.

Identifikasi Fenolik Sejumlah ekstrak ditambahkan 3-4 tetes larutan besi klorida, terbentuknya

warna biru-hitam menunjukkan adanya fenolik ( Tiwari et al, 2011 ).


20

3.3.4

Pengujian Parameter Non spesifik Ekstrak ( Depkes RI, 2000).

a.

Susut Pengeringan Ektrak ditimbang dengan seksama sebanyak 1-2 gram dan dimasukkan ke

dalam botol timbang dangkal bertutup yang sebelumnya telah dipanaskan pada suhu 1050 C selama 30 menit dan telah ditara. Sebelum ditimbang, ekstrak diratakan dalam botol timbangan dengan menggoyang- goyangkan botol, hingga merupakan lapisan setebal lebih kurang 5 mm sampai 10 mm, kemudian dimasukkan kedalam oven, buka tutupnya. Pengeringan dilakukan pada suhu penetapan yaitu 1050 C hingga diperoleh bobot tetap lalu ditimbang. Sebelum setiap pengeringan, botol dibiarkan dalam keadaan tertutup mendingin dalam eksikator hingga suhu kamar. b.

Kadar Air Pengukuran kadar air dilakukan dengan cara kurang lebih 3 gram ekstrak

dimasukkan dan ditimbang seksama dalam wadah yang telah ditara. Ekstrak dikeringkan pada suhu 1050 C selama 5 jam dan ditimbang. Pengeringan dilanjutkan dan ditimbang pada jarak 1 jam sampai perbedaan antara 2 penimbangan berturut- turut tidak lebih dari 0,25%. c.

Kadar Abu Lebih kurang 2-3 g ekstrak yang telah digerus dan ditimbang seksama,

dimasukkan kedalam krus platina atau krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara, lalu ekstrak diratakan. Dipijarkan pelahan-lahan hingga arang habis, didinginkan, ditimbang. Jika arang tidak dapat hilang, ditambahkan air panas, disaring dengan menggunakan kertas saring bebas abu. Dipijarkan sisa abu dan kertas saring dalam krus yang sama. Filtrat dimasukkan ke dalam krus, diuapkan, dipijarkan hingga bobot tetap, ditimbang. Kadar abu dihitung terhadap berat ekstrak dan dinyatakan dalam % b/b. 3.3.5

Pengujian Parameter Spesifik ( Depkes RI, 2000). Uji parameter spesifik hanya dilakukan uji parameter organoleptik ekstrak

dengan menggunakan pancaindera mendeskripsikan bentuk, warna, bau dan rasa.


21

3.4

Rancangan Percobaan Hewan coba yang digunakan adalah tikus putih jantan galur Wistar,

berumur 2-3 bulan dengan berat badan 150 – 250 gram diaklimatisasi selama dua minggu agar dapat menyesuaikan dengan lingkungannya. Selama proses adaptasi, dilakukan pengamatan kondisi umum dan penimbangan berat badan. Hewan uji dipilih sebanyak 30 ekor tikus putih jantan secara acak untuk dibagi menjadi 6 kelompok, masing- masing terdiri dari 5 ekor. Penentuan tikus tiap kelompok mengacu pada syarat WHO.

Tabel 1. Tabel Perlakuan Metode Induksi Aloksan Kelompok

Jumlah

Perlakuan

I

5

Kontrol normal, diberi air suling.

II

5

Kontrol negatif, diinduksi aloksan & diberi Na CMC 0,5%.

III

5

IV

5

V

5

VI

5

Kontrol positif, diinduksi aloksan kemudian diberi suspensi glibenklamid 0,1mg/200 BB. Diinduksi aloksan & diberi suspensi Na CMC 0,5 % ektrak lumut hati Mastigophora diclados dalam dosis 1mg/kg BB. Diinduksi aloksan & diberi suspensi Na CMC 0,5% ekstrak lumut hati Mastigophora diclados dalam dosis 10mg/kg BB. Diinduksi aloksan & diberi suspensi Na CMC 0,5 % ekstrak lumut hati Mastigophora diclados dalam dosis 100 mg/kg BB.

3.5

Pembuatan Sediaan Dosis Uji

1.

Dosis ekstrak lumut hati Mastigophora diclados Dosis yang digunakan pada ekstrak n-heksan Mastigophora diclados

adalah dosis 1 mg/kg BB, 10 mg/kg BB dan 100 mg/kg BB yang kemudian di konversikan ke dalam dosis tikus masing-masing menjadi 0,2 mg/200 g BB, 2 mg/200 g BB dan 20 mg/200 g BB. 2.

Dosis Glibenklamid Sebagai Kontrol Positif Glibenklamid diberikan dalam bentuk suspensi dengan Na CMC sesuai

dosis oral efektif pada manusia 5 mg/60kg BB yang dikonversikan berdasarkan


22

perhitungan menggunakan luas permukaan tubuh (HED), yaitu dosis untuk setiap 200 g BB tikus menjadi 0,1 mg/200g BB. 3.

Dosis Aloksan Dosis

aloksan monohidrat yang akan digunakan dalam percobaan ini

adalah 100 mg/kg BB dilakukan secara intraperitoneal untuk tikus dengan berat badan 200g adalah 20 mg/200g BB (Nandhagopal et al , 2013) adapun dalam penelitian lain menggunakan dosis 150mg/kg BB secara interperitoneal (Kharkar et al 2013). 3.6

Pengambilan Darah dan Pengaruh Kadar Glukosa Darah Pengambilan darah dilakukan dengan cara tikus dimasukkan ke dalam

kandang kecil. Kemudian ekor tikus dibersihkan dengan alkohol 70%. Selanjutnya darah diambil secara intravena melalui ujung ekor dilakukan pemijatan perlahan terhadap ekor agar darah keluar, dan di ukur kadar gula darah dengan alat glukometer. 3.7

Uji Statistik Terhadap Kadar Glukosa Darah

a.

Pengelohan Data Data yang diperoleh diolah secara statistik menggunakan SPSS. Analisis

yang dilakukan yaitu uji normalitas dan uji homogenitas, selanjutnya dilakukan analisis varian satu arah (ANOVA) untuk melihat ada atau tidaknya perbedaan bermakna antara kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol. Bila terdapat perbedaan bermakna, maka untuk mengetahui perbedaan antar kelompok perlakuan dilanjutkan uji beda nyata terkecil (BNT). Hipotesis : Ho : tidak ada perbedaan yang bermakna antara setiap kelompok. Ha : terdapat perbedaan yang bermakna antara setiap kelompok. Pengambilan Keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0,05, maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0,05, maka Ho ditolak.


23

b.

Presentase Penurunan Kadar Glukosa Darah dengan Rumus Sebagai berikut : (Farida dkk, 2011)

Presentase penurunan kadar glukosa darah = Keterangan : Go: gula darah puasa sebelum diberikan sediaan uji. Gt: gula darah setelah diberikan sediakan uji.


BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1

Penyiapan Bahan Tumbuhan lumut hati yang digunakan diperoleh dari Gunung Slamet

Purwokerto. Kemudian dilakukan determinasi di Pusat Penelitian Bogoriense (LIPI) Cibinong Bogor yang bertujuan untuk mengetahui keaslian tumbuhan yang akan digunakan dan untuk menghindari terjadinya kesalahan dalam pemilihan tumbuhan. Hasil determinasi yang diperoleh menunjukan bahwa tumbuhan lumut hati yang digunakan merupakan spesies Mastighopora diclados (Brid.) Nees. Tumbuhan lumut yang diperoleh, disortasi untuk memisahkan antara tumbuhan dengan kotoran dan kontaminan lainnya. Proses pengeringan dilakukan dengan cara diangin-anginkan yang bertujuan untuk meminimalisir adannya pemanasan yang dapat merusak senyawa yang terkandung, penghalusan dilakukan untuk

memperkecil

ukuran

partikel

tanaman,

yang

bertujuan

untuk

memaksimalkan dalam proses ekstraksi, karena semakin kecil ukuran partikel, semakim besar luas permukaannya, sehingga kontak antara pelarut dengan partikel tanaman semakin besar dan proses ekstaksi dapat berjalan maksimal. Simplisia disimpan dalam wadah tertutup rapat.

4.2

Ekstraksi Tumbuhan lumut hati diekstraksi dengan menggunakan metode maserasi.

Cara ini dipilih untuk meminimalisir kerusakan senyawa termolabil. Proses maserasi ini menggunakan teknik maserasi bertingkat dengan pelarut yang memiliki tingkat kepolaran yang berbeda yaitu n-heksan, etil asetat dan metanol. Alasan menggunakan teknik maserasi bertingkat ini yaitu untuk memaksimalkan proses ekstraksi dimana senyawa akan terekstraksi berdasarkan tingkat kepolarannya. Sebuk simplisia lumut yang digunakan untuk maserasi sebanyak 2103 gram yang kemudian diperoleh ekstrak n-heksan sebanyak 46 gram dengan randemen 2,18%.

24


25

Tabel 2. Hasil Karateristik Ektrak n- heksan dari Mastigophora diclados No

Parameter

Ektrak n-heksan

1.

Organoleptis

Warna : hitam Bau

: jamu

Bentuk : gumpalan kasar 2.

Kadar air

0,048%

3.

Kadar abu

0,636%

4.3

Hasil Penapisan Fitokimia Penapisan fitokimia dilakukan untuk mengidentifikasi komponen apa saja

yang

terkandung dalam tanaman sehingga memungkinkan untuk megetahui

senyawa yang berpotensi sebagai antidiabetes. Penapisan fitokimia yang dilakukan meliputi uji senyawa alkaloid, flavonoid, steroid, terpenoid, saponin, tanin dan fenol. Berdasarkan uji fitokimia yang dilakukan diketahui bahwa ekstrak n-heksan Mastighopora diclados hanya mengandung terpenoid. Tabel 3. Hasil Penapisan Fitokimia No.

Metabolit Sekunder

Hasil

1.

Alkaloid

-

2.

Flavonoid

-

3.

Saponin

-

4.

Steroid

-

5.

Terpenoid

+

6.

Tanin

-

7.

Fenol

-

Keterangan : (+) Memberikan reaksi positif, (-) Memberikan reaksi negatif

4.4 Pengukuran Kadar Glukosa Darah Dengan Metode Induksi Aloksan Pada penelitian ini tikus diaklimatisasi selama 2 minggu agar tikus dapat menyesuaikan diri dengan lingkungannya dengan pemberian makan dan minum. Setelah aklimatisasi, tikus kemudian ditimbang. Sebelum dilakukan pengukuran


26

darah, seluruh tikus dipuasakan selama 18 jam untuk meniadakan pengaruh zatzat lain pada pengukuran kadar glukosa darah. Tikus diinduksi melalui interperitoneal dengan dosis 100mg/kg BB atau setara dengan 20mg/200g BB dipilih untuk membuat diabetes tipe 2 dalam penelitian ini, karena diharapkan diabetes yang timbul berupa resistensi insulin yang masih dapat diobati oleh penggunaan obat hipoglikemik. Setelah diinduksi dengan aloksan kemudian tikus dipelihara selama 7 hari sebelum diberi perlakuan dengan sampel uji untuk membuat hiperglikemia yang stabil. Setelah tikus hiperglikemia oleh induksi aloksan, tikus kemudian dibagi menjadi 5 kelompok perlakuan untuk kelompok yang akan diberikan terapi. Adapun 1 kelompok untuk kelompok kontrol normal tanpa diinduksi aloksan. Pemberian ekstrak n-heksan Mastigophora diclados dan glibenklamid sebagai terapi hiperglikemik diberikan secara oral pada tikus selama 28 hari. Glibenklamid dilipilih sebagai terapi pembanding ekstrak n-heksan Mastigophora diclados karena glibenklamid diabsorpsi dari lambung dan sangat bagus di protein plasma, dikeluarkan lewat feses dan di metabolisme di urin (Paffitt, 1983). Adapun pemberian glibenklamid dan ekstrak n-heksan diberikan dalam sediaan suspensi dengan penambahan NaCMC 0,5 % sebagai agen pensuspensi. Setelah pengukuran glukosa darah didapatkan hasil, kemudian dapat dihitung nilai rerata dan standar deviasi yang dapat dilihat pada tabel 4.

Tabel 4. Nilai Rerata dan Standar Deviasi Kadar Glukosa Darah Tikus Hari ke 0

Hari ke 7

Hari ke 14

Hari ke 21

Hari ke 28

Kelompok

sebelum

setelah

setelah

setelah

setelah

Perlakuan

pemberian

pemberian

pemberian

pemberian

pemberian

ekstrak

ekstrak

ekstrak

ekstrak

ekstrak 60,2±12,35

Kontrol normal

58,8±15,31

60,6±15,38

59,2±12,85

60±15,41

Kontrol negatif

161,8±12,67

165±13,54

169,6±13,12

189,8±8,61 171,4±23,43

Kontrol positif

136,2±14,75

107,6±15,09 93,8±17,12

78,4±18,76 65,8±19,51

Dosis 1mg/kg BB

149,75±7,41

124,5±3,51

111,25±4,97

104,5±4,04 105±4,35

Dosis 10mg/kg BB

143±7

142±6

126,75±14,43 115±15,76

Dosis 100mg/kg BB

164,6±14,01

98,33±14,57 72,66±10,70

109±12,72

69,5±22,01 58,8±8,52


27

Hasil penelitian ini didapat bahwa rerata kadar glukosa darah pada kelompok perlakuan lebih tinggi dari pada kelompok kontrol dan hasil ini tidak bermakna

secara

statistik.

Untuk

membandingkan

lebih

jelas

efek

antihiperglikemik antara kelompok, dapat dilihat pada presentase penurunan kadar glukosa pada tabel 5.

Tabel 5. Presentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Pada Tikus Kelompok Perlakuan

Hari ke 7

Hari ke 14

Hari ke 21

Hari ke 28

Kontrol positif

20,99%

31,13%

42,43%

51,68%

Dosis 1mg/kg BB

16,8%

25,71%

30,21%

29,88%

Dosis 10mg/kg BB

0,6%

11,36%

19,58%

23,77%

Dosis 100mg/kg BB

40,2%

55,8%

57,7%

64,2 %

Untuk penelitian antihiperglikemik ini menggunakan dosis bertingkat secara teratur pada tikus. Ekstrak di siapkan dalam 3 besaran dosis kelipatan 10 untuk tiap kelompok. Besarnya dosis ditentukan dari hasil penelitian tahun sebelumnya

yang

mengacu

pada

penelitian

Endah

Purnamasari,

yang

menunjukkan efek paling baik pada pemberian dosis 100mg/kg BB. Dilihat dari hasil presentase kadar penurunan glukosa darah seluruh dosis perlakuaan dari dosis rendah sampai dosis tinggi mengalami penurunan glukosa darah namun dari data tersebut dapat dilihat dosis yang dapat menurunkan glukosa secara maksimal terdapat pada dosis tinggi

(100mg/kg BB) adapun

dosis rendah (1mg/kg BB) lebih besar presentase penurunannya dibandingkan dosis sedang (10mg/kg BB). Dari presentase kadar penurunan tersebut dapat dibuat kurva hubungan antara kadar glukosa darah (mg/dL) terhadap waktu (hari) untuk semua kelompok perlakuan dapat dilihat pada gambar 3.


28

Grafik Kadar Glukosa Darah Tikus 200

189.8

180 140 120 100

Kontrol Normal

142 124.5 107.6 98.33

126.75 111.25 93.8

115 104.5

109 105

60.6

72.66 59.2

78.4 69.5 60

65.8 60.2 58.8

80 60

58.8

171.4

169.6

165

164.6 161.8 149.75 143 136.2

160

Kontrol Negatif Kontrol Positif Dosis rendah

40

Dosis Sedang Dosis Tinggi

20 0 0

7

14

21

28

Gambar 3. Kadar Glukosa Darah Pada Metode Induksi Aloksan

Pada grafik diatas dapat dilihat yang menunjukkan efek penurunan kadar glukosa darah yang paling besar adalah perlakuan ektrak n-heksan dari lumut hati Mastigophora

diclados

dosis

tinggi

(100mg/kgBB)

diikuti

perlakuan

glibenklamid 0,1mg/200gBB kemudian ekstrak n-heksan dari lumut hati Mastigophora diclados dosis rendah (1mg/kgBB) dan terakhir perlakuan ekstrak n-heksan dari lumut hati Mastigophora diclados dosis sedang (10mg/kgBB). Grafik

pada kontrol negatif dimana tikus hanya diinduksikan oleh

aloksan terjadi penurunan pada hari ke 28 hal ini mungkin dikarenakan adanya regenerasi sel beta pankreas, sesuai dengan penelitian (Chaugale et al, 2007) yang mengatakan bahwa regenerasi pankreas dapat terjadi pada waktu 12 hari pada penggunaan aloksan dosis 120mg/kgBB. Dalam penelitian tersebut juga dikatakan bahwa pemberian aloksan dosis 140mgkg BB akan terjadi peningkatan glukosa darah yang dapat kembali normal pada waktu beberapa bulan. Dari seluruh data diatas memperlihatkan bahwa efek penurunan kadar glukosa darah secara maksimal terdapat pada dosis tinggi (100mg/kg BB). Sedangkan untuk dosis rendah (1mg/kg BB) dan dosis sedang (10mg/kg BB) belum dapat menghasilkan efektifitas dosis yang maksimal perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan dosis yang lebih bervariasi agar diketahui dosis optimal untuk dapat menurunkan glukosa darah pada tikus hiperglikemik.


29

Belum

terdapat

penelitian

mengenai

aktivitas

antidiabetes

dari

Mastigophora diclados. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan dari tumbuhan dapat memiliki aktivitas sebagai antidiabetes antara lain biji jinten hitam yang dilaporkan memiliki dosis 10g/kg BB (Khanam,2009) maka ekstrak n-heksan dari Mastigophora diclados memiliki aktivitas antidiabetes yang lebih besar karena dosis yang digunakan hanya sebesar 100mg/kg BB dengan metode yang sama. Pada penelitian tersebut dilaporkan juga bahwa metabolit sekunder yang didapat adalah senyawa terpenoid. Dalam penelitian ini ekstrak n-heksan dari lumut hati Mastigophora diclados juga didapatkan metabolit sekunder yang sama yaitu terpenoid. Kandungan senyawa terpenoid dapat sebagai antioksidan yang dimana dapat membantu tubuh dalam proses pemulihan sel-sel tubuh (Nur asda wardiah, 2009). Berbagai penelitian sebelumnya juga menyatakan bahwa tumbuhan yang mengandung antioksidan dapat menekan terjadinya stress oksidatif dan mampu menurunkan kadar gula darah pada diabetes antara lain jahe (Zingiber officinale), kumis kucing (Orthosiphon aristatus), jeruk purut (Citrus aurantiifolia) (Miyake et al. 1998). Selanjutnya, untuk melihat kesamaan dan perbedaan nilai rata-rata presentase kadar glukosa darah tikus pada setiap kelompok uji data pengukuran glukosa darah dianalisis secara statistik dengan mengunakan Uji ANOVA satu arah (lampiran 12). Uji statistik awal yakni dilakukan uji normalitas dengan menggunakan kolmogorov-smirnof, dari tabel normalitas diketahui bahwa seluruh hewan uji terdistibusi dengan normal (P≥0,05) baik sebelum maupun setelah perlakuan. Pada hasil pengujian BNT menunjukkan bahwa kontrol positif, dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi berbeda signifikan dengan kontrol negatif yang artinya bahwa glibenklamid dan ekstrak n-heksan dari lumut hati Mastighopora diclados dapat memberikan efek antidiabetik terhadap tikus yang di induksi aloksan. Pada hari ke 7, 21 dan 28 kontrol positif tidak

terjadi

perbedaan secara bermakna dengan dosis tinggi yang artinya bahwa dosis tinggi mempunyai efek yang hampir sama dengan kontrol positif atau bahkan dapat


30

memberikan efek yang lebih baik, kemungkinan karena glibenklamid hanya menstimulasi pelepasan insulin pada tikus sedangkan ekstrak lumut hati berkemungkinan dapat memperbaiki kerja sel beta pankreas.


BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN

5.1

Kesimpulan Dari hasil penelitian dapat disimpulkan :

1.

Ekstrak n-heksan dari Lumut hati Mastigophora diclados dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus putih yang diinduksi dengan aloksan.

2.

Presentase kadar penurunan glukosa darah terbesar yaitu pada dosis tinggi (100mg/kgBB) sebesar 64,2% dan tidak berbeda secara bermakna dengan kontrol positif (P≥0,05) dengan dosis 0,1 mg/200g BB.

5.2

Saran Perlu dilakukan penelitian tentang toksisitas dari ekstrak n-heksan lumut

hati Mastigophora diclados pada hewan uji untuk mengevaluasi batas keamanannya jika digunakan dalam jangka panjang, serta dilakukan penelitian lebih lanjut dengan dosis yang lebih bervariasi agar diketahui dosis optimal untuk menurunkan glukosa darah tikus dan memperhatikan lama perlakuan.

31


DAFTAR PUSTAKA Ali, M., et al., “Phytochemical screening, antioxidant and analgesic activities Of Croton argyratus ethanolic extracts” Journal of Medicinal Plants Research Vol. 6. Ansel, Howard C. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi Edisi Keempat. Penerjemah Farida Ibrahim. UI Press : Jakarta. Asakawa, Y. 2000. Recent Advance in Phytocemistry of Bryophytes – Acetogenins Terpenoid and Bis (bibenzil )s from Selected Japans,Taiwanes,New Zeland,Argebtina and European Liverwort. Phytocemistry 56(2001) 297-312. 31 agustus 2000. Ayoola, GA., et al. 2008. Chemical analysis and antimicrobial activity of the essential oil syzigium aromatikum (clove). African journa of Microbiology Research 2 (1), pp. 162-166 Chougale AD, Panaskar SN, Gurao PM, Arvindeka AU. 2007. Optimization of alloxan dose is essential to induce stable diabetes for prolong period. Conard, h.s redfearn. 1996. How to know the mosses and liverworts. Lowa: wm. C. Brown company publisher. Departemen Kesehatan RI. 1993. Metode penapisan Farmakologi,Pengujian Fitokimia, Pengujian klinik Pengembangan dan Pemanfaatan Obat Bahan Alam. DEPKES RI; 15-17 Departemen Kesehatan RI . 1979. Farmakope indonesia, edisi III. Departemen Kesehatan RI, Jakarta. Departemen Kesehatan RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan : Jakarta Departemen Kesehatan RI. 1996 Materia Medika Indonesia. Jilid I: Jakarta. Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Dirjen Pengawasan Obat dan Makanan.Volume 1 : Jakarta. Departemen Kesehatan RI. 2001. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Badan Pengawasan Obat danMakanan. DEPKES RI Jakarta ; hal 13. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (2005). Pharmaceutical Care untuk Penyakit Diabetes Militus. Direktorat Bina Farmasi dan Komunitas dan Klinik Jakarta . Hal : 1-27.

32


33

Dipiro, J. T. (2009). Pharmacotherapy Handbook. 7th Edition. The McGrawHill. New York. Halliwel B, Gutterridge, J , M, C. 1949. Free radial in biology and medicine .3 nd ed oxford university press. London ;561-563. Jung, Y.W., T. R. Schoeb., C.T. Waever., D.D. Chaplin. 2006. Antigen and Lipopolysaccharide Play SynergisticRoles in the Effector Phase of AirwayInflammation in Mice. American Journal of Pathology 168 (5). Kharkar Ritesh, Pawar .P. Deepak, Shamkuwar .B. Prashant. 2013. Antidiabetic Activity of Sphaeranthus Indicus linn Extracts In Alloxan. Induced Diabetic Rats.Vol (5) Khanam, Matira and Esmin Fauzia Dewan. 2009. Effects of the crude and the n- hexane Extract Of Nigella Sativa Linn (Kalajira Upon diabetic rats.Banglades h j Pharmacol Vol.4.4 P 17-20. Komala, I., Ito, T., Nagashima, F. 2010. Cytotoxic,Rradical Scavenging, and Antimicrobial Activities of Sesquiterpenoids from Tahitian Liverworth Mastigophora diclados (Brid). Nees (Mastigophoracee) .J.Nat.Med (2010) 64:417-422. Kumar, E.K., Ramesh, A., Kasiviswanath, R. (2005). Hypoglicemic and Antihyperglicemic Effect of Gmelina asiatica Linn. In normal and in alloxan Induced Diabetic Rats. Andhra Pradesh: Departement of Pharmaceutical Sciences. Laurence D.R., and Bacharach, A.L. 1964. Evaluation Of Drug Activities Pharmacometrics. Academic Press. London and New York. Ludviczuk Agnieska And Asakawa Yoshinori. 2010. Chemosystematics of Selected Liverwort Collected in Borneo. Tropical Bryology 31: 33-42, 2010 Faculty of Pharmaceutical Sciences, Tokushima Bunri University, Yamashiro-cho;Tokushima 770-8514, Japan. M.D Rockville. 2002. Guidance for Industry and Reviewers Estimating The Safe Starting Dosein Clinical Trais For The Rapeutics in Adult Healthy Voluntreers Pharmacology and Toxicology. Miyake, Y., Yamamoto, K. Tsujihara, N., and Osawa, T., 1998. Protective Effect of Lemon Flavonoids on Oxidative Stress in Diabetic Rats. Lipid, 33 : 689-695 Nandhagopal.K, Kanniyaku Mari M, Anbu and V. Velpandian. 2013. Antidiabetic Activity of Karchure Chooranam On Alloxan Induced


34

Diabetic Rats. International Journal Of Pharma and Bio Sciences. 434439, India Oetjen, Georg-Wilhem & Haseley, Peter. 2004. Frezz-Drying. From Germany: WILEY-VCH Verlag Gmbh & Co.Kga. Pafitt, K. 1983. Martindale the extrapharmacopela. 20th. the parmaceutical. Geneva. London : 854. Suharmiati. 2003. Pengeujian bioaktivitas anti diabetes militus tumbuhan obat. Badan penelitian dan pengembangan kesehatan, pusat penelitian pengebangan pelayanan dan teknologi kesehatan. Departemen kesehatan RI Surabaya. Szkudelski, T. (2001). The Mechanism of Alloxan and Streptozotocin Action in B Cells of the Rat Pancreas. Physiological Research. 50:536-546. Tiwari, S., Gehlot, S. and Gambhir, I.S. (2011) Centella asiatica: A concise drug review with probable clinical uses. Journal of Stress Physiology & Biochemistry 7, 38-44. Widijanti A, Ratulangi T.B. 2009. Pemeriksaan Laboratorium Penderita Diabetes Mellitus. Malang. Widowati, Wahyu. 2008. Potensi Antioksidan Sebagai Antidiabetes. Universitas Kristen maranatha.Bandung. JKM.7(2): 192-202.


35

Lampiran 1. Perlakuan Hewan Uji

Gambar 4. Penyuntikan Aloksan

Gambar 5. Pemberian Sediaan Uji

Secara Intraperitoneal.

Gambar 6 . Pengukuran Glukosa Darah Pada Hewan Uji.

UIN Syarif Hidaytullah Jakarta

36

Lampiran 2. Hasil Penapisan Fitokimia

Gambar 7. Alkaloid (Dragendoff)

Gambar 9.Fenolik

Gambar 8. Alkaloid (Mayer)

Gambar 10.Flavonoid


37

Gambar 11. Saponin

Gambar 12. Terpenoid


38

Lampiran 3. Sertifikat Glibenklamid


39

Lampiran 4. Determinasi


40

Lampiran 5. Alur Pembuatan Ekstrak

Lumut Hati Mastigophora diclados basah.

basah

basah

basah

basah

basah

Determinasi tanaman

Sortasi basah

Dicuci dengan air bersih dan mengalir

Diangin-anginkan

Sortasi kering

Lumut Hati Mastigophora diclados dibelender basah hingga menjadi serbuk.

basah Pembuatan Ekstak : 2103gram serbuk di maserasi dengan pelarut dari non polar, semi polar, dan polar, hasil destilasinya disimpan ditempat yang gelap dan sesekali digoyang- goyangkan .pelarut diganti setiap 3 hari dan disaring sampai mendapat filtrat yang bening.

Filtrat dipekatkan menggunakan vacum rotary basah evaporator, hasil ekstrak yang masih terdapat kandungan air dikentalkan menggunakan freeze dryer

basah

Ekstrak kental.

basah


41

Lampiran 6. Alur Aklimatisasi Hewan Uji

Disiapkan 30 ekor tikus putih jantan dengan bobot 150-250 g.

Diadaptasikan atau diaklimatisasi selama 14 hari .

5 ekor kelompok kontrol normal

5 ekor kelompok kontrol positif

5 ekor kelompok kontrol negatif

Dikelompokkan secara acak menjadi 6 kelompok.

5 ekor kelompok dosis rendah Mastigophora diclados. 5 ekor kelompok dosis sedang Mastigophora diclados.

5 ekor kelompok dosis tinggi Mastigophora diclados.


42

Lampiran 7. Alur Kerja Uji Metode Aloksan

Persiapan Tikus puasa selama 18 jam

Kontrol Normal

Kontrol Negatif

Kontrol Positif

Dosis Rendah.

Dosis Sedang.

Dosis Tinggi.

Induksi aloksan dosis 20 mg/200g BB tikus

Aquadest

Pekembangan Hewan Uji Selama 7 hari

Pengukuran Kadar Hiperglikemia Awal

Aquadest

Suspensi Na CMC 0,5%

Glibenkla mid. 0,1 mg/200g BB

Dosis rendah. 1mg/kg BB

Dosis sedang.10 mg/kg BB

Dosis tinggi.100 mg/kg BB

Ukur Kadar Gula Darah pada hari ke 7, 14, 21, 28

Analisa Data


43

Lampiran 8. Perhitungan Dosis A. Ekstrak n- heksan Mastigophora diclados dengan Kelompok Dosis :  Dosis rendah (D1) = 1 mg/kg BB  Dosis sedang (D2) = 10 mg/kg BB  Dosis tinggi (D3) = 100 mg/kg BB 1. Dosis Rendah Untuk satu ekor tikus 200g, maka volume larutan sediaan untuk dosis rendah dalah : 1 mg/kg BB = 0,2 mg/200g BB VAO = Dosis x Berat badan Konsentrasi = 0,2 mg/200g BB x 200g 0,2 mg/mL = 1mL 2. Dosis Sedang Untuk satu ekor tikus 200g, maka volume larutan sediaan untuk dosis sedang adalah : 10 mg/ kg BB = 2 mg/200g BB VAO = Dosis x Berat badan Konsentrasi = 2 mg/200g BB x 200g 2 mg/mL = 1mL 3. Dosis Tinggi Untuk satu ekor tikus 200g, maka volume larutan sediaan untuk dosis tinggi adalah : 100 mg/kg BB = 20 mg/200g BB VAO = Dosis x Berat badan Konsentrasi = 20 mg/200g BB x 200g 20 mg/mL = 1 mL B. Glibenklamid HED (mg/kg) = dosis hewan (mg/kg) x km hewan Km manusia 5 mg/60 kg = dosis hewan (mg/kg) x 6 37 5 mg/60 kg = dosis hewan (mg/kg) x 0,162 Dosis hewan = 0,83 mg/kg 0,162 Dosis hewan = 0,1 mg/200g BB C.

Aloksan Dosis ( 20 mg/200g BB) VAO = Dosis x Berat badan Konsentrasi


44

= 20 mg/200 g x 200g 20 mg/mL = 1 mL


45

Lampiran 9. Pemeriksaan Parameter Ekstrak  Perhitungan Perolehan Kembali Ekstrak Yang Didapat

46 X 100 2103 = 2,18 %  Pemeriksaan Kadar Air Berat cawan kosong (A)

= 24,1865 gr

Berat sampel

= 1,0006 gr

Berat cawan + sampel sebelum di oven (B)

= 25,1925 gr

Berat cawan + sampel sesudah di oven (C)

= 25,1802 gr

= 0,048 %  Pemeriksaan Kadar Abu Berat Krus kosong (A)

=24,4164 gr

Berat sampel

= 1,0052 gr

Berat Krus + sampel sebelum di tanur (B)

=25,4216 gr

Berat Krus + sampel sesudah di tanur (C)

=24,4228 gr

% kadar Abu = C – A B–A

100%

= 24,4228-24,4164 X 100% 25,4216-24,4164

= 0,636 %


46

Lampiran 10. Hasil Pengukuran Pada Metode Induksi Aloksan

Kelompok Perlakuan

Kontrol Normal

Kontrol Negatif

Kontrol Positif

Dosis Rendah

Dosis Sedang

Dosis Tinggi

Sebelum pemberian ekstrak nheksan Mastigopho ra diclados Hari ke 0

Setelah peberian ektrak nheksan Mastigophora diclados Hari ke 7

45 70 80 49 50 58,8 161 143 158 173 174 161,8 145 125 149 116 146 136,2 152 139 156 152

50 72 82 49 50 60,6 167 145 161 182 170 165 125 85 111 102 115 107,6 127 122 128 121

Setelah pemberian ekstrak nheksan Mastigophor a diclados Hari ke 14 50 62 80 48 56 59,2 173 164 177 184 150 169,6 115 71 105 93 85 93,8 112 113 104 107

Setelah pemberian ekstrak nheksan Mastigopho ra diclados Hari ke 21

Setelah pemberian n- heksan Mastigoph ora diclados Hari ke 28

46 73 80 49 52 60 186 188 184 205 186 189,8 104 60 91 74 63 78,4 102 110 101 105

49 62 79 49 62 60,2 186 181 169 160 161 171,4 91 55 82 55 46 65,8 102 110 103

149,75 146 135 148

124,5 139 147 135 147

111,25 121 139 109 138

104,5 107 112 103 138

105 103 104 101 128

143 149 169 176

142 88 92 115

126,75 76 78 64 105

115 76 55 55 92

164,6

98,33

72,66

69,5

109 65 70 54 49 56 58,8


47

Lampiran 11. Perhitungan Presentase Kadar Glukosa Darah Metode Induksi Aloksan A. Glibenklamid Hari ke 7 = 136,2 -107,2 X 100 % = 20,99 % 136,2 Hari ke 14 = 136,2 – 93,8 X 100 % = 31,13 % 136,2 Hari ke 21 = 136,2 -78,4 X 100% = 42, 43 % 136,2 Hari ke 28 = 136,2 – 65,8 X 100% = 51,68 % 136,2 B. Dosis Rendah Hari ke 7 = 149,75 – 124,5 X 100% = 16,84 % 149,75 Hari ke 14 = 149,75 -111,25 X 100 % = 25,70 % 149,75 Hari ke 21 = 149,75 – 104,5 X 100% = 30,21 % 149,75 Hari ke 28 = 149,75 – 105 X 100 % = 29,88 % 149,75 C. Dosia Sedang Hari ke 7 = 143 -142 X 100 % = 0,699 % 143 Hari ke 14 = 143 – 126,75X100 % = 11,36 % 143 Hari ke 21 = 143 – 115X 100 % = 19,58 % 143 Hari ke 28 = 143 -109 X 100 % = 23,77 % 143 D. Dosis Tinggi Hari ke 7 = 164,6 – 98,33 X 100% = 40,26 % 164,6 Hari ke 14 = 164,6 -72,66 X100 % = 55,85 % 164,6 Hari ke 21 = 164,6 – 69,5 X 100 % = 57,77 % 164,6 Hari ke 28 = 164,6 – 58,8 X 100 % = 64,2 % 164,6


48

Lampiran 12 . Hasil Statistik Dosis Ektrak n-heksan Mastigophora diclados dengan Metode Induksi Aloksan. 1. Uji Normalitas Kolmogorof –Smirnov dan Uji Homogenitas a. Uji Normalitas Kolmogorof – smirnov b. Tujuan : Untuk mengetahui kenormalan data penurunan kadar glukosa darah Hipotesis Ho

: Data penurunan kadar glukosa darah tikus yang terdistribusi normal

Ha

: Data penurunan kadar glukosa darah tikus tidak terdistribusi normal

Tabel 7. Uji Normalitas Mastigophora diclados Pada Metode Induksi Aloksan One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Hari ke 0 N Normal Parametersa Most Extreme Differences

Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed)

Hari ke 7

25 1.3192E2 4.01351E1 .251 .136 -.251 1.253 .087

Hari ke 14

26 1.1481E2 3.52012E1 .118 .083 -.118 .599 .865

26 1.0573E2 3.84973E1 .097 .097 -.071 .495 .967

Hari ke21 27 1.0196E2 4.48789E1 .189 .189 -.114 .984 .288

Hari ke 28 28 92.3571 4.39370E1 .162 .162 -.146 .856 .456

a. Test distribution is Normal.

Keterangan : Nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima, artinya penurunan kadar glukosa darah pada tikus seluruh kelompok perlakuan terdistribusi normal. b.Uji Homogenitas levene Tujuan : Untuk melihat homogenitas data penurunan kadar glukosa darah tikus. Hipotesis Ho : Data penurunan kadar glukosa darah tikus bervariasi homogen Ha : Data penurunan kadar glukosa darah tikus bervariasi tidak homogen Pengambilan keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak


49

Tabel 8. Uji Homogenitas

Levene Statistic Hari 0 Hari 7 Hari 14 Hari 21 Hari 28

df1

1.779 2.804 1.383 2.262 2.915

df2 5 5 5 5 5

Sig. 19 20 20 21 22

.165 .045 .273 .086 .036

Keterangan : Pada uji homegenitas data tersebut yang tidak memenuhi syarat yaitu pada hari ke 7, 21 dan 28 karena signifikansi P≤ 0,05. Kesimpulan : Data kadar glukosa darah hari ke 0 sebelum pemberian ekstrak dan hari ke 14 setelah pemberian ekstrak. Dilanjutkan dengan ANOVA karena syarat normalitas dan homegenitasnya telah terpenuhi.

2. Uji Kruskal Wallis Mastigophora diclados pada metode induksi aloksan Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan secara bermakna pada data penurunan kadar glukosa darah pada tikus karena tidak memenuhi syarat uji ANOVA Hipotesis Ho : Data penurunan kadar glukosa darah tikus tidak berbeda secara bermakna Ha : Data penurunan kadar glukosa darah tikus berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak Tabel 9. Uji Kruskal-Wallis Mastigophora diclados Pada Metode Induksi Aloksan

hari7 Chi-Square Df Asymp. Sig.

12.522 2 .002

hari21 10.519 2 .005

hari28 9.471 2 .009

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: kelompok7


50

Keterangan : Data kadar glukosa darah tikus hari ke 7, 21 dan 28 setelah pemberian ekstrak berbeda secara bermakna maka dilanjutkan dengan uji BNT Menggunakan metode LSD. Uji BNT merupakan uji lanjutan apabila hasil pengujian menunjukkan adanya perbedaan nilai secara bermakna. Tujuannya adalah untuk menentukan kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan kelompok lainnya. Tabel 10. Uji Analirah Varian ( ANOVA) Satu Arah dan Beda Nyata Terkecil (BNT) Terhadap kadar glukosa darah kelompok hewan uji. Tujuan : Untuk mengetahi ada atau tidaknya perbedaan data kadar glukosa darah tikus. Hipotesis: Ho : Data kadar glukosa darah tikus tidak berbeda secara bermakna Ha : Data kadar glukosa darah tikus berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi≤ 0,05 maka Ho ditolak a. Uji ANOVA satu arah terhadap kadar glukosa darah seluruh kelompok hewan uji hari ke 0 sebelum pemberian ekstrak dan hari ke 14 setelah pemberian ekstrak. ANOVA Tabel 10. Uji ANOVA Sum of Squares Hari ke 0

Between Groups

Mean Square

35680.023

5

7136.005

2979.817

19

156.832

Total

38659.840

24

Between Groups

33954.899

5

6790.980

3096.217

20

154.811

37051.115

25

Within Groups

Hari ke 14

df

Within Groups Total

F

Sig.

45.501

.000

43.866

.000


51

Tabel 11. Uji BNT LSD (I) (J) Dependen kelompo kelompo Mean Difference t Variable k1 k1 (I-J) Hari 0

95% Confidence Interval Std. Error

Sig.

Lower Bound Upper Bound

Kontrol Kontrol normal negatif

-101.40000*

7.92042

.000

-117.9776

-84.8224

Kontrol positif

-77.40000*

7.92042

.000

-93.9776

-60.8224

Dosis rendah

-90.95000*

8.40087

.000

-108.5332

-73.3668

Dosis sedang

-84.20000*

9.14571

.000

-103.3422

-65.0578

Dosis tinggi

-105.86667*

9.14571

.000

-125.0089

-86.7245

Kontrol Kontrol negatif normal

101.40000*

7.92042

.000

84.8224

117.9776

Kontrol positif

24.00000*

7.92042

.007

7.4224

40.5776

Dosis rendah

10.45000

8.40087

.229

-7.1332

28.0332

Dosis sedang

17.20000

9.14571

.075

-1.9422

36.3422

Dosis tinggi

-4.46667

9.14571

.631

-23.6089

14.6755

Kontrol Kontrol positif normal

77.40000*

7.92042

.000

60.8224

93.9776

Kontrol negatif

-24.00000*

7.92042

.007

-40.5776

-7.4224

Dosis rendah

-13.55000

8.40087

.123

-31.1332

4.0332

Dosis sedang

-6.80000

9.14571

.466

-25.9422

12.3422

-28.46667*

9.14571

.006

-47.6089

-9.3245

Kontrol normal

90.95000*

8.40087

.000

73.3668

108.5332

Kontrol negatif

-10.45000

8.40087

.229

-28.0332

7.1332

Kontrol positif

13.55000

8.40087

.123

-4.0332

31.1332

Dosis sedang

6.75000

9.56481

.489

-13.2694

26.7694

Dosis tinggi

-14.91667

9.56481

.135

-34.9360

5.1027

Kontrol normal

84.20000*

9.14571

.000

65.0578

103.3422

Kontrol negatif

-17.20000

9.14571

.075

-36.3422

1.9422

Kontrol positif

6.80000

9.14571

.466

-12.3422

25.9422

Dosis tinggi Dosis rendah

Dosis sedang


52

Dosis rendah

Dosis tinggi

Hari 7

-6.75000

9.56481

.489

-26.7694

13.2694

Dosis tinggi

-21.66667*

10.22521

.047

-43.0683

-.2651

Kontrol normal

105.86667*

9.14571

.000

86.7245

125.0089

Kontrol negatif

4.46667

9.14571

.631

-14.6755

23.6089

Kontrol positif

28.46667*

9.14571

.006

9.3245

47.6089

Dosis rendah

14.91667

9.56481

.135

-5.1027

34.9360

21.66667*

10.22521

.047

.2651

43.0683

-96.00000*

7.93129

.000

-112.5444

-79.4556

-47.00000*

7.93129

.000

-63.5444

-30.4556

-63.90000*

8.41240

.000

-81.4480

-46.3520

-81.40000*

8.41240

.000

-98.9480

-63.8520

-37.73333*

9.15826

.001

-56.8371

-18.6295

96.00000*

7.93129

.000

79.4556

112.5444

49.00000*

7.93129

.000

32.4556

65.5444

32.10000*

8.41240

.001

14.5520

49.6480

14.60000

8.41240

.098

-2.9480

32.1480

58.26667*

9.15826

.000

39.1629

77.3705

47.00000*

7.93129

.000

30.4556

63.5444

-49.00000*

7.93129

.000

-65.5444

-32.4556

-16.90000

8.41240

.058

-34.4480

.6480

-34.40000*

8.41240

.001

-51.9480

-16.8520

9.26667

9.15826

.324

-9.8371

28.3705

63.90000*

8.41240

.000

46.3520

81.4480

-32.10000*

8.41240

.001

-49.6480

-14.5520

16.90000

8.41240

.058

-.6480

34.4480

-17.50000

8.86745

.062

-35.9972

.9972

26.16667*

9.57794

.013

6.1874

46.1459

81.40000*

8.41240

.000

63.8520

98.9480

Dosis sedang Kontrol Kontrol normal negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol rendah normal Kontrol negatif Kontrol positif dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang normal


53

Hari 14

Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis tinggi Dosis Kontrol tinggi normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Kontrol Kontrol normal negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Konrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol rendah normal Kontrol negatif Dosis rendah Dosis sedang

-14.60000

8.41240

.098

-32.1480

2.9480

34.40000*

8.41240

.001

16.8520

51.9480

17.50000

8.86745

.062

-.9972

35.9972

43.66667*

9.57794

.000

23.6874

63.6459

37.73333*

9.15826

.001

18.6295

56.8371

-58.26667*

9.15826

.000

-77.3705

-39.1629

-9.26667

9.15826

.324

-28.3705

9.8371

-26.16667*

9.57794

.013

-46.1459

-6.1874

-43.66667*

9.57794

.000

-63.6459

-23.6874

-105.40000*

7.86920

.000

-121.8149

-88.9851

-34.60000*

7.86920

.000

-51.0149

-18.1851

-49.80000*

8.34655

.000

-67.2106

-32.3894

-67.55000*

8.34655

.000

-84.9606

-50.1394

-13.46667

9.08657

.154

-32.4209

5.4876

105.40000*

7.86920

.000

88.9851

121.8149

70.80000*

7.86920

.000

54.3851

87.2149

55.60000*

8.34655

.000

38.1894

73.0106

37.85000*

8.34655

.000

20.4394

55.2606

91.93333*

9.08657

.000

72.9791

110.8876

34.60000*

7.86920

.000

18.1851

51.0149

-70.80000*

7.86920

.000

-87.2149

-54.3851

-15.20000

8.34655

.084

-32.6106

2.2106

-32.95000*

8.34655

.001

-50.3606

-15.5394

21.13333*

9.08657

.031

2.1791

40.0876

49.80000*

8.34655

.000

32.3894

67.2106

-55.60000*

8.34655

.000

-73.0106

-38.1894

15.20000

8.34655

.084

-2.2106

32.6106

-17.75000

8.79803

.057

-36.1024

.6024


54

Hari 21

Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis tinggi Dosis Kontrol tinggi normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Kontrol Kontrol normal negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol rendah normal Kontrol negatif

36.33333*

9.50296

.001

16.5105

56.1562

67.55000*

8.34655

.000

50.1394

84.9606

-37.85000*

8.34655

.000

-55.2606

-20.4394

32.95000*

8.34655

.001

15.5394

50.3606

17.75000

8.79803

.057

-.6024

36.1024

54.08333*

9.50296

.000

34.2605

73.9062

13.46667

9.08657

.154

-5.4876

32.4209

-91.93333*

9.08657

.000

-110.8876

-72.9791

-21.13333*

9.08657

.031

-40.0876

-2.1791

-36.33333*

9.50296

.001

-56.1562

-16.5105

-54.08333*

9.50296

.000

-73.9062

-34.2605

-121.00000*

9.39220

.000

-140.5321

-101.4679

-18.40000

9.39220

.064

-37.9321

1.1321

-44.50000*

9.96193

.000

-65.2170

-23.7830

-55.00000*

9.96193

.000

-75.7170

-34.2830

-9.50000

9.96193

.351

-30.2170

11.2170

121.00000*

9.39220

.000

101.4679

140.5321

102.60000*

9.39220

.000

83.0679

122.1321

76.50000*

9.96193

.000

55.7830

97.2170

66.00000*

9.96193

.000

45.2830

86.7170

111.50000*

9.96193

.000

90.7830

132.2170

18.40000

9.39220

.064

-1.1321

37.9321

-102.60000*

9.39220

.000

-122.1321

-83.0679

-26.10000*

9.96193

.016

-46.8170

-5.3830

-36.60000*

9.96193

.001

-57.3170

-15.8830

8.90000

9.96193

.382

-11.8170

29.6170

44.50000*

9.96193

.000

23.7830

65.2170

-76.50000*

9.96193

.000

-97.2170

-55.7830


55

Hari 28

Kontrol positif Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang normal Kontrol negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis tinggi Dosis Kontrol tinggi normal Kontro negatif Kontrol posiitf Dosis rendah Dosis sedang Kontrol Kontrol normal negatif Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol negatif normal Kontrol positif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Kontrol positif normal Kontrol negatif Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi

26.10000*

9.96193

.016

5.3830

46.8170

-10.50000

10.50079

.329

-32.3376

11.3376

35.00000*

10.50079

.003

13.1624

56.8376

55.00000*

9.96193

.000

34.2830

75.7170

-66.00000*

9.96193

.000

-86.7170

-45.2830

36.60000*

9.96193

.001

15.8830

57.3170

10.50000

10.50079

.329

-11.3376

32.3376

45.50000*

10.50079

.000

23.6624

67.3376

9.50000

9.96193

.351

-11.2170

30.2170

-111.50000*

9.96193

.000

-132.2170

-90.7830

-8.90000

9.96193

.382

-29.6170

11.8170

-35.00000*

10.50079

.003

-56.8376

-13.1624

-45.50000*

10.50079

.000

-67.3376

-23.6624

-111.20000*

7.99636

.000

-127.7834

-94.6166

-5.60000

7.99636

.491

-22.1834

10.9834

-44.80000*

9.23340

.000

-63.9489

-25.6511

-48.80000*

8.48142

.000

-66.3894

-31.2106

2.20000

7.65593

.777

-13.6774

18.0774

111.20000*

7.99636

.000

94.6166

127.7834

105.60000*

7.99636

.000

89.0166

122.1834

66.40000*

9.23340

.000

47.2511

85.5489

62.40000*

8.48142

.000

44.8106

79.9894

113.40000*

7.65593

.000

97.5226

129.2774

5.60000

7.99636

.491

-10.9834

22.1834

-105.60000*

7.99636

.000

-122.1834

-89.0166

-39.20000*

9.23340

.000

-58.3489

-20.0511

-43.20000*

8.48142

.000

-60.7894

-25.6106

7.80000

7.65593

.319

-8.0774

23.6774


56

Dosis rendah

Kontrol 44.80000* normal Kontrol -66.40000* negatif Kontrol 39.20000* positif Dosis -4.00000 sedang Dosis 47.00000* tinggi Dosis Kontrol 48.80000* sedang normal Kontrol -62.40000* negatif Kontrol 43.20000* positif Dosis 4.00000 rendah Dosis 51.00000* tinggi Dosis Kontrol -2.20000 tinggi normal Kontrol -113.40000* negatif Kontrol -7.80000 positif Dosis -47.00000* rendah Dosis -51.00000* sedang *. The mean difference is significant at the 0.05 level.





9.23340

.000

25.6511

63.9489

9.23340

.000

-85.5489

-47.2511

9.23340

.000

20.0511

58.3489

9.65653

.683

-24.0264

16.0264

8.94021

.000

28.4591

65.5409

8.48142

.000

31.2106

66.3894

8.48142

.000

-79.9894

-44.8106

8.48142

.000

25.6106

60.7894

9.65653

.683

-16.0264

24.0264

8.16125

.000

34.0746

67.9254

7.65593

.777

-18.0774

13.6774

7.65593

.000

-129.2774

-97.5226

7.65593

.319

-23.6774

8.0774

8.94021

.000

-65.5409

-28.4591

8.16125

.000

-67.9254

-34.0746

Kesimpulan : Pada hasil uji LSD diatas menunjukkan bahwa kontrol positif, dosis rendah, dosis sedang dan dosis tinggi berbeda secara bermakna dengan kontrol negatif yang artinya bahwa glibenclamid dan ekstrak n-Heksan dari lumut hati mastighopora diclados dapat memberikan efek terhadap tikus yang di induksi aloksan. Pada hari ke 7, 21 dan 28 kontrol positif tidak berbeda secara bermakna dengan dosis tinggi yang artinya bahwa dosis tinggi mempunyai efek yang hampir sama dengan kontrol positif atau bahkan dapat memberikan efek yang lebih baik .


UJI EFEK ANTIHIPERGLIKEMIA EKSTRAK n-heksan DARI LUMUT HATI(Mastigophora diclados) DENGAN METODE INDUKSI ALOKSAN

Recommend Documents