UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN KOMBINASI EKSTRAK ETANOL BUAH OYONG (Luffa acutangula (L.) Roxb.) DAN JAMUR TIRAM (Pleurotus ostreatus) DENGAN METODE DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)
TUGAS AKHIR Diajukan untuk memenuhi salah satu persyaratan Memperoleh gelar Ahli Madya D3 Farmasi
Oleh : DIANNE PARASWATI NIM. M3512012 PROGRAM STUDI DIPLOMA 3 FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA 2015
Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Etanol Buah Oyong (Luffa acutangula (L.) Roxb.) dan Jamur Tiram (Pleurotus ostreatus)dengan Metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)
Dianne Paraswati Program Studi Diploma 3 Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas Maret INTISARI
Antioksidan merupakan senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih elektron (electron donor) kepada radikal bebas untuk menghambat reaksi radikal bebas. Buah oyong (Luffa acutangula (L.) Roxb.) dan jamur tiram (Pleurotus ostreatus) diduga berpotensi memiliki aktivitas antioksidan, namun aktivitas antioksidan ekstrak kombinasinya belum diketahui. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan kombinasi ekstrak etanol buah oyong (Luffa acutangula (L.) Roxb.) dan jamur tiram (Pleurotus ostreatus), nilai IC50dan nilai Combination Index (CI). Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium. Ekstrak etanol buah oyong (Luffa acutangula (L.) Roxb.) dan jamur tiram (Pleurotus ostreatus) diperkolasi dengan pelarut etanol 70%. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl). Identifikasi kandungan fitokimia dan uji aktivitas antioksidan kualitatif dengan kromatografi lapis tipis (KLT). Uji aktivitas antioksidan kuantitatif dengan spektrofotometri UVVis pada panjang gelombang 516 nm dengan pembanding vitamin C. Hasil pengujian ekstrak buah oyong dan jamur tiram mengandung senyawa flavonoid, saponin, tanin, alkaloid dan terpenoid. Nilai CI dengan konsentrasi 1/4IC50:1/4IC50 yaitu 0,77, 1/2IC50:1/4IC50 yaitu 0,71, 1/4IC50:1/2IC50 yaitu 0,59, 1/2IC50:1/2IC50 yaitu 0,52. Kata kunci : Buah Oyong, Jamur Tiram, DPPH, IC50, Combination Index, Antioksidan
Antioxidant Activity Test of Ethanolic Extract Combination of Oyong Fruit (Luffa acutangula (L.) Roxb.) and Oyster Mushroom (Pleurotus ostreatus)Using DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) Method
Dianne Paraswati Diploma of Pharmacy, Faculty of Mathematic and Sciences Sebelas Maret University ABSTRACT
Antioxidant is chemical compound that can give one or more electron (electron donor) to free radical which can obstruct free radical reaction. Oyong fruit (Luffa acutangula (L.) Roxb.) and oyster mushrooms (Pleurotus ostreatus) were potential as antioxidant agent but the activity of its combination was unknown. The aim of this study was to know antioxidant activity of ethanolic extract of oyong fruit (Luffa acutangula (L.) Roxb.) and oyster mushrooms (Pleurotus ostreatus), IC50 value and Combination Index (CI) value. This research was experimental laboratorium. The extraction using percolation method with ethanol 70 % as solvent. Antioxidant activity test using DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) method. Identification of phythochemistry contains and the qualitative antioxidant activity had been done byThin Layer Chromatography (TLC). The quantitative antioxidant activity test had been done by ultraviolet visible spectrofotometric at maximum wavelenght of 516 nm with vitamin C as comparator. The result show that extract of oyong fruit and oyster mushroom, both of them contained of flavonoids, saponins, tannins, alkaloids, and terpenoids. Concentration of CI value 1/4IC50:1/4IC50, 1/2IC50:1/4IC50, 1/4IC50:1/2IC50, 1/2IC50:1/2IC50was 1,52; 0,50; 0,72; and 0,22. Keywords : Oyong fruit, Oyster mushrooms, DPPH, IC50, Combination Index, Antioxidant
MOTTO
Sebuah lilin masih akan menyala walaupun apinya diambil untuk menyalakan seribu lilin lainnya. Kebahagiaan tidak akan pernah berkurang karena dibagi ( Siddarta Gautama )
Kamu tidak dapat mengajari seseorang apa pun, kamu hanya bisa membantunya menemukan apa yang ada dalam dirinya sendiri (Galileo Galilei)
Keberhasilan seseorang ditentukan oleh dirinya sendiri, orang lain tidak mampu untuk menentukan keberhasilanmu, tetapi setidaknya kamu bisa menjadi yang terbaik untuk dirimu sendiri dan berguna untuk orang lain (Dianne Paraswati T)
PERSEMBAHAN
Tugas akhir ini kupersembahkan untuk .... Papa dan Mama yang selalu memberikan semangat, kasih sayang, dan dukungan serta doa-doanya selama ini. Ibu Anif Nur Artanti M.Sc.,Apt yang telah memberikan
motivasi,
bimbingan,
ilmu
dan
pengalamannya. dr. Wahyu Julianda yang selalu memberi semangat dan memotivasiku dengan penuh kesabaran.
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehinggasaya dapat menyelesaikan Tugas Akhir berjudul “Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Etanol Buah Oyong (Luffa acutangula (L.) Roxb.) dan Jamur Tiram (Pleurotus ostreatus) dengan Metode
DPPH
(1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)”dengan
baik
dan
lancar.
Penyusunan Tugas Akhir merupakan salah satu syarat untuk dapat memperoleh gelar Ahli Madya Farmasi di Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Dalam penulisan Tugas Akhir ini penulis telah berusaha semaksimal mungkin untuk memberikan hasil yang terbaik. Pelaksanaan tugas akhir ini tidak mungkin dapat terselesaikan jika tanpa adanya bimbingan, dorongan, semangat, harapan dan motivasi serta bantuan baik moril maupun materiil, dan do’a dari berbagai pihak. Penulis pada kesempatan ini mengucapkan terima kasih kepada: 1. Prof. Ir. Ari Handono Ramelan, M.Sc. (Hons), Ph.D, selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas Maret Surakarta. 2. Ibu Estu Retnaningtyas N., S.TP., M.Si selaku Ketua Program Studi D3 Farmasi Universitas Sebelas Maret Surakarta. 3. Ibu Anif Nur Artanti, M.Sc., Apt selaku pembimbing Tugas Akhir atas segala kesabaran dan keikhlasannya dalam memberikan arahan, bimbingan, dan saran. 4. Ibu Nestri Handayani, M.Si.,Apt selaku pembimbing akademik yang telah memberikan motivasi, arahan, bimbingan, saran, motivasi dan ilmunya.
5.
Yang terkasih Papa, dan Mamayang telah memberikan doa, penuh dukungan dan semangat.
6. Sahabat- sahabat seperjuangan khususnya Diah Rakhmawati, Endhayanti Oktovia, Esdha Titis, Naim Anggraita, Foury Christya, Wahyu Siamsiana, Murni Ayut dan teman-teman sepenelitian yaitu Nissya Arienda, Astrid Octaviani, Kartika Monikasari, Rika Triyoga, Suci, Yulfanah Diany dan Farmasi 2012yang telah berbagi suka dan duka serta pengalaman selama masa-masa kuliah. 7. dr. Wahyu Julianda yang telah memberikan semangat, dan memotivasiku dengan kesabaran. Adikku Fajar Nur Hayati yang telah memotivasi. 8. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu, yang telah membantu pelaksanaan dan penyusunan Tugas Akhir ini. Penulis menyadari masih banyak kekurangan dalam penulisan Tugas Akhir ini. Untuk itu penulis mengharapkan adanya kritik dan saran yang membangun dari semua pihak untuk perbaikan sehingga akan menjadi bahan pertimbangan dan masukan untuk penyusunan tugas-tugas selanjutnya. Penulis berharap semoga Tugas Akhir ini dapat bermanfaat bagi pembaca pada umumnya dan dapat menjadi bekal bagi penulis dalam pengabdian Ahli Madya Farmasi di masyarakat pada khususnya. Surakarta, 10 Juli 2015
Penulis
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL........................................................................................ i HALAMAN PENGESAHAN.......................................................................... ii HALAMAN PERNYATAAN......................................................................... iii INTISARI......................................................................................................... iv ABSTRACT...................................................................................................... v HALAMAN MOTTO...................................................................................... vi HALAMAN PERSEMBAHAN...................................................................... vii KATA PENGANTAR .................................................................................... viii DAFTAR ISI.................................................................................................... ix x DAFTAR TABEL ................................................................................................... DAFTAR GAMBAR.........................................................................................xi DAFTAR LAMPIRAN..................................................................................... xii xiii DAFTAR SINGKATAN......................................................................................... BAB 1 PENDAHULUAN .................................................................................1 1.1. Latar Belakang.............................................................................................4 1.2 Perumusan Masalah.....................................................................................5 1.3. Tujuan Penelitian........................................................................................5 1.4. Manfaat Penelitian.......................................................................................5
BAB 2 LANDASAN TEORI ....................................................................................7 2.1.
Tinjauan Pustaka................................................................................................7
2.1.1
8 Tanaman Oyong..............................................................................................
8 2.1.1. Klasifikasi Tanaman Oyong............................................................................. 8 2.1.2. Nama lain Tanaman Oyong.............................................................................. 2.1.3. Morfologi Tanaman Oyong.............................................................................9 2.1.4. Kandungan Kimia Tanaman............................................................................9 2.1.5. Khasiat............................................................................................................9 2.2. Jamur Tiram..................................................................................................... 9 2.2.1. Klasifikasi Tanaman......................................................................................... 10 11 2.2.2. Morfologi Jamur Tiram....................................................................................... 2.2.3. Kandungan Kimia Jamur Tiram ........................................................................11 12 2.2.4. Khasiat........................................................................................... ..................... 12 ii 2.3. Ekstrak dan Ekstraksi............................................................................................ 2.3.1 Cara Dingin.................................................................................................... 12 iii 13 v 2.3.1.1 Maserasi......................................................................................................... 13 vi 2.3.1.2 Perkolasi.......................................................................................................... 2.4.
14 vii Kromatografi.........................................................................................................
14 1 2.4.1. Kromatografi lapis tipis..................................................................................... 2.4.1.1. Fase diam................................................................................................. 14 4 2.4.1.2. Fase gerak................................................................................................. 15 5 2.4.1.3. Metode Deteksi...........................................................................................15 5 6 5 7
2.5. Radikal Bebas.................................................................................................. 16 2.5.1. Mekanisme Kerja Terbentuknya Radikal Bebas..................................... 16 2.5.2 Mekanisme Pertahanan Tubuh................................................................. 19 2.6. Antioksidan..................................................................................................... 19 2.6.1. Jenis Antioksidan.................................................................................... 19 2.6.2. Sumber Antioksidan................................................................................ 19 2.7
2.8
Uji Aktivitas Antioksidan................................................................................. 20 2.7.1
Penentuan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH.................... 20
2.7.2
Aktivitas Peredaman Radikal Superoksida..........................................21
2.7.3
Aktivitas Penghambatan Radikal Hidroksil.........................................21
2.7.4
Metode Kekuatan Pereduksi................................................................22
2.7.5
Metode ABTS......................................................................................22
2.7.6
Metode FRAP......................................................................................23
Spektrofotometri UV- VIS................................................................................23
2.2
25 Kerangka Pemikiran................................................................................................
2.3
26 Hipotesis..................................................................................................................
BAB 3 METODE PENELITIAN.............................................................................27 3.1. Jenis Penelitian....................................................................................................27 3.1 Alat dan Bahan.....................................................................................................28 3.1.1 Alat................................................................................................................28 28 3.1.2 Bahan................................................................................................. 3.2 Waktu dan Tempat Penelitian.......................................................................29
3.2.1. Waktu Penelitian....................................................................... 31 3.2.2. Tempat Penelitian...................................................................... 31 3.3. Prosedur Penelitian............................................................................ 32 3.3.1. Pengumpulan dan Pengelolaan sampel...................................... 32 3.3.2. Determinasi Sampel................................................................... 32 3.3.3
Penyiapan Bahan........................................................................ 33
3.3.4. Pembuatan Ekstrak...................................................................... 33 3.3.5
Kontrol kualitas ekstrak..............................................................34
3.3.6 Identifikasi Kandungan Kimia..................................................... 34 3.3.6.1. Uji Flavonoid........................................................................... 34 3.3.6.2. Uji Saponin................................................................................34 3.3.6.3. Uji Tanin...................................................................................35 3.3.6.4. Uji Antrakuinon.........................................................................35 3.3.6.5. Uji Alkaloid...............................................................................35 3.3.6.6. Uji Terpenoid............................................................................... 35 3.3.7. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak.................................................. 36 3.3.7.1 Pembuatan Larutan DPPH........................................................... 36 3.3.7.2 Pembuatan Larutan Blanko.........................................................36 3.3.7.3 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Pengukuran...........36 3.3.7.4
Operating Time Larutan DPPH 0,004%..................................... 36
3.3.7.5 Pengujian Aktivitas Antioksidan terhadap Ekstrak dan Vitamin 36C 3.3.7.6 Pengujian Aktivitas Antioksidan............................................. 36
3.3.7.7 Pengukuran Serapan Sampel..................................................
37
3.3.8
Pembuatan Larutan Kombinasi Ekstrak..................................
37
3.3.9
Pengukuran Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak..........
39
3.3.10. Uji Kualitatif Antioksidan......................................................
39
3.3.11
Analisa Data............................................................................
40
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................
44
4.4.1
Hasil Determinasi dan Tahap Ekstraksi.................................
4.1.2
Hasil Identifikasi Kandungan Kimia......................................
4.1.3
Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak................................
46
4.1.3.1 Uji kualitatif antioksidan.....................................................
46
4.2 PEMBAHASAN.............................................................................
46
4.2.1 Determinasi Tanaman..............................................................
46
4.2.2 Preparasi Bahan....................................................................... 4.2.3 Perkolasi..................................................................................
44 46
47 48 49
4.2.4 Uji kuantitatif antioksidan menggunakan metode DPPH .... 4.2.4.1 Penentuan panjang gelombang maksimum DPPH...............
49
4.2.4.2 Penentuan Operating time ....................................................
50
4.2.4.3 Analisa Data Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Tunggal Oyong dan Jamur Tiram.........................................................
50
4.2.4.4 Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Oyong dan Jamur Tiram......................................................................................
56
4.2.4.5 Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Oyong dan Jamur Tiram pada Aplikasi Persamaan Tunggal.................... 60 BAB 5 KESIMPULAN..................................................................... 63 5.1
Kesimpulan............................................................................. 63
5.2
Saran....................................................................................... 63
DAFTAR PUSTAKA........................................................................ 64 LAMPIRAN....................................................................................... 68
DAFTAR TABEL
Tabel I.
Perbandingan Nilai IC50 Hasil Perhitungan dan Hasil SPSS
55
Probit....................................................................................... 56 Tabel II.
Konsentrasi Kombinasi Pada Ekstrak Oyong dan Jamur Tiram....................................................................................... 60
Tabel III. Konsentrasi Kombinasi Ekstrak Oyong, dan Jamur Tiram pada aplikasi persamaan tunggal.............................................. Tabel IV. Interpretasi Sifat Senyawa Ekstrak...........................................
61
DAFTAR GAMBAR
Gambar Gambar 1. 1. Buah Oyong (Luffa acutangula (L.)Roxb.)..................................... 7 Gambar Gambar 2. 2. Jamur Tiram (Pleurotus ostreatus).................................................. 9 Gambar Gambar 3. 3. Mekanisme Antioksidan.................................................................
19
Gambar Gambar 4. 4. Ekstrak Etanol Buah Oyong...........................................................
36
Gambar Gambar 5. 5. Ekstrak Etanol Jamur Tiram............................................................ 37 Gambar Gambar 6. 6. Hasil Uji Identifikasi Kimia Ekstrak Buah Oyong.........................
38
Gambar Gambar 7. 7. Hasil Uji Identifikasi Kimia Ekstrak Jamur Tiram......................... 39 Gambar Gambar 8. 8. Reaksi Reduksi DPPH oleh Senyawa Antioksidan Gambar 9.
42
Hasil Uji Kualitatif Antioksidan..................................................... 43
Gambar Gambar 10.9. Kurva Regresi Linier Ekstrak Jamur Tiram dan Buah Oyong........ 49 Gambar Gambar 11.1 Kurva Regresi Linier vitamin C...................................................... 51 Gambar Gambar 12.1 Aktivitas Antioksidan Ekstrak Tunggal Oyong dan Jamur Tiram, Kombinasi Ekstrak Oyong dan Jamur Tiram dibandingkan dengan
Gambar 13.
Vitamin C Tunggal.........................................................................
55
Combination index Ekstrak Oyong dan Jamur Tiram....................
58
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.Lam Determinasi Sampel Ekstrak Buah Oyong (Luffa acutangula (L.) Roxb)................................................... Lampiran 2.
Perhitungan Hasil Ekstraksi Buah Oyong.........................
Lampiran 3.
Determinasi Sampel Ekstrak Jamur Tiram........................................
Lampiran 4.
Perhitungan Hasil Ekstraksi Jamur Tiram...........................................
Lampiran 5.LampPenentuan Panjang Gelombang (Skrining Lamda Maksimum).... Lampiran 6.LampGrafik Absorbansi DPPH 0,004% terhadap varian waktu................. Lampiran 7.LampAbsorbansi DPPH 0,004% terhadap varian waktu.............................
66 67 69 70 72 72 73
Lampiran 8LampPerhitungan % Inhibisi Ekstrak Oyong, Jamur tiram dan 74 Vitamin C............................................................................................... Lampiran 9.LampHasil Analisis SPSS Regresi Linier Probit Ekstrak Buah Oyong, Jamur Tiram, dan Vitamin C......................................... Lampiran 10.
Perhitungan Konsentrasi Kombinasi Ekstrak Oyong dan Jamur Tiram pada Aplikasi Persamaan Tunggal...........................................
Lampiran 11
76
85
87 Perhitungan nilai CI Kombinasi Ekstrak Oyong dan Jamur Tiram.......
DAFTAR SINGKATAN
CI
= Combination index
DPPH
= 1,1 Difenil-2-Pikrilhidrazil
IC50
= Inhibitory Concenteration
KLT
= Kromatografi Lapis Tipis
nm
= nanometer
p.a.
= pro analisis
PPM
= parts per million
SOD
= Superoksida Dismutase
SPSS
= Statistical Product and Service Solution
UV
= Ultraviolet
Vis
= Visible
