TEHNIK ANALISA KROMATOGRAFI SEDERHANA
KROMATOGRAFI • ADALAH SUATU TEHNIK PEMISAHAN, YG PERTAMA KALI DIPAKAI MEMISAHKAN ZAT-2 WARNA TANAMAN. KROMA= ZAT WARNA. • PRINSIP YG MEMUNGKINKAN TEHNIK KROMATOGRAFI DIPAKAI DLM AHP ADALAH: MEMANIPULASI SIFAT-2 FISIK ZAT-2 YG MENYUSUN SUATU CAMPURAN PANGAN/ZAT PENYUSUN BAHAN PANGAN.
MANIPULASI SIFAT FISIK ZAT PENYUSUN BHN PANGANS ADL: 1. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT UTK LARUT DLM SUATU PELARUT/CAIRAN. 2. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT UTK DAPAT TERADSORPSI PADA BUTIR-2 ZAT PADAT YG HALUS DGN PEMUKAAN YG LUAS 3. TENDENSI MOLEKUL DARI SUATU ZAT UNTUK MASUK KE FASE UAP/MENGUAP.
• KRN PERBEDAAN SATU/LEBIH DAI SIFAT-2 FISIK TADI, CAMPURAN BERBAGAI ZAT DAPAT DIPISAHKAN DALAM SUATU SISTEM YG BERGERAK SECARA KONTINYU. • DPT PULA DIKATAKAN TIDAK ADA DUA ZAT ATAU LEBIH YG MEMILIKI SIFAT FISIK YG SAMA. OLEH SEBAB ITU PEMISAHAN SUATU CAMPURAN ZAT DAPAT SELALU DILAKUKAN.
CONTOH: • GLUKOSA, FRUKTOSA DAN SUKROSA ATAU GULA SEDERHANA LAINNYA SELALU DAPAT DIPISAHKAN DLM SUATU CAMPURAN ZAT YG MENGANDUNG GULA SEDERHANA TSB DGN TEHNIK KROMATOGRAFI. DEMIKIAN PULA UTK SUATU ZAT CAMPURAN/SENYAWA CAMPURAN LAINNYA.
POLARITAS DLM ILMU KROMATOGRAFI • ARTI POLARITAS: ADANYA PEMISAHAN KUTUB MUATAN POSITIF DAN NEGATIF DARI SUATU MOLEKUL AKIBAT TERBENTUKNYA KONFIGURASI TERTENTU DARI ATOM2 YG MENYUSUNNYA. • POLARITAS DLM KROMATOGRAFI DIPAKAI SEBAGAI PETUNJUK SIFAT PELARUT, ADSORBEN DAN SOLUTE.
POLARITAS ZAT PELARUT KONSTANTE DIELEKTRIK
NAMA ZAT PELARUT
1,890
PE, HEKSAN, HEPTAN
2,023
SIKLOHEKSAN
2,238
KARBON TETRAKLORIDA,TRIKLOROETILEN, TOLUEN
2,284
BENZENE, DIKLOROMETANE
4,806
KLOROFORM
4,340
ETIL ETER
6,020
ETIL ASETAT
20,700
ASETON, n.PROPANOL
24,300
ETANOL
33,620
METANOL
80,370
AIR
ADSORBENT= ZAT PENYERAP/PENGIKAT • ADSORBENT DAPAT BERSIFAT POLAR ATAUPUN NON-POLAR • ADSORBEN POLAR: SILIKA GEL, ALUMINA • NON-POLAR: ARANG ATAU CHARCOAL • PROSES ADSORPSI SAMA DGN PROSES TERLARUTNYA SOLUTE DALAM PELARUT YAITU: LIKE DISSOLVES LIKE • CONTOH: ALKOHOL TERIKAT > KUAT d.p. eter TERHADAP ADSORBEN SILIKA GEL, SEBALIKNYA ETER >TERIKAT KUAT PADA CHARCOAL d.p. ALKOHOL
KROMATOGRAFI PARISI & ADSORPSI • PEMISAHAN SCR KROMATOGRAFI PARTISI ATAUPUN ADSORPSI SANGAT DIPENGARUHI OLEH: • PERBEDAAN POLARITAS SOLUTE YG DIPISAHKAN.
CHROMATOGRAPHY PAPER
TLC PLATES
PEMISAHAN JENIS GULA • PERSIAPAN SAMPEL: LAKUKAN SAMA SPT PENETAPAN GULA REDUKSI • LARUTAN STD: LAR. GLUKOSA, LAKTOSA, MANNOSA DSB 1% • PELARUT/FASE MOBIL:
PELARUT/FASE MOBIL: • 1. n-butanol:asam asetat:air: 4:1:5 (v/v) • 2. n-butanol:asam asetat:eter:air: 9:6:3:1 (v/v) • 3. isopropanol:piridin:air:asetat:8:8:4:1 • 4.butanol:etanol:air:40:11:19 • 5.etil asetat:asetat:air:3:3:1 • 6.etil asetat:piridin:air:10:4:3
PENDETEKSI: • LARUTAN ANILIN-FTALAT: LAR.1.669 G ASAM 0-FTALAT &0,91 ML ANILIN DLM CAMPURAN 48 ML n-BUTANOL, 48 ML ETER & 4 ML AIR. SEMPROTANPD KROMATOGRAM KERING, PANASKAN PADA 105-110 0C selama 5 – 7 MENIT. • PEREAKSI RESORSINOL: • PEREAKSI ANILIN DIFENILAMIN:
PENGUKURAN DGN KROMATOGRAFI KERTAS • PERSIAPAN KERTAS KROM.: 25X25 CM, GARIS 3 CM DR SATU SISI, TANDAI GRS TSB DGN PENSIL JARAK 2,5 CM, BERI TANDA • SPOTTING: ISI BEJANA DGN 50-100 ML DGN FASE MOBIL BIARKAN BEJANA JENUH, SAMBIL NUNGGU TETESKAN SAMPEL & LAR. STD PD TITIK-2NYA.
LANJUTAN KROM. KERTAS • BESARNYA SPOT TETESAN 2 CM • BIARKAN KERING ATAU PERCEPAT KERING DGN HAIR-DRYER • KERTAS DIBENTUK SILINDER, JEPIT, LETAKKAN DLM BEJANA JENUH, LAKUKAN FASE DEVELOPING. • BIARKAN FASE MOBIL MEMBASAHI KERTAS SAMPAI ¾ KERTAS, ANGKAT KERTAS KERINGKAN • DETEKSI & PENGUKURAN Rf • SEMPROT SPOT DGN LAR. PENDETEKSI
DETEKSI & PENGUKURAN Rf • SEMPROT SPOT DGN LAR. PENDETEKSI, KERINGKAN, WARNA SPOT TERBENTUK, KERTAS PANASKAN 105 0C, tandai bag. Tengah spot dgn pensil ukur & bandingkan dgn Rf spot std. • Rf = jarak start-spot/jarak start-finish.
TLC ACCECORIES
TLC REAGENT SRP
F.M SPRAY BOTTLE
GLASS CC
Alat pelapis adsorben
Cara pengembangan
Hasil pengembangan ganda
Al.kromatografi atsorbsi
• PRINSIP PROSEDUR ANALISA: PEMISAHAN PEWARNA MAKANAN SCR KROMATOGRAFI KERTAS • PEMISAHAN ASAM AMINO DARI SAMPEL DGN CARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS.
