Tak berkesudahan kasih setia TUHAN, tak habis-habisnya rahmatNya, selalu baru t i a p pagi; besar kesetiaanMu! (Ratapan 3:2 2-2 3 )
k a r y a kecil b u a t :
Sahabaf Se j a t i . Tuhan Yesus Krisrus P a p a . re-ie. W i d . Gin. Ida. A s i k i n , Daniel Papi. Mami. Varvara. Trivina. Fiona. Revina. E v t i n a
rr
1 4
KULTUR AWTHER DAW KULTUR PUGUK
PEPAVA ( e a r i c a papaya L . ) SEGARA 3 n Witre
Oleh NANDUANTO WIDJOJO A 22.0360
J U R U S A N BUD8 D A Y A P E R T A N l A N F A K U L T A S PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN 806027 1 9 9 0
RINGKASAN
HANDYANTO WIDJOJO.
K u l t u r Anther dan K u l t u r Pucuk Pepaya
( C a r i c a papaya L. ) secara I n V i t r o ( d i bawah bimbingan LIVY WINATA GUNAWAN dan S R I S E T Y A T I HARJADI). P e n e l i t i a n i n i t e r d i r i d a r i 2 percobaan t e r p i s a h , i t u k u l t u r a n t h e r dan k u l t u r pucuk.
ya-
K u l t u r anther bertu-
j u a n mempelajari pengaruh sukrosa terhadap proses androgenes's
langsung, sedangkan k u l t u r pucuk b e r t u j u a n mencari
kombinasi t a r a f NAA dan BA yang t e p a t s e r t a mempelajari 'pengaruhnya terhadap penggandaan tunas. Pada k u i t u r a n t h e r digunakan eksplan a n t h e r d a r i kuncup bunga ,pepaya Bangkok dan Hawai b e r j e n i s k e l a m i n hermap r o d i t dengan panjang p e t a l 16-18 rnrn ( f a s e mikrospora u n i nukleat).
Media dasar yang digunakan adalah media Tsay
dan Su (1985) ditarnbah 100 mg/l
g l u t a m i n dan 1 mg/l
n i n dengan perlakuan 5 t a r a f sukrosa: 90
30,
45,
60,
ade-
7 5 , dan
dl. Pada k u l t u r pucuk digunakan eksplan pucuk t u n a s sam-
p i n g pepaya Bangkok hermaprodit berukuran 2-3 rnm. kuan kombinasi NAA ( 1 ,
3 a M ) dan BA ( 2 , 4 ,
Perla-
6 .uM) dicobakan
dengan media dasar Murashige dan Skoog (MS).
Eksplan d i -
tanam pada media perlakuan, tunas yang tumbuh d i s u . b k u l t u r ke media yang sama s e t e l a h berumur 12 minggu dan 8 minggu
S e t e l a h 4 minggu pada media MS-0 tunas d i s u b k u l t u r ke med i a yang sama s e p e r t i pada i n i s i a s i awal dan s u b k u l t u r I . Proses androgenesis langsung maupun m e l a l u i k a l u s t i d a k t e r j a d i pada semua a n t h e r yang ditanam pada media perlakuan.
D a r i 327 a n t h e r pepaya Bangkok yang aksenik
hanya 2 yang mengalami pembengkakan pada p e r l a k u a n t a r a f sukrosa 30 g / l .
Pada v a r i e t a s Hawai d i j u m p a i 2 a n t h e r
membengkak d a r i 630 a n t h e r aksenik, t a r a f sukrosa 30 dan 75 g / l .
y a i t u pada p e r l a k u a n
Semua a n t h e r yang membengkak
berwarna c o k l a t dan m a t i sebelum berkembang l e b i h l a n j u t . Pengaruh sukrosa terhadap proses androgenesis langsung belum dapat d i p e l a j a r i pada percobaan i n i
.
Kontaminasi b a k t e r i yang t i n g g i menjadi masalah utama dalam k u l t u r pucuk (70.35 % ) .
Jumlah eksplan yang m a t i
bertambah dengan meningkatnya t a r a f BA sehingga pad8 subkultur
I perlakuan BA 6 a M t i d a k dapat d i l a n j u t k a n karena
hampir semua eksplan mengalami kematian. Pembentukan tunas majemuk pada k u l t u r pucuk pepaya Bangkok baru t e r j a d i s e t e l a h eksplan mengalami s u b k u l t u r
I 1 atau
8 b u l a n s e j a k i n i s i a s i awal.
Jumlah tunas p e r
k u l t u r t e r t i n g g i d i h a s i l k a n pada kombinasi NAA 1 u M dan BA 2 uM, y a i t u sebanyak 2 . 8 tunas.
KULTUR ANTHER DAN KULTUR PUCUK PEPAYA ( Car i c a papaya L . ) SECARA I n V i t r o
oleh HANDYANTO WIDJOJO A 22.0360
L a p o r a n K a r y a I l m i a h sebagai s a l a h s a t u s y a r a t u n t u k m e m ~ e r o l e hg e l a r S a r j a n a P e r t a n i an
pada
Jurusan B u d i D a y a P e r t a n i a n Fakultas P e r t a n i a n
I n s t i t u t P e r t a n i a n Bogor
JURUSAN BUD1 DAYA PERTANIAN FAKULTAS PERTANIAN I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR 1990
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR FAKULTAS PERTANIAN,
JURUSAN BUD1 DAYA PERTANIAN
K a m i m e n y a t a k a n l a p o r a n K a r y a I l m i a h y a n g disusun
oleh: Nama M a h a s i s w a :
HANDYANTO WIDJOJO
Nomor Pokok
:
A 22.0360
Judul
:
KULTUR ANTHER DAN KULTUR PUCUK PEPAYA ( C a r i c a papaya L . ) SECARA I n V i t r o
d i t e r i m a s e b a g a i salah satu s y a r a t m e m p e r o l e h g e l a r S a r j a n a ~ e r t a n i a npada Jurusan B u d i D a y a P e r t a n i a n , Fakultas Pertanian,
rl\*
Institut P e r t a n i a n Bogor.
u
D r I r L i v y Winata G u n a w a n
Dr Ir S r i Setyati Harjadi
Dosen Pembimbing I
Ir S r i Setyati Harjadi K e t u a Jurusan
K e t u a PS A g r o n o m i
Bogor,
April
1990
R I W A Y A T HIDUP
P e n u l i s d i l a h i r k a n d i L o s a r i ( C i r e b o n ) pada tanggal 5 Juli
1967 d a r i pasangan Soegianto W i d j o j o dan L i n d i a -
ningsih Limijadi. P e n u l i s menyelesaikan p,endidikan Taman Kanak-kanak d i TK P e r t i w i L o s a r i Timur pada tahun 1972.
Pada tahun 1973
sampai 1976 p e n u l i s menempuh p e n d i d i k a n d i SD Negeri 1 L o s a r i Timur.
Pada tahun 1977 p e n u l i s pindah ke SD Negeri
40 Tegal dan l u l u s pada tahun 1979.
P e n u l i s rnelanjutkan
pendidikannya ke SMP Santa M a r i a Cirebon dan l u l u s pada tahun 1982.
Pada tahun yang sama p e n u l i s meneruskan pen-
d i d i k a n n y a ke SMA Santo A l o y s i u s Bandung dan l u l u s pada tahun 1985. M e l a l u i j a l u r Sistem Penerimaan Mahasiswa Baru ( S i penmaru) p e n u l i s d i t e r i m a d i i n s t i t u t P e r t a n i a n aogor pada tahun 1985.
Setahun kemudian p e n u l i s m e m i l i h j u r u s a n Budi
3aya P e r t a n i a n dan s e l a n j u t n y a mengambil Program S t u d i Agronomi dengan bidang kekhususan H o r t i k u l t u r a . P e n u l i s pernah a k t i f dalam k e g i a t a n Desa Binaan yang diselenggarakan o l e h Himpunan Mahasiswa Agronomi pada t a hun 1986, memperoleh j u a r a 2 pada Lomba Karya T u l i s I l r n i a h se Jurusan Budi Daya P e r t a n i a n IPB tahun 1987, dan rnenjadi a s i s t e n B i o l o g i Umum pada tahun 1988-1989.
UCAPAN T E R I M A KASIH
P e n u l i s menyampaikan r a s a t e r i r n a k a s i h yang mendalam kepada: D r I r L i v y Winata Gunawan dan D r I r S r i S e t y a t i
H a r j a d i s e l a k u dosen pembirnbing yang t e l a h mernberikan
d i d i k a n , bimbingan, nasehat, dan dorongan
D r I r G.
A.
Wattirnena dan I r N i Made Armini Wiendi
yang t e l a h rnenguji dan rnernberikan saran p e r b a i k a n Urusan Senimar dan Karya I l r n i a h Petugas L a b o r a t o r i u m K u l t u r J a r i n g a n Budi Daya Pertanian Ternan-ternan d i l a b o r a t o r i u r n a t a s bantuan, kerjasama, dan p e r h a t i a n yang d i b e r i k a n Rekan-rekan d i Komisi Pelayanan Siswa a t a s dukungan dan kasihnya H a j i Odom dan Pak Wanta yang rnengijinkan p e n u l i s rnernperoleh bahan tanaman untuk p e n e l i t i a n i n i d a r i kebun pepayanya Semua pihak yang t e l a h rnernbantu dalarn penyelesaian p e n e l i t i a n dan p e n u l i s a n k a r y a i l r n i a h i n i .
DAFTAR IS1
Hal arnan
..................................... DAFTAR GAMBAR ................................... PENDAHULUAN ..................................... ............................. L a t a r Belakang .......................... Tujuan P e n e l i t i a n H i p o t e s i s .................................. TINJAUAN PUSTAKA ................................ Sejarah dan Botani P.epaya .................. .............................. Syarat Tumbuh .............. Budidaya P r a k t i s dan Produksi Genetika J e n i s Kelamin Pepaya .............. K u l t u r Pucuk ............................... K u l t u r Pucuk Pepaya ................... K u l t u r Anther .................... ......... K u l t u r Anther Pepaya .................. BAHAN DAN METODE ................................ Tempat dan Waktu P e n e l i t i a n ................ ............................. Bahan dan A l a t ................. S t e r i l i s a s i A l a t dan Media Metode P e n e l i t i a n .......................... .............................. K u l t u r Anther ................. Perlakuan dan Eksplan Penentuan Fase Mikrospora ............. DAFTAR TABEL
X
xii 1 1 4
5 6 6
I
17 17
Ha 1 aman
............................. Lingkungan Tumbuh ..................... Pengamatan ............................ ............................... K u l t u r Pucuk Perlakuan dan Eksplan ................. Penanaman ............................. .................... Pemi ndahan Eksplan Lingkungan Tumbuh ..................... Pengamatan ............................ HASIL DAN PEMBAHASAN ............................ .............................. K u l t u r Anther K u l t u r Pucuk ............................... T i n g k a t Kontaminasi ................... I n i s i a s i Awal ......................... S u b k u l t u r I ........................... S u b k u l t u r I 1 .......................... KESIMPULAN DAN SARAN ............................ ~ e s i m p u l a n .................................. Saran ...................................... DAFTAR PUSTAKA .................................. LAMPIRAN ......................................... Penanaman
19 19
19 20 20 20 21
21 22 23 23 28 28 29
34 35 41 41
41 42 45
DAFTAR TABEL
Halarnan
Perbandingan Sex H a s i l Penyerbukan pada Tanaman Pepaya
..............................
Banyaknya Anther yang D i k u l t u r k a n , Terkontaminasi, dan Aksenik hingga 8 Bulan S e t e l a h Tanam ( 8 BST)
.............................
Jumlah Anther yang Berwarna Kuning, Pucat, dan Kecoklatan pada 8 BST
Kuning
..........
Jumlah dan Persentase Anther yang Mengalami Pembengkakan pada Beberapa T a r a f Sukrosa
..
Banyaknya Pucuk yang Ditanam, Aksenik, Terkontarninasi, dan M a t i pada Media S e l e k s i
..
Banyaknya Pucuk Awal, Terkontaminasi, dan Aksenik pada I n i s i a s i Awal
Mati,
............
Pengaruh BA terhadap T i n g g i Tunas pada I n i s i a s i Awal (12 MST)
.......................
R a t a - r a t a Jurnlah Daun per K u l t u r dan Jurnlah Eksplan Berkalus pada A k h i r I n i s i a s i Awal
.
Pengaruh BA terhadap T i n g g i Tunas pada A k h i r S u b k u l t u r I ( 8 MST)
.......................
R a t a - r a t a Jumlah Daun p e r K u l t u r dan Banyaknya Eksplan Berkalus pada A k h i r S u b k u l t u r I Banyaknya K u l t u r yang Tidak dan Membentuk Tunas Majemuk s e r t a K i s a r a n Jumlah Tunas yang D i h a s i l k a n p e r Kul t u r pada Akhi r Subk u l t u r I 1 ( 8 MST)
.........................
T i n g g i Tunas T e r t i n g g i , R a t a - r a t a Jumlah Daun p e r K u l t u r dan Banyaknya Eksplan B e r k a l u s pada A k h i r S u b k u l t u r I 1
...................
Larnoi r a n 1.
Kornposisi Media Murashige dan Skoog (1962)
2.
Kornposisi Media Tsay dan Su (1985)
3.
S i d i k ~ i g a mT i n g g i Tunas pada A k h i r I n i s i a s i Awal ( 1 2 MST)
4.
S i d i k Ragam T i n g g i Tunas pada A k h i r Subkul t u r I ( 8 MST)
......
.......................
...........................
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Kuncup Bunga dan Polen yang Berada pada Fase Mikrospora U n i n u k l e a t
18
2.
Anther yang Membengkak
26
3.
Pengaruh BA terhadap Persentase Eksplan yang Hidup dan M a t i pada I n i s i a s i Awal
1.
4.
5.
.............. ..................
..
30
G r a f i k Pertumbuhan Eksplan pada I n i s i a s i Awal
....................................
31
Tunas yang Membentuk Daun dengan Tangkai Oaun yang Pendek dan Gemuk s e r t a H e l a i Daun yang Tidak Sempurna
33
R a t a - r a t a Jurnlah Tunas p e r K u l t u r pada A k h i r S u b k u l t u r I 1 ( 8 MST)
36
Eksplan yang Menghasilkan Tunas Majernuk dan Membentuk Kalus
39
..................
6.
7.
..............
.....................
PENDAHULUAN
L a t a r Be1 akanq Pepaya adalah s a l a h s a t u tanaman buah-buahan t r o p i s yang tumbuh b a i k d i I n d o n e s i a dan mempunyai p o t e n s i u n t u k dikembangkan sebagai k o m o d i t i ekspor non migas.
Pada t a -
hun 1983 volume ekspor pepaya I n d o n e s i a sebesar 1 9 t o n . Jumlah i n i t e r u s meningkat dan pada tahun 1985 volume e k s p o r n y a menjadi 5 9 t o n . dengan negara t u j u a n S i n g a p u r a dan A u s t r a l i a . * l S e l a i n kesinambungan p r o d u k s i dan k u a n t i t a s yang mencukupi, k u a l i t a s a d a l a h s a l a h s a t u komponen p e n t i n g yang h a r u s d i p e r h a t i k a n dalam memproduksi buah pepaya u n t u k t u j u a n ekspor.
Pengadaan b i b i t unggul yang memi-
l i k i s i f a t g e n e t i k yang seragam, p r o d u k t i v i t a s t i n g g i , dan k u a l i t a s buah yang b a i k t i d a k dapat d i p u n g k i r i l a g i merupakan langkah awal yang h a r u s d i l a k u k a n dalam pengusahaan tanaman pepaya s k a l a b e s a r secara k o m e r s i a l u n t u k t u j u a n ekspor. Penanaman pepaya m e l a l u i b i j i merupakan c a r a b u d i daya yang b i a s a d i l a k u k a n p a r a p e t a n i pepaya k a r e n a r e l a t i f murah, mudah, dan t i d a k memerlukan i n v e s t a s i awal b i b i t yang t i n g g i .
T e t a p i c a r a i n i bukanlah c a r a yang t e r -
b a i k dalam penanaman pepaya s k a l a besar k a r e n a adanya
*)
S t a t i s t i k a I n d o n e s i a 1985,
1987, BPS, J a k a r t a .
2
variasi genetik yang sangat tinggi dan terjadinya segregasi tipe jenis kelamin (jantan, betina, dan hermaprodit). Penyerbukan terkendali dengan cara menyerbuki putik bunga hermaprodit dengan serbuk sari bunga hermaprodit dari varietas yang sama atau dengan penyerbukan sendiri dapat menekan keragaman sifat buah, tetapi belum dapat mengatasi keragaman jenis kelamin pepaya.
Benih yang
berasal dari buah hermaprodit asal penyerbukan terkendali pada tanaman hermaprodit tetap akan menghasilkan tanaman pepaya hermaprodit dan tanaman betina dengan perbandingan 2:l.
Selain segregasi jenis kelamin, hama, dan penyakit juga merupakan rnasalah yang serius dalam budidaya pepaya. Penyakit terpenting pada pepaya adalah penyakit yang disebabkan oleh virus.
Penyakit virus bercak cincin pepaya
dilaporkan telah menjadi penyakit terpenting di Hawai, Amerika Utara, Afrika, Karibia, India, dan Taiwan (Chen, Wang, dan Maeda, 1987;
Litz, 1986).
Tanaman yang terse-
rang akan menghasilkan buah pepaya dengan kadar gula yang rendah sehingga tidak dapat dipasarkan. Teknik kultur jaringan merupakan salah satu alternatif pemecahan masalah.
Kultur pucuk diandalkan untuk
mempertahankan suatu klon tertentu dan perbanyakan cepat, sedangkan kultur anther untuk memperoleh tanaman pepaya homozigot yang dapat digunakan dalam kegiatan pemuliaan
3 tanarnan.
M e l a l u i k u l t u r pucuk dapat d i h a s i l k a n b i b i t
yang seragam dalarn jurnlah b e s a r dalarn waktu s i n g k a t , bebas harna dan p e n y a k i t , dan rnerupakan c a r a e f e k t i f u n t u k rnernperoleh tanarnan b a r u yang sarna dengan induknya.
Kul-
t u r a n t h e r dapat rnenunjang k e g i a t a n pernuliaan tanarnan, r n i s a l n y a dalarn usaha menghasilkan h i b r i d a t e r k e n d a l i unt u k rnemperoleh tanarnan yang r e s i s t e n t e r h a d a p p e n y a k i t virus. Tanarnan h a p l o i d rnernpunyai jurnlah krornoscin sornatik sarna dengan s e l - s e l ploid,
garnetnya.
Pada tanarnan pepaya d i -
krornosornnya b e r j u r n l a h 2n=18 dan s e l - s e t
garnetnya
rnengandung krornosorn n=9, s e h i n g g a tanaman h a p l o i d pepaya r n e r n i l i k i jurnlah krornosorn n=9.
Dalarn k u l t u r a n t h e r tanarn-
an h a p l o i d dapat d i p e r o l e h r n e l a l u i p r o s e s a n d r o g e n e s i s l a n g s u n g (perkernbangan p o l e n langsung rnenjadi tanarnan tanpa rnelalui f e r t i l i s a s i )
atau melalui kalus
K e b e r h a s i l a n p r o s e s a n d r o g e n e s i s pada k u l t u r a n t h e r s e c a r a urnurn d i p e n g a r u h i o l e h p e r l a k u a n suhu rendah, p o s i s i media yang digunakan, k u l t u r diternpatkan.
korn-
dan l i n g k u n g a n f i s i k d i mana
Salah s a t u kornponen media yang b e r -
p e r a n p e n t i n g dalarn rnendapatkan tanarnan h a p l o i d r n e l a l u i a n d r o g e n e s i s adalah g u l a ( N i t s c h , 1 9 8 1 ) .
Namun u n t u k
rnengetahui s e j a u h rnana pengaruh g u l a s e c a r a s p e s i f i k pada k u l t u r a n t h e r pepaya v a r i e t a s t e r t e n t u rnasih d i p e r l u k a n suatu penelitian.
4
Penelitian kultur anther pepaya telah dilakukan oleh Litz dan Conover ( 1 9 7 8 , dalam Litz, 1 9 8 6 ) . ploid yang diperoleh hanya 0 . 1
%
Tanaman ha-
dari seluruh anther yang
ditanam pada modifikasi media dasar Murashige dan Skoog (MS) yang ditambah 20 g/l sukrosa dengan perlakuan awal suhu rendah.
Pembentukan tanaman haploid melalui kultur
anther berhasil diperbaiki oleh Tsay dan Su ( 1 9 8 5 ) dengan menggunakan rnodifikasi media dasar MS-1/2 penuh) ditambah 60 g/l sukrosa.
(Na-Fe- EDTA
Anther yang dikulturkan
berada pada fase sel polen uninukleat.
Keberhasilan ter-
bentuknya tanarnan haploid pada penelitian ini juga rnasih sangat rendah, yaitu sekitar 1
%
tetapi sudah lebih ting-
gi dibandingkan hasil yang dicapai oleh Litz dan Conover ( 1978).
Dalam kultur pucuk perimbangan auksin dan sitokinin msmegang peranan penting.
sil rnemperoleh
7
Litz dan Conover ( 1 9 7 8 ) berha-
tunas pepaya 'Solo' baru per 3 minggu
rnelalui kultur pucuk dengan menambahkan 1 .uM NAA dan 2 .uM @.A pada media perbanyakan MS. Tu.iuan Penel i tian 1.
Kultur anther:
mempelajari dan mengamati pengaruh
sukrosa terhadap proses androgenesis langsung pada media Tsay dan Su ( 1 9 8 5 ) .
5 2.
K u l t u r pucuk:
rnencari k o m b i n a s i t e p a t t a r a f NAA dan
BA s e r t a rnempelajari pengaruhnya t e r h a d a p
penggandaan t u n a s pepaya pada media M S .
Hi~otesis 1.
Sukrosa berpengaruh t e r h a d a p p r o s e s a n d r o g e n e s i s 1angsung.
2.
Kornbinasi k o n s e n t r a s i NAA dan B A yang t e p a t menghas i l k a n penggandaan t u n a s yang t e r b a i k .
TINJAUAN PUSTAKA
S e i a r a h dan B o t a n i PeDaya Pepaya a d a l a h tanaman a s l i Amerika Tengah yang b e r i k l i m t r o p i s (Samson,
1980).
Tanaman pepaya yang d i b u . d i -
dayakan sekarang merupakan h a s i l p e r s i l a n g a n a l a m i a n t a r a C a r i c a p e l t a t a Hook. and Arn.
dengan s p e s i e s l i a r l a i n n y a
( L i t s , 1984). Pepaya yang m e m i l i k i nama b o t a n i C a r i c a papaya L. termasuk tanaman b e r k e p i n g dua,
s a l a h s a t u anggota k e l u -
a r g a Caricaceae dan genus C a r i c a . t i k n y a 2n=18 ( L i t z ,
Jumlah kromosom soma-
1984).
Tanaman yang m e m i l i k i pembuluh l a t e k s pada semua bag i a n tanamannya i n i termasuk h e r b a t a h u n a n b e r k a y u f u n a k , batangnya t i d a k bercabang,
besar,
t i n g g i n y a d a p a t menca-
p a i beberapa meter d i a t a s t a n a h (Hartmann, Kof ranek,
1981 ;
Samson,
1980 )
Daunnya besar dan l e b a r ,
F l o c k e r , dan
. m e n j a r i dengan t a n g k a i daun
yang panjang dan b e r l u b a n g pada b a g i a n tengahnya s e p e r t i p i p a , t e r s u s u n secara m e l i n g k a r (Samson, djoatmodjo,
1980 dan S o e d i r -
1985).
Pada tanaman pepaya d a p a t d i j u m p a i bermacam-macam b e n t u k , t i p e , dan j e n i s bunga.
Berdasarkan j e n i s k e l a -
minnya S o e d i r d j o a t m o d j o ( 1 9 8 5 ) menyebutkan beberapa macam bunga,
y a i t u bunga b e t i n a , bunga j a n t a n ,
bunga sempurna
7
elongata, bunga sempurna petandria, bunga sempurna antara, dan bunga sempurna rudimenter. Buah pepaya termasuk buah buni.
Bagian yang dapat
dimakan adalah bagian mesokarp dan endokarp yang berdaging lunak.
Pada bagian dalam dinding ovarinya dijumpai
biji dalam jumlah banyak.
Buah muda mengandung papain,
suatu enzim pencerna protein (Hartmann et a l . , 1981). Bentuk buahnya bervariasi dari bulat hingga seperti buah pear.
Bobotnya umumnya berkisar 0.5-2.0 kg.
Buah pepaya
sering dikonsumsi sebagai buah segar, salad, campuran es buah, dan selai (Samson. 1980).
Setiap 100 g buah pepaya
mengandung 45 kalori, dengan kandungan vitamin A sebanyak 710 SI. vitamin C 75 mg, kalium 221 mg, dan beberapa mineral lainnya (Soedirdjoatmodjo, 1985). Svarat Tumbuh Pepaya dapat tumbuh pada suhu lingkungan 15O-35Oc, tetapi suhu optimal bagi pertumbuhannya berkisar antara 22-28O~. Tanaman muda membutuhkan kelembaban tinggi. Curah hujan yang baik bagi tanaman pepaya berkisar 15002000 mm per tahun (Soedirdjoatmodjo, 1985).
Tanaman
pepaya dapat tumbuh pada ~ ~ O L U - 3 2 '(Hartmann ~~ et a 7 . , 1981). Tanah bagi pertanaman pepaya harus memiliki drainase dan aerasi yang baik, subur, kaya bahan organik, lebih
d i s u k a i yang m e m i l i k i t o p o g r a f i yang d a t a r , b e r k i s a r 6-7
dan pH-nya
(Samson. 1980).
Tanaman pepaya termasuk tanaman yang t a h a n k o n d i s i k e k e r i o g a n karena s i s t e m perakarannya yang r a p a t .
Pohon
penahan a n g i n sangat besar peranannya u n t u k m e l i n d u n g i pertanaman pepaya d a r i t e r p a a n a n g i n yang k u a t (Samson, 1980).
Budidava P r a k t i s dan P r o d u k s i Tanaman pepaya b i a s a d i t a n a m dengan j a r a k tanam 2.5 m x 2 m sampai 3 m x 3 m t e r g a n t u n g v a r i e t a s .
Popu-
l a s i n y a p e r h e k t a r b e r k i s a r 1000-2000 tanaman (Samson, 1980). %nga
pertama muncul k i r a - k i r a 5 b u l a n s e t e l a h pe-
nanaman b i j i , sedangkan buah pertama d a p a t d i p e t i k 5 bu'lan k m u d i a n (Hartmann e t a l . ,
1981).
P r o d u k s i t o t a l di
P u l a u Jawa mencapai 1 890 602 k u i n t a l pada t a h u n 1988. S e n t r a p r o d u k s i n y a t e r s e b a r d i s e l u r u h P u l a u Jawa dengan daerah-daerah
p e n g h a s i l utama Malang,
Jombang,
dan B o g o r . * )
G e n e t i k a J e n i s K e l a m i n Pepaya Berdasarkan j e n i s k e l a m i n n y a t e r d a p a t 3 j e n i s k e l a m i n tanaman pepaya.
yaitu:
tanaman j a n t a n ,
h e r m a p r o d i t (Hartmann e t a l . , 1980; *)
Soedirdjoatmodjo,
-
B i r o Pusat S t a t i s t i k ,
1981;
1985). 1988.
Litz,
betina, 198
dan
Dalarn t u l i s a n n y a S o e d i r d j o a t r n o d j o ( 1 9 8 5 ) rnengernukakan h a s i l p e n e l i t i a n t e n t a n g penyerbukan s i l a n g dan p e n y e r b u k a n s e n d i r i pada tanarnan pepaya yang d i l a k u k a n o l e h S t o r e y d i Hawai Tabel 1 .
(Tabel 1 ) .
Perbandingan Sex Hasil Penyerbukan pada Tanarnan P e p a y a Penyerbukan
*
Perbandingan Sex
diserbuk sendiri Kul t u r P u c u k
K u l t u r p u c u k a d a l a h s a l a h s a t u d a s a r k e g i a t a n perb a n y a k a n t a n a r n a n s e c a r a v e g e t a t i f r n i k r o dalarn k u l t u r
jari ngan.
D i bandingkan dengan kul t u r rneristern, kul t u r
pucuk l e b i h banyak d i l a k u k a n k a r e n a e k s p l a n yang l e b i h b e s a r p a d a k u l t u r p u c u k l e b i h rnudah d i i s o l a s i , rnernpunyai p e l u a n g h i d u p l e b i h b e s a r , d a n rnenunjukkan k e c e p a t a n turnbuh y a n g l e b i h b a i k (Hu d a n Wang,
1983).
Ukuran
10 e k s p l a n yang digunakan dalam k u l t u r pucuk umumnya b e r k i s a r 3-10
mm (Gunawan,
1987).
Menurut Murashige (1974) dalam k u l t u r pucuk tahap perkembangan e k s p l a n pada dasarnya t e r d i r i d a r i 3 f a s e , yaitu:
f a s e pertumbuhan,
(1)
nas, dan ( 3 )
(2)
f a s e penggandaan t u -
f a s e pembentukan a k a r .
Pada f a s e penggan-
daan tunas t e r d a p a t 3 kemungkinan t e r b e n t u k n y a tunas majemuk,
yaitu:
m e l a l u i pembentukan tunas a k s i l a r ,
pem-
bentukan tunas a d v e n t i f , a t a u m e l a l u i pembentukan embrio somatik (Hu dan Wang,
1983).
Kemampuan eksplan untuk b e r t a h a n h i d u p , menghasilkan penggandaan tunas, nyak f a k t o r ,
yaitu:
dan beregenerasi d i p e n g a r u h i o l e h basumber dan k o n d i s i f i s i o l o g i s eks-
p l a n , kandungan hormon endogen, c a r a s t e r i l i s a s i eksplan, i s o l a s i eksplan, media, dan l i n g k u n g a n f i s i k k u l t u r (Hu dan Wang,
1983).
K u l t u r Pucuk Pepava K u l t u r pucuk pepaya t e l a h d i l a k u k a n o l e h beberapa peneliti.
Mehdi dan Hogan (1976) mengkulturkan pucuk
pepaya yang b e r a s a l d a r i kecambah dengan menggunakan media MS ditambah 4.7 wM k i n e t i n .
Untuk media perakaran
digunakan MS ditambah 4.7 wM k i n e t i n dan 24.5 wM I B A . Pada p e n e l i t i a n t e r s e b u t t i d a k t e r j a d i perbanyakan pucuk. Y i e dan Liaw (1977,
dalam
Litz,
1984) b e r h a s i l
menemukan media yang cocok untuk perbanyakan pucuk a s a l
11 kecambah dengan menggunakan media MS yang mengandung 0.3 uM I A A dan 2 3 IVM k i n e t i n atau 2.2-4.4
.uM B A .
L i t z dan.Conover ( 1 9 7 8 ~ )menggunakan media MS ditambah 50 .uM k i n e t i n dan 10 a M NAA pada suhu ruang tumbuh 2 5 O ~dan i n t e n s i t a s penyinaran 1.5 k l u x selarna 1 6 jam unt u k m e n g i n i s i a s i pucuk pepaya yang b e r a s a l d a r i tanaman dewasa.
Setelah berumur 2 bulan pucuk t e r s e b u t dipindah-
kan ke media perbanyakan.
Media perbanyakan t e r b a i k ada-
l a h media MS yang ditambah 1 a M NAA dan 2 a M BA dengan kecepatan perbanyakan 7 tanaman per 3 minggu.
Perakaran
dirangsang dengan media MS yang ditambah 0.5-5 a M I B A a t a u 0.5-15
a M NAA.
NAA 5 IVM memberi pengaruh t e r b a i k
untuk pembentukan akar. Pada tahun 1981 L i t z dan Conover melakukan p e n e l i t i a n k u l t u r pucuk pepaya dengan media yang sama s e p e r t i yang mereka gunakan pada p e n e l i t i a n tahun 1978.
Hasil
p e n e l i t i a n n y a menunjukkan bahwa pada k u l t u r pucuk pepaya waktu dan kecepatan pertumbuhan dan perbanyakan tanaman dipengaruhi o l e h :
umur tanarnan sumber eksplan, musim
pada s a a t pucuk d i a m b i l ,
t i p e j e n i s kelamin, ada t i d a k n y a
kontaminasi b a k t e r i , dan t e r j a d i n y a e t i o l o g i yang d i s e babkan o l e h suatu patogen.
Tanaman yang sedang berada
Dada f a s e pertumbuhan a k t i f merupakan sumber eksplan yang baik.
Eksplan yang d i a m b i l pada musim panas menunjukkan
pertumbuhan i n v i t r o l e b i h b a i k daripada eksplan yang
12 d i a m b i l pada musim d i n g i n .
Pucuk pepaya j a n t a n menunjuk-
kan pertumbuhan dan jumlah perbanyakan l e b i h t i n g g i d i bandingkan pucuk tanaman h e r m a p r o d i t dan b e t i n a . perakaran MS ditambah 2.5
Media
4 M IBA memberikan h a s i l yang
t e r b a i k.
K u l t u r Anther K u l t u r anther merupakan s a l a h s a t u c a r a mendapatkan tanaman h a p l o i d m e l a l u i proses androgenesis.
Tanaman
h a p l o i d adalah tanaman yang mempunyai jumlah kromosom sama dengan gamet pada s e l - s e l
sporofitnya (Bajaj,
1983).
Androgenesis adalah perkembangan s e l polen menjadi tanaman t a n p a m e l a l u i proses f e r t i l i s a s i
( N i t s c h dan Godard,
1979). Pada dasarnya mekanisme androgenesis adalah mencegah pembentukan s e l g e n e r a t i f a t a u menghentikan perkembangan g e n e r a t i f yang normal dan mempertinggi pembelahan s e l - s e l v e g e t a t i f ( N i t s c h dan Godard,
1979).
Tanaman h a p l o i d m e l a l u i k u l t u r a n t h e r dapat d i p e r o l e h dengan 2 cara,
yaitu:
m e l a l u i proses androgenesis
langsung a t a u embriogenesis m e l a l u i pembentukan k a l u s (Gunawan,
1987;
Sink dan Padmanabhan, 1977).
Penggunaan tanaman h a p l o i d mencakup beberapa d i s i p l i n ilmu: (Collins,
pemuliaan tanaman, 1977;
Gunawan,
Padmanabhan, 1977).
1987;
f i s i o l o g i , dan b i o k i m i a Pierik,
1987;
Sink dan
Penggunaannya d i bidang t e r s e b u t
13
adalah:
(1)
rnendeteksi rnutasi dan rekornbinan yang u n i k ,
rnenghasilkan h i b r i d a t e r k e n d a l i ,
(2)
(3)
s i f a t tertentw,
(4)
hornozigot,
rnernpelajari s i f a t - s i f a t
(5)
s e s i f , dan ( 6 )
seleksi s i f a t -
rnempercepat upaya rnernperoleh tanarnan g e n e t i k yang r e -
digunakan dalarn h i b r i d i s a s i sornatik.
Dibandingkan k u l t u r p o l e n dan k u l t u r o v u l yang belum diserbuk,
c a r a rnendapatkan tanarnan h a p l o i d r n e l a l u i k u l t u r
a n t h e r rnerniliki keuntungan karena t e k n i k i s o l a s i n y a l e b i h rnudah.
Kerugiannya adalah kernungkinan t e r b e n t u k n y a t a -
narnan d a r i j a r i n g a n s p o r o f i t , s e p e r t i d i n d i n g a n t h e r a t a u t a n g k a i s a r i (Gunawan, 1987). N i t s c h (1981) rnenyatakan bahwa unsur minor dan v i t a min t i d a k d i p e r l u k a n dalarn proses androgenesis.
Pernberi-
an z a t pengatur turnbuh j u g a t i d a k berpengaruh bahkan dap a t b e r s i f a t rnerusak pada k o n s e n t r a s i t e r t e n t u , dapat rnengharnbat proses ernbriogenesis.
karena
B a j a j (1983) rne-
ngernukakan bahwa z a t pengatur turnbuh sebaiknya d.iberikan dalarn k o n s e n t r a s i serendah rnungkin untuk rnenghindari t e r bentuknya k a l u s d a r i j a r i n g a n d i p l o i d yang t i d a k d i h a r a p kan
. N i t s c h (1981) j u g a rnenyatakan bahwa u n t u k rnernperoleh
tanarnan h a p l o i d m e l a l u i androgenesis langsung p e r l u d i p e r h a t i k a n r n o d i f i k a s i g u l a dan asarn amino yang ditarnbahkan pada media turnbuh.
14
H a s i l p e n e l i t i a n Mauro,
Nef,
dan F a l l o t (1986) me-
n u n j u k k a n bahwa penambahan g l u t a m i n 100 mg/l 1 mg/l
pada media dasar MS-1/2
dan a d e n i n
dengan tambahan NAA 0.5 .uM
dan BA 0.4 .uM meningkatkan pembentukan k a l u s dan pembent u k a n tanaman h a p l o i d m e l a l u i p r o s e s e m b r i o g e n e s i s .
Pe-
n e l i t i a n i n i d i l a k u k a n terhadap a n t h e r V i t i s v i n i f e r a k u l t i v a r Carbenet-Sauvignon. Menurut N i t s c h (1981) penggunaan cahaya p u t i h dengan intensitas tinggi sis,
(5000 l u x ) menghambat p r o s e s androgene-
sedangkan penyimpanan pada tempat g e l a p a t a u yang
d i b e r i cahaya b i r u t i d a k b e r s i f a t menghambat. P e r l a k u a n awal suhu rendah pada k u l t u r a n t h e r memb e r i k a n pengaruh yang b a i k ( N i t s c h dan Godard, yaitu:
1979),
meningkatkan v i a b i l i t a s p o l e n dan keserempakan
pehelahan sel,
memperlambat metabolisme k e a r a h pema-
tangan s e k s u a l ,
dan merangsang pembelahan s e l - s e l
t a t if
vege-
.
K u l t u r A n t h e r Pepava L i t z dan Conover ( 1 9 7 8 ~dalam L i t z ,
1984) t e l a h
mencoba k u l t u r a n t h e r pepaya dengan menggunakan media MS ditambah 20 g sukrosa,
2 mg BA, 0.5 mg NAA,
dan 10 g
arang a k t i f p e r l i t e r media,
d i i k u t i p e r l a k u a n awal suhu
rendah 4 ' ~ selama 3-4
Tanaman h a p l o i d yang t e r b e n -
hari.
t u k hanya s e k i t a r 0.1 %. Tsay dan Su (1985) menggunakan a n t h e r u n t u k memperol e h tanaman h a p l o i d pepaya dengan media MS-1/2
(Na-Fe-
15 EDTA penuh) yang ditarnbah 2 mg/l
g/l
sukrosa.
NAA,
1 mg/l
BA,
dan 6 0
Fase rnikrospora yang rnenunjukkan t i n g k a t
pembentukan k a l u s t e r t i n g g i a d a l a h u n i n u k l e a t h i n g g a m i t o s i s pertarna. hanya 1 . 1 4 %.
Jurnlah tanarnan h a p l o i d yang t e r b e n t u k
P e r l a k u a n tanpa cahaya f g e l a p ) pada r u a n g
k u l t u r memberikan h a s i l l e b i h b a i k pada pernbentukan kalus.
Tanarnan h a p l o i d d i p e r o l e h dengan memindahkan
embrio yang t e r b e n t u k ke media MS tanpa z a t p e n g a t u r tumbuh dengan s u k r o s a sebanyak 60 g p e r l i t e r media.
.
BAHAN DAN METODE
TemDat dan Waktu P e n e l i t i a n P e n e l i t i a n d i l a k u k a n d i Laboratorium K u l t u r J a r i n g a n Jurusan Budi Daya P e r t a n i a n , P e r t a n i a n Bogor.
Fakultas Pertanian, I n s t i t u t
P e n e l i t i a n berlangsung pada b u l a n Janu-
a r i 1989 s a m ~ a i bulan Pebruari 1990.
Bahan dan A l a t Media k u l t u r yang digunakan adalah f o r m u l a s i Murashige dan Skoog (MS) dengan tambahan NAA, agar,
dan sukrosa.
BA, g l u t a m i n , adenin,
Bahan-bahan yang digunakan untuk s t e -
r i l i s a s i bahan tanaman dan a l a t tanarn adelah B e n l a t e , A g r i mycin, C l o r o x ,
Betadine, a l k o h o l , s p i r i t u s ,
dan a k u a d e s t i -
1a t a . Alat-alat gelas p i a l a ,
yang digunakan m e l i p u t i b o t o l k u l t u r k e c i l ,
erlenmeyer, p i p e t ,
autoclave,
g e l a s pengaduk, corong, p i p e t t e t e s ,
saringan kain,
sen, k e r t a s alumunium f o i l , k a r e t gelang, tanam,
gunting,
p i n s e t , cawan p e t r i ,
oven, neraca,
pH-meter,
bunkotak
lampu s p i r i t u s , dan
rak inkubasi.
S t e r i l i s a s i A l a t dan Media Sebelurn digunakan b o t o l k u l t u r , p i n s e t , s k a l p e l , cawan p e t r i d i s t e r i l k a n dengan a u t o c l a v e pada tekanan 1 7 . 5 p s i selama 1 jam.
Media d i s t e r i l k a n dalam a u t o c l a v e se-
lama 30 m e n i t pada tekanan 1 7 . 5
psi.
17 Metode P e n e l i t i a n P e n e l i t i a n yang d i l a k u k a n t e r d i r i d a r i 2 percobaan terpisah, cuk.
yaitu:
(1)
k u l t u r a n t h e r dan ( 2 )
k u l t u r pu-
Kedua percobaan t e r s e b u t menggunakan rancangan acak
lengkap. Kul t u r Anther P e r 1 akuan dan E k s ~an l Pada percobaan i n i t e r d a p a t 5 t a r a f p e r l a k u a n s u k r o sa,
yaitu:
30, 45,
60, 75, dan 90 g / l .
Media yang d i g u -
nakan adalah.media Tsay dan Su ( 1 9 8 5 ) . y a i t u : (Na-Fe-EDTA
MS-1/2
penuh) dengan kombinasi NAA 2 mg/1,
ditambah 100 mg/l
g l u t a m i n dan 1 mg/l adenin.
BA 1 m g / l Eksplan
yang digunakan a d a l a h a n t h e r pepaya Bangkok dam Hawai yang b e r a s a l d a r i kuncup bunga dengan panjang p e t a l 16-18 mm. S e t i a p p e r l a k u a n t e r d i r i d a r i 70 a n t h e r pepaya Bangkok dan 160 a n t h e r pepaya Hawai.
Penentuan Fase M i k r o s o o r a Beberapa kuntum bunga pepaya yang masih kuncup dengan p a n j a n g p e t a l 8-25 mm direndam dalam l a r u t a n a l k o h o l aset a t selama 24 jam.
L a r u t a n a l k o h o l a s e t a t d i b u a t dengan
mencampur 1 b a g i a n asam a s e t a t 9 5 % dan 3 b a g i a n a l k o h o l 96 % berdasarkan volume. S e t e l a h 24 jam d i f i k s a s i dalam l a r u t a n a1 k o h o l a s e t a t anther
yang
terdapat
dalam
kuncup
bunga
diambil
dan
18
d i l e t a k k a n pada g e l a s obyek.
Anther d i t e k a n dan d i a d u k
dengan tusuk g i g i sehingga polennya t e r s e b a r pada permukaan gelas obyek.
Asetocarmin d i t e t e s k a n pada p o l e n yang
t e r s e b a r sebagai media p r e p a r a t dan b e r f u n g s i sebagai pewarna sehingga memperjelas bagian-bagian l a h d i t u t u p dengan gelas penutup,
s e l polen.
Sete-
p r e p a r a t d i a m a t i d i ba-
wah mikroskop yang d i l e n g k a p i dengan karnera f o t o ( i n v e r t e d microscope) dengan perbesaran 6 0 0 k a l i dan d i f o t o . H a s i l perneriksaan menunjukkan bahwa p o l e n yang berada pada f a s e u n i n u k l e a t t e r d a p a t pada kuncup bunga pepaya dengan panjang p e t a l 16-18 mm.
Gambar 1.
Kuncup Bunga dan Polen yang Berada pada Fase M i k r o s p o r a U n i n u k l e a t
19
Penanaman Bunga pepaya dengan panjang petal 16-18 mm dicuci bersih dengan deterjen dan dibilas dengan air kran mengalir.
Selanjutnya bunga pepaya tersebut direndam dalam la-
rutan alkohol 70
%
selama 1 menit dan dibilas dengan air
steril yang telah disiapkan dalam kotak tanam. Dalam kotak tanam bunga pepaya direndam dalam larutan Clorox 20
%
selama 10 menit lalu dibilas dengan air steril
sebanyak 3 kali masing-masing selama 2 menit.
Kemudian
bunga pepaya dimasukkan ke dalam larutan Betadine encer dalam cawan petri dan dilakukan pemisahan anther dari tangkai sari dan petal yang membungkusnya.
Setelah itu
anther dimasukkan ke dalam botol kultur yang telah berisi media. Linqkunqan Tumbuh Setelah botol-botol kultur berisi anther diberi perlakuan awal suhu rendah 12'~ selama 10 hari di dalam lemari es, botol-botol tersebut dipindahkan ke rak kultur dengan perlakuan gelap pada suhu 25O6. Penqamatan Peubah yang diamati pada kultur anther adalah: (1)
banyaknya anther yang terkontarninasi
(2)
banyaknya anther yang mengalami perubahan.
20
Pengamatan dilakukan setelah kultur berumur 8 bulan setelah tanam (8 B S T ) . Kul tur Pucuk Perlakukan dan Eksplan Perlakuan yang dicobakan terdiri dari 2 faktor, yaitu NAA dengan taraf 1 dan 3 N M dikombinasikan dengan BA 2, 4, dan 6 .uM, sehingga semuanya ada 6 macam media perlakuan. Media dasar yang digunakan adalah HS penuh.
Eksplan yang
digunakan adalah pucuk tunas samping pepaya yang berumur 4-5 tahun dan berjenis kelamin hermaprodit.
Sekitar 20
eksplan ditanam untuk masing-masing perlakuan Penanaman Pucuk tunas samping pepaya sepanjang
+
1.5 cm yang
telah dipetik dari pohon induknya dicuci bersih dengan deterjen dan dibilas dengan air kran mengalir.
Pucuk-pucuk
tersebut kemudian direndam dalam larutan Benlate dan Agrimycin dengan konsentrasi masing-masing 4 g/l selama 3 jam. Selanjutnya pucuk-pucuk tersebut siap memasuki tahap steri 1 isasi berikutnya dalam kotak tanam. Dalam kotak tanam pucuk yang akan digunakan sebagai eksplan direndam dalam larutan Clorox 20
%
selama 5 menit
lalu dibilas dengan air steril selama 2 menit, kemudian dimasukkan ke dalam larutan Clorox 10
%
selama 10 menit,
lalu dimasukkan lagi ke dalam larutan Clorox 5 X dan
21
d i b i a r k a n selama 20 menit kemudian d i b i l a s dengan a i r s t e r i l selama 2 m e n i t sebanyak 3 k a l i .
Pucuk-pucuk
t e r s e b u t s e l a n j u t n y a dipindahkan ke dalam
cawan p e t r i yang b e r i s i l a r u t a n B e t a d i n encer l a l u d i p o t o n g hingga d i p e r o l e h e k s p l a n s i a p tanam yang berukuran 2-3
mm.
Eksplan ditanam pada media MS-0 sebagai media se-
l e k s i sebelum masuk ke media perlakuan. Pemindahan Eksplan S e t e l a h 1 rninggu berada dalam media s e l e k s i , e k s p l a n yang h i d u p dan bebas d a r i kontaminasi dipindahkan ke media perlakuan.
Eksplan d i b i a r k a n tumbuh dan berkembang dalam
media t e r s e b u t selama 3 b u l a n . S e t e l a h 3 b u l a n dalam media perlakuan, eksplan d i s u b k u l t u r ke media yang sama dan d i b i a r k a n selama 2 b u l a n . Kemudian eksplan dipindahkan ke media MS-0 (MS tanpa z a t pengatur tumbuh).
S e t e l a h 1 b u l a n dalam media t e r s e b u t
eksplan d i s u b k u l t u r ke media yang sama s e p e r t i pada i n i s i a s i awal dan s u b k u l t u r
I l a l u d i b i a r k a n mengalami p e r -
tumbuhan dan perkembangan selama 2 bulan. Linqkunnan Tumbuh Botol-botol
k u l t u r pucuk pepaya d i l e t a k k a n pada r a k
k u l t u r dengan i n t e n s i t a s cahaya s e k i t a r 1500 l u x ,
lama
penyinaran 16 jam per h a r i , dan suhu Jingkungan 21°c.
22
Pengamatan Pengarnatan terhadap k u l t u r pucuk d i l a k u k a n s e t i a p rninggu.
Peubah yang diarnati r n e l i p u t i :
(1 )
t i n g g i tunas t e r t i n g g i
(2)
jumlah daun per k u l t u r
(3)
banyaknya eksplan b e r k a l u s
(4)
banyaknya eksplan yang rnernbentuk tunas rnajernuk
(5)
jumlah tunas p e r k u l t u r
HASIL DAN PEMBAHASAN
K u l t u r Anther Usaha mendapatkan k u l t u r aksenik dengan e k s p l a n ant h e r t i d a k menemui k e s u l i t a n .
Hal i n i disebabkan l e t a k
a n t h e r pada tanaman i t u s e n d i r i yang t e r l i n d u n g d a r i kemungkinan i n f e k s i o l e h mikroorganisme d i s e k i t a r n y a (kontaminasi e k s t e r n a l l .
Demikian juga kemungkinan kon-
t a m i n a s i i n t e r n a l t i d a k mencapai s e l - s e l
reproduktif.
Besarnya kontaminasi pada v a r i e t a s Bangkok dan Hawai masing-masing' adalah 6 . 6 % dan 21.3 % (Tabel 2 ) .
Konta-
m i n a s i yang t e r j a d i sebagian besar karena kontaminasi cendawan pada media yang mudah menyebar d i s e l u r u h permukaan media sehingga semua a n t h e r yang t e r d a p a t dalam bot o 1 k u l t u r tersebut terkontaminasi.
T i n g g i n y a kontamina-
s i pada v a r i e t a s Hawai disebabkan karena s e t i a p b o t o l k u l t u r b e r i s i l e b i h banyak a n t h e r dibandingkan pada var i e t a s Bangkok, sehingga pada s a a t t e r j a d i kontaminasi
Tabel 2 .
Banyaknya Anther yang D i k u l t u r k a n , Terkontaminasi, dan Aksenik hingga 8 Bulan S e t e l a h Tanam ( 8 BST)
Varietas
Anther yang dikulturkan
Anther yang t e r kontaminasi ( % )
350 800
(6.6) 23 170 (21.3)
Bangkok Hawai (%)
=
Anther aksenik ( % )
327 (93.4) 630 (78.71
persentase terhadap jumlah anther yang d i kulturkan
24
pada k u l t u r t e r s e b u t jurnlah anther vang terkontarninasi j u g a l e b i h banyak. Hingga s a a t 4 BST t i d a k ada satupun anther yang d i k u l t u r k a n rnengalami proses androgenesis langsung rnaupun m e l a l u i pembentukan k a l u s .
K u l t u r t i d a k mengalarni p e r u -
bahan k e c u a l i perubahan warna walaupun a n t h e r d i b i a r k a n pada media t e r s e b u t hingga 8 bulan. Warna a n t h e r berangsur-angsur menjadi pudar s e t e l a h
4 rninggu dalam b o t o l k u l t u r .
Anther berubah d a r i warna
k u n i n g menjadi k u n i n g rnuda, kuning pucat, dan a k h i r n y a rnenjadi c o k l a t .
Tabel 3 .
Jumlah Anther yang Berwarna Kuning. Kuning Pucat, dan Kecoklatan pada 8 BST
Varietas
Sukrosa Anther ( 9/11 akseni k
Bangkok
Jumlah anther berwarna c o k l a t pucat k u n i ng
30 45 60 75 90
Total
Hawai
30
45 60 75 90 Total
%
= persentase terhadap jumlah anther aksenik
25 D a r i pengamatan t e r h a d a p warna a n t h e r s e t e l a h 8 BST t e r n y a t a hanya 9 a n t h e r d a r i 327 a n t h e r pepaya Bangkok a k s e n i k a t a u s e k i t a r 2.8 % s a j a yang t e t a p berwarna kuning.
Sisanya sebanyak 17.7 % ( 5 8 / 3 2 7 ) berwarna k u n i n g
p u c a t dan 79.5 % (260/3271 mengalami kematian.
Pada va-
r i e t a s Hawai d a r i 630 a n t h e r a k s e n i k yang a d a . h i n g g a 8 BST,
586 a t a u 93 % d i a n t a r a n y a t e l a h berwarna c o k l a t ,
30 ( 4 . 8 % ) berwarna k u n i n g p u c a t , dan hanya 14 ( 2 . 2 % ) yang masih berwarna k u n i n g (Tabel 3 ) . Jumlah a n t h e r yang berwarna c o k l a t s a a t 8 BST pada v a r i e t a s Bangkok 13.5 % l e b i h rendah d i b a n d i n g k a n v a r i e t a s Hawai (Tabel 3 ) .
Hal i n i menunjukkan bahwa v a r i e t a s
Bangkok m e m i l i k i kemampuan b e r t a h a n yang l e b i h b a i k pada l i n g k u n g a n f i s i k dan media p e r l a k u a n yang d i c o b a k a n d i bandingkan v a r i e t a s Hawai. D a r i 327 a n t h e r pepaya Bangkok a k s e n i k hanya 2 yang mengalami pembengkakan pada media dengan t a r a f s u k r o s a 30 g / l .
Pada v a r i e t a s Hawai d i j u m p a i 2 a n t h e r yang meng-
a1 arni pembe&gkakan d a r i s e j u m l ah 630 a n t h e r a k s e n i k kesel u r u h a n , y a i t u pada a n t h e r yang d i t a n a m pada media dengan t a r a f sukrosa 30 dan 75 g / l
(Tabel 4 ) .
Semua a n t h e r yang membengkak berwarna c o k l a t dan mat i sebelum sempat berkembang l e b i h l a n j u t .
Hal i n i d i d u -
ga k a r e n a komposisi media dan l i n g k u n g a n f i s i k yang d i c o bakan belum cocok u n t u k j e n i s pepaya yang d i t e l i t i dan t i d a k mendukung perkembangan k u l t u r l e b i h l a n j u t .
Tabel 4.
Jumlah dan Persentase Anther yang Mengalami Pembengkakan pada Beberapa Taraf Sukrosa
Varietas
Sukrosa ( d l )
Bangkok
Anther akseni k
Anther yang membengkak ( % )
30 45
Total Hawai
30 45 60
75 90 Total
(%)
= persentase terhadap anther akseni k
Komposisi media dan k o n d i s i k u l t u r adalah f a k t o r f a k t o r yang mempengaruhi respon anther yang d i k u l t u r k a n s e l a i n t i n g k a t perkembangan mikrospora serbuk s a r i (Hu dan Zeng , 1 9 8 4 ) .
Gambar 2.
Anther yang rnernbengkak
27 S i f a t g e n e t i k Juga rnempengaruhi respon a n t h e r yang ditanarn t e r h a d a p p e r l a k u a n yang d i b e r i k a n .
Baja.1 ( 1 9 8 3 )
rnenyebutkan bahwa g e n o t i p dan k o n d i s i tanarnan surnber eksplan adalah f a k t o r - f a k t o r
p e n t i n g yang mern~engaruhi
k e b e r h a s i l a n i n d u k s i tanarnan h a p l o i d pada k u l t u r a n t h e r . Pada p e n e l i t i a n Tsay dan Su ( 1 9 8 5 ) a n t h e r d a r i 3 v a r i e t a s pepaya yang digunakan rnemberikan respon yang berbeda. V a r i e t a s S u n r i s e menunjukkan p e r s e n t a s e a n t h e r yang rnernbentuk k a l u s t e r t i n g g i ,
0.97 %.
i n n y a , y a i t u Tainung-CY
dan F l o r i d a ,
yang rnembentuk k a l u s hanya 0.77
Pada kedua v a r i e t a s l a persentase anther
% dan 0.33
%.
Pada pene-
l i t i a n k u l t u r a n t h e r j a g u n g (Genovesi dan C o l l i n s ,
1982)
dengan menggunakan 7 g e n o t i p d i j u m p a i p u l a perbedaan respon a n t a r g e n o t i p dalam ha1 p e r s e n t a s e a n t h e r yang membentuk ernbrio a t a u k a l u s . Baenziger, Schaffer,
Pada p e n e l i t i a n B u l l o c k ,
dan B u t t i n o (1982) dengan a n t h e r
gendum d i j u m p a i 1 v a r i e t a s yang t i d a k menunjukkan p r o s e s a n d r o g e n e s i s sama s e k a l i d i a n t a r a 11 g e n o t i p yang d i c o ba.
Kesepuluh v a r i e t a s l a i n n y a rnenunjukkan p e r s e n t a s e
a n t h e r yang mengalarni a n d r o g e n e s i s yang berbeda.
29 pucuk a k s e n i k yang d i p e r o l e h pada media s e l e k s i t i d a k s e l u r u h n y a b e r t a h a n h i n g g a a k h i r pengamatan.
12
rninggu s e t e l a h tanam ( M S T ) .
Inisiasi A
d
D a r i 125 pucuk yang d i t a n a m pada media p e r l a k u a n 64 % d i a n t a r a n y a mengalami k e m a t i a n dan t e r k o n t a m i n a s i o l e h b a k t e r i dan cendawan,
hanya 36 % yang merupakan
t u n a s a k s e n i k h i n g g a a k h i r i n i s i a s i awal
Tabel 6.
(Tabel 6 ) .
Banyaknya Pucuk Awal. T e r k o n t a m i n a s i , M a t i , dan A k s e n i k pada I n i s i a s i Awal
Pucuk
Jumlah
Awal
125
Terkontaminasi b a k t e r i
Persentase ( % )
100
28
22.4
6
4.8
Mat i
46
36.8
Akseni k a k h i r
45
36.0
T e r k o n t a m i n a s i cendawan
-
Pada i n i s i a s i awal tampaknya ada kecenderungan Fen ~ n g k a t a nt a r a f BA menyebabkan menurunnya j u m l a h k u l t u r yang h i d u p dan meningkatkan j u m l a h k u l t u r yang mengalami kematian.
Penurunan j u m l a h k u l t u r yang h i d u p dan p e n i n g -
k a t a n j u m l a h k u l t u r m a t i yang t a j a m tampak pada p e n i n g k a t a n k o n s e n t r a s i BA d a r i 2 /uM m e n j a d i 4 .uM
(Gambar 3 ) .
Garnbar 3 .
+----c
kultur hidup
&----a
kultur mati
Pengaruh B A t e r h a d a p Persentase Eksplan yang H i d u p dan M a t i pada I n i s i a s i Awal
Pada i n i s i a s i awa.1 j u g a t i d a k d i j u r n p a i adanya e k s p l a n yang rnernbentuk t u n a s rnajernuk. rnulai t e r l i h a t pada 1 MST.
Perturnbuhan k u l t u r
Secara urnum e k s p l a n rnenunjuk-
kan perturnbuhan yang c e p a t hi-ngga 6 MST.
Pada minggu-
rninggu b e r i k u t n y a e k s p l a n turnbuh larnbat (Garnbar 4 ) . E k s p l a n dengan p e r l a k u a n N l B 1 , N2B1, dan N2B2 rnenunjukkan kecepatan perturnbuhan s e c a r a urnurn yang l e b i h b a i k d i b a n d i n g k a n e k s p l a n dengan p e r l a k u a n NlB2, N183, dan N2B3. Perturnbuhan t e r b a i k tarnpak pada e k s p l a n yang rnendapat p e r l a k u a n kornb-iriasi NAA 1 hlM dan BA 2 .uM (NIB1 1.
Gambar 4 .
G r a f i k Pertumbuhan Eksplan pada I n i s i a s i Awal -NAA 1 aM (Nl) * BA 2 UM ( B 1 ) ---- NAA 3 a M ( N 2 ) A BA 4 a M ( 8 2 ) 0 BA 6 a M ( 8 3 )
T i n g g i tunas pada a k h i r i n i s i a s i awal,' y a i t u 1 2 mjnggu s e t e l a h tanam ( 1 2 M S T ) ,
hanya dipengaruhi o l e h t a -
r a f k o n s e n t r a s i B A , sedangkan k o n s e n t r a s i NAA dan kombin a s i NAA-BA
t i d a k n y a t a mempengaruhi t i n g g i t u n a s .
Peningkatan k o n s e n t r a s i BA d a r i 2 a M menjadi 6 .uM menyebabkan penurunan t i n g g i sangat n y a t a (Tabel Lampiran 3 , Tabel 7 ) .
Pemberian k o n s e n t r a s i yang t e r l a l u t i n g g i da-
p a t mengharnbat pemanjangan t u n a s dan menurunkan ukuran t u n a s yang tumbuh (Hu dan Wang, Wainwright,
1981 )
1983;
Flegmann dan
Tabel 7 .
Pengaruh BA terhadap T i n g g i Tunas pada I n i s i a s i Awal (12 MST)
BA (uM)
T i n g g i tunas (mm)
6.22 a
6
K e Cerangari : angka-angka yang d i i k u t i o l e h h u r u f yang sama t i d a k berbeda n y a t a pada t a r a f u j i Duncan 0 . 0 5
Jumlah daun pada semua t a r a f p e r l a k u a n t i d a k menunj u k k a n perbedaan yang n y a t a . ngamatan b e r k i s a r a n t a r a 2 . 0
Jumlah daun pada a k h i r pehingga 2.6
p e r k u l t u r (Ta-
Tabel 8 .
R a t a - r a t a Jumlah Daun p e r K u l t u r dan Jumlah Eksplan B e r k a l u s pada A k h i r I n i s i a s i Awal
NAA ( a M )
BA CUM)
Juml ah Juml ah ekspl an daun/ b e r k a l us/eksk u l t u r * ) p1an akseni k
33
Secara umum daun-daun
vang t e r b e n t u k m e m i l i k i t a n g -
k a i daun yang pendek dan gemuk s e r t a h e l a i daun yang t i dak sempurna (Gambar 5 ) .
Gambar 5 .
Tunas yang Membentuk Daun dengan Tangkai Daun yang Pendek.dan Gemuk s e r t a H e l a i Daun yang Tidak Sempurna
Kalus mulai t e r l i h a t pada 3 MST, t e r b e n t u k pada bagian yang mengalami pelukaan.
Kalus pada umumnya b e r -
warna p u t i h sampai krem muda hampir t i d a k berwarna dan mudah lepas.
Jumlah k u l t u r b e r k a l u s meningkat dengan
peningkatan NAA d a r i 1 .uM menjadi 3 .uM (Tabel 81.
Menu-
r u t P i e r i k (1987) pemberian a u k s i n dengan k o n s e n t r a s i yang t i n g g i menyebabkan meningkatnya pembentukan k a l u s .
34
Subkultur
I
Penggandaan tunas t i d a k t e r j a d i hingga a k h i r s u b k u l tur I.
Tunas hanya mengalami pertumbuhan.
Secara umum
t u n a s bertambah dalam t i n g g i dan jumlah daunnya. T i n g g i tunas pada s u b k u l t u r t a r a f BA.
I hanya dipengaruhi o l e h
Peningkatan k o n s e n t r a s i BA d a r i 2 .uM menjadi
4 .uM t e l a h menyebabkan penurunan t i n g g i secara n y a t a pada a k h i r s u b k u l t u r I (Tabel 9).
Tabel 9 .
Pengaruh BA terhadap T i n g g i Tunas pada A k h i r S u b k u l t u r I ( 8 MST)
BA (uM)
T i n g g i t u n a s (mm)
Jumlah daun p e r k u l t u r pada a k h i r s u b k u l t u r I t i d a k d i p e n g a r u h i secara n y a t a o l e h t a r a f NAA, b i n a s i keduanya. 2 . 3 h i n g g a 3.0
BA, maupun kom-
Jumlah daun p e r k u l t u r b e r k i s a r a n t a r a
pada kombinasi NAA-BA yang dicobakan (Ta-
be1 10). Hingga a k h i r s u b k u l t u r I hanya 1 eksplan yang membentuk k a l u s , y a i t u tunas yang ditanam pada media dengan kombi n a s i NAA 3 u M dan BA 2 .uM (Tabel 10).
Pada p e r l a -
kuan l a i n n y a t i d a k d i j u m p a i e k s p l a n yang membentuk k a l u s .
Tabel 10.
NAA (.uM)
R a t a - r a t a Jumlah Daun per K u l t u r dan Banyaknya Eksplan Berkalus pada A k h i r Subkultur I
BA
Jumlah daun/
(at-?) k u l t u r * I
Jumlah eksplan berkal u s / e k s p l a n aksenik
Kalus yang Cerbentuk adalah k a l u s f r i a b e l ,
berwarna
t r a n s p a r a n krem muda hampir t i d a k berwarna, dan merupakan respon a k i b a t perlukaan.
Subkultur I1 Penggandaan tunas baru t e r j a d i s e t e l a h e k s p l a n mengalami s u b k u l t u r I1 a t a u s e k i t a r 8 b u i a n s e j a k pucuk ditanam pada media i n i s i a s i awal.
Hal i n i diduga karena
j e n i s pepaya Bangkok membutuhkan waktu yang r e l a t i f lama untuk membentuk tunas majemuk. Rata-rata jumlah tunas p e r k u l t u r t i d a k d i p e n g a r u h i secara nyata o l e h , t a r a f B A , nya.
Kombinasi NAA 1 U M
NAA,
maupun kombinasi kedua-
dan BA 2 ~ J M( N I B $ ) menghasilkan
r a t a - r a t a jumlah tunas per k u l t u r 2.8
tunas.
Perlakuan
l a i n n y a , NlB2, N2B1, dan N2B2 masing-masing menghasilkan 2.3,
2.0,
dan 2.0
tunas p e r k u l t u r (Gambar 6 ) .
Tabel 1 1 .
Banyaknya K u l t u r yang Tidak dan Membentuk Tunas Majernuk s e r t a K i s a r a n Jumlah Tunas yang D i h a s i l k a n p e r K u l t u r pada A k h i r S u b k u l t u r I1 ( 8 MST) -
NAA BA Kultur (uM) (uM) aksenik
(
)
=
Kultur K u l t u r dengan Jurnlah dengan tunas rnajernuk tunas/ 1 t u n a s normal vitrous kultur
persentase terhadap tunas aksenik s e t i a p p e r 1akuan
Jumlah dan persentase k u l t u r yang menghasilkan t u n a s majemuk normal t e r t i n g g i d i jurnpai pada p e r l a k u a n kornbi nas i NAA 1 u M dan BA 2 .uM.
Salah s a t u k u l t u r pada p e r l a k u -
an i n i menghasi l k a n 5 tunas b a r u . Sernua k u l t u r pada kornbinasi NAA 1 u M - dan BA 4 .uM rnenghasilkan tunas majemuk, t e t a p i hanya 6 7 % yang merupakan t u n a s normal, sedangkan sisanya (33 % ) adalah t u n a s
vitrous. Jumlah tunas p e r k u l t u r t e r t i n g g i yang d i p e r o l e h pada p e n e l i t i a n i n i , y a i t u sebanyak 5 ,
l e b i h rendah diban-
dingkan h a s i l yang d i c a p a i o l e h L i t z dan Conover (1978) dengan r a t a - r a t a jumlah tunas p e r k u l t u r sebanyak 7 . Waktu yang dibutuhkan sarnpai t e r b e n t u k n y a t u n a s rnajernuk, y a i t u 8 b u l a n s e j a k i n i s i a s i awal,
j u g a l e b i h lama b i l a
d i b a n d i n g k a n pernbentukan t u n a s majemuk pada p e n e l i t i a n L i t z dan Conover ( 1 9 7 8 ) yang hanya membutuhkan 3 b u l a n s e j a k i n i s i a s i awal.
Perbedaan t e r s e b u t d i d u g a t e r u t a m a
disebabkan o l e h perbedaan g e n o t i p v a r i e t a s yang d i g u n a kan
. T i n g g i t u n a s t e r t i n g g i dan j u m l a h daun p e r k u l t u r
pada a k h i r s u b k u l t u r I 1 t i d a k d i p e n g a r u h i s e c a r a n y a t a o l e h t a r a f NAA. BA, rnauDun kornbinasi keduanya.
Namun
d a r i t a b e l 12 tampak bahwa kombinasi NAA I .uM dan BA 2 .uM menunjukkan t i n g g i t u n a s t e r t i n g g i
(17.0
mm) yang l e b i h
b a i k d i b a n d i n g k a n p e r l a k u a n l a i n n y a (11.0-15.00
mrn).
Tabel 12.
T i n g g i Tunas T e r t i n g g i , R a t a - r a t a Juml a h D a u n / K u l t u r . dan Banyaknya E k s p l a n B e r k a l u s pada A k h i r S u b k u l t u r I 1
NAA BA (.uM) (.uM)
Tinggi tunas*) t e r t i n g g i (rnm)
Jumlah daun/*) kultur
Jumlah e k s p l a n berkalus/eksp l a n aksenik
P e r l a k u a n kombinasi NAA I u M dan BA 2 a M m e n g h a s i l k a n j u m l a h daun p e r k u l t u r sebanyak 3.5,
sedangkan p e r l a -
kuan NAA 1 .uM dengan t a r a f BA 4 uMN menghasilkan 4.0
daun
39
p e r k u l t u r yang merupakan j u m l a h t e r t i n g g i d i a n t a r a p e r lakuan l a i n n y a .
Pada kombinasi NAA 3 UM dengan t a r a f BA
2 a M dan 4 UM masing-masing kultur 3.3
dan 2.6
Gambar 7 .
d i h a s i l k a n jumlah daun p e r
(Tabel 1 2 ) .
Eksplan yang Menghasilkan Tunas Majemuk ( a ) dan Membentuk Kalus ( b )
Kalus t e r b e n t u k pada sernua p e r l a k u a n yang ada pada s u b k u l t u r 11.
Sebagian besar k a l u s a d a l a h f r i a b e l dan
t i d a k mampu beregenerasi membentuk tunas-tunas
baru
(Gambar 7 ) . Pada semua kombinasi p e r l a k u a n yang dicobakan t i d a k d i j u m p a i k u l t u r yang membentuk akar.
H a l i n i s e s u a i de-
ngan h a s i l p e n e l i t i a n L i t z dan Conover ( 1 9 7 8 ) ,
yang me-
nunjukkan p e r l u n y a pemindahan eksplan k e media yang hanya mengandung a u k s i n u n t u k pembentukan a k a r .
40
Usaha rnengakarkan t u n a s pada media MS yang ditambah 2 . 5 u M NAA s e p e r t i yang d i l a k u k a n L i t z dan Conover ( 1 9 7 8 )
t e l a h d i lakukan terhadap beberapa k u l t u r selama 2 b u l a n narnun t e t a p t i d a k t e r j a d i pembentukan a k a r .
Menurut Hu
dan Wang ( 1 9 8 3 ) kegagalan pembentukan akar biasanya t e r jadi
pada eksplan yang b e r a s a l d a r i tanaman dewasa.
Pembentukan akar j u g a dapat terhambat karena kandungan s i t o k i n i n yang t i n g g i dalam eksplan.
KESIMPULAN DAN SARAN
Kesi rnpu 1an Anther pepaya Bangkok dan Hawai belum b e r h a s i l d i tumbuhkan pada media dasar Tsay dan Su ( 1 9 8 5 ) .
Pengaruh
sukrosa t e r h a d a p proses androgenesis langsung belurn dapat diarnati. K u l t u r pucuk pepaya Bangkok rnembutuhkan waktu r e l a -
t i f lama,
y a i t u sarnpai s u b k u l t u r I 1 ( 8 bulan s e j a k d i t a -
narn pada media i n i s i a s i awal) untuk menghasilkan penggandaan t u n a s . Jumlah t u n a s p e r k u l t u r t e r t i n g g i d i h a s i l k a n pada kombinasi NAA 1 a M dan BA 2 N M .
Saran P e n e l i t i a n k u l t u r a n t h e r pepaya p e r l u d i l a k u k a n pada varietas-varietas
l a i n untuk mencari g e n o t i p yang mampu
menghasilkan tanaman h a p l o i d . dap proses androgenesis,
Pengaruh asam amino t e r h a -
penggunaan media c a i r ,
arang
a k t i f , dan i n t e n s i t a s cahaya rendah disarankan untuk d i t e l i t i lebih lanjut. P e n e l i t i a n k u l t u r pucuk pepaya Bangkok b e r i k u t n y a disarankan menggunakan t a r a f NAA dan BA yang l e b i h rendah dengan s e l a n g k o n s e n t r a s i yang l e b i h sempit a t a u menggunakan j e n i s a u k s i n dan s i t o k i n i n yang l a i n .
DAFTAR PUSTAKA
B a j a j , Y . P. S. 1983. I n v i t r o production o f haploid, p . 228-287. I n P . V . Arnrnirato, D. A . Evans, W . R . Sharp, Y . ~ a m a d a( e d s . ) Handbook o f p l a n t c e l l culture. I. Techniques f o r p r o p a g a t i o n and breeding. M a c m i l l a n P u b l i s h i n g Co., New Y o r k . B u l l o c k , W . P., P. S. B a e n z i g e r , G. W . S c h a e f f e r , and P. J . B o t t i n o . 1982. A n t h e r c u l t u r e o f wheat ( T r i t i c u m a e s t i v u m L . ) F l ' s and t h e i r r e c i p r o c a l crossses. Theor. A p p l . Genet. 62:155-159. Chen,
M. H., P. J . Wang, and Maeda. 1987. Somatic embryogenesis and p l a n t r e g e n e r a t i o n i n C a r i c a papaya L. t i s s u e c u l t u r e d e r i v e d from r o o t explants. P l a n t c e l 1. R e p o r t 6:348-351.
C o l l i n s , G. B. 1977. P r o d u c t i o n and u t i l i z a t i o n o f anther-derived haploids i n crop plants. Crop S c i 17:583-586. Flegmann. A. W . and H. W a i n w r i g h t . 1981. Shoot d o u b l i n g time: a q u a n t i t a t i v e parameter f o r c h a r a c t e r i t i z i n g shoot c u l t u r e i n v i t r o . P l a n t C e l l T i s s u e Organ C u l t u r e 1 :85-92. Genovesi, A . D. and G. B. C o l l i n s . 1982. I n v i t r o prod u c t i o n o f h a p l o i d p l a n t s o f c o r n v i a a n t h e r CUTture. Crop S c i . 22:1137-1144. George, E. F. and P. D. S h e r r i n g t o n . 1984. P l a n t prop a g a t i o n by t i s s u e c u l t u r e . Exegetics Limited, London. 709 p. Gunawan, L . W. 1987. Teknik k u l t u r j a r i n g a n . Laboratorium K u l t u r Jaringan, Pusat Antar U n i v e r s i t a s , B i o t e k n o l o g i , I n s t i t u t P e r t a n i a n Bogor, Bogor. 251 p . Hartmann, H. T., W. J. F l o c k e r , and A. M. K o f r a n e k . 1981. P l a n t Science. Growth, development, and u t i l i z a t i o n o f c u l t i v a t e d plants. P r e n t i c e - H a l l , I n c . , Englewood C l i f f s , New J e r s e y . 676 p . Hu, C. Y. and P. J. Wang. 1983. Meristem, shoot t i p , and bud c u l t u r e , p . 177-227. P. V . Ammirato, D. A. Evans, W . R . Sharp, and Y. Yamada ( e d s . ) Handbook o f p l a n t c e l l c u l t u r e . I. M a c m i l l a n P u b l i s h i n g Co., New York.
Hu, H . and J. 2 . Zeng. 1984. Development o f new v a r i e t i e s v i a a n t h e r c u l t u r e , p . 65-90. P. V . . Ammirato, D. A . Evans, W . R . Sharp, and Y . Yamada (eds.) Handbook o f p l a n t c e l l c u l t u r e . 11. Macm i l l a n P u b l i s h i n g Co., New Y o r k . Kevers, C . , M. Coumans, M. F. Coumans-Gilles, and Th. Gaspar. 1984. P h y s i o l o g i c a l and b i o c h e m i c a l e v e n t s leading t o v i t r i f i c a t i o n o f plants cultured in v i t r o . P h y s i o l . P l a n t . 61:69-74. L i t z , R. E. 1984. Papaya, p . 349-368. I n P. V . Ammirato, D. A . Evans, W . R . Sharp, Y . Yamada e d s . ) Handbook o f plant c e l l culture. 11. Crop s p e c i e s . Macm i l l a n P u b l i s h i n g Co., New Y o r k .
. 1986. Papaya ( C a r i c a papaya L . ) , p . 220232. I n Y . P. S. B a j a j ( e d . ) Biotechnology i n a g r i c u l t u r e and f o r e s t r y . I. Trees. SpringerVerlag, B e r l i n . and R . A . Conover. 1978a. I n v i t r o propaH o r t S c i . 13(3):241-242. g a t i o n o f papaya.
.
1981. E f f e c t o f sex t y p e , season, and o t h e r f a c t o r s o n i n v i t r o e s t a b l i s h m e n t and c u l t u r e o f C a r i c a papaya L . e x p l a n t s . J . Amer. Soc. H o r t . S c i . 106(6):792-794. Mauro, M. C l . , N e f , and J. F a l l o t . 1986. Stimulation o f s o m a t i c embryogenesis and p l a n t r e g e n e r a t i o n f r o m a n t h e r c u l t u r e o f V i t i s v i n i f e r a cv.. CarbenetSauvignon. P l a n t C e l l R e p o r t 5:377-380. Mehdi, A. A. and L. Hogan. 1976. Tissue c u l t u r e o f H o r t S c i . 11(3):311 ( a b s t r a c t ) . C a r i c a papaya L. Murashige, T . culture.
1974. P l a n t propagation through t i s s u e Ann. Rev. P l a n t . P h y s i o l 25:135-166.
N i t s c h , C. 1981. Production o f isogenic l i n e s : Basic In t e c h n i c a l a s p e c t s o f a n d r o g e n e s i s , p . 241-252. T . A. Thorpe ( e d . ) P l a n t t i s s u e c u l t u r e methods and application i n agriculture. Academic P r e s s , I n c . , New York. and M. Godard. 1979. The r o l e o f hormones i n p r o m o t i n g and d e v e l o p i n g t o s e l e c t new v a r i e t i e s i n s t e r i l e c u l t u r e , p. 49-62. T. K . S c o t t ( e d . ) P l a n t r e g u l a t i o n and w o r l d a g r i c u l t u r e . Plenum P r e s s , New York.
P i e r i k , R . L. M . 1987. I n v i t r o c u l t u r e o f higher M a r t i n u s N i j h o f f P u b l i s h e r , Dordrecht. plants. 344 p . Samson, J . A . New York. Sink.
1980. Tropical f r u i t s . 250 p .
Longman,
Inc.,
K . C . and V . Padmanabhan. 1977. Anther and p o l l e n c u l t u r e t o produce h a p l o i d s : P r o g r e s s and a p p l i c a t i o n f o r t h e p l a n t breeder. HortSci. 12 ( 2 ) : 143-148.
S o e d i r d j o a t m o d j o , M. D. S . 1985. Bertanam pepaya. Badan P e n e r b i t Karya B a n i ? J a k a r t a . 70 p. Tsay.
H . S . and C. Y . Su. 1985. Anther c u l t u r e o f papaya ( C a r i c a papaya L . 1. P l a n t C e l l Report 4: 28-30.
LAMPIRAN
Tabel Lampiran 1 .
Stok
Bahan
Myo-inositol
Konsentrasi Pemakai an larutan m l stok/ mg/ 1 (!j/1) 1 media
10.000
Thiamin
0.010
Pyridoxin
0.050
Niacin
0.050
Glycin
0.200
Gula *)
*r
Komposisi Media M r a s h i g e dan Skoog 11962)
30 000
Murashige, T . and F. Skoog. 1962. A r e v i s e d medium f o r r a p i d g r o w t h and b i o a s s a y s w i t h t o b a c c o tissue. P h y s i o l . P l a n t . 15:473-497.
Tabel Larnpiran 2.
Stok
Bahan
A
NH4N03
B
KN03
C
KH2P04
K o m p o s i s i M e d i a T s a y dan S u (1985)*)
Konsentrasi P e r n a k a i an larutan rnl s t o k / mg/l (dl1 1 media
H3B03 KI Na2Mo04 CoCl2.6H20 0
CaCl2.2H20
E
MgS04.7H20 MnS04. H 2 0 ZnSO4.7H20 CuS04.5H20
F
Na2EDTA.2H20 FeS04.7H20 Myo-inositol T h i arni n Pyridoxin Niacin
Gly c in NAA
BA *)
Tsay,
H. S . and C. Y . S u . 1985. p a p a y a ( C a r i c a papaya L . ) . 4:28-30
Anther culture of Plant Cell Report
Tabel Lanipiran 3 .
Sumber lteraaaman NAA
NAA x BA Sisa
db
F-hitung
P-hitung
2.550
0.189
0.666
50.842
25.421
1.887
0.165
525.262
13.468
JK
KT
1
2.550
2 39
Tabel Lampiran 4 .
Sumber keragaman
S i d i k Ragam T i n g g i Tunas pada A k h i r I n i s i a s i Awal ( 1 2 MST)
db
S i d i k Ragam T i n g g i Tunas ~ a d a A k h i r S u b k u l t u r I ( 8 MST)
JK
KT
F-hitung
P-hi t u n g
NAA
1
0.272
0.272
0.025
0.877
BA
1
70.939
70.939
6.599
0.030
NAA x BA
1
1.250
1.250
0.116
0.741
S isa
9
96.750
10.750
