Szőlőmag extraktum hatása makrofág immunsejtek által indukált gyulladásos folyamatokra
Radnai Balázs, Antus Csenge, Sümegi Balázs Pécsi Tudományegytem Általános Orvostudományi Kar Biokémiai és Orvosi Kémiai Intézet
Metabolit-profil adatbázis (minta) mg/l
Ga
Ty
Cfa
Ct
Rut
Pcy
Ca
Qu
pCm
Fa
tR
Cabernet F
45.3
46.5
42.1
62.1
9.5
83.2
14.6
3.7
9.2
2.5
0.8
Cabernet S
57.8
89.1
53.5
81.8
13.1
43.7
23.1
5.6
6.6
3.4
2.8
Cabernet S/F
70.9
54.9
54.8
69.0
17.2
51.8
20.0
2.4
9.2
0.9
1.2
Cuveé
60.3
72.3
53.3
73.8
20.2
25.4
27.1
3.5
10.5
1.3
1.9
Kadarka
57.9
56.0
62.8
77.0
12.1
3.0
5.9
8.7
0.0
3.3
0.9
Kékfrankos
46.0
82.9
87.0
71.5
13.6
44.2
37.0
11.3
9.5
0.0
2.8
Merlot
65.9
81.2
51.6
89.1
16.9
47.5
18.5
11.2
10.2
3.0
3.9
Oportó
29.7
63.5
52.4
98.6
19.4
56.7
37.4
9.8
3.7
8.1
1.2
Pinot noir
45.2
116
55.5
103
9.7
33.9
28.9
7.5
8.9
8.3
3.2
Portugieser
43.0
67.2
50.2
77.2
14.7
51.7
25.7
5.8
0.4
7.1
1.4
Royal Cuvee
79.2
82.9
54.6
75.9
13.6
67.5
23.3
5.8
5.8
0.0
1.9
Rubin Cuvee
53.5
89.3
66.1
79.8
13.3
61.0
30.8
12.2
4.3
11.5
3.1
Shiraz
50.0
84.3
40.4
68.2
15.5
65.6
24.4
13.4
8.3
0.0
1.1
Zweigelt
58.3
86.7
77.5
73.4
6.8
60.2
30.6
6.0
8.0
7.9
2.7
Total (n=67)
56.1
77.6
57.3
79.4
14.2
50.1
24.6
7.4
7.5
3.8
2.3
Ga: Gallic acid; Ty: Tyrosol; Cfa: Caftaric acid; Ct: Catechin; Rut: Rutin; Pcy: Procyanidin B2; Ca: Caffeic acid; Qu: Quercetin; pCm: p-Coumaric acid; Fa: Ferulic acid; tR: trans-Resveratrol
Szívinfarktus model 300-350 g hím CFY Sprague-Dawley patkányok
2 x 80 mg/kg izoproterenol (ISO) s.c. 24 h szünettel 2002 Polgár Merlot vákum desztillált (alkohol < 1%), CaCO3 -abszorbeált (1 g/l), 5 x higítva vízzel (AFRW) p.o. ad libitim 8 hétig Testtömeg mérés Kamratömeg mérés Szív fixálása, festése pikroszíriusz vörössel, átlagos (100 sejt) cardiomyocita átmérő megállapítása
Immunhisztokémiai jelölés III-as típusú kollagén ellen Szív homogenizálása, immunoblotting foszfo-Akt Ser473 és foszfo-PKCα/β IIThr638/641 ellen
AFRW hatása a gravimetrikus paraméterekre 1,6 1,4
heart weight (g)
1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 control
Ventricles/body weight (mg/g)
3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 Control
ISO
ISO+AFRW
ISO
ISO+AFRW
AFRW hatása a cardiomyocita méretre
Control
ISO Diameters of myocyte (µm)
25
***
†
ISO
ISO+AFRW
20 15 10 5 0
ISO + AFRW
Control
AFRW hatása a kollagén lerakódásra
Control
ISO ***
deposition of collagen type III
43 38 33 28
18 13 8 3 -2
ISO + AFRW
†
23
Control
ISO
ISO+AFRW
Quercetin szerepe a rák megelőzésében és a rákterápiában
Quercetin hatása humán U-251 glioblastoma sejtek 48 órás túlélésére
Viability (%)
120
***
100
***
80
*** ***
60
***
40
20 0 Control
1
10
25
50
100 μM
Quercetin hatása a kolónia formálásra Control
1 μM
10 μM
25 μM
50 μM
100 μM
Quercetin és sugárterápia együttes hatása
a kolónia formálásra Control
4Gy
Qct
Qct + 4Gy
Qct+4Gy+TMZ
Cell number
400 300 200 100 0
*** *** ***
***
A gyulladás Makrofágok és monociták találkoznak a szervezetbe bejutó baktériumokkal és kölcsönhatásba lépnek a baktériumok felszínén lévő lipopoliszahariddal (LPS), amely a sejtfelszíni receptor aktiválásával gyulladásos válaszreakciót indít el Ezen válaszreakciók következtében megnő a makrofágok és monociták termelte: - Reaktív oxigén speciesz (ROS) - NO-szintáz szint (nitrogén-monoxid termelés) - Citokinek és egyéb gyulladást előidéző anyagok szintézise
Célkitűzés, anyagok és eszközök Célkitűzés: Munkánkban egy Villányból származó szőlőmag őrlemény gyulladásgátló (antiinflammatórikus) hatását vizsgáltuk LPS indukálta RAW264,7 makrofág sejteken. Kísérleteinkben az aktivált immunsejtek legfontosabb gyulladásos mediátorait RNS, ROS és TNFα mértük.
Kísérleti csoportok: CTRL: kontroll, kezeletlen sejtek ALK: alkohol, etanol kezelt sejtek LPS: lipopoliszacchariddal kezelt sejtek (100ng/ml) LPS+SZŐ: LPS-sel és szőlőmag őrleménnyel kezelt sejtek. Anyagok: A szőlőmag őrleményt 0,5 g-ot, 1ml tömény etanolban rázattuk szobahőmérsékleten 24 órán át. Az így nyert alkoholos extraktumot 10, 5, 1 μl / 1 ml médium koncentrációban alkalmaztuk. A lipopoliszacharid molekulát (Escherichia coli 0127:B8) a Sigma-Aldrich-től rendeltük. A RAW264,7 sejteket az ATTC-től vettük.
Szőlőmag őrlemény hatása az LPS indukálta RNS termelődésre Nitrit termelődés
0,4 0,35
-
+
-
+
0,3
OD550
Alk
0,25 0,2 0,15 0,1
CTRL
LPS
0,05 0 CTRL CTRL
LPS LPS
LPS+ SZŐ(10) LPS+SZŐ(10)
LPS+ SZŐ(5)
LPS+SZŐ(5)
LPS+SZŐ(1)
LPS+ SZŐ(1)
Szőlőmag őrlemény hatása az LPS indukálta ROS termelődésre 2400
fluorescent intensity (au)
2200 2000 1800 1600 1400 1200 1000 CTRL CTRL
LPS LPS
LPS+ LPS+SZŐ(10)
LPS+SZŐ(5) LPS+
LPS+SZŐ(1) LPS+
SZŐ(10)
SZŐ(5)
SZŐ(1)
Szőlőmag őrlemény hatása az LPS indukálta TNFα termelődésre 3 2,5
OD550
2 1,5 1 0,5 0 CTRL CTRL
LPS LPS
LPS+SZŐ(10)
LPS+ SZŐ(10)
LPS+SZŐ(5)
LPS+ SZŐ(5)
LPS+SZŐ(1)
LPS+ SZŐ(1)
Konklúzió Összefoglalva eredményeinket kijelenthetjük, hogy a szőlőmag őrlemény, valószínűleg magas polifenol és más növényi antioxidáns tartalma miatt, hatékonyan csökkentette az aktivált makrofágokban beinduló gyulladásos folyamatokat.
Pécs, 2012.05.22.
