Szinoviális szarkómák patogenezisében szerepet játszó szignálutak jellemzése szöveti multiblokk technika alkalmazásával

Szinoviális szarkómák patogenezisében szerepet játszó szignálutak jellemzése szöveti multiblokk technika alkalmazásával

Fónyad László1, Moskovszky Linda1, Szemlaky Zsuzsanna1, Szendrői Miklós2, Sápi Zoltán1 1Semmelweis 2Semmelweis

Egyetem, 1sz. Patológiai és Kísérleti Rákkutató Intézet, Budapest Egyetem, Ortopédiai Klinika, Budapest

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban

Háttér

•A szinoviális

Célkitűzés

•Szignálutak jellemzése

szarkómákról általában

Anyag, Módszer

Eredmények, Következtetések

•TMA – szöveti

•Nagyobb vizsgálat

multiblokk technika

részeredményei ezek

•Mit tudunk a

•Van e kiemelt fontosságú

•50 eset

•receptor tirozin kinázok

betegségről

szignálút, ami felelős lehet

•IHC

•RAS-AKT-mTOR szignálút

•Tisztázatlan kérdések

a tumor kialakulás és

•FISH

•p4EBP1 és a PTEN

növekedés tekintetében

kivételével, nem találtunk

•Van e eltérés a jellemző

különbséget a transzlokált

transzlokációt t(x;18)

és a transzlokációt nem

hordozó, illetve nem

hordozó tumorok esetében

hordozó esetek szignálút aktivitási profilja között?

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Háttér

Szinoviális szarkóma

•10% a rosszindulatú lágyrész tumoroknak •végtagokon (ízületek közelében) •fiatal felnőttek •Ismeretlen hisztogenezis (tumors of uncertain differentiation)

•Formái: •Bifázisos •Monofázisos •Fibrózus •Epitheliális •Rosszul differenciált (kereksejtes)

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Háttér

Vimentin

Immunhisztokémia jellemzők

~100%

EMA and Keratin-pan ~97%

Vimentin Keratin-pan

at least focal TLE1

~100%

SYT-protein

~90%?

S100

~35%

BCL2

~100%

CD99

~70%

β-katenin

~95%?

CD34

~0%

EMA TLE1 CD34

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Háttér

Genetikai jellemzők

•t(X;18)(p11.2;q11.2)

RT-PCR

•SYT – krsz.18. •SSX1,SSX2, SSX4 – krsz.X. •SYT-SSX kiméra gén és fehérje

ABL SYT-SSX1

•Onkogén hatás

ABL SYT-SSX2

18q11.2 break apart FISH

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Célkitűzés

Tanulmányunk célja, annak felderítése, hogy a

•SS kialakulása és •növekedése során •milyen szignálutak játszanak szerepet, •közöttük meghatározhatóak e olyanok, melyek kiemelt fontossággal bírnak, illetve annak vizsgálata, hogy a •transzlokációt hordozó és nem hordozó tumorokban van e eltérés a fenti szignálutak aktivitásában.

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Anyag, Módszer

•50 eset (8 bifázisos, 35 monofázisos, 7 rosszul differenciált) •Minták formalin fixáltak, paraffinba ágyazottak •TMA-blokkokat terveztünk (TMA-Master - 3DH) •A mintákon IHC és FISH - t(X;18) break apart próbát végeztünk. (Vysis, Abbott)

Szöveti multiblokk technika

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Anyag, Módszer

felhasznált antitestek

EGFR (mb)- Ventana -1:200

pMAPK (pl)- CellSignTech -1:100

FGFR (pl)- LabVision -1:200

Wnt-1 (pl, nu)- LabVision -1:50

IGFR (mb)- Chemicon -1:400

APC (pl)- LabVision -1:300

VEGFR (pl)- LabVision -1:300

b-Cat (nu)- LabVision -1:100

PDGFR-A (mb)- Neomarkers -1:200

NF-kB (pl, nu)- LabVision -1:600

RAS (nu)- LabVision -1:2000

MDM2 (pl, nu))- LabVision -1:100

PTEN (nu)- LabVision -1:100

CyclinA (nu)- LabVision -1:150

pAKT(pl)- CellSignTech -1:100

CyclinD1 (nu)- LabVision -1:200

p4EBP1 (pl)-CellSignTech-1:100

P21 (nu)- LabVision -1:100

pp70S6 (nu)-Dako-1:100

P27 (nu, pl)- LabVision -1:200

pS6 (pl)-CellSignTech-1:100

CDK2 (nu, pl)- LabVision -1:150

pRAF (pl)- CellSignTech -1:200

P16 (nu, pl)- LabVision -1:200

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Anyag, Módszer

•A metszeteket (IHC, FISH) digitalizáltuk: MiraxScan (3DH) •Kiértékelés: MiraxViewer (3DH) •Séma: •IHC •negatív:-3%, •#:4-10% •##:11-40% •###: 41%•Csak a jelzett sejtalkotók pozitivitását vettük figyelembe (előző ábra) •FISH •Break apart – szignál szétválás

minták kiértékelése

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Eredmények, Következtetések

összesítő táblázat

TABLE 1. Immunhistochemical profile of 50 synovial sarcoma cases

Positive cases (%)

Strong positive cases (%)

Positivity in the t(X;18) negative cases (n=11/50) (%)

Positivity in the t(X;18) positive cases (n=39/50) (%)

Receptor Tyrosine Kinases

ERFR

86

50

73

90

FGFR

66

6

45

IGFR

30

2

27

31

VEGFR

100

38

100

100

PDGFR-A

100

62

100

100

RAS (H-, K-, N)

100

62

100

100

PTEN

88

48

64

pAKT

64

0

45

p4EBP1

52

4

90

pP70S6K

100

76

100

pS6

58

0

80

WNT

100

49

100

100

APC

72

0

73

72

b-CAT

74

17

55

RAS-AKT-mTORpathway

WNT-pathway

<<

<<<

69

95 69

>>>

42 100

>>

<<

53

81

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Eredmények, Következtetések

•tirozin kinázok kifejezett aktivitása (EGFR, VEGFR, PDGFR) •a RAS-AKT-mTOR szignálút további aktiválását okozza

RAS-AKT-mTOR

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban Eredmények, Következtetések

•SS-ák kialakulásában számos szignálút játszik szerepet •Ezek közül az egyik legaktívabb a RAS-AKT-mTOR út •A transzlokáció pozitív és negatív esetek között tapasztalt nagyfokú hasonlóság alapján feltételezzük, hogy a fúziós gén és terméke, a fúziós fehérje csak a tumorkialakulás kezdeti folyamataiban játszik szerepet, a későbbi progresszió során kisebb jelentőséggel bír.

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban hogyan tovább? •Fúziós gén blokkolása mikroRNS technikával •Proliferációs vizsgálat vonalakon •Egérbe oltás

Szignálutak jellemzése szinoviális szarkómákban tervezett vizsgálatok sejtvonalakon SYT

MiRNS

SSX

Köszönöm a figyelmet!

Szinoviális szarkómák patogenezisében szerepet játszó szignálutak jellemzése szöveti multiblokk technika alkalmazásával

Fónyad László [email protected]

1Semmelweis

Egyetem, 1sz. Patológiai és Kísérleti Rákkutató Intézet,

Budapest 2Semmelweis

Egyetem, Ortopédiai Klinika, Budapest