Staphylococcus haemolyticus törzsek antibiotikum rezisztenciájának klonális megoszlása pulzáló gélelektroforézis alapján Kardos Szilvia, Volter Imréné, Pesti Józsefné, Ghidán Ágoston, Kristóf Katalin, Rozgonyi Ferenc, Nagy Károly Semmelweis Egyetem, Orvosi Mikrobiológiai Intézet Magyar Orvosi Laboratóriumi Szakdolgozók Egyesülete (MOLSZE) X. (jubileumi) Nagygyőlése Budapest, 2007. augusztus 30 – szeptember 01.
Bevezetés Staphylococcus haemolyticus Fiziológiás körülmények között
Intenzív centrumok
Az emberi bır normál
Antibiotikum
baktérium flórájának tagjai
rezisztencia magas Gyakran polirezisztens
Az ép bırön és
A kolonizációt és fertızést
nyálkahártyákon fertızést
okozó baktériumok eredete
nem okoz
nem egyértelmően tisztázott
?
Anyagok és módszerek A törzsek azonosítása:
kataláz, koaguláz, telepmorfológia
API ID 32 Staph (BioMérieux)
Az antibakteriális érzékenységi vizsgálatok
korongdiffúziós és mikrodilúciós módszerrel (NCCLS/CLSI)
Fenotípusos oxacillin rezisztencia verifikálása
mecA gén kimutatásával PCR módszerrel
A sejtek adhéziójáért (biofilm-képzés) felelıs gének jelenlétének kimutatása
icaA, icaB. icaC, icaD ,icaR , fbnA, fbnB
A törzsek epidemiológiai vizsgálata
rezisztencia fenotípus meghatározásával
genotipizálással pulzáló gélelektroforézis PFGE (SmaI)
2001-2005 között a Semmelweis Egyetem intenzív centrumaiban ápolt szeptikus állapotú betegekbıl kitenyészett Staphylococcus haemolyticus törzsek gyakorisága 70
gyakoriság (%)
60 50 40
átlagosan évente ~7 %
30 20 10
6.8
7.6
2002
2003
9.2
6.4
3.7
0 2001
S.haemolyticus
összes Gram-pozitív
2004
2005
összes Gram-negatív
163 összesen 2417 izolátum
98 hemokultúrából kitenyészett S. haemolyticus törzs MIC érték meghatározása antibiotikum
rezisztens %
oxacillin
100
vancomycin
0
teicoplanin
49
amikacin
27
gentamicin
72
clindamycin
49
ciprofloxacin
87
clarithromycin
99
telithromycin
57
levofloxacin
87
moxifloxacin
82
MIC (µg/ml)
A sejtek adhéziójáért felelıs gének jelenlétének kimutatása PCR módszerrel (n=149) Tapadási faktorok vizsgálata icaA
Pozitív
icaB
2
1,4 % 784 bp
Nincs pozitív
icaC
Pozitív
21
14 %
icaD
Pozitív
3
2%
icaR
Pozitív
1
0,6 %
fbnA
Nincs pozitív
fbnB
Nincs pozitív
Denaturá Denaturáció ció
Primerek hibridizá hibridizáció ciója
DNS lá lánchosszabbí nchosszabbítás
icaR gén pozitív
2001-2005 között a Semmelweis Egyetem intenzív centrumaiban ápolt betegekbıl kitenyészett S. haemolyticus törzsek (n=163) rezisztencia pattern típus meghatározása korondiffúziós módszerrel pattern típus
rezisztencia pattern
%
3a
OX, E, GE
3
3b
OX, E, CIP
3
4a
OX, E, CIP, SXT
1
4b
OX, E, CIP, GE
22
4d
OX, E, GE, SXT
1
4e
OX, E, GE, CL
4
5a
OX, E, GE, CIP, SXT
17
5b
OX, E, GE, CIP, CL
22
5c
OX, E, CIP, CL, T
2
5d
OX, E, CL, T, GE
2
6a
OX, CL, E, T, GE, CIP
3
6b
OX, CL, E, GE, CIP, SXT
13
6c
OX, CL, E, CIP, SXT, T
2
6d
OX, CL, E, SXT, T, GE
5
összesen
100
Jelmagyará Jelmagyarázat: OX=oxacillin, OX=oxacillin, CL=clindamycin, CL=clindamycin, E=erythromycin, E=erythromycin, SXT=sulphamethoxasole/trimethoprim, T=tetracycline, T=tetracycline, CIP=ciprofloxacin, CIP=ciprofloxacin, GE=gentamicin
Hemokultúrából kitenyészett 98 S. haemolyticus törzs klonalitás vizsgálata pulzáló gélelektroforézis módszerrel 5 µl •PIV puffer
M
1
2
3
•Lizozim koncentráció 550 µg/ml •Proteináz K koncentráció 800 µg/ml
M
1
Lysostaphin koncentráció 1.: 40 µg/ml 2.: 80 µg/ml 3.: 120 µg/ml
3 óra
•SmaI •etidium-bromid
24 óra
2
3
Szeptikus állapotú betegek hemokultúrájából kitenyészett S. haemolyticus törzsek epidemiológiai vizsgálata PFGE módszerrel I. sz. perinatális intenzív centrum Dice (Tol 1.0%-1.0%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
100
98
96
94
92
90
88
86
84
82
80
78
76
74
72
70
68
66
64
62
60
58
56
54
52
50
48
46
SmaI
116
M 1
2
3 4
5
6 M
7
8
9 10 11 12 M
1 PIC
64
1 PIC
86
1 PIC
112
1 PIC
113
1 PIC
114
1 PIC
132
1 PIC
111
1 PIC
63
1 PIC
117
1 PIC
44
1 PIC
157
1 PIC
3
1 PIC
161
1 PIC
109
1 PIC
185
1 PIC
75
1 PIC
76
1 PIC
162
1 PIC
167
1 PIC
104
1 PIC
110
1 PIC
121
1 PIC
62
1 PIC
170
1 PIC
159
1 PIC
26
1 PIC
27
1 PIC
12
1 PIC
22
1 PIC
24
1 PIC
28
1 PIC
31
1 PIC
17
1 PIC
23
1 PIC
10
1 PIC
11
1 PIC
13
1 PIC
14
1 PIC
21
1 PIC
8
1 PIC
5
1 PIC
137
1 PIC
138
1 PIC
124
1 PIC
98
1 PIC
133
1 PIC
135
1 PIC
139
1 PIC
141
1 PIC
147
1 PIC
71
1 PIC
72
1 PIC
94
1 PIC
43
1 PIC
130
1 PIC
122
1 PIC
49
1 PIC
175
1 PIC
179
1 PIC
180
1 PIC
131
1 PIC
81
1 PIC
158 68
1 PIC 1 PIC
74
1 PIC
154
1 PIC
61 32
1 PIC 1 PIC
33
1 PIC
105
1 PIC
73
1 PIC
97
1 PIC
129
1 PIC
106
1 PIC
45
1 PIC
A négy leggyakoribb rezisztencia pattern csoportba tartozó 120 S. haemolyticus törzs genotípusos megoszlása
6b
5b
5a
4b
1
1
1
1 1 1 1 2
1 1 1
2
1
1
1
1
2 1 1 1 1
2
1 1 1 1 1 1 1 1
1
3
1 1 1 1
3
1
1
1
1
1 1 2 1 11
2
1 1 1
Rezisztencia pattern típus
1 1 1 1
3
1 1
1
3
4a
5
PFGE
6b
6c
7a
7c
típusok
8a
8c
8d
8e
8f
8g
8h
8i
8j
8k
9a
9b
10a
10b
10c
10d
10e
11a
11b
11c
11d
11e
11f
11h
11i
11j
12
18b
22a
23a
23b
24
25
26
27
Összefoglalás 2001 és 2005 között átlagosan évente 7 %-ban tenyészett ki az intenzív osztályon ápolt betegekbıl S. haemolyticus Ezek az izolátumok polirezisztensek voltak Csak vancomycin- nel kezelhetık a betegek MIC meghatározás javasolt Az azonos antibiotikum rezisztencia kép a S. haemolyticus esetében nem járványtani marker, mert genotípusosan a vizsgált törzsek különböznek
Eredményeink szerint a törzsek nagyobb valószínőséggel
random módon válogatódnak ki a betegek saját flórájából vagy mikro és makro környezetébıl
Köszönöm a figyelmet!
"Kis lépés egy embernek, de hatalmas lépés az emberiségnek„ (Neil A. Armstrong)
