SELEKSI BAKTERI PROBIOTIK DARI SALURAN PENCERNAAN UNTUK MENINGKATKAN KINERJA PERTUMBUHAN UDANG VANAME Litopenaeus vannamei TITA NOPITAWATI

SELEKSI BAKTERI PROBIOTIK DARI SALURAN PENCERNAAN UNTUK MENINGKATKAN KINERJA PERTUMBUHAN UDANG VANAME Litopenaeus vannamei

TITA NOPITAWATI

SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2010

PERNYATAAN MENGENAI TESIS DAN SUMBER INFORMASI    

Dengan  ini  saya  menyatakan  bahwa  tesis  Seleksi  Bakteri  Probiotik 

dari  Saluran  Pencernaan  untuk  Meningkatkan  Kinerja  Pertumbuhan  Udang  Vaname  Litopenaeus  vannamei  adalah  karya  saya  dengan  arahan  dosen  pembimbing  dan  belum  pernah  diajukan  dalam  bentuk  apapun  kepada  perguruan tinggi manapun.  Sumber informasi yang berasal dari karya yang  diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalan  teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir tesis ini.        Bogor,  Februari 2010      Tita Nopitawati NIM : C151070171

ABSTRACT   TITA NOPITAWATI.  Probiotics Selections from White Shrimp Gut to  Increased Growth Performance of White Shrimp Litopenaeus vannamei.   Under direction of WIDANARNI and DEDI JUSADI.    The effect of probiotics isolated from white shrimp gut Litopenaeus vannamei  (M2,Z3,K9  and  S3)  supplemented  into  the  diet  on  enzym  activities,  growth  performance of white shrimp and digestibility was investigated.  A triplicate  experiment were conducted using 8,0 g white shrimp.  Each shrimp was fed  on  the  diet  supplemented  with  either  probiotics  produce  amylase  (M2),  produce  lypase  (Z3),  produce  protease  (Z3),  produce  amylase,lypase  and  protease  (S3)  or  control  (no  supplementation  of  probiotics).    Regardless  of  the  strain,  the  application  of  probiotics  significantly  increased  the  bacteria  population  in  the  shrimp  gut,  thereby  digestibility,  protein  and  lipid  retention,  food  efficiency  and  growth  of  shrimp  significantly  improved.    On  the other hand, shrimp fed on the diet supplemented with K9 probiotics had  the  best  growth  performance.    Therefore,  K9  is  the  best  probiotics  isolated  from the white shrimp gut to use as a supplementarydiet for white shrimp.    Keywords : probiotics, growth performance, digestibility, white shrimp.               

RINGKASAN   TITA  NOPITAWATI.  Seleksi  Bakteri  Probiotik  dari  Saluran  Pencernaan  untuk  Meningkatkan    Kinerja  Pertumbuhan  Udang  VanameLitopenaeus  vannamei.  Dibimbing oleh WIDANARNI dan DEDI JUSADI.  Kualitas  pakan  sangat  menentukan  laju  pertumbuhan  udang.    Pakan  yang  dikonsumsi  oleh  udang  tidak  semuanya  dapat  dicerna  namun  ada  yang dikeluarkan dalam bentuk limbah berupa feses dan sisa metabolisme  lain seperti urin dan amoniak.  Besarnya pakan yang dikeluarkan menjadi  feses  tergantung  dari  kesesuaian  komponen  pakan  dengan  kemampuan  enzimatik  di  saluran  pencernaan  udang  atau  daya  cerna.    Pakan  yang  berkualitas  selain  dihasilkan  dari  sumber  bahan  pakan  juga  dapat  dihasilkan  dengan  penambahan  enzim  dalam  pakan.  Peningkatan  enzim  pencernaan  eksogen  dengan  memanfaatkan  bakteri  saluran  pencernaan  pada  ikan  telah  banyak  dilaporkan.  Adanya  informasi  tentang  peranan  bakteri  dalam  saluran  pencernaan  yang  memiliki  kemampuan  enzimatis  atau  mampu  menyumbangkan  enzim  kecernaan  endogen  sehingga  membantu  proses  penyerapan  makanan,maka  dibuat  suatu  rancangan  penelitian  untuk  menyeleksi  bakteri  dari  saluran  pencernaan  udang  sebagai  probiotik  untuk  meningkatkan  kinerja  pertumbuhan  udang  vaname.   Penelitian  ini  dilakukan  dalam  dua  tahap  secara  in  vitro  dan  in  vivo.   Penelitian  in  vitro  meliputi  isolasi  bakteri  kandidat  probiotik,  seleksi  bakterikandidat  probiotik  yang  terdiri  dari  1)uji  aktivitas  proteolitik,  lipolitik dan amilolitik, 2)uji ketahanan terhadap asam lambung dan garam  empedu,  3)  uji  pertumbuhan  bakteri,  4)ujiaktivitas  antagonistik  terhadap  bakteri  patogen,  5)uji  penempelan,  6)  uji  patogenitas  bakteri  kandidat  probiotik.    Uji  in  vivo  meliputi:Uji  pakan  percobaan  pada  udang  vaname  yaitu:  1)  uji  pertumbuhan  dengan  beberapa  parameter  yang  dianalisis  seperti laju pertumbuhan udang, konversi pakan, retensi protein, populasi  bakteri, tingkat kelangsungan hidup dan konsumsi pakan. 2) Uji daya cerna  pakan  dan  3)  uji  aktivitas  enzim  saluran  pencernaan.    Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  5  perlakuan  dan  3  ulangan.Pakan  yang  diujikan  terdiri  dari  A)  pakan  komersial  yang  ditambah  isolat  terbaik  penghasil  amilase  (isolat  M2),B)  pakan  komersial  yang  ditambah  isolat  terbaik  penghasil  lipase  (isolat  Z3),C)  pakan  komersial  yang  ditambah  isolat  terbaik  penghasil  protease  (isolat  K9),  D)  pakan komersial yang ditambah isolat terbaik penghasil amilase, lipase dan  protease (S3), E) pakan komersial yang tidak ditambahkan probiotik.  Dari uji in vitro didapatkan beberapa isolat yang mampu menghidrolisis substrat. Adanya kemampuan menghidrolisis protein, lemakdan karbohidratini menunjukkan bahwa makromolekul yang menjadi sumber karbon mampu dimanfaatkan oleh bakteriprobiotik tersebut. Bakteri kandidat probiotik ini juga memiliki ketahanan terhadap asam lambung dan garam empedu sehingga

diharapkan mampu bertahan pada saluran pencernaan. Hasil dari uji penempelan menunjukkan bahwabakteri kandidat probiotik ini memiliki kemampuan menempel pada substrat yang ditunjukkan dengan tingginya populasi bakteri yang menempel per mm2. Bakteri probiotik ini juga telah teruji tidak bersifat patogen. Bakteri pobiotik yang terpilih yaitu K9, Z3, M2 dan S3 memenuhi persyaratan untuk dijadikan sebagai probiotik. Pemberian pakan yang ditambahkan bakteri probiotik yang memiliki aktivitas enzim memberikan pengaruh yang nyata (P<0,05) terhadap kinerja pertumbuhan udang vaname dibandingkan dengan pertumbuhan udang yang diberikan pakan kontrol atau tanpa penambahan probiotik. Hasil terbaik pertumbuhan udang vaname ditunjukkan oleh perlakuan K9 yaitu pemberian pakan yang ditambah isolat yang memiliki aktivitas enzim protease. Kecernaan yang tinggi menyebabkan protein dan energi nutrien pakan yang dapat diserap udang akan lebih tinggi sehingga energi akan lebih banyak tersimpan untuk pertumbuhan.Perlakuan K9 juga menunjukkan hasil konversi pakan yang paling baik dibandingkan lainnya.Penambahan probiotik pada pakan komersial terhadap udang uji juga memberikan pengaruh yang nyata pada populasi bakteri di saluran pencernaan udang uji dibandingkan kontrol. Hal ini memacu peningkatan aktivitas enzim endogenous yang diproduksi oleh bakteri dalam saluran pencernaan. Enzim protease yang disekresikan oleh isolat K9 mampu meningkatkan kinerja pertumbuhan udang vaname. Kelangsungan hidup udang uji memberikan hasil yang tidak berbeda nyata antar perlakuan. Hal ini mungkin diakibatkan oleh kuantitas serta kualitas pakan yang diberikan cukup untuk mempertahankan kebutuhan pokok udang serta lingkungan yang terjaga dengan baik selama pemeliharaan. Kata kunci : probiotik, kinerja pertumbuhan, kecernaan, udang vaname      

                 

©HakCiptaMilik IPB, tahun 2010  HakCiptadilindungiUndang‐Undang  Dilarangmengutipsebagianatauseluruhkaryatulisinitanpamencantumkanatau menyebutkansumbernya.Pengutipanhanyauntukkepentinganpendidikan,  penelitian,  penulisankaryailmiah,  penyusunanlaporan,  penulisankritik,  atautinjauansuatumasalah;  danpengutipantersebuttidakmerugikankepentingan yang wajar IPB.  DilarangmengumumkandanmemperbanyaksebagianatauseluruhKaryatulisdal ambentukapa pun tanpaizin IPB     

SELEKSI BAKTERI PROBIOTIK DARI SALURAN PENCERNAAN UNTUK MENINGKATKAN KINERJA PERTUMBUHAN UDANG VANAME Litopenaeus vannamei

TITA NOPITAWATI

Tesis Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains pada Program Studi Ilmu Akuakultur

SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2010

Penguji Luar Komisi pada Ujian Tesis : Dr. Nur Bambang Priyo Utomo

Judul Tesis

: Seleksi Bakteri Probiotik dari Saluran Pencernaan untuk Meningkatkan

Kinerja

Pertumbuhan

Udang

Vaname

Litopenaeus vannamei Nama

: Tita Nopitawati

NIM

: C151070171

Disetujui Komisi Pembimbing

Dr. Widanarni Ketua

Dr. Dedi Jusadi Anggota

Diketahui

Ketua Program Studi Ilmu Akuakuktur

Dekan Sekolah Pascasarjana

Prof. Dr. Enang Harris

Prof. Dr. Ir. Khairil Anwar Notodiputro, MS.

Tanggal Ujian: 5 Februari 2010

Tanggal Lulus:

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala karuniaNya sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan.

Tema yang dipilih dalam

penelitian yang dilaksanakan sejak bulan November 2008 ini adalah probiotik dengan judul Seleksi Bakteri Probiotik dari Saluran Pencernaan untuk Meningkatkan Kinerja Pertumbuhan Udang Vaname Litopenaeus vannamei. Terima kasih penulis ucapkan kepada Dr. Widanarni dan Dr. Dedi Jusadi selaku dosen pembimbing, Dr. Nur Bambang Priyo Utomo selaku dosen penguji yang telah banyak membantu serta memberikan saran.

Di samping itu,

penghargaan penulis sampaikan kepada Bapak I Made Suitha A.Pi, Ibu Nurdiana S.Pi, ibu Khotim A.Md beserta seluruh staf Balai Layanan Usaha Produksi Perikanan Budidaya (BLUPPB) Karawang atas kesempatan yang diberikan untuk melakukan penelitian di BLUPPB Karawang. Ungkapan terima kasih penulis sampaikan kepada orang tua (Otong Suryaman Alm & Tinah Rostini), suami Nanang Sujana S.Pi dan putra tersayang Gavin Farandhya atas doa, cinta dan kasih sayang, pengertian serta dorongan yang selalu diberikan.

Penulis juga

mengucapkan terima kasih kepada teman-teman Akuakultur 2007 untuk kebersamaanya selama ini dan Bapak Ranta atas bantuannya selama penelitian. Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, Februari 2010

Tita Nopitawati

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Ciamis, 24 November 1978 dari Ayah Otong Suryaman (Alm) dan Ibu Tinah Rostini. Penulis merupakan putri ketiga dari tiga bersaudara. Penulis menyelesaikan pendidikan SMA pada tahun 1997 dan diterima di Institut Pertanian Bogor melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB pada tahun 1997. Penulis memilih jurusan Budidaya Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan dan lulus pada tahun 2001. Setelah menyelesaikan pendidikan di IPB penulis bekerja di perusahaan swasta selama 5 tahun. Penulis menikah pada tahun 2004 dengan Nanang Sujana S.Pi dan telah dikaruniai seorang putra bernama Gavin Farandhya berumur 5 tahun.

Pada tahun 2007 penulis melanjutkan pendidikan pascasarjana dan

memilih mayor Ilmu Akuakultur. Pada tanggal 5 Februari 2010 penulis lulus dengan penelitian berjudul Seleksi Bakteri Probiotik dari Saluran Pencernaan untuk Meningkatkan vannamei

Kinerja Pertumbuhan Udang Vaname Litopenaeus

i

DAFTAR ISI

Halaman DAFTAR TABEL ...................................................................................................... ii DAFTAR GAMBAR ................................................................................................. vi DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................................. vii PENDAHULUAN Latar Belakang ........................................................................................................... 1 Tujuan dan Manfaat Penelitian .................................................................................. 2 TINJAUAN PUSTAKA Sifat Umum Udang Vaname ...................................................................................... Kebutuhan Nutrisi Udang .......................................................................................... Aplikasi Bakteri sebagai Probiotik dalam Akuakultur............................................... Enzim Pencernaan ......................................................................................................

4 4 5 7

BAHAN DAN METODE Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................................... 10 Prosedur penelitian ..................................................................................................... 10 Isolasi Bakteri Kandidat Probiotik ............................................................................. 10 Seleksi Bakteri Kandidat Probiotik ............................................................................ 11 1. Uji Aktivitas Proteolitik, Lipolitik dan Amilolitik................................................ 11 2. Uji Ketahanan terhadap Asam Lambung dan Garam Empedu ............................. 11 3. Uji Pertumbuhan Bakteri....................................................................................... 11 4. Uji Aktivitas Antagonistik terhadap Bakteri Patogen ........................................... 12 5. Uji Penempelan ..................................................................................................... 12 6. Uji Patogenisitas Bakteri Kandidat Probiotik ....................................................... 13 Uji Pakan Percobaan pada Udang Vaname ................................................................ 13 1. Uji Pertumbuhan ................................................................................................... 14 2. Uji Daya Cerna Pakan ........................................................................................... 17 3. Uji Aktivitas Enzim Saluran Pencernaan .............................................................. 17 Analisis Data .............................................................................................................. 18 HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil ........................................................................................................................... 19 Isolasi Bakteri kandidat Probiotik dari Saluran Pencernaan Udang .......................... 19 Seleksi Bakteri Kandidat Probiotik ............................................................................ 19 1. Aktivitas Proteolitik, Lipolitik dan Amilolitik ....................................................... 19 2. Ketahanan terhadap Asam Lambung dan Garam Empedu .................................... 20

ii

3. Fase Pertumbuhan Bakteri ..................................................................................... 21 4. Aktivitas Antagonistik terhadap Bakteri Patogen .................................................. 23 5. Penempelan Bakteri Kandidat Probiotik ................................................................ 24 6. Aktivitas Patogenitas.............................................................................................. 24 Pakan Percobaan pada Udang Vaname ...................................................................... 25 1. Pertumbuhan Udang ............................................................................................... 25 2. Aktivitas Enzim Saluran Pencernaan ..................................................................... 26 Pembahasan ................................................................................................................ 27 KESIMPULAN ......................................................................................................... 31 SARAN ...................................................................................................................... 31 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 32 LAMPIRAN ............................................................................................................... 38

iii

DAFTAR TABEL

Halaman 1

Komposisi proksimat pakan komersial yang digunakan ................................... 13

2

Pertumbuhan relatif (PR), kelangsungan hidup (SR), konversi pakan (KP), retensi protein (RP), kecernaan total (KT) dan kecernaan protein (KP) udang vaname ................................................................................................... 25

3

Aktivitas enzim protease, lipase, amilase dan populasi bakteri......................... 26

iv

DAFTAR GAMBAR

Halaman 1 Tempat pemeliharaan udang dan tandon air ........................................................ 14 2 Hasil aktivitas proteolitik, lipolitik dan amilolitik ............................................... 19 3 Diameter hidrolisis enzim oleh isolat proteolitik, lipolitik dan amilolitik ........... 20 4 Selisih log (CFU/ml) antara jumlah isolat pada pH 2,5 dengan pH normal setiap periode pengamatan ................................................................................... 20 5 Selisih log (CFU/ml) antara jumlah isolat pada pH 7,5 dengan pH normal setiap periode pengamatan .................................................................................. 21 6 Kurva nilai kerapatan optik (Optical density) ...................................................... 22 7 Aktivitas antagonistik bakteri kandidat probiotik terhadap V.harveyi................................................................................................ 23 8 Diameter zona hambat bakteri kandidat probiotik terhadap V.harveyi................................................................................................ 23 9 Hasil uji penempelan bakteri kandidat probiotik pada lempeng baja .................. 24

v

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman 1 Prosedur uji hidrolisis protein, lemak dan karbohidrat ........................................ 39 2 Prosedur analisa proksimat .................................................................................. 41 3 Prosedur analisa Cr2O3 pakan dan feses............................................................... 45 4 Prosedur analisis aktivitas enzim ......................................................................... 47 5 Luas zona hasil hidrolisis protein, lemak dan karbohidrat................................... 49 6 Uji ketahanan asam lambung ............................................................................... 50 7 Data optical density bakteri selama 24 jam.......................................................... 51 8 Uji konfrontasi dan antagositik bakteri ................................................................ 52 9

Data penempelan bakteri pada substrat ............................................................... 52

10 Data bobot tubuh udang vaname selama pemeliharaan ..................................... 53 11 Laju pertumbuhan relatif udang vaname selama pemeliharaan (60 hari) ........................................................................................ 54 12 Kecernaan protein udang vaname ....................................................................... 55 13 Retensi protein udang vaname ............................................................................ 56 14 Perhitungan retensi protein udang vaname ......................................................... 57 15 Konversi pakan ................................................................................................... 58 16 Rata-rata tingkat kelangsungan hidup (%) udang vaname selama pemeliharaan (60 hari) ............................................................................................................ 59 17 Data kualitas air selama pemeliharaan udang vaname ....................................... 60 18 Aktivitas enzim amilase, lipase dan protease udang vaname ............................. 62 19 Jumlah Populasi bakteri pada udang vaname ..................................................... 62 20 Jumlah pakan yang dikonsumsi udang vaname selama pemeliharaan (60 hari). ....................................................................................... 63

PENDAHULUAN Latar Belakang

Kualitas pakan sangat menentukan laju pertumbuhan udang. Pakan yang dikonsumsi oleh udang tidak semuanya dapat dicerna namun ada yang dikeluarkan dalam bentuk limbah berupa feses dan sisa metabolisme lain seperti urin dan amoniak. Besarnya pakan yang dikeluarkan menjadi feses tergantung dari kesesuaian komponen pakan dengan kemampuan enzimatik di saluran pencernaan udang atau daya cerna. Pakan yang berkualitas selain dihasilkan dari sumber bahan pakan dapat juga dihasilkan dengan penambahan enzim dalam pakan. Pada umumnya pakan dicerna secara optimal dengan bantuan enzim dari saluran pencernaan udang sehingga energi yang dihasilkan dapat digunakan untuk memacu pertumbuhan udang. Di dalam saluran pencernaan udang terdapat bakteri yang menghasilkan enzim pencernaan yang dapat merombak nutrien makro yang masuk melalui pakan untuk kebutuhan udang tersebut.

Kehadiran enzim dalam saluran

pencernaan sangat mempengaruhi daya cerna udang.

Penggunaan probiotik

berhasil meningkatkan keseimbangan bakteri pada saluran pencernaan yang mengakibatkan peningkatan penyerapan makanan (Parker 1974; Fuller 1989). Murni (2004) menyatakan bahwa penambahan bakteri probiotik Bacillus sp. ke dalam pakan menyebabkan adanya peningkatan aktivitas enzim protease dan amilase sehingga kecernaan protein dan karbohidrat meningkat.

Dengan

demikian maka protein dan energi nutrien pakan yang dapat diserap saluran pencernaan akan lebih banyak dan mengakibatkan pertumbuhan meningkat. Hal ini berarti protein dan energi yang dapat disimpan oleh tubuh juga akan lebih tinggi yang berakibat pada tingginya retensi nutrien dan laju pertumbuhan. Probiotik dapat menguntungkan bagi inangnya karena adanya kemampuan enzimatis (Fuller & Turvy 1971; Parker 1974), memiliki kemampuan mensintesis biotin, Vitamin B12 (Sugita et al. 1991) dan enzim hidrolitik seperti amilase (Sugita et al. 1998) dan protease (Hoshino et al. 1997). Enzim-enzim khusus yang dimiliki oleh bakteri ini sangat membantu dalam pemecahan molekul

2

kompleks menjadi molekul sederhana sehingga akan mempermudah pencernaan lanjutan dan penyerapan oleh saluran pencernaan udang. Dengan penyerapan pakan yang tinggi maka diharapkan energi nutrien terserap lebih dan digunakan untuk pertumbuhan. Peningkatan enzim pencernaan eksogen dengan memanfaatkan bakteri saluran pencernaan pada ikan telah banyak dilaporkan (Clarke et al. 1993; Das dan Tripathi 1991; Opuszynski dan Shireman 1994; Hoshino et al. 1997; Xue et al. 1999; Robertson et al. 2000; Spanggaard et al. 2000; Jankauskiene 2002). Bairagi et al. (2002) melaporkan bakteri aerobik yang terdapat pada saluran pencernaan sembilan ikan tawar yang diteliti mampu menghasilkan enzim yang memfasilitasi penggunaan pakan dan kecernaan.

Hasil penelitian Aslamyah

(2006) menunjukkan bahwa bakteri pada saluran pencernaan ikan bandeng berperan dalam fungsi fisiologis saluran pencernaan dengan menyumbangkan enzim protease, lipase dan amilase endogen masing - masing sebesar 41,33; 36,12 dan 22,51%.

Hasil penelitian Wang (2007) menyatakan bahwa penambahan

probiotik (campuran Rhodobacter sphaeroides dan Bacillus sp.) dalam pakan menghasilkan peningkatan bobot tubuh udang vaname. Adanya informasi tentang peranan bakteri dalam saluran pencernaan yang memiliki kemampuan enzimatis atau mampu menyumbangkan enzim kecernaan eksogen sehingga membantu proses penyerapan makanan maka dibuat suatu rancangan penelitian untuk menyeleksi bakteri dari saluran pencernaan udang sebagai probiotik untuk meningkatkan kinerja pertumbuhan udang vaname. Pemilihan probiotik yang diisolasi dari saluran pencernaan udang diharapkan akan lebih mudah dalam beradaptasi dengan lingkungan saluran pencernaan sehingga mampu hidup dan berkembang membantu proses pencernaan.

Tujuan dan Manfaat Penelitian Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan bakteri yang mempunyai aktivitas enzim protease, lipase dan amilase dari saluran pencernaan untuk meningkatkan kecernaan pakan dan kinerja pertumbuhan udang vaname. Hasil penelitian ini diharapkan akan bermanfaat dalam pengembangan bakteri sebagai

3

probiotik terutama yang berkaitan dengan nutrisi, dan penambahan bakteri dalam pakan mampu untuk meningkatkan kinerja pertumbuhan udang vaname.

TINJAUAN PUSTAKA

Sifat Umum Udang Vaname

Nama lain dari udang vaname adalah Pacific White Shrimp, West Coast White Shrimp. Taksonomi udang vaname adalah sebagai berikut : Kingdom

: Animalia

Subkingdom

: Metazoa

Filum

: Arthropoda

Kelas

: Crustacea

Subkelas

: Malacostraca

Ordo

: Decapoda

Subordo

: Dendrobrachiata

Famili

: Penaeidae

Genus

: Penaeus

Subgenus

: Litopenaeus

Spesies

: Litopenaeus vannamei

Ciri-ciri udang vaname yaitu bertubuh putih bening, warna tubuh bercorak kebiru-biruan dari kromatofor yang berwarna biru dan berpusat di antara batas uropod dan telson (Robertson et al.1993). Kisaran parameter kualitas air yang optimal untuk pertumbuhan vaname antara lain pada suhu 26°C - 30°C, oksigen terlarut > 5mg/L dan alkalinitas 150-200 mg/L serta salinitas 5-35%o (Lester & Pante 1992). Aktivitas makan udang dipengaruhi oleh intensitas cahaya (Sumere & Kontara 1987) sesuai dengan sifat alami udang yaitu nokturnal (aktif pada malam hari).

Kebutuhan Nutrisi Udang Protein tidak hanya dibutuhkan untuk pertumbuhan jaringan namun juga digunakan sebagai sumber energi. Karena kebutuhan ini maka peningkatan protein dalam pakan diperlukan untuk memenuhi kebutuhan dasar yang dapat meningkatkan pertumbuhan. Kandungan asam amino yang diberikan pada udang harus benar-benar seimbang karena pada saat molting krustase kehilangan sekitar

5

50-80% protein tubuh, sebagian dapat diganti bersamaan dengan nutrien lain. Kebutuhan protein udang berukuran 0-0,5 gram adalah 40% (Akiyama et al. 1992). Kebutuhan protein pada spesies omnivora seperti vaname lebih rendah dibandingkan spesies karnivora seperti Penaeus japonicus (Guillaume 1997). Kecernaan protein berkisar antara 75-93%, namun pada Litopenaeus vannamei ditemukan aktivitas enzim pencernaan untuk beradaptasi dengan komposisi pakan (Guillaume 1997).

Asam amino esensial yang dibutuhkan

krustase adalah: arginina, histidina, isoleusina, leusina, lisina, metionina, fenilalanina, threonina, triptofan dan valina. Sedangkan kebutuhan fosfolipid sebesar 2% dalam pakan terutama fosfatidikolin, kolesterol atau fitosterol serta highly unsaturated fatty acids (HUFA), polyunsaturated fatty acids (PUFA). Penelitian terbaru melaporkan manfaat fosfatidikolin dalam meningkatkan ketahanan terhadap stress (Cotteau et al. 1996).

Komponen fosfolipid dapat

meningkatkan pertumbuhan dan kelangsungan hidup udang. Empat asam lemak yang berperan penting pada krustase yaitu linoleic (18:2 n-6), linolenic (18:3 n-3), eicosapentanoid (EPA) (20:5 n-3) dan docosahexanoic (DHA) (22:6 n-3). Kebutuhan lemak bervariasi tergantung dari habitat, suhu, jaringan, siklus hidup dan fase molting (Shiau 1998). Kecernaan karbohidrat berkisar 80-90% namun bisa berbeda karena sumber atau derajat gelatinisasinya setelah diproses (Cousin et al.1996).

Aplikasi Bakteri sebagai Probiotik pada Akuakultur

Penelitian penggunaan probiotik dalam hewan akuatik meningkat seiring dengan permintaan akuakultur yang ramah lingkungan (Gateouspe 1999). Definisi probiotik menurut Verschuere et al. (2000) yaitu mikrob hidup yang memiliki pengaruh yang menguntungkan terhadap inang dengan cara meningkatkan penggunaan pakan dan nilai nutriennya, meningkatkan respon imun inang terhadap penyakit atau meningkatkan kualitas lingkungan. Menurut Fuller (1992), probiotik merupakan makanan tambahan dalam bentuk mikrob hidup yang diberikan sebagai suplemen dengan tujuan untuk meningkatkan kesehatan. Seiring perkembangan teknologi probiotik didefinisikan sebagai sediaan sel bakteri atau komponen dari sel

6

bakteri lain yang mempunyai pengaruh menguntungkan bagi kesehatan dan kehidupan inangnya (Salminen et al. 1999). Menurut Irianto (2003), pada dasarnya ada 3 model kerja probiotik yaitu: menekan populasi bakteri melalui kompetisi dengan memproduksi senyawasenyawa antimikrob atau melalui kompetisi nutrisi dan tempat pelekatan di dinding intestinum, merubah metabolisme bakteri dengan meningkatkan atau menurunkan aktivitas enzim, dan menstimulasi imunitas melalui peningkatan kadar antibodi atau aktivitas makrofag. Sementara Verschuere et al. (2000) menjabarkan beberapa kemungkinan model kerja probiotik yaitu: produksi senyawa penghambat, kompetisi senyawa kimia atau ketersediaan energi, kompetisi tempat penempelan, peningkatan respon imun, perbaikan kualitas air, interaksi dengan fitoplankton, sumber makro dan mikronutrien, dan memproduksi enzim untuk membantu pencernaan makanan. Pada ikan Salmon Atlantik dan Rainbow trout yang diberi pakan dengan penambahan bakteri probiotik Carnobacterium sp. dengan konsentrasi 5 x 1010 sel/kg pakan, isolat dapat hidup dengan baik di saluran pencernaan ikan tersebut. Setelah 14 hari dilakukan uji tantang dengan bakteri Aeromonas salmonicida, Yersinia ruckeri, Vibrio ordalii dan Vibrioa anguillarum hasilnya menunjukkan efektivitas pengurangan penyakit yang disebabkan bakteri patogen tersebut kecuali Vibrio anguillarum (Robertson et al. 2000).

Beberapa imunostimulan seperti

glukan, lipopolisakarida dan peptidoglikan telah dilaporkan mampu menstimulasi fungsi selular pada udang (Gullian et al. 2004). Selain itu pengaruh probiotik sebagai pakan tambahan yang mampu meningkatkan imun terhadap bakteri patogen Vibrio sp. dan WSSV juga telah dilakukan (Itami et al. 1998; Gullian et al. 2004). Penambahan bakteri probiotik pada ikan air tawar juga telah dilakukan pada ikan gurame dengan penambahan bakteri Bacillus sp. namun tidak menunjukkan perbedaan yang nyata antar perlakuan terhadap pertumbuhan walaupun berbeda nyata dengan kontrol. Dosis yang dipakai adalah 1,0 x 109; 1,5 x 109; 2,0 x 109; 2,5 x 109; 3,0 x 109 CFU/100g pakan dan kontrol. Hasil penelitian Murni (2004) menunjukkan bahwa penambahan probiotik Bacillus sp. dalam pakan buatan dapat meningkatkan kecernaan, efisiensi pakan dan pertumbuhan ikan gurame dengan dosis optimal 10 ml/kg pakan dan kepadatan bakteri 4,2 x 104 CFU/ml. Manfaat

7

penambahan yaitu meningkatkan nilai pakan, kontribusi enzim dalam saluran pencernaan, menghambat bakteri patogen, anti mutan gen dan anti karsinogen, menunjang pertumbuhan dan meningkatkan respon imun (Mohanty et al. 1993; 1996; Sharma and Bhukhar 2000; Veschuere et al. 2000; Spanggard et al. 2001; Ziaei Nejad et al. 2006; Wang et al. 2005; Wang and Xu 2006; Wang 2007). Bakteri remedian (Bacillus sp.) telah dimanfaatkan pada pemeliharaan larva udang windu dan memberikan pengaruh positif pada pertumbuhan karena bakteri dan enzim yang dihasilkannya akan ikut termakan dan membantu proses pencernaan dalam saluran pencernaan udang (Handayani et al. 2000). Peningkatan kualitas air juga dapat dilakukan dengan penambahan probiotik. Baru-baru ini juga dilaporkan bahwa penggunaan probiotik komersial dalam tambak vaname dapat menurunkan konsentrasi nitrogen dan fosfor (Wang et al. 2005).

Enzim pencernaan

Enzim adalah protein yang disintesis didalam sel dan dikeluarkan dari sel penghasilnya melalui proses eksositosis.

Enzim pencernaan yang diekresikan

dalam rongga pencernaan berasal dari sel-sel mukosa lambung, pilorik kaeka, pankreas dan mukosa usus.

Aktivitas enzim sangat erat kaitannya dengan

perkembangan sistem pencernaan (Walford & Lam 1993). Sel-sel mukosa lambung menghasilkan enzim protease dengan aktivitas proteolitik optimal pada pH rendah. Cairan pankreas banyak mengandung tripsin yaitu suatu protease yang aktivitasnya optimal sedikit di bawah alkalis, di samping itu cairan ini juga mengandung amilase, maltase dan lipase. Aktivitas enzim pencernaan meningkat dengan meningkatnya umur larva karena organ penghasil enzim juga semakin sempurna. Haryati (2002) menjelaskan bahwa aktivitas enzim pepsin, tripsin, lipase, dan amilase meningkat sejalan dengan dengan peningkatan umur dan ukuran tubuh pada ikan bandeng.

Peningkatan

terbesar yaitu pada saat larva berumur 10 hari, sedangkan aktivitas enzim tripsin terjadi pada umur 15 hari. Sampai umur 30 hari aktivitas enzim pepsin belum tercapai, karena itu pakan buatan baru dapat diberikan pada umur 15 hari.

8

Aktivitas enzim lipase telah diteliti oleh Borlongan (1990).

Organ

pencernaan utama yang mensekresikan lipase adalah usus, pankreas dan pilorik kaeka.

Ikan yang mendapatkan pakan berupa diatom dan uniseluler

dengan

kandungan lemak kasar 1,98% mempunyai aktivitas lipase yang lebih tinggi pada organ utama yang mensekresi enzim tersebut dibandingkan dengan yang diberi pakan alga hijau berfilamen dengan kandungan lemak kasar 0,98%. Ikan bandeng secara efektif dapat beradaptasi terhadap tingkat lemak dalam pakan.

Hal ini

menunjukkan bahwa aktivitas enzim berkorelasi dengan komposisi pakan yang dikonsumsi. Aktivitas enzim udang vaname telah diteliti oleh Wang (2008) dimana pada stadia larva aktivitas protease vaname tidak berbeda antara yang diberikan pakan dengan probiotik atau tanpa penambahan probiotik, namun pada stadia postlarva 12 dan 7-8 aktivitas proteasenya paling tinggi dan berbeda dengan udang yang diberikan pakan tanpa penambahan probiotik.

Penambahan probiotik juga

memberikan pengaruh terhadap aktivitas amilase dibandingkan udang yang diberikan makanan tanpa probiotik begitupun dengan aktivitas lipase udang vaname. Enzim amilase, protease dan lipase mempengaruhi pencernaan makanan di usus anterior. Protease yang disebut juga endopeptidase merupakan kelompok enzim pencernaan udang yang bertanggung jawab lebih dari 60% dari kecernaan total protein dalam udang (Galgani et al. 1984, 1985; Tsai et al 1986). Protease merupakan enzim yang paling banyak berperan dalam hidrolisis protein. Sedangkan dalam hidrolisis karbohidrat adalah amilase seperti yang ditunjukkan ikan mas (Zonneveld et al. 1991).

Keberadaan enzim dalam pakan akan

meningkatkan daya cerna bahan makanan. Penelitian yang dilakukan Lemos et al. 2000 tentang derajat hidrolisis pakan udang penaeid dengan sumber protein yang terdiri dari: tepung ikan menhaden, tepung kedelai, tepung limbah tuna, tepung ikan putih dan tepung langostilla dengan ekstrak enzim pencernaan udang pada konsentrasi 1 ml/10 g pakan menghasilkan derajat hidrolisis protein berkisar dari 23,20 sampai 33,99%. Aktivitas tripsin dan kemotripsin Litopenaeus vannamei lebih tinggi pada udang yang diberikan protein kualitas rendah (tepung menhaden B) dibandingkan dengan pakan lainnya.

9

Penelitian Aslamyah (2006) menunjukkan bahwa bakteri Carnobacterium sp. mampu menghidrolisis karbohidrat pakan sebesar 20,00 sampai 57,87 mg pada jumlah inokulum 1010 CFU/ml dan 20,00 sampai 58,13 mg pada jumlah inokulum 1012 CFU/ml dan bakteri tersebut berperan dalam fungsi fisiologis saluran pencernaan dengan menyumbangkan enzim protease, lipase dan amilase endogen masing - masing sebesar 41,33; 36,12 dan 22,51%

BAHAN DAN METODE Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dimulai dengan tahap isolasi dan seleksi bakteri kandidat probiotik yang dilakukan di Laboratorium Kesehatan Ikan, Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor (IPB) mulai bulan November 2008 sampai Februari 2009. Tahap selanjutnya yaitu pemeliharaan udang vaname dilakukan di Balai Layanan Usaha Produksi Budidaya (BLUPPB) Karawang Jawa Barat dari bulan Juli sampai September 2009. Setelah pemeliharaan selanjutnya dilakukan analisa enzim di Laboratorium Bakteriologi, Pusat Antar Universitas (PAU), IPB dan analisa kecernaan serta analisa proksimat dilakukan di Laboratorium Nutrisi Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB.

Prosedur Penelitian Isolasi Bakteri Kandidat Probiotik Sumber inokulum didapat dari isi saluran pencernaan udang vaname fase dewasa dengan ukuran rata-rata 10-15 g yang dilakukan dengan cara mengeluarkan saluran pencernaan udang.

Saluran pencernaan ditimbang dan

diukur panjangnya kemudian digerus dan diencerkan. pencernaan diencerkan dengan

Setiap 1g saluran

9 ml larutan fisiologis (NaCl 0,85%) steril.

Sampel hasil pengenceran kemudian ditumbuhkan pada media seawater complete (SWC) yang dibuat dari 1,25 g bakto pepton, 0,25 g yeast ekstrak, 750 ml air laut, 250 ml akuades dan 3 ml gliserol.

Sebagai sumber energi untuk bakteri

proteolitik, lipolitik dan amilolitik masing-masing digunakan susu (kasein), minyak zaitun dan tepung kanji (pati). Kultur cair bakteri dilakukan dalam suasana aerob pada suhu 29°C selama 20-24 jam.

Kultur selanjutnya diencerkan sampai 10-7 dan kemudian

ditumbuhkan kembali pada media SWC yang telah ditambahkan sumber energi. Kultur dibuat duplo dan kemudian diinkubasi pada suhu 29°C selama 20-24 jam.

11

Seleksi Bakteri Kandidat Probiotik Seleksi probiotik dilakukan dengan mengamati bakteri yang mampu menghidrolisis kasein, pati dan lemak (Lampiran 1). Tahap seleksi bakteri untuk mendapatkan kandidat probiotik terdiri dari : 1. Uji Aktivitas Proteolitik, Lipolitik dan Amilolitik Pengujian ini bertujuan untuk mengukur besarnya kemampuan aktivitas proteolitik, lipolitik dan amilolitik dari masing masing isolat yang diuji melalui uji hidrolisis protein, lemak dan karbohidrat (Lampiran 1).

Aktivitas protease

ditandai dengan zona bening di sekeliling isolat yang ditumbuhkan pada media agar sedangkan isolat yang tidak mampu menghidrolisis protein tidak terbentuk zona di sekitar isolat. Hasil aktivitas lipase ditandai dengan adanya warna hijau terang pada isolat yang ditumbuhkan dan aktivitas amilase ditandai dengan warna sekeliling isolat menjadi kuning cerah sedangkan isolat yang tidak mampu menghidrolisis karbohidrat warna sekeliling isolat gelap. 2. Uji Ketahanan terhadap Asam Lambung dan Garam Empedu Kemampuan bakteri untuk bertahan dalam lambung yang berpH rendah dan saluran pencernaan yang ber-pH basa diuji dengan ketahanan asam lambung dan garam empedu. Metode ini mengacu pada Ngatirah et al. (2000) yaitu dengan menginokulasikan 1 ml isolat bakteri ke dalam satu seri tabung yang berisi 9 ml larutan media steril dengan pH 2,5 (diatur dengan penambahan HCL) dan pH 7,5 (diatur dengan penambahan NaOH) dan selanjutnya diinkubasi pada suhu 29°C. Selanjutnya sel bakteri yang tumbuh dihitung dengan metode hitungan cawan setiap 2 jam selama 8 jam. Ketahanan terhadap asam lambung dan garam empedu ditentukan oleh selisih jumlah koloni antara kontrol dan perlakuan. Semakin kecil selisihnya maka semakin tahan terhadap asam lambung dan garam empedu. 3. Uji Pertumbuhan Bakteri Pencapaian fase ekponensial bakteri dapat ditentukan dengan fase pertumbuhan bakteri. Persiapan kultur dilakukan dengan cara menginokulasikan 0,1 ml isolat bakteri ke dalam 10 ml media kultur cair dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 29°C. Sediaan ini disebut kultur segar yang kemudian diambil 1% dan diinokulasikan ke dalam media kultur steril 90 ml dan diinkubasi kembali

12

pada suhu 29°C. Pertumbuhan bakteri diamati setiap 2 jam dengan mengukur nilai

kerapatan

atau

optical

density

(OD)

dengan

menggunakan

alat

spektrofotometer dengan panjang gelombang 620 nm (Hadioetomo 1990). 4. Uji Aktivitas Antagonistik terhadap Bakteri Patogen Uji ini dilakukan untuk mengetahui kemampuan bakteri kandidat probiotik dalam menghambat bakteri patogen. Bakteri patogen yang digunakan adalah Vibrio harveyi. Pertama dilakukan kultur cair bakteri patogen dan setiap kandidat probiotik. Selanjutnya dari kultur cair diambil 0,1 ml dan ditambahkan 0,9 ml larutan fisiologis steril. disebar di cawan.

Untuk bakteri patogen diambil 0,1ml dan kemudian

Kertas saring steril dicelupkan pada suspensi kandidat

probiotik dan diletakkan di atas media padat SWC yang telah disebar dengan V.harveyi. Biakan bakteri ini diinkubasi pada suhu 29°C selama 24 jam dan diamati zona bening sebagai hasil bahwa kandidat probiotik dapat menghambat V. harveyi. 5. Uji Penempelan Uji ini mengacu pada metode berdasarkan Dewanti & Wong (1993) yang menggunakan lempeng baja. Terlebih dahulu lempeng baja disterilkan dengan cara direndam dalam larutan deterjen yang dipanaskan sampai mencapai suhu 40 45°C selama 24 jam, kemudian lempeng baja dibilas dengan air panas 40 - 50°C sampai bersih lalu dikeringanginkan, selanjutnya diautoklaf pada suhu 121°C selama 20 menit. Pengujian dilakukan dengan cara meletakkan lempeng baja di dalam erlenmeyer 1 L dengan posisi berdiri. Erlenmeyer sebelumnya telah diisi dengan 250 ml SWC steril dan telah diinokulasi 1 ml kultur segar bakteri. Erlenmeyer ditutup dengan alumunium foil dan ditempatkan dalam shaker selama 24 jam pada suhu 29°C. Setelah 24 jam lempeng baja dibilas dengan larutan buffer fosfat (BF). Kemudian permukaan lempeng diseka secara merata dengan menggunakan swab. Swab dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 10 ml BF dan divortex selama 1 menit. Selanjutnya dilakukan pengenceran serial dan dihitung populasi bakteri dengan metode hitungan cawan. Jumlah bakteri yang tumbuh pada media dalam erlenmeyer juga dihitung dengan cara mengambil 1 ml cairan dari media tumbuh dan diencerkan dengan 9

13

mL buffer Fosfat. Selanjutnya dilakukan penghitungan populasi bakteri yang tumbuh dengan metode hitung cawan. Bakteri yang mampu membentuk biofilm dengan baik akan mampu menempel pada substrat yaitu usus. 6. Uji Patogenisitas Bakteri Kandidat Probiotik Uji patogenisitas dilakukan untuk melihat apakah bakteri yang diberikan bersifat patogen atau tidak terhadap udang.

Uji ini dilakukan dengan cara

menyuntikkan bakteri kandidat probiotik secara intramuskular dengan konsentrasi 106 CFU/ml sebanyak 0,1 ml/ekor. Udang dipelihara selama 7 hari dan diamati kelangsungan hidupnya setiap hari.

Pada akhir pemeliharaan tingkat

kelangsungan hidup udang dihitung dan dibandingkan dengan kontrol yakni udang yang disuntik dengan larutan fisiologis. Kandidat probiotik yang akan digunakan adalah bakteri yang tidak bersifat patogen yang tidak menyebabkan udang sakit dan mati pada saat uji patogenitas ini.

Uji Pakan Percobaan pada Udang Vaname Pakan yang digunakan yaitu pakan komersial (Tabel 1) dan ditambahkan kandidat probiotik. Sebelum dicampurkan ke dalam pakan dilakukan kultur cair bakteri kandidat probiotik yang ditempatkan dalam shaker dengan suhu 29°C dengan kecepatan 180 rpm dan dilakukan pemanenan sesuai waktu pencapaian fase eksponensial. Hasil kultur bakteri yang didapat dipindahkan ke dalam tabung ulir dan disentrifuse selama 15 menit dengan kecepatan 4000 rpm. Hasil endapan bakteri probiotik inilah yang dicampurkan ke dalam pakan. Probiotik sebanyak 10g/kg (Wang et al. 2007) ditambahkan ke dalam pakan dengan cara disemprotkan secara merata menggunakan spuit dengan menambahkan 2% kuning telur. Tabel 1. Komposisi proksimat pakan komersil yang digunakan Komposisi Proksimat Protein Lemak Serat Abu Air

Kandungan (%) 32% 5% 4% 15% 11%

14

Komposisi : Fish meal, shrimp meal, squid meal, soybean meal, wheat flour, soy lecithin, squid oil, fish oil, immune stimulant, vitamin, mineral, anti mold and anti oksidant Sumber : Luxindo 39 3A Pakan yang diberikan pada percobaan ini terdiri dari : A: Pakan komersial yang ditambah isolat terbaik penghasil amilase (isolat M2) B:

Pakan komersial yang ditambah isolat terbaik penghasil lipase (isolat Z3)

C: Pakan komersial yang ditambah isolat terbaik penghasil protease (isolat K9) D: Pakan komersial yang ditambah isolat terbaik penghasil amilase, lipase dan protease (S3) E: Pakan komersial yang tidak ditambahkan probiotik Selanjutnya pakan ini diberikan pada udang selama percobaan pemeliharaan untuk selanjutnya dilakukan : 1. Uji Pertumbuhan Pemeliharaan udang dilakukan pada wadah plastik ukuran 90L sebanyak 15 buah (Gambar 1). Bagian samping ditutup plastik warna hitam dengan tujuan untuk menurunkan intensitas cahaya sesuai dengan sifat udang yang aktif pada malam hari (nokturnal). Sebelum digunakan, semua peralatan diberi desinfektan dengan kaporit. Wadah plastik diisi air yang berasal dari tambak udang dengan ketinggian 70%. Air dari tambak disaring terlebih dahulu dan diberi desinfektan dengan kaporit 30 ppm kemudian dinetralkan dengan Na-thiosulfat 10 ppm dan diaerasi tinggi.

Air disterilkan selama 3 hari dan pada hari keempat udang

dimasukkan ke dalam wadah plastik.

Gambar 1. Tempat pemeliharaan udang dan tandon air

15

Udang dengan bobot rata-rata 8,35 ± 0.16 g dan panjang 10,14 ± 0,21cm ditebar dengan kepadatan 30 ekor per wadah. Pemeliharaan udang dilakukan selama 60 hari dan diberi pakan satiation sebanyak lima kali sehari, yaitu pukul 06.00, 10.00, 14.00, 18.00 dan 21.00. Jumlah pakan yang diberikan sebanyak 5 % dari bobot tubuh udang dan selanjutnya disesuaikan dengan pertambahan bobot tubuh udang vaname. Penggantian air dilakukan 3 hari sekali sebanyak 10% dan penyiponan dilakukan setiap pagi hari untuk membersihkan sisa pakan dan feses. Jumlah pakan yang diberikan selama pemeliharaan ditimbang dan dicatat untuk menghitung efisiensi pakan.

Untuk mengetahui laju pertumbuhan udang

dilakukan sampling setiap 10 hari sekali. Pengukuran kualitas air dilakukan pada awal, tengah dan akhir pemeliharaan meliputi salinitas, pH, suhu, dissolve oksigen (DO) dan amoniak.

Untuk uji pertumbuhan ini dianalisis beberapa

parameter yaitu : 1. Laju pertumbuhan relatif udang Laju pertumbuhan relatif dihitung menggunakan rumus menurut Takeuchi (1988) yaitu: PR = Wt-Wo x 100% Wo Dimana : Wo = Bobot ikan awal (g) Wt = Bobot ikan akhir (g) PR = Pertumbuhan relatif 2. Konversi Pakan (KP) Konversi pakan dihitung berdasarkan rumus menurut Takeuchi (1988) yaitu : KP =

F x 100% (Wt +Wd ) - Wo

Dimana : KP = Konversi pakan (%) Wo = Bobot rata rata ikan uji pada awal penelitian (g) Wt

= Bobot rata rata ikan uji pada waktu t (g)

Wd

= Bobot udang yang mati selama penelitian (g)

F

= Bobot pakan yang dikonsumsi selama penelitian

16

3. Retensi Protein Retensi

protein

dapat diketahui dengan melakukan analisis proksimat

kadar protein (Lampiran 2) terhadap pakan, serta tubuh udang awal dan akhir penelitian. Rumus yang dipakai berdasarkan Takeuchi (1988) : RP

=

Pt-Po x 100 Pe

Dimana : RP

= Retensi protein (%)

Po

= bobot protein dalam tubuh ikan pada waktu 0 (g)

Pt

= bobot protein dalam tubuh ikan pada waktu t (g)

Pe

= bobot protein yang dikonsumsi ikan (g)

4. Populasi bakteri Populasi bakteri yang terdapat dalam saluran pencernaan udang dan feses udang vaname dihitung pada awal dan akhir percobaan dengan metode hitungan cawan. Hal ini dilakukan untuk melihat ada atau tidaknya perbedaan populasi setelah diberikan pakan uji. Sampel saluran percernaan udang dan feses digerus secara terpisah dan setiap 1 g saluran pencernaan diencerkan dengan 9 ml larutan fisiologis steril. Kemudian hasil pengenceran ditumbuhkan pada media agar padat. 5. Tingkat kelangsungan hidup Tingkat kelangsungan hidup diamati setiap periode pengamatan 10 hari sampai akhir penelitian dan penghitungannya menggunakan rumus sebagai berikut (Effendie 1997) : S

=

Nt x 100 No Dimana : S = Derajat kelangsungan hidup (%) Nt = Jumlah udang uji pada akhir penelitian ( ekor ) No = Jumlah udang uji pada awal penelitian ( ekor ) 6. Konsumsi Pakan Konsumsi pakan dihitung dengan cara menimbang jumlah pakan awal sebelum diberikan ke udang dan setelah pemberian pakan, pakan kembali

17

ditimbang untuk mengetahui jumlah pakan yang dikonsumsi udang setiap hari selama masa pemeliharaan. 2. Uji Daya Cerna Pakan Pengujian daya cerna pakan dilakukan secara terpisah dari uji pertumbuhan. Pakan yang akan digunakan dihaluskan menjadi serbuk dan ditambahkan 0,6 % Cr2O3 sebagai indikator kecernaan dan CMC sebesar 20 g/kg pakan sebagai perekat (Watanabe 1988).

Selanjutnya pakan serbuk dibuat pelet lagi dan

dikeringkan. Pakan diberikan pada udang selama seminggu dan pada hari ketujuh dilakukan pengumpulan feses udang dengan cara menyipon akuarium dengan selang kecil dan ditampung dalam ember. Selanjutnya disaring dan feses yang terkumpul ditempatkan pada botol film untuk selanjutnya dianalisa (Lampiran 3). Feses yang terkumpul dikeringkan dalam oven bersuhu 110°C selama 4-6 jam. Selanjutnya dilakukan analisa kandungan Cr2O3 terhadap feses yang sudah dikeringkan (Lampiran 4). Nilai kecernaan dihitung berdasarkan Takeuchi (1988) : Kecernaan protein (%) = 1-(a’/a )/(b’/b) x 100 Kecernaan Total (%) = 1-(a’/a) x 100 Keterangan : a = % Cr2O3 dalam pakan a’ = % Cr2O3 dalam feses b’ = % protein dalam feses b = % protein dalam pakan 3. Uji Aktivitas Enzim Saluran Pencernaan Uji aktivitas enzim dilakukan pada saluran pencernaan udang di akhir penelitian. Hal ini dilakukan untuk mengetahui ada atau tidaknya pengaruh dari penambahan probiotik pada pakan yang diberikan dibandingkan kontrol. Udang diambil sebanyak 6 ekor dari setiap akuarium kemudian dibedah untuk diambil saluran pencernaannya. Preparasi ekstrak enzim saluran pencernaan udang ini dilakukan pada suhu 4°C. Saluran pencernaan udang kemudian dicuci dengan akuades dan dikeringkan dengan kertas penghisap. Selanjutnya usus ditimbang dan dihomogenkan dengan menambahkan larutan buffer 10 ml. Setelah homogen lalu disentrifuse selama 20 menit pada 1200 rpm untuk mendapatkan supernatan

18

yang akan digunakan pada pengujian selanjutnya yaitu aktivitas enzim (Lampiran 3). Analisis Data Data hasil isolasi dan seleksi bakteri kandidat probiotik serta aktivitas enzim saluran pencernaan udang dianalisa secara deskriptif sedangkan data hasil uji pertumbuhan dan kecernaan dianalisa secara statistika.

Rancangan yang

digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dan menggunakan analisa ragam dengan tingkat kepercayaan 95% dan dilanjutkan dengan uji Duncan untuk mengetahui perbedaan antar perlakuan (Steel dan Torrie 1993).

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Isolasi Bakteri Kandidat Probiotik dari Saluran Pencernaan Udang Hasil isolasi bakteri kandidat probiotik dari saluran pencernaan udang didapat total sebanyak 30 isolat bakteri untuk diseleksi lebih lanjut. Isolat bakteri ini diambil berdasarkan koloni yang berbeda. Morfologi koloni isolat bakteri yang didapat adalah bulat sedang, tidak beraturan, warna krem; bulat besar menipis ke pinggir, tepian bergerigi, warna krem; bulat melebar, tepi berserabut, warna bening; bulat, menipis ke tepi, warna bening.

Seleksi Bakteri Kandidat Probiotik 1. Aktivitas Proteolitik, Lipolitik dan Amilolitik Hasil uji aktivitas proteolitik, lipolitik dan amilolitik terhadap bakteri kandidat probiotik disajikan pada Gambar 2.

Hasil uji aktivitas proteolitik

ditandai dengan adanya zona bening di sekeliling koloni isolat, aktivitas lipolitik ditunjukkan dengan adanya warna hijau di sekeliling koloni isolat dan aktivitas amilolitik ditandai zona kuning bening di daerah isolat yang ditumbuhkan.

aktivitas proteolitik

aktivitas lipolitik

aktivitas amilolitik

Gambar 2 Hasil aktivitas proteolitik, lipolitik dan amilolitik. Hasil pengukuran luas diameter hasil aktivitas disajikan pada Gambar 3 dan Lampiran 5. Dari hasil pengukuran diameter hidrolisis protease didapatkan tiga isolat dengan diameter tertinggi sebesar 20 mm yaitu K9, K19 dan Z1. Isolat yang mampu menghidrolisis lipase paling tinggi yaitu isolat Z5 dengan diameter 12 mm disusul Z3 diameter 9 mm dan isolat yang mampu menghidrolisis amilase paling tinggi yaitu M1 dan M2 dengan diameter 15 mm. Isolat-isolat tersebut selanjutnya diuji lanjut berdasarkan tahapan seleksi bakteri probiotik. Adanya kemampuan menghidrolisis protease, lipase dan amilase ini menunjukkan bahwa

 

20

isolat-isolat tersebut mampu memanfaatkan sumber energi yaitu kasein, lemak dan pati yang ditambahkan pada media menjadi sumber karbon.

Gambar 3 Diameter hidrolisis enzim oleh isolat proteolitik, lipolitik dan amilolitik. 2. Ketahanan terhadap Asam Lambung dan Garam Empedu Toleransi terhadap asam merupakan salah satu syarat penting suatu isolat untuk dijadikan kandidat probiotik. Hasil dari pengujian ketahanan terhadap asam lambung dan garam empedu disajikan pada Gambar 4, Gambar 5 dan Lampiran 6

Gambar 4 Selisih log (CFU/ml) antara jumlah isolat pada pH 2,5 dengan pH normal setiap periode pengamatan.

 

21

Gambar 5 Selisih log (CFU/ml) antara jumlah isolat pada pH 7,5 dengan pH normal. Hasil pengujian terhadap asam lambung menunjukkan bahwa isolat S3 dan K9 memiliki selisih terkecil yang berarti lebih tahan terhadap pH asam lambung dibandingkan isolat lainnya. Isolat harus tahan terhadap pH asam lambung untuk mampu bertahan hidup dalam saluran pencernaan. Apabila sel bakteri terpapar pada kondisi yang sangat asam maka membran sel dapat mengalami kerusakan dan berakibat pada hilangnya komponen-komponen intraseluler seperti Mg, K dan lemak dari sel tersebut.

Pada akhirnya kerusakan ini dapat mengakibatkan

kematian sel (Bender & Marquis 1987). Hasil pengujian terhadap garam empedu menunjukkan bahwa isolat K9 merupakan isolat yang paling mampu beradaptasi karena selisih log populasinya paling kecil diantara semua isolat. 3.  Fase Pertumbuhan Bakteri Hasil  pengamatan  nilai  kerapatan  optik  Optical  Density  ditunjukkan  pada  Gambar  6  dan  Lampiran  7.    Dari  kurva  pertumbuhan  terlihat  bahwa  setiap isolat memiliki  pertumbuhan yang bervariasi. Hasil pengamatan nilai  kerapatan  optik  didapatkan  rata‐rata  akhir  eksponensial  dengan  jumlah  sel  tertinggi  terjadi  pada  jam  ke  16  dan  18.      Waktu  tersebut  selanjutnya  digunakan sebagai dasar pemanenan sel bakteri.

 

22

       

Gambar 6 Kurva nilai kerapatan optik (Optical Density).

 

23

4. Aktivitas Antagonistik terhadap Bakteri Patogen Hasil uji aktivitas antagonistik ditunjukkan pada Gambar 7. Isolat bakteri kandidat probiotik rata-rata memiliki daya hambat terhadap bakteri patogen yaitu V.harveyi dimana aktivitas ini ditandai dengan adanya zona hambat di sekeliling isolat yang ditanam.

Gambar 7 Aktivitas antagonistik bakteri kandidat probiotik terhadap V. harveyi. Hasil pengukuran zona hambat isolat kandidat probiotik disajikan pada Gambar 8 dan Lampiran 8. Kandidat probiotik diharapkan mampu menekan pertumbuhan bakteri patogen dalam saluran pencernaan. Hal ini dapat terjadi karena kandidat yang mampu menekan pertumbuhan bakteri patogen mampu menghasilkan antibakteri. Pemilihan probiotik salah satu kriterianya berdasarkan kemampuannya memiliki aktivitas antagonistik dimana pada penelitian ini ditujukan untuk bakteri patogen udang yatu Vibrio harveyi.

Gambar 8 Diameter zona hambat bakteri kandidat probiotik terhadap V.harveyi.

 

24

Dari hasil uji aktivitas antagonistik didapatkan hasil bahwa bakteri kandidat probiotik rata-rata mampu menekan pertumbuhan V.harveyi. Zona hambat terbaik dihasilkan oleh isolat S2 dengan diameter 13 mm namun ada satu isolat yang tidak mampu menghambat bakteri patogen yaitu isolat bakteri Z10. 5. Penempelan Bakteri Kandidat Probiotik Faktor penempelan atau adherence factor merupakan faktor yang dimiliki oleh bakteri untuk menempel dan membentuk biofilm pada permukaan padat (Characklis 1990).

Hal yang mempengaruhi sifat penempelan bakteri pada

permukaan padat adalah sifat hidrofobisitas antar sel bakteri, jarak antar sel dan adanya reseptor pada sel inang (Zita & Hermannson 1997). Uji penempelan terhadap kandidat probiotik memberikan hasil yang berbeda pada setiap kandidat probiotik seperti ditunjukkan pada Gambar 9 dan Lampiran 9. Untuk kandidat probiotik terpilih (Z3, K9, S3 dan M2) menunjukkan adanya kemampuan menempel pada substrat. Isolat K9 memiliki jumlah koloni 14.000 koloni /mm2 yang artinya isolat ini mampu menempel dengan baik.

Gambar 9 Hasil uji penempelan bakteri kandidat probiotik pada lempeng baja. 6. Aktivitas Patogenisitas Hasil yang didapat dari uji patogenisitas membuktikan bahwa kandidat probiotik yang terpilih (M2, Z3, K9 dan S3) tidak bersifat patogen. Hal ini

 

25

dibuktikan dari hasil kelangsungan hidup udang 100 % . Udang yang disuntik dengan isolat bakteri kandidat probiotik mampu bertahan hidup selama masa uji dan kondisi tubuhnya tidak ada perbedaan dengan udang kontrol atau yang disuntik dengan larutan fisiologis. Dengan hasil ini maka kandidat probiotik dapat diaplikasikan sebagai probiotik pada penambahan pakan yang akan diberikan pada udang. Pakan Percobaan Udang vaname 1. Pertumbuhan Udang Hasil

uji pertumbuhan disajikan pada Tabel 2 yang meliputi beberapa

parameter yang dianalisis.

Pemberian pakan yang ditambahkan kandidat

probiotik yang memiliki aktivitas enzim memberikan pengaruh yang nyata (P<0,05)

terhadap

pertumbuhan

udang

vaname

dibandingkan

dengan

pertumbuhan udang yang diberikan pakan kontrol atau tanpa penambahan probiotik. Tabel 2 Pertumbuhan relatif (PR), kelangsungan hidup (SR), konversi pakan (KP), retensi protein (RP), kecernaan total (KT) dan kecernaan protein (KP’) udang vaname Perlakuan (jenis bakteri)

Parameter M2

Z3

K9

S3

Kontrol

PR (%)

71,2±8,9bc

63,3±2,9b

91,1±0,01d

79,5±0,04c

48,9±0,04a

SR(%)

95,56 ± 0,57a 

96,67 ± 0,57a 

98,02 ± 0,5a

100,0 ± 0,00a 

81,11 ± 4,04a

KP(%)

2,16±0,112a

2,21±0,15a

1,83±0,09b

1,83±0,036b

2,29±0,083a

RP(%)

37,12±2,22bc 

32,87±3,21b

46,97±3,27d

39,78±2,02c

23,38±1,96a 

KT (%)

72,97±1,80 a b

76,16±2,33 cd 

75,61±1,54 bc 

78,55±0,76 d 

71,78±1,98 a 

KP’(%)

76,34±2,03bc

76,75±2,64cd

79,93±1,37d

79,27±1,03d

73,36±1,36a

Keterangan : (p<0,05) Huruf yang berbeda pada garis yang sama menunjukkan perbedaan antar perlakuan.  Hasil terbaik pertumbuhan udang vaname ditunjukkan oleh perlakuan K9 yaitu pemberian pakan yang ditambah isolat yang memiliki aktivitas enzim protease dan selanjutnya perlakuan S3 yaitu pemberian pakan yang ditambah isolat yang memiliki aktivitas protease, lipase dan amilase. Hasil pertumbuhan

 

26

udang vaname pada kedua perlakuan ini lebih baik dibandingkan perlakuan lainnya (Lampiran 10 dan Lampiran 11). Hal ini diduga karena dengan kecernaan protein yang tinggi

yaitu 79,93%±1,37  (Lampiran  12)  sehingga mampu

meningkatkan retensi protein sebesar 46,97%±3,27  (Lampiran  13  dan  Lampiran 14). Perlakuan K9 juga menunjukkan hasil konversi pakan yang baik yaitu 1,83±0,09 (Lampiran 15) yang berarti bahwa pakan yang dibutuhkan untuk menjadikan kg daging sebesar 1,83 kg dan ini lebih efektif dalam penggunaan protein baik sebagai sumber energi atau sebagai zat pembangun tubuh sehingga protein yang tidak tercerna dan keluar dalam bentuk sisa metabolisme dapat dikurangi. Kelangsungan hidup selama pemeliharaan udang vaname menunjukkan tidak ada perbedaan yang nyata antara perlakuan dengan kontrol (Lampiran 16). Selama  pemeliharaan  salinitas  air  15‰  sesuai  dengan  kondisi  di  tambak  udang,  DO  berkisar  di  5,0‐6,8  dan  amoniak  berkisar  di  0,01‐0,02  dan  pH  berkisar pada 7,5‐7,9 (Lampiran 17).    3. Aktivitas Enzim Saluran Pencernaan Hasil uji aktivitas enzim saluran pencernaan udang disajikan pada Tabel 3 dan Lampiran 18. Dari hasil analisis aktivitas enzim pada saluran pencernaan udang didapatkan aktivitas enzim protease, lipase dan amilase saluran udang yang sejalan dengan kemampuan bakteri dalam menghidrolisis protein, lemak dan karbohidrat pada uji in vitro.

Sehingga bakteri yang mampu menghidrolisis

protein, lemak dan karbohidrat ini pada saat ditambahkan ke dalam pakan mampu menyumbangkan enzim eksogenous pada udang vaname. Tabel 3 Aktivitas enzim protease, lipase, amilase dan populasi bakteri (PB) Perlakuan (jenis bakteri) Parameter Protease (UA/menit) Lipase (µmol AL/menit) Amilase (UA/ menit) PB (Log cfu/g)

M2

Z3

K9

S3

Kontrol

0,0892

0,0975

0,1157

0,1742

0,0182

1,565

157,165

33,985

131,255

22,255

0,0022

0,0028

0,0063

0,0348

0,0134

7,14±0,019  b 

7,86±0,16 b

7,96±0,33 b

7,96±0,63 b 

6,07±0,05 a

 

27

Keterangan : (p<0,05) Huruf yang berbeda pada garis yang sama menunjukkan perbedaan antar perlakuan. Penambahan probiotik pada pakan komersial terhadap udang uji juga memberikan pengaruh yang nyata pada populasi bakteri di saluran pencernaan udang uji (Tabel 3 dan Lampiran 19). Hal ini memacu peningkatan aktivitas enzim endogenous yang diproduksi oleh bakteri dalam saluran pencernaan. Ini dibuktikan dengan populasi bakteri yang lebih tinggi pada saluran pencernaan udang uji pada perlakuan M2, Z3, K9 dan S3 dibandingkan kontrol. Peningkatan populasi bakteri sejalan dengan aktivitas enzim protease, lipase dan amilase pada saluran pencernaan udang vaname. Pembahasan Seleksi probiotik dari saluran pencernaan udang vaname menghasilkan kandidat probiotik yang mampu mensekresikan enzim yaitu enzim protease (K9), enzim lipase (Z3) dan enzim amilase (M2) ataupun ketiga enzim baik protease, lipase dan amilase (S3). Isolat K9 sebagai bakteri proteolitik yaitu bakteri yang mampu mensekresikan enzim protease yang akan merombak protein menjadi asam amino. Isolat Z3 sebagai

bakteri lipolitik yaitu bakteri yang mampu

mensekresikan enzim lipase yang akan mencerna trigliserida dan menghasilkan asam lemak rantai panjang dan gliserol. Sedangkan isolat M2 sebagai bakteri amilolitik yaitu bakteri yang mampu mensekresikan enzim amilase yang akan mendegradasi pati menjadi maltosa dan glukosa yang kemudian diangkut ke dalam sitoplasma sel dan digunakan sebagai sumber karbon dan energi. Syarat lain suatu bakteri dapat dijadikan kandidat probiotik adalah mampu bertahan pada paparan pH asam dan basa dengan selisih log populasi yang kecil antara pH normal dengan pH asam dan pH normal dengan pH basa. Hal ini sangat penting karena bakteri probiotik harus mampu untuk bertahan pada pH asam lambung dan setelah itu probiotik akan akan berhadapan dengan garam empedu yang ber-pH basa. Bakteri yang mampu bertahan pada pH rendah atau asam dinyatakan bersifat asam atau resisten terhadap asam lambung dan yang berhasil bertahan pada pH basa dinyatakan resisten terhadap garam empedu (Chou & Weimer 1999). Keempat bakteri kandidat probiotik yang terpilih rata-rata

 

28

memiliki ketahanan terhadap pH asam dan basa dan tetap hidup sampai akhir pengamatan 8 jam. Hal ini diduga karena isolat diseleksi dari saluran pencernaan yang sudah beradaptasi dengan kondisi asam lambung dan garam empedu pada saluran pencernaan. Peran lainnya yang harus dimiliki suatu bakteri untuk dapat dijadikan kandidat bakteri probiotik yaitu mampu menghasilkan senyawa antibakteri yaitu peptida yang disintesis dalam ribosom sehingga menghambat perkembangan bakteri patogen khususnya V.harveyi yang banyak terdapat pada saluran pencernaan udang vaname dan mampu menjaga keseimbangan bakteri dalam saluran pencernaan. Supaya mampu hidup dan berkembang dengan baik pada saluran pencernaan maka kandidat probiotik harus mempunyai kemampuan menempel sehingga mampu mengkolonisasi substrat dengan baik. Apabila tidak mampu mengkolonisasi maka bakteri probiotik akan terlepas oleh konstraksi usus (Havenaar et al. 1992). Kandidat probiotik yang terpilih memiliki jumlah koloni yang relatif tinggi menempel pada substrat. Penambahan probiotik pada pakan komersial terhadap udang uji juga memberikan pengaruh yang nyata pada populasi bakteri di saluran pencernaan udang uji. Ini dibuktikan dengan populasi bakteri yang lebih tinggi pada saluran pencernaan udang uji pada perlakuan M2, Z3, K9 dan S3 dibandingkan kontrol. Hal ini memacu peningkatan aktivitas enzim endogenous yang diproduksi oleh bakteri dalam saluran pencernaan (Ziaei-Nejad et al. 2006). Peningkatan populasi bakteri sejalan dengan aktivitas enzim protease, lipase dan amilase pada saluran pencernaan udang vaname.

Dari hasil aktivitas enzim terlihat bahwa enzim

protease yang membantu penyederhanaan protein menjadi asam amino memiliki preferensi yang lebih besar digunakan sebagai energi oleh udang dibandingkan dengan enzim lipase atau enzim amilase sehingga mampu meningkatkan pertumbuhan. Penambahan probiotik ke dalam pakan komersial juga memberikan pengaruh yang nyata pada pertumbuhan udang vaname.

Perlakuan K9 yaitu

 

29

udang yang diberikan pakan komersial yang ditambah probiotik penghasil enzim protease menghasilkan pertumbuhan tertinggi dibandingkan perlakuan lainnya dan hal ini didukung dengan retensi protein yang tinggi serta kecernaan protein yang tinggi. Kecernaan yang tinggi menyebabkan protein dan energi nutrien pakan yang dapat diserap udang lebih tinggi sehingga energi akan lebih banyak tersimpan untuk pertumbuhan. Kecernaan pakan meningkat dengan adanya penambahan probiotik dalam pakan dibandingkan dengan pakan tanpa penambahan probiotik. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Handayani et al. (2000) bahwa bakteri pengurai yang ikut termakan akan membantu proses pencernaan dalam saluran pencernaan udang karena bakteri ini mampu memproduksi

enzim

protease,

amilase

serta

lipase

dan

meningkatkan

keseimbangan bakteri dalam saluran pencernaan. Enzim‐enzim  khusus  yang  dimiliki  oleh  bakteri  ini  sangat  membantu  dalam  pemecahan  molekul  kompleks  menjadi  molekul  sederhana  sehingga  akan  mempermudah  pencernaan lanjutan dan penyerapan oleh saluran pencernaan udang.   Pertumbuhan yang baik pada perlakuan K9 juga didukung dengan hasil  uji  in  vitro  bahwa  isolat  K9  paling  besar  mensekresikan  enzim  protease  dengan  diameter  hidrolisa  mencapai  20  mm,  populasi  bakteri  yang  menempel  pada  saluran  pencernaan  lebih  banyak  dibandingkan  isolat  lainnya  dan  tahan  terhadap  kondisi  asam  dan  basa  saluran  pencernaan.  Sehingga isolat K9 berkembang dengan baik pada saluran pencernaan udang  dan  mampu  menyumbangkan  enzim  protease  yang  mendukung  pertumbuhan  udang  vaname.  Enzim  protease  yang  disebut  juga  endopeptidase merupakan kelompok enzim yang paling penting pada udang  karena  peranannya  lebih  dari  60%  pada  pencernaan  udang  (Galgani  et  al.  1984; Tsai et al. 1986).  Udang vaname memiliki preferensi yang lebih tinggi  untuk  memanfaatkan  protein  sebagai  sumber  energi  dibandingkan  karbohidrat  dan  lemak.  Sebagaimana  diketahui  bahwa  udang  vaname  membutuhkan  protein  yang  tinggi  dibandingkan  ikan  tawar  dan  protein  berperan  sebagai  zat  pembangun  tubuh  (Watanabe  1988). Perlakuan  K9  memiliki nilai retensi protein yang paling tinggi dengan konversi pakan yang 

 

30

baik yang artinya dengan jumlah konsumsi pakan yang sama (Lampiran 20)  udang  perlakuan  K9  lebih  mampu  memanfaatkan  protein  pakan  sehingga  protein  yang  keluar  dalam  bentuk  amoniak  akan  berkurang  dan  hal  ini  berdampak baik bagi lingkungan. Selain itu dengan nilai konversi pakan yang  jauh lebih rendah dibandingkan kontrol maka hal ini sangat menguntungkan  bagi usaha budidaya udang.  Dari hasil penelitian ini kelangsungan hidup udang uji memberikan hasil yang tidak berbeda nyata antar perlakuan.

Hal ini diakibatkan oleh kuantitas

serta kualitas pakan yang diberikan cukup untuk mempertahankan kebutuhan pokok udang serta lingkungan yang terjaga dengan baik selama pemeliharaan.

KESIMPULAN   Dari saluran pencernaan udang vaname diperoleh 4 isolat potensial bakteri kandidat probiotik penghasil enzim protease (K9), lipase (Z3), amilase (M2) dan menghasilkan enzim protease, lipase dan amilase (S3). Penambahan probiotik K9 pada pakan mampu meningkatkan kinerja pertumbuhan udang sehingga probiotik K9 berpotensi untuk dijadikan probiotik komersial.

SARAN Dari hasil penelitian ini maka disarankan penggunaan probiotik K9 dalam pakan udang sehingga meningkatkan kinerja pertumbuhan udang vaname.

DAFTAR PUSTAKA

Akiyama DM, Dominy WG, Lawrence AL. 1992. Penaeid shrimp nutrition. in : Marine shrimp culture: Principles and Practise (ads A. W. fast and L. J. Lester). pp.535-566. Elsevier science, New York. Arellano CF. Olmos SJ. 2002. Thermostable 1-4 and 1-6 glucosidase enzymes from Bacillus sp isolated from a marine environment. World J microbial, Biotechnology 18, 791-795. Aslamyah S. 2006. Penggunaan mikroflora saluran pencernaan sebagai probiotik untuk meningkatkan pertumbuhan dan kelangsungan hidup ikan bandeng. [Disertasi]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Bairagi A, Ghosh KS, Sen SK, Ray AK. 2002. Enzyme producing bacterial flora isolated from fish digestive tracts. Aquaculture International 10 : 109-121. Bender GR, Marquis RE. 1987. Membrane ATP ases and acid tolerance of Actinomyces viscosus and Lactobacillus casei. Appl Environ Microbiol 53:2124-2128. Bergmeyer HU, Grassi M. 1983. Methods of Enzymatic Analysis. Volume ke-2. Weinheim: Verlag Chemie. Borlongan TG. 1990. Studies on the lipases of milkfish Chanos-chanos. Aquaculture 89:315-325. Brock JA, Main KL. 1994. A Guide to the common problems and diseases of cultured Penaeus vannamei. 242 pp. World Aquaculture Society, Baton Rouge. Los Angeles, USA. Characklis WG. 1990. Biofilm processes. Jon Willey and Sons. Inc Clark DJ, Lawrence AL, Swakon DHD. 1993. Apparent chitin digestibility in penaeid shrimp. Aquaculture, 109(1)51-57. Cho CY, Slingr Y, Baylay HS. 1982. Bioenergenetic of salmon fishes energetic intake, expenditure and productivity. Comp Biochemistry physiology 73B(1): 25-41. Chou LZ, Weimer B. 1999. Isolation and characterization of acid and bile tolerant isolates from strain of L. Acidophilus. Dairy science 82:23-31

33

Cousin M, Cuzon GM, Guillaume J. 1996. Digestibility of starch in Penaeus vannamei: in vivo and in vitro study on eight sample of various origin. Aquaculture, 147:(3-4)261-73. Cotteau P, Camara MR, Sorgeloos P. 1996. The effect of different level and source of dietary phospatydilcholine on the growth, survival, stress resistance, and fatty acid composition of postlarval Penaeus vannamei. Aquaculture, 147 (3-4) 261-73. Clarke RTJ, Bauchop T. 1977. Microbial Ecology of Gut. London. New York. San Fransisco : Academic Press. Das KM. Tripathy SD. 1991. Studies on the digestive enzymes of grass carp, Ctenopharingodon idella Val. Aquaculture 92: 11-21. Dewanti R, Wong ACL. 1995. Influence of culture conditions on biofilm formation by E.coli 157:H7. Food microbiology 67:456-456 Ding X et al. 2004. Effects of probiotics on growth and activities of digestive enzymes of Penaeus vannamei. J.Fish Sci. China 11, 580-584 Fuller R. 1989. Probiotics in man and animal. Microbiology 66 :365-378. Fuller R. Turvy A. 1971. Bacteria associated with the intestinal wall of the fowl (Gallus domesticus). Journal of Applied Bacteriology 34:617-622. Fuller R. 1992. Probiotics. The Scientific Basic. London, New York, Tokyo, Melbourne, Madras: Chapman and Hall. Gatesoupe, FJ. 1999. The use of probiotics in aquaculture. Aquaculture 180,147165. Galgani ML, Benyamin Y, Ceccaldi HJ. 1984. Identification of digestive proteinase of Penaeus kerathurus (Forskal) : a comparison and moult cycle. Comp. Biochem. Physiol.118A,1267-1271. Galgani ML, Benyamin Y, Van WA, 1985. Purification, properties and immunnoassays of trypsin from the shrimp Penaeus japonicus. Comp. Biochem. Physiol.81B,447-452. Gullian M, Thompson F, Rodriguez J. 2004. Selection of probiotic bacteria and study of their immunostimulatory effects in Penaeus vannamei. Aquaculture 233,1-14. Guillaume J. 1997. In Crustacean Nutrition (L.R.D’Abramo D. E. Cocklin and D.M Akiyama eds.p.26. World Aquaculture Society, Baton Rouge, LA.

34

Hadioetomo RS. 1990. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pangan I. Bogor. Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi. Fakultas Teknologi Pertanian. Institut Pertanian Bogor. Handayani R, Kokarkin C, Astuti SM. 2000. Pemanfaatan enzim bakteri remedian pada pemeliharaan larva udang windu. (Laporan Penelitian). Jepara : Balai Budidaya Air Payau. Haryati. 2002. Respon larva ikan bandeng (Chanos chanos Forskal) terhadap pakan buatan dalam sistem pembenihan (disertasi). Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Havenaar R, Brink BT, Huis JHJ. 1992. Selection of strain probiotics use. Chapman and Hall, London. Hoshino T et al. 1997. Isolated of Pseudomonas sp. of fish intestine excretion an active protease at low temperature. Lett. Applied Microbiology 25:70-72. Itami T et al. 1998. Enhancement of disease resistance of kuruma shrimp, Penaeus japonicus, after oral administration of peptidoglican derived from Bifidobacterium thermophilum. Aquaculture 164: 277-288. Irianto A, Austin B. 2003. Probiotic in aquaculture (Rev). Journal of Fish Disease 25, 633-642. Jankauskiene R. 2002. Bacterial Flora of Fishes from Aquaculture: The genus Lactobacillus. Institute of Ecology Akademijos 2, Vilnius 2600. Lithuania, e-mail:[email protected]. http//www.hbu.Cas.C2-ResLim 2002-PRINT-151-154 pdf. Lemos D, Ezquerra JM, Garcia Carreno FL. 2000. Protein digestion in penaeid shrimp: digestive proteinase, proteinase inhibitors and feed digestibility . Aquaculture 186,89-105 Lester LJ, and Pante JR. 1992. Penaeidae Temperature and Salinity Responses. In : Marine Srimp Culture : Principle and Practise (eds Fast AW and Lester LJ.) pp.515-34. Elsevier, Amsterdam, Nedherlands. Mohanty SN, Swain SK, Tripathy SD. 1993. Growth and survival of rohu spawn fed on a liver basal diet. J. Inland Fish.Soc.India 25 (2),41-45. Mohanty SN, Swain SK, Tripathy SD. 1996. Rearing of Ctala (Catla catla Ham) spawn on formulated diets. J. Aquac. Trop.11, 253-258 Murni. 2004. Pengaruh penambahan bakteri probiotik Bacillus sp. dalam pakan buatan terhadap aktivitas enzim pencernaan, efisiensi pakan dan

35

pertumbuhan ikan gurame. [Tesis]. Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Nakayama A, Yano Y, Yoshida K. 1994. New method for isolating barophiles from intestinal content of deep-sea fishes retrieved from abyssal zone. Applied and Enviromental Microbiology. 60 (11):4210-4212. Opuszynski K, Shireman JV. 1994. Herbivorous Fishes, Culture and Use for Weed Management. Florida. London, Tokyo: Cooperation with USFWS National Fisheries Research Centre Gainesville, CRC Press Boca Raton Ann Arbor. Robertson L, Lawrence AL, Castile F. 1993. Interaction of salinity and feed protein level on growth of Penaeus vannamei. Journal of Applied aquaculture, 2 (1)43-54. Robertson PAW et al. 2000. Use of carnobacterium sp. as a probiotic for atlantic salmon (Salmo salar L.) and rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum). Aquaculture .185:235-243. Sugita H, Miyajima C, Deguchi Y. 1991. The vitamin B12-producing ability of the intestinal microflora of freshwater fish. Aquaculture.165: 269280. Sugita H, Hirose Y, matsuo N, Deguchi Y. 1998. Production of the antibacterial substance by bacillus species strain NM12, an intestinal bacterium of Japanese coastal fish. Aquaculture 165: 269-280 Parker RB.

1974. Probiotics, the other half of the antibiotic story. Animal Nutrition and Health 29:4-8.

Salminen S, Ouwehand A, Benno Y, Lee YK. 1999. Probiotics: how should they be defined. Trend Food Science Technology. 10,107-110. Sharma OP, Bhukhar SKS. 2000. Effect of aquazyn-TM-1000, a probiotic on the water quality and growth, nutrien utilization and carcass composition in mrigal fry. J. Aquaculture. 4. 29-35. Shiau SY. 1998. Nutrient requirement of penaied shrimp. Aquaculture 164(14)77-93. Spanggaard S, Huber I, Nielsen J, Nielsen T, Appel KF, Gram L. 2000. The mikroflora of rainbow trout intestinal: a comparison of traditional and molecular identification. Aquaculture 182:1-15. Steel RGD, Torrie JH. 1993. Prinsip dan Prosedur Statistika. Gramedia Pustaka Utama. 748 hal.

36

Sumere, S. Umiyati, Endhay K, Kontara. 1987. Teknik Pembuatan Pakan Udang. INFIS manual Seri No. 50: 1 – 18 pp. Takeuchi T. 1988. Laboratory Work, Chemical Evaluation of Dietary Nutrients. Di dalam : Watanabe T, Editor. Fish Nutrition and Mariculture. Tokyo: department of Aquatic Biosciences, University of Fisheries. Hlm 179-288. Tsai IH, Chuang KL, Chuang JL. 1986. Chymotrypsins in digestive tracts of crustacean decapods (shrimps). Comp. Biochem. Pysiol. 85, 235240. Verschuere L, Rombaut G, Sorgeloos P, Vertraete W. 2000. Probiotics bacteria as biological control agents in aquaculture. Microbiol. Mol. Biol. Rev.64,655-671. Walford JT, Lam TJ. 1993. Development of digestive tract and proteolytic enzyme activity in seabass Lates calcalifer larvae and juveniles. Aquaculture 109:187-205 Wang YB. 2007. Effect of probiotics on growth performance and digestive enzyme activity of the shrimp Penaeus vannamei. Aquaculture 269: 259-264. Wang YB, Xu ZR, 2006. Efects of probiotics for common carp (Cyprinus carpio) based on growth performance and digestive enzyme activities. Anim. Feed Scie. Technol. 127, 283-293. Wang YB, Xu ZR, Xia MS. 2005. The effectiveness of commercial probiotics in northern white shrimp (Penaeus vannamei L.) Pond. Fish . Sci. 71,1034-1039. Watanabe T. 1988. Fish Nutrition and Marineculture. JICA texkbook the general aquaculture course. Tokyo. Department of Aquatic Biosciences .Tokyo University of Fisheries Xue XM et al.1999. Characterization of cellulase activity in the digestive system of the redclaw crayfish (Cherax quadricarinatus). Aquaculture .180:373-386. Zhou XX, Yan BW, Wei FL. 2008. Effect of probiotic on larvae shrimp (Penaeus vannamei) based on water quality, survival rate and digestive enzyme activities. Aquaculture. 287;349-353. Zonneveld N, Huisman AE, Boon JH. 1991. Prinsip-prinsip Budidaya Ikan. Jakarta. PT. Gramedia

37

Ziaei SN et al. 2006. The effect of Bacillus spp. bacteria used as probiotics on digestive enzyme activity, survival and growth in the indian white shrimp Fenneropenaeus indicus. Aquaculture 252, 516-524. Zita A, Hermanson M. 1997. Effect of bacterial cells surface structure and hydrophocity on attachment to activated sludge flocs. Journal Appl and Environ. Microbiol 63: 1168-1170

LAMPIRAN

Lampiran 1 Prosedur uji hidrolisis Protein, lemak dan karbohidrat.

Hidrolisis Kasein 1. Media SWC steril yang telah dicampur susu skim 2% dituang pada cawan petri 2. Inokulasikan bakteri yang akan diuji dengan metode gores pada permukaan agar yang telah memadat, disebarluaskan seluas 0,5 cm 3. Cawan petri tersebut diinkubasi dalam inkubator pada suhu 29°C selama 24-48 jam 4. Hasil hidrolisis kasein diamati, yaitu daerah jernih pada agar, sebaliknya apabila daerah koloni tetap keruh berarti tidak terjadi hidrolisis 5. Ukur diameter wilayah yang dihidrolisis,

Hidrolisis Lemak 1. Media SWC steril yang telah dicampur dengan minyak zaitun 2% dituang pada cawan steril 2. Inokulasikan bakteri yang akan diuji dengan metode gores pada permukaan agar yang telah memadat 3. Inkubasikan pada inkubator pada suhu 29°C selama 24-48 jam 4. Amati hasil hidrolisis lemak tersebut, dengan menuangkan CuSO4 jenuh pada permukaan agar cawan, Bakteri yang mampu menghidrolisis lemak, di sekitar pertumbuhan koloninya terdapat warna hijau mengkilat, sedang di daerah lain tidak, 5. Ukur diameter wilayah yang dihidrolisis

Hidrolisis Pati 1. Media SWC steril yang telah dicampur dengan kanji 2% dituang pada cawan steril 2. Inokulasikan bakteri yang akan diuji dengan metode gores pada permukaan agar yang telah memadat 3. Inkubasikan pada inkubator pada suhu 29 °C selama 24 - 48 jam 4. Amati hasil hidrolisis pati tersebut, dengan menuangkan reagen Kl pada permukaan agar cawan, Bakteri yang mampu menghidrolisis pati, di sekitar

39

pertumbuhan koloninya terdapat daerah jernih atau terang, sedang di daerah lain terdapat warna gelap, 5. Ukur diameter wilayah yang dihidrolisis

40

Lampiran 2 Prosedur analisa proksimat (Takeuchi 1988).

Prosedur analisa kadar air -

Cawan dipanaskan pada suhu 110° C selama 1 jam, kemudian didinginkan alam desikator selama 30 menit dan ditimbang (A)

-

Sampel ditimbang sebanyak 1 gram dan dimasukkan ke dalam cawan, kemudian ditimbang (B)

-

Cawan dan sample dipanaskan tanpa penutup pada suhu 110° C selama 2 jam kemudian didinginkan dalam desikator sampai suhu ruang dan ditimbang (C)

(B – C) Kadar Air (%) = ________ x 100 (B - A)

Prosedur analisis kadar abu -

Cawan dipanaskan pada suhu 600 °C selama 1 jam dalam muffle furnase, kemudian dibiarkan suhu muffle furnase turun dampai 110°C, selanjutnya cawan dikeluarkan dan didinginkan dalam desikator selama 30 menit, kemudian ditimbang (A)

-

Sampel ditimbang sebanyak 1 sampai 2 gram dan dimasukkan ke dalam cawan porselin kemudian ditimbang (B)

-

Cawan porselin dan sample dipanaskan dalam muffle furnase pada suhu 600° C selama 1 jam kemudian dibiarkan semalam

-

Cawan porselin dan sample dikeluarkan, kemudian didinginkan dalam desikator selama 30 menit kemudian ditimbang (C)

(B – C) Kadar Abu (%) = ________ x 100 (B - A)

41

Prosedur analisis kadar protein

1. Tahap Oksidasi - Bahan ditimbang sebanyak 0,5 g (A) - Masukkan bahan, katalis, H2SO4 pekat 10 ml ke dalam labu kjedahl - Labu kjedahl dipanaskan pada suhu 400°C sehingga terjadi perubahan warna menjadi hijau bening, didinginkan dan diencerkan sampai 100 ml 2. Tahap Destruktif - 5 ml larutan hasil oksidasi dimasukkan ke dalam labu destilasi - Tambahkan 10 ml NaOH 0,05 N - Masukkan H2SO4 0,05 N sebanyak 10 ml ke dalam Erlenmeyer dan tambahkan 2-3 tetes MnSO4 , dekstruksi selama 10 menit 3. Tahap titrasi - Hasil destruksi dititrasi dengan NaOH 0,05 N - Catat hasil titran - Lakukan prosedur yang sama terhadap blanko

Kadar Protein = 0,0007 x 6,25 x (ml blanko- ml titran) x 20 x 100% A Prosedur analisis lemak -

Labu ekstraksi dipanaskan pada suhu 110° C selama 1 jam setelah itu didinginkan selama 30 menit dalam desikator kemudian timbang,

- Sampel ditimbang sebanyak 1-2 gram dan dimasukkan ke dalam tabung filter kemudian ditutup dengan lapisan tipis dari katon abrorbent dan dikeringkan dalam oven pada suhu 90 sampai 100 °C selama 2-3 jam -

Tempatkan tabung filter di

dalam ruang ekstraksi dari alat soxhlet dan

hubungkan dengan kondensor labu ekstraksi yang telah diisi dengan 100 ml petroleum ether sebelumnya panaskan ether pada labu ekstraksi dalam water bath pada suhu 60 -70 °C selama 16 jam - panaskan labu ekstraksi pada suhu 100 C kemudian ditimbang (B) ( B-A ) - Kadar Lemak (%) = ______________________ x 100 Berat sampel

42

Prosedur analisis serat kasar - Kertas filter dipanaskan dalam oven pada suhu 110° C kemudian didinginkan di desikator selama 15 menit, - Cawan porselin dipanaskan pada suhu 550° C selama 1 jam di dalam muffle furnase, kemudian biarkan sampai suhu muffle furnase turun sampai 110° C kemudian didinginkan dalam desikator selama 30 menit - Sample ditimbang sebanyak 1-2 gram, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer, tambahkan 200 ml H2SO4 1,25 % panas dan 1 ml iso-amyl alcohol sebagai agen antifoam - Hubungkan labu dengan kondensor, dididihkan 30 menit ,labu diputar secara periodic agar bahan tidak mengendap - Labu dipindakan dan cairan disaring kemudian dicuci 3 kali dengan 40-50 ml air panas - Residu yang terdapat dalam filter dipindahkan ke dalam labu orijinal yang berisi air panas dan ditambahkan 50 ml NaOH 5% panas dan iso amyl alcohol lalu diencerkan dengan 200 ml air panas - Selanjutnya labu dididihkan dan disaring kembali dengan filter fiber nilon kemudian dicuci sebanyak 5 kali berturut turut dengan 40 sampai 50 ml air panas - Residu yang terdapat pada filter dipindahkan dalam kertas filter dan dicuci dengan air tambahkan 15 ml alcohol dan 10 ml ether, Selanjutnya dikeringkan pada suhu 110° C sampai tercapai bobot konstan - Kertas saring dimasukkan ke dalam cawan porselin dipanaskan dalam muffle furnase pada suhu 550°C selama 1 jam atau sampai beratnya konstan kemudian didinginkan Berat yang hilang selama pembakaran - Kadar serat kasar (%) = ___________________________________ x 100 Berat Sampel Prosedur analisis karbohidrat -

200 mg/0,2 gram sample ditambah dengan 0,7 N HCL 20 ml kemudian dihidrolisis selama 2,5 jam dalam water bath

43

- Selanjutnya dipindahkan ke labu ukur 100 ml dan dinetralkan dengan 1 N NaOH (dengan indicator phenol red) - Protein diendapkan dengan cara menambahkan 5 ml ZnSO4 5% dan 5 ml Ba(OH)2 0,3 N - Tambahkan akuades sampai volume 100 ml dan saring dengan kertas saring - Filtrat yang dihasilkan dipipet 2 ml dan ditambah 2 ml reagent nelson sampai berubah warna biru tua - Tambahkan akuades sampai volume 25 ml , tunggu 25 menit supaya bereaksi - baca absorbansi pada panjang gelombang 500 nm Pereaksi Cu++ Larutan A

: 12 g / Na tartrat ditambahkan 24 g a 2CO3 dilarutkan dengan air hingga 60 ml dan ditambahkan 40 ml CuSO 10% dan 16 g NaHCO3 ke dalam larutan tersebut, diencerkan dengan air suling sampai 250 ml

Larutan B

: dilarutkan 180 g Na2SO4 dalam air panas, kemudian dididihkan

Pereaksi Nelson Larutan A

: 25 g Amonium Molibdat (NH)2 NO2O24, 4H2O dalam 450 ml air ditambahkan 21 ml H2SO4 (p)

Larutan B

: 3 g NaHSO ke dalam 25 ml air dicampurkan larutan A dan B sampai 1 L

Pembuatan standar : Timbang 0,0625 g dextrose dan larutkan dalam air 200 ml ( konsentrasi standar menjadi 250 ppm), Pipet 0, 5, 10, 15 dan 20 ml larutan standar perlakuan sama dengan sample, yaitu ditambahkan pereaksi Cu++ dan Nelson

Perhitungan = {[(Abs sample/Abs standar rata-rata) x (100 ml Vol akhir/bobot sampel)]X 100%} /106

44

Lampiran 3 Prosedur analisa Cr2O3 pakan dan feses. a. Penambahan cromium oksida (Cr2O3) dalam pakan ƒ

Pakan dalam bentuk tepung dicampur merata dengan Cr2O3sebanyak 0,5-1% dari jumlah pakan,

ƒ

CMC sebanyak 20 g/kg pakan disiram dengan air panas dan diaduk sampai kental, lalu ditambahkan dalam pakan sambil diaduk sampai merata,

ƒ

Kemudian pakan dicetak menjadi bentuk pellet dan dikeringkan,

ƒ

Pemberian pakan + Cr2O3 dilakukan selama 15 hari dan koleksi feces dimulai pada hari ke 7,

b. Prosedur analisis cromium oksida (Cr2O3) ƒ

Larutan asam perklorat sebanyak 3 ml ditambahkan ke dalam labu kjeldahl, feses ditimbang sebanyak 0,1-0,2 g dalam berat kering dan ditambahkan 5,0 ml larutan asam nitrat (specific gravity 1,42), kemudian dipanaskan perlahan-lahan selama 30 menit sampai volume larutan 1,0 ml,

ƒ

Larutan

didinginkan,

setelah

dingin

larutan

diaduk

untuk

menghancurkan feses, kemudian tambahkan 3,0 ml asam perklorit (70%), ƒ

Selanjutnya larutan didestruksi (untuk menghancurkan logam-logam) dengan cara memanaskan larutan dengan suhu tidak terlalu panas ± 80 O

C selama 10 menit sampai kelihatan uap putih dan larutan berganti

warna dari hijau menjadi kuning atau orange, ƒ

Larutan didinginkan dan diencerkan dengan akuades sampai 100 ml, kemudian didiamkan selama beberapa menit pada suhu ruang,

ƒ

Absorbansi larutan diukur pada panjang gelombang 350 nm, Y = 0,2089X + 0,0032 Dimana : Y = Absorbsi X = Cr2O3 mg/100 ml

45

Perhitungan nilai kecernaan berdasarkan rumus Takeuchi (1988), yaitu : Kecernaan total= 100 x (1 – a’/a) Kecernaan nutrien = 100 x (1-a/a’ x b/b’) Keterangan : a’ = indikator Cr2O3dalam feses (%) a = indikator Cr2O3dalam pakan (%) b’ = nutrien dalam feses (%) b

= nutrien dalam pakan (%)

46

Lampiran 4 Prosedur analisis aktivitas enzim. Amilase Substrat usus diambil sebanyak 1 ml, Tahap selanjutnya dengan melakukan prosedur seperti di bawah ini : Sumber: (Bergmeyer dan Grassi,1983) Perlakuan

Blanko (ml)

Standar (ml)

Sampel (ml)

- Soluble starch dalam

1,0

1,0

1,0

-

1,0

-

1,0

-

1,0

-

-

-

buffer sitrat pH 5,7 - Maltosa standar - Ekstrak enzim - Akuades

Dikocok dan diinkubasi dalam shaker water bath pada suhu 32 C selama 30 menit DNS

3,0

3,0

3,0

Panaskan pada suhu 100 C selama 10 menit Diencerkan dengan akuades sampai volume tertentu atau tergantung kepekatan warna Didiamkan beberapa menit pada suhu ruang , kemudian diukur absorbansinya pada panjang gelombang 578 nm

Ppm ______ 360,32

X

1 ____ 30

X 100 = Unit/menit/ml

Lipase - Substrat lipase stabil ( minyak zaitun 1,5 ml ditambah 1,5 ml Tris-HCL 0,1 sebagai buffer dengan pH 8 - Kemudian ditambahkan 1,0 ml ekstrak enzim - Campuran dihomogenkan dan diinkubasi selama 6 jam pada suhu 37° C - Reaksi dihentikan dengan menambah 3 ml etil alkohol 95% - Titrasi sample dengan NaOH 0,01 N dengan menggunakan Thymopthalein 0,9% (w/v) dalam etanol sebagai indicator - Prosedur yang sama dilakukan terhadap blanko - Satu unit aktivase lipase didefinisikan sebagai volume NaOH 0,05 N yang dibutuhkan untuk menetralisir asam lemak yang dilepaskan selama 6 jam inkubasi dengan substrat, setelah dikoreksi dengan blanko

47

Protease Substrat usus diambil sebanyak 1 ml dan ditambahkan 0,2 ml CaCl2 2 mmol/L, Tahap selanjutnya dengan melakukan prosedur seperti di bawah ini :

Perlakuan

Blanko (ml)

Standar (ml)

Sampel (ml)

- Buffer borat (0,01 M, pH 8,0)

1,0

1,0

1,0

- Substrat kasein (20 mg/ml pH 8,0

1,0

1,0

1,0

- HCL ( 0,05 mg/ml )

0,2

0,2

0,2

- Enzim dalam CaCl2 (10 mmol/l)

-

-

0,2

- Tirosin standar (5 mmol/l)

-

0,2

-

- Akuades

0,2

-

-

Diinkubasi dalam shaker water bath pada suhu 37°C selama 10 menit - TCA (0,1 M)

3,0

3,0

3,0

- Akuades

-

-

0,2

- Enzim dalam CaCl2 (10 mmol/l

0,2

0,2

-

Didiamkan pada suhu 37°C selama 10 menit, selanjutnya sentrifuse dengan kecepatan 3500 rpm selama 10 menit - Filtrat

1,5

1,5

1,5

- Na2CO3 (0,4 M)

5,0

5,0

5,0

- Folin ciocalteau

1,0

1,0

1,0

Diamkan pada suhu 37° C selama 20 menit, kemudian baca absorbansinya pada panjang gelombang 578 nm

Rumus aktivitas protein OD sample – OD Blanko U/menit/ml = _______________________ x faktor pengenceran x T-1 OD Standar – OD Blanko Dimana U = Aktivitas enzim dalam international Unit per menit OD = Absorbansi T = Waktu (menit)

48

Lampiran 5 Luas zona hasil hidrolisis protein, lemak dan karbohidrat isolat bakteri. Hasil hidrolisis (mm) No

Isolat

1

K19

20

2

Z3

13

3

M2

1

15

4

Z1

20

8

5

Z10

6

Z5

5

12

7

Z11

5

3

9

8

Z7

6

2

4

9

M1

1

10

S3

2

8

3

11

S2

13

9

3

12

K9

20

Protease

Lipase

Amilase 2

9

8

12

15

49

Lampiran 6 Uji Ketahanan Asam lambung. Jumlah Populasi Mikrob Periode Pengamatan NO

ISOLAT 2 normal

pH 2,5 7

1,1 x 10

6

4 pH 7,5 7

1,2 x 10

7

pH normal 1,4 x 107

1,2 x 10

pH 2,5

pH 7,5 7,

2,4 x 10

normal 7

6,6 x 10

8

pH 2,5 7

4,2 x 10

pH 7,5 7

5,8 x 10

7

pH normal 8,1 x 107

4,2 x 10

7

6,1 x 107

pH 2,5

pH 7,5

1

K19

1,3 x 10

2

Z3

2,5 x 107

2,1 x 107

2,4 x 107

2,8 x 107

2,1 x 107

2,5 x 107

3,6 x 107

2,8 x 107

3,4 x 107

4,8 x 107

3,5 x 107

3,8 x 107

3

M2

2,6 x 107

2,1 x 107

2,3 x 107

3,7 x 107

5,3 x 107

3,5 x 107

6,3 x 107

5,8 x 107

5,9 x 107

8,3 x 107

7,5 x 107

6,8 x 107

4

Z1

1,8 x 108

1,4 x 108

1,6 x 108

2,2 x 108

1,5 x 108

1,9 x 108

4,6 x 108

1,7 x 108

2,5 x 108

6,6 x 108

1,8 x 108

2,6 x 108

5

Z10

3,8 x 107

3,1 x 107

3,6 x 107

5,8 x 107

3,6 x 107

4,1 x 107

8,7 x 107

4,7x 107

6,1 x 107

9,6 x 107

4,9 x 107

6,3 x 107

6

Z5

4,9 x 107

4,3 x 107

4,6 x 107

6,7x 107

4,7 x 107

5,1 x 107

7,2 x 107

5,1 x 107

6,7 x 107

2,7 x 108

1,2 x 108

2,3 x 108

7

Z11

2,9 x 108

2,5 x 108

2,6 x 108

4,7 x 108

3,2 x 108

4,3 x 108

5,1 x 108

3,9 x 108

4,8 x 108

6,4 x 108

4,5 x 108

5,1 x 108

8

Z7

8,7 x 107

8,1 x 107

8,4 x 107

9,8 x 107

9,1 x 107

8,8 x 107

1,5 x 108

1,0 x 108

1,2 x 108

1,9 x 108

1,3 x 108

1,4 x 108

9

M1

5,5 x 107

5,0 x 107

5,1 x 107

7,5 x 107

5,3 x 107

6,8 x 107

8,7 x 107

5,7, x 107

7,8 x 107

9,7 x 107

6,9 x 107

8,1 x 107

10

S3

3,6 x 107

3,1 x 107

3,2 x 107

6,8 x 107

4,7 x 107

5,4 x 107

7,6 x 107

5,8 x 107

6,7 x 107

8,2 x 107

6,3 x 107

7,6 x 107

11

S2

5,7 x 107

3,3 x 107

5,3 x 107

9,4 x 107

5,6 x 107

7,4 x 107

1,7 x 108

9,7 x 107

1,2 x 108

1,7 x 108

1,2 x 108

1,7 x 108

12

K9

6,5 x 107

5,9 x 107

6,4 x 107

7,5 x 107

6,7 x 107

7,8 x 107

8,0 x 107

7,5x 107

7,5 x 107

9,1 x 107

7,3x 107

7,8 x 107

50

Lampiran 7 Data optical density bakteri selama 24 jam.

NO

OPTICAL DENSITY (CFU/mL) Periode pengamatan (Jam) ISOLAT 0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

24

1

M1

0,453

0,659

0,724

0,872

1,009

1,186

1,28

1,32

1,378

1,409

1,233

1,208

0,906

2

K9

0,231

0,419

0,687

0,814

1,045

1,051

1,144

1,282

1,441

1,47

1,527

1,527

1,512

3

S2

0,221

0,451

0,625

0,982

1,129

1,394

1,398

1,381

1,415

1,523

1,552

1,562

1,569

4

K19

0,087

0,105

0,475

0,766

0,821

1,039

1,295

1,304

1,354

1,304

1,271

1,13

1,367

5

Z10

0,235

0,438

0,543

0,898

1,107

1,239

1,329

1,397

1,528

1,781

1,429

1,389

1,118

6

Z11

0,276

0,371

0,467

0,91

1,151

1,281

1,379

1,403

1,537

1,607

1,59

1,296

1,197

7

Z5

0,245

0,434

0,543

0,91

1,043

1,183

1,266

1,332

1,333

1,346

1,483

1,071

1,003

8

S3

0,225

0,436

0,585

0,794

0,939

1,155

1,158

1,343

1,483

1,507

1,503

1,501

1,542

9

M2

0,221

0,451

0,749

0,983

0,992

1,126

1,311

1,312

1,473

1,429

1,38

1,351

1,245

10

Z3

0,261

0,386

0,648

0,707

0,724

1,125

1,221

1,209

1,214

1,268

1,339

1,335

1,227

11

Z7

0,376

0,758

0,869

0,972

1,063

1,169

1,217

1,24

1,243

1,28

1,294

1,41

0,903

12

Z1

0,351

0,611

0,629

0,892

0,964

1,0892

1,247

1,557

1,654

1,663

1,689

1,531

1,022

51

Lampiran 8 Uji konfrontasi dan antagonistik bakteri. No

Isolat

Daya Hambat

Diameter zona hambat ( mm)

1

K19

+

10

2

Z3

+

8

3

M2

+

12

4

Z1

+

9

5

Z10

-

0

6

Z5

+

8

7

Z11

+

10

8

Z7

+

2

9

M1

+

10

10

S3

+

9

11

S2

+

13

12

K9

+

11

Lampiran 9 Data penempelan bakteri pada substrat. Isolat

Jumlah koloni yang menempel/mm2

K19

6,519

Z3

6,815

M2

3,852

Z1

8,000

Z10

7,704

Z5

4,444

Z11

4,148

Z7

4,444

M1

7,407

S3

10,370

S2

0,474

K9

1,422

52

Lampiran 10 Data bobot tubuh udang vaname selama pemeliharaan. Lama pemeliharaan (Hari) 0 10 20 30 40 50 60

PERLAKUAN A1 8,20 9,10 11,60 12,60 12,90 13,20 13,60

A2 A3 B1 B2 8,10 8,30 8,30 8,50 9,13 10,10 9,40 9,10 11,30 11,20 12,30 11,90 13,53 12,32 12,50 12,30 13,98 12,80 12,90 12,90 14,60 13,00 12,90 13,23 14,70 13,80 13,61 13,61

B3 8,20 9,10 11,40 12,00 12,80 13,12 13,60

C1 8,20 10,50 13,30 13,80 14,00 15,30 15,60

C2 8,40 10,20 13,60 13,90 14,30 15,70 16,10

C3 8,20 10,10 12,10 12,70 13,80 14,30 15,70

D1 8,40 10,10 11,70 12,60 13,50 14,67 15,30

D2 8,60 10,30 12,10 12,70 13,50 14,00 15,00

D3 8,30 9,60 12,30 12,80 13,20 14,24 15,10

E1 8,40 9,00 9,80 10,,2 11,20 11,80 12,80

E2 8,60 9,00 9,80 10,40 11,50 12,00 12,90

E3 8,60 8,90 9,60 10,20 11,10 11,70 12,40

53

Lampiran 11 Laju pertumbuhan relatif udang vaname selama pemeliharaan (60 hari)

SK Between groups Within groups Total

Perlakuan E B A D C Sig

Perlakuan

Pertumbuhan Relatif

A1 A2 A3 Rata-rata±SD B1 B2 B3 Rata-rata±SD C1 C2 C3 Rata-rata±SD D1 D2 D3 Rata-rata±SD E1 E2 E3 Rata-rata±SD

65,9 81,5 66,3 71,2±8,9 64,0 60,1 65,9 63,3±2,92 90,2 91,7 91,5 91,1±0,76 82,1 74,4 81,9 79,5±4,39 52,4 50,0 44,2 48,9±4,21

JK 3079,34

db 4

KT 769,8

251,162

10

25,116

3330,51

4

N 3 3 3 3 3

1 48,87a

Fhit 30,651

2 63,33b 71,23bc

1

0,82

3

sig 0,000

4

71,23cd 79,47c 0,72

91,13d 1

Keterangan : (p<0,05) Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan antar perlakuan

54

Lampiran 12 Kecernaan protein udang vaname. Perlakuan

Kecernaan protein(%)

A1 A2 A3 Rata-rata±SD B1 B2 B3 Rata-rata±SD C1 C2 C3 Rata-rata±SD D1 D2 D3 Rata-rata±SD E1 E2 E3 Rata-rata±SD

74,68 75,72 78,60 76,34±2,03 74,43 76,19 79,62 76,75±2,64 80,53 79,45 77,83 79,27±1,37 81,06 79,03 79,71 79,93±1,03 71,83 72,69 75,56 73,36±1,36

. SK Between groups Within groups Total

Perlakuan E A B C D sig

JK 82,29

db 4

KT 20,57

35,63

10

3,56

117,94

4

N 3 3 3 3 3

1 73,36a 76,33bc 76,74cd

0,06

Fhit 5,77

sig 0,011

2 76,33b 76,74c 79,27d 79,93d 0,054

Keterangan : (p<0,05) Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan antar perlak

55

Lampiran 13 Retensi protein udang vaname. Perlakuan

Retensi Protein (%)

A1 A2 A3 Rata-rata±SD

36,38 39,61 35,36 37,12±2,22

B1 B2 B3 Rata-rata±SD C1 C2 C3 Rata-rata±SD D1 D2 D3 Rata-rata±SD E1 E2 E3 Rata-rata±SD

29,93 32,21 36,46 32,87±3,21 43,57 50,10 47,23 46,97±3,27 40,62 37,47 41,25 39,78±2,02 24,59 24,42 21,12 23,38±1,96

SK Between groups Within groups Total

Perlakuan E B A D C Sig

JK 914,902

db 4

KT 228,725

69,093

10

6,905

983,994

4

N 3 3 3 3 3

1 23,3767a

2 32,8667b 37,1167bc

Fhit 33,104

3

sig 0,000

4

37,1167c 39,1700c 46,9667d

Keterangan : (p<0,05) Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan antar perlakuan

56

Lampiran 14 Perhitungan retensi protein udang vaname. Keterangan bobot udang

bobot udang

kadar protein

kadar protein

kadar protein

kadar protein

awal (gram)

akhir (gram)

tubuh awal (%)

tubuh awal (g)

tubuh akhir (%)

A1

8,20

14,10

16,41

134,56

A2

8,10

15,10

16,30

A3

8,30

14,10

B1

8,30

B2

Perlakuan

Konsumsi pakan

kadar protein

Protein yang

(g)

pakan (%)

dikonsumsi udang (g)

Retensi Protein (%)

tubuh akhir (g)

Protein yang disimpan dalam tubuh (%)

Protein yang disimpan dalam tubuh (g)

17,84

251,54

1,43

116,98

1005,00

32,00

321,60

36,38

132,03

17,39

262,59

1,09

130,56

1030,00

32,00

329,60

39,61

16,52

137,12

17,83

251,40

1,31

114,29

1010,00

32,00

323,20

35,36

13,90

16,90

140,27

17,12

237,97

0,22

97,70

1020,00

32,00

326,40

29,93

8,50

13,90

16,85

143,23

17,57

244,22

0,72

101,00

980,00

32,00

313,60

32,21

B3

8,20

14,00

16,64

136,45

17,83

249,62

1,19

113,17

970,00

32,00

310,40

36,46

C1

8,20

15,80

16,20

132,84

17,32

273,66

1,12

140,82

1010,00

32,00

323,20

43,57

C2

8,40

16,50

16,30

136,92

17,82

294,03

1,52

157,11

980,00

32,00

313,60

50,10

C3

8,20

16,20

16,90

138,58

18,07

292,73

1,17

154,15

1020,00

32,00

326,40

47,23

D1

8,40

16,00

16,50

138,60

17,42

278,72

0,92

140,12

1078,00

32,00

344,96

40,62

D2

8,60

15,50

16,60

142,76

17,41

269,86

0,81

127,10

1060,00

32,00

339,20

37,47

D3

8,30

15,60

16,70

138,61

17,82

277,99

1,12

139,38

1056,00

32,00

337,92

41,25

E1

8,40

13,20

16,20

136,08

16,45

217,14

0,25

81,06

1030,00

32,00

329,60

24,59

E2

8,60

13,30

16,50

141,90

16,78

223,17

0,28

81,27

1040,00

32,00

332,80

24,42

E3

8,60

12,90

16,30

140,18

16,42

211,82

0,12

71,64

1060,00

32,00

339,20

21,12

57

Lampiran 15 Konversi pakan udang vaname. Perlakuan

Konversi pakan (%)

A1 A2 A3 Rata-rata±SD B1 B2 B3 Rata-rata±SD C1 C2 C3 Rata-rata±SD D1 D2 D3 Rata-rata±SD E1 E2 E3 Rata-rata±SD

2,264 2,044 2,186 2,164±0,112 2,336 2,266 2,034 2,212±0,158 1,93 1,75 1,79 1,83±0,094 1,89 1,95 1,94 1,93±0,036 2,37 2,21 2,28 2,29±0,08

SK Between groups Within groups Total

Perlakuan C D A B E Sig

JK 0,461

db 4

KT 0,115

0,109

10

0,011

0,570

4

N 3 3 3 3 3

1 1,83a 1,93a

0,267

Fhit 10,565

sig 0,001

2 2,16b 2,21b 2,29b 0,184

Keterangan : (p<0,05) Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan antar perlakuan

58

Lampiran 16

Rata-rata tingkat kelangsungan hidup (%) udang vaname selama pemeliharaan (60 hari).

Perlakuan

Jumlah Populasi awal (ekor)

Jumlah populasi akhir (ekor)

A B C D E

30,00 ± 0,00 30,00 ± 0,00 30,00 ± 0,00 30,00 ± 0,00 30,00 ± 0,00

28,67 ± 0,57 28,67 ± 0,57 29,67 ± 0,57 30,00 ± 0,00 24,33 ± 4,04

SK Between groups Within groups Total

JK 4,462

db 4

KT 1,116

22,331

10

2,231

26,773

4

Perlakuan A B C D E Sig

N 3 3 3 3 3 3

Tingkat Kelangsungan hidup (%) 95,56 ± 0,57 96,67 ± 0,57 98,02 ± 0,57 100,00 ± 0,00 81,11 ± 4,04

Fhit 0,500

sig 0,737

SR 95,56 95,56 95,56 96,67 96,67 0,418

Keterangan : (p<0,05) Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan antar perlakuan

59

Lampiran 17 Data kualitas air selama pemeliharaan udang vaname. PERLAKUAN A

Waktu ULANGAN 1

ULANGAN 2

ULANGAN 3

Salinitas

Suhu

DO

pH

Alkalinitas

NO2

NH3

Salinitas

Suhu

DO

pH

Alkalinitas

NO2

NH3

Salinitas

Suhu

DO

pH

Alkalinitas

NO2

NH3

Awal

15

25,6

6,46

7,92

110

0,002

0,000685

15

26

6

7,78

122

0,032

0,0006

15

26,6

6,73

7,97

122

0,032

0,022

Tengah

15

26,2

6,76

8,03

112

0,002

0,00097

15

26,2

6,97

8,07

130

0,047

0,0011

15

26

6,79

8,06

120

0,041

0,028

Akhir

15

26,3

5,19

7,75

164

0,013

0,02

15

26,3

6,5

7,84

176

0,014

0,023

15

26,3

6,5

7,99

162

0,015

0,042

NO2

NH3

Salinitas

Suhu

DO

NO2

NH3

PERLAKUAN B

Waktu ULANGAN 1 Salinitas

Suhu

DO

pH

Alkalinitas

ULANGAN 2 NO2

NH3

Salinitas

Suhu

DO

pH

Alkalinitas

ULANGAN 3 pH

Alkalinitas

Awal

15

25,7

6,2

7,86

120

0,02

0,015

15

26,3

5,31

7,73

122

0,015

0,453

15

26,2

5,9

7,82

110

0,04

0,0126

Tengah

15

26,2

6,6

7,92

124

0,023

0,0246

15

25,6

5,8

7,88

128

0,0018

0,408

15

25,9

6,7

8,06

118

0,04

0,0157

Akhir

15

26,3

5,09

7,8

178

0,017

0,029

15

26,3

4,04

7,7

186

0,015

0,0269

15

26,3

5,83

7,85

168

0,017

0,0234

PERLAKUAN C

Waktu ULANGAN 1

ULANGAN 2

ULANGAN 3

Salinitas

Suhu

DO

pH

Alkalinitas

NO2

NH3

Salinitas

Suhu

DO

pH

Alkalinitas

NO2

NH3

Salinitas

Suhu

DO

pH

Alkalinitas

NO2

NH3

Awal

15

25,9

6,24

7,73

120

0,031

0,00057

15

26

5,85

7,82

122

0,032

0,0154

15

25,9

6,18

7,77

110

0,034

0,000434

Tengah

15

25,9

6,6

8,04

122

0,038

0,0014

15

25,6

5,8

8,05

126

0,037

0,00096

15

26,2

6,7

7,89

122

0,039

0,000537

Akhir

15

26,3

4,43

7,54

150

0,016

0,025

15

26,3

5,04

8,16

156

0,016

0,038

15

26,3

5,77

7,4

170

0,02

0,0103

60

PERLAKUAN D

Waktu ULANGAN 1 Sal

Suhu

DO

pH

Alkal

ULANGAN 2 NO2

NH3

Sal

Suhu

DO

pH

ULANGAN 3 Alkal

NO2

NH3

Sal

Suhu

DO

pH

Alkal

NO2

NH3

Awal

15

25,5

6,02

7,73

120

0,032

0,352

15

26

5,87

7,76

123

0,031

0,0125

15

25,9

5,76

7,8

124

0,023

0,0122

Tengah

15

25,9

6

8,04

124

0,034

0,0269

15

26,2

6,64

8,05

136

0,036

0,026

15

25,9

5,76

7,86

148

0,029

0,0165

Akhir

15

26,3

4,48

7,5

182

0,017

0,0269

15

26,3

4,43

7,72

220

0,013

0,0275

15

26,3

4,68

7,56

202

0,018

0,0023

PERLAKUAN E

Waktu ULANGAN 1

ULANGAN 3

ULANGAN 2

Sal

Suhu

DO

pH

Alkal

NO2

NH3

Sal

Suhu

DO

pH

Alkal

NO2

NH3

Sal

Suhu

DO

pH

Alkal

NO2

NH3

Awal

15

25,4

5,86

7,9

123

0,0182

0,432

15

25,4

6,2

7,8

123

0,044

0,432

15

25,5

5,7

7,75

132

0,121

0,0158

Tengah

15

25,9

6,02

7,97

138

0,0068

0,483

15

25,7

6,5

8,07

140

0,07423

0,464

15

26

6,48

7,83

94

0,122

0,032

Akhir

15

26,3

4,11

7,4

184

0,016

0,0172

15

26,3

5,23

7,64

184

0,016

0,0195

15

26,3

5,93

7,45

184

0,016

0,0305

61

Lampiran 18 Aktivitas enzim amilase, lipase dan protease udang vaname. Perlakuan A B C D E

Aktivitas protease (UA/menit) 0,0892 0,0975 0,1157 0,1742 0,0182

Aktivitas amilase (UA/menit) 0,0022 0,0028 0,0063 0,0348 0,0134

Aktivitas lipase (µmolAL/menit) 1,570 157,17 33,990 131,26 22,260

Lampiran 19 Jumlah Populasi bakteri pada udang vaname. Perlakuan A1 A2 A3 Rata-rata B1 B2 B3 Rata-rata C1 C2 C3 Rata-rata D1 D2 D3 Rata-rata E1 E2 E3 Rata-rata

SK Between groups Within groups Total

Saluran pencernaan awal akhir 8

Feses awal

akhir

4,8 x 10 6,4 x 108 4,3 x 108

6,5 x 10 3,5 x 109 3,6 x 109

3,2 x 10 3,5 x 107 3,7 x 107

4,2 x 107 5,2 x 107 3,9 x 107

5,0x108±1,097

5,96x109±1,704

4,43x107±0,25

5,1x107±0,681

5,2 x 108 4,7 x 108 5,2 x 108

4,7 x 109 6,7 x 109 6,5 x 109

4,2 x 107 4,3 x 107 4,8 x 107

4,9 x 107 4,8 x 107 5,6 x 107

5,0x 108±0,2

5,96 x 109±1,1

4,43 x 107±0,3

5,1 x 107±0,4

6,7 x 108 3,9 x 108 4,8 x 108

3,5 x 1010 6,5 x 1010 5,4 x 1010

3,2 x 107 3,5 x 107 3,6 x 107

6,2 x 107 5,2 x 107 5,7 x 107

5,13 x 108±1,3

5,13 x 1010±1,5

3,4 x 107±0,1

5,7 x 107±0,5

8

9

5,4 x 10 3,6 x 108 4,8 x 108

7,5 x 10 6,4 x 1010 7,3 x 1010

3,7 x 10 3,1 x 107 3,4 x 107

6,2 x 107 5,8 x 107 4,2 x 107

4,6 x 108±0,9

7,1 x 1010±0,5

3,6 x 107±0,3

5,4 x 107±0,8

8

10

7

9

7

7

4,4 x 10 5,4 x108 3,7 x 108

5,6 x 10 4,6 x 109 5,6 x 109

3,2 x 10 3,3 x 107 3,5 x 107

3,7 x 107 5,2 x 107 4,2 x 107

4,5 x 108±0,8

5,23 x 109±0,5

3,33x 107±0,1

4,4 x 107±0,7

JK 8,092

db 4

KT 2,023

1,093

10

0,109

9,184

14

Fhit 18,51

sig 0,008

62

Perlakuan E A B C D Sig

N 3 3 3 3 3

1 6,0667a

2 7,670b 7,860b 7,963b 7,966b 0,714

1,000

Keterangan : Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan antar perlakuan (p<0,05)

Lampiran 20

Jumlah pakan yang dikonsumsi udang vaname selama pemeliharaan (60 hari). Perlakuan

Jumlah pakan yang dikonsumsi (g)

A1 A2 A3 Rata-rata±SD B1 B2 B3 Rata-rata±SD C1 C2 C3 Rata-rata±SD D1 D2 D3 Rata-rata±SD E1 E2 E3 Rata-rata±SD

1005,00 1030,00 1010,00 1015,00±13,23

1030,00 1040,00 970,00 1013,33±37,86

1040,00 980,00 1010,00 1010,00±30,00

1015,00 1005,00 1032,00 1017,33±13,65

1010,00 1005,00 1010,00 1008,33±2,89

63