Raritní infekce identifikované soupravami ErbaLachema v ONP Příbram
Petr Ježek Oblastní nemocnice Příbram,a.s. Spoluautoři: Petr Petráš-NRL pro stafylokoky,SZÚ Praha Pavel Švec-CCM,MU Brno Josef Scharfen-NRL pro patogenní aktinomycety, Oblastní nemocnice a.s. Trutnov
Úvod 1. 2. 3. 4. 5.
Zvyšující se výskyt podmíněně patogenních nebo nových druhů mikroorganismů Zavedení molekulárně biologických metodtaxonomické změny Zlepšující se diagnostika rutinních laboratoří Pokroky v medicíně-vyšší přežívání pacientů Zvyšující se výskyt imunosuprimovaných pacientů Stále se zvyšující věk populace Lednice 6/2012
2
1.Helcococcus kunzii Pacient č.1 -žena,53 let,v III/2007 operace plochonoží na PDK,vytvořen pakloub a t.r. ještě reoperace. Po té řada reoperací až do VI/2011-kdy:výrazný otok s defektem cca 30x30mm na dorzu-t.č. ještě bez ATB Bez mikrobiol.vyšetření a bez ATB v VIII/2011 přijata na CHIR dle RTG = susp.osteomyelitis Hnis na mikrobiolog.vyš. = Kl.oxytoca Ko za týden-vyjmutí uvolněného K drátu Mikrobiol. Vyšetření-K drát + redon Empiricky cotrimoxazol 2x 960mg,potom ko-aminoPNC 2x1.2g – bez výrazného efektu Lednice 6/2012
3
1.Helcococcus kunzii Mikrobiol.nález=Kl.oxyto ca,St.pseudintermedius,H.kunzii Dle výsledku citlivosti nasazen klindamycin 4x300mg po dobu 25 dní Doplňující léčba:Iruxol a Askina krytí Defekt vyléčen a pac. dosud bez obtíží Lednice 6/2012
Foto P.Čapek 4
Mikrobiologický nález Nález
Rána 21.8
Rána 27.8.
Redon 27.8.
Klebsiella oxytoca
+
+
-
Staphylococcus pseudintermedius
-
-
+
Helcoccus kunzii
-
+
-
Lednice 6/2012
5
1.Helcococcus kunzii Pacient č.2-muž,83 let,se zhnisaným ateromem v oblasti zad Ambulantně excize + stěr na mikrobiol.vyš. Pacient zhojen p.p. bez ATB Mikrobiol. nález:H.kunzii+St.epidermidis
Lednice 6/2012
6
Mikrobiologie M.D.Colins a kol.(1993) G+,CAT -,fakultativně anaerobní koky v párech event. hloučcích Kolonie transparentní nehemolytické(event.sla bě α) Typické testy:PYR+,LAP Výskyt:dolní extremity s poruchou krvení Kultura H.kunzii na KA. Foto P.Ježek Etiolog.účast:není plně Lednice 6/2012 objasněna
7
Identifikace Streptotest24-ErbaLachema TEST
Pac.1 Pac.1
Pac.2 Pac.2
TEST
Pac.1 Pac.1
Pac.2 Pac.2
TEST
Pac.1 Pac.1
Pac.2 Pac.2
PYR
+
+
ESL
+
+
AMG
-
-
HIP
-
NT
INU
-
-
TGT
-
-
NAG
+
+
MAN
-
-
MLT
-
-
LAP
-
-
SOR
-
-
RAF
-
-
bMN
-
-
MLB
-
-
TRE
-
-
GLR
-
-
RIB
-
-
SOE
-
-
bGL
+
-
LAC
-
-
VPT
-
-
bGA
+
+
PUL
-
-
CAT
+
+
aGA
-
-
ARG
-
-
PHS
-
-
S06
+
8
Identifikace:Streptotest24-ErbaLachema
Pacient č.1 Helcococcus kunzii
Identif.skóre Identif.skóre
89,7
T-index
Pacient č.2
0.19
Helcococcus kunzii
Identif.skóre Identif.skóre
89,7
T-index
0.19
Abiotrophia adiacens
8,14
0.21
Abiotrophia adiacens
8,14
0.21
Alloiococcus otitis
2,80
-0.07
Alloiococcus otitis
2,80
-0.07
Výsledek Pacient č.1:Neidentifikováno Pacient č.2:Neidentifikováno Lednice 6/2012
9
Identifikace dalšími metodami Metoda
Pacient 1
Pacient 2
Hmotnostní Helcococcus spektrofotometrie kunzii
Helcococcus kunzii
rep-PCR (GTG)5 Helcococcus kunzii
NT
Lednice 6/2012
10
2.Oligella urethralis Pacient:žena,56 let-v gynekologické ambulanci-cysta labia velikosti cca 2x1cm v oblasti mediální strany pravého labia major Přítomnost cca 10 let-bez klinických ani subjektivních obtíží Provedena hysteroskopie,frakcionovaná kyretáž + exstirpace cysty Okolí klidné,obsah cysty nažloutlé barvy Hojení p.p. bez ATB Lednice 6/2012
11
Mikrobiologie Lautrop a kol.(1970)Moraxella like org. Později M.urethralisuveřejněný popis odpovídá popisu deBorda (1942)-řadí ji do č.Mimae Rossau a kol.(1987)=samostat-ný druh a rod r.Oligella řazen do č.Alcaligenaceae Kultura O.urethralis na KA.Foto P.Ježek
Lednice 6/2012
12
Mikrobiologie G- drobné koky nebo kokobacily ve dvojicích Růst:Aerobní,nenáročné -na KA i MC Kolonie:KA-žlutavé, mazlavé,nehemolytic-ké Biochemicky málo aktivní OXI+ a většinou i CAT+ Výskyt:urogenitální aparát a moč Patogenita:zřejmě nízká
O.urethralis,barvení Gram,zvětšeno 1000x.Foto P.Ježek
Lednice 6/2012
13
Identifikace NEFERMTest24-ErbaLachema
Taxon
Identifikační skóre
Oligella urethralis
T-index
95,11 3,08
0,65 0,41
Moraxella canis
0,87
0,45
Alcaligenes faecalis
0,23
0,23
Moraxella caprae
0,15
0,33
Bordetella hinzii
0,15
0,20
Comamonas testosteroni
Velmi dobrá identifikace
14
Identifikace NEFERMTest24 ErbaLachema TEST OXI CAT IND ARG URE LYS GLU FRU INO SUC
Výsledek
+ + -
TEST PHS bGA bGL NAG MAN XYL CEL GAL NO3 NO2
Výsledek
+
TEST ESL GGT LAC MLT TRE SCI 37°C 42°C
Výsledek
+ + + + 15
Identifikace dalšími metodami
Hmotnostní spektrofotometrie Oligella urethralis rep-PCR - neprovedeno
Lednice 6/2012
16
3.Campylobacter fetus ssp. fetus Pacient:muž,75 let,přijat na INT pro bolesti na hrudi a dyspnoické problémy A:ICHS,stav po IM,těžká dysfunkce levé komory,kardiostimulátor,DM,chron.ren.selhání v predialyzačním stadiu Při přijetí:dyspnoe,bolest v oblasti sterna a epigastria,suchý kašel,bez T,normotenzní,při námaze dušnost, dehydrován,vpravo bazálně s chrůpky RTG-objemný levostranný fluidothorax, Laboratoř:FW82/h,CRP208,PCT 1,6µg/l,leu12,4x109/l Mikrobiologie:3xHE+moč,sputum-nelze ATB:ampicilin/sulbactam4,5g/d a klarithromycin 1g/d Lednice 6/2012
17
3.Campylobacter fetus ssp. fetus Druhý den: klin.stav bez vývoje, Laboratoř:CRP 346↑,leu 11,9x109/l,ostatní bez pohybu Provedena hrudní pce:cca 60ml slámově žluté zakalené tekutiny,ukončena pro nespolupráci pacienta-odesláno na mikrobiologii(aerobně!) Třetí den:exitus v ranních hodinách Mikrobiologie: v HE Campylobacter fetus ssp. fetus post mortem Lednice 6/2012
18
Mikrobiologie McFadyean a Stockman (1909)-z hovězího dobytka Vinzent a kol.(1947) poprvé u člověka (septikémie) = Vibrio fetus Véron a Chatelain(1973) a Simbert (1974) revize taxonomického postavení = Campylobacter fetus Lednice 6/2012
19
Mikrobiologie Campylobacter fetus- 2 poddruhy ssp.fetus ssp.venerealis Význam:veterinární medicína-infekční zmetání skotu a ovcí a infekční infertilita skotu Člověk:septikémie,infikované aneurysma, celulitida,endokarditida,spondylodiscitida,osteo myelitida,CNS infekce,potraty aj. „Reptile-like kmeny“- u plazů,epidemiologicky zřejmě nevýznamné Lednice 6/2012
20
Mikrobiologie Vyšetření:v HE po 5 dnech G- spirálovité drobné tyčky,z anaerobní kultivace na Schaedler.a. Punktát DH=negativní Moč = negativní Kolonie-drobné, transparentní,bez hemolýzy,růst i mikroarofilně Biochemie = chudá C.f.ssp.fetus,barvení gram,zvětšeno 1000x.Foto P.Ježek
Lednice 6/2012
21
Identifikace Anaerotest23 ErbaLachema
Test
Výsledek Test
Výsledek Test
Výsledek
CAT
+
NIT
+
RAF
-
OXI
+
SUC
-
CEL
-
IND
-
SAL
-
XYL
-
GLU
-
TRE
-
ARA
-
MLT
-
MAN
-
SOR
-
FRU
-
RHA
-
cefoperazon
R
GAL
-
NAG
-
metronidazol
R
LAC
-
bGL
-
k.nalidixová
R
MLZ
-
ESL
-
42°C
URE
-
MNS
-
22
Identifikace Anaerotest23 ErbaLachema
Identifikační skóre
Taxon Campylobacter gracilis Bacteroides ureolyticus Veilonella parvula Eubacterium lentum Fusobacterium nucleatum Porphyromonas asacharolytica
95,08 3,38 1,31 0,16 0,04 0,01
T-index 1,0 0,78 0,69 0,55 0,45 0,37
Velmi dobrá identifikace Lednice 6/2012
23
Identifikace dalšími metodami
Hmotnostní spektrofotometrie rep-PCR s primerem (GTG)5 Campylobacter fetus bez zařazení do ssp.
Lednice 6/2012
24
Shluková analýza rep-PCR s primerem (GTG)5 Podobnost (%) 96 98 100
CCM 5682 C. fetus subsp. fetus CCM 6213 C. fetus subsp. fetus CCM 5993 C. fetus subsp. venerealis T
CCM 3951 C. fetus subsp. venerealis CCM 5681 C. fetus subsp. venerealis CCM 5683 C. fetus subsp. fetus CCM 6210 C. fetus subsp. fetus HE 119 CCM 5992 C. fetus subsp. venerealis p.Švec-CCM,PřF MU Brno Lednice 6/2012
25
4.Varibaculum cambriense Pacient:muž,68 let,dlouhodobě léčen pro acne rosacea s chronickým zánětem víček na ORL ambulanci s otokem tváře a víček vpravo po vymáčknutí furunkulu-tuhý infiltrát Incize-malé množství sanquinolentní tekutiny a bělavá hmota Stěr na mikrobiolog.vyšetření Sutura s drénem(24 hod.) Terapie:ko-aminoPNC 2x1,2g Rána zhojena p.p.,pacient bez obtíží Lednice 6/2012
26
Mikrobiologie V.Hall a kol.(2003)-jediný druh rodu Varibaculum Taxonomie: č.Actinomycetaceae Fylogenetická příbuznost: r.Actinomyces, r.Arcanobacterium,r.Actinobaculum, r.Mobiluncus Lednice 6/2012
27
Mikrobiologie G+ rovné nebo difteroidní tyčky rostoucí anaerobně obvykle za 48 hod. Kolonie:malé,konvexní,transparentní a nehemolytické (Schaedler agar) CAT+,GLU,SAC,RIB+ Výskyt:vzácně v abscesech s různou lokalizací a IUD Přirozený výskyt není znám
V.cambriense,barvení Gram,zvětšeno 1000x.Foto P.Ježek
Lednice 6/2012
28
Identifikace ANAEROTest23 ErbaLachema TEST
Výsledek
TEST
Výsledek
TEST
Výsledek
CAT
-
URE
-
bGL
-
IND
-
NIT
+
ESL
-
GLU
+
SUC
+
MNS
+/-
MLT
+/-
SAL
-
RAF
-
FRU
-
TRE
-
CEL
-
GAL
-
MAN
-
XYL
-
LAC
-
RHA
-
ARA
-
MLZ
-
NAG
-
SOR
29
Identifikace ANAEROTest23 ErbaLachema
Taxon
Identifikační skóre
Actinomyces odontolyticus Actinomyces meyeri Clostridium botulinum b.A Atopobium minutum Peptostreptococcus anaerobius Prevotella disens
99,53 0,35 0,04 0,03 0,02 0,01
Velmi dobrá identifikace
T-index
0,75 0,33 0,16 0,19 0,05 0,00 30
Identifikace dalšími metodami NRL pro patogenní aktinomycety Sekvenace genu 16Sr RNA Varibaculum cambriense
Lednice 6/2012
31
Závěr taxon
databáze
Helcococcus kunzii
ano
výsledek doporučení identifikace identifikován ???
Oligella urethralis
ano
identifikován
žádné
Campylobacter fetus ssp. fetus
není
neidentifikován
doplnit
Varibaculum cambriense
není
neidentifikován
doplnit 32
Závěr Pravděpodobnost zvyšujícího se výskytu raritních či méně často vyskytujících nebo nových druhů mikroorganismů v klinickém materiále Potřebnost pravidelného doplňování databází v diagnostických soupravách Využívání jiných metod identifikace 33
34
