ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic

ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic FONS Symposium klinické biochemie Pardubice, 23.9. – 25.9.2012 M. Tomíšková, J. Skřičková, 1 I. Klabenešová, M. Dastych 2 Klinika nemocní plicních a tuberkulózy 1 Oddělení klinické biochemie a hematologie 2 Fakultní nemocnice v Brně - Bohunicích a Lékařská fakulta Masarykovy univerzity Brno

Gastrin-Releasing Peptid (GRP) |

peptid s 27 aminokyselinami

|

fyziologicky stimuluje uvolňování gastrinu v lidském gastrointestinálním traktu a způsobuje vasodilataci v dýchacím ústrojí

|

u malobuněčného karcinomu plic (SCLC) byla zjištěna zvýšená exprese a uvolňování GRP

Progastrin-releasing Peptid |

extrakce GRP je náročný proces nevhodný k rutinnímu použití pro velmi krátký poločas v krvi

|

jeho prekurzor - Progastrinreleasing Peptide (ProGRP) je stabilní

|

může být stanoven v séru s použitím Elisa testu na rekombinantním ProGRP

Vlastnosti proGRP |

fyziologicky nachází v malé koncentraci v krvi každého člověka

|

není tumor specifický protein - nenádorové plicní choroby - jiné zhoubné nádory

Hodnota ProGRP v lidském séru u zdravých jedinců 2-50 pg/ml | medián 20 pg/ml, 95.percentil = 35pg/ml | medián u nemocných se SCLC 250 pg/ml, 95.percentil je 1500 pg/ml | 20% nemocných s SCLC je hodnota více jak 10x větší než u benigních plicních chorob |

Vyšetřování proGRP u nemocných na KNPT ve FN Brno Soubor nemocných s plicním onemocněním vyšetřených v roce 2010 na KNPT ve FNB, Bohunice Cíl – Srovnání hodnot ProGRP u skupiny nemocných s : |

benigním plicním onemocněním

|

nemalobuněčným bronchogenním karcinomem (NSCLC)

|

malobuněčným bronchogenním karcinomem - limitovaným stádiem - extensivním stádiem

Metoda vyšetření ProGRP Architect proGRP je chemiluminiscenční dvoukroková metoda na mikročásticích CMIA (Chemiluminiscent Microparticle ImunoAssay) |

Vzorek nemocného + paramagnetické mikročástice potažené protilátkami anti-ProGRP

|

Vazba Pro GRP + protilátky na mikročásticích

|

konjugát protilátek anti ProGRP + akridinium

|

vznik reakční směs + roztoky pre –Trigger a Triger

|

chemoluminiscenční reakce

|

Měření množství detekovatelného ProGRP (přímá úměra signálu v relativních světelných jednotkách detekovatelného optikou systému analyzátoru Architekt i Systém)

Procentuální zastoupení nemocných n=149 (100%) 20,8 38,3

40,9

Benigní

NSCLC

SCLC

Tabulka 1. Srovnání hodnot proGRP dle typu onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem

N

Průměr Medián

10% 90% 46 - 12 946

Min Max 22 - 101 958

SCLC

57

5 670

1 032

NSCLC

61

55

41

28 - 62

21 - 728

Jiná nenádorová plicní onemocnění

31

45

38

26 - 74

21 - 92

10% 90%

Min Max

Výsledky K-W testu1 a <0,001

b b

b) Po transformaci dekadickým logaritmem

N

Průměr Medián

SCLC

57

2,9

3,0

1,7 - 4,1 1,3 - 5,0

NSCLC

61

1,6

1,6

1,4 - 1,8 1,3 - 2,9

31

1,6

1,6

1,4 - 1,9 1,3 - 2,0

Jiná nenádorová plicní onemocnění 1 statistická

Výsledky K-W testu1 a <0,001

b b

významnost hodnocena Kruskal-Wallis testem a, b – homogenní skupiny bez významných rozdílů (hodnoceno post hoc pomocí mnohonásobného porovnání metodou průměrného pořadí)

Obrázek 1. Srovnání hodnot proGRP dle typu onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem

N=57

N=61


N=57

N=31

Median 25%-75% 10%-90%

12000

p1 < 0.001

10000

8000

6000

4000

2000 b

Dekadický logaritmus proGRP (pg/ml)

a

proGRP (pg/ml)

N=31

6

14000

5

a

Median 25%-75% 10%-90%

p1 < 0.001

4

3

2

b

b

NSCLC

Jiné

1

b

0

0

SCLC

NSCLC

Onemocnění pacienta 1 statistická

N=61

Jiné

SCLC

Onemocnění pacienta

významnost hodnocena Kruskal-Wallis testem a, b – homogenní skupiny bez významných rozdílů (hodnoceno post hoc pomocí mnohonásobného porovnání metodou průměrného pořadí)

Tabulka 2. Srovnání hodnot NSE dle typu onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem

N SCLC NSCLC

53 35

Průměr Medián 140,9 25,4

63,2 20,4

10% 90% 13,2 305,0 10,3 54,4

Min Max 9,6 979,0

Výsledky M-W testu1 < 0,001

8,2 - 60,4


N SCLC

53

Průměr Medián 1,8

1,8

10% 90%

Min Max

Výsledky M-W testu1

1,1 - 2,5 1,0 - 3,0 < 0,001

NSCLC

1 statistická

35

1,3

významnost hodnocena Mann-Whitney testem

1,3

1,0 - 1,7 0,9 - 1,8

Obrázek 2. Srovnání hodnot NSE dle typu onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem

N=53

N=35 Median 25%-75% 10%-90%

350

NSE (mg/ml)

N=53

p1 < 0.001

300 250 200 150 100 50 0

N=35 Median 25%-75% 10%-90%

2,5

p1 < 0.001

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0

SCLC

NSCLC


1 statistická

3,0

Dekadický logaritmus NSE (mg/ml)

400



SCLC

NSCLC


Obrázek 3. Srovnání hodnot proGRP u pacientů s SCLC dle pokročilosti onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem

N

Průměr

Medián

10% 90%

Extenzivní stadium (ED)

31

8 790

1 097

46 - 19 939

Limitované stadium (LD)

26

1 949

952

N

Průměr

Medián

10% 90%


31

3,1

3,0

1,7 - 4,3


26

Min - Max Výsledky M-W testu1 22 101958

0,345

51 - 6 325 27 - 12 946


1 statistická

Min - Max Výsledky M-W testu1 1,3 - 5,0 0,345

2,8


3,0

1,7 - 3,8

1,4 - 4,1

Obrázek 3. Srovnání hodnot proGRP u pacientů s SCLC dle pokročilosti onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem N=31

b) Po transformaci dekadickým logaritmem N=31

N=26

20000 Median 25%-75% 10%-90%

16000

p1 = 0.345

14000 12000 10000 8000 6000 4000


18000

proGRP (pg/ml)

N=26

6 Median 25%-75% 10%-90%

5

p1 = 0.345

4

3

2

1

2000 0

0


1 statistická





Obrázek 4. Srovnání hodnot NSE u pacientů s SCLC dle pokročilosti onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem

N Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD)

29


24

64,3

77,5 42,8

10% 90% 21,7 737,0 12,0 143,0

Min Max 9,6 979,0 9,6 305,0


10% 90%

Min Max


0,007


N Extenzivní stadium (ED) Limitované stadium (LD) 1 statistická

29


1,9

1,3 - 2,9 1,0 - 3,0 0,007

24

1,6


1,6

1,1 - 2,2 1,0 - 2,5

Obrázek 4. Srovnání hodnot NSE u pacientů s SCLC dle pokročilosti onemocnění a) Bez transformace dekadickým logaritmem N=29

b) Po transformaci dekadickým logaritmem N=29

N=24

800

p1 = 0.007 Dekadický logaritmus NSE (mg/ml)

Median 25%-75% 10%-90%

700 600

NSE (mg/ml)

N=24

3,0

500 400 300 200

Median 25%-75% 10%-90%

2,5

p1 = 0.007

2,0

1,5

1,0

0,5

100 0

0,0

Extenzivní stadium (ED) 1 statistická





Obrázek 5b. Srovnání hodnot NSE a proGRP dle typu onemocnění Pacienti s NSCLC (N=35)

Pacienti s SCLC (N=53)

proGRP = 65 pg/ml

p = 0.002

3

2

NSE = 17 mg/ml

1

0

Spearman r = 0.014

4



proGRP = 65 pg/ml

Spearman r = 0.411

4

p = 0.935

3

2

NSE = 17 mg/ml

1

0 0

1

2

3

4


5

0

1

2

3

4


5

Obrázek 8. ROC křivka pro diskriminaci mezi SCLC a NSCLC na základě proGRP resp. na základě NSE

1

ROC křivka dle proGRP Plocha pod křivkou: AUC = 0.92 (95% IS 0.86; 0.97) p<0.001

Senzitivita

0,8

0,6

ROC křivka dle NSE

0,4

Plocha pod křivkou: AUC = 0.80 (95% IS 0.71; 0.89) p<0.001

proGRP

0,2

NSE

0 0

0,2

0,4

0,6

1 - Specificita

0,8

1

Obrázek 10. Doba přežití od data diagnózy dle proGRP 1,0

1,0

Cut off: proGRP = 2 000 pg/ml

Cut off: proGRP = 1 000 pg/ml ≤ 1 000 (N=28) >1 000 (N=29)

p1 = 0,861

0,6

0,4

0,2

≤ 2 000 (N=39)

0,8

Podíl žijících pacientů


0,8

>2 000 (N=18)

0,6

p1 = 0,176

0,4

0,2

0,0

0,0 0

5

10

15

20

25

30

35

40

0

5

10

15

20

25

30

35

40

Doba od diagnózy (měsíce)

Doba od diagnózy (měsíce) 1,0

Cut off: proGRP = 3 000 pg/ml ≤ 3 000 (N=45)


0,8

>3 000 (N=12)

Cut off pro proGRP

Pod cut off Medián N (95% IS)

1 000 pg/ml

11,3 13,0 29 28 měsíce měsíce (7,0; 19,0) (4,1; 18,5)

p1 = 0,003

0,6

0,4

0,2

0,0 0

5

10

15

20

25

30


35

40

Nad cut off Medián N (95% IS)

11,2 13,4 18 2 000 pg/ml 39 měsíce měsíce (9,9; 16,8) (4,3; 18,1) 13,9 1) P-hodnota Log-rank testu 5,3 měsíce měsíce 3 000 pg/ml 45 12 (10,3; (0,4; 10,1) 17 5)

Obrázek 12. Doba přežití od data diagnózy dle NSE 1,0

1,0

Cut off: NSE = 35 ng/ml

Cut off: NSE = 20 ng/ml ≤ 20 (N=9) > 20 (N=44)

p1 = 0,116

0,6

≤ 35 (N=15)

0,8

0,4

0,2



0,8

> 35 (N=38)

p1 = 0,077

0,6

0,4

0,2

0,0

0,0 0

5

10

15

20

25

30

35

40

0

5

10

15

20

25

30

35

40


Doba od diagnózy (měsíce) 1,0

Cut off: NSE = 50 ng/ml ≤ 50 (N=19)


0,8

> 50 (N=34)

Cut off pro NSE

Pod cut off Medián N (95% IS)

20 ng/ml

11,6 16,8 44 9 měsíce měsíce (9,8; 23,8) (6,8; 16,4)

35 ng/ml

11,6 13,9 38 15 měsíce měsíce (8,1; 19,6) (7,3; 15,9)

p1 = 0,343

0,6

0,4

0,2

0,0 0

5

10

15

20

25

30


35

40

1) P-hodnota

12,5 13,4 34 19 měsíce měsíce (9,5; 17,4) (8,0; 17,0)

Log-rank testu

50 ng/ml

Nad cut off Medián N (95% IS)

NSE u malobuněčného karcinomu výhody a nevýhody |

korelace mezi hodnotou NSE a rozsahem onemocnění v době diagnózy

|

korelace mezi hodnotou NSE a prognózou SCLC (DFS, OS) uváděna v některých pracích nebyla v našem souboru potvrzena

|

častá falešná pozitivita NSE v běžné praxi Vzhledem k obsahu NSE i v červených krvinkách a krevních destičkách je třeba provést oddělení krevních elementů nejpozději do jedné hod. od odběru, jinak jsou naměřené hodnoty NSE falešně pozitivní,měřitelnou interferenci způsobuje již obsah hemoglobinu vyšší než 50 mg/l!

ProGRP u malobuněčného karcinomu výhody a nevýhody |

|

| |

vyšší senzitivita u nemocných s SCLC bez ohledu na pokročilost onemocnění zvýšená hodnota proGRP u 79,9% pacientů oproti zvýšené hodnotě NSE u 57,8% s LD SCLC vyšší senzitivita v časném vzestupu při recidivě nebo progresi SCLC (sledování po ukončené léčbě) Větší stabilita proGRP při pokojové teplotě, zvl. při vyšetřování ProGRP z plasmy (3-7 hod.) Omezení metody: zvýšené proGRP u pacientů s renální insuficiencí – musí se tedy korelovat s hladinou kreatininu

Význam ProGRP - závěr | | | | |

| |

diagnostika SCLC (odlišení NSCLC, sekundární metastatické postižení plic) sledování efektu léčby záchyt časné recidivy nebo progrese onemocnění Při hodnotách proGRP nad 3000pg/ml je i prognostickým faktorem kombinované bronchogenní karcinomy (odhalení přítomnosti neuroendokrinní složky) odlišení falešně pozitivní hodnoty NSE Kombinace pro GRP a NSE má aditivní hodnotu – zvyšuje senzitivitu a specificitu v diagnostice SCLC

ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic

Recommend Documents