PENGARUH FRAKSI HEKSAN, KLOROFORM DAN METANOL DARI DAUN EUPATORIUM TRIPLW ERVE VAHL TERHADAP PERTUMBUHAN PLASMODIUM FALCIPARUM IN VITRO

ADLN - / PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

^

H

I j

SKRIPSI

KJC * . U K A V'.W A N 0 «**

rr 7)3V g r H«s

SRI H A S T U T I

?

(os-9 0 i[ioi)

PENGARUH FRAKSI HEKSAN, KLOROFORM DAN METANOL DARI DAUN EU PATO R IU M T R IP L W E R V E VAHL TERHADAP PERTUMBUHAN PLASMODIUM FALCIPARUM IN VITRO

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA SURABAYA

1995

SKRIPSI

PENGARUH FRAKSI HEKSAN ...

HASTUTI

ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

M I L I K FERPUSTAKAAN °VHZTERSI?AS A IR L A N O O V

S U R A B A Y A PENGARUH FRAKSI

HEKSAN, KLOROFORM DAN METANOL

DARI DAUN Eupatorium triplinerve V a h l . TERHADAP PERTUMBUHAN Plasmodium falciparum IN

VITRO

SKRIPSI DIBUAT

UNTUK

SARJANA

MEMENUHI FARMASI

UNIVERSITAS

PERSYARATAN PADA

MENCAPAI

FAKULTAS

AIRLANOOA

OELAR

FARMASI

SURABAYA

'
Dra. Aty W idyawaruyanti, Apt,

dr. Anni Syafriah, MS

Pembintbing Berta

Pembioibing Serta

SKRIPSI


HASTUTI


KATA

PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Allah swt segala

rahmat

menyelesaikan

dan

hidayah-Nya

skripsi

ini

sehingga

guna

penulis

meraenuhi

mencapai gelar sarjana pada Fakultas

Universitas

'

Selama pelaksanaan penelitian dan penyasunan ini banyak hambatan yang dapat

dapat

persyaratan

Farmasi

Airlangga Surabaya.

atas

terselesaikan

harus

berkat

dihadapi

dorongan

dan

dan

skripsi

semua

bantuan

ini dari

berbagai pihak khususnya Bapak/Ibu dosen pembimbing. Untuk itu pada kesempatan rasa

hormat

kepada 1. Bp.

dan

terima

ini

penulis

menyampaikan

kasih

yang

sebesar-besarnya

selaku

Pembimbing Utama,

: Prof.DR.Sutarjadi

Dra. Aty Widyawaruyanti dan dr.Anni Syafriah,MS. Pembimbing Serta yang

telah

dengan

sabar

Ibu selaku

memberikan

pengarahan dan saran-saran dalam menyelesaikan

skripsi

ini. 2. Kepala Jurusan Biologi Farmasi, Kepala dan Kepala Lab.

Botani

Lab.

Farmasi-Farmakognosi

Fitokimia Fakultas

Farmasi Universitas Airlangga beserta seluruh Staff dan Karyawan yang lelah

memberikan

sarana

dan

prasarana

serta membantu dalam pelaksanaan skripsi ini.

i

SKRIPSI


HASTUTI


ii 3. Direktur

Tropical

beserta

Staff

Disease

dan

Recearch

Karyawa

yang

Center telah

Surabaya memberikan

kesempatan dan fasilitas laboratorium. 4. Kepala Jurusan Parasitologi dan Kepala Jurusan

Anatomi

dan Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga beserta

seluruh

Staff

dan

Karyawan

yang

telah

memberikan bantuan fasilitas laboratorium. 5. Kepala

Badan

Penyakit

Penelitian

Menular

Kesehatan Jakarta

dan

Pengembangan

Bersumber Pusat

Binatang

beserta

Bagian

Departemen

seluruh

staff

karyawan yang telah memberikan kesempatan dan fasilitas untuk pelaksanaan penelitian 6. Ibu Dra.

memberikan

biaya

serta

kesempatan,

dengan

sabar

pelaksanaan penelitian Drh.

ini.

Suhintam

bantuan

fasilitas

membimbing

kami

dan

selama

ini.

Pusarawati,

M.Kes.

yang

membimbing selama penyelesaian penelitian 8. Bp. Drh.

bantuan

Siti Masroerah-Broto Sutaryo dan keluarga yang

telah

7. Ibu

dan

Chairul Anwar,MS,

Staff

Anatomi dan Histologi Fakultas

ini.

pengajar

Kedokteran

telah membantu dalam pengambilan

telah

foto-foto

dari

Lab.

Unair

yang

Flasmodium

falciparum Welch. 9. Bp/Ibu Dosen Fakultas Farmasi

Unair

terutama

dan penguji skripsi yang telah berkenan

memeriksa

memberikan saran untuk kesempurnaan skripsi

SKRIPSI


panitia dan

ini.

HASTUTI


ill

10.

Ibu

dan

saudara-saudaraku

memberikan motivasi dalam

tercinta

belajar

yang

dan

selalu

menyelesaikan

skripsi ini. 11. Rekan - rekan mahasiswa Fakultas Farmasi Airlangga

dan

semua

pihak

yang

Universitas

telah

membantu

penyelesaian skripsi ini. Semoga Allah swt senantiasa

memberikan

rahmat

hidayah-Nya atas kebaikan yang telah diberikan.

dan

Mengingat

keterbatasan penulis maka kritik dan saran yang membangun selalu

penulis

harapkan

dari

kesempurnaan skripsi ini. Akhir persembahkan untuk Almamater Universitas Airlangga Surabaya

berbagai kata

tercinta semoga

pihak

skripsi

ini

Fakultas dapat

saya

Farmasi

bermanfaat

dan memberikan sumbangan bagi ilmu pengetahuan.

Surabaya,

demi

Amin.

Januari 1995

Penyusun

SKRIPSI


HASTUTI


DAFTAR ISI

HALAMAN

KATA PENGANTAR DAFTAR ISI

........................................ ... i

.............................................

DAFTAR GAMBAR DAFTAR TABEL

.........................................

DAFTAR LAMPIRAN

BAB I

BAB II

vii

..................... •.................... viii

DAFTAR SINGKATAN

RINGKASAN

iv

......................................

ix

.......................................

x

.............................................. PENDAHULUAN

................................. ... 1

1.

Latar Belakang Masalah

2.

Perumusan Masalah

3.

Hipotesis

4.

Tujuan Penelitian

TINJAUAN PUSTAKA 1.

xi

............... ... 1

....................

6

.............................. ....................

6 6

........................... ... 7

Tinjauan tentang Tanaman Eupatorium

triplinerve V a h l

... 7

1.1.

Klasifikasi Tanaman

1.2.

Penyebaran Tanaman

1.3.

Morfologi Tanaman

1.4. Kandungan Tanaman

.................

7

................... ... 7 ....................

3

.................... ... 9

1.5.

Khasiat Tanaman

.......................

2.

Penelitian Tanaman Obat yang Mempunyai

10

Aktivitas Antimalaria

11

3.

Tinjauan tentang Plasmodium falciparum

14

3.1.

Klasifikasi Plasmodium falciparum

14

3.2. Morfologi Plasmodium falciparum

... ....

3.3.

Siklus Hidup Plasmodium falciparum

4.

Klasifikasi Antimalaria

5.

Tujuan Pengobatan

15

..

17

..............

20

....................

21

iv

SKRIPSI


HASTUTI


V

BAB III

METODE PENELITIAN 1.

.......................... .. 24

Bahan Penelitian

...................... .. 24

1.1. Daun Eupatorium triplinerve Vahl. 1.2.

Plasmodium Falciparum

1.3. Bahan Pembanding 1.4. Pelarut

...

24

................ .. 24

....................... .. 25

................................ .. 25

1.5. Bahan Untuk Uji In Vitro

................ 26

2.

A l a t

............................... .. 26

2.1.

Alat yang Akan Digunakan Untuk Pembuatan Ekstrak Daun Eupatorium

triplinerve Vahl

.. 26

2.2.

Alat yang Digunakan Untuk Uji Aktivitas 26

3.

Pembuatan Ekstrak Daun Eupatorium

triplinerve V a h l 4.

.. 27

Prosedur Pembiakan Sinambung Plasmodium

Falciparum

.. 30

4.1.

Sterilisasi Alat-alat

................ ..30

4.2.

Pembuatan Medium Biak

................. .. 31

4.3. Penyiapan Eritrosit Untuk Mendukung Pembiakan

.. 33

4.4.

Penyiapan Sel Parasit Untuk Pembiakan

4.5.

Menghitung Parasitemia

4.6.

Sub Kultur (Inokulasi Biakan)

4.7.

Sinkronisasi

5.

Teknik Uji Aktivitas Antimalaria

5.1.

Penyiapan Suspensi Sel Parasit

5.2.

Penyediaan Lempeng Sumur Mikro yang

................ .. 35 ........ ..35

.......................... .. 35 ....

..37

Prosedur Pengujian Efek Antimalaria In Vitro

SKRIPSI

37

........37

Mengandung Bahan Uji dan Kontrol 5.3.

33

............................... .. 39


HASTUTI


vi

6.

Evaluasi Hasil Pengujian Aktivitas Antimalaria

...........................

6.1. Cara Pembuatan Sediaan Darah Tebal

BAB IV

6.2.

Perhitungan Prosen Penghambatan

7.

Analisis Data

41

.........................

44

........

49

Hasil Penghitungan Prosen Penghambatan Pertumbuhan Plasmodium falciparum

2.

40

....

HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA 1.

...

40

Analisis Data

.........................

2.1. Menentukan Ho dan Ha

50 51

........................

51

Harga F Hitung

2.3.

Perbandingan Harga F hitung dangan ................................

2.4.

Kesimpulan

2.5.

Uji LSD

............................

3.

Kurva Log Kadar vs Log Prosen

................................

Penghambatan

49

.................

2.2.

F tabel

...

55 55 56

..........................

57

BAB V

PEMBAHASAN

..................................

61

BAB VI

KESIMPULAN

..................................

70

BAB VII

SARAN-SARAN

.................................

71

........................................

72

...............................................

77

DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN

SKRIPSI


HASTUTI


DAFTAR GAMBAR

HAL. A M A N

Gambar

1 : Morfologi Plasmodium falciparum

Gambar

2 : Daur Hidup Plasmodium falciparum

Gambar

3 : Ekstraksi Serbuk Daun Eupatorium

triplinerve Vahl. Gambar

4

........................... ... 45

6 : Kurva Log Kadar vs Log % Penghambatan

Gambar

Kloroform

......................... 60

3 : Kurva Log Kadar vs Log % Penghambatan Fraksi

Gambar

......................... ... 59

7 : Kurva Log Kadar vs Log % Penghambatan Fraksi

Gambar

Metanol

....................... ... 61

9 : Tanaman Eupatorium triplinerve Vahl.

82

.................. ... 83

11 : Hapusan Darah Tipis Plasmodium falciparum setelah sinkronisasi

Gambar

..

10 : Hapusan Darah Tipis Plasmodium falciparum sebelum sinkronisasi

Gambar

............ ... 42

5 : Kurva Log Konsentrasi vs Log Prosen

Fraksi Heksan Gambar

23

: Gambaran Lempeng Sumur Mikro untuk

Penghambatan Gambar

....

........... ............ 29

Uji Aktivitas Antimalaria Gambar

..... ... 16

12

.................. ... 83

: Hapusan Darah Tebal Kontrol Negatif

....

84

Gambar 13 : Hapusan Darah Tebal Kontrol Positif

....

84

Gambar

14

: Hapusan Darah Tebal K^ Fraksi

Heksan

85

Gambar

15

: Hapusan Darah Tebal

Kloroform

85

Gambar

16 : Hapusan Darah Tebal K 0 Fraksi o

Metanol

86

Fraksi

vii

SKRIPSI


HASTUTI


DAFTAR TABEL

HALAMAK

TABEL 1

TABEL 2

:

:

• TABEL 3

Tabel ANAVA untuk Rancangan Tersarang dengan

jumlah

Berbeda

......................................

Tabel

Sub-sampling

Selisih

Harga

yang

Rata-rata Tiap

Kelompok dengan Kontrol Positif (Yi*) :

41

Data Prosen Penghambatan

....

43

Pertumbuhan

Plasmodium falciparum dari Berbagai Fraksi Daun Eupatorium triplinerve V a h l ........... TABEL 4

:

Data Konversi Y ke Log (Y + 1) dari Berbagai Fraksi Daun Eupatorium triplinerve Vahl.

..

51

.

51

..

54

......................

56

TABEL 5

:

Data Pengamatan untuk Rancangan Tersarang

TABEL 6

:

Tabel ANAVA untuk Rancangan Tersarang dengan Jumlah Sub-sampling yang Berbeda

TABEL 7

:

Tabel Selisih Kelompok

Harga

dengan

Kontrol Positif TABEL 8

:

50

Tabel %

Rata-rata Harga

Rata-rata

Penghambatan Rata-rata

Berbagai

Fraksi

Daun

Tiap

dari

Eupatorium

triplinerve V a h l .............................. TABEL 9

:

Hubungan Antara Log Kadar dengan Prosen Penghambatan

57

Log

........................

58

vii i

SKRIPSI


HASTUTI


DAFTAR SINGKATAN

GBHN

=

Garis-garis Besar Haluan Negara

R P M I

=

Rosewell Parla Memorial Institute

RP-HS

-

RPMI - Human serum

HEPES

=

N-2-Hydroksi Ethyl Piperazin-N-2-Ethane Sulfonic Acid

C P D

=

Citrat Phosphas Dextrose

A C D

=

Acid Citric Dextrose

R B C

=

Red Blood Cells

P A B A

=

Para Amino Benzoic Acid

S S

=

Sum Square

S S A

=

Sum Square A

S S B

=

Sum Square B

S S E

= Sum Square Error

M S A

=

Mean Square A

M S B

=

Mean Square B

M S E

=

Mean Square Error

df

=

degree of freedom

ix

SKRIPSI


HASTUTI


DAFTAR LAMPIRAN

HALAMAN

LAMPIRAN

I

Hasil Penghitungan % Penghambatan Pertumbuhan Plasmodium falciparum dari

Berbagai

Fraksi

Daun

Eupatorium triplinerve V a h l ..... LAMPIRAN

II

77

Konversi % Penghambatan ( Y ) ke Log ( Y + 1 ) dari Berbagai Fr ak si

Daun Eupatorium triplinerve

V a h l ................................ LAMPIRAN

III

78

Penghitungan % Penghambat Ratarata dari Berbagai Fraksi Daun

Eupatorium triplinerve V a h l .....

79

LAMPIRAN

IV

Daftar Harga F tabel

...........

33

LAMPIRAN

V

Daftar Harga t tabel

...........

31

LAMPIRAN

VI

LAMPIRAN

VII

LAMPIRAN VIII

Tanaman Eupatorium triplinerve V a h l ................................

82

Foto Plasmodium falciparum

33

....

Surat Keterangan Identifikasi Tanaman

..........................

87

x

SKRIPSI


HASTUTI


R I N G K A S A N

Pengobatan tradisional dengan tumbuhan

maupun

binatang

telah

masyarakat kita dan umumnya Data ilmiah terutama

padahal

GBHN

data

tradisional

Indonesia

jawabkan pemakaiannya

dalam

bahan

dikenal

oleh

manfaatnya

klinik

mengamanatkan

meneliti dan mengembangkan obat obat

lama

dirasakan

empirik.

telah

menggunakan

secara

masih

untuk

langka

menggali,

tradisional

ini

yang

dapat

upaya

pelayanan

menjadi

dipertanggung kesehatan.

Untuk itu perlu dilakukan uji klinik obat-obat tradisional untuk memantapkan khasiatnya. Telah dilakukan uji aktivitas daun Eupatorium

Plasmodium

triplinerve

falciparum

.

beberapa

Vahl.

fraksi

terhadap

Sebagai

dari

pertumbuhan

pembanding

adalah

klorokuin diphosphat yang berkhasiat antimalaria. Pengamatuii dilakukan pada daya hambat fraksi

Eupatorium

daun

triplinerve

pertumbuhan Plasmodium falciparum in

dari

beberapa

Vahl.

vitro

terhadap

dan

hasilnya

dibandingkan dengan kontrol. Hasil uji aktivitas galur

1-2300

penghambatan bermakna

terhadap

menunjukkan pertumbuhan

untuk

fraksi

berkisar pada kadar

Plasmodium

kadar

yang

Plasmodium heksan,

falciparum

memberi

falciparum

kloroform

dan

efek secara metanol

100 pg/ml - 10.000 Mg/ml.

xi

SKRIPSI


HASTUTI


Harga IC^q (kadar penghambatan pertumbuhan skizon %) berkisar pada

: untuk fraksi heksan

untuk fraksi kloroform

=

50

236,175

^2/ ml,

untuk

fraksi

log

prosen

= 639,398 /Jg/ml dan

metanol = 646,847 pg/ml. Dari hasil pembuatan kurva log kadar penghambatan

menunjukkan

fraksi

Eupatorium

daun

peningkatan

prosen

bahwa

peningkatan

triplinerve

penghambatan

vs

Vahl.

pertumbuhan

konsentrasi menyebabkan

Plasmodium

falciparum . Dari

hasil

pengujian

tananan Eupatorium

tersebut

triplinerve

Vahl.

maka

diperkirakan

mempunyai

khasiat

antimalaria.

SKRIPSI


HASTUTI


BAB I P E N D A H U L U A N

1.

L a t a r B e la k a n g M a saiah

Sebagai salah satu negara di daerah tropik,

mempunyai wilayah yang kaya akan dan diantaranya manusia,

banyak

yang

bermacam-macani

bermanfaat

Sebagai

bahan

pengobatan,

tumbuhan

bagi

baik sebagai sumber pangan maupun

pengobatan.

Indonesia

kehidupan

sebagai

bahan

penggunaan

tradisional telah dikenal sebagian besar rakyat

obat

Indonesia

t

dan digunakan secara turun temurun berdasarkan

pengalaman

hidup sehari-hari.

Masalah yang dihadapi dalam

penggunaan

obat

ini

tradisional

adalah

sebagian

besar

kebenaran

khasiat bahan yang digunakan belum dapat dibuktikan secara ilmiah melalui penelitian dan pengujian

yang

sistematik.

Karena itu pemerintah menghimbau seluruh rakyat

Indonesia

untuk terus melakukan

penggalian,

pengujian

serta

terhadap

pengembangan

selanjutnya

memanfaatkannya

pelayanan

kesehatan

sekaligus

memelihara

secara dan

penelitian, obat

tradisional

dalam

rangka

lebih

luas

mengembangkan

dan

meningkatkan dan warisan

merata, budaya

bangsa [1 ,2 ]. Dalam permasalahan

ini,

meskipun

penelitian

tentang

tumbuhan obat sampai sekarang masih terus belanjut,

nanun

cukup

belum

banyak

tumbuhan

obat

di

Indonesia

yang

1

SKRIPSI


HASTUTI


2

diketahui kandungan dan khasiatnya

secara

pasti

o b a t . Dari bermacam-macam kegunaan

tumbuhan

sebagai

obat

di

Indonesia salah satu diantaranya dapat berkhasiat antimalaria.

Penggalian tumbuhan obat sebagai

antimalaria

masih terus ditingkatkan mengingat penyakit Indonesia sampai saat ini

masih

kesehatan masyarakat karena adanya

Plasmodium

klorokuin

ini

falciparum yang

epidemologi 102

masih endemik di

telah

penduduk

sangat penting.

negara

dunia

WHO di

masih

Di

Indonesia

malaria juga masih menjadi

tahun dunia

terhadap

1989, dan

terancam

sampai

masalah

saat

penyakit tersebut masih cukup tinggi Pulau Jawa dan Bali di

mana

dari daerah endemik dan non sering

terjadi

endemik ledakan

Oleh

kesehatan

yang

ini

Angka

malaria.

meni&bulkan banyak kematian. Perkembangan nyarauk Anopheles yang resisten terhadap

menambah

kesulitan

karena

dan

di

luar penduduk

Di

daerah yang

penyebaran

insektisida,

dalam

di

kesakitan

malaria

ditemukannya Plasmodium falciparum yang resisten akan

penyakit

campuran

wabah

dari

malaria.

terutama

terdapat

malaria

lebih

kesehatan

beberapa daerah masih merupakan endemik.

klorokuin

bagi

ditemukan

resisten

karena itu, malaria masih menjadi masalah

tersebut

masalah

di

[3].

Menurut data

setengah

malaria

merupakan

dewasa

sebagai

serta

terhadap

pemberantasan

penyakit ini [4,5,6].

SKRIPSI


HASTUTI


3 Penyakit

malaria

merupakan

penyakit

infeksi

yang

disebabkan oleh parasit bersel tunggal yaitu protozoa yang termasuk dalam genus Plasmodium. Plasmodium ini 4 (empat) spesies yang bersifat antara

Plasmodium

lain

parasitik

falciparum,

Plasmodium malariae , dan Plasmodium

mempunyai

bagi

manusia,

Plasmodium ovale.

vivax,

Dari

keempat

spesis tersebut Plasmodium falciparum adalah spesies paling umum menginfeksi manusia di daerah tropik tropik

dan

berbahaya

merupakan yaitu

penyebab

malaria

malaria

tertiana

dan

yang

maligna

yang sub

paling

yang

dapat

menimbulkan kematian [7]. Kinina,

suatu

alkaloid

batang kina (Cinchona s p .) paling

tua

dan

banyak

yang

diisolasi

merupakan

digunakan

obat oleh

dari malaria

sebagian

masyarakat di dunia.

Setelah ditemukan obat sintetik

mempunyai

kimia

struktur

mirip

dengan

4-aminokinolin misalnya klorokuin, malaria mulai beralih ke

obat

kinina

maka

galur

Plasmodium

falciparum

yang

negara lain, bahkan ditemukan terhadap

obat

sintetik

tersebut membuat para

lain.

ilmuwan

pula

galur

di

yang

Namun

ditemukan

resisten

klorokuin dan kemudian diikuti dengan cepat

besar

obat

tersebut.

demikian pada tahun 1959 di Amerika latin mulai

yang

yaitu

pemakai

sintetik

kulit

terhadap negara

yang

-

resisten

Adanya

resistensi

berpaling

kembali

galur kepada

bahan alam untuk mencari obat malaria yang baru, disamping mencari serum antimalaria [8],

SKRIPSI


HASTUTI


4 Artemisinin (Qinghaosu),

suatu

senyawa

seskuiterpen

lakton yang terdapat dalam Artemisia annua suku Compositae telah berhasil diisolasi oleh para ilmuwan dari ternyata berkhasiat sebagai Qinghaosu

ini

merangsang

obat

malaria

[9].

peneliti-peneliti

mencari bahan alam antimalaria yang lain,

Cina

Penemuan

lain

sampai

dan

untuk

akhirnya

ditemukan pula senyawa 4-fenil kumarin yang diisolasi dari tumbuhan suku Rubiaceae

Cautarea

yaitu

Exostema caribaeum yang ternyata anti Plasmodium falciparum in

Sebagai negara

dan

juga mempunyai aktivitas

vitro

Diosma pilosa berhasil diisolasi 5,6,7-trimetoksikumarin

latiflora

CIO].

Dari

tanaman

senyawa antimalaria yaitu

[11].

Tropik,

Indonesia

merupakan

daerah

yang kaya akan sumber bahan alam yang sangat potensial dan telah

banyak

antimalaria.

jenis

tumbuhan

yang

sebagai

Tumbuhan tersebut antara lain Brucea javanica

yang mengandung zat antimalaria

Carica

diteliti

papaya

Tinospora

dan

kuasinoid

[12].

tuberculata

Tanaman

juga

telah

diteliti dan berkhasiat sebagai obat malaria [13,14],

Eupatorium triplinerve Daun Prasman

merupakan

Vahl.

salah

atau

satu

dikenal

tanaman

dimanfaatkan untuk bermacam-macam pengobatan, sebagai obat diketahui

demam

dan

mengandung

malaria senyawa

(6,7-metilendioksikumarin), seskuiterpen

SKRIPSI

. Selain itu juga

[15,18]. kumarin

dan


yang

dapat

diantaranya Daun

Prasman

yaitu

ayapin

senyawa

mengandung

sebagai

minyak

golongan atsiri

HASTUTI


5 yang

mempunyai

komponen

eter-timohidrokinon

[17].

terpenting Jakupovich

yaitu

dimetil

mengatakan

genus Eupatorium kaya akan senyawa seskuiterpen

bahwa

lakton

Dengan menggunakan pendekatan etnofarmakologi di mana tanaman tersebut telah digunakan India

dan

pendekatan

kandungan

kumarin

sebagai

kemotaksonomi dan

antimalaria

yaitu

seskuiterpen

adanya

dalam

di zat

tanaman

Eupatorium triplinerve Vahl. yang diperkirakan

berkhasiat

sebagai antimalaria

sebelumnya

diduga

bahwa

tanaman

sebagai

atas,

maka

Eupatorium

pada

penelitian

Eupatorium

tanaman

mempunyai khasiat tersebut di

seperti

triplinerve

antimalaria. dianggap

Berdasarkan

perlu

triplinerve

Vahl. hal

untuk

meneliti

Vahl,

untuk

mencari

lakton

dari

alternatif antimalaria yang lain. Karena senyawa

annua dan senyawa Exostema

seskuiterpen kumarin

caribaeum

mempunyai

maka uji khasiat

antimalaria

triplinerve Vahl.

ini

penelitian

ini adalah

kandungan yang

berkhasiat

besar terdapat pada daun. fraksi

tanaman

dari

Eupatorium

Plasmodium

falciparum

terhadap

daunnya,

pertumbuhan

yang karena

sebagai

macam

parasit

dipilih

untuk

diperkirakan

antimalaria

Dalam penelitian

tiga

dan

tanaman

dari

Bagian tanaman

latiflora

anti Plasmodium,

aktivitas

menggunakan

dan diamati daya hambatnya malaria tersebut.

Cautarea

dari

Artemisia

pelarut

ini

zat

sebagian digunakan

yaitu

heksan,

kloroform dan metanol.

SKRIPSI


HASTUTI


6

2. Per am us an Masalah Apakah fraksi heksan,

Eupatorium

triplinerve

kloroform dan metanol dari daun Vahl.

mempunyai

aktivitas

Plasmodium

antimalaria dengan cara menghambat pertumbuhan

falciparum in vitro.

3. Hipotesis 3.1. Fraksi heksan dari daun Eupatorium triplinerve mempunyai

aktivitas

menghambat

pertumbuhan

antimalaria

Plasmodium

Vahl.

dengan

cara

falciparum

in

vitro. 3.2.

Fraksi kloroform Vahl.

dari

daun

Eupatorium

mempunyai aktivitas antimalaria

triplinerve dengan

Plasmodium falciparum

menghambat pertumbuhan

cara in

vitro. 3.3.

Fraksi Vahl.

metanol mempunyai

menghambat

daun

Eupatorium

triplinerve

aktivitas

antimalaria

dengan cara

dari

pertumbuhan

Plasmodium

falciparum

in

vitro. 4. Tujuan Penelitian Penelitian fraksi heksan,

triplinerve

ini bertujuan

untuk

mengetahui

pengaruh

kloroform dan metanol dari daun Eupatorium Vahl.

terhadap

pertumbuhan

Plasmodium


SKRIPSI


HASTUTI


BAB II TINJAUAN PUSTAKA

1. Tinjauan tentang tanaman Eupatorium triplinerve Vahl. 1.1.

Klasifikasi Tanaman Divisio

Spermatophyta

Sub Divisio

Angiospermae

Class

Dicotyledoneae

Sub Class

Sympetalae

Ordo

Asterales

Farailia

Asteraceae ( Compositae

Genus

Eupatorium Eupatorium triplinerve V a h l . [18]

Species Sinonim

[19,

)

20] :

- Eupatorium ayapana Vent,

ex Millin

- Eupatorium perfoliatum, Eupatorium aromaticus Mama D a erah

[15,

21] :

- Sumatera

: Daun Prasman,

- Sunda

: Jukut Prasman

- Jawa

: Godong Prasman,

1.2.

Daun Panahan,

Acerang

Raja Panah

Penyebaran Tanaman Eupatorium triplinerve Vahl.

Eupatorium

triplinerve

Vahl.

berasal

dari

daerah

Amerika tropik, dan ditemukan tumbuh liar di daerah Amazon [22], banyak ditanam di

India.

Tanaman

ini

telah

lama

7

SKRIPSI


HASTUTI


8

dibawa

ke

Jawa,

tumbuh

liar

di

daerah

berbukit

dan

pegunungan rendah sampai dengan ketinggian 1.600 meter

di

atas permukaan air laut. Tanaman

di

terapat

terbuka

maupun

ditanam sebagai penutup

ini dapat tumbuh baik

ditempat tanah

perkebunan teh karena mampu

terlindung

di

perkebunan

mencegah

erosi.

juga sering ditanam sebagai tanaman obat

1.3.

dan

sering

karet

dan

Selain

itu

[15].

Morfologl Tanaman Merupakan

bercabang,

tanaman

batang

terna

merayap

(herba)

menahun,

(repens)

atau

banyak condong

(ascendens). Tanaman ini mempunyai tinggi 0,5 meter sampai dengan

1 meter. Memiliki akar tunggang,

ke tanah, pada nodus yang terletak di tumbuh

akar.

Berbatang

berbent.uk bulat,

basah

tidak dalam atas

tanah

(herbaceus)

sedikit berkayu dan

masuk sering

kecil-kecil

berwarna

kemerahan.

Pada batang tersebut terdapat ruas di mana pada tiap nodus terdapat

dua

daun.

Batang

yang

masih

muda

biasanya

berbulu. Bentuk daun tunggal duduk berhadapan (folia opposita) berbentuk (o blongus).

lanset Tepi

( lanceolatus) daun

integer,

atau

sempit

pangkal

(acutus) dan mempunyai ujung yang meruncing

dcun

memanjang runcing

(ac umi na tus ).

Daging daun becwarna hijau kemerahan dengan permukaan daun yang gundul (glaber) kadang sedikit berbulu.

SKRIPSI


HASTUTI


9

Tanaman (penninervis)

ini

mempunyai

dengan

permukaan bawah

pangkal

ibu

tulang

daun

pada

Helai daun mempunyai ukuran panjang 3 - 12 cm,

lebar 0,5 -

daun

dan

menyirip

kemerahan.

tangkai

menonjol

daun

berwarna

2,5 cm dengan

agak

tulang

yang

(petiole) mempunyai panjang 6 - 1 0 Menurut Backer (1963) jarang dapat berbunga.

pendek.

Tangkai

daun

Pulau

Jawa

milimeter.

tumbuhan

ini

di

Tanaman ini mempunyai bunga majemuk

yang berjumlah 20 sampai 50 dan panjang 6 -

7

milimeter.

Kelopak bunga lepas berwarna hijau keunguan dan bulu-bulu.

Mahkota bunga berwarna putih kecil-kecil dengan

panjang 3 , 5 - 5

milimeter,

berbentuk jarum,

putih dan pada bagian ujungnya

berwarna

ini mempunyai benang sari kecil, sebagian terikat. rata.

1.4.

mempunyai

lepas

mempunyai bulu

coklat. dan

Tanaman

kadang-kadang

Bunga tersusun dalam bentuk

malai

yang

Adapun buahnya mempunyai jenis kendaga [15,19].

K andungan Tanaman 1. Minyak Atsiri Minyak

atsiri

diperoleh

dari

dengan air dari tanaman segar. lebih ringan dari air, seperti tumbuhan asal.

hasil

Minyak ini bersifat

tidak berwarna Dalam

destilasi

minyak

dan

berbaa

atsiri

ini

mengandung jenyawa seskuiterpen yaitu beta selinen dan monoterpen yaitu sineol

SKRIPSI

[23,


24],

HASTUTI


10

2. Kumarin Dalam

tanaman

kumarin

ini

terdapat

beberapa

[15,17,25] antara lain

senyawa

:

- Ayapanin - Ayapin (daun) - Herniarin

■

(daun)

- Dafnetin (seluruh tumbuhan) - Dimetil eter dafnetin (seluruh tumbuhan) - 7-metil eter dafnetin ( seluruh tumbuhan) - Hidrangetin (seluruh tumbuhan) - Umbelliferon (seluruh tumbuhan) 3. Senyawa

lain

yaitu

timohidrokinon

eter timohidrokinon [17,

1.5.

dan

21]-

.

Khasiat Tanaman a. Minyak atsiri dari

Eupatorium

ayapana

sebagai antifungi dan antibakteri b.

digunakan

[26],

Infus seluruh tanaman digunakan untuk menstimulasi menstruasi. tumbuhan dekokta

Di India dan di Jawa daun atau seluruh

yang pahit

dibuat dipakai

dalam

bentuk

untuk

infus

mengobati

Rebusan daun yang sangat pahit dapat

pula pada kelainan lambung

dan

diare kronik, diare cataral


atau demam.

dimanfaatkan

sebagai obat hemostatik dan stimulansia,

SKRIPSI

dimetil

diberikan

perut antara lain

[17,21].

HASTUTI


11 c. Ekstrak dari daun yang telah dikeringkan digunakan untuk pengobatan tukak lambung [27]. d. Daun segar

yang

diremas-remas

ditempelkan

pada

luka dipakai untuk membersihkan luka dan raengobati luka karena gigitan reptil yang berbisa.

Daun yang

diremas dan ditempelkan pada dahi untuk

mengobati

sakit kepala.

diberikan

Sebagai obat dalam

terhadap gigitan ular.

juga

Untuk obat

sariawan

mulut

menggunakan daun segar yang dikunyah tetapi airnya tidak ditelan

[15].

Di kepulauan Bourbon dibudidayakan dan dikeringkan untuk

dikirim

ke

Perancis

yang

dipergunakan

sebagai pengganti teh Cina [15].

2. Penelitian

Tanaman

Obat

yang Mempunyai

Aktivitas

Antimalaria Beberapa senyawa yang telah berhasil

diisolasi

tanaman obat yang mempunyai aktivitas antimalaria, lain

dari antara

:

a. Senyawa Golongan Alkaloid Kulit batang Cinchona sp. yang telah 1820

telah

senyawa

SKRIPSI

dikenal

sejak abad

berhasil

alkaloid

merupakan XVII

diisolasi

dengan

inti

zat

obat dan

pada

aktifnya

kuinolin


antimalaria

:

tahun yaitu kinina,

HASTUTI


M I I I K

.

;-VP»S '

kinidina,

sinkonina

______

■- .

;

* V k ■>*:■.£' A

dan sinkonidina.

12

'

Colin W. Wright

juga telah berhasil mengisolasi senyawa febrifugin dari tanaman Dichroea febrifuga yang antimalaria

64

aktivitas kinina.

-

100

kali

mempunyai lebih

besar

aktivitas dari

pada

Namun demikian sampai sekarang kinina

masih dianggap sebagai antimalaria yang potensial

[28].

b. Senyawa Golongan Seskuiterpen l a kton Seorang ilmuwan dari Cina senyawa artemisinin

telah

(Qinghaosu) dari tankman

annua dan senyawa yingzhaosu uneinatus

yang

berhasil

mempunyai

dari

tanaman

aktivitas

mengisolasi

Artemisia Artabotrys

antimalaria

dan

toksisitasnya lebih keoil dibandingkan dengan klorokuin Kedua

senyawa

seskuiterpen

tersebut

lakton

termasuk

dalam

golongan

[29].

c. Senyawa Golongan Kuasinoid Senyawa kuasinoid yang

mempunyai

khasiat

antimalaria

berhasil diisolasi dari tanaman suku Simarubaceae yaitu

Bruoea javanica yang mengandung

bruseantin,

bruseantinol dan brusein pada buahnya,

Euryooma

longifolia

yang

juga

mengandung

erikomalakton dan erikomanol

brusatol, akar

dari

erikomanon,

[12],

d. Senyawa Golongan Triterpenoid Khalid dkk. suatu

berhasil mengisolasi senyawa gedunin,

senyawa

tetranortriterpenoid

dari

yaitu

tanaman

Azadirachta indica [ 3 0 ] .Selain itu juga telah diisolasi

SKRIPSI


HASTUTI


13 senyawa nimbolid,

suatu senyawa triterpen yang terdapat

dalam daun dan biji Azadirachta indica var. oleh Rochanankij dkk.

siaminensis

Kedua senyawa tersebut mempunyai

aktivitas antimalaria [31]. e. Senyawa Golongan Kumarin Noster berhasil

mengisolasi

senyawa

4-fenil

kumarin

dari tanaman Cautarea latifflora dan Exostema caribaeum yang

berkhasiat

berhasil yaitu

sebagai

mengisolasi

antimalaria.

senyawa

5,6,7-trimetoksi

Khalid

antimalaria

kumarin

dari

yang

juga lain

Diosma

tanaman

pilosa CIO,11]. f. Senyawa Golongan Lignan Dari

tanaman

Haplophyllum

diisolasi senyawa justisidin,

tuberculatum

berhasil

suatu arilnaftalen

lignan

yang berkhasiat sebagai antimalaria [11]. g. Senyawa Golongan Flavon Kuersetin adalah suatu senyawa dari

tanaman

Diosma

pilosa

bersifat sebagai antimalaria.

flavon yang

yang

diisolasi

dilaporkan

Menurut

Divo,

juga

kuersetin

mempunyai efek antimitokondria pada Plasmodium [11]. h. Senyawa Derivat Antrasena Dari akar Psorospernum

febrifugum

berhasil

diisolasi

sat antimalaria antranoid, yaitu vismion D [32]. Selain senyawa-senyawa di atas masih ada senyawa lain yang berkhasiat sebagai

SKRIPSI

antimalaria,

masalnya


kossipol

dari

HASTUTI


14

Thespesia

tanaman

Alstonia

populnea,

scholaris

ft

dan

ekhitamin

dari

tanaman

caesalpinin

dari

tanaman

Caesalpinia bonducella [9]. Penelitian untuk meneari obat yang

lain

masih

terus

tumbuhan lain yang

terdapat di (jambu

dikembangkan

dapat

dikatakan

Plasmodium

menghambat pertumbuhan

malaria

dari

karena

antara

lain

:

Lantana

camara

( te m be lek an) ,

ada

aktivitas yang

Psidium

Indonesia,

biji),

masih

mempunyai

falciparum

tanaman

juga

guajava

Nyctanthes

arbortristis <sri gading) dan Carica papaya L. [14,33].

3. Tinjauan Tentang Plasmodiun falciparum Welch. 3.1.

Klasifikasi

Plasmodium falciparum Welch.

Phylum Sub Phylum

:

Protozoa

:

Plasmodroma

Class

Sporozoa

Ordo

Haemosporida Danilewsky

Family

Plasmodiidae Mesnil

Genus

Plasmodium

Species Sinonim [35,

36]

:

Plasmodium falciparum Welch.

[34]

:

Plasmodium tenue Stephens Laverania malariae Grassi & Feletti - Laverania falciparum Welch.

SKRIPSI


HASTUTI


15

3.2.

Plasmodium falciparum

Morfologi

Plasmodium

falciparum

malaria tertiana

merupakan

maligna.

Parasit

manusia mempunyai 2 (dua) bentuk,

parasit

ini

di

penyebab

dalam

darah

yaitu bentuk cincin

dan

gametosit. Bentuk cincin : Bentuk

cincin

dari

Plasmodium

ini

Plasmodium vivax., mempunyai diameter tipis dan jumlahnya 2 - 6 .

Bentuk

lebih

kecil

kurang

lebih

ini mempunyai

dari 1

fj,

nucleus

yang berbentuk batang atau terbagi menjadi 2 (dua) granul. Setelah 12 jam terserang,

semua skizon

akan

menghilang

dari peredaran darah tepi.

Gametosit : Gametosit merupakan bentuk yang seperti sosis dengan

diameter

telah 10

-

terdapat dalam peredaran darah tepi. gametosit

yaitu

dewasa,

makrogametosit

Ada

granul.

kemerahan,

Mikrogametosit

2

dan

Makrogametosit bernoda biru, mengandung dan

fj.

12

bernoda

mengandung banyak nucleus

berbentuk Bentuk

(dua)

ini macam

m i k r og am et os it . kumpulan

biru yang

nucleus

lemah mengkilat

atau dan

granul haemosoin yang lebih kecil dan tersebar. Pada pemeriksaan darah tepi baik hapusan maupun tetes tebal terutama dijumpai parasit muda bentuk form).

SKRIPSI

Pada sediaan darah

tebal

stadium


cincin tropozoit

(ring juga

HASTUTI


16

berbentuk sekali

cincin,

bentuk

gametosit. berbentuk

gametosit

cincin

Pada tanda

dan

sediaan seru

berbentuk balon

darah

atau

merah tipis

koma

dan

pisang, di

banyak

sisi

luar

tropozoit

muda

cincin

terbuka,

gametosit berbentuk pisang dan terdapat bintik maurer pada sel darah merah Giemsa,

(gambar

1).

Dengan

tampak inti berwarna merah,

pengecatan

plasma berwarna

sel darah berwarna merah muda dan pigmen tengguli sampai hitam tengguli

Gambar 1 j

[34,

pewarna

berwarna

biru, kuning

37].

Murfologi Plasmodium falciparum perbesaran 1535 kali [37]

dengan

Keterangan : a. b.

Bentuk cincin Plasmodium falciparum dalam eritrosit Psrtumbuhan s k i z o n d a l a m e r i t r o s i t dengan bintik mauref'8 c - f Pertumbuhan dan fase skizogonik g — h Bentuk rnerozoit i. Bentuk mctkrogametoeit j. Bentuk mikrogametosit

SKRIPSI


HASTUTI


17

3.3.

Siklus Hidup Plasmodium falciparum Siklus hidup

parasit

malaria

dalam sel hospes vertebrata,

sebagian

sebagian

terjadi

di

lagi di dalam nyamuk

Anopheles. Sama seperti Plasmodium lainnya,

siklus

hidup

Plasmodium falciparum terdiri dari 2 (dua) fase yaitu fase aseksual seksual

(skizogoni) dalam

hospes

vertrebrata

dan

fase

(sporogoni) dalam nyamuk Anopheles [38,39].

1. Fase aseksual (skizogoni) Fase

ini

mempunyai

2

siklus

yaitu

daur

dalam

sel

parenkim hati (siklus jaringan/siklus ekso-eritrositik) dan siklus eritrositik dalam darah. a. Siklus jaringan (siklus ekso-eritrositik) Siklus jaringan

dimulai

setelah

betina menusuk hospes dan

nyamuk

sporozoit

Anopheles

infektif

yang

berada dalam kelenjar ludah nyamuk tersebut masuk ke dalam peredaran darah.Dalam waktu 30 menit sporozoit masuk ke dalam parenkim hati. tersebut

tumbuh

diameter 60

menjadi

t-t dan

Dalam sel hati parasit

s"kizon

menghasilkan

yang 15.000

merozoit berdiameter tidak lebih dari hati.

Dalam waktu 6 - 9

masak pecah, ke

dalam

1

40.000

dalam

sel telah

melepaskan merozoit dan kemudian

masuk

darah.

skizon

-

yang

sirkulasi

hari

mempunyai

Merozoit

ini sebagian

difagositosis dan sebagian lagi menyerang eritrosit.

SKRIPSI


HASTUTI


18 b. Siklus eritrositik Siklus eritrositik dimulai pada waktu rnerozoit masuk ke dalam sirkulasi darah

dan

menyerang

eritrosit.

Siklus ini terjadi dalam waktu 48 jam. Pada fase ini parasit mulai tampak

sebagai

kromatin

kecil

dikelilingi sedikit sitoplasma dan mempunyai bentuk cincin. Stadium ini disebut

yang bentuk

tropozoit.

Pada

saat tropozoit sedang tumbuh bentuknya menjadi tidak teratur dan mulai membentuk pigmen. Tropozoit tumbuh

menjadi

berkembang menjadi

skizon

skizon

matang

muda, dan

kemudian

selanjutnya

membelah menjadi rnerozoit. Eritrosit yang mengandung

skizon ini kemudian pecah

melepaskan rnerozoit, pigmen dan sisa sel selanjutnya masuk ke dalam

plasma

darah.

Parasit

yang

tidak

mengalami fagisitosis masuk ke dalam eritrosit lain, mengulangi

siklus

skizogoni.

Penghancuran

eritrosit ini menimbulkan gejala khas malaria demam yang diikuti menggigil.

yang

yaitu

Sebagian rnerozoit yang

memasuki eritrosit tersebut tidak

membentuk

tetapi berdiferensiasi membentuk gametosit,

skizon memasuki

fase seksual. 2. Fase seksual Csporogoni.3 Fase seksual / sporogoni dalam

SKRIPSI

nyamuk

di

mana

yang

sebenarnya

sebagian


terjadi

rnerozoit

di yang

HASTUTI


19 berdiferensiasi menjadi

gametosit

dalam tubuh nyamuk pada saat

akan

Anopheles

nyamuk

menghisap darah penderita dan memulai Berbeda

dengan

skizon

bersama eritrosit.

,

siklus

gametosit

Gametosit

mikrogametosit (gametosit

berpindah

ke

betina seksual.

tidak

dicerna

berdiferensiasi

menjadi

jantan)

(gametosit betina). Bentuk ini

dan

dapat

makrogametosit ditemukan

dalam

darah tepi. Pada mikrogametosit titik kromatin membagi diri menjadi 6 - 8

inti yang bergerak ke pinggir

mikrogamet berinti tunggal berbentuk seperti cambuk keluar,

lepas

dari

yaitu dan

parasit. suatu

bergerak

induknya.

Proses

Di

sini

filamen

yang

aktif

didesak

ini

disebut

eks flagelasi. Makrogametosit

menjadi

terdiri atas sebuah

matang

badan

sebagai

dari

makrogamet,

sitoplasma

berbentuk

bulat dengan sekelompok kromatin di tengah. Fertilisasi terjadi karena masuknya mikrogamet ke dalam membentuk zigot.

Dalam

nyamuk menghisap darah,

waktu zigot

12

-

14

berubah

makrogamet jam

menjadi

seperti cacing dan disebut ookinet yang dapat dinding lambung nyamuk.

Ookinet

ookista yang berbentuk bulat dan membran basal

dinding

menjadi beberapa-kali

SKRIPSI

lebih

ini

berubah

diantara lambung. besar


lapisan Di

dari

sini pada

setelah bentuk menembus menjadi epital ookista bentuk

HASTUTI


20

semula.

Dalam ookista terbentuk ribuan

apabila

ookista

pecah.

rongga badan nyamuk tubuh

nyamuk.

sporozoit

dan

bergerak

Beberapa

sporozoit,

dilepas

ke

dan dalam

keseluruh

jaringan

menembus

kelenjar

sporozoit

ludah dan bila nyamuk menusuk manusia / menghisap darah manusia, dan

sporozoit tersebut akan masuk ke

jaringan

serta

memulai

dalam

darah

siklus

pra-eritrositik

kemudian memasuki siklus eritrositik.

Siklus sporogoni

dalam nyamuk memerlukan waktu mengetahui

daur

hidup

8 - 1 2

Plasmodium

hari

.

falciparum

Untuk dapat

dilihat dalam gambar 2 pada halaman 23.

4. Klasifikasi Antimalaria Berdasarkan kerjanya

pada

tahap

perkembangan

Plasmodium dapat dibedakan sebagai berikut

[41]

dari

:

a. Skizontisida Jaringan Obat golongan

ini dapat menghambat perkembangan

ek so- eri tr os it i k.

Apabila

dapat

bentuk

mempengaruhi

perkembangan awal dalam fase pra-eritrositik maka dapat mencegah penyebab penyakit menyerang eritrosit.

(kausal profilaktik) sebelum

Jika obat tersebut berkhasiat pada

skizon jaringan sekunder maka dapat mencegah kekambuhan penyakit.

SKRIPSI


HASTUTI


21

b. Skizontisida darah Obat

ini

merupakan

obat

yang

menekan

perbanyakan

parasit dalam eritrosit untuk mencegah timbulnya gejala klinik . c. Garnet osi da Obat yang termasuk

dalam

pada bentuk seksual

golongan

dengan

cara

parasit dari manusia ke nyamuk

gametosit mencegah

bekerja

penyebaran

(memusnahkan

gametosit

mencegah

terjadinya

dalam darah). d. Sporontislda Obat

ini

bekerja

sporogoni

dan

dengan

perkembangan

cara

parasit

apabila

terbawa

dalam tubuh nyamuk bersama darah.

5* Tujuan Pengobatan Dengan tersebut di

adanya depan,

klasifikasi maka

antimalaria

pemilihan

obat

disesuaikan dengan tujuan pengobatannya. beberapa tujuan pengobatan malaria,

seperti

malaria Untuk

harus

itu,

antara lain [42]

ada :

a* Pengendalian serangan klinik Untuk tujuan bekerja

ini

terhadap

eritrosit),

digunakan

skizontisida

merozoit

dalam

sehingga tidak

darah

eritrosit

berbentuk skizon

tidak terjadi penghancuran eritrosit

yang

yang (fase

baru dan

menimbulkan

gejala klinik.

SKRIPSI


HASTUTI


22 b. Pengobatan supresi Pengobatan parasit

ini

dari

ditujukan tubuh

untuk

penderita

menyingkirkan dengan

cara

semua memberi

golongan ski2 ontisida darah dalam waktu yang lebih lama dari masa hidup parasit. c. Pencegahan kausal Penggunaan

_

skizotisida

jaringan

yang

bekerja

skizon yang baru memasuki jaringan hari dapat tahap infeksi eritrosit dan menghambat lanjut.

pada

mencegah

transmisi lebih

-

d. Pengobatan radikal Pengobatan ini dimaksudkan dalam fase eritrosit

dan

untuk

memusnahkan

ekso-eritrosit,

parasit

karena

itu

digunakan kombinasi skizontisida darah dan jaringan. e. Garnetositosida Pengobatan ini ditujukan untuk membunuh gametosit berada

dalam

eritrosit

sehingga

dapat

yang

menghambat

transmisi ke dalam tubuh nyamuk.

SKRIPSI


HASTUTI


j■ GS/.'

23

^Elongation and d *vitcgm *rt of m olility by Z Y G O T E -^ O K I N E T E ,F «rtiU »»tio n ol

Gambar 2 :

SKRIPSI

( Z Y G O T£ 1 o «n * d )

Daur Hidup Plasmodium falciparum We l c h . [40]


HASTUTI


BAB III METODE PENELITIAN

1. Bahan Penelitian 1.1.

Daun Eupatorium triplinerve Vahl. Daun Eupatorium triplinerve Vahl.

dala&

penelitian

Sutaryo

yang

ini

diperoleh

diambil

dari

dari

Herbarium

Penelitian dan Pengembangan Botani, LIPI,

Bogor.

Bagian daun

yang akan digunakan

yang

S.M.

Broto

Bogoriense

Badan

Puslitbang

digunakan

bagian yang berada di atas tanah.

Dra.

Biologi

adalah

-

seluruh

Daun diambil secara acak

kemudian dikumpulkan, dicuci dan dikeringkan

dengan

cara

diangin-anginkan di udara

kering

daun

terbuka.

tersebut dipotong kecil-kecil, halus, dan diayak 1.2.

Setelah

kemudian

ditumbuk

sampai

.

Plasmodium falciparum Plasmodium

yang

digunakan

falciparum I 2300 yaitu berasal dari

Irian

strain

Jaya dan

Penelitian dan Pengembangan Bagian Penyakit

Menular

sensitif diperoleh

Kesehatan

Bersumber

Plasmodium

adalah

klorokuin dari

bikarbonat.,

RPMI

1840

Binatang,

HEPES buffer,

ditambah

Badan

(Balitbangkes)

Kesehatan Jakarta yang dibiakkan in vitro dalam dengan medium

yang

dengan

Departemen eritrosit natrium

gentamisin dan serum.

24

SKRIPSI


HASTUTI


25

1.3.

Bahan pembanding Untuk

mengeiahui

adanya

khasiat

daun Eupatorium triplinerve Vahl.

fraksi

antimalaria maka

dari

digunakan

pembanding Rlorokuin diphosphat. 1.4. Pel a rut. Pelarut yang digunakan untuk

pembuatan

fraksi

daun

Eupatorium triplinerve Vahl. adalah : - Heksan - Kloroform - Metanol 1.5.

Bahaii untuk uji in vitro Bahan yang digunakan untuk membuat

Plasmodium falciparum antara lain

medium

pembiakan

:

- Aquabidest - RPMX

1640

- Buffer HEPES - Gentamisin sulfat - Natrium bikarbonat - Serum dan eritrosit manusia - Minyak Imersi - C.P.D.

: Asam sitrat,

Natrium sitrat,

N a 2H P 0 4 , Dextrose

- Pewarna Giemsa - Metanol - Bufer phosphat

: N a 2HPQ^ dan N a ^ P Q ^

- Sorbitol

SKRIPSI


HASTUTI


26

2. Alat 2.1*

Alai, yang Akan Digunakan untuk Pembuatan Ekstrak Daun

Eupatorium triplinerve Vahl.

:

- Maserator - Corong Buchner - Rotary evaporator Heidolph tipe WI - Gelas ukur - Neraca analitik 2.2.

Alat yang Digunakan untuk Uji Aktivitas Plasmodium

falciparum

:

- Laminar air flow - Inkubator - Timbangan analitik - Autoklaf - Lemari pendingin - Desikator dengan tempat

lilin

- Penyaring membran milipor 0,22 m - Mikroskop - Gelas beker yang steril - Labu Erlenmeyer - Mikrotitreplate (lempeng sumur roikro) - Botol medium yang steril - Alat dan tabung sentrifuse bertutup - Alat suntik yang steril - Pipet ukur dan pipet Pasteur yang steril

SKRIPSI


HASTUTI


27

- Gelas obyek - Lampu spiritus dan lilin

3. Pembuatan Elcstrak Daun Eupatorium triplinerve Valh. Bahan

daun

dikumpulkan dan cara

segera

dibersihkan,

diangin-anginkan

dihancurkan ditimbang

Eupatorium

tumbuhan

sampai

di

1

dikeringkan

udara

halus

sebanyak

triplinerve

dan

dengan metode maserasi ulang.

kemudian

Bahan

tersebut

kilogram

dan

daun

Eupatorium

Vahl. dalam maserator

kali

dengan

selama

24

jam

(setiap

200

kira-kira 700 ml pelarut), Buchner.

Pekerjaan ini

diekstraksi

Metode ini dikerjakan dengan

cara merendam serbuk kering tiap

dengan

terbuka

diayak.

(satu)

Vahl.

gram

triplinerve

pelarut

serbuk

heksan

membutuhkan

kemudian disaring dengan corong kali.

Fraksi

heksan d i k u mp ul ka n, diuapkan dengan tekanan rendah

sampai

didapatkan fraksi yang sehingga

semua

diangin-anginkan

diulangi

kental

sampai

dan

heksan

menguap

sampai

kering

3

selanjutnya dan

dan

diuapkan

ditimbang.

Residu

dimaserasi

kembali

dengan kloroform selama 24 jam untuk tiap

kali

penyarian

sambil digojok - gojok.

yang

diperoleh

diuapkan sampai

kering

Fraksi dan

kloroform dilakukan sebanyak dengan

metanol

hingga kering.

SKRIPSI

setelah Maserasi

kloroform ditimbang. 3

kali.

sebelumnya

Maserasi Residu

diangin

dengan

dimaserasi -

anginkan

ini juga dilakukan sampai 3


kali.

HASTUTI


28

Pada

setiap

secukupnya,

tahap

tnaserasi,

pelarut

ditarabahkan

keraudian campuran tersebut dibiarkan selama 24

jam sambil digojok-gojok.

Masing-tnasing fraksi yang

terkumpul tadi diuji daya hambatnya

terhadap

Plasmodium falciparum in vitro. Dari

hasil

telah

pertumbuhan uji

tersebut

akan diketahui fraksi ekstrak mana yang mengandung senyawa an t im al ar ia . Tahap

penelitian

ini

dapat

disederhanakan

dalam gambar 3 [43].

SKRIPSI


HASTUTI


29

SERBUK DAUN KERING d«ngan B • I amat

RESIDU

FRAKSI HEKSAN diuapkan

sampai

k#ring

dimaserasi ulang dongan k l o r o f o r m t i g a k a l i selama * 2 4 ja m

RESIDU

FRAKSI KLOROFORM diuapkan

sampai

kering

dimaserasi ulang dengan m e t a n o l t i g a Icali a e l a m a • 2 -4 j a m

RESIDU

FRAKSI METANOL diuapkan

Gambar 3

sampai

k e ri nrj

: Fraksinasi serbuk daun Eupatorium triplinerve Vahl.

SKRIPSI


HASTUTI


30

4. Prosedur Pembiakan Sinambung Plasmodium falciparum Semua pekerjaan

Plasmodium

yang

falciparum

berhubungan

dilakukan

dengan

secara

pembiakan

aseptik

dalam

laminar air flow dengan alat-alat yang telah disterilkan. 4.1.

Sterilisasl Alat-alat

Alat-alat dan ketentuan,

bahan

yaitu

kimia

[49]

disterilisasi

sesuai

dengan

:

a. Disterilisasi dalam oven suhu 150 °C selama 60 menit. Alat-alat gelas setelah dicuci bersih,

dikeringkan.

Pipet diisi kapas pada bagian pangkalnya dan dibungkus. Botol,

Erlenmeyer,

gelas

beker,

ditutap

rapat

dan

•diikat dengan tali. b. Disterilisasi

dengan pemanasan dalam autoklaf pada 2 tekanan 1.5 kg/cm dan suhu 115-118 °C selama 80 menit. Alat-alat dari plastik dibungkus Larutan bahan kimia

yang

tahan

lebih dahulu. panas,

volume

tidak

lebih dari 100ml dimasukkan da lam botol bertutup rapat. c. Alat-alat dari karet (tutup dalam gelas beker dandirebus

dengan

yang

vial

ditutup

aquadest

dsb.) dengan

beberapa

disterilisasi gelas kali,

arloji setiap

pendidihan air diganti. d. Alat-alat

dari logam sebelum digunakan dipanasi selama

15-20 detik di atas api.

SKRIPSI


HASTUTI


31

e.

Ruangan penyinaran

untuk

kerja

asepti*

disterilkan

dengan

lampu UV selama 30 menit sebelum bekerja dan

dilengkapi dengan penyalaan

laminar

air

flow

selama

medium

dasar,

bekerja. 4.2.

Pembuatan M ed ium Biak Medium biak Plasmodium

terdiri

dari

medium komplit (lengkap) dan medium biak. 4.2.1.

Medium Dasar CRPMI 16403 Medium dasar terdiri dari - RPMI 1840

:

................

- Bufer HEPES

10,4

.............

- Gentamisin Sulfat

.......

gram

5,49 gram 1.00 ml (40 mg/ml)

- Aquabidest steril ad 1000 ml. Cara pembuatan

:

- RPMI 640 dilarutkan dalam 900 ml aquabidest - Ditambah dengan buffer HEPES, diaduk ad larut -

Ditambah

gentamisin

sulfat

kemudian

ditambah

dengan aquabidest ad 1000 ml. Selanjuutnya larutan tersebut

disterilkan

penyaring metabran milipore 0,22 m kemudian

melalui disimpan

dalam botol yang telah disterilkan @ 100 ml. 4.2.2.

Larutan N atrium Bikarbonat SSi b/v 5 gr. NaHCOg dilarutkan dalam kemudian

disterilkan

melalui

100

ml

aquabidest,

penyaring

membran

milipore 0.22jU, disimpan dalam wadah steril @ 10 ml

SKRIPSI


HASTUTI


32 4.2.3.

Medium Lengkap Ctransport media) Medium

lengkap

terdiri

dari

medium

dasar

dan

NaHCOg 5% b/v. N a H C 0 35% b/v sebanyak 4,2 ml ditambahkan

ke

dalam

100 ml medium dasar. Penambahan NaHCO^ yang

dibuat

segar akan memberikan perubahan warna medium dari kunung digunakan

menjadi mencuci

jingga. sel

Medium

darah

dasar

lengkap

segar

yang

ini belum

terinfeksi dan untuk mencuci biakan. 4.2.4.

S e r u m Segar Untuk mendapatkan serum segar vena

yang

kemudian

diambil

dengan

dimasukkan

ke

berasal alat

dalam

dari

suntik tabung

darah steril,

sentrifuse

steril. Tabung didiamkan pada suhu kamar atau suhu 37 °C selama 3

jam

Selanjutnya disentrifuse selama 8 - 1 0 pasteur steril,

menit.

sehingga pada Dengan

1800

darah

pada

membeku.

putaran/menit

menggunakan

pipet

serum dipisahkan dan disimpan dalam

botol yang steril pada suhu -20°C. 4.2.4.

Medium Biak CRP-HS atau RP-10HA3 Medium biak terdiri dari medium lengkap

dan

serum

Ke dalam 104,2 ml medium lengkap ditambahkan

serum

manusia (Human Serum).

homolog 11,5 ml. Medium ini digunakan untuk pembiakan Plasmodium.

SKRIPSI


HASTUTI


33

4.3.

Penyiapan Eritrosit Unluk Mendukung Pembiakan Darah diambil melalui vena,

ditampung

dalam

tabung

steril yang mengandung antikoagulan ACD atau CPD disimpan pada suhu

4 °C selama 7

hari

dan untuk

meningkatkan kemampuan mendukung pembiakan parasit. Diambil

10 ml darah tersebut kemudian

dalam tabung sentrifuse selama

dengan

10 menit. Plasma

dan

dimasukkan

kecepatan

1300

"buffy-coat"

rpm

dibuang,

kemudian “Packed cel l” yang tersisa dicuci dengan ml medium lengkap dan disentrifuse 1800 rpm selama 3 - 1 0

menit.

volume sama.

Suspensi ini

"Packed cell"

kembali

ke

mengandung

dalam 50%

yang disebut RBC-50% hematokrit dan siap

10

kecepatan

Supernatan dibuang

pencucian diulangi sampai 3 kali. telah dicuci disuspensikan

dengan

ke

dan yang RP-HS

eritrosit ditambahkan

ke dalam biakan parasit. 4.4.

Penyiapan Sel Parasit Untuk Pembiakan Eritrosit

yang

diambil dari

terinfeksi

parasit

malaria

dapat

:

- bahan pembiak - manusia atau kera yang terinfeksi - penyimpanan beku Apabila menggunakan akan

mengalami

terutama jika

SKRIPSI

darah

kesulitan diambil

dari

manusia dalam darah


yang hal yang

terinfeksi transportasi jauh

dari

HASTUTI


34 terapat kultur. Oleh karena sel

parasit

dari

itu

sebaiknya

simpanan

beku.

digunakan

Selain

penyimpanan dalam keadaan beku dapat bertahan

itu sampai

bertahun - tahun. Cara Pencairan (Thawing) - Biakan

beku

:

digosok-gosok

dengan

tangan

hingga

seluruh isinya mencair. - Cairan tersebut dipindahkan

ke

tabung

dan disuspensikan dengan larutan NaCl terjadi

hemolisis,

kemudian

kecepatan 1500 rpm selama

sentrifuse 3.5%

sampai

disentrifuse

dengan

7-10

menit,

supernatan

dibuang. - Proses pencucian di atas diulang sekali lagi dengan medium komplit (transport media). - Packed cell yang diperoleh disuspensikan RP-HS (15%

serum

manusia)

kemudian

pada kecepatan dan waktu yang dibuang.

ke

dalam

disentrifuse

sama,

supernatannya

Pencucian ini diulangi sebanyak 2 kali.

- Packed cell disuspensikan kembvali dalam RP-HS ditambah 5-10

tetes

larutan

RBC-50%

dan

hematokrit,

kemudian diraasukkan cawan petri. - Biakan dimasukkan dalam desikator yang berisi lilin kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C

Setiap 24

jam

medium biak diganti dengan medium yang segar. - Kadar hematokrit selama kultur dibuat 1.2%

SKRIPSI


.

HASTUTI


35 4.5.

Menghitung Parasitemia Parasitemia ditentukan dengan cara menghitung

jumlah

parasit hidup tiap 10.000 eritrosit. Cara penghitungan

:

Dibuat hapusan darah

tipis

dari

suspensi

parasit.

Diambil 35 lapangan pandang secara berurutan (''10.000 eritrosit).

Selanjutnya dihitung jumlah parasit

setiap lapangan pandang dan dihitung

jumlah

pada

parasit

hidup tiap 10.000 eritrosit. 4.6.

Sub Kultur CInokulasi Biakan) - Biakan yang telah mencapai kadar

parasitemia

yang

tinggi harus dipecah dan dipindahkan ke tempat yang lain untuk dibiakkan lebih lanjut. - Kadar

parasitemia

biakan

sampai 0.1 - 0.2 X dengan

asal

harus

cara

diturunkan

diencerkan

dengan

RBC-50% hematokrit. - Setelah diencerkan dibuat hapusan darah

tipis

dan

dihitung derajat p ar as it em ia n ya . - Biakan dimasukkan kembali ke dalam

desikator

yang

berisi lilin dan diinkubasi pada suhu 37 ° C . 4.7.

Sinkronisasi Sinkronisasi

pada

prinsipnya

adalah

sorbitol untuk membunuh parasit yang

penambahan

mempunyai

umur

lebih dari 18 jam.

SKRIPSI


HASTUTI


36 Cara sinkronisasi [44,45] - Dibuat kemudian

larutan

:

sorbitol

disterilkan

5%

dalam

melalui

aquabidest

penyaring

membran

milipor 0,22 (J. - Suspensi parasit dalam

biakan

(kadar

parasitemia

>10%) dipindahkan dalam tabung sentrifuse disentrifuse dengan menit selama 8 - 1 0

kecepatan menit,

1.800

kemudian

putaran

per

supernatan dibuang.

- "Packed cell" disuspensikan dengan larutan sorbitol 5%

sebanyak

3 - 4

kali

volumenya,

dibiarkan kontak dengan sorbitol selama Selanjutnya

disentrifuse

dengan

putaran per menit selama 8 - 1 0

kemudian 10

menit.

kecepatan

1.800

menit.

- "Packed cell" dicuci dengan medium komplit sebanyak 3-4 kali

volumenya

untuk

menghilangkan

sorbitol

kemudian disentrifuse pada 1.800 putaran per menit, supernatan dibuang.

Tahap ini dilakukan sebanyak

2

kali. - "Packed cell" disuspensikan lagi dengan medium biak (RP-HS)sehingga diperoleh

50%

suspensi,

kemudian

dibagi ke dalam cawan petri dengan diameter

60

mm

masing-masing sebanyak 4 ml. - Biakan

dimasukkan

diinkubasikan

pada

ke suhu

dalam 37

°C

desikator dalam

dan

inkubator

selama 12 jam.

SKRIPSI


HASTUTI


37

- Tahap 2-5 diulangi hapusan

darah

sekali

tebal

dan

lagi,

kemudian

tipis

untuk

dibuat

mengamati

bentuk dari parasit yang ada. - Hasil sinkronisasi ini siap untuk digunakan uji

in

vitro.

5. Teknik Uji Aktivitas Antimalaria Untuk uji aktivitas antimularia in vitro

diperlukan

Plasmodium dengan satu stadium yang dapat diperoleh dengan cara sinkronisasi.

Stadium yang diperlukan adalah

cincin atau tropozoid muda yang dalam tumbuh menjadi skizon.

biakan

Kriteria efek

bahan

stadium

selanjutnya uji

terhadap

Plasmodium adalah % penghambatan pertumbuhan dari cincin menjadi skizon yang 5.1.

dibandingkan

stadium

dengan.

kontrol.

Penyiapan Suspeiisi Sel Parasit. Kadar

parasitemia

suspensi

sel

parasit

pengujian efek anti.nalaria adalah 0,5 -

1

parasit yang digunakan untuk

adalah

telah disinkronisasi

dan

pengujian

mengandung

%

bentuk

untuk

.

Sel yang

cincin

tua/dewasa (umur 18-26 jam) cukup banyak. 5. 2. Penyediaan Lempeng Sumur Mikro yang Mengandung

Bahan

Uji dan Kontrol Sebagai bahan uji

-

masing

fraksi dari daun Eupatorium triplinerve Vahl.

dengan

konsentrasi

SKRIPSI

10.000

adalah

larutan

masing

, 1 .0 0 0 , 1 0 0 , 1 0 , 1 dan 0 , 1 /jg/ml.


HASTUTI


38

Adapun penyiapan bahan uji ini dilakukan secara aseptik. Cara pembuatan

:

- Ditimbang 100 mg bahan uji,

kemudian

dilarutkan

pelarut yang sesuai dalam labu ukur 10 ml (Ki

dengan

=

10.000

Pg/ml). - Dari larutan

Ki

dipipet

dimasukkan ke dalam

labu

1

ml

ukur

dengan 10

ml

pipet dan

volume,

diencerkan

dengan pelarutnya semula sampai garis tanda (Kz =

yg/ml)

1.000

.

- Larutan K.2 dipipet

1 ml, masukkan ke dalam labu ukur

ml dan diencerkan dengan pelarutnya semula sampai

10

tepat

10 ml (K.3 = 100 j^g/ml). - Larutan K.3 dipipet

1 ml, dimasukkan ke dalam

10 ml dan diencerkan

dengan

pelarutnya

labu

semula

ukur sampai

tepat 10 ml (K* = 10 £Jg/ml). - Larutan K* dipipet

10 ml, dimasukkan ke dalam labu

dan diencerkan dengan pelarutnya semula

sampai

ukur tepat

10 ml
10 ml, diencerkan

10 ml dalam labu ukur (Kc* = 0 , 1

dengan

pelarutnya

pg/ml).

Catatan : - Untuk fraksi heksan menggunakan pelarut heksan. - Untuk fraksi kloroform menggunakan pelarut kloroform. - Untuk fraksi metanol menggunakan pelarut metanol.

SKRIPSI


HASTUTI


39

Sebagai

kontrol

negatif

digunakan

pelarut

dari

masing-masing fraksi. Sebagai

pembanding

digunakan

klorokuin

diphosphat

dengan konsentrasi 4 pmol/10 pi dengan pelarut aquabidest. Lempeng

sumur

mikro

terdiri

terbagi dalam 8 baris ( A - H ) dan

dari

96

sumur

yang

12 kolom ( 1 - 12 ).

- Kolom 1-4 diisi dengan fraksi heksan. - Kolom 5-8 diisi dengan fraksi kloroform. - Kolom 9-12 diisi dengan fraksi metanol. - Baris A sebagai kontrol negatif yang diberi pelarut dari masing-masing fraksi - Baris

E

sebagai

.

kontrol

positif

yang

diberi

bahan

pembanding. - Baris B, C, D, F, G dan H

diisi

fraksi

R±, Kz, Ka, K*, Ks dan

Untuk

lebih

jelasnya

dengan

masing-masing

secara berurutan.

pembagian

tersebut

dapat

dilihat pada gambar 4. Tiap sumur diisi dengan bahan kontrol positif sebanyal 5.3.

uji,

kontrol

negatif

dan

10 a/1 .

Prosedur Pengujian Efek Anti malaria In Vitro Apabila lempeng sumur mikro yang akan digunakan untuk

uji telah siap,

selanjutnya dilakukan

suspensi sel sebagai berikut

pengujian

:

- Ke dalam tiap sumur diberi 50 a/1 suspensi

SKRIPSI

terhadap


sel

parasit.

HASTUTI


40

- Lempeng

sumur

mikro

dimasukkan ke dalam

yang

telah

desikator

berisi

yang

medium

diberi

uji

lilin

dan

diinkubasikan pada suhu 37 °C selama 24 jam.

6. Evaluasi Hasil Pengujian Aktivitas Antimalaria Untuk mengevaluasi hasil

uji

aktivitas

sebelumnya dibuat sediaan darah tebal yang diperiksa dengan menggunakan mikroskop obyektif

100 kali).

Dari

sediaan

antimalaria

nantinya

(perbesaran

darah

tebal

200 Plasmodium stadium aseksual.

dihitung

prosen

falciparum

penghambatan

terhadap

penghambatan

ini

kontrol

dibuat

kurva

garis

dari

3

Setelah itu

Plasmodium

pertumbuhan negatif.

lensa

tersebut,

dihitung jumlah skizon hidup yang mempunyai lebih inti setiap

akan

Dari

prosen

regresi

linier,

(gambar 4) kemudian dicari prosen penghambatan 50% (IC 50) dari

ekstrak

daun

Eupatorium

triplinerve

Vahl,

yang

pada

gelas

mempunyai khasiat antimalaria. 6.1.

Cara Pembuatan Sediaan Darah Tebal : - Sebanyak 1-2 obyek bersih.

tetes

darah

diteteskan

Dengan salah satu ujung gelas

tetesan darah tadi

dilebarkan

sambil

ujung gelas obyek secara berputar, darah febrin.

mempunyai

diameter

1

Selanjutnya dikeringkan

cm

menggerakan

sampai tanpa

pada

obyek,

sediaan terbentuk

suhu

kamar,

dalam tempat yang bebas debu-

SKRIPSI


HASTUTI


41

- Sediaan darah tebal tadi Giesnsa dalam

bufer

7,2

permukaan sediaan darah,

ditetesi sampai

dengan

pewarna

menutupi

seluruh

kemudian didiamkarr

24- 48 j a m •Selanjutnya sediaan tadi air yang mengalir mengalir

sampai

sehingga habis

dicuci

larutan

dan

seluruh

selama dengan

Giemsa

turut

eritrositnya

t e r h e mo li si s. 6.2.

Perhitungan Prosen Penghambatan : Prosen penghambatan pertumbuhan Plasmodium falciparum

dapat dihitung dengan rumus di bawah

Prosen Penghambatan

=

1 00X

—

ini

:

Xe ----Xk

x lOQSi

Ket erangan : Xe 3 jumlah skizon hidup pada aumur yang dib«ri bahan uji. Xk -* jumlah slcizon hidup pada sumur kontrol positif.

SKRIPSI


HASTUTI


42

GAMBARAN LEM P E N G SUMUR MIKRO UNTUK UJI ANTIMALARIA

1

2

3

4

5

6

7

8

g

10

li

12

A B C D E F G H

Gambar 4 : Gaaibaran Lempeng Sumur Mikro untuk Uji Aktivitas Antimalaria Keterangan : A r: E = B, C, D, F, G, H = Kolom 1-3 Kolom 4-6 Kolom 7-9

SKRIPSI

= -

Diisi kontrol negatif Diisi kontrol posilif Diisi bahan uji pada berbagai koneentraei Oiisi fraksi heksan Oiisi fraksi kloroform Diisi fraksi metanol


HASTUTI


43

Cara Pembuatan Kurva Kegresi Linier

Log Prosen Penghambatan C 5£ )

Log ICadar C }jg / ml )

Gambar 5

SKRIPSI

Kurva Log Kadar vs Log Prosen Penghambatan


HASTUTI


44 7. Analisis Data Berdasarkan

pengolahan

data

sebelumnya

didapatkan data dalam bentuk prosen penghambatan Data-data ini selanjutnya

dianalisis

dengan

(

" )

di

mana

sebelumnya

data

"

kurang dari

ada

harga

prosen

telah Log

penghambatan

10 % maka seluruh data akan

).

Nested

tersebut

ditransformasikan terlebih dahulu ke dalam bentuk Jika dari data itu

%

menggunakan

" ANALISIS VARIAN " model Rancangan Tersarang ( Design

maka

Y. yang

ditransformasikan

ke dalam bentuk Log (Y + 1) [47],

Langkah Pengolahan Data : a. Menyaiakan Ho dan Ha. Ho^ = Tidak ada perbedaan pengaruh secara bermakna yang ditimbulkan oleh

setiap

fraksi

Eupatorium triplinerve Vahl.

dari

daun

terhadap pertumbuhan

Plasmodium falciparum in vitro. Hc»z = Tidak ada perbedaan pengaruh secara bermakna yang ditimbulkan oleh

adanya

setiap fraksi dari Vahl.

daun

perbedaan

kadar

Eupatorium

terhadap pertumbuhan Plasmodium

dalam

triplinerve falciparum

in vitro. Ha

=

Ada

perbedaan

ditimbulkan oleh

pengaruh setiap

secara

bermakna

yang

dari

daun

fraksi

Eupatorium triplinerve^ a h l . terhadap

pertumbuhan

Plasmodium falciparum in vitro.

SKRIPSI


HASTUTI


45

Haz = Ada perbedaan pengaruh seeara ditimbulkan

oleh adanya

setiap jenis ekstrak

bermakna

perbedaan

dari

yang

kadar

dalam

Eupatorium

daun

triplinerve Vahl. terhadap pertumbuhan Plasmodium falciparum in vitro.

b. Mencari harga F hitung dengan tabel ANAVA Tabel 1.

Tabel ANAVA untuk Rancartgan Tersarang Jumlah Sub-sampling yang Berbeda

SUMBER VARIASI

df

SS

dengan

MS

Antar Kelompok ( kadar )

( I ~ 1 )

ss kelompok

Antar Perlakuan (jenis ekstrak)

( i ~ 1 )

SSA

MSA ~ ^ A nbA ~ (4-1)

Antar Kelompok dalam perlakuan

(/-l)-(i-l) = < * - * )

SSB

MSB =

Antar Sumur dalam kelompok (sampling error)

(N-l)-(/-l) = ( » - I >

T O T A L

( N - 1 )

^SB (£-<,)

_ SSE MSE - ( N - O Vi r* T?

SSE

Dari tabel di atas dihitung harga F hitung F hitung t

-

MSA / MSB

F hitung z

=

MSB / MSE

*>

SKRIPSI

C


HASTUTI


46

*>

SS Total CSSD

Z ijk

♦>

SS Treatment

♦>

S S Kelompok

*>

SSB

*>

SS Residual

CSSA)

Vjk

ZI Y 2L s- r.

*

Z

*• j

Y2 . ij

SS Kelompok

CSSE3

SS

-

-

SSA

SS Kelompok

Keterangan :

(i - 1,2,3,4)

i-

=

Perlakuan

j

=

Kelompok kadar

(j = 1,2,3,4,5,6)

k

=

S u m u r

1,2,3)

I

-

Z Kelompok kadar

N

=

Z Percobaan

s

=

Z replikasi / Sumur

r

=

Z Kelompok kadar dalam tiap perlakuan

(k=

(£ = 19)

(N = 57) ( s = 3 )

1 ; r 2= r 3= r 4= 6 )

< r

c. Membandingkan harga F hitung dan F tabel

SKRIPSI

F tabel 1

*

a,

(-i, - 1),

(•£ - 1)

F tabel 2

»

a,

(t - 1),

(N - ■£)


HASTUTI


47

d. Kesi inpul an Jika harga

F hitung > F tabel,

maka

Ho ditolak

dan

bermakna

yang

Ha diterima. - F hitung 1 > F tabel 1 Berarti ada perbedaan pengaruh secara

daun

Eupatorium

pertumbuhan

Plasmodium

ditimbulkan oleh setiap fraksi dari

triplinerve

Vahl.

terhadap

falciparum in vitro. - F hitung 2 > F tabel 2 Berarti ada perbedaan pengaruh secara

bermakna

ditimbulkan oleh adanya perbedaan kadar dalam fraksi

dari

Eupatorium

daun

triplinerve

yang setiap Vahl.

terhadap pertumbuhan Plasmodium falciparum in vitro.

Hal Ho

yang

diterima

sebaliknya dan

Ha

berlaku untuk keduanya,

ditolak

apabila

yaitu

F hitung 1 maupun

F hitung 2 < F tabel 1 ataupun F tabel 2.

Untuk mengetahui efektivitas Prosen Penghambatan

( %

)

dari setiap perlakuan / kelompok maka dilakukan uji LSD (Least Significant Difference)

L S D

SKRIPSI

S


HASTUTI


48

Tabel 2.

Tabel Sellsih Harga R a t a —rata Tiap Kelompok dengan Harga Rata-rata Kontrol Positif C Y 11 !> Y11

Y ii

Y u

Y2 1

[Y u

- Y2 1 ]

Yai

[Y u

- Ya i]

Y«i

[Yu

- Y 4 l]

Y2 2

[Y u

- Y22 ]

Y32

[Y u

- Ya aJ

Y *2

[Yu

- Y42]

Y23

[Y u

- Y23]

Y 33

[Yu

- Y33]

Y+a

[Yu

- Y*3]

Y2 *

[Y u

- Yz-i]

Ya*

[Yu

- Ya *]

Y-*-*

[Y u

- Y**]

Y zs

[Y u

- Y23]

Yas

[Yu

- Ya s]

Y *3

[Y u

- Y*5]

? 2<3

[Y u

- Y 2 <S]

Y 3<5

[Yu

- Ya<s]

Y*<s

[Y u

- Y*<*]

Jika selisih harga rata-rata > LSD maka ada perbedaan yang signifikan, dan sebaliknya.

Catatan : - Jika

tidak

ada

perbedaan

yang

kontrol positif berarti mempunyai

signifikan daya

terhadap

hambat

seperti

kontrol positif (klorokin diphosphat) - Kontrol positif harus mempunyai selisih harga dengan kontrol negatif yang lebih besar dari (mempunyai

perbedaan

yang

signifikan

rata-rata pada

dengan

LSD.

kontrol

negatif).

SKRIPSI


HASTUTI


B A B

I V

HASIL PENELITIAN DAN A N A LISIS DATA

1.

Hasil

Penghitungan

Prosen

Penghambatan

Pertumbuhan

Plasmodium falciparum in vitro

Untuk menghitung jumlah skizon yang hidup inti

^

3

menggunakan

setiap

200

parasit

mikroskop

bantuan minyak imersi.

1000

perbesaran

aseksual

kali

dengan

Prosen penghambatan pertumbuhan

Plasmodium falciparum Eupatorium

stadium

dengan

dari

triplinerve

fraksi - fraksi

Vahl.

dibandingkan

daun dengan

kontrol negatif dihitung dengan menggunakan rumus

:

di mana : X

S/

=

Jumlah skizon hidup

pada

sumur

yang

diberi

bahan uji. X^ =

Hasil

Jumlah skizon hidup pada sumur kontrol negatif

penghitungan

Plasmodium

falciparum

%

penghambatan dari

fraksi

-

pertumbuhan fraksi

daun

Eupatorium triplinerve Vahl. dapat dilihat di tabel 3.

49

SKRIPSI


HASTUTI


50

Tabel 3

:

Data

X

Penghambatan

Pertumbuhan

falciparum dari. Berbagai Fraksi

Plasmodium

Daun Eupatorium

triplinerve Vahl.

Jenis Ekstrak

Heksan

Kloroform

Metanol

2.

No. Sumur

K-

1.

0

90

88

85

76

50

12

11

2.

0

90

88

84

76

17

4

0

3.

0

87

90

74

69

22

6

0

1.

0

89

82

65

46

5

0

0

2.

0

92

81

70

39

17

10

3

3.

0

87

83

71

31

19

8

0

1.

0

88

67

54

50

26

8

0

2.

0

88

71

54

45

21

15

2

3.

0

86

69

52

34

25

10

2

Prosen Penghambatan C JO Kz K* Ki Ka Ks

Analisis Data

Sebelum

dianalisis,

ditransformasikan

terlebih

log (Y+l) karena ada harga kurang dari

SKRIPSI

K<s

10

data

yang

dahulu

ke

%

diperoleh dalam

penghambatan

(Y)

bentuk yang

%.


HASTUTI


51 Tabel 4 :

Data Log CY+1) dari Berbagai Fraksi

Dau n

Eupatorium triplinerve Vahl. Jenis Ekstrak

Heksan

Kloroform

Metanol

Tabel 5

K*

Ki

Kz

1.

1,96

1,95

1,93

1,89

2.

1,96

1,95

1,93

3.

1,94

1,96

1.

1,95

2.

Log

K=

K<s

1,71

1 ,1 1

1,08

1,89

1,26

0,70

0,00

1,88

1,84

1,36

0,84

0,00

1,92

1,82

1,67

0,78

0,00

0,00

1,97

1,91

1,85

1,60

1,26

1,04

0,60

3.

1,94

1,92

1,86

1,50

1,30

0,95

0,00

1.

1,95

1,83

1,74

1,71

1,43

0,95

0,00

2.

1,95

1,86

1,74

1,66

1,34

1 ,20

0,48

3.

1,94

1,84

1,72

1,54

1,41

1,04

0,48

: Data Pengamatan Untuk R ancangan Tersarang EKSTRAK HEKSAN

MHR SUM

C Y + 1 3 Ka K*

No. Sumur

EKSTRAK KLOROFORM

BCSTRffc ICTWQL

1

K* K 1 !K 2!K 3 !K4 !K5 1K6 K 1 1K 2 1K 31K4 1K5 1K6 K 1 !K 2 1K 3 1K4 1K5 1K 6 1

1

I 1 I 1 I I 1 I 1 I I I I I I1 I Ir i I l I l 1 1 I I I I I > 1.96 1.95 11.33 ! 1.89 11.71 11.11 11.08 1.92 11.82 11.67 10.7B 10.00 10.00 1.83 11.74 11.71 1 1.43 10.95 10.00 ! t I I I ( 1 I I1 I 1 I I I 1 I f i I l I l I i I l I I t I

2

1 1 I1 I 1 I I I I I I I I 1 I I 11 I I I I I I I I I I 1 I 1 I 1.35 1.95 11.33 1 1.83 11.26 10.70 10.00 1.31 11.85 11.60 1 1.26 11.04 10.60 1.86 11.74 11.66 1 1.34 11.20 10.48 ’ t I I I I I I I I I I I I I I1 I * I I I 1 I i I l I I I I I I

3

I \ I I I I 2I ' I I I I I 1 I t I I I\ I \ I I I I I I I I 1.95 1.96 11.88 1 1.84 11.36 10.84 10.00 1.92 11.86 11.50 ! 1.30 10.95 10.00 1.84 11.72 11.54 11.41 11.04 10.48 i i i l i I t I I f I I I I I I I I I I I I1 i i i ir i i

Y ii

5.86 5.86 15.74 15.62 14.33 12.65 11.08 5.75 15.53 14.77 13.34 11.99 10.60 5.S5 15.20 14.91 14.18 13.19 10.96

Y ij

1.95 1.95 11.91 1 1.87 11.44 10.88 10.36 t.92 11.84 11.59 1 1.11 10.66 10.20 1.84 11.73 11.64 1 1.39 11.06 10.32

Y i...

5.86

25.28

21.96

23.97

Y i...

5.35

1.40

1.22

1.33

SKRIPSI


HASTUTI


52

2.1.

Menentukan Ho d a n Ha

H o j = Tidak ada perbedaan pengaruh seeara bermakna yang ditimbulkan oleh

setiap

fraksi

dari

daun

Eupatorium triplinerve V a h l . terhadap pertumbuhan Plasmodium falciparum in vitro. H o z = Tid ak ada perbedaan pengaruh secara bermakna yang ditimbulkan oleh

adanya

setiap fraksi dari Vahl.

daun

perbedaan

kadar

Eupatorium

dalam

triplinerve

terhadap pertumbuhan Plasmodium

falciparum

in vitro. Ha^ =

Ada

perbedaan

ditimbulkan oleh

pengaruh

secara

setiap

bermakna

yang

dari

daun

fraksi

Eupatorium triplinerveV ahl.

terhadap

pertumbuhan

Plasmodium falciparum in vitro. Ha 2 = Ada perbedaan pengaruh secara ditimbulkan

oleh adanya

setiap jenis ekstrak

bermakna

perbedaan

dari

daun

yang

kadar

dalam

Eupatorium

triplinerve Vahl. terhadap pertumbuhan Plasmodium falciparum in vitro.

2.2.

Harga F hitung Y2

*> C

=

N

( 5,86 + 25,28 + 21,98 + 23,97 >2 -------------------------------------

= 104,26

57

SKRIPSI


HASTUTI


53

*>

S S Total CSS)

Z

i*

y2k Wk

( 1,962 + 1,952 + =

*>

... + 0,482 )

-

104,26

22,12

S S Treatment

CSSA3

.2 E Y i----— s. r.

-

5,862

25,282 ------- + 18

+

105,71

c

-

21, 982 23,972 ------ + -----18 18

104,26

104,26

1,45

*>

SS Kelompok __

=

*>

SKRIPSI

SSB

Z Y2 . i-j__<•j

5,86 + 5,86 + ... + 0,96 ------------------ = -------------------3

=

124,11

=

19,85

-

104,26

104,26

=

SS Kelompok

=

19,85

=

18,40

-

-

-

SSA

1,45


HASTUTI


54

*>

S S Residual SSE

Tabel 6.

SUMBER

CSSE}

»

SS

-

=

22,12

=

2,27

SS Kelompok -

19,85

Tabel ANAVA untuk R a n c a n g a n Tersarang Jumlah Subsampling yang Berbeda

VARIASI

df

SS

( I ~ 1 ) =18-1 = 18

22,12

Antar Perlakuan (jenis fraksi)

( i ~ 1 ) = 4 - 1 = 3

1,45

Antar Ke lom po k d a l a m Perlakuan < Exp. Error )

(*-l)-(i-l) = ( * - * > = 18-3 = 15

19,85

Antar Su mu r d a l a m Ke lom pok ( S a m p l i n g Error)

(N-l)-(^-l) = ( N - I ) =56-18 = 38

2, 27

T O T A L

( N - 1 ) = 57-1 = 56

Antar Kel om po k ( kadar )

dengan

MS

MSA ~ SSA ”bA " ( i-l ) = 0,483 _ ( SSB MSB ti urn

-

-

F hitung 1

=

1,323

uop — SSE MSE " ( N-*

Dari tabel di atas dapat diperoleh harga F hitung

^

)

:

MSA ---MSB 0,483 1,323

=

SKRIPSI

0,365

-------- >


< df

3 dan 15 )

HASTUTI


55

MSB -

F hitung 2 MSE 1,323 0,060 22,05

2.3.

Perbandingan Harga F hitung deng a n F tabel F tabel 1 =

0,05

;

<

F tabel 2

3 dan 15

« ,

df = =

F hitung 2

1)

F tabel 1

;

0,05

-

3,29

=

F tabel 2 =

df = =

F hitung 1

a

a , (i - 1 ) , (/

=

F tabel 1

2.4.

( df 15 dan 38 )

>

- 1) , (H

-

1)

15 dan 38

1,94 F tabel 2

Kesimpulan

- F hitung 1 < ditolak.

F

tabel

Hal ini berarti

Tidak ada perbedaan

1,

maka

Hoditerima

Vahl.

Ha

:

pengaruh

secara

terhadap

bermakna

yang

daun

Eupatorium

pertumbuhan

Plasmodium

ditimbulkan oleh setiap fraksi dari

triplinerve

dan


SKRIPSI


HASTUTI


56 - F hitung 2 > F tabel 2 diterima. Ada

,

maka

Hal ini berarti

perbedaan

Ho

ditolak

dari

pengaruh

secara

Eupatorium

daun

Ha

: bermakna

ditimbulkan oleh adanya perbedaan kadar dalam fraksi

dan

triplinerve

yang setiap Vahl.


2.5.

UJI LSD LSD

Tabel 7 :

-

t ( a/2, N-l

=

t ( 0,025 , 38 )

=

2,024

=

0,405

x

)

/

2.MSE / s /

2 . 0,060 / 3

0,2

Selisih Harga Rata - rata

Tiap Kelompok dengan

Harga Rata - rata Kontrol Positif CY..) 11

711

Y11

Y21

1,95-1,95=0,00

Y31

1,95-1,92=0,03

*22

1,95-1,95=0,04

Y32

1,95-1,84=0,11

Y23

1,95-1,87=0,08

Y33

1,95-1,59=0,36

7 24

1,95-1,44=0,51

Y 34

1,95-1,11=0,84

Y35

1,95-0,66=1,29

Y36

1,95-0,20=1,75

Y25 Y26

SKRIPSI

1,95-0,88=1,07 1,95-0,36=1,59


Y11 Y«

1,95-1,84=0,11 1,95-1,73=0,22

Y*3

1,95-1,64=0,31

Y 44

1,95-1,39=0,56

Y 45

1,95-1,06=0,89

Y 46

1,95-0,32=1,63

HASTUTI


57 HASIL

:

Yang mempunyai efek relatif sama yaitu

yang

mempunyai

selisih

LSD

(

kontrol positif

) adalah

harga

mempunyai

kontrol yang

daya

lebih

hambat

positif kecil seperti

:

-

Fraksi

heksan

:

Kr

CO

daripada harga

dengan

( 1 0 0 - 1 0 . 0 0 0 /Jg/®1 )

-

Fraksi

kloroform

:

* 1 , k 2 , K3

( 1 0 0 - 1 0 . 0 0 0 /jg/ml)

-

Fraksi

metanol

:

V

( 1 0 0 - 1 0 . 0 0 0 Pg/ml)

K l'

V

K3

3. Kurva Log Kadar vs Log P r osen Penghambatan Untuk mengetahui hubungan antara peningkatan kadar dari setiap fraksi

dengan besarnya aktivitas maka dibuat

kurva log kadar vs log prosen penghambatan.

Data prosen

penghambatan yang digunakan adalah hasil rata-rata dari ketiga sumur untuk setiap fraksi

.

Tabel 8 : Tabel X Penghambatan Rata-rata dari berbagai Fraksi Daun Eupatorium triplinerve Vahl. No.

Konsentrasi C/jgXml} X

logX

X Penghambatan

Heksan Yi

logY i

Rata - rata C 50

Klorof orm Y2

logYZ

Metanol Ya

logYa

1.

10.000

4

88,67

1,95

82,00

1,91

69,00

1,84

2.

1.000

3

81,00

1,91

68,67

1,84

53,33

1,73

3.

100

2

73,67

1,87

38,67

1,58

43,00

1,63

4.

10

1

29,67

1,47

13,67

1,14

24,00

1,38

5.

1

0

7,33

0,86

6,00

0,78

11,00

1,04

0,1

-1

3,67

0,56

1,00

0,00

1,33

0,12

6.

SKRIPSI


HASTUTI


58

Dari data tersebut dibuat persamaan garis linier yang oenunjukkan hubungan antara peningkatan kadar dengan besarnya prosen penghambatan.

Tabel 9 : Hubungan antara Log Kadar dengan Log Prosen Penghambatan. Fraksi

r

a

Heksan

0,941

0,987

0,300

Y= 0,300X + 0,987

Kloroform

0,962

0,644

0,376

Y= 0,376X + 0,644

Metanol

0,911

0,822

0,312

Y= 0,312X + 0,822

b

Persamaan Garis

Harga IC^ q dari masing-masing ekstrak adalah

SKRIPSI

-

Fraksi

Heksan

:

238,175 pg/ml

-

Fraksi

Kloroform

:

639,398 jug/ml

-

Fraksi

Metanol

:

646,847 M g / m l


:

HASTUTI


59

LOG % PENGHAMBATAN

Gambar 6 s

Kurva Log Kadar vs Log X Penghambatan Ekstrak Heksan

SKRIPSI


HASTUTI


60

LOG % PENGHAMBATAN

Gambar 7 :

Kurva Log Kadar vs Log X Penghambatan Ekstrak Kloroform

SKRIPSI


HASTUTI


61

LOG % PENGHAMBATAN

Gambar 8 :

Kurva Log Kadar vs Log X Penghambatan Ekstrak Metanol

SKRIPSI


HASTUTI


BAB V P E M B A H A S A N

Pada uji aktivitas antimalaria

Eupatorium

fraksi dari daun bahan uji,

yang

akan

ini

digunakan

triplinerve

diamati

daya

Vahl.

tiga

sebagai

hambatnya

terhadap

pertumbuhan Plasmodium falciparum in vitro.

Fraksi

yang

akan digunakan ada tiga macam yaitu

heksan

yang semi

fraksi

bersifat non polar,

fraksi kloroform yang

bersifat

polar

metanol

polar.

dan

fraksi

dari

fase

Untuk

mendapatkan fraksi - fraksi tersebut dilakukan fraksinasi secara bertahap diawali

dari

pelarut

dengan

polaritas

yang lebih rendah sampai pelarut dengan polaritas tinggi, yaitu

dimulai

dengan

menggunakan

dilanjutkan dengan kloroform metanol.Hal

dan

pelarut

yang

terakhir

dengan

ini dimaksudkan untuk memisahkan senyawa

polar dari caropurannya dengan senyawa lainnya,

heksan,

sebab apabila fraksinasi

yang

dimulai

lebih dari

non polar

senyawa

yang lebih polar maka dikhawatirkan senyawa-senyawa

yang

bersifat non polar akan ikut ke dalam fase polar sehingga tidak didapatkan pemisahan yang lebih baik. Untuk proses fraksinasi tanaman tersebut metode maserasi ulang yaitu dengan cara

menggunakan

merendam serbuk /

simplisia dari tanaman Eupatorium triplinerve Vahl. 24

jam,

kemudian

disaring

untuk

diambil

selama

fraksinya.

62

SKRIPSI


HASTUTI


63

Maserasi diulang sebanyak tiga pelarut.

kali

untuk

Hal ini dimaksudkan agar senyawa yang

dapat tertarik relatif lebih sempurna.

Jumlah pelarut yang diperlukan tidak karena pelarut yang telah

macara

diharapkan

Adapun

menggunakan metode maserasi ini antara lain -

setiap

keuntungan

: terlalu

banyak

digunakan sebelumnya dapat

digunakan kembali setelah dipisahkan dari fraksi yang ditariknya dengan menggunakan rotary evaporator. -

Lebih efektif karena serbuk

dapat

kontak

terjadi

antara

lebih

lama

pelarut

dengan

sehingga

dapat

tertarik lebih sempurna. -

Pengerjaannya relatif lebih mudah

dan

tidak

banyak

menimbulkan kesulitan selama proses berlangsung. Selama

proses

maserasi

sewaktu-waktu

sehingga lapisan pelarut yang

sudah

perlu

jenuh

lebih

dapat menyebar dan bergantian dengan bagian lain

untuk

menghindari

kontak

dengan

terjadinya

bahan.

Hal

penjenuhan

digojok dahulu

pelarut

bertujuan

setempat

yang

yang untuk dapat

menyebabkan fraksinasi menjadi kurang sempurna. Wadah yang digunakan selama untuk

menghindari

proses

maserasi

penguapan

harus

pelarut

tertutup

(terutama

organik) sehingga tidak terjadi penjenuhan

akibat

rapat pelarut jumlah

pelarut yang berkurang. Ekstrak yang dihasilkan dari proses maserasi tersebut dipisahkan dari pelarutnya dan selanjutnya diuapkan sampai

SKRIPSI


HASTUTI


64

didapatkan fraksi

yang

kental.

Fraksi

ini

selanjutnya

digunakan untuk uji aktivitas antimalaria. Dalam uji aktivitas antimalaria diperlukan Plasmodium dengan satu

stadium

yang

dapat

diperoleh

dengan

sinkronisasi biakan Plasmodium dengan menggunakan sorbitol 5Z b/v.

Stadium yang digunakan untuk

stadium

atau

cincin

tropozoit

muda

pembiakan selanjutnya dalam waktu + 2 4 menjadi

skison.

Plasmodium

Kriteria

falciparum

efek

adalah

yang

muda

menjadi

bahan

prosen

skizon

dibandingkan dengan kontrol.

larutan

uji

adalah

mana

selama

jam akan berkembang

pertumbuhan Plasmodium falciparum dari tropozoid

uji

(%)

terhadap

penghambatan

stadium

yang

cincin

nantinya

/

akan

Pada saat penghitungan jumlah

sk i 2on yang hidup digunakan sediaan darah tebal yang pada preparat

cara

ini eritrosit dilisiskan

terlebih

mana dahulu

(tidak difiksasi) untuk mempermudah penghitungan. Untuk masing-masing pertumbuhan

mengetahui fraksi

sejauh yang

Plasmodium

mana

diuji

aktivitasnya

falciparum,

diperoleh dianalisis dengan menggunakan “ model rancangan tersarang

(

pengaruh

"Nested

maka

dari terhadap

data

" ANALISIS Design"

yang VARIAN

).

Dari

analisis tersebut Ha diterima apabila F hitung > F

tabel.

Dalam analisis ini didapatkan dua harga

dan

F

hitung

F

tabel di mana F hitung 1 aenunjukkan hubungan antara jenis fraksi dengan

SKRIPSI

besarnya

pengaruh

yang


ditimbulkan

oleh

HASTUTI


65

masing-masing

fraksi

tersebut

Plasmodium falciparum in

vitro.

terhadap F

pertumbuhan

hitung

2

menyatakan

hubungan antara perbedaan kadar dari setiap fraksi besarnya

pengaruh

yang

ditimbulkan

oleh

dengan

masing-masing

kadar tersebut terhadap pertumbuhan Plasaodiua

falciparum

in vitro. Apabila harga F hitung 1 > F tabel 1 maka Ho dan Ha diterima.

Hal ini berarti

yang ditimbulkan

oleh setiap fraksi dari

triplinerve

Vahl.


terhadap

ada

perbedaan

dan Ha diterima, pengaruh yang

hitung maka

dan hal ini berarti bahwa

ditimbulkan

oleh

Plasmodium

pertumbuhan

harganya lebih besar daripada F tabel 2

adanya

pengaruh

Eupatorium

daun

Sama halnya dengan F

ditolak

2

Ho

ada

jika

ditolak perbedaan

perbedaan

kadar

dalam setiap fraksi dari daun Eupatorium triplinerve Vahl. terhadap pertumbuhan Plasmodium falciparum in yang sebaliknya

berlaku

untuk

keduanya

vitro.

yaitu

diterima dan Ha ditolak apabila baik F hitung 1

Ho

perbedaan

pengaruh

yang

ditimbulkan

akan

maupun

hitung 2 < F tabel 1 ataupun F tabel 2, dan berarti ada

Hal

oleh

F

tidak adanya

variasi di atas. Berdasarkan hasil analisis data yang telah dalam penelitian -

ini diperoleh hasil sebagai berikut

:

F hitung 1 < F tabel 1 ( F hitung 1 = 0,365 dan F tabel

SKRIPSI

dilakukan


1 = 3,29 )

HASTUTI


66

Berarti tidak ada perbedaan pengaruh secara yang

ditimbulkan oleh setiap fraksi

Eupatorium

triplinerve

Vahl.

bermakna

dari

terhadap

daun

pertumbuhan

Plasmodium falciparum in vitro. -

F hitung 2 > F tabel 2 ( F hitung 2 = 22,05 dan F tabel 2 = 1,94 ) Berarti ada perbedaan pengaruh secara

bermakna

ditimbulkan oleh adanya perbedaan kadar dalam

Eupatorium

fraksi dari daun

yang setiap

triplinerve

Vahl.


Dengan demikian dari hasil analisis tersebut di atas dapat dikatakan

bahwa

triplinerve

semua

Vahl.

antimalaria,

fraksi

dari

sama - sama

dan perbedaan

mempunyai

yang

ada

adalah

besarnya

%

aktivitas

tidaklah

Perbedaan besarnya aktivitas antimalaria yang dalam hal ini

Eupatorium

daun

bermakna. ditimbulkan

penghambatan

disebabkan oleh perbedaan kadar dari setiap jenis

hanyalah fraksi.

Dengan kata lain adanya perbedaan kadar menyebabkan adanya perbedaan besar aktivitas (perbedaan hambatan

pertumbuhan

yang d i t i m b u lk an ny a) . F hitung 1 yang lebih besar daripada F tabel 1 juga diberikan

oleh

menyatakan

bahwa

masing - masing

efek fraksi

perbedaan yang bermakna dengan efek

yang

antimalaria tidak

yang

mempunyai

diberikan

oleh

kontrol positif (klorokuin diphosphat).

SKRIPSI


HASTUTI


67

Untuk

mengetahui

ditimbulkan

oleh

efektivitas setiap

dilakukan uj i LSD (Least

prosen

perlakuan

penghambatan /

Significant

yang

kelompok

maka

Difference).

Dalam

uji LSD ini akan dibandingkan selisih harga rata-rata dari setiap kelompok kadar dengan harga rata-rata dari positif,

Apabila selisih harga

besar daripada harga

LSD

kelompok kadar tersebut

rata-rata

berarti dengan

ada

kontrol

tersebut

lebih

perbedaan

antara

positif,

begitu

kontrol

pula sebaliknya. Dari hasil uji LSD yang telah dilakukan mempunyai daya hambat yang cukup efektif

ternyata yang

seperti

kontrol

positif (selisih harga rata-ratanya < harga LSD) atialah : - Fraksi heksan

!

Rg

- Fraksi kloroform : R^, R ?) - Fraksi metanol

:

Untuk mengetahui hubungan setiap fraksi

( 100 - 10.000 pg/al

)

( 100 - 10.000 A^g/ml ) ^3

( 100 - 10.000 pg/ml

antara

peningkatan

dengan besarnya aktivitas,

)

kadar

maka data prosen

penghambatan yang didapat, dibuat kurva log kadar vs log % p e n g h a m b a t a n . Selain untuk mengetahui

hubungan

tersebut,

kurva ini juga dapat digunakan untuk mencari besarnya IC^q dengan cara ekstrapolasi kurva log kadar vs

log

prosen

penghambatan.

yang

dapat

IC^q menunjukkan kadar fraksi

memberikan penghambatan pertumbuhan Plasmodium

falciparum

sebesar 50 % dibandingkan kontrol negatif.

SKRIPSI


HASTUTI


68

Dari kurva yang telah dilihat hubungan antara

dibuat log

6 -8 )

(gambar

kadar

dan

dapat

besarnya

penghambatan yang dinyatakan dalam bentuk persamaan linier seperti pada tabel 9. Dari persamaan

menunjukkan

bahwa

masing-masing Vahl.

dengan

fraksi

menyebabkan

peningkatan

dari

daun

maka

dapat

prosen

Dari

dikatakan bahwa besarnya

lurus dengan peningkatan kadar masing-masing

Eupatorium

triplinerve

Vahl.

Dari

didapatkan dapat diketahui bahwa fraksi IC50 p a *ing rendah (236,175 ^g/ml),

ini

penghambatan

penghambatan pertumbuhan Plasmodium falciparum

daun

maka

triplinerve

pertumbuhan Plasmodium falciparum in vitro. tersebut

yang

konsentrasi

Eupatorium

peningkatan

garis

seperti

tercantum pada tabel 9 di mana harga r positif,

%

prosen berbanding

fraksi

dari

kurva

yang

heksan

diikuti

hasil

mempunyai

oleh

fraksi

kloroform (639,398 /-fg/ml) dan yang tertinggi adalah fraksi metanol

(646,847

menghasilkan

^g/ml).

penghambatan

diperlukan fraksi metanol.

Hal

heksan

ini

berarti

sebesar <

50

fraksi

Dengan kata lain besarnya

yang diberikan oleh fraksi heksan fraksi metanol.

Dari

bahwa senyawa yang

hasil mempunyai

%

bahwa

untuk

kadar

yang

kloroform aktivitas

>

tersebut khasiat

fraksi maka

<

fraksi

antimalaria kloroform dapat

antimalaria

>

diduga lebih

bersifat non polar.

SKRIPSI


HASTUTI


69

Dari Kurva ditemukan adanya titik-titik di luar garis.

yang

Selama penyimpangan tersebut tidak

jauh maka hal tersebut tidak menjadi masalah. tersebut disebabkan oleh faktor ketelitian di mana pada pengamatan mengamatai sangat

sederhana.

penghambatan

dari

berpengaruh

Pada

kurva

fraksi

penyimpangan yaitu harga pada

(kadar 100 /Jg/ml)

pada

Penyimpangan

(human

hasil yang

log

error)

heksan

dipakai vs

memang log

terdapat

sebesar dari

yang

p e n g h it un ga n,

kadar

tabel

sudah

sedangkan tnenunjukkan

Apabila

menunjukkan penghambatan yang

dilihat

lebih

besar

dari yang semestinya (titiknya berada di atas garis). ini berarti

pada

kadar

tersebut

sebenarnya

penghambatan yang yang lebih rendah dari 73,S7 penyimpangan

tersebut disebabkan oleh

dari garis linier.

%

suatu

236,175

penghambatan rata-rata sebesar 73,67 % . dari kurva,

terlalu

ini faktor ketelitian subyek

mengingat metode untuk penghitungan masih

berada

Hal

metnberikan

%

penyimpangan

.

Jadi titik

Untuk menghindari penyimpangan tersebut

yaitu menghindari faktor human error maka pada sebaikknya dilakukan oleh beberapa orang beberapa kali sehingga didapatkan

dan

ketelitian

pengamatan dilakukan yang

lebih

baik.

SKRIPSI


HASTUTI


BAB VI K E S I

Dari hasil

M P U L A N

penelitian

yang

dilakukan

dapat

1. Fraksi heksan dari daun Eupatorium triplinerve

Vahl.

diambil beberapa kesimpulan, yaitu

mempunyai

aktivitas

menghambat

pertumbuhan

telah :

antimalaria

Plasmodium

dengan

falciparum

cara in

vitro pada kadar di atas 100 ^g/ml.

2. Fraksi kloroform Vahl.

mempunyai

menghambat

dari

daun

aktivitas

Eupatorium antimalaria

Plasmodium

pertumbuhan

triplinerve dengan

cara

falciparum

in

vitro pada kadar di atas 100 jug/ml.

3. Fraksi metanol dari daun Eupatorium mempunyai

aktivitas

antimalaria

menghambat

pertumbuhan

Plasmodium

triplinerve Vahl. dengan

falciparum

cara in

vitro pada kadar di atas 100 Mg/ml.

70

SKRIPSI


HASTUTI


BAB VII SARAN - SARAN

Perlu dilakukan penelitian

lebih

lanjut

terhadap

senyawa dalam daun Eupatorium triplinerve Vahl.

maca«

yang dapat

menghambat pertumbuhan Plasmodium falciparum in vitro yang dilanjutkan

dengan

isolasi

senyawa

yang

berkhasiat

t e rs eb ut .

71

SKRIPSI


HASTUTI


DAFTAR PUSTAKA

1.

Tjetje, Sumantri, M., Solichin dan Budi Pramana, 1991, Prospek Pengembangan Obat Tradisional Peluang dan Tantangan, Proceeding II, Kongres Ilmiah ke- 8 ISFI, Jakarta, hal. 11-13.

2.

Hargono, D. , 1892, Kebijaksanaan Pengembangan Obat Tradisional ke Arah Fitofarmaka, Buku P anduan Si mposi u m Fitoterapi dan Pengobatan Alternatif, Universitas Airlangga, Surabaya, hal. 13*

3.

Oemijati, S. , 1991, Masalah Malaria di Indonesia, Kumpulan Makalah Si mposi um Malaria, FKUI, Jakarta, hal* 2-3.

4.

Priaatna Dahlan, Y. , 1990, Propil Antibodi dan Reaktivitas Seluler pada Rekrudesensi dan Reinfeksi Plasmodium falciparum, Ringkasan Disertasi, Fakultas Pasca Sarjana Universitas Airlangga, Surabaya, hal. 1-5.

5.

Halim Mubin dan Pain, S. , 1992, Malaria Tropika dengan Beberapa Komplikasi, Cermin Dunia Kedokteran, Nomor 74, hal. 48.

6.

Rampengan, T.H. , 1991, Penatalaksanaan Malaria pada Anak, Majalah Kedokteran Tropis Indonesia, Nomor 1-2 . (Volume 4), hal. 17.

7.

Gandahusada, S., Pribadi, W., dan Illahude, 1990, Parasitologi Kedokteran, FKUI.

H.D.

,

8.

Phillipson, J.D. , and 0' Neill, M.J. , 1987, Antimalarial and Amoebicidal Natural Products, Biologically Actif Natural Products, Clarendon Press, Oxford, p. 49-57.

9.

Klayman, D.L., 1985, Qinghaosu (Artemisin) : An Antimalarial Drug from China, Science 2 2 8 , p. 1049-1054.

10.

Noster, S. and Kraus, Lj. , 1990, In Vitro Antimalarial Activity of Cautarea latiflora and Exostema caribaeum Extract on Plasmodium falciparum , Planta Medica 56, p. 63-65* 72

SKRIPSI


HASTUTI


73

11.

Khalid, S.A., Farouk, A., Geary, T.G. and Jensen, J.B., 1936, Potensial antimalarial candidates from African Plants : an in vitro aproach using Plasmodium falciparum , Journal of Etnopharmacology 15, p. 201 - 208.

12.

0' Neil, M.J., Bray, P.H., Broadman, P., Chan, K L ., Phillipson, J.D., Warhurst, D.C. and Peter, W., 1987, Plant as sources of Antimalaria drug Part 4 : Activity of Brucea javanica fruit against Chloroquine-resistant Plasmodium falciparum in vitro, Journal of Natural Products 50 (1), p. 41 48.

13.

Utomo, A.B., 1993, Pengaruh Pemberian Ekstrak fase CHCla Batang Tinospora tuberculata Lamk. terhadap Pertumbuhan Plasmodium falciparum Welch. secara in vitro, Skripsi, Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga, Surabaya, hal. 56.

14.

Rokhim, 1993, Pengaruh Ekstrak Fraksi CHcls akar Pepaya Gantung ( Carica papaya L var. Gantung) terhadap daya hambat pertumbuhan Plasmodium falciparum secara in vitro, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga, Surabaya, hal. 67.

15.

Heyne, K., 1927, Tumbuhan Berguna Indonesia Edisi III, Terjemahan Badan Litbang Kehutanan, Jakarta, hal. 1827 - 1828.

16.

Kloppenburg - Versteegh, J., 1915, Wenken en Raadgevingen betreffende het gebruik van Indische Platen, vruchten enz, 3 e verbeterde druk, GCT van Dorp & Co., Semarang - Surabaya - Den Haag.

17.

Anonim, 1985, Tananian Obat Indonesia, Jilid I, Departemen Resehatan Republik Indonesia, hal. 6 8 .

18.

Sya ms uh id ay at , S.S., Hutapea, J.R., 1991, Inventarisasi Tanaman Obat Indonesia I, Balai Penerbitan dan Pengembangan Kesehatan, Jakarta.

19.

Backer, C.A. and Backhuizen v.d. Brink, R.C., 1983, Flora of Java : Spermatophyte only, tfolters Noordhoff. N.V. Groningen, The Netherlands, p. 377 379.

SKRIPSI


HASTUTI


74 21.

Nadkarni, K.M., 1973, Indian Materia Medica Vol I Popular Book Report Bombay 7, Dootabapehuar Prakashan Ltd., Panvel, hal. 521 - 522.

22.

Sastroamidjojo, A.S., 1967, Dian Rakyat, hal. 108 - 109.

23.

Jain, T.C. and Striha, R.J., 1976, Semmler's Hydrocarbon from Eupatorium ayapana, Phytochemistry 15, hal. 847 -848.

24.

Yadava, RN and Saini, V.K., 1991, estimtion of Antimicrobial oils, Soc. 6 (9), ha. 532 -533.

25.

Chaturvedi, R and Meskhandain, NB, 1989, from Eupatorium ayapana. J. Indian Chem., hal. 286 - 287.

26.

Sharma, S.K. and Sigh, V.P. 1979, The Antifungal Activity of some essencial oils, Indian Drugs Pharm. Ind. 14 (1), hal. 3 - 6 .

27.

Van Den Berg, M.A., 1984. Ver-0-Peso : The Ethnobotany of an Amazonian Market, Advaances in Economic Botany Ethnobotsny in The Neotropics G. T. Prace & J.A. Kallunki (Ed. 5), N.Y. Botanical Garden, Bronx, N.Y. 3, hal. 140 -149.

23.

Wright, W.C. and 0' Neil, M.S., 1991, Antiamoebic and Activities of Alkaloid Isolated, Planta Medica 57, p . 337 - 339.

29.

Woerdenberg, H.J., Light, C.B. and Pras, N., 1990, Artemisia annua L. : A source of novel antimalarial drugs, Pharmaceutisch Week blad Scientific, e d . 12 (5), p. 169 - 181.

30.

Khalid, S.A., dkk, 1989, Isolation and characterization of an antimalarial agent of the Neem tree Asadirachta indioa, Journal of Natural Product 52 (5), p. 922 - 927.

SKRIPSI

Obat


Asli

Indonesia,

Spectrophotometri J. Indian C h e m . ,

Coumarins Soc 6 (4),

HASTUTI


75

31.

Rochanankij, S., 1985, Nimbolide a constituent of Azadirachta indica, inhibits plasmodium falciparum in culture, South East Asian, Medica Public Health 16 (1), hal. 66-72.

32.

Bray, D.H., Kilimali, V.A.E.B., Nkunya, M., Siemienska, J.J., Warhurst, D.C. and Weenen, H., 1989, Tarzanian Plants with antimalarial activity, Transai of the Royal Soc. of Tropical Medical and Hygiene 83, p. 422.

33.

Weenen, H., Nkunya, M., Bray, D.H., Mwasumbi, L.B., Kinabo, L.S. and Kilimali, A.E.B., 1990, Antimalarial activity of Tanzania Medicinal Plants, Planta Medica 56, p. 368-370.

34.

Kudo, R.R., 1966, P r o t o z o o l o g y , Charles C. Thomas Publizer, Springfield Illionis USA, p. 717-737.

35.

Boyd, M.F., 1970, Malariology : A Comprehensive survey of all aspect of the group of disease from a global satand point, Vol I, Philadelphia, W.B. Sounders Compagny, p. 29.

36.

Russel, P.F., West, L.S., Manwell, R.D., Mac Donald, G., 1963, Practical Malariology, Second Edition, Oxford University Press, London, p. 25-49.

37.

Mayer, H.F., 1970, Review of Medical Pharmacology Large Medical Publication, Los Atlas, California, p. 593.

38.

Brown, H.W., 1979, Dasar Parasitologi Klinis , (Diterjemahkan oleh Rukmono, B., dkk.), Penerbit PT. Gramedia, Jakarta.

39.

Davey, T.H., 1966, A Guide to Human, Parasitology for Medical Practitioners, Eighth Edition, The English Language Book Society and H.K. Lewis and Co. Ltd., London, p. 79-84.

40.

Jeffrey, H.C. and Leach, R.M., 1968, Atlas of Medical Helminthology and Protozoology, E.S. Livingstone Ltd., Edenburg and London, p. 35.

41.

Mutschler, E., 1991, Dinamika Obat : Buku ajaran farmakologi dan toksikologi, edisi V, Penerbit ITB, Bandung, hal. 674-675.

SKRIPSI


HASTUTI


76

42.

Sulistia Gan, 1987, Farmakologi dan Terapi, Gaya Baru, Jakarta, hal.492-493.

edisi III

43.

Harboune, J.B., 1987, Penentuan Cara Modern Menganalisa Tumbuhan, Metode Fitokimia, diterjemahkan oleh Dr. Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung.

44.

Iwo, M.I., 1987, Laporan Latihan Kerja tentang Teknik dan Uji in vitro Aktivitas Obat Antimalaria, FMIPA ITB, Bandung, hal. 23-51.

45.

Wattimena, J.R., Ranti, A.S., Iwo, M.I., 1989, Efek Ekstrak Kering dalam Metanol dari Daun Cassia siamea (C ae salpiniaceae) Kulit Alstonia scholaris R. Br. (Ap oc yn ac ea e ), Herba Elephantopus scaber (Asteracae), Buah Morinda citrifolia L. (Rubiaceae), biji Sivletenia merophylla (Meliaceae) dan kulit Plumeria acuminata (Apocinaceae) pada strain Plasmodium falciparum F. 2332 dan I. 2300 in vitro, Laporan Penelitian, P.A.U. Ilmu Hayati ITB, Bandung, hal. 1-10 .

46.

Trager, W. and Jensen, J.B., 197S, Human Malaria Parasites in continuous Culture, Science 193, D e p . of Parasitology, Rockfeller University, New York, p. 673-675 .

47.

Steel, R.G.D, and Torrie, J.H., 1980, Principle and Procedures of Statistics : A Biometrical Approach, second Edition, Me. Graw-Hill Book Company, New York, p. 153 - 170, 233 - 235.

48.

Sujana, 1986, Metoda Statistika , edisi IV, Penerbit Tarsito Bandung, Bandung,

49.

Indrayanto G.,1988 Kultur Jaringan Tanaman petunjuk praktis untuk bidang Farmasi ), Bioteknologi UGM, Yogyakarta, hal. 9-19.

SKRIPSI


(suatu PAU

HASTUTI


LAMPIRAN I

HASIL PENGHITUNGAN X PENGHAMBATAN PERTUMBUHAN

Plasmodium falciparum DARI BERBAGAI FRAJCSI DAUN Eupatorium triplinerve Vahl.

je n is

ESK'TWK

NMR SLMJR A

K

♦

K

-

K 1

K 2

K

K 3

4

K. 3

K 6

■

108

11

13

16

26

H

B

0

90

88

S3

76

30

12

11

K

A

102

10

12

16

23

es

90

110

A

B

0

90

se

84

76

17

4

0

A

97

13

10

19

27

76

91

97

B

0

37

90

74

69

22

6

0

A

112

12

20

39

61

106

112

116

L

B

0

B9

92

65

46

3

0

0

R

A

100

8

19

30

61

B3

90

97

F

B

0

92

B1

70

39

17

10

3

R

A

100

13

17

29

69

SI

92

103

B

0

37

S3

71

31

19

e

0

A

94

11

31

43

47

70

B6

95

B

0

SB

67

54

SO

26

a

0 94

11 T A N

S3

93

96

A

96

11

28

44

33

76

82

B

0

OB

71

54

43

21

13

2

A

96

13

30

46

63

72

06

94

B

0

06

69

32

34

23

10

2

2

L

KETEFWGON i A a

> ■

J u m lih akizon hidup dangtn i n t i 3 t i a p 200 p a r a s it aaakaual P in g hx u b atjn tsrliadap k o n tro l n a g a tif

77

SKRIPSI


HASTUTI


H I L I K ___ PBRPUSTAKAAN "VnTERSlTAS AIRLANOOA* S U R A B A Y A LAMPIRAN II

KONVERSI X PENGHAMBATAN CY3 KE LOG C Y+l3 DARI BERBAGAI FRAKSI DAUN Eupatorium triplinerve Vahl.

JENIS KSKTKfiK

H E K e

A H

K L 0 R 0 F 0 R if n

HOMOR SUMUR

SKRIPSI

: K 2

K 3

! K 4

:

k

5

K 6

90.00 ',80.00 |85.00 176.00 150.00 ! 12.00 S Y 1 1 H og (Y + l) 1.96 S 1.95 S 1.93 S 1.89 S 1.71 1 1.11

11.00

90.00 188.00 284.00 176.00 *17.00 ! 4.00 ! Y 2 a Slog (Y + l) 1.96 S 1.95 S 1.93 S 1.89 S 1.26 1 0.70

0.00

87.00 190.00 ',74.00 J69.OT 122.00 1 6.00 S Y 3 1 Slog (Y + l) 1.94 1 1.96 S 1.88 1 1.84 1 1.36 1 0.84

0.00

89.00 '82.00 165.00 146.00 1 5.00 1 0.00

0.00

1.95 ! 1.92 ! 1.82 i 1.67 ! 0.78 1 0.00

0.00

92.00 ',81.00 170.00 139.00 117.00 ',10.00 ! Y 2 a Slog (Y + l) 1.97 J 1.91 ! 1.85 ! 1.60 1 1.26 1 1.04

3.00

87.00 ',83.00 ',71.00 S31.00 119.00 1 8.00 S Y 3 1 Slog (Y + l) 1.94 1 1.92 ! 1.86 ! 1.50 S 1.30 1 0.95

0.00 0.00

88.00 '67.00 ',54.00 150.00 126.00 1 8.00

0.00

1.95 ! 1.83 ', 1.74 ! 1.71 1 1.43 1 0.95

0.00

Y

88.00 171.00 ',54.00 145.00 S21.00 115.00

0.00

Slog (Y + l)

1.95 ', 1.86 S 1.74 ! 1.66 s 1.34 1 1.20

0.48

86.00 ',69.00 ',52.00 J34.OT S25.00 110.00 S Y 3 a Slog (Y + l) 1.94 5 1.84 ', 1.72 S 1.54 S 1.41 1 1.04

2.00

i

! 1

Y

Slog (Y + l)

■i X

M E T A H n u L

K + 1K 1

S 1

Y

Slog (Y + l) ! o 1


1.08

0.00

0.00

0.60

0.48

HASTUTI


79 LAMPIRAN III

PENGHITUNGAN PROSEN PENGHAMBATAN RATA-RATA DARI BERBAGAI FRAKSI DAUN Eupatorium triplinerve VAHL. Jenis No Konsentrasi ?S Penghambatan C 50 X Penghambatan ekstrak C /jg/ntf.} 1 2 3 Rata-rata C 50

H E K S A N

K L 0 R 0 V 0 R M

1.

10 .000

88

88

90

88,67

2.

1 .000

85

84

74

81,00

3.

100

76

76

69

73,67

10

50

17

22

29,S7

5.

1

12

4

6

7,33

6.

0,1

11

0

0

3,67

4.

1. 9

10 .000

82

31

33

82,00

1 .000

65

70

71

63, 67

3.

100

46

39

31

33, 67

10

5

17

19

13, 67

5.

1

0

10

3

6,00

6.

0,1

0

3

0

1,00

4.

1. M E T A N 0 Li

SKRIPSI

10 .000

67

71

69

69,00

n u.

1 .000

54

54

52

53,33

3.

100

50

34

43,00

4.

10

26

45 OA

25

24,00

5.

1

8

15

11,00

6.

0,1

0

2

10 o


1,33

HASTUTI


80

LAMPIRAN IV

DAFTAR HARGA

F Tabel

OAFTAft 0

NW

OMUNriW ««1«m■•«!>OifiifUmftuUmW9

•MM WM*| » • t.M

’ 1 • » 4 i • 9 • • II 11 If 11 14 It It 19 It It It ai aa aa a4 aa at a) aa tt at «t tt is t ••

*-.*»;

SKRIPSI

I

t

111,4 u t . i a u .i U44 1*44 ••44 I I M •• M 1414 1M I ii.t t 14.14 1 M I •t . M it 4 a ia 4 a 1149 1141 it .ia •.at •.at 1.41 •.1* i. t 4 M t M l •41 M l m i t .a t 14* M l 4. I t 444 141 141 t .t l I.N 4.14 m i M t M l 444 1.11 4.99 4.14 M l 4.91 44a 441 441 441 *.11 M t M t 4.94 4 .a t •4? i* ia MT M l M l 141 m i 444 44? 144 m i M l •41 M4 149 t .ia 441 •44 M l M l M9 M l M l a .n M l 4,11 a.9i •4a •41 a.a« 1.14 a49 ua 444 a .tt a .ia •49 •41 a4t M l l.t l a.M 4.9t 141 M t a.i » M l a .tt M l a. i i a.M 449 a .t i a4i *.14 a .ta M l M l M9 •.it 441 1.J4 *44 4.11 M l M l M t M t M l 444 a .tt u a a .t t a.9» i n a.44 M t • .it 4.44 a.ta 144 •41 M t a.?4 1.44 M t •44 441 1.44 4.14 m i M t a .T t •41 •41 M l 4.41 a .t i 4.14 t4 a 'a .T9 1.44 •44 M t 144 4 JI 141 1.11 I4 t a.94 M l M4 14« 141 4.aa a.4t a . it M9 a.9i a. a t M l M a 14a 4.|| 1.4V 1.4? 144 a .tt 149 a.4t Ma U9 4 .a t 1.44 • .tt t4 t M t M t ’ . M l t.44 M4 4.11 141 a .t « a .t t M4 M l a44 M9 Ma 4 JI a.4t 1.41 •.Tt M t M l *v4* M l U l 444 a.aa m i a .?t M t M t M i •44 141 4 J| 147 8.14 4.T4 *49 M t M t M l MT 441 M l a.9t 149 M t M9 141 M l 4.44 a .M M i m i M4 1.44 M t M t <44 4.11 t .M m s a .?t M l 1.41 M l MS ill 4*19 a.aa m i 1.44 •4a M l M S . tIT M l 441 M l •44 i4 t M t a .M M l b‘ L ia lit 4.44 L it a.9t 141 •49 M t M9 a . i i •.14 i.ta •49 4,44 *.4» . M l a.i9 M l Ma i.ii •44 a .tt L4t M l M l 1.14 M l 144 i.t t

tfUUnfi,

•41.1 • 4 M 1414 I4 * .t MM S IM • IM • IM a iM 114.4 1144 11.41 IM t 1141 1141 1141 1149 1141 I M t IM t M l 1.74 4.44 M t I.M M f 447 M t M l M l t.M M l 1.11 M l 1.99 1.91 I.9 S M l M t 441 4.11 4.94 i.t a M t M l 441 4.44 441 4 .M 441 441 M4 441 •49 144 M l M9 •.94 a.9t •49 •44 1,41 M9 1.44 M1 M l 144 1.17 1 41 a.aa •41 M l M l M l 1.11 M l I.M M l 149 M l 1.14 a .i9 •41 a. 14 •■It M t a4 a M t M l •.91 M l M l Ma M9 M4 1.91 144 M l •44 141 •41 a .9 t Ma M? M l M9 141 a.4t M l M t 1.91 141 M a 144 M l 149 Ma M t S .M M t •49 a .t t Ma a.44 141 M t M4 a .s t M l M t a .tt M l M l M t M l M l M4 M9 a .u a ;tt •44 1.41 a .4 i Ma M l 141 M l M l a .u 147 1.41 a .4 i a.aa M l l.« 4 1.11 •.!• 144 M l M l a .4 i M t i .i i •.•a 1.14 1.14 a . it M l 141 I.t t 1.41 144 14T M l t .lt 5.11 M l M l 149 i.ta M l M t Ma M l a .ti •49 a.ta . •■•• 143 i .i i 141 M l a .a t a .u 141 144 141 141 I.tt 144 M l •41 1.4* a .i t M l M t 141 141 149 l.tl a .it MS M l M9 a .ta 141 141 I .M I.M 1.91 M t Ma a.M 1.41 144 144 141 I.t t 1.91 . IJ t a .tt M t a .ta 141 I.M 141 1.M 1.91 1.9) 144 1.44 ' M l M l 1.11 I .M 149 141 1.99 t.91 •4a M l M9 t.lt 141 t .M 141 t .lt 1.91 1.11 ' M l M< a .ti 149 141 141 t.91 I.M 1.91 149 a .ta 1.11 a. t4 141 t .lt 149 141 1.99 ’ 1.91 1.11 M l M l M l 1 .M 141 141 141 1.91 1.91 144

’ ' *

1.11 •41 I.II 141 141

M l M l » 1.11 141 !.?•

a .t t 141 144 1.91 1.19

141 * 144 1.91 141 149

141 t.91 1.91 141 141

144 1.94 141 141 t.44

1.11 1.11 141 141 141

1.94 I.M 141 14a l.ia

1.11 141 149 1.11 I.II

141 141 i.a i i.t t I.M

m*Sm*ha!J/


HASTUTI


81 LAMPIRAN

V

DAFTAR HARGA

O A K TA R

t Tabel

C

NUfti P w k m i U I LTntuJt D itfrib u ri t

V»dk ( BiUnfio D*i*m Badaa OtfUr M « ftr« U lc a fl tp )

V

tO »

» •u*

'u n

'u i

1

6 3 .M

3 1 ,8 2

1 2 ,7 1

2 3

9 ,9 2

6 ,9 6

5,84

4 ,5 4

430 3 .1 8

*31 %92

i

4 ,SO

3 ,7 5

s s

4 ,0 3

2 .3 5

139 1 .6 4

2 .7 8

2 ;i 3

3 .3 8 3 ,1 4

2*7 2 ,4 5

m

.

1 .3 7 6 1 .0 6 1

1 ,0 0 0

0 ,7 2 7 0 ,6 1 1

032 s

0.1 w

0 ,2 8 9

o ;m

0384

0377

0 .1 3 7

0 .5 6 9

0 ,271

O.IZl

1 .5 3

0 .9 7 8 0 .9 41

0316 0 ,7 6 5 0 .7 4 1

2 .0 2

1 ,4 8

0 ,9 2 0

0 ,7 2 7

0 ,3 5 9

0 .2 6 7

0 .1 3 2

134

1 .4 4

0 ,9 0 6

0 ,7 2 8

0353

0 .2 6 5

1 .9 0

1 .4 2

0 ,7 11

0 ,5 4 9

0 .2 6 3

136 1 ,8 3

1 .4 0

0396 0 .8 * 9

0 ,1 3 1 0 .1 3 0

0 .7 0 6

0 .5 4 6

0302

0 ,1 3 0

1,38

0 .8 8 3

0 .7 0 3

0 .5 4 3

0361

0,120

7

S .5 0 3 .3 0

3 ,0 0 2 ,9 0

236

8

9

3 35

232

2 ,2 6

to

W 7

2 ,2 3 230

1,37

0379

0 ,7 0 0

0342

3 ,1 1

2 .7 6 2 .7 2

1,81

11 12

1 .8 0

136

0.540

0 ,2 6 0 0 .2 6 0

0 ,1 2 9 0 .1 2 9

2,68 2.86

2 J8

MB

0 .8 1 6 0373

0 .6 9 7

3 .0 6 3,01

0359

2 ,6 2

1 ,7 7 1 ,7 6

0 ,6 9 2

0 .5 3 8 0337

O J5 9 0358

0 ,1 2 8 0 .1 2 8

2 ,9 8

2 ,1 6 2 ,1 4

0 .6 9 $ 0 ,6 9 4

0339

15

2 ,9 5

2 .6 0

2 ,1 3

2 ,9 2

2 ,5 8

2 ,1 2

0 ,2 5 8 0358

0 .1 2 6

18 17

2 .9 0

2,57

18

2,55 2,54

0357 0357 0357

0 .1 2 8 0 .1 2 7

19

2 .8 8 2 ,8 6

2,11 2 ,1 0

20

2 .8 4

*2,53

2 .8 3

0357 0357

0 .1 2 7

21

a

2 .8 2

0 ,1 2 7

13 14

.

3.71

‘ 3 ,0 6

2^1

136 135

134

0370 0368

1.75

1.34

0366

0 ,6 9 1

0 .5 3 6

1,75 1 ,7 4

134 143

0365 0 ,8 6 3

0 .6 9 0 0 .6 8 9

0 ,5 3 5 0334

1.73

133 1.33

0362 0,8 61

0 .6 8 8

0 ,5 3 4

0 ,6 8 8

0 ,5 3 3

2 ,0 9

1,73

2 .5 2

2 .0 9 2 ,0 0

l . « 1 ,7 2

2 ,S I 2 ,8 0

2 ,0 7 2 ,0 7

1 ,7 2 1 .7 1

2 ,4 9

2 .0 6

0 .1 2 8

0 .1 2 8

0 ,1 2 7

1.32

0 ,8 6 0

0 .6 S 7

0 .5 3 3

132 1,32

0359 0 .3 5 8

0 .6 8 6

0 ,5 3 2

0356

0 ,1 2 7

1/71

0358 0357

0 ,5 3 2 0 ,5 3 2

0356

132 1 ,3 2

0 ,6 8 6 0 ,6 8 5 0 ,6 8 5

0331

0356

0 ,1 2 1 0 .1 2 7

0 ,1 2 7

23

2 .8 1

24

2 ,8 0

21

2 .7 9

2 ,4 8

2 ,0 6

1.71

1 .3 2

0 ,8 5 6

0 .6 8 4

0.531

0356

26

2 ,7 8

2 ,4 8

2 ,0 6

1.32

0 ,8 6 6

0 ,6 6 4

0331

0 .2 5 6

0 .1 2 7

27

2 .7 7

2 .0 5

131

0 ,5 31

0356

0 ,1 2 7

2 .7 6

2 .0 5

1.70

131

0355 0355

0 ,6 8 4

28

2 ,4 7 2 ,4 7

l.tl 1 ,7 0

0 .6 8 3

0356

0 ,1 2 7

2 ,7 6

2 .4 6

2 ,0 4

1 .1 0

131

0 .8 5 4

0 .6 8 3

0 .5 3 0 0 ,5 3 0

0356

0 .1 2 7

2.04 2 .0 2

1 .7 0

131

0,8 54

0356

0 ,1 2 7

1 .3 0 1 .3 0 1 .2 9

0351 0 .8 4 8

0 ,6 8 3 0.6 81

0 ,5 3 0

1 .6 8

0 .2 5 5 0 .2 5 4

0 ,1 2 6

0 .6 7 9

0 .5 2 9 0 ,5 2 7

0 ,8 4 5

0 ,6 7 7

0326

0 .2 5 4

0 .1 2 6 0 .1 2 6

1 ,2 8

0 ,8 4 2

0 .6 74

0 .5 2 4

035£

0 ,1 2 6

2f

SO

2 ,7 5

2 .4 8

40 60

2 ,7 0

2 ,4 2 239 2 ,3 6

2 ,0 0

1.67

120

2 ,6 6 2 .8 2

1 .9 8

OQ

2 ,5 8

2 .3 3

1 .9 6

1 .6 6 1 .6 45

Sum txr: Stntiaticel Table* for Biological, Agricultural mnd Mtdtcal R itn rc h , Fisher, ft.A. din Y*tr» . F.. T ib l» III, Oliver 3t Boyd Lid, Edinburgh.

SKRIPSI


HASTUTI


82 LAMPIRAN

VI

FOTO TANAMAN Eupatorium triplinerve Vahl.

Gambar 9 : Tanaman Eupatorium triplinerve Vahl.

SKRIPSI


HASTUTI


83 LAMPIRAN

VII Foto Plasmodium falciparum Welch. ( perbesaran

1.000 X )

Gambar 10 t Hapusan Darah Tipis seb e l u m sinkronisasi

*rv * Jt

Gambar 11 : Hapusan Darah Tipis Sesudah Sinkronisasi

SKRIPSI


HASTUTI


84

% ' i• * %

¥

■

**

*

'

a.

. £

‘ . ^

Gambar 12 t Hapusan Darah Tebal Kontrol Negatif

«%

*%

K

..

'

*• 'V t

i Gambar 13 : Hapusan Darah Tebal Kontrol Positif

SKRIPSI


HASTUTI


85

SKRIPSI


HASTUTI


86

-

#>-

Gambar 16 : Hapusan Darah Tebal

Fraksi Metanol

Koterangan Gambar : 1. 2. 3. 4.

SKRIPSI

Eritrosit Bentuk skizon dari Plasmodium Falciparum Bentuk cincin dari Plasmodium falciparum Bentuk Tropozoit muda dari Plasmodium falciparum


HASTUTI


87

LAMPIRAN

VIII

Surat Keierangan Identifikasi Tanaman

PUSAT PENELITIAN DAN PENOEKBANOAN BIOLQQI BALAI PEHELmAN DAN

LIPI

fOEHBANCJAN BOTANI

'

HERBARIUM BOGORIENSE

.

Jalan Raya Juanda No. 22-24r Eogor, Indonesia* Telcpon (0?51) 322035

No. j 5 / ^ .U / b o V- /
,

Bogor,

go Pebruari 1992

Kepada Yth. Sdr. S. Brotoaataryo Apt J l. Borobudnr no.7 Jakarta I

Dengan Hormat, Manunjuk ear at Saudara tertan ggal No.

541 5 M

f a f f f / & 3 f a l .dengan

— <3 DeStrnV^r

,

in i diberitahukan hahwa

tumbuhan yang Saudara k l' Imkan ke Heibariu/n Eogorionge, Balitbang Botani, pualittang B io lo g i - L IP I, Bogoi t adalah aebagai berikut Wo.

t

■

J e n i s

3uku

1.

Euoatorlna -f^ipltnerva Vahl

2%

Plant ago nwor L-

.

Aateraceae Plantaginaoaae

Domikian, semoga bsrguna bagi sau< lo « i - LIPI

■/

B a litb o n g Botemi

SKRIPSI


HASTUTI

PENGARUH FRAKSI HEKSAN, KLOROFORM DAN METANOL DARI DAUN EUPATORIUM TRIPLW ERVE VAHL TERHADAP PERTUMBUHAN PLASMODIUM FALCIPARUM IN VITRO

Recommend Documents