GAMBARAN DARAH MENCIT (Mus nzascul~~s nlbirzus) PADA PROSES PERSEMBUHAN LUICA YANG DIBERI SALEP FRAKSI ETIL ASETAl DAN FRAKSI AIR RIMPANG KUNYIT (Curcctnm longn Linn.)
Oleh: AGUS FAHRIZAL ALAMSYAH B04104121
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2009
ABSTRAK AGUS FAHRIZAL ALAMSYAH. Gambaran Darah Mencit (Mus nzusculus albinus) Pada Proses Persembuhan Luka Yang Diberi Salep Fraksi Etil Asetat dan Fraksi Air Rinlpang Kunyit (Curcuma longa Linn.). Dibimbing oleh IETJE WIENTARSIH dan SUS DERTHI WIDHYARI. Penelitian ini bertujuan mengetahui aktivitas pemberian sediaan topikal dalam bentulc salep dari ekstrak rimpang kunyit (Curcuma longa Linn.) terhadap gambaran darah dalam proses persembuhan luka pada mencit putih (Mus nzusculus albinus). Sebanyak 40 ekor mencit albino jantan dengan berat 20-40 gram, berumur 2 bulan digunakan dalam penelitian ini. Mencit dibagi menjadi 4 kelompok dengan setiap kelompoknya 10 ekor mencit, yaitu kontrol positif dengan obat komersial yang mengandung neomycin sulfat 5% (K+), kelonlpok kontrol negatif tanpa sediaan (K-), kelolnpok perlakuan dengan fraksi etil asetat rimpang kunyit (PE), dan kelompok perlakuan dengan fraksi air rimpang kunyit (PA).Kulit daerah punggung anterior tiap mencit dilukai dengan skalpel sepanjang 11.5 cm. Aplilcasi sediaan salep dilakukan setiap hari sebanyak dua kali sehari selana 21 hari pasca perlukaan. Pengamatan hematologi dilalcukan pada hari ke2, 4, 7, 14, dan 21. Hasil uji penapisan fitokomia menunjukan bahwa fraksi etil asetat rimpang kunyit mengandung senyawa-senyawa kimia dari golongan flavonoid dan kuinon, sedangkan fraksi air rimpang kunyit hanya mengandung senyawa kimia dari golongan kuinon. Gambaran darah mencit akibat pemberian salep fraksi etil asetat rinlpang kulyit (PE) memperlihatkan profil yang lebih mendekati kelompok kontrol positif (K+) daripada kelompok mencit yang diberi salep fralcsi air rimpang kunyit (PA). Hal ini terlihat dari profil ganbaran darah hingga akhir pengamatan. Secara umuln sediaan salep rimpang kunyit dengan fraksi etil asetat mempunyai manfaat dalam memba~rtuproses persembuhan luka dibandingkan dengan salep rimpang kunyit dengan fraksi air, sehingga salep rimpang kunyit dengan fraksi etil asetat berpotensi untuk dikembangkan menjadi obat komersial.
GAMBARAN DARAH MENCIT (MKS~tusculusalbiitrrs) PADA PROSES PERSEMBUHAN LUKA YANG DIBERI SALEP FRAKSI ETIL ASETAT DAN FRAKSI AIR RIMPANG KUNYIT (Cr~rcr~mn lot~gnLinn.)
Oleh: AGUS FAHRIZAL ALAMSYAH B04104121
Skripsi Sebagai salah satu syarat untuk melnperoleh gelar Sarjiu~aKedolcteran Hewan pada Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2009
(Mus nzusculus albinus) Pada Proses Persembuhan Luka Yang Diberi Salep Fraksi Etil Asetat dan Fraksi Air Rimpang ICunyit (Curcunzn longr~ Linn.) Bentuk Tugas Alchir : Penelitian : Agus Fahrizal Alamsyah Nama : B04104121 NIM
Judul Tugas Akhir
: Gambaran Darah Mencit
Disetujui
Dosen Pembimbing I
Dosen Pembimbing I1
Dr.Hi.Ietie Wientarsih.Apt.MSc NIP. : 19530211 198503 2 002
Dr.drh.Sus Derthi Widhvari,MSi NIP. : 19640601 199002 2 001
Diketahui
Tanggal Lulus :
3 0 SEF 2009
KATA PENGANTAR Segala puji dan syukur kehadirat Allah SWT atas rahmat, karunia dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi ini sebagai salah satu syarat untuk inemperoleh gelar sarjana kedokteran hewan di Fakultas Kedolcteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Sholawat serta salam semoga terlimpah ltepada Rasulullah SAW. Terima kasih yang sebesar-besamya penulis ucapkan kepada: Ayah, Ibu, Adi!&u Iga dan Mita untuk do'a, ltasih sayang, semangat dan dukuugan yang selalu diberikan kepada penulis. Dr.Hj.Ietje Wientarsih,Apt.MSc dan Dr.drh.Sus Derthi Widhyari,MSi sebagai dosen pembimbing atas bimbingan, arahan, nasehat, perhatian, semangat dan ~notivasiyang telah diberikan kepada penulis. Dr.dr11.Wiwin Winarsih,MSi atas bantuan dan arahan yang telah diberiltan kepada penulis. Teman-teman Angkatan 41 (Asteroidea) untuk kasih sayang dan kebersamaannya. Teriinakasih
kepada semua pihak
yang telah membantu dalam
penyelesaian skripsi ini. Semoga Allah SWT menlbalas semua kebaikan yang telah diberikan. Penulis menyadari bahwa masih banyalc kelcuraugan dalam tulisan ini, oleh karena itu saran dan kritik yang membangun sangat diharapkan. Penulis berharap semoga karya il~niahini dapat bermanfaat.
Bogor, September 2009
Agus Fahrizal Alanzsyah
RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Dompu, Nusa Tenggara Barat pada tanggal 17 Agustus 1987. Penulis merupakan putra pertama dari tiga bersaudara, dari Bapak Farasil Muhamad Said dail Ibu Rosidah. Penulis menempuh pendidikan di SD Negeri 1 Dompu
(1993-1999),
SLTP Negeri 1 Dompu (1999-2002) dan SMU Negeri 1 Dompu (2002-2004). Penulis melanjutkan pendidikan di Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor inelalui jalur Uildangan Seleksi Masuk IPB (USMI). Selama meiljadi mahasiswa, penulis pernah aktif di Himpunan Profesi Satwa Liar dan Himpunan Profesi Hewan Kesayangan & Satwa Akuatik pada tahui12005-2007. Pe~lulisjuga ikut meiljadi anggota Himnpuilan Mahasiswa Islam.
DAFTAR IS1 Halaman DAFTAR TABEL ............................................................... v
DAFTAR GAMBAR ...........................................................
vi
DAFTAR LAMPIRAN .........................................................
vii
PENDAHULUAN Latar Belakang................................................................................. 1 .. Tujuan Penelltian.............................................................................. 2 .. Manfaat Penelltian ............................................................................ 2 TINJAUAN PUSTAKA Rimpang Kuuyit Sejarah dail Botani Kunyit ................................................ 3 Sifat Fisik dan Kimia Kunyit ............................................ 3 Peranan Rimpang Kunyit ............................................... 5 Zat Aktif Rimpang Icunyit ............................................... 5 Ekstraksi .................................................................................... 8 Salep............................................................................................ Mencit ................................................................................................ Darah ................................................................................................. Eritrosit ......................................................................................... Leukosit ........................................................................................ Hemoglobin .................................................................................. Hematokrit.................................................................................... Perseinbuhan Luka ............................................................................ Fase Peradangan ........................................................................... Fase Proliferasi ............................................................................. Fase Peinatangan.......................................................................... Faktor-Faktor Yang Mempengaruhi Persembuhan Lulca............. METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat .......................................................................... 26 Alat dan Bahau ............................ ..................................................... 26 Hewan Percobaan .............................................................................. 26 .. Metode Penel~tian............................................................................. 26 .. Pembuatau Simpltsia................................................................... 26 Pembuatan Ekstrak Kunyit .......................................................... 26 . . . Penapisail Fitokiinia .................................................................... 27 Pembuata~lSalep......................................................................... 28 Perlukaan Pada Mencit ................................................................ 28 Pengeloinpokan Perlaluan ....................................................... 28 Pemberian Obat Luka Komersil dail Salep Kunyit ..................... 29 Penganlbilan Darah..................................................................... 29 Analisa Darah .............................................................................. 29
Perhitungan Jumlah Eritrosit.................................................... Perhitungan Jumlah Leukosit ................................................... Penentuan Kadar Hemoglobin................................................. nilai Hematokrit................................................ .Perl~itungan . Anal~s~s Data.....................................................................................
29 30 30 30 31
HASIL DAN PEMBAHASAN . . . Penapisan F~tokimla.......................................................................... 32 Gambaran Darah............................................................................... 32 Jumlah Eritrosit............................................................................ 33 Nilai Hematokrit.......................................................................... 35 Kadar Hemoglobin....................................................................... 37 Jumlah Leultosit....................................................................... 39 Efektifitas Pemberian Salep Kunyit Untuk Persembuhan Luka....... 41 KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan....................................................................................... 42 Saran................................................................................................. 42 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................... 43 LAMPIRAN..........................................................................................
46
DAFTAR TABEL
Halaman
. . . .
1 Kompos~siKlmla ICunyit............................................................
4
2 Data Dasar Fisiologis Pada Mencit .............................................
11
. . .
3 Hasil Pellapisan Fitolc~mla..........................................................
32
4 Rataall jumlah eritrosit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit .............................................................
33
5 Rataan nilai hematokrit (PCV) pada mellcit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit ...........................................................
35
6 Rataan ltadar hemoglobin (Hb) pada mencit dalam koildisi lulca yang diolesi salep kunyit .............................................................
37
7 Rataan ju~nlahleukosit (WBC) pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit ............................................................. 39
DAFTAR GAMBAR Halaman 1 Tanaman dan Rimpang kunyit .................................................... 4
2 Mencit laboratorium (Mus nzuscz~lusalbinus).................................. 10
3 Rataan jumlah eritrosit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit ............................................................
34
4 Rataan nilai hematokrit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit ............................................................. 36
5 Rataan kadar hemoglobin pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit ............................................................. 38
6 Rataan jumlah leulcosit pada lnencit dalarn kondisi luka yang diolesi salep kuuyit............................................................. 40
DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1 Analisa data jumlah eritrosit setelah perlakuan .......................... 47 2 Analisa data jumlah leukosit setelah perlakuan .......................... 53 3 Analisa data nilai llematokrit setelah perlakuan ......................... 59
4 Analisa data lcadar hemoglobin setelah perlakuan ......................
65
PENDAHULUAN Latar belakang Manusia dijuluki homo fibula karena ia melnpunyai kebiasaan bercerita apa yang dilihat, didengar, dan dirasalcan. Demikian juga halnya dengan nenelc moyang kita, lcetika berhasil menyembuhkan penyakit tertentu dengan suatu ramuan, cerita tersebut segera tersebar ke segenap anggota komunitasnya. Ramuan itu biasanya tidak melalui penelitian ilmiah, tetapi lebih didasarkan pada pengalaman, budaya, dan kepercayaan. Pengalaman empiris inilah yang mendasari pengetahuan farmakologi dalam mempertimbangkan pe~nalcaianobat tradisional dalam pengobatan modern. Penelitian dan pengembangan tanaman obat ditujulcan untuk mencari alternatif pellgganti obat sintetik, salah satunya adalah penelitian di Bidang farmasi yang berdasarkan indikasi suatu tanaman obat yang memiliki khasiat secara empiris. Selain itu, pengujian toksikologi juga telah banyak dilakukan ole11 para peneliti untuk mengetahui selang lceamanan penggunaan tanaman obat bailc secara akut maupun kronis (Dalimartha 2005). Sampai saat ini pengkajian tanaman obat tersebut terus dilakukan, tidak terkecuali tanaman kunyit. Kunyit merupakan salall satu tumbuhan yang banyak digunakan masyarakat Indonesia, terutama untuk keperluan dapur (bumbu dan zat warna makanan), lcos~netikamaupun dalam pengobatan tradisional. Secara tradisional, air rebusan rimpang kunyit yang dicampur dengan gambir digunakan sebagai air lcumur mulut untuk gusi bengkak. Kete~sediaantananan kunyit yang sangal berlinlpah di Indonesia tidak didukung dengan pengembangan obat luka dari tanaman untuk lcepentingan komersil. Pennasalahan-permasalahan tersebut lnenjadi pertimbangan tuntuk mengembangkan obat luka asal tanaman kunyit lcarena melniliki prospek yang sangat bailc dala~npemanfaatannya menjadi produk yang siap pakai, guna lnendukung swasenlbada obat dalam upaya meningkatlcan ltesehatan ~nasyarakat Indonesia, serta sebagai penghasil devisa negara.
Tujuan Penelitian 1. Mengetahui zat-zat aktif dalam kunyit yang dapat ditarik oleh pelarut etil asetat dan air.
2. Mengetahui jumlah eritrosit, jumlah leukosit, nilai hematohit, d m kadar hemoglobin pada mencit (Mus mz~sculus)dalam kondisi luka yang diolesi salep fi.aksi etil asetat dan fraksi air rimpang kunyit (Curcunza longa Linn). 3. Mengetahui secara umum perbandingan efektifitas pemberian sediaan salep fraksi etil asetat dan fraksi air rimpang kunyit dalam persenlbuhan luka.
Manfaat Penelitian Hasil penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai sumber informasi tentang gainbaran darah (jumlah eritrosit, jumlah leukosit, nilai hematohit, dan kadar hemoglobin) pada nlencit dalam kondisi luka yang diolesi salep fraksi etil asetat dan fraksi air riinpang lunyit (Curcunza longa Linn.). Hasil penelitian juga dapat digunakan sebagai acuan perbandingan efel~tifitaspenggunaan salep fraksi etil asetat dan fraksi air rimpang kunyit (Curczln~alonga Liim.) dalanl proses persembuhan luka d m sebagai dasar penelitian lebih lanjut.
TINJAUAN PUSTAKA Sejarah dan Botani Kunyit Kunyit merupakan tanaman obat yang bersifat tahunan (perenial) yang tersebar di seluruh daerah tropis. Tanaman kunyit tumbuh subur dan liar di sekitar hutan atau bekas kebun. Kunyit merupakan tumbuhan semak yang tumbuh berumpun-rumpun, mempunyai susunan tubuh yang terdiri dari akar, batang semu, rimpang, terdiri dari kumpulan ltelopak atau pelepah daun yang berpautan, daun tangkai bunga, dan kuntum bunga (Rukrnana 1994). Tumbuhan ini tidak berbulu, batangilya pendelc, bunganya putih pucat dan kuning, daunnya berjumbai, mempunyai daun pelindung berwarila putih bergaris hijau dan diujuilgnya merah jambu, sedangkan yang terletalc di bagian bawah berwarna hijau muda, serta pelepah daunnya menlbentuk batang semu (Purseglove et al. 1981). Kunyit dikenal sebagai Curcunza loizgga Linn, karena naina tersebut sudah dipakai untuk jenis rempah-rempah lainnya, inaka tahun 1918 diganti menjadi Curczrma donzestica oleh Valantin (Purseglove et al. 1981). Kata curcuma berasal dari bahasa Arab yaitu kz~rkz~m dan bahasa Yunani kaalkoin. Pada tahun 77-78 SM, Dioscarides menyebut tanaman ini sebagai Cyperus yang menyerupai jahe, tetapi pahit, kelat, sedikit pedas dan tidalc beracun. Tananan ini banyak dibudidayakan di Asia Selatan khususnya di India, Cina Selatan, Taiwan, Filipina dan Indonesia khususnya Jawa (Darwis et al. 1991). Tanaman kunyit termasuk kingdom Plantae, divisi Spealinatoplyta, sub divisi Angiosperi1zae, kelas Monoco@ledonae, ordo Zingiberales, falnili Zingiberaceae, genus Cz~rcunza, spesies Curcunza doi~zesticaValet (Rukmana 1994).
Sifat Fisifc dan I
Gambar 1. Tanaman dan Rimpang kunyit (Sumber: h@://www..sadaJcom/images/turmeric.gz~ Kunyit merupakan jenis temu-temuan yang mengandung senyawa aktif diantaranya minyak atsiri dan kurkuminoid. Mimyak atsiri tersebut mengandung senyawa-senyawa k i i i a seskuiterpen alkohol, tumeron dan zingiberen sedangkan kurktunimoid mengandung senyawa kurkumii dan turunannya berwarna b i g yang meliputi desmetoksikurkumin dan bisdesmetoksikurkumin. Di samping itu rimpang kunyit juga mengandung pati atau amilum, gom dan getah, sedangkan yang memberikan aroma harum dan rasa khas pada umbinya adalah minyak atsiri (Thomas 1989). Komposisi kimia kunyit dapat diliiat pada Tabel 1. Tabel 1. Komposisi K i i a Kunyit Komponen
Jumlah (%)
Kadar air
6.0
Protein
8.0
Karbohidrat
63.0
Serat kasar
7.0
Bahan mineral
6.8
Mmyak volatil
3.0
Kurkumin
3.0
Bahan non volatil
9.0
Sumber :Natarajan dan Lewis (1980)
Peranan Rirnpang Kunyit
Bagian kunyit yang sering dimanfaatkan adalah rimpangnya, untuk antikoagulan, antiedemik, menurunkan tekanan darah, obat malaria, obat cacing, obat salcit perut, memperbanyak ASI, stimulan, mengobati keseleo, memar dan rematik. Kurltuminoid
pada kunyit berkhasiat
sebagai antihepatotoksik,
anthelmintik, antiedemik, analgesik. Zat aktif lain dari kunyit yaitu lturkumin dapat berfuilgsi sebagai antiinflamasi dan antioksidan. Kurkumin juga berkhasiat mematikan kuman dan menghilangkan rasa kelnbung karena dinding empedu dirangsang lebih giat untuk mengeluarkan cairan pemecah lemak. Millyak atsiri pada kuilyit dapat bermanfaat untuk mengurangi gerakan usus yang kuat sehingga manlpu meugobati diare. Selain itu, juga bisa digunakan ultuk ~neredakatlbatuk dan autikejang (Sumiati dan Adnyana 2004). Salep yang dibuat dari campuran lcutlyit dellgall nmillyak kelapa banyak digunakan untuk menyembuhkan kaki bengkak dan untuk mengeluarkan cairan penyebab bengkak. Salep dari kunyit detlgan asam kawak juga digunakan untuk pengobatail kaki luka. Kunyit yang diremas-remas dengan biji ceugkeh dan melati digutlakail u~ltulcobat radang hati, dan penyakit kulit. Sementara akar kunyit yang diremas-remas dapat digunalcan sebagai obat luar peuyakit bengkak dan reunatik (Sumiati dan Adilyaila 2004). Beherapa penelitian secara in vitro dan in vivo meuunjukan bahwa kunyit mempunyai aktivitas sebagai antiinflarnasi (anti peradangan), aktivitas terhadap peptic tllcel; antitoksik, antihiperlipiden~ia,dan aktivitas anti kailker. Pada tikus, jus lcunyit atau serbulc yang diberikail secara oral tidak menghasilkan efek a~~tiinflamasi (anti peradangan), hanya injeksi iiltraperitoneal (Ice organ dalain perut) yang efektif. Ekstrak kurkumin juga dapat mencegah kerusakan hati pada tikus, mencegah hepatoksisitas dan kerusakan sel, menuruilkaii semua komposisi lipid (trigliserida, fosfolipida dail kolestrol) dall mencegah lcanker usus (Sumiati dan Adnyana 2004).
Zat Alctif Rimpang Kunyit Alkaloid Alkaloid merupakan metabolit sekunder yang bersifat basa (Anonim
2008a). Menurut Hidayat (2008) alkaloid merupalcail seilyawa basa nitrogen asal
tumbuhan yang bersifat fisiologi altif. Alkaloid hagi tumbuhan b e r h g s i sebagai senyawa racun yang melindungi tumbuhan dari serangga dan herbivora, produk akllir reaksi detoksifikasi senyawa-senyawa yang berbahaya bagi tumbuhan, reg~~lator faktor peitumbuhan dan sebagai senyawa cadangan untuk sumber nitrogen atau elemen lain yang berguna bagi tumbuhan. Allcaloid sering kali beracun bagi manusia dan banyak yang mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol, jadi digunakan secara luas dalam bidang pengobatan (Harborne 1987). Alkaloid berfungsi sebagai anti de~nam (anti piretikum), anti cacing (anthelmintikum), obat atau zat pemulih (analeptiltum): anti parasit (anti plasmodium), anti radang (antiinflamasi), anti batuk (antitusif), insektisida, narkotikum, merangsang sistem saraf pusat (stimulansia), memacu keluarnya
keriugat
(diaphoretic),
merangsang
muntah
(emetikum),
dan
merangsang keluarnya urin (Anonim 2008a). Flavonoid Flavonoid merupakan senyawa yang larut dala~n air. Flavonoid ~nengandung siste~n aro~natik yang terkonjugasi, umulnnya terdapat pada turnbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid. Se~nua flavonoid inenurut strukturnya merupakan turunan senyawa iuduk flavon yang berupa tepung putih dan semuanya mempunyai sejumlah sifat yang salna (Harborne 1987). Flavonoid
berfungsi
menurunltan
permeabilitas
kapiler
sehingga
perdarahan kapiler dapat dicegah serta kerapuhan dan kerusaltan ltapiler dapat diperbaiki (Wardhana et al. 2001). Flavonoid bekerja dengall membentuk sumbat tro~nbositdan ~neinperbaikiendotel vaskuler sehingga dapat ~nenutuprobekan ltecil pada pembuluh darall (Evans 1989).
Polifenol dan Tanin Polifenol ~nerupakan kelonlpok bahan kilnia yang ditemukan pada tananan yang ~nemililtikarakteristilt mengandung lebih dari satu kelompok fen01 per molekul. Secara umum sub divisi polifenol terdiri atas tanin dan phenylpropanoid seperti lignin dan flavanoid (Hollmann 2005).
Tanin pada tumbuhan sub divisi angiospermae terdapat khusus dalam jaringall kayu. Menurut batasannya, tanin dapat bereaksi dengan protein membentuk kopolimer mantap yang tak larut dalam air. Dalam industri, tanin adalah senyawa yang berasal dari tumbuhan, yang mampu mengubah lculit hewan yang mentah menjadi kulit siap pakai karena kemampuannya menyambung-silang protein. Salah satu fungsi utama tanin dalam tumbuhan ialah sebagai penolak hewan pemalcan tumbuhan karena rasanya yang sepat (Harborne 1987).
Saponin Saponin adalah deterjen alami yang ditemukan pada banyak tanaman yang memiliki bahan surfaktan karena mengandung lemak dan air yang mudah larut. Komponen strulctur saponin terdiri dari gula-gula hexose dengan sejumlah atom karbon, hidrogen dan oksigen. Keberadaan saponin dapat dicirikan dengan rasa yang pahit, pe~nbentukbusa yang stabil pada larutan cair (busa berbentuk sarang lebah pada air) dan mampu membentuk lnolekul dengan kolestrol (Cheeke 1999). Selain itu, saponin juga mempunyai kemampuan membunuh kulnan (Anonim 2008b).
Icuinon Kuinon adalah senyawa berwarna dan mempuyai kromofor dasx seperti lcromofor pada benzokuinon, yang terdiri atas dua gugus 1cal"oonil yang berkonyugasi dengan dua ikatan rangkap karbon-karbon. Warna pigmen kuinon di
slam beragam, mulai dari kuning pucat sampai hampir hitanl, dan struktur yang telah dikenal jumlahnya lebih dari 450. Untuk tujuan identifikasi kuinon dapat dibagi menjadi enlpat kelompok: benzokuinon, naftolcuinon, antraltuinon, dan kuinon isoprenoid. Senyawa kuinon yang terdapat sebagai glikosida h u t sedikit dalaln air, tetapi umumnya kuinon lebih mudah larut dalan leinak dan akan terekstraksi dari ekstrak tumnbuhan kasar bersama-sama dengan karotenoid dan ltlorofil (Harborne 1987). Senyawa kuinon mempunyai kemampuan sebagai antibiotik dan penghilang rasa sakit seita merangsang pertumbuhan sel baru pada lculit (Anonin1 2008b).
Ekstraksi
Ekstraksi adalah pemisahan kandungan aktif dari simplisia menggunakan cairan penyaring yang cocok. Metode ekstraksi antara lain perendaman (nzaserasi), perkolnsi, digesti, infusi dan dekoksi. Hal-ha1 yang harus diperhatikan dala~nproses ekstraksi adalah jumlah simplisia, penambahan air ekstrak, derajat kehalusan, cara pemanasan, cara penyaringan dan perhitungan dosis pemakaian (Wientarsih dan Prasetyo 2006). Maserasi adalah cara ekstraksi yang paling sederhana. Bahan jamu yang dihaluskan sesuai dengan syarat Farmakope Indonesia (biasanya terpotong-potong atau diserbuk-kasarlca~~),disatukan dengan bahan ekstraksi. Deposisi tersebut disimpal dan terlindungi dari cahaya langsung (mencegah reaksi yang dilcatalisis cahaya ataupun perubahan warna) kemudian dikocok kembali. Waktu maserasi adalah berbeda-beda, setiap Farmakope mencantumkan 4-10 hari dengan dilaltultan pengocokan secara berulang (kira-kira tiga kali sehari). Melalui usaha ini dijamin suatu keseilnbangan konsentrasi bahan ekstralcsi yang lebih cepat lte dalam cairan (DepKes RI 1995). Keadaan dia~nselama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif. Semakin besar perbandingan simplisia terhadap cairan ekstraksi, akan semakin baik hasil yang diperoleh (Voight 1994). Cara ekstraksi yang tepat secara alarni tergantung pada telcstur dan kandungan air bahan tumbuhan yang dieltstraksi dan pada jenis senyawa yang diisolasi (Harbome 1987). Ekstraksi juga sangat bergantung pada jenis d a l komposisi dari cairan pengeltstraksi. Untuk memperoleh sediaan obat yang cocok umumnya berlalcu canpuran etanol-air sebagai cairan pengekstraksi (Voight 1994).
Salep Salep merupakan sediaan setengah padat yang digunakan sebagai obat luar pada membran mukosa/lculit. Bahan obat harus larut atau terdispersi homogen dalam dasar salep yang cocok. Fungsi salep antara lain sebagai sutbstansi obat untulc pengobatan lalit (pembawa), pelunlas pada lalit, mencegah kontak permulcaan kulit dengan rangsangan dari luar (Wientarsih dan Prasetyo 2006).
Syarat-syarat dasar salep antara lain harus stabil secara fisik maupun kimia, warna dan bau harus stabil selama penyimpanan da11 pemakaian, dapat dicampurlcan dengan semua obat, halus dan licin sehingga mudah dioleskan pada kulit, daya kerjanya sama baik untuk kulit kering maupun berlemak, tidak mengiritasi kulit, tidak mudah tengik, dan mudah dipakai atau dioleskan (Wientarsih dan Prasetyo 2006). Voight (1994) ~nenjelaskanbahwa salep yang mengandung cairan dalain jumlah besar harus dilindungi terhadap pengenceran cairan jika wadah tidak terjanlin kerapata~mya.Ini dilakukan dengan menutup menggunakan folia logam atau plastik atau bahan lain yang cocok. Menurut Ansel (1989) salep biasanya dikemas, baik dalam botol atau dalan tube. Botol dapat dibuat dari gelas tidak berwarna, warna hijau, biru atau burain dan porselen putih. Botol plastik juga dapat digunakan. Wadah dari gelas b u a m dan berwarna berguna untulc salep yang mengandung obat yang peka terhadap cahaya. Kebanyakan salep harus disimpan pada temperatur di bawah 30°C untuk mencegah pelembekan dan cairnya salep. Preparat setengah padat seperti salep, sering memerlukan penambahan pengawet kimia sebagai anti miluoba, pada for~nulasi untuk mencegah pertumbuhan miluoorganisme yang mengkontaminasi. Salep dibuat dengan dua ~netode umum yaitu: pencampuran dan peleburan, baik dalam ukuran besar maupun kecil. Metode untuk pembuatan tertentu, teruta~na tergantung pada
sifat-sifat bahannya. Dalan metode
pencampuran, komponen dari salep dicampur bersama-sama sampai diperoleh sediaan yang rata (Ansel 1989).
Mencit (Mus I I I L I S C I ~ ~ U S ) Hewan yang akan digunakau pada penelitian ini adalah ~nencit laboratoriuin Mus nzusculzrs (Gambar 2). Klasifikasi mencit laboratoriuin me~n~rut Arrington (1972) adalah sebagai berikut ; Kingdom
: Animalia
Filunl
: Chordata
Kelas
: Ma~nmalia
Ordo
: Rodentia
Family
: Muridae
Genus
: Mus
Spesies
:Mus musculus
Mencit sering digunakan sebagai hewan model dalam berbagai kegiatan penelitan. Hewan ini mudah didapat, mudah dikembangbiakkan dan harganya relatif murah, ukurannya kecil sehingga mudah ditangani, jumlah anak perperanakannya banyak.
Sebagaimana makhluk hidup
lainnya selama
pertumbuhan dan perkembangannya mencit tidak dapat lepas dari pengaruh berbagai faktor lingkungan hidupnya. Mencit laboratorium adalah hewan yang semarga dengan mencit liar atau mencit nunah/domestic. Semua galur mencit laboratorium yang ada pada waktu ini merupakan turunan dari mencit liar sesudah melalui peteniakan selektif. Mencit diielompokkan dalam order rodentia karena memiliki sepasang gigi insisivus yang berbentuk seperti pahat dan dapat menajam dengan sendirinya. Genus Mus memiliki empat bentuk morfotipe yang sudah dikenal sebagai spesies tertentu yaitu Mus musculus, Mus domesticus, Mus castaneus, dan Mus bactrianus, maupun sebagai sub spesies dari MIISmusculus yaitu Mus n~usculusdometicus Perm 1999).
Mencit laboratorium mempunyai berat badan yang hampir sama dengan mencit liar. Saat ini terdapat berbagai warna bulu, galur, dan berat badan yang berbeda-beda setelah diternakkan secara selektif selama 80 tahun yang lalu (Smith & Mangkoewidjojo 1988). Banyak strain berbeda dari mencit laboratorium yang
telah dikembangkan oleh ahli genetik. Beberapa strain seperti Swiss Webster dikembangkan secara outbreed, sementara beberapa strain lain seperti DDY, Balblc, DBA, dan 3 6 diiembangkan secara inbred dengan geu-gen yang homozigot (Penn 1999).
Mencit merupakan hewan yang jinak, lemah, mudah ditangani, takut cahaya dan aktif pada malam hari. Mencit yang dipelihara sendiri, makannya lebih sedikit dan bobotnya lebih ringan dibanding yang dipelihara bersama-sama dalam satu kandang, dan kadang-kadang mempunyai sifat kanibal (Penn 1999). Mencit memiliki lama hidup sekitar satu hingga dua tahun, baldcan beberapa bisa mencapai usia tiga tahun dengan lama produksi ekonomisnya adalah sembilan bulan. Mencit mencapai usia dewasa pada 35 hari dimana setelah usia delapan minggu sudah dapat dikawinkan. Lama kebuntingal mencit adalah 19-21 hari dengall jumlah anak rata-rata enam ekor. Bobot mencit jantan dewasa adalah 20-40 gram dan mencit betina adalah 18-35 gram. Mencit laboratorium dapat dilcandangkan pada kotak sebesar kotak sepatu yang dapat terbuat dari berbagai macam bahan, misalnya plastik (polipropilen atau polikarbonat), aluminium, atau baja tahan karat (Smith & Mangkoewidjojo 1988). Selanjutnya data dasar fisiologis mencit dapat dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Data dasar fisiologis pada mencit. Karakteristik Berat Dewasa Jantan Betina Berat lahir Masa kebuntinga~~ Mata membuka Masa hidup Suhu tubuh Konsumsi pakan Konsumsi air Kardiovaskuler Frekuensi jantung Rataan Kisaran Rataan sistole Rataau diastole Frekuensi pernapasan Rataan Kisaran Hemoglobin Rataa~l Kisara~~ Hematokrit Eritrosit Rataan Kisaran Leukosit Rataan Kisaran
Sumber: Arrington (1972)
Nilai 20-40 gr 18-35 gr 1.0-1.5 gr 18-2 1 hr 12-13 hr 1-2 th 37.4 O C 4-5 grI100 gr BBIhr 4-7 m1/100 gr BBIhr 600 detaklrnnt 328-780 detaklmnt 113 mmHg 81 mmHg 163 Imnt 84-230 /mnt 14.8 gr% 10-19 gr% 41.5 % 9.3 x 10'lpL 7.7-12.5 x lo6 I ~ L 8 x lo3 IpL 4-12x 1 0 ~ 1 ~ ~
Darah Darah merupakan media cair yang terdiri dari komponen selular yaitu selsel darah dan komponen cairan yang kaya akan protein yaitu plasma darah (Schalm et al. 1975). Menurut Stainer dan Forsling (1990) kandungan cairan tubuh pada hewan veitebrata sekitar 65% dari total bobot badannya, yang dibagi ~nenjadicairan ekstraseluler dan cairan intraseluler. Pada hewan yang ineiniliki siste~nvaskuler tei-tutup, seluruh cairan tubuh didistribusikau di antara dua kompai-temen cairan
tersebut.
Cairan
ekstraseluler
terdiri
dari
cairan
ekstravaskuler dan cairan intravaskuler. Cairan ekstravaslculer terdiri dari cairan interstisial yang inerupalcan tiga perempat cairan ekstraseluler dan cairan intravaskuler yang terdiri dari plasma darah (Guyton dan Hall 1997). Cairan ekstraseluler ini pada mamalia dewasa jumlahnya sekitar 45% dari jumlah total cairan tubuh dan sisanya 55% adalah intraseluler (Stainer dan Forsling 1990). Menurut Ganong (1999) darab ~nerupakancairan ekstraseluler yang berada dala~nvaslculer (intravaskuler). Fungsi darah adalah menyuplai setiap sel dengan air yang diperlulcan, oksigen, elektrolit, nutrisi, dan transpol-tasi horinon serta menerima sisa buangan metabolisme untuk ditransport ke organ selwesi (Schalm
et al. 1975). Selain itu menurut Banlcs (1986) fungsi darah yang laiu adalah sebagai alat pertahanan tubuh melalui sel-sel pertahanan dan inaterial penghalang (ailtibodi, antitoksin, dll). Darah pada hewan dengan sirkulasi tertutup terdiri atas sel-sel darah dan cairan @lasina) yang mengisi sirkulasi dan yang mengalir dalam gerak teratur tanpa arah yang didorong terutama lcontralcsi ritmik jantung (Junqueira d m Carneiro 1980). Plasma darah ~nengandungzat-zat yang penting dalam proses digesti (asam amino, glukosa, gliserol, d m asam lemak terbang), produk buangan nitroge~l (urea, asain urat, 1u.eatinin) dari metabolisme, hormon, antibodi, karbondioksida, garam anorganik, dan protein plasma seperti albumin, globulin, dan fibrinogen (Van Tyne dan Berger 1975). Menurut Rapaport (1987), sel-sel darah terdiri dari tiga macan yaitu sel darah merah (eritrosit), sel darah putih (leukosit), dan platelet (troinbosit). Jika contoh darah dibiarkan atau disentrifuse, ~nakaaka11 terjadi pemisahau mei~jadi dua bagiail yaitu eleinen seluler yang terdiri dari eritrosit, leukosit, troinbosit, dan
kadang-kadang sel misterius dari Reticulo Endotelial System (RES) dan plasma atau fraksi ekstraseluler yang mengandung air, elektrolit, glukosa, enzim, dan hormon (Phillis 1976). Perubahan fisiologis pada tubuh hewan merupalcan faktor yang dapat me~npengaruhi ganlbaran darah. Perubahan fisiologis internal antara lain pertambahan umur, status gizi, latihan, kesehatan, stress, proses produlcsi darah, siklus estrus, suhu tubuh, sedangkan perubahan fisiologis eksternal antara lain infeksi kuman penyalcit, fralct~lra, perubahan suhu linglc~mgan, sanitasi dan sebagainya (Banks 1986).
Eritrosit Eritrosit merupakan sel yang tidak berinti dan bersifat non motil. Eritrosit biasanya berbentulc bilconlcaf, bulat dengan bagian tengah yang pucat. Komposisi eritrosit pada hewan dewasa terdiri dari 62-72% air, sisanya hampir 35% adalah padatan, 95% dari padatan adalah hemoglobin dan sisanya 5% adalah protein yang terdapat pada strolna dan membran sel, lipid, vitamin, glukosa, enzim dan lain-lainnya (Swenson 1984). Jumlah eritrosit pada mencit berkisar antara 7,7-12.5 jutalpl (Arrington 1972). Faktor yang dapat mempengaruhi jurnlah eritosit antara lain adalah rute pengambilan darah sampel. Faktor lain yang mempengaruhinya
adalah
lconsentrasi hemoglobin, Packed Cell Volume (PCV), umur, jenis lcelamin, kesehatan, olahraga, laktasi, kebuntingan, suhu, dan ketinggian (Swenson 1984). Jangka hidup eritrosit pada beberapa hewan laboratoris kecil bel-turut-turut sekitar 45-50,45-50, dan 20-30 hari pada kelinci, tikus, dan mencit. Pada keadaan anemia defisiensi zat besi, dimana eritrosit menjadi berukuran kecil, mungkin dapat diperkirakan bahwa jangka hidupnya diperpanjang karena sel yang lebih muda memililci ukuran lebih besar dibandingkan sel tua. Sebaliknya, anemia tipe mikrositik terjadi karena sel-sel darah muda yang tidalc dilepaskan ke dalam darah yang bersirkulasi dalam jumlah yang cukup untuk menggantilcan sel-sel yang telah mati (Swenson 1984).
Leul~osit Leukosit atau sel darah putih merupakan unit yang aktif dari sistem pertahanan tubuh (Guyton 1997). Leukosit memiliki jumlah yang jauh lebih sedikit dibandingkan dengan eritrosit yang bersirkulasi dalam tubuh, terdapat enam jenis sel darah putih yang normal dalam darah yaitu neutrofil, eosinofil, basofil, monosit, limfosit, dan sel plasma. Limfosit dan monosit dibentuk di jaringau limfatik dan limfonodus, tonsil, limpa, timus, dan mukosa usus. Granulosit dibentuk di sumsum tulang. Janglca hidup dari leukosit belum diketahui secara pasti, namun sekitar 3-12 hari untuk leukosit granular dan sedikit lebih lama untuk limfosit (Williams 1987). Selain itu terdapat tron~bositdalam jumlah besar yang merupakan fragn~enjenis ke-7 dari sel darah putih yang dite~nukandalanl sumsum tulang, nzegnkariosit. Tiga jenis sel polimorfonuklear me~nilikipenanlpilan granular, oleh sebab itu merelta dinamakan granulosit, atau dalam terminologi klinik sering dinamakan "polys" (Lichtman 1980). Jumlah sel darah putih tertentu dapat nleningkat karena berbagai ha1 seperti pada infeksi bakteri, jumlah leukosit khususnya meningkat tajam, sebaliknya pada infeksi viral jumlah neutrofil menurun tajanl (leukopenia). Leukopenia dapat juga dite~nuibersa~nadengan endotoksin bakteri, septicenzia dan toxenzia, sedangkan pada kasus tumor (neoplasma) yang nlelibatkan system limpatik, jumlah limfosit dalam aliran darah meningkat dengan perubahan rasio dari eritrosit dengan leukosit (Swenson 1984). Hemoglobin Hemoglobin adalah suatu protein berpigmen merah yang membawa oksigen dala~nsel darah merah. Pembentukan hemoglobin di~nulaidari eritroblas pada stadium retilculosit keinudian diteruskan samnpai sel eritrosit matang. Jika sel darah mesa11 meninggalkan sumsuln tulang dan masuk ke aliran darah maka aka1 tetap melanjutkau pembentukan sedikit hemoglobin selama beberapa hari atau sesudahnya (Schalm et al. 1975). Hemoglobin terbentuk dari gabungan 2 komponen yaitu heme dan globin. Heme mengandung protoporphin dan ion ~ e yang ~ +disintesis oleh mitokondria (Schalm et al. 1975) dan dari beberapa penyelidikan dengan menggunaltan isotop
diketahui bahwa heme terutama disintesis dari asam asetat dan glisin yang kebanyakan terjadi di mitolcondria (Guyton 1995). Kandungan zat besi yang terlepas ketika hemoglobin mengalami kerusakan, akan segera menuju ke hati, kemudian akan dipergunakan kembali untt~k pembentukan hemoglobin baru (Ganong 2002). Globin adalah suatu peptida yang didapatkan dari pembentukan hemoglobin yang disintesis oleh sitoplasma sel darah merah (Schalm et al. 1975). Sifat dasar hemoglobin adalah kemampuannya untuk berikatan secara longgar dan reversibel dengan oksigen tetapi jika ada gangguan akan merubah sifat-sifat fisik hemoglobin (Guyton 1995). Berat molekulnya 64.450 dalton yang berbentuk bulat terdiri dari 4 subunit. Hemoglobin inengiltat 0 2 untuk membentuk oksihemoglobin, terhadap
0 2
0 2
menempel pada ~ e dalam ~ + heme. Afinitas hemoglobin
dipengaruhi oleh pH, suhu, dan konsentrasi 2,3 difosfogliserat (2,3-
DPG) dalanl sel darah merah (Lorenz 1993). 2,3-DPG dan dengan
0 2
Hi berkompetisi
untuk berikatan dengan hemoglobin tanpa oksigen (hemoglobin
terdeoksi), sehingga menuiunkan afinitas hemoglobin terhadap
dengan
0 2
menggeser 4 rantai peptida (Ganong 2002). Faltor lain yang menyebabkan afinitas hemoglobin terhadap
rendah
0 2
adalah susunan asam amino yang terdapat pada rantai polipeptida. Pada henloglobin dewasa mempunyai bentulc rantai polipeptida komponen hemoglobin yang mempunyai afinitas
0 2
a202
yang merupakan
yang tinggi, akan tetapi
rantai polipeptida a ~ y 2pada janin lebih tiuggi. Sedangkan pada embrio yang mempunyai rantai <2c2afinitas terhadap 0 2 rendah (Ganong 2002). Hemoglobin terdapat kira-kira 95% dari berat kering RBC dewasa dail variasi dalam rangkaian asanl amino pada globin untuk mernbedakan tipe hemoglobin antara embrional, fetus dan dewasa (Banks 1986). Hemoglobin dewasa normal adalah 90% hemoglobin A (Hgb A) yang terdiri dari 2 rantai polipeptida yang disebut rantai n dan
dan diberi kode
~ $ 2 (Guyton
1995).
Henloglobin embrio dilcenal deagan I~ernoglobintipe E (Okabe et al. 1996). Hemoglobin E mengandung polipeptida dengan rantai
5
dan rantai
E,
yang
membentulc globin gower 1 (12~2) dan globin gower 2 (~12~2).Sedanglcan hemoglobin fetus dikenal dengan hemoglobin tipe F yang masih dapat terkandung dalam darah hewan yang baru lahir dan me~nilikistruktur yang mirip dengan
struktur hemoglobin A, kecuali bahwa rantai P-nya diganti dengan rantai y sehingga hemoglobin F adalah azyz (Ganong 1999). Hemoglobin mempunyai nilai yang berbeda pada berbagai tingkat perturnbullan, perbedaan ini terdapat pada komposisi asam amino, kurva disosiasi oksigen, dan kelarutan spektrum absorbsi ultraviolet. Jumlah hemoglobin pada darah normal pada kebanyakan mamalia dewasa 13-15 g r d 1 0 0 ml (Guyton 1995). IIematokrit Hematokit atau Packed Cell Volunze (PCV) adalah presentase sel darah merah di dalam 100 ml darah. Pada hewan normal PCV sebanding dengan jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin. Eritrosit berpengaruh terhadap viskositas darah yaitu semakin ineinbesar persentasi sel darah ~nerahsemakin banyak timbul gesekan antar lapisan darah sehingga viskositas darah meningkat yang berakibat pada derajat kesultaran aliran darah ymg melalui pembuluh darah kecil (Guyton 1995). Pemeriltsaan total hematokrit tubuh di vena atau banyaknya hematokrit pada pembuluh darah, menunjukkan bahwa limpa memainkan peran dalam menlpengaruhi sirkulasi sel darah merah. Rasio total hematokit darah dengan hematokrit vena lebih besar ketika limpa mengalami gangguan (Schalm et al. 1975). Darah dalam pembuluh darah yang kecil dalan tubuh secara nyata menu~unkan nilai hematokrit dibandingkan dengan darah yang berasal dari jantung atau pembuluh darah (Banks 1986). Persembuhan Lulta Persembuhan luka adalah proses dalam tubuh yang sebisa mungkin memperbaiki bagian luka menjadi bentuk yang paling mendekati kondisi normal tubuh sebelumnya (Vegad 1995). Proses perse~llbuhanbukanlah suatu proses yang sedel-hana inelainka~l suatu proses yang kompleks nanlun terintegrasi dan sisteinatik (Engelhardt el al. 1998; Kalangi 2004). Proses biologis utalna dalam perbaikan jaringan secara umunl meliputi tiga tahap utama yaitu proses peradangan, pembelltukan jaringan grailulasi, dan pembentukan matriks serta
remodelilzg (Kalangi 2004). Proses biologis tersebut terjadi dalam beberapa fase persembuhan lulta yang lebih dikenal dengan fase peradangan, fase proliferasi, dan fase maturasi (Banks 1993). Persembuhan luka dibagi meujadi dua macanl berdasarltan lteadaan lulta yang terjadi, yaitu persembuhan berdasar penyatuan primer (prinzary union) dan persembuhan
berdasar
penyatuan
sekunder
(secondary
union).
Suatu
persembuhan luka dapat digolongkan menjadi penyatuan luka primer apabila luka tertutup, lnengaltibatkan hilangnya sejumlah kecil jaringan, lulta berupa suatu garis insisi dengan scalpel yang steril, tidak disertai infeksi sekunder oleh bakteri, dan celah luka segera ditutupi oleh darah beku. Persembuhau berdasar penyatuan luka sekunder ditandai dengan luka yang terbulta dan mengalarni kerusakan atau hilangilya jaringan dalam jumlah besar. Selain itu, luka terinfeksi oleh bakteri, banyak pembuluh darah yang terkoyak, serta dapat ditemui jaringan yang mengalami nekrosis dan peradangan di daerah luka (Vegad 1995).
Fase Peradangan Peradangan adalah suatu realtsi dari jaringan hidup yang dialiri darah terhadap perlultaau lokal. Terjadinya peradangan pada suatu area lokal dapat menyebabkan beberapa perubahan baik pada tingkat vascular maupun pada tingkat selular. Perubahan yang terjadi pada tingltat vascular adalah perubahan pada pembuluh darah, perubahan pada aliran darah, perubahan pada pergerakan atau arus darah dalanl pelnbuluh, eksudasi plasma darah, emigrasi dari leukosit, dan diapedesis dari eritrosit. Perubahan pada tingkat selular berupa peningkatan aktivitas leukosit. Aktivitas leukosit ini merupakan suatu aktivitas yang berkelanjutan dan terdiri dari inarginasi, adesi, emigrasi, fagositosis, dan pelepasan produk-produk leukosit ke jaringan eltstraselular (Vegad 1995). Sesaat
setelah
terjadi
perlukaau,
pembuluh
darah
mengala~ni
vasokonstriltsi yaug singkat. Icontraksi buluh darah ini segera diikuti oleh vasodilatasi pada arteriol yang akan menyebabkan pembukaan mikrovaskular baru seperti vena, arteriol kecil, dan pernbuluh kapiler (Vegad 1995). Dilatasi pembuluh darah ini disebabkan oleh substansi kinlia yang disebut sebagai
mediator inflamasi. Kondisi ini mengakibatkan hiperemi dan peningkatan aliran darah pada daerah yang meradang. Vasodilatasi mengakibatkan peningkatan aliran darah yang segera diikuti oleh melanlbatnya sirkulasi darah. Darah yang mengalir lambat dalam mikrovaskular dapat mengakibatkan peningkatan permeabilitas dinding pembuluh tersebut. Dinding endotel menjadi permeable terhadap protein plasma dan mengakibatkan protein plasma yang terdiri dari albumin, globulin, datl fibrinogen keluar lte jaringan interstisial. Hal ini menyebabkan tekanan osnzotic intravasculav lnenurun dan tekanan osnzotic cairan interstisial meningkat. Akibatnya, cairan plasma darah keluar dari pembuluh dan terakunlulasi di jaringan interstisial. Kondisi ini disebut sebagai udema peradangan ltarena pada saat ini luka akan terlihat basah. Mediator lcimia seperti histamin dan bradikinin turut meinbantu pelepasan cairan plasma darah dengan membuka hubungan antar sel endotel (Vegad 1995). Hubungan antar sel endotel ini menjauh akibat efek inflamasi yang menyebabkan kontraksi pada endotel. Pada fase peradangan, platelet alcan teraktivasi untult membentuk benang-benang fibrin yang akan mengheniikan hemoragi pada matriks ekstraselular akibat pembuluh darah yang terkoyak pada saat perlukaan (Anonim 2003). Selain itu, sel mast juga menghasilkan heparin yang ~nerupakanzat pengkoagulasi darah. Darah dalam pembuluh dapat mengalami stasis dimana aliran darah sudah terhambat. Kondisi ini dapat disebabkan oleh meningkatnya pembuluh kapiler baru yang dialiri darah pada daerah luka. Darah yang melewati pembuluh kapiler ini berjalan dellgall sangat lambat, akibatnya darah yang bersirkulasi akan terhambat. Selain itu, protein plasma yang telah keluar dari penlbuluh darah menyebabkan peningkatan konsentrasi benda-henda darah dimana viskositas darah akan meniilgkat dan aliramlya akan terhambat (Vegad 1995). Pergerakan atau arus aliran darah dalanl pe~nbuluhmembagi peinbuluh lnenjadi dua zona. Pada bagian tengah lumen pembuluh, pergeraltan darah ditunjang oleh suatu gaya sentripetal. Bagian ini disebut sebagai alirall aksial dan terdiri dari elenlen-elemen seluler seperti eritrosit dan leukosit. Bagian eksternal dari zona tersebut langsung terhubung dengan dinding endotel dan terdiri dari plasma. Zona ini disebut aliran plasmatilc. Ketilta aliran darah melanlbat, leukosit
keluar dari zona aksial karena gaya sentripetal zona tersebut tergantikan oleh suatu gaya sentrifugal (Vegad 1995). Leukosit akan mengalani marginasi dan berdiam diri pada dinding endotel. Marginasi leulcosit ini semakin menghambat aliral darah sehingga akan terjadi pembendungan, eritrosit yang tertumpuk akan membentuk suatu susunan bentuk yang disebut rouleaux yang berukuran besar serta lnendominasi area aksial pembuluh sehingga leukosit alcan terdorong ke daerah perifer pembuluh darah. Leukosit yang terakumulasi pada dinding endotel akan melalcukan etnigrasi atau lceluar dari pembuluh darah menuju jaringan luka. Leukosit keluar dari pembuluh darah melalui celah antara dinding endotel. Sel darah merah juga dapat keluar dari pembuluh darah, tidak seperti leukosit, eritrosit tidak melniliki kelnampuan untuk bergerak sendiri dan pergerakan eritrosit tersebut berupa gerak pasif akibat dorongan dari tekanan intravaskular yang menurun karena keluarnya leulcosit dari pembuluh tersebut. Terjadinya luka juga mengindulcsi pelepasan beberapa substansi kilnia yang bertindak sebagai mediator dalam perubahan-perubaha~yailg terjadi pada sisteln vascular di daerah luka tersebut (Vegad 1995). Beriltut ini adalah beberapa mediator inflamasi yang mempengarulli proses peradangan dan persembuhan luka. Histamin Histamin merupakan salah satu mediator peradangan yang berfungsi sebagai inedia pada proses dilatasi arteriol dan peningkatan permeabilitas pembuluh darah (Dellmann & Brown 1988; Vegad 1995). Senyawa ini tersinlpan dalaln granul pada sel mast, basofil, dan platelet. Histamin menyebabkan kontraksi pada dinding endotel dan menyebablcan melebarnya celah yalg menghubungkan sel-sel endotel. Pelepasan senyawa ini (degranulasi sel mast) dapat dipicu oleh beberapa faktor, yaitu agen fisik seperti trauula atau dingin, reaksi imunologik, suatu fraksi dari lcolnplen~e~~ yang disebut sebagai anaphjdatoxins, dan adanya lzistanzine-releasing factor yang dilceluarkan oleh neutrofil (Vegad 1995). Selain histainin, substansi yang bertindalc sebagai mediator inflamasi lainnya adalah serotonin. Senyawa ini juga dihasilkan oleh sel
mast namun hanya terdapat pada tikus dan n~encit(Dellmann & Brown 1988; Vegad 1995). Enzim-enzim lisosom Sel neutrofil dan monosit mengandung butir-butir lisosom yang akan dilepaskan pada saat terjadi proses peradangan. Neutrofil memiliki dua macam butir yang terbentuk dalam waktu yang tidak bersamaan pada sitoplasmanya. Butir yang terbentuk lebih awal yaitu butir azurophil atau disebut juga butir primer (Dellmann & Brown 1988). Butir primer ini memiliki kandungan senyawa yang dapat meningkatkan permeabilitas pembuluh darah, memicu kemotaksis, dan menyebabkan kerusakan pada jaringan ikat (Banks 1993). Faktor pengalctifasi platelet (Platelet Activating Factor-PAF) Platelet akan mengalami agregasi da11 melepaslcan kandungannya jika dipicu oleh faktor pengaktifasi ini. PAF memiliki petensi yang lebih hebat dari histamin dalam ha1 menyebabkan peningkatan permeabilitas dinding pembuluh darah (Vegad 1995). Faktor pengaktifasi platelet ini juga dapat menyebabkan adesi sel leukosit pada dinding endotel dan proses kemotaksis. Selain platelet, PAF ini juga dapat disekresi oleh sel-sel lain seperti basofil, neutrofil, monosit, dan sel endotelial. Sitokin Sitokin dapat diproduksi oleh banyak sel, terutama oleh sel limfosit dan mo~losityang telah teralttivasi. Sitokin yang dihasilkan oleh sel limfosit diltenal dengan llama limfolcin, sementara sitokin yang dibentulc oleh moilosit disebut monokin. Tiga jenis sitokin yang memiliki peranan penting dalam proses peradangan adalah interleukin-1 (IL-I), tumour necrosis factor (TNF), dan interleukin-8 (IL-8) (Vegad 1995). Menurut Vegad, IL-1, TNF,dan IL-8 diselcresi oleh makrofag yang teralttivasi dan dstimulasi oleh beberapa faltor, salah satunya adalah perlukaan fisik. IL-1 dan TNF berfungsi dalam merangsang perlekatan atau adesi sel-sel leukosit pada dinding endotel. TNF memiliki pengaruh yang sama dengan IL-8 dala~nproses peradangan, yaitu menyebabkan agregasi dan alctivasi dari neutrofil pada jaringall 1~1kahanya saja IL-8 merupakan chen~onrtracta~~t dan aktivator neutrofil yang lebih kuat. IL -8 juga menstiinulasi proses inigrasi dan proliferasi keratinosit secara langsung (Engelhardt et a1 1998). Selain itu,
Engelhardt et a1 juga menyatakan bahwa IL-8 juga memiliki peran dalam peningkatan angiogenesis di daerah luka. Setelah leulcosit lceluar dari dinding endotel, sel-sel tersebut bergeralc menuju jaringan yang terluka mengikuti suatu kekuatan yang merangsangnya yang disebut kemotaksis. Ken~otalcsis dikatakan sebagai suatu migrasi yang terarah dari sel-sel menuju suatu senyawa penarik atau attractant (Vegad 1995). Leukosit bermigrasi pada jaringan ikat menuju daerah luka melalui suatu gradien kimia. Menuut Kalangi 2004, terdapat molekul-molekul struktural pada matriks ekstrasel yang kemungkcinan dapat mendorong migrasi melalui sel radang. Molelcul-molelcul ini mendorng migrasi melalui penyediaan suatu substratum (fibronektin dan kolagen) yang dapat menjadi pedoman kontak bagi sel radang untukbergerak ke arah chemoattractant. Proses pengambilan partikulat ke dalam sitoplasma oleh suatu sel disebut sebagai proses fagositosis (Vegad 1995). Sel-sel leukosit yang telah tiba di daerah luka akan segera membunuh dan menghancurkan material asing (bakteri) dan selsel
yang
rusak
pengidentifikasian
dengan sel
cara
leukosit
fagositosis. terhadap
Fagositosis
materi
yang
diawali akan
dengan difagosit.
Pengidentifikasian ini dimungkinlcan bila materi tersebut telah dilapisi ole11 suatu faktor serum atau antibodi spesifik yang disebut sebagai opsonin dan proses ini disebut sebagai opsonisasi (Vegad 1995). Setelah permukaan leukosit menempel dengan partikel yang teropsonisasi, sitoplasma leukosit @seudopodia) akan memanjang dan mengelilingi materi hingga membentuk vakuol atau rongga yang mengelilingi materi dan disebut fagosom. Proses ini disebut engulfment atau penelanan. Setelah ~nateiterkurung dalam valc~~ol leukosit, ~nakaterjadi proses degradasi atau penghancuran materi tersebut dengan enzi~nhidrolitik pada organel lisosom sel leukosit. Fagososm dengan materi di dalamnya yang sudah terpapar dengan lisosom disebut fagolisosom. Proses peradangan mencalup perelautan sel-sel radang dari pembuluh darah menuju jaringan lulca. Kedatangan sel-sel ini ke daerah luka atas pengaruh beberapa mediator peradangan yang telah dijelaskan sebelumnya. Sel-sel yang menginfiltrasi daerah luka diantaranya adalah neutrofil, makrofag, dan limfosit.
Neutrofil Neutrofil adalah sel leukosit yang berdiameter antara 10 sampai 12 pm, memiliki butir halus, dan ini bergelambir (Dellmann & Brown 1988). Sel ini juga disebut dengan le~kositpolimorfonuklear atau sel granulosit. Butir-butir granul yang terdapat pada sitoplasma neutrofil adalah lisosom yang mengandung enzim yaug memungkinkan neutrofil untuk mengha~curkan bakteri melalui proses fagositosis (Vegad 1995). Neutrofil merupakan leukosit yang tiba paling awal di lokasi terjadinya peradai~gan.Oleh karena itu disebut sebagai pertahanan selular pertama. Setelah memfagosit partikel asing (termasuk sisa llelcrosa sel inang). neutrofil akan segera mati. Makro fag Makrofag yang berada di jaringan berasal dari sel monosit darah yang bermigrasi ke jaringall illtat (Dellmann & Brown 1988; Vegad 1995). Jumlah sel monosit darah pada me~lcitberkisar antara 1-12 % dari total leukosit (Smith & Mangkoewidjojo 1988). Namun, apabila terjadi peradangal, jumlah monosit yang bermigrasi ke jaringan ikat menjadi berlipat-lipat dan maluofag yang telah ada di jaringan ikat alean teraktivasi. Makrofag ini mulai bermunculan setelah neutrofil menyelesailcan tugasnya untuk memfagosit partilcel asing. Faktor yang meinpengaruhi kemunculan makrofag antara lain adalah suatu chen~oattractnnt yaitu monocyte chemoattractant protein-l (MCP) d a ~macrophage initiating
protein-la atau MIP-la (Engelhardt 1998). Seperti neutrofil, makrofag adalah sel yang efelctif untulc proses fagositosis. Makrofag mencerna dan memfagosit organisme patogen dan debris jaringan termasuk sel-sel neutrofil yang tidalc berguna lagi (Kalangi 2004). Untuk memungkinlcan fungsi tersebut, sel makrofag dilengkapi dengan kandungan enzim-enzim hidrolitik dalarn jumlah sangat besar dimana enzim-enzim tersebut dapat mendegradasi beragan jenis material secara berula~~g-ulang(Vegad 1995). Selain memfagosit, makrofag yang aktif juga melepaskan beberapa bahan aktif yang penting untuk proses peradangan dan proses perbaikan luka. Bahan-bahan aktif yang dilepaslcan inalcrofag yaitu : Plasma protein, terdiri dari protein komplemen dalam proses fagositosis dan protein pengkoagulasi
Mediator lipida sepel-ti hasil metabolisme asam aralcidonat (leultotrien dan prostaglandin) serta Platelet Activating Factor (PAF) Faktor-faktor kemotaktik Sitokin, seperti interleukin-1 (IL-I), tumour necrosis factor (TNF), dan interleukin-8 (IL-8) Faktor-faktor pertumbuhan seperti platelet-derived growth j21ctor (PDGF), fibroblast growth factor
(FGF), epidermal growth factor
(EGF), dan
transforming growth factor-P (TGF-P). Faktor-faktor ini mempengaruhi proliferasi fibroblast dan pembuluh darah. Limfosit Limfosit tidak memiliki kemampuan untuk melakukan fagositosis dan hanya memiliki kemampuan kemotaksis yang terbatas. Dalam persembuhan luka, peran limfosit adalah melepaskan limfokin yang mempengaruhi populasi dari selsel radang lainnya. Beberapa limfokin yang dihasilkan adalah MAF atau macrophage aggregatingfrrctor, d m MCF atau nzacrophage chemolactic facfor. (Banks 1993). MAF merangsang agregasi dari maluofag, sedangkan MCF berfungsi sebagai chemoattractant bagi makrofag.
Fase proliferasi Fase proliferasi meliputi aktivitas mitosis dari sel-sel epidermis, sel-sel endotel, dan sel-sel fibroblast. Fibroblast, sel-sel radang, dan pembuluh darah baru memenuhi jaringan luka dan membentuk jaringan granulasi yang akan terlihat berwarna merah muda dan bergranulasi. Pada fase ini mulai terjadi proses reepitelisasi dimana sel-sel epitel mulai bermigrasi dan berproliferasi ke jaringan luka. Lapisan hemidesmosom ailtara epidermis dengan membran dasar akan menipis dan memungkinkan sel epitel yang telah aktif untuk bermigrasi ke jaringan luka dan mengeluarkan sitolcin seperti IL-1, TNF, TGF-a, dan TGF-P (Anonim 2003). Untuk memfasilitasi migrasinya pada jaringan ikat, sel epitel mengeluarltan enzini kolagenase (Singer & Clark 1999). Sel-sel endotel berproliferasi mulai dari ujung pembuluh yang terkoyak hingga terbentuk suatu pembuluh kapiler baru (Banks 1993). Pembentukan pembuluh darah baru tersebut dapat berupa pemanjangan maupun percabangan
dari pembuluh darah induk menjadi pembuluh darah kecil (kapiler). Proses ini dikenal dengan istilah angiogenesis. Pembentultan suatu peinbuluh darah baru memerlukan degradasi enzimatik dari membran dasar pembuluh induk agar pembentukan cabang pembuluh anak dapat terjadi. Selain itu, juga terjadi migrasi, proliferasi, serta pematangan sel-sel endotel untuk membentuk suatu pembuluh kapiler baru (Vegad 1995). Setelah terbentuk, kapiler-ltapiler bar^^ yang terbentnk akan beranastomose sehiilgga altan terjadi perltembangan sirkulasi di daerah luka (Kalangi 2004). Faktor yang mempengaruhi angiogenesis ini antara lainfibroblast growth factor (FGF) dan vascular endothelial growth factor (VEGF) yang dihasilkan oleh makrofag. Dalam ha1 ini, FGF lebih banyak berperan daripada VEGF, yaitu dengan menginduksi sekresi proteinase ole11 sel endotel untuk inendegradasi membran dasar serta memicu migrasi dan proliferasi endotel (Vegad 1995). Fibroblast bermigrasi lte daerah luka dan be~proliferasi. Prolifersai fibroblast ini dipicu ole11 beberapa faktor pertumbuhan (growth firctor) seperti, plcrtelet-derived growth factor (PDGF), epidernzal growth factor (EGF),fibroblast qowth factor (FGF), dan kansforming growth factor-p (TGF-P), serta sitokin fibrogenik yang dihasilkan oleh makrofag (Vegad 1995; Anoniln 2003). Sel fibroblast secara aktif mensintesis proteogliltan dan ltolagen. Fibroblast berproliferasi membentuk matriks ekstraseluler yang mengandung lnyofilamel~ dan disebut myofibroblast dimana matrilts ini akan bennigrasi ke area luka dan berltontraksi untuk mengmangi ukuran luka hingga daerah luka altan tertutup (Anonim 2003).
Fase pematangan Fase ini ditandai dengan berkurangnya jumlah fibroblast secara berkala dan penurunan jumlah pembuluh-pembuluh kapiler. Serabut kolagen mengalmi pertalnbahan jumlah dan menyusun diri sepanjang garis lebar luka. Secara berangsur-angsur, luka meningltatkan lcelcuata~lintegritasnya terhadap tekanan. Pada fase ini matriks eltstraseluler sementara yang telah terbentuk pada fase sebelumnya digantiltan oleh matriks kolagen dermis (Anonim 2003). Fase ini dapat berlangsung berbulan-bulan bahkan bertahun-tahuli.
Falttor-falttor yang Mempengaruhi Persembuhan Luka Persembuhan luka dipengaruhi oleh beberapa faktor, yaitu nutrisi, ltadar vitamin C, mineral zinc (Zn) dan glukokortikosteroid dalam tubuh, usia, partikel iritan lokal, kurangnya suplai darah, keberadaan benda asing dan faktor-faktor nleltanis (Vegad 1995). Nutrisi yang tidak seimbang terutama kurangnya konsumsi protein (asam amino) dapat menyebabltan keltuatan regangan jaringan iltat akan melemah. Sel-sel fibroblast yang terbentuk hanya sediltit dan sintesis serabut kolagen akan terhambat. Kekurangan vitamin C akan mengakibatkan serabut kolagen yang disintesis oleh fibroblast menjadi lebih sedikit dan mengalami penurunan ltualitas. Zinc adalah mineral yang diperiultan untuk inetabolisme beberapa enzim yang penting untuk persembuhan luka. Pada individu yang kekurangan zinc, persembuhan luka akan memakan waktu lebih lama. Persembuhan luka pada individu yang berusia tua akan memakan waktu lebih lama jilta dibandingltan dengan individu yang masih muda. Hal ini terkait dengan suplai darah individu muda yang lebih bailt dan adanya ltemungkinan penyakit seperti aterosltlerosis pada individu tua. Glul~olcortiltosteroidmemiliki pengaruh pada proses inflamasi dan fibroplasia. Keberadaannya dalam jumlah besar dapat menginduksi perubahan kimia pada matriks substansi dasar jaringan iltat. Keberadaannya di jaringan dapat mengurangi produksi kolagen dan pembentultan neokapiler. Infiltrasi bakteri, debri-debri dari sel yang nekrosis. nanah dan benda asing dapat menyebabkan infeksi jaringan dan penundaan persembuhan luka. Kurangnya suplai darah jaringan dapat dipengaruhi oleh adanya gangguan dalam sistem sirkulasi seperti adanya penyakit pada pembuluh arteri.
METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian ini telah dilaksanakan selama 5 bulan mulai bulan Juli sarnpai bulan Desember 2007 di Bagian Patologi, Laboratorium Farmasi, Laboratorium Patologi Klinilc, Departemen Kinik, Reproduksi dan Patologi, Fakultas Kedolcteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Alat dan Bahan Pada penelitian ini dipergunakan alat-alat sebagai berikut: erlenmeyer, evaporator, oven, mikroskop, hemositometer (kamar hitung, pipet eritrosit, pipet leulcosit, aspirator), mikrohematokrit kapilaritube, Henzatocrit reader, sentrifuse, Hemometer. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah rimpang kunyit, etil asetat, air, etanol 96%, vaselin kuning, crestoseal, larutan pengencer Hayem, larutan pengencer Turk, HCI 0,l N, aquadestilata.
Hewan Percobaan Hewan percobaan yang digunakan adalah 40 ekor mencit jantan berumur 2 bulan yang dibagi menjadi 4 kelo~llpolc dengan setiap kelompoknya 10 ekor mencit.
Metode Penelitian Pembuatan Simplisia Pembuatan simplisia dilakukan dengan menjemur kunyit yang sudah diiris-iris di bawah terik matahari dengan ditutup plastik sampai kering. Simplisia tersebut dihaluslcan menjadi seperti serbuk.
Pembuatan Ekstrak Icunyit Sebanyalc 1 bagian serbuk kunyit direnda~n(maserasi) dengan 10 bagian etanol 96%, lalu dimasukan ke dala~nbejana tertutup selama 24 jam dengan sesekali diadulc. Maserat dipisahlcail da11 diproses ulang selama 3 kali (triplo)
dengan jenis dan jumlah pelarut yang sama. Ekstraksi dihentikan jika filtrat berwama jernih. Filtrat yang diperoleh kemudian diuaplcan dengan evaporator pada tekanan rendah dan suhu tidak lebih dari 50 OC sampai beratnya konstan (ekstrak semi padat). Ekstrak semi padat yang dihasilkan kemudian difraksinasi deilgan menggu~lalcan pelarut air dan etil asetat. Hasil fraksinasi kemudian dievaporasi dan dioven dengan temperatur 40 OC selama 24 jam hingga membentuk ekstrak lcental. Penapisan Fitokimia
Dilakukan pellapisan fitokimia dari hasil ekstraksi untuk mengetahui kandungan ballan aktif dengan menggunakan metode Harbo~nk(1987) sebagai berikut : Uji Alkaloid Serbuk si~nplisia dibasakan dengan 3 tetes ammonia, kemudian ditambahkan kloroform. Filtrat ditambahkan 10 tetes H2S04 2M. I-Iasil positif apabila ditanlbahlcai~ Meyer menjadi endapan putih dan coklat dengan penambahan pelarut Rx Wagner. Uji Flavonoid Serbuk si~nplisisa dipanaskan dengan calnpuran metan01 dail logan1 Magnesium. Adanya flavonoid akan menyebabkan filtrat berwarna merah setelah penamballan 5 tetes NaOH 10%. Uji Saponin Serbuk simplisia dipanaskan dengan air dalam tabung reaksi. Kemudian dikocolc kuat-kuat kurang lebih 30 detik. Pembentulcal busa 10 menit kemudian menunjukkan bahwa dalam sampel terdapat saponin. Uji Tanin Serbuk siinplisia ditarnbahkan dengan air, kemudian dididilkan. Pada filtrat ditambahkan larutan 5 tetes FeC13 1%. Sehingga terbentuk warna biru tua atau hitam lcehijauan. I-Ial ini menunjuldtan bahwa sampel tersebut positif
Uji Kuinon Serbuk simplisia ditambahkan air kemudian dididihkan. Pada filtrat diberi NaOH 15%. Adanya senyawa kuinon ditandai dengan terjadinya warna kuning hingga merah. Uji Fenol Serbuk simplisia ditambahkan lasutan pereaksi FeC13 1% sebanyak 5 tetes. Adanya senyawa fen01 ditandai dengal terbentulmya wama ungu, biru atau hijau. Pembuatan Salep
Untuk pembuatan salep, 1 bagian ekstrak dari masing-masing fraksi air dan etil asetat dicampur dengan 4 bagian bahan dasar salep (vaselin). Dihomogenkan di mortar dan lcemudian disimpan dalam pot plastilt yang te~tutup dan tidak berwarna.
Perlukaan Pada Mencit
Sebelum melakukan perlukaan, rambut di sekitar punggung mencit dicukur dan didiamkan selama dua hasi. Sebelum disayat, kulit mencit diseka dahulu dengan kapas beralkohol 70 %. Mencit diberi anastesi perinhalasi dengan eter, kemudian dilakukan penyayatan pada punggung mencit dengan menlbuat sayatan sepanjang satu centimeter sejajar
0s.
Vertebrae menggu~lakanscalpel
yang steril.
Pengelompokan Perlakuan
Kelompolc K+: Kontrol positif, kelompok mencit yang dilulcai dan diberi obat luka komersil Kelompok K-: IControl negatif, kelompok mencit yang dilukai nanlull tidak diberikan pengobatan Perlakuan PE : Kelonlpok mencit yang dilukai dan diberiltan pengobatan dengall sediaa~lsalep kunyit dengan pelarut etil asetat Perlakuan PA : Kelompok mencit yang dilukai dan diberikan pengobatan dengall sediaan salep kunyit dengan pelarut air
Pemberian Obat Lulia Komersil dan Salep Kunyit Obat luka komersil (ekstrak placenta 0,5 %, neomycin sulfate 10 % dan jelly base) dan sediaan salep kunyit dioleskau pada luka dengan menggunakan cotton buds. Aplikasi obat dilakukan setiap hari sebanyak dua kali sehari selama 21 hari pasca perlukaan.
Pengambilan darah Pengambilan sampel darah dilakukan pada hari ke-2, 4, 7, 14, dan 21 pasca perlukaan. Sebelum penganlbilan darah terlebih dahulu dilakukan pe~nbiusa~l dengan eter. Darah diambil sebanyak i 2 ml dengan spoit langsung dari jantung
dau ditampung dengan venoject yang diisi antikoagulan.
Antilcoagulan yang digunakan adalah Ethylendiamine tetraacetic acid (EDTA). Analisa darah Perhituugan jumlah eritrosit Salnpel darah dihisap menggunakan pipet eritrosit hingga tanda tera 0.5 dengall aspirator. Ujung pipet dibersilkan dengan menggunakan tissue, lalu pengencer hayem dihisap hingga tanda 101. Pipet digerakan memutar dengan membentuk angka 8 selama 3 menit. Setelah homogen, cairan yang tidak terkocok pada ujung pipet dihilangkan dengan mene~npelkanujung pipet ke kertas tissu. Setelah itu teteskan satu tetes ke dalam hemositometer, usahakan jangan sampai ada udara yang masuk. Setelah itu dibiarkan selama beberapa saat sehingga cairan mengeudap, lalu penghitungan dapat dimulai. Agar tidak terjadi penghitungan dobel maka sebailurya ~nenggunakanhand counter. di bawah mikroskop dengan pembesaran 45x10. Jumlah leukosit yang didapat dari hasil perhitungan dilcaliltan dellgall lo4 untulc mengetahui jumlah eritrosit dalam 1 mm3 darah.
JumIah Total Eritrosit = a x 1 0 ~ 1 m m ~ Keterangan : a adalah jumlah eritrosit hasil penghitungan dalam hen~ositon~eter
Perhitungan jumlah leukosit Sampel darah dihisap menggunakan pipet leukosit hingga tanda tera 0.5 dengan aspirator. Ujung pipet dibersihkan dengan menggunakan tissue, lalu larutan pengencer Turk yang memiliki kandungan berupa asam asetat glasial dan pewarna Gentian Violet dihisap hingga tanda 11. Kemudian pipet digerakkan nmemutar dengan nmembentuk angka 8 selama 3 menit. Setelah homogen, cairan yang tidak terkocok pada ujung pipet dihilangkan dengan menempelkan ujung pipet ke kertas tissu. Setelah itu teteskan satu tetes ke dalam hemositometer, usahakan jangan sampai ada udara yang masuk. setelah itu dibiarkan selama beberapa saat sehingga cairan mengendap, lalu penghitungan dapat dimulai. Agar tidak terjadi penghitungan dobel ~nakasebaiknya menggunakan hand counler. di bawah lnikroskop dengan pembesaran 45x10. Jumlah leukosit yang didapat dari hasil perhitungan dikalikan 50 untuk mengetalmui jumlah leukosit setiap 1 mm3 daral~. Jumlah Total Leukosit = c x 50/mm3 Keterangan: c adalah julnlah leukosit hasil penghitungan dalam hemositometer Penentuau kadar hemoglobin Penentuan kadar hemoglobin dilakukan dengan menggunakan metode Sahli. Prinsip nletode ini adalah mengukur konsentrasi henlatin yang dibeutulc ole11 daralm dengan HC1. Prosedur metode ini yaitu darah dipipet dengan pipet Sahli sebamyak 0.02 ml kemudian dimasukkan ke dalam tabung Sahli yang berisi HC1 0,l N sampai batas terbawah, kemudian didiamkan kurang lebih 3 menit satnpai terbentuk asam hematin yang berwarna coklat tua. Warna tersebut kemudian disamakan dengan warna standar sahli dengan ditambahkannya aquadestilata sedikit demi sedikit ke dalam tabung sampel. Setelah warnanya sama, nminiskus akhir dibaca pada skala yang menunjukkan kadar hemoglobin.
Perhitungan uilai hematokrit Penghitungan nilai hematolwit atau Paclced Cell Volunfe (PCV) dilalcukan dengan menggnnakan metode mikrolmematolcrit. Prinsip lcerjanya adalah
memisahkan sel-sel darah dari plasma yang terdiri dari butir-butir darah merah diultur dan dinyatakan sebagai persen volume dari lteseluruhan darah. Prosedur untuk metode ini adalah darah diarnbil dengan mikrohematokrit kapilaritub hingga
314
dari tabung tersebut dan ditutup dengan crestoseal. Kemudian
disentrifuse selama 5 menit dengan kecepatan 12.000 rpm. Selanjutnya diukur persen volume sel darah merah dengan mikrohematolcrit reader.
Analisis Data Data yang diperoleh dianalisa menggunakan Analisis Sidik Raganl (ANOVA) dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL), dan dilanjutkan deugan Uji Jarak Berganda Duncan (Duncan's Multiple Range Test) untuk mengetahui perbedaan perlakuan yang ada. Nilai probabilitas (P < 0,05) diterima sebagai hasil yang berbeda nyata (Mattjik dan Sumertajaya 1999).
HASIL DAN PEMBAHASAN Penapisan Fitokimia (Screening Pitokimia)
Berdasarkan penapissu~ fitokimia (screening fitokimia) diperoleh hasil seperti yang disajikan dalam tabel 3. Tabel 3. Hasil penapisan fitokimia Parameter
Simplisia
Fraksi Air
Fraksi Etil Asetat
Rimpang Kunyit Alkaloid
+
Flavonoid
-
Tallilia dan Polifello1
-
Saponin
-
Kuinon
+
+
+
+
Ket:
+ = Pelarut menarik senyawa tersebut
- = Pelarut tidak lnenarik senyawa tersebul Flavonoid
berfungsi
menurunkan
permeabilitas
kapiler
sehingga
perdarallan kapiler dapat dicegah serta kerapuhan dan lce~usakankapiler dapat diperbailti (Wardhala el al. 2001). Flavolloid bekerja dengan n~embe~ltuk sumbat trombosit dan ~nemperbaikiendotel vaskuler sehingga dapat menutup robekan kecil pada pe~nbuluhdarah (Evans 1989). Pada pe~~elitian ini pelarut etil asetat mampu menarik senyawa flavonoid yang ada dala~nrimpang kunyit. Senyawa kui~loll me~npunyai kema~npua~lsebagai antibiotik dan penghilsu~grasa sakit serta merangsang pertumbuhan sel baru pada kulit (Anonim 2008b). Pada pellelitian ini pelarut air dan etil asetat mampu menarik senyawa lcuinoll yang berada di dalan rimpang lcunyit. Pada lcasus perse~llbuhanluka, kuinon berpersul dalanl proses merangsang pertumbuhan sel baru pada luka kulit sehingga dapat lnempercepat proses perse~nbuhannya
Gambaran Darah
Hasil pengarnatal1 ganbarall darah pada mencit (Mus nzusculus) dalam lcondisi luka yang diolesi salep lcunyit dapat dilihat pada tabel 4, 5, 6 dan 7.
Jumlah Eritrosit (RBC) Hasil penelitian untuk jumlah eritrosit mencit dalam kondisi luka setelah pemberian salep kunyit pada hari ke-2,4,7, 14, dan 21 ditampilkan pada Tabel 4. Tabel 4. Rataan jumlah eritrosit (RBC) pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit. Kelompok
Ket:
4
2
Hari Ke7
14
21
K+ K-
7.87+1.46abcd 9.27f0.67~~' 6.76f2.9Obcd 4.25i0.14~ 4.46f0.16~ 5 . 6 6 f 0 . 9 6 ~ ~ ~6 . 0 6 f 1 . 4 5 ~ ~ ~ 10.12f3.80~~ 6 . 4 2 f 0 . 3 0 ~ ~6 . 1 0 f 1 . 9 0 ~ ~ ~
PA
3.91f3.38Cd
.
12.31f5.04a
6.15f0.1 lbm
5.96f0.40bcd 5 . 3 2 f 0 . 0 0 ~ ~ ~
*
Dala Disajikan dalam rataan standar deviasi Satuan dalam juta/mm3 I-luruf yalig berbeda (superschript) pada kolom dan baris yang sama menunjukdn perbedaan pada taraf uji (P
Jumlah eritrosit pada inencit berkisar antara 7.7-12.5 juta/mil13 dengan rata-rata 9.3 juta/mm3 (Arrington 1972). Pada penelitian ini jumlal~ eritrosit mencit sebelum dilakultan perlukaan rata-rata 7.2 juta/mn3, ha1 ini diasuinsikan sebagai kondisi awal sebelurn diberi perlakuan. Hasil pengamatan menunjukan jumlah eritrosit berfluktuasi antar perlakuan dan antar waktu pengainatan. Banyak faktor yang dapat mempengaruhi jumlah eritrosit diantaranya adalah konsentrasi hemoglobin, PCV, umur, jenis kelamin, kesehatan, olahraga, laktasi, kebuntingan, suhu, dan ketinggian (Swenson 1984). Jumlah eritrosit PE lebih mendekati atau hampir sama dengan nilai kondisi awal sebelum diberi perlakuan. Hal ini diduga ltarena peran dari zat aktif flavonoid yang dapat menurunkan permeabilitas kapiler sehingga perdarahan kapiler dapat dicegab serta kerapuhan dan kerusakan kapiler dapat diperbaiki (Wardhana et al. 2001). Flavonoid bekerja dengan membentuk sumbat trombosit dan memperbaiki endotel vaskuler sehingga dapat menutup robekan kecil pada pembuluh darah (Evans 1989). Jumlah eritrosit pada hari ke-2 relatif stabil ltecuali pada kelompok PE yang memperlihatkan nilai tertinggi, walaupun masih dalaln kisaran normal. Hal ini diduga karena perlukaan yang dibuat tidak mempengaruhi jumlah eritrosit. Menurut Spektor and Spektor (1993), percepatan pergerakan cairan yang melalui dinding pembuluh darah ke jaringan peradangall memungkinkan molekul-molekul
kecil lewat, namun menahan protein-protein besar seperti protein plasma tetap berada dalam darah. Sifat pembuluh darah yang permeable menimbulkan tekanan osmotik yang cenderung menahan cairan di dalam pembuluh darah . Kejadian ini diimbangi oleh dorongan keluar tekanan hidrostatik di dalam pembuluh darah. Tekanan hidrostatik ini dalam keseimbangan antara intrakapiler dan tekanan ekstrasel, yakni tekanan lintas diiding. Limfatik kemudian memindahkan cairan yang mencapai celah jaringan ,untuk mempertahankan kesetaraan secara normal. Pergeseran cairan pada saat luka tejadi sangat cepat, sehingga eksudat pada masa peradangan mengandung protein plasma yang sangat signifkan. Gambar rataan jumlah eritrosit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit dapat dilihat pada Gambar 3.
3
I3.O0 11.oo
1
E
9.00 -
3
7.00
-
5.00
-
3.00
-
3 .-
C
1.00
0
3
2
4
7 Hari ke-
14
21
Gambar 3. Rataan jinlah eritrosit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit. Jumlah eritrosit yang rendah pada awal pengamatan diduga karena terjadinya perlukaan (Gambar 3). Sesaat setelah terjadi perlukaan, pembuluh darah mengalami vasokontriksi yang singkat. Kontraksi buluh darah ini segera diikuti oleh vasodilatasi pada arteriol yang akan menyebabkan pembukaan mikrovaskular baru seperti vena, arteriol kecil, dan pembuluh kapiler (Vegad 1995). Dilatasi pembuluh darah ini disebabkan oleh substansi kimia yang disebut
sebagai mediator inflamasi. Kondisi ini mengakibatkan hiperemi dan peningkatan aliran darah pada daerah yang meradang.
Fase peradangan menyebabkan perubahan yang terjadi pada tillgkat vaskular berupa perubahan pada pembuluh darah, perubahan pada aliran darah, perubahan pada pergerakan atau arus darah dalam pembuluh, eksudasi plasma darah, enligrasi dari leukosit, dan diapedesis dari eritrosit (Vegad 1995). Pada hari ke-14 hingga hari ke-21, jumlah eritrosit relatif stabil pada setiap kelompok perlalcuan. Hal ini diduga karena telah terjadinya proliferasi dari sel untuk lnembentuk benang-benang fibrin dan terjadinya fase pematangan yang ditandai dellgan pembentukan serabut kolagen juga neovaslcularisasi yang sudah
Nilai Hematokrit
Hasil peilelitiail untuk nilai heinatoluit me~lcitdalan kondisi luka setelah pelnberian salep lcunpit pada hari ke-2,4, 7, 14, dall 21 ditampilkan pada Tabel 5. Tabel 5. Rataan lnilai hematokrit pada lnencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit. Kelornpok
.
-
Hari Kern
*
d
-.
*
Data Disajikan dalam rataan standar deviasi Satuan dalam persen (%) Huruf yang berbeda (superschript) pada kolom dan baris yang sama menunjukan perbedaan pada taraf uji (P<0,05)
Hematolcit adalah persentase sel darah merah di dalam 100 ml darah. Nilai heinatokrit inerupakan salah satu indikator untuk mengetahui hewan dalam lcondisi anemia. Pada hewan normal nilai hematoluit sebanding dengan jumlah eritrosit dall kadar hemoglobin (Guyton 1995). Peningkatan nilai hen~atokritdapat dipeagaruhi ole11 kenailcan derajat aktivitas tubuh, anemia dail ketinggian lokasi (Guyton dall Hall 1997). Mellcit lnemiliki nilai hematokrit rata-rata sebesar 41.5 % (Arrington 1972). Pada pellelitiail ini nilai helnatolcrit mencit sebelum dilakultail perlukaan rata-rata 29%, ha1 ini diasulnsikall sebagai kondisi awal sebelum diberi perlakuan.
Pada Tabel 5 diatas secara umum terlihat bahwa perubahan nilai hematokrit pada tiap kelompok mencit pada kondisi luka masih dalam kisaran ambang batas. Nilai hematokrit kelompok K+ pada hari ke-2 menunjukkan nilai yang lebih rendah atau berbeda nyata (W0.05)dibandingkan nilai hematokrit pada hari ke-7 dan ke-14. Hal ini diduga karena pada hari ke-7 dan ke-14 merupakan masa persembuhan (respon tubuh terhadap adanya luka). Nilai hematokrit yang cenderung meningkat pada kelompok K+ dan kelompok PEmulai hari ke-2 h'igga hari ke-21, diduga karena kerja dari zat aktif yang membantu perbaikan kondisi kesehatan hewan, sedangkan pada kelompok PA dan K- nilai hematokritnya lebih fluktuatif. Penurunan nilai hematokrit pada kelompok mencit dalam penelitian ini, cenderung dipengaruhi oleh proses luka. Setelah mengalami perdarahan yang cepat, maka tubuh akan mengganti cairan plasma dalam waktu 1 sampai 3 hari, namun ha1 ini akan menyebabkan konsentrasi sel darah merah menjadi rendah. Bila tidak tejadi perdarahan yang kedua, maka konsentrasi sel darah merah biasanya kembali normal dalam waktu 3 sampai 6 minggu (Guyton dan Hall 1997). Gambar rataan nilai hematokrit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit dapat dilihat pada Gambar 4.
.-
C
S m
2
I
40 38 36 34 32 30 28 26
-
.
-
241
1
22 20 3 18 7I 16 C 2 4 7 14 21 Hari ke-
Gambar 4. Rataan nilai hematokrit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit.
Pada setiap kelompok mencit, nilai hematokrit terus Inengalami peningkatan sejak hari ke-4 (Gambar 4) tapi tidak menunjukan perbedaan yang signifikan (P>0.05) (Tabel 5). Profil nilai hematokrit kelompok mencit PE, cenderung lebih mendekati kelompok mencit (K+) sebagai kontrol positif yang Inengalldung neolnycin sulfat 5% daripada kelompok lnencit PA dan lcelompok lnencit yang tidak diberi sediaan apapun sebagai kontrol negatif (K-).
ICadar Hemoglobin (Hb) Hasil penelitian untuk kadar hemoglobin mencit dalam kondisi luka post pemberian salep lcunyit pada hari ke-2,4,7, 14, dan 21 ditampillcan pada Tabel 6. Tabel 6. Rataan kadar hemoglobin (Hb) pada mencit dalan~kondisi luka yang diolesi salep kunyit. Kelo~npok
K+ KPE PA
2 9.00f1 .41d' 9.00f1.41de 10.2012.26~~'
4 9.60r1.13~~ 11.00f1.41'~' 9.20i1.13~~
10.50*0.71~'~~ 1 1 . 4 0 i 0 . 5 7 ' ~
Hari Ke7
14
21
9.80r0.57'~"~
11.70+0.42"~~ 11.70f0.99'~
11.10+1.27'5de
9 . 6 0 + 0 . 2 8 ~ ~ 11.60f0.57'~
8.70i0.99'
10.40+0.57'~'
12.20t0.28'~
9.00*1 .4i6'
I I .50*O.7lew
12.40+0.008
Ket:
=
Data Disajikan dalam rataan i standar deviasi Satuan dalam gram persen (g%) Huruf yang berbeda (superschript) pada kolom dan baris yang sama menunjukan perbedaan pada taraf uji (P<0,05)
Mencit ~nelnilikikisaran kadar hemoglobin sebesar 10-19 gr% dengan rata-rata 14.8 gr% (Arrington 1972). Pada penelitian ini kadar hemoglobin mencit sebelum dilakulcan perlukaan rata-rata 9.2 gr%, ha1 ini diasulnsikan sebagai lcondisi awal sebelum diberi perlakuan. Hasil penelitian menu~~jukan bahwa kadar hemoglobin masih relatif stabil selanla pengamatan pada selnua lcelompolc perlakuan, dengan nilai berlcisar antara 9-12 g%. Pada awal pengamatan dari hari ke-2 hingga hari ke-7, terlihat nilai kadar hemoglobin lebih fluktuatif. Secara ulnunl perubahan kadar henloglobin tersebut masih dalanl kisaran anbang batas. I
kelompok perlakuan mengalami penurunan pada hari yang berbeda (Gambar 5). Pada kehilangan darah yang kronis, penderita seringkali tidak dapat mengabsorbsi cukup besi dari usus halus untuk membentuk hemoglobin secepat darah yang hilang. Kemudian terbentuk sel darah merah yang mengandung sedikit sekali hemoglobin, sehingga menimhukan keadaan anenzia hipokromik mikrositik (Guyton dan Hall 1997). Pada hari ke-21, kadar hemoglobin kelompok PE dan PA menunjukkan nilai yang berbeda nyata (P<0.05) dibandingkan dengan nilai hemoglobin pada hari ke-7. Hal ini menunjukkan bahwa pada hari ke-21 khasiat salep ekstrak rimpang kunyit untuk obat persembuhan luka sudah terliiat. Hasil uji penapisan fitokiiia fraksi etil asetat dan ftaksi air rimpang kunyit mengandung senyawasenyawa kimia dari golongan flavonoid dan kuinon. Kuinon mempunyai kemampuan sebagai antibiotik, penghilang rasa sakit dan merangsang pertumbuhan sel baru pada kulit. Kunyit sebagai antioksidan juga dapat melindungi hemoglobin dari oksidasi. Gambar rataan kadar hemoglobin pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit dapat dilihat pada Gambar 5. 14 -
13 12 -
2
4
7 Hari ke-
14
21
Gambar 5. Rataan kadar hemoglobin pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit. Nilai kadar hemoglobin yang mendekati kadar hemoglobin kontrol positif (K+) dipakai sebagai indiiator untuk menyatakan perlakuan yang efektif untuk persembuhan luka. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar hemoglobin
kelompok PE (fralcsi etil asetat) lebih mendekati kadar hemoglobin kelompok K+, dibandingkan dengan kelompok lainnya. Hal ini diduga akibat adanya kandungan zat aktif pada kunyit yang ditarik oleh pelarut etil asetat yang mampu menlbantu mempercepat persemhuhan luka, sehingga kelompok K+ dan PE dinyatakan sebagai kelompok perlakuan yang dapat lebih bailc dalam mempertahankan homeostasis darah.
Jumlah Leukosit (WBC) Hasil penelitian uutuk jumlah leukosit mencit dalam kondisi luka post pemberian salep kunyit pada hari ke-2,4,7, 14, dan 21 ditampilkan pada Tabel 7. Tabel 7. Rataan jumlah leukosit (WBC) pada mellcit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit. Hari Ice-
Kelompok
2 -
K+ KPE PA
2.87+0.81abc 5.67?;3.21ab 3.65f0.98~~' 4.80f1 .goabc
4
7
14 ..
1.92f1.OzbC 5 . 5 2 f 2 . 2 ~ ~ ~ 3.60f0.91abc 1.92f1.80bC 7.57i3.50a 2.07i0.03~~ 3 . 0 5 f 2 . 0 5 ~ ~ ~ 1.27f0.03C 4.37+2.58abc 3 . 0 0 f 2 . 8 2 ~ ~ ~ 2.3210.10~~ 2.50f1 .27bc
31 -. 2.90f0.07~~~ 2.62i0.31abc 2.20f0.49~~ 5.55f0.00"~
Ket: Data Disajikan dalam rataan i standar deviasi Satuan dalam rblmm3 Huruf yang berbeda (superschript) pada kolo~iidan baris yang sama menunjukan perbedaan pada tarafuji (P
Mencit inemiliki kisaran jumlah leukosit sebesar 4-12 ribu/min3 dengail rata-rata 8 ribu/mm3 (Anington 1972). Pada peilelitian ini jumlah leulcosit mencit sebelum dilalculcail perlulcaan rata-rata 5.7 ribu/mm3, ha1 ini diasumsikan sebagai kondisi awal sebelun diberi perlakuan. Hasil penelitian menunjukan bahwa untuk jumlah leulcosit pada tiap kelornpok mencit pada lcondisi luka meilgalarni fluktuasi yang bervariasi. Fase peradangall menyebablcarl perubahan pada tingkat selular berupa peningkatan aktivitas leukosit. Aktivitas leulcosit ini inerupalcan suatu aktivitas yang berkelailjutail dau terdiri dari marginasi, adesi, einigrasi, fagositosis, dail pelepasail produk-produk leukosit ke jaringan ekstraselular (Vegad 1995). Jumlah leukosit dapat meningkat ole11 beberapa sebab seperti pada infeksi bakteri, sebalilu~yapada infeksi viral jumlah leukosit inenurun tajanl (leukopenia). Leukopoilia dapat juga terjadi akibat adanya endotoksin bakteri, septicemia dan
toxemia, sedangkan pada kasus tumor (neoplasma) yang melibatkan sistem limfatik, jumlah limfosit dalam aliran darah meningkat (Swenson 1984). Gambar rataan jumlah leukosit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit dapat dilihat pada Gambar 6. 8
-
6 7
2E
-
5 -
-.* 3
-C1 L
4 -
3
UI
-
23
2 -
3
I,
0
7
2
4
7 Hari ke-
14
21
Gambar 6. Grafik rataan jumlah leukosit pada mencit dalam kondisi luka yang diolesi salep kunyit Jumlah leukosit yang rendah pada hari ke-7 pada kelompok mencit dengan pemberian salep fraksi etil asetat rimpang kunyit (PE)dan kelompok mencit yang diberi salep fiaksi air rimpang kunyit (PA) diduga karena pada hari ke-7 luka mulai sembuh. Zat aktif kuinon dalam M i etil asetat dan kaksi air rimpang kunyit dapat berfungsi sebagai antibiotik dan penghilang rasa sakit serta merangsang pertumbuhan sel baru pada kulit (Anonim 2008~).Perlukaan dapat menyebabkan mobilisasi dari sebagian besar leukosit untuk bergerak ke pusat peradangan, ha1 ini mengakibatkan jumlah leukosit di dalam sirkulasi menjadi menurun. Jumlah leukosit hari ke-7 pada kelompok mencit yang tidak diberi sediaan apapun (K-), mengalami peningkatan yang signifkan. Hal ini diduga karena pada hari ke-7 tejadi puncak peradangan, dan proses persembuhan luka bejalan sangat lambat. Leukosit yang terakumulasi pada dindiig endotel akan melakukan emigrasi atau keluar dari pembuluh darah menuju jaringan luka. Leukosit keluar
dari pembuluh darah melalui celah antara dindiig endotel sedangkan eritrosit
tidak memiliki lcemampuan untult bergerak sendiri dan pergerakan eritrosit hanya berupa gerak pasif akibat dorongan dari tekanan intravaskular yang menurun karena keluarnya leukosit dari pembuluh tersebut.
e. Efektifitas Pemberian Salep Kunyit Untuk Persembuhan Lulta Gambaran darah (jumlah eritrosit, jumlah leukosit, nilai hematokrit, dan ltadar hemoglobin) pada lcelompok perlaltuan yang memperlihatkan nilai lebih stabil atau lebih mendekati kontrol positif, berarti memiliki kemampuan lebih baik untuk persembuhan luka. Pada penelitian ini jumlah eritrosit, jumlah leukosit, nilai hematoluit, dan ltadar hemoglobin kelompok PE (fraksi etil asetat) memperlihatkan nilai yang lebih mendekati K+ dibandingltan kelompok PA (fraksi air).
KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan 1. Hasi! uji penapisan fitokimia menunjukan bahwa fraksi etil asetat rimpang lcunyit ~nengandungsenyawa-senyawa kimia dari golongan flavonoid dan Icuinon, sedanglcan fralcsi air riinpang kunyit hanya mengandung senyawa lcimia dari golongan lcuinon.
2. Gambaran darah mencit akibat pemberian salep fralcsi etil asetat rimpang kunyit memperlihatkan profil yang lebih mendekati kelompok mencit yang diberi obat persembuhan lulca komersial yang mengandung neomycin sulfat 5% sebagai koiltrol positif dibandinglcan lcelompok mencit yaug diberi salep fraksi air riinpang kunyit. Ha! ini terlihat dari profil gambaran darah hingga alchir pengamatan. 3. Secara uinuin sediaan salep rimpang kunyit dengan fraksi etil asetat mempunyai manfaat dalain inembantu proses perseinbuhan
luka
dibandingkan salep rimpang kunyit dengan fraksi air, sehingga salep rimpang kunyit dengan fraksi etil asetat berpotensi untuk dikembangkan menjadi obat komersial.
Saran
1. Perlu dilakulcan penelitian lebih lanjut terhadap fraksi rinlpang kunyit dengan pelarut yang berbeda terkait dengall senyawa aktifi~yasebagai antiinflainasi yang dapat mempengaruhi grunbaran darah.
2. Perlu dilakulca~l penelitian serupa dengan inenambaldcan beberapa paraineter pengamatan seperti diferensial leukosit.
DAPTAR PUSTAIU Anonim. 2003. Apoptosis in Skin Wound htt~://www.medscaue.com/viewarticle/457929 6. r28 Juli 20081.
Healing.
2 0 0 8 a . htt~:Nhabibfa07.multiply.com/iournal/item/ll. r12 Januari 20091.
.-.-------
----------. 2008b. hb~:llwww.f-buzz.com/2008/08/06/inilah-manfaat-lidd1-buava. Januari 20091. Ansel HC. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Edisi ke-4. Jakarta: UI Press. Anington LR. 1972. Introductory Laboratory Aninznl Science. The Breeding, Care and Managenzent ofExperinzenta1 Animals. New York: The Interstate Printers & Publishers Inc. Banks WJ. 1986. Applied Veterinary Histology. 2nd Edition. Baltimore: William dan Willtins. hlm 164-167. Banks WJ. 1993. Applied Veterinary Histology. 3rd Edition. Baltimore: Willianl dan Wilkins. hlm 298-323. Cheeke PR. 1999. Actual and Potential Applications of Yucca schidigra and Quilaja saponaria Saponin in Human and Aninzal Nutrition. htt~://www.asa.org/ias/s~posid~rceedins/O909df. r12 Januari 20091. Dalimartha S. 2005. Tanantun Obat di Lingkungnn Sekitor. Jakarta: Puspa Swara. Darwis SN, Madjo Indo ABD dan Hasiyah S. 1991. Tuinbuhan Obat dun Famili Zingiberaceae. Bogor: Badan Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri. Dellmann HD and Brown EM. 1988. Buku Text Histologi Veteriner. Ed ke-3. Diterjemahlcan ole11 Hartono R. Jakarta: UI Press. 111111 57-71. Terjemahan dari: Textbook of Veterinary Histology. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Farmakope Indonesia. Ed ke-4. Engelhardt E, Toltsoy A, Goebeler M, Debus S, Brocker EB, Gillitzer R. 1998. Chemokines IL-8, GROa, MCP-1, IP-10, and Mig are Sequentially and Differentially Expressed During Phase-Spesific Infiltration of Le~~kocyte Subsets in Human Wound Healing. Ant JPathol. 153: 1849-1860. Evans WC. 1989. Trease and Pharnzacognosi Basis of Therapeutics. Ed ke-4. Bailliere. London: W.B Saunders.
Ganong WF. 1999. Review of Medical Physiology. Diterjemahkan oleh Adji Dharma. Fisiologi Icedokteran. Ed ke-17. Jakarta: EGC. Ganong WF. 2002. Review of Medical Physiology. Diterjemahkan oleh HM Djauhari Widjajakusumah. Fisiologi Kedokteran. Ed ke-20. Jakarta: EGC. Guyton AC. 1995. Bukzr Ajar Fisiologi Kedoktercm (TextBook of Mediccrl Physiologyj. Ed ke-7. Diterjemahkan oleh Tengadi IW. Jakarta: EGC. hlm 52-67. Guyton AC dan Hall 1997. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Ed ke-9. Diterjemahkan oleh Setiawan I, Tengadi KA, Santoso A. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Textbook ofMedical Physiology. Harborne JB.1987. Metode Fitokinzia. Penzmrzliz Cara A4odern 1\4enganali.ris Tumbulzan. Ed lte-2. London New Yorlc: Chapman and Hall. Hidayat MA. 2008. http://eleaming.unej.ac.id/co~~ses/FAR3 14/document/alkaloid Hollman PC. 2005. Polyphenols and disease risk in epidemiologic studies. http:~~www.Id.wiltipedia.ordwiki/polifeno1. r12 Januari 20091. Juanqueira LC and Carneiro J. 1980. Histologi Dasar. Ed Ice-3. Diterjemahkan oleh EGC. Jakarta: EGC. Hlm 256-273. Icalangi SJR. 2004. Peran Kolagen Pada Penyenzbuhan Lzika. Dexa Media 4(17). http://www.dexa-n~edicdtest/htdocs/dexanedicdarticle files/ltolagen.pdf. Juli 20081. Lichtman M. 1980. Henzatology and Oncology. New York: Grune & Stratton Mattjik AA dan Sumertajaya M. 1999. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS, SPSS, dan Minitab. Bogor: IPB Press. Natarajan CP and Lewis YS. 1980. Technology of Ginger and Tunzeric. Proceeding of the National Senzinar of Ginger and T~rnzeric.Kerala India: Central Plantation Crops Research Institute. Okabe J et al. 1996. Haemoglobin types, erythrocyte membrane skeleton and plasma iron concentration in calves with poikilocytosis. The Journal of Veterinary Medical Science. 58(7) : 629-634. Penn
D. 1999. A House ~blo~ise Primer. http://stonny.biolonv.uta11.edu/lab/rnouseprimer.htn11. 128 Juli 20081.
Phillis JW. 1976. Veterinary Physiology. Bristol Wright Scintechinea.
Purseglove JW, Brown EG, Green CL and Robbins SRJ. 1981. Spices Vol. 2. London: Longman. Rapaport IS. 1987. Introduction to Hematology. New York: J.B. Lippincott Company. Rukmana HR. 1994. Kunyit. Jakarta: Kanisius Schalm OW, Jain NC and Carrol EJ. 1975. Veterinary Haematology. Ed ke-3. Philadelphia: Lea dan Febiger. Hlm 235-373. Smith JB dan Mangkoewidjojo S. 1988. Pemeliharaan, Penlbiakan don Pengguncran H e ~ l a nPercobaan Di Daerah Tropis. Jalcarta: UI Press. Spector WG, Spector TD.1993. Pengantar Patologi Umum. ED Ice 3. Soetjipto NS,Harsoyo,Hana A,Astuti P, penerjemah: Moelyono MPE, editor. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Terjemahan dari: An Introduction to General Pathology. 3"' Edition. Stainer MW and Forsling HL. 1990. Physiological Processes :An introduction to Manzmalian Physiology. London: Mc Graw-Hill Boolc Company. Sumiati T dan Adnyana IK. 2004. Si Kuning Kaya Manfaat. http: l/www.Pikiranrakyat.com/cakrawala/lainnya02.htm.[28 Juli 20081. Swenson MJ. 1984. Duke's Physiology of Domestic Animals. Ed lce-10. London: Publishing Associattes a Division of Coinell University. Thomas ANS. Tanaman Obat Tradisionnl. Jogjakarta: Kanisius Van Tyne J and Berger AJ.1975. Fundamental of Ornithology. Ed Ice-2. USA: Iowa. Vegad JL. 1995. Textbook of Veterinary General Pathology. New Delhi: Vilcas Publishing House PVT LTD. hlm: 82-153. Voight R. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Wardhana AH, Kencanawati E, Nurmawati, Rahmaweni, dan Jatmiko CB. 2001. Pengaruh Pemberian Sediaan Patikan Kebo (Etphorbia hirtn L.) terhadap juiizlah eritrosit, kan'cir hemoglobin, don nilai henzntokrit paclu ayanz yar7g diinfelcsi dengan Eimeria tenalla. Jurnal Iln~t/Terncrk don Veter-iner-. Wientxsih I dan Prasetyo BF. 2006. Jurnal Farmasi dun Ili7zu Reseptir. Bogor: IPB Press. Williams DF. 1987. Blood Conzpatibility vol 1. Florida: CRC Press
Lampiran 1
The GLM Procedure Class Level Information
L e v C ; . ] values U l s n g a n n 1 2
G Z q - 7 P I P2 P3 P4
r m
2441421
Number of Observations Read
40
Number of Observations Used
39
Dependent Variable: RBC Source Model
rnF1-m m1!87368987E12/1
I Error 1 I Corrected Total 1
1 38 I/ 2.6577944E14 1 11
1
2.9883172E13
2.716652E12
1 1
~r > F
0.2229
1
I
Source Perlakuan*Waktu
Source
m
p
y
q
M
F
[
~r > F
p!v\mim
Perlakuan
0.8827
Ulangan(Per1akuan) 0.0807
Waktu
l
Ulangan(Waktu) Perlakuan*Waktu
~
m m m m
0 2023 0 0051
Tests of Hypotheses Using the Type Ill MS for Ulangan(Per1akuan) as an Error Term Source Perlakuan
mM588799171/781012(
0,9411
Tests of Hypotheses Using the Type Ill MS for Ulangan(Waktu) as an Error Term Source Waktu
1AEMeanSquare(Fl
P ~ > F
IqMmi.fi 0.3388
Duncan's Multiple Range Test for RBC Note:
I Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square
1
0.05
1
Note: Cell sizes are not equal. I
,
u3
, I -
Number of Means Critical Range
1 F -1
4
1765539
Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping
m m
Perlakuan
/ 6 9 1 5 5 5 6 1 1 pqq
A A
pqm
A
A
P4
P2
P3
Alpha
0.05
Error Degrees of Freedom Error Mean Square Harmonic Mean of Cell Sizes
11 2.717E12
7.777778
Note: Cell sizes are not equal. Number of Means Critical Range
H1-m
5
2007676
--
Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping B
B B B
Imm
pqpGGJm4 q -
F ]
A
m q
1 m
m
- 1 G i z q r ; 1 2 1 The GLM Procedure Class Level Information
Dependent Variable: f Source
Sum of Squares
1.8829859E14 Error Corrected Total
Waktu
7.748085E13 2.6577944E14
4 2
51
TypelSSMeanSquarelm
Source Treatment
I
~ 1~
~r > F
'
0.0300
i H m m m 1 I 1 1 ~ 1 ~r > F
Source Treatment
19
0.0300
Alpha
0.05
Error Degrees of Freedom
19
-
4.078E12
Error Mean Square
-
-
Harmonic Mean of Cell Sizes
1.904762
Note: Cell sizes are not equal. Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping
Treatment
nlqn-• -
YilAAWM ~
p4-4 ~2-7
~
P3-2
~
~~~~~m ~ l ~ ~ m 8ri1C1Fl T l ~ ~ m ~ - T PI-14
-
P1-7 23-7
-
P I-21
~-iq-----i-q 1 0
-
6425000
P2-14
Means with the same letter are not significantly different.
1 8pq-mpzGJr;l
Treatment
Duncan Grouping
P4-7
rmm-q qlqrmm/O
I ,
D
P2-21
a
P2-4
FIp pjpzqq B
1
P4-14 ~2-2
i-m p l m p l 115550000121 ~ ~ -
-
-
1
P3-4
P3-14 P4-21
~
~
I
P3-21
1~~~~~ PI4
-~1~~1pGqr;l -
P I -2
~
~
n
B
Lampiran 2.
The GLM Procedure Class Level Information values
ul..e..;112
G G iq m
P I P2 P3 P4
7
5
1
1
2
4
7
1421
Dependent Variable: WBC Source Model Error Corrected Total
W-MeanSquare
IF>
F
~ ~ 2 7 2 7 6 3 3 2 ~ 0.4555
~~~~
54
~ 1~
Source Perlakuan*Waktu
~r > F
m-mm
0.2544
Tests of Hypotheses Using the Type 111 MS for Ulangan(Per1akuan) as an Error Term
~ ~ l M e s n S q u a r e Pl ~ ~> F 1
Source
m M v I m
Perlakuan
0.7457
Tests of Hypotheses Using the Type Ill MS for Ulangan(Waktu) as an Error Term Source Waktu
mType S ll SIMesnSquarem
1
1309.029297
1
327.257324
1
Duncan's Multiple Range Test for WBC Note: This test controls error rate. Alpha Error Degrees of Freedom
~ rF r
0.1479
Note: Cell sizes are not equal. I
lr-
I
I/
Number of Means Critical Range
Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping
A
F m p m
56.713110
A
Perlakuan P2 PI P4
A
A 0.05
Alpha
-
Error Degrees of Freedom
11 248.1 173
Error Mean Square
P
Harmonic Mean of Cell Sizes
7.777778
-
Note: Cell sizes are not equal. Number of Means Critical Range
21314 117.58111
19.19
Means with the same letter are not significantly different.
I Duncan Grouping 1
Mean
1 N /I Waktu I
Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping
/54769m
A
14
A
A The GLM Procedure Class Level Information
Ulang an Treat ment
l2 20
PI-14 PI-2 PI-21 PI-4 PI-7 P2-14 P2-2 P2-21 P2-4 P2-7 P3-14 P3-2 P3-21 P3-4 P3-7 P4-14 P4-2 P4-21 P4-4 P4-7
Number of Observations Read 40
-
Number of Observations Used Dependent Variable: WBC Source Model Error Corrected Total
H
E
mpiG&
ppiiiG
39
Source
OF/TypeIwm ~r > F
-
-
19 6232.859572
Treatment -
1
328.045241
0.1526
Source Treatment
~1~ ~
0,1526
0.05
Alpha
Error Degrees of Freedom
19
Error Mean Square
203.2126
Harmonic Mean of Cell Sizes
1.904762
-
Note: Cell sizes are not equal. Means with the same letter are
Lampiran 3.
The GLM Procedure Class Level Information Class Ulangan Perlakuan Waktu
/L
valuer
2 1
I2
4/
P I P2 P3 P4
5 1 1
2471421
Number of Observations Read 40 Number of Observations Used
39
Dependent Vanable Hematokr~t
BmE
Source Model
~
~
z
i
0~118.84829551
Error Corrected f otal
m
v
\
m
Hematokrit Mean 0.744133
13698794.341462
31.69231
r
G
60
IqITypelSS-rn
Source Perlakuan*Waktu
Source Perlakuan Ulangan(Per1akuan) Waktu Ulangan(Waktu)
rnm-0741 1~ ~ ~ l A / m m ~ ~1~ m-7383 1
PI > F
0.6929
~r
0.5335 0.4488 0 0346
~
m m m m
Perlakuan*Waktu
F
0 7371 0.6929
Tests of Hypotheses Using the Type Ill MS for Ulangan(Per1akuan) as an Error Term Source Perlakuan
mvMeanSqusre/ ~
~~~~
r F>
0.5667
Tests of Hypotheses Using the Type Ill MS for Ulangan(Waktu) as an Error Term Source Waktu
PITypelllSSmFl 1 4 ) ( -
P> I
0.0368
Duncan's Multiple Ranae Test for Hematokrit Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. -.-.---=
-====-
Error Degrees of Freedom Error Mean Square -
-
Harmonic Mean of Cell Sizes
18.8483
F
Note: Cell sizes are not equal.
_ _.-.,,.
,
HLiJHM I
2 .
7 - 1
Number of Means
Critical Range
1
Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping
Mean
1
N
1 Perlakuan /
Alpha
0.05
Error Degrees of Freedom Error Mean Square Harmonic Mean of Cell Sizes
11 18.8483
7.777778
Note: Cell sizes are not equal. Number of Means Critical Range L
.
) 1 3 ) 4 ) PIP
Means with the same letter are not significantly different.
5-
5.288 -
Means with the same letter are not significantly different. &can
~
r
o
u
*-iqm
p
i
n
g
w
7
~ p i - l T 21; i B --A
( 3 0 7 5 0 1 8 ( 1-4
B
-
Ir-p l7Jipq2 The GLM Procedure
Class Level Information
Ulang
n 20
ment
PI-14 PI-2 PI-21 PI-4 PI-7 P2-14 P2-2 P2-21 P2-4 P2-7 P3-14 P3-2 P3-21 P3-4 P3-7 P4-14 P4-2 P4-21 P4-4 P4-7
Number of Observations Read 40 ---
I Number of Observations Used 1 3 9 1 Dependent Variable: t
/SDUICB I Model
1 1 Tqm-173 DF
Sum of Squares
1
Mean Square ;value
I Error I Corrected Total Hematokrit Mean 0.633473
12.47520-
31.69231
Source
TypelSSI.eanlqusrem ~r > F
Treatment
m=-1
Source
T y p e S lS I e .a n S q u a r e m~r > F
Treatment
0.1210
1
~
Alpha
0.05
Error Degrees of Freedom
19
Error Mean Square
15.63158
Harmonic Mean of Cell Sizes
1.904762
Note: Cell sizes are not equal.
01210
Lampiran 4.
The GLM Procedure I
3
Class Level Information
I Perlakuan 1
4
I Waktu
5112471421
1
I/ P I P2 P3 P4 I 1
Dependent Variable: Hemoglobin
m m o f m
Source
~r > F
1 ~ ~ ( ( 7 ( 6 0 0.0?06 2 6 ~
Model
~~I~~
Error Corrected Total
38
Hemoglobin Mean 0.905876
1-07842721
10.43077
66
Type-=
Source Perlakuan*Waktu
~r > F
rnm-752715281
0.0458
~ 1~
0.4483
Source Perlakuan Ulangan(Per1akuan)
~
~
0.2072
~1~~18(7
Waktu
0.0026
Ulangan(Waktu) Perlakuan*Waktu
Iqm-501 n m 1 7 6 2 7 1 5 8 /1 =
0.0151 0.0458
Tests of Hypotheses Using the Type Ill MS for Ulangan(Per1akuan) as an Error Term Source Perlakuan
(
/
DF
1
Type Ill SS
1 1
1
Mean Square
Tests of Hypotheses Using the Type Ill MS for Ulangan(Waktu) as an Error Term Source
Duncan's Multiple Range - Test for Hemoglobin . Note: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentw~se error rate. I
I Alpha
1
I
0.05
1
/I l1I ( Error Mean Square 1 0.615083 1 I Harmonic Mean of Cell Sizes 1 9.72973 1 b r r o r Degrees of Freedom
1
Note: Cell sizes are not equal. P ,
Number of Means Critical Range
Means with the same letter are not significantly different. Duncan Grouping
A A
/I1
1-rn
N
Perlakuan P4
lo
A
1
) P2
1 1 0 3 6 0 0 mP I
A Alpha
0.05
11
Error Degrees of Freedom Error Mean Square
0.615083
Harmonic Mean of Cell Sizes
7.777778
Note: Cell sizes are not equal. Number of Means Critical Range
The GLM Procedure Class Level Information
Ulang an
l
Treat ment
2 PI-14 PI-2 PI-21 PI-4 PI-7 P2-14 P2-2 P2-21 P2-4 P2-7 P3-14 P3-2 P3-21 P3-4 P3-7 P4-14 P4-2 P4-21 P4-4 P4-7
Dependent Variable: Hemoglobin Source Model Error
~
1-m
I
~
I
~
Tpr > F G 0.0397
~ i
1.15157895
Corrected Total
Hemoglobin Mean 10.43077
-
L
