Gliceril-triheptanoát (GTH) jelzőanyag meghatározása feldolgozott állati melléktermékekben GC/MS módszerrel Lovász Csaba, Debreczeni Lajos NÉBIH ÉTbI Takarmányvizsgáló NRL Hungalimentária - 2013. április 16-17.
Tartalom Bevezetés - Jogszabályi háttér - Állati eredetű melléktermékek - felhasználásuk - GTH mint jelzőanyag GTH meghatározása - Minta-előkészítés - Extrakció – bepárlási lépések - SPE minta tisztítási lépés - Műszeres analízis - Eredmények
Bevezetés Jogszabályi háttér: Az Európai Parlament 1774/2002/EK rendelete szabályozza az állati melléktermékek biztonságos használatát, felhasználásának feltételeit az állati takarmányozásban. A 1774/2002/EK rendelet növekvő kockázati megítélésük alapján három kategóriába sorolja ezeket az állati melléktermékeket: (amelyeket a begyűjtésük, a feldolgozásuk, a szállításuk, illetve felhasználásuk során már elkülönítve kell kezelni)
1. kategóriába tartozó anyag; 2. kategóriába tartozó anyag; 3. kategóriába tartozó anyag.
Bevezetés Jogszabályi háttér: 1. kategóriába tartozó anyagok: 999/2001/EK Rendeletnek megfelelően a TSE-fertőzésre gyanús állatok; TSE mentesítés során leölt állatok; betiltott anyagokkal kezelt állatok, kísérleti állatok; pl. cirkuszi állatok;
2. kategóriába tartozó anyagok: trágya, illetve az emésztő traktus tartalma; bizonyos vágóhídi melléktermékek, hulladékok; járványos állatbetegségek felszámolása során leölt állatok;
3. kategóriába tartozó anyagok: vágott állatok azon részei, amelyek emberi fogyasztásra alkalmatlanok; nyersbőr, irha, szarv, pata, sörte, toll; nem kérődző állatokból nyert vér, stb.
Bevezetés Jogszabályi háttér: A Rendelet előírja, hogy az 1. és a 2. kategóriába tartozó melléktermékeket az előállításuk során kémiailag is meg kell jelölni, hogy biztosítani lehessen egyrészt ezen termékek nyomon követhetőségét, másrészt hogy megakadályozzuk ezen állati melléktermékek takarmány- és élelmiszerláncba jutását. A DG-SANCO kérésére az Európai Bizottság kutató intézete (IRMM) tett javaslatot a „marker” anyagként alkalmazható vegyületekre. A kiválasztásnál fontos feltétel volt, hogy a marker ellenálljon az 1. és 2. kategóriába tartozó állati melléktermékek feldolgozásánál alkalmazott sterilizálási körülményeknek is. A melléktermékek előállítása, „jelzése” során alkalmazott jelzőanyag koncentráció olyan magas, hogy lehetővé teszi az összes pozitív minta azonosítását. A marker koncentráció: 250 mg GTH / 1 kg zsír.
Bevezetés GTH mint jelzőanyag: A marker vegyület a Glicerol-TriHeptanoát (GTH) egy heptadekánsav glicerinnel alkotott észtere.
triglicerid,
három
A GTH kémiai tulajdonságaiban megegyezik az állati és a növényi eredetű zsiradékok fő alkotóival. A természetes zsírokban igen kis mennyiségben fordul elő (< 0,05 relatív %), mivel páratlan szénatomszámú zsírsavakat tartalmaz. Előállítása olcsó, nem toxikus. Jól oldódik zsiradékokban – egyszerű bekeverés, homogén jelzett termék.
Már kis koncentrációban is szelektíven meghatározható.
GTH-tartalom meghatározás Forrásmunkák: Implementation study to evaluate glyceroltriheptanoate (GTH) as a marker for animal by-products in rendering systems Ana Boix, Federica Serano, Stefano Bellorini, Christoph von Holst
Determination of glyceroltriheptanoate (GTH) in processed animal byproducts by gas chromatography C. Von Holst, A. Boix, S. Bellorini, S. Androni, F. Serano European Commission JRC Institute for Reference Material and Measurement
GTH-tartalom meghatározás Minta-előkészítés lépései: - Darálás, homogenizálás, részminta képzése.
A minta bemérése az extrakcióhoz.
GTH-tartalom meghatározás Extrakció, extraktum bepárlása: Gyorsított oldószeres extrakció: (Accelerated Solvent Extraction) Oldószer: ciklo-hexán : aceton (1:1) Nyomás: 1500 psi Hőmérséklet: 100 °C Statikus – dinamikus – oldószer lefúvatás Automatizált – 12 férőhelyes berendezés (ASE 300 – Dionex)
GTH-tartalom meghatározás MultiVapor rendszer
Nitrogén áramú bepárló
GTH-tartalom meghatározás Minta tisztítás (SPE): Szilárd fázisú extrakció: (Solid Phase Extraction) SPE Oszlop: NH2, 500 mg – 3 ml Mosás: 7,5 ml hexán Minta: 1g zsiradék – 10ml hexán (200 ml) Elúció: 3 ml hexán - dietiléter 85:15 (v/v) Bepárlás – végtérfogat 2 ml izo-oktán
Injektálási standard: 5-a-Kolesztán
GTH-tartalom meghatározás Műszeres analízis (GC-MS-SIM) Gázkromatográfiás körülmények: Oszlop: Rxi-5MS (30m x 0,25mm 0,25mm, Restek) Hőmérséklet program: 200°C (2 min) / 10°C/min / 300°C (10min) Injektálás: „solvent vent” mód (100°C), splitles idő: 1.8min
Tömegspektrometriás körülmények: Ionforrás: EI (70eV), 230°C MS módszer: SIM (1+2 ion / komponens)
GTH-tartalom meghatározás Műszeres analízis: Varian CP-3800 GC Varian 320-MS
GTH-tartalom meghatározás Műszeres analízis: GTH
Talajjavító minta kromatogramja 5-a-Kolesztán-IS
GTH
Standard oldat kromatogramja 5-a-Kolesztán-IS
GTH-tartalom meghatározás Műszeres analízis: S/N : 99/1 0,096 mg/ml - ~10 mg/kg zsír R: 0,999
LOD: 1mg/kg zsír Ct: 250mg/kg zsír
GTH-tartalom meghatározás Mérési eredmények: A GTH-tartalom meghatározásokat 2008-óta végzi a laboratórium. Eddig közel 100 db mintát vizsgáltunk. - ~ 50 % szerves talajjavító szer - ~ 50 % húsliszt, hús és csontliszt, zsíradék
Köszönöm figyelmüket!
