UJI AKTIVITAS PROTEIN BUAH PARIA
(Momordica charantia L.) DENGAN MENGGUNAKAN UJI KEMATIAN LARVA UDANG DAN ALUR SEL SECARA IN VITRO
AN1 KURNIAWATI
PROGRAM PASCA SARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2002
ABSTRAK P,NI KURNIAWATI. Uji Aktivitas Protein Buah Paria (Momordica charantia L.) dengan Menggunakan Uji Kematian Larva Udang dan Alur Sel Secara in Vitro. Penelitian ini dilakukan untuk mempelajari aktivitas ekstrak protein aktif buah paria muda dan matang dari beberapa kultivar paria dengan uji kematian larva udang dan alur sel. Buah muda adalah buah yang dipanen untuk sayur, buah matang adalah buah paria yang telah berubah warna menjadi kuningorange. Bahan timaman yang digunakan adalah buah paria Hijau, Putih, Kotok, dan Giok. Ekstraksi protein buah paria menggunakan buffer pH, diendapkan dengan amonium sulfat dan dirnurnikan dengan kolom sephadeks. Uji hayati yang digunakan untuk menguji aktivitas ekstrak protein adalah uji kematian larva udang d m uji menggunakan alur sel in vitro. Peubah yang diamati pada uji kematian larva udang adalah LC50 (Lethal Consentration 50 %), sedangkan untuk uji menggunakan a1ur sel adalah indeks penghambatan proliferasi. Semua kultivar paria baik muda maupun matang menunjukkan aktivitas dengan nilai LCs0 dibawah 100 pg/ml. Analisis ragam terhadap indeks p~nghambatanproliferasi alur sel menunjukkan bahwa urnur buah, kultivar, dan irlteraksinya nyata mempengaruhi indeks penghambatan proliferasi alur sel L929 d m KR4. Fraksi dan konsentrasi ekstrak protein nyata mempengaruhl indeks p:nghambatan proliferasi alur sel L929 dan KR4 tetapi interaksinya tidak b erpengaruh nyata terhadap indeks penghambatan proliferasi. Buah paria giok muda menunjukkan penghambatan tertinggi terhadap proliferasi alur sel L929 yaitu sebesar 26.19%. Buah matang paria hijau rrlenunjukkan penghambatan tertinggi terhadap proliferasi alur sel KR4 (36.67%). Sernua Graksi menunjukkan aktivitas penghambatan proliferasi, hanya M s i E clan G tidak menunjukkan penghambatan terhadap alur sel KR4. Fraksi F menunjukkan plenghambatan tertinggi terhadap alur sel L929 (21.48%) meskipun tidak berbeda nyata dengan fiaksi B (13.66%) dan E (19.83%). Fraksi C (23.50%) menunjukkan penghambatan tertinggi terhadap alur sel KR4 meskipun tidak berbeda nyata dlzngan fraksi A (17.26%), B (21.16%), D (13.97%). Semakin tinggi konsentrasi uji elcstrak protein semakin meningkat aktivitas penghambatan proliferasi. Konsentrasi elcstrak protein 400 pg/ml dapat menghambat proliferasi alur sel L929 dan KR4 brzrturut-turut sebesar 15.97 % dan 2 1.96%.
SURAT PERNYATAAN Dengan ini saya menyatakan bahwa tesis yang berjudul : UJI AKTNITAS PROTEIN BUAH PARIA (Momordica charantia L.) DENGAN MENGGUNAKAN LARVA UDANG DAN ALUR SEL SECARA IN W R O atlalah benar merupakan hasil karya sendiri dan belurn pernah dipublikasikan. Semua sumber data dan informasi yang digunakan telah dinyatakan secara jelas dan d 3pat diperiksa kebenarannya.
Bogor, Juli 2002
Ani Kurniawati A.GR 97043
UJI AKTIVITAS PROTEIN BUAH PARIA
(Momordicacharantia L.) DENGAN MENGGUNAKAN UJI KEMATIAN LARVA UDANG DAN ALUR SEL SECARA
IN VITRO
AN1 KURNIAWATI
Tesis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains pada Program Studi Agronomi
PROGRAM PASCA SARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2002
: Uji Aktivitas Protein Buah Paria (Momordicacharantia L.) dengan Menggnakan Uji Kematian Larva Udang dm Alur sel Secara in Vitro Nilma : Ani Kurniawati Nrp. . : 97043 Program Studi : Agronomi
Ji~dulTesis
Menyetujui, 1. Komisi Pembimbing
Prof Dr Ir Sugeng Sudiatso Ketua
/I
Prof Dr Ir Latifah K. Darusman fuxota
Tanggal Lulus : 26 Oktober 2001
Dr d&d Harran. MSc. hggota
v
RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Klaten 13 Nopember 1969, anak pertama dari tiga bersaudara. Penulis menikah dengan Yurisman tahun 1995, saat ini dikaruniai dua o~.anganak, Shavira A. Pravianti (5 tahun ) dan Gernilang A Prirnagasi (3 tahun). Penulis menyelesaikan pendidikan dasar d m menengah di Klaten. Tahun 1988 penulis diterima sebagai mahasiswa program sarjana di Institut Pertanian Bogor dan memperoleh gelar Sarjana Pertanian dari Jurusan Budidaya Pertanian pada tahun 1993.
Penulis diterima sebagai pengajar di Jurusan Budidaya Pertanian, mulai tahun 1994 hingga sekarang. Pada tahun 1997 penulis melanjutkan studi S2 di Program Pasca Sarjana - IPB, dengan beasiswa BPPS.
PRAKATA Puji syukur kehadirat Allah SWT atas rahmat dan hidayah-Nya sehingga tulisan ini dapat diselesaikan. Tema yang penelitiaan ini adalah penggalian potensi sayuran, yaitu beberapa kultivar paria, sebagai pangan fhgsional. Thesis ini merupakan sebagian penelitian dari Graduate Team Research Gpant, Batch IV yang semulai dipimpin oleh Alm. Prof Dr Ir Livy W. Gunawan yang selanjutnya digantikan oleh Dr Ir Said Harran, MSc. Penulis mengucapkan te-irnakasih kepada alm. Prof Dr Ir Livy Winata Gunawan yang telah memberikan ke sempatan kepada penulis untuk bergabung dalam proyek penelitiannya, semoga Tuhan menerima amal baiknya dan keluarga yang ditinggalkan diberi perlindungan dan kekuatan. Penulis menyampaikan ucapan terimaksih dan penghargaan kepada komisi pembimbing; Prof Dr Ir Sugeng Sudiatso. Prof Dr Ir Latifah K. Darusman, dan Dr Ir Said Harran, MSc. yang telah memberikan bantuan baik berupa saran maupun faiilitas yang menunjang kelangsungan penelitian. Penghargaan dan ucapan terimakasih kepada Drh Bambang Pontjo P., MS., Ph.D atas izin penggunaan laboratorium Patologi, FKH-IPB. Terimakasih kepada Ibu Sutanty, Ibu Wiwi, Ibu Hilda atas penerimaan yang bak; Mbak Ati (Saraswati) dan Mas Faisal atas bantuan dan persahabatannya di Laboratorium ImunologiNAMRU. Penghargaan juga saya sampaikan kepada teman-teman di Jurusan Budidaya Peltanian atas perhatian dan semangatnya Kepada Ir Evy Damayanti, MS staf pengajar Jurusan GMSK dan teman sekeja di Laboratorium NAMRU-2 Jakarta; terimakasih atas persahabatan dan kerjasamanya yang baik; Ir Herla R, MS. atas waktuya di Laboratorium Patologi-FKH. Ucapan terimakasih untuk semua piha. yang turut membantu kelancaran pekerjaan di Laboratorium Biokimia-FMIPA, Laboratorium PSPT, Laboratorium Imunologi-NAMRU-2 Jakarta. Rasa terimakasih yang dalam untuk keluargaku; anak-anak, suami, ibu dan sanua keluarga; tanpa pengertian, bantuan dan dukungannya saya tidak munglun dapat menyelesaikan semua ini. Semoga tulisan ini bermanfaat bag penulis dalam melaksanakan tugas di ternpat bekerja dan dapat menyumbangkan informasi untuk pengembangan pemanfaatan sayuran, terutama paria. Bogor, Juli 2002 Ani Kurniawati
DAFTAR IS1 Halaman ix
DAFTAR TABEL ..................................................................... DAFTAR GAMBAR ................................................................'
X
D AFTAR LAMPIRAN ...............................................................
xi
PIZNDAHULUAN Latar Belakang .................................................................. Tujuan ......................................................................... Hipotesis .......................................................................
1 4 5
TlNJAUAN PUSTAKA Botani Tanaman Paria ....................................................... Manfaat Paria ................................................................. Ekstraksi Protein ............................................................... Kanker ........................................................................... Pangan dan Kanker ............................................................. Uji Hayati ....................................................................... Kultur Sel........................................................................ Uji Alur sel ..................................................................... B t W DAN METODE Tempat Dan Waktu Penelitian................................................ Bahan dm Metode............................................................. Ekstraksi Protein ............................................................... Uji Kematian Larva Udang ................................................ Uji Menggunakan Alur Sel ...................................................
18 18 19 20 21
H.4SIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Protein ............................................................... Uji Kematian Larva Udang ................................................... Uji Aktivitas Menggunakan Alur Sel .......................................
26 28 33
DPSTAR PUSTAKA ..................................... :....................
43
LAMPIRAN ............................................................................
46
DAFTAR TABEL Halaman 1
Rendemen protein buah paria pada fiaksi amoniurn sulfat ............
2
Rekapitulasi Andisis Ragam terhadap peubah Indeks Penghambatan Proliferasi .................................................................... 34
27 ,
3 Interaksi Kultivar dan Umur Paria terhadap Indeks Penghambatan Proliferasi Alur Sel L929 secara in Vitro .................................
35
4 Interaksi Kultivar dan Umur Paria terhadap Indeks Penghambatan Proliferasi Alur Sel KR4 secara in Vitro .................................
35
5 Indeks Penghambatan Proliferasi Tiap Kelompok Fraksi ..............
37
6 Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Protein terhadap Indeks Penghambatan Proliferasi Alur Sel secara in Vitro ....................................... 39
DAFTAR GAMBAR Halaman 1 Rendemen Protein Buah Paria pada Fraksi Amoniurn Sulfat ........... 27 -
2 Nilai LC 50 Ekstrak Protein Buah Paria pada Fraksi Amoriium Sulfat Dengan Uji Kematian Larva Udang ... ................. ................ ... 3
28
Pola Pernisahan Ekstrak Protein Beberapa Kultivar Paria Muda dengan Kolom Sephadeks ... .................. ... ............. ... ........... 30
4 Pola Pernisahan Ekstrak Protein Beberapa Kultivar Paria Matang dengan KolomSephadeks .................................................. 30 5 Rendemen Fraksi Kolom Kultivar paria Muda ............... ..........
31
6 Rendemen Fraksi Kolom Kultivar paria Matang ......... ......... ...... 32 7 Indeks Penghambatan Proliferasi Kultivar Paria Muda terhadap Alur Sel L929 ............ ... ...... ...... ...... ....... ........ . . .
36
8 Indeks Penghambatan Proliferasi Kultivar Paria Matang terhadap AlurSelKR4 ...................................... .......................
36
9 Indeks Penghambatan Roliferasi Kelompok Fraksi ....................
38
1(1 Pengaruh Konsentrasi terhadap Indeks Penghambatan Proliferasi ...
39
,
DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1
Iiagan Alur Penelitian . . . . . ..... .. ... ... .. . ..... . ............ . . . ...... .. . ... 46
2 Pangelompokan Frakai Hasil Fraksinasi Ekstrak Protein Buah Paria . . . . ..... . .. . . . ... .. . . .. . . . .. . .. . .... . . ..... . . .. . .. ... .... .. .... . . . . . .. . .. . . 47
3 Hasil Freeze Drier Buffer Na3P04 50mM . . ... .. ... .. ..... . . . . . .. . . . . . . . .
47
4 Hasil Freeze Drier Fraksi Kolom . . . . .. .. . . ... . ............ . . .... . . . . . ... . . .. 47
5 Hasil Uji-t Pengaruh Buffer dan Pelarut terhadap Proliferasi Alur sel L929 dan KR4... ......... . . . .. . .. ... .. . ... ............... . . . .. . . ... . . 48 6 Analisis Ragam Indeks Penghambatan Proliferasi Ekstrak Protein terhadap Alur sel L929 .. . .. ... ... . . . ...... ... . . ... .. . ...... . .. .. . . . . ... . . . . ... 48
7 Analisis Ragam Indeks Penghambatan Proliferasi Ekstrak Protein terhadap Alur Sel KR4 ...... ......... ... ... ... ... ............... ............ ... 48 8 Kultivar Paria yang Diuji Aktivitasnya ........ . ................... . .... .... 49
9 Uj:i Aktivitas Ekstrak Protein Paria dengan Alur Sel Menggunakan Microtitter Plate96-well ........................ .......................... ... ... 50
