Lampiran 1. Bagan percobaan pada masing-masing Perlakuan Penelitian di laboratorium. ZPT](3)
ZPT4(1)
ZPT5(3)
ZPT2(1)
ZPT1(2)
ZPT4(3)
ZPT6(2)
ZPT2(3)
ZPTl(l)
ZPT8(2)
ZPT3(1)
ZPT6(3)
ZPT5(3)
S3A3(2)
ZPT6(1)
ZPT9(2)
ZPT7(3)
ZPT3(2)
ZPT3(3)
ZPT8(1)
ZPT9(1)
ZPT7(2)
ZPT8(1)
ZPT5(2)
ZPT5(1)
ZPT2(2)
ZPT9(3)
ZPT7(I)
ZPT4(2)
ZPT8(3)
Keterangan : 1,2 dan 3
= Ulangan
ZPTl,...dst = Formulasi perlakuan
29
Lampiran 2. Pembuatan Larutan Stok Media MS
L
Larutan stok A untuk persenyawaan N H 4 N O 3
(diperbanyak
50 kali
konsentrasi) Larutan stok A ini dibuat dengan cara menimbang 83.5 gram NH4NO3 kemudian dilarutkan ke dalam aquades 700 ml yang ditempatkan pada gelas piala 1000 ml. Kemudian diaduk sampai volumenya
menjadi
1000
larut, setelah larut bam dicukupkan
ml dengan
penambahan
aquades,
selanjutnya
dipindahkan ke erlenmeyer dan diberi label " Stok A " dan untuk membuat 1 liter media dibutuhkan 20 ml lamtan stok ini.
2.
Larutan stok B untuk persenyawaan KNO3 (diperbanyak 50 kali konsentrasi) Caranya adalah dengan menimbang 95 gram KNO3, kemudian dilarutkan ke
dalam aquades 700 ml yang ditempatkan pada gelas piala 1000 ml. Kemudian di aduk sampai larut, setelah lamt bam dicukupkan volumenya menjadi 1000 ml dengan penambahan aquades, kemudian dipindahkan kedalam erlemeyer yang bervolume 1000 ml dan diberi label "Stok B " dan untuk membuat 1 liter media dibutuhkan 20 ml larutan stok ini.
3. Larutan Stok C imtuk persenyawaan CaCl2.2H20 (diperbanyak 100 kali konsentrasi) Caranya adalah dengan menimbang 44 gram CaCl2.2H20, kemudian dilamtkan ke dalam aquades 700 ml yang di tempatkan pada gelas piala 1000 ml. Kemudian diaduk sampai lamt, setelah lamt baru dicukupkan volumenya menjadi 1000 ml dengan
penambahan aquades, kemudian dipindahkan ke dalam
erlenmeyer yang bervolume 1000 ml dan diberi label "Stok C" dan untuk membuat 1 leter media dibutuhkan 10 ml larutan stok ini.
30
4. Larutan stok D untuk persenyawaan MgS047H20 dan KH2PO4 (diperbanyak 100 kali konsentrasi) Caranya adalah dengan menimbang 37 gram MgS04.7H20 dan 17 gram KH2PO4, Kemudian masing-masing senyawa di atas larutan secara terpisah yaitu
masing-masing dilarutkan ke dalam 350 ml aquades. Kemudian setelah larut kedua larutan dimasukkan kedalam gelas piala 1000 ml. Kemudian diaduk sampai rata, setelah itu baru di cukupkan volumenya menjadi
1000 ml dengan
penambahan aquades, kemudian di pindahkan
erlenmeyer
kedalam
yang
bervolume 1000 ml dan di beli label " Stok D " dan untuk membuat 1 liter media dibutuhkjui 10 ml larutan stok ini.
5. Larutan Stok E untuk persenyawaan FeS04.7H20 Dan NaEDTA (diperbanyak 200 kali konsentrasi) Caranya dengan menimbang 5.57 gram FeS04.7Il2C Jan 7.45 gram NaEDTA. Kedua bahan tersebut dilarutkan secara terpisah dalam aquades 650 ml. Larutan Na2EDTA dipanaskan hingga suhu 40-60° C selama beberapa menit. Kemudian ditambahkan larutan FeS04.7H20, diaduk hingga rata, kemudian dibiarkan sampai suhu larutan kembali ke suhu kamar. Setelah dingin larutan dimasukkan kedalam erlenmeyer 1000 ml, lalu di cukupkan volumenya menjadi 1000 ml dengan penambahan aquades. Terakhir wadah larutan stok ini dilapisi dengan aluminium foil dan di beri label "Stok E" dan untuk membuat 1 liter media dibutuhkan 5 ml larutan stok ini.
31
6. Larutan Stok F yang terdiri dari unsur mikro. Pembuatan larutan stok ini dibuat ke dalam kepekatan 200 kali konsentrasi akhir media. Adapun unsur-unsur adalah: Senyawa
Jumlah yang ditimbang (mg)
MnS04.H20
3380,0
ZnS04.7HO
1720,0
H3BO3
1240,0
Kl
166,0
Na2Mo04.2h20
50,0
C0CL6H2O
5,0
CuS04.5h20
5,0
Bahan dimasukkan satu persatu kedalam gelas piala 1000 ml yang beri 700 ml aquades. Setiap kali memasukan dilakukan pengadukan sampai setiap senyawa tersebut betul-betul larut. Setelah semua bahan larut, malca volume dicukupkan
menjadi
1000
ml
dengan
penambahan
aquades. Kemudian
dipindalikan ke dalam erlenmeyer dan diberi label "Stok F" dan untuk membuat 1 liter media dibutuhkan 1 ml larutan stok ini.
32
7.
Larutan Stok G merupakan larutan stokmvitamin (diperbanyak 1000 kali konsentrasi)
Adapun bahan-bahan yang digunakan adalah Bahan
Jumlah yang ditimbang
Thiamine
10,0
Nicotini Acid
50,0
Pyridoxin
50,0
Glycine
200,0
Caranya adalah menimbang seluruh bahan sesuai dengan jumlah di atas, kemudian semua bahan dimasukkan ke dalam gelas piala yang berisi aquades 25 ml, kemudian diaduk hingga semua bahan benar-benar larut, setelah itu dicukupkan volumenya hingga 100 ml dengan penambahan aquades.
Pembuatan larutan stok ZPT a. Pembuatan larutan stok Kinetin 1. Ditimbang kinetin 100 mg dan dituang ke dalam gelas piala 100 ml yang berisi 70 ml aquades. 2. Sambil diaduk-aduk, larutan dalam gelas piala ditetesi dengan larutan HCl 1 N kemudian dipanaskan sebentar hingga benar-benar larut (menjadi jemih) 3. Setelah larut dan dingin, larutan dipindahkan kedalam labu takar 100 ml untuk ditepatkan volimienya menjadi 100 ml dengan menambahkan aquades.
33
4. Larutan yang telah jadi dipindahkan ke dalam botol simpan 100 ml kemudian ditutup rapat dan diberi label. Setelah itu, labu takar disimpan di dalam lemari es. Bila 1 ml stok ini ditambahkan dalam pembuatan 1 liter media maka akan memberi perlakuan kinetin Ippm.
b. Pembuatan larutan stok Indole Acetic Acid (lAA) 1. Ditimbang balian sebanyak 100 mg kemudian dituangkan kedalam gelas piala 100 ml yang berisi 70 ml aquades. 2. Larutan ini diaduk-aduk sambil diteteskan sedikit larutan NaOH 1 N hingga bahan benar-benar tercampur larut. Setelah larut merata maka larutan
ini dipindahkan
kedalam
labu
takar
100
ml
dengan
menambahkan aquades. 3. Lamtan yang telah ditempatkan volumenya itu dipindalikan ke dalam elenmeyer 100 ml kemudian ditutup rapat dan diberi label. Setelah itu elenmeyer disimpan dalam lemari es. 4. Kebutuhan lamtan stok zat pengatur tumbuh untuk membuat 1 liter media tergantung konsentrasi zat pengatur tumbuh yang digunakan. Apabila zat pengatur tumbuh atau auksin yang digunakan 0,5 ppm maka dibutuhkan 0,5 ml lamtan stok, bila 1 ppm maka dibutuhkan 1 ml larutan stok, dan setemsnya. Sebagai pengganti lamtan NaOH dapat digunakan bahan pelamt alkohol 40 % atau dengan pemanasan larutan awal (larutan sebelum diterakan dalam labu takar) selama beberapa menit sehingga bahan benar-benar larut (jemih).
impiian 3. Skema pembuatan media MS
Stok A
A
StokB StokC
StokE StokF
/ 300 cc \
StokD Stok Kinetin
StokG Stok l A A
Ditambah aquades hingga volume mencapai 900 ml
Diukur pH 5,7-5,8 (bila pH < 5,7 ditambahkan KOH, tetapi bila pH > ditambahkan HCL)
Ditambah aquades hingga volume mencapai 1.000 ml
Agar-agar dimasukkan ke dalam larutan kemudian dipanaskan hingga larut sambil diaduk-aduk dengan pengaduk kaca
Larutan dituang ke dalam botol kultur ±20 ml
Botol ditutup dengan aluminium foil kemudian disterilisasi dan diinkubasi selama 1 minggu
35
Lampiran 4. Tabel Analisis Sidik Ragam.
4a. Analisis sidik ragam l A A dan Kinetin terhadap saat muncul tunas. F-tab JK F-hit RJT SK DB 370,524 3,33 * 46,316 2,51 Perlakuan 8 250,218 18 13,901 Galat 620,742 26 Total K K . = 14,11 %
4b. Analisis sidik ragam l A A dan Kinetin terhadap saat muncul akar. F-hit F-tab DB JK KT SK Perlakuan 98,448 12,306 16,26 * 2,51 8 13,625 0,757 Galat 18 112,072 26 Total K K = 10,51 %
4c. Analisis sidik ragam l A A dan Kinetin terhadap pertambahan jumlah ruas. JK F-hit DB KT F-tab SK 8 2,374 2,04 Perlakuan 0,297 2,51 Galat 18 2,616 0,145 4,989 Total 26 K K = 18,60%
4d. Analisis sidik ragam l A A dan Kinetin terhadap persentase keberhasilan eksplan tumbuh. SK DB JK Kl F-hit F-tab 1574,074 196,759 1,06"^ 2,51 Perlakuan 8 18 3333,333 185,185 Galat 1 4907,407 Total 26 1 K K = 18,60%
* = signitlcan, ns = non significan
