26. listopadu2014
Prrlka z IgG protilátek proti Toxoplasmagondii Enzyme-Linke d ImmunoSorbentAs say
I t k t r r . r l oi 'ir r i t - l I i . l , i l , ( \i\. l t i l
3) vzorky vlastní vzorek Ťeditl : 50 do Ťedícího roztoku pro vzorky slepévzorky pŤipravenyv koncentraci l:50 kontroly neŤedit á 100 pl, 60 min, 37"C 4) konjugát 5x prom;it 100 pl konjugáfu (neŤedit,užje v pracovníkoncentraci) 30 min, RT (room temperature: pokojová teplota) 5) vyvolání 5x prom;it l00 pl substrátovéhoroztoku (neŤedit,uŽ je v pracovní koncentraci) 15 min' RT, ve tmě (zakqit alobalem) 6) měňení zastaveníreakce:pŤidatl00 pl zastavovacíhoroztoku ELISA reader:měŤitpŤi450 nm
123456 A 1:50
B 1:50
c StdB stdc 1 : 5 0 neied. neied.
A B c 1:100 1:100 1:100
stdB lx
stdc lx
StdD neied.
stdD lx
B c stdB 1:200 1:200 ! x
stdc
A B c stdB 1:400 1:400 1 : 4 0 0 $ x
stdc
stdD
$x
$x
B c StdB 1:800 1:800 16x
stdc
StdD 16x
A 1:200
A 1:800
!,x
16x
stdD !x
ť
a
stdA
stdA
0Ab
0Ab
0Ab 0Px
0Ab 0Px
Když se Ťelcne
metody a nepŤímé druhf dí!:PŤímé
DETEKCE ANTIGENU SPECIFICKOU PROTITATKOU Z hlediska v|astnídetekce antigenu mťržeme imunochemickémetody rozdělit na metody pÍíméa nepŤímé (Obr. 1).
primárníproti|átka.''''.... ,'1,;
neznacena primární proti|átka
PŤímémetody U pŤímÍchmetod je primární proti. pÍílátka (monok|onální či polyk|onální) mo označenavhodnousondou.V;|běr sondy závisína zvolenéimunochemické metodě.Nejčastějise primárníproti|át. ky kova|entněkonjugujísr znlmi typy (napÍ.F|Tc, TRITO' A|exa fluorochromťr Fluor Dyes, Cy Dyes, Dyomics Dyes, Phycoerythrin, Allophycocyanin),enzym (kŤenováperoxidáza,alkaIickáfosfatáza) či nekovalentně značíko|oidními částicemi(z|ato,!atex).Některémetody vazbu primárníchproti!átek vyžadují na pevny nosič(napŤ.agarÓzovékuličky).PÍímokonjugovanéproti!átkyjsou dostupnépro širokéspektrum antigen v prritokové cyto. a majívyužitízejména s rťrzmetrii.Velkf vfběr fluorochromťr nlmi emisnímispektryvede k narťrstajícíoblibě tzv.multibarevné cytometrie, rťrzné kombinace kde se používají pÍímoznačenfchmonoklonálníchproněkolika tilátek pro simultánníana!1/zu znakriv jednom kroku.
NepŤímé metody
e
NepÍímémetody jsou ve srovnání a|ejes pÍím1|mi sice komp|ikovanější, jich vlhodou je, žemajímnohemnižší mez detekce.V prvnímkrokuje na studovan1|materiálaplikovánaneznačená primárníprotiIátka,která je specifická protizkoumanému antigenu.Ve druhémkrokuje tato neznačenáprimární protilátkadetekována(barvena)pomocí značenésekundární protilátky.Sekun. dárníproti!átka,samozŤejměznačená proti vhodnousondou,je pŤipravena fragmoleku|e(či|épeprotijednot|iv.|m |aimunog|obulinu mentťrm čiÍetězctjm) kterébylo zdrojem boratorníhozvíŤete, primárníproti|átky.NapÍíkladpro imunochemickoudetekciantigenupomocí myšímonok|onálníproti|átky(specifická primárníproti!átka)lze použítGoat-anti.Mouse/H RP (kozísekundárníprotilátku značenoukÍenovouperoxidázou). Enzymatickoureakci kÍenovéperoxi. dázy v místěspecifickévazbyprimární protilátkypak sledujeme pomocísubstrát vhodn1|chpro danou analytickou metodu.
pr o ti|átka sekundár ní
antigen .....
, ,,..,,..,,....:..,..........
obr. |: PÍíméa nepÍíméimunochemické metody je používání pro. pÍípadem ZvIáštním derivátembiotinu. tilátekznačen1fch BiotinylovanéprotiIátkyjsou jak primární,tak i sekundární.Vlastnídetekce biotiny|ovanfchproti!átekje prováděna ažv následném,tedy tÍetímkroku,pomocísond vázanfch na streptavidin, popÍ.avidin(tzv.tÍístupřováSABC či ABC metoda,Obr. 2). Sondy jsou, stej-
streptavidin
vyvinu|aÍadafirem, kterése zab1|vají produkcíproti|áteka imunochemick;|ch reagencií,rťrzné kity'jenžvám šetÍí čas a umožnídetekovatspo|eh|ivěi antigesměny s nízkouexpresí.Nejnovějším rem ve vÍvojitěchtokit je tzv.,,polymer labeling..techno|ogie(obr. 3), která vyuŽíváprincipu ABc, resp. SABC meinou.f(streptavidinotody,ale biotin-avid pr o ti|átka: sekundár ní
znitt:elty
FI T C
biotinyIovaná s e k u n d á rní proti|átka''...''. p ri m á rn.. í ... ...... proti|átka
a n t i g e n . . .......... . .i obr. 2: TÍístupřová metoda pŤípadech, ně jako ve q|šezmiĎovan1|ch fluorochromy'enzymy nejčastějirťrzné či koloidníčástice.Metoda tak využívá vysokoafinitnívazby biotin.streptavidin (avidin)k zesílení signálu.Neu.|hodou ABc čisABc metod je poměrně vysoké nespecificképozadí,zpťrsobené vazbou streptavidinu/avidinu na endogenníbiotin.Toto nespecificképozadí je možnésnížitpomocítzv.b|okovacích činide!. V1fhodounepŤímfchmetod je také to, ževětšinareagenciímá širšívyužttí- jednu značenousekundárníproti!átku(napÍ.FlTGGoat anti Mouse využít k detekciněko|ika lgG)je možné proti!átekprimárních(v tomto piípadě myšíchlgG).Vzhledemk tomutofaktu
neznacena ' : r; : , ' pnmarnr proTilaTKa
antigen ................. ..................: Obr. 3: Polymer labeling u.f)mristekje zde nahrazenpolymerem, kter1|nereagujenespecifickys žádnou složkoustudovanéhomateriálu.Tímje dosaženovysokécit|ivostidetekce s mL nimálnímnespecifickfmpozadím.
Široké wužití
Ap|ikace protilátekse jižnet1fkápouze metod jako napÍ. imunochemick1fch fluorescenční mikimunohistochemie, pr ELlsA, toková cytometrie, roskopie, i v Íaale protiIátkyjsou dnes využívány (b|okování rrizn1fch dě funkčníchstudií receptorťr a ligand , indukce apoptÓzy apod.)i v microarraytechnologiích (včetněkonformačních studií). Na závěr nesmímeopomenoutskutečnost,že mnoho proti|átek(zejménamojako schvá|enokloná!ních) se up|atĎuje ná terapeutikačiinvivo diagnostikav ce|é Íaděonkologick!'chonemocněníči léčbě(napÍ.Herceptin, imunosupresivní Rituximab,Campath-1H apod.).
Biotin - (strept)avidin v kaŽdé Živébufice;je koenzymempro karboxy|ázy Biotin = vitaminH, pÍítomnf - napi.pyruvátkarboxy|ázu, trans.karboxy|ázu, Coz do substrátu) (inkorporace tkáníjátra, Živočišnlch z mají biotinu obsah Největší aj. karboxy|ázu acetylCoA ledvinya slinivka. se taképŤirozeně Existují nebodroŽdí. Vysokyobsahbiotinumá napÍ.m|éko tytomohoumítna proteiny(napÍ. v mitochondriích); biotiny|ované vyskytující s avidinemnapÍ.pii pouŽití pťi konjugovanlch pozadí enzymťr svědomívysoké imunohistochemil. proteinumnohobiotinťt. (proti|átek, proteinťr |ektin..)je na 1 mo|eku|e Pri biotinytaci s značkyaj.,viz dále)konjugované Protopii ap|ikacienzymu(čifluorescenční protein a na biotiny|ovany vazbě k mnohonásobné dojde avidinem/ streptavidinem metody). detekční citlivosti signá|u(tj.zvÝšení zesí|ení proteinymohoubyt tj.biotiny|ované absorbanci, Pri 28o nm má minimá|ní stanovoványstejnějakonebiotiny|ované. spektrofotometricky vyskytujese iv p vodněizolovanyzvaječného bí|ku, Avidin - bazickyglykoprotein avidinii, produkován SťrepÍomyces bakterií jinlch ptačích tkáních.Streptavidin Stejnějakoavidinmá 4 vazebnámístapro biotin.Avidinči neníglykosy|ován. bft konjugováns enzymem(častoperoxidáza,a|ka|ickáfosfatáza), mťrŽe streptavidin zlata. koloidního nebos částicí ku|ičkou magnetickou chromoforem, f|uoroforem, (ko|ony se streptavidin m Že bft takéimobi|izován Avidinnebostreptavidin agarÓzou). interakceprotein-|igand známánekovalentní Interakcebiotin.avidinje nejsi|nější vetmi vysoká).Vazba se vytvoií Kn 1013M-',tj.stá|e (Kn> 1015M.1;prostreptavidin organickym rozpětípH (2-13),tep|oty, ve|mirych|ea odoláváširokému p sobeníproteázv po ani se nerozpadá aj. Komp|exbiotin.avidin rozpouštěd|ťrm traktu. trávicím kterí díkypokus m na potkanech, se piiš|o avidin-biotin Na existencisi|néinterakce Príčinou dermamtitidu. bí|kuvyvíje|i pridietěs ve|kfmobsahemvaječného bí|ku vitaminuH = biotinu.Avidinz vaječného nedostatek by|ama|nutrice, dermatitidy s biotinema tentokomp|exnemoh|bft ve stievěvstÍebáván. vytváie|komp|exy značeníAb, lektinťr Vfhody systémubiotin - (strept)avidinoproti pÍimému nebo sond . zvyšenácitlivost o jedinilenzymovykonjugátm Že bytpoužitprodetekcimnohar znfch proti|átek / sond / |ektinťr biotinylovanych Použitísystémubiotin - (strept)avidin prťrtoková afinitní / imunoblot; afinob|ot cytometrie; EL|SA/ R|A;imunohistochemie; genetické screeninghybridom; ... mapování; in situhybridizace; chromatografie;
Ftjuo šŮ| LAB
&rbotrrlr
í
\ \_-)
luuÓ.lbd .lntigun
-
+\|,á T ?ltŇ
Priurry :lotrbody
avidinznačenfenzymem
Frgxrm *O: BRAB , /
v
)
\.
ffixx: +\|/á --"*)?'$
Inrnuibilirr'd An(igen
avidinovfm stek- kontaktdvou biotinylovanych komponent (naobouobrázcíchje pro pÍehlednost vyznaěenavŽdypouzejednamo|eku|a biotinu je biotinovfchzbytk na proteinu protilátky/ enzymu;ve skutečnosti na 1 mo|eku|u navázánoVíce,tímje zpťtsobena amp|ifikace signáIu)
Parazitární nemoci častéhov;fskytu (kromě stňevníchinfekcí) - postupy pro terénnípraxi.
ToxoPLAsMÓZA
(privodce Toxoplasma gondi)
protozoárníinfekcí.Jejímp vodcem je stŤevníkokcidie V ČR je toxop\asmÓzanejrozšíŤenější koček, schopná nakazit rizné druhy savcti, vjejichž tkáních (svalovina, mozková tkáĎ) toxoplasmy tvoŤímikroskopická loŽiska (tkáriovécysty). K nákaze člověka dochéuípozŤením infekčníchstádií parazita nebo transplacentárnímpŤenosemtoxoplasem z matky na plod (kongenitálnítoxoplasmÓza). Zdrojem infekce m Že byt i infikovany orgán pŤi transplantaci. Alimentární cestou se člověk m že nakazit po pozŤení ( 1) toxoplasmovych oocyst, které ulpěly na rukou či zelenině znečištěné stolicí nakaŽenych koček, (2) toxoplasmami Z tkáĎovlch cyst v nedostatečně tepelně upravenémmase nakaženého zvíŤete. U imunokompetentníchosob je nejčastější uzlinová forma. Pokud není alterován celkovy je nutná u akutníchočníchforem,pŤipostiŽeníCNS apod. stav.tak se neléčí. Léčba Toxoplasmová meningoencefalitida patŤíu osob HIV/AIDS mezi dvě rychleji smrtící oportunníinfekce (spolu S pneumocystovou pneumonií).Tito pacienti musí blt léčenina Vysoce specializovanych infektologick1fch pracovištích (AIDS centra Praha Bulovka, regionálnícentra:Brno, ČeskéBudějovice,Hradec Králové,ostrava,P|zeťl'Ústí nad Labem). Toxoplasmová infekce se v naprostévětšině pŤípadridiagnostikuje prtikazem specifick;fch protilátek V krevním séru. Pro vyšetŤeníse odebírá 3-5 ml sráŽlivé krve. Zák|adním vyšetŤením se zjišťuje,zda je pacient toxoplasmami nakaŽen a je-li pravděpodobné,Že se nachází v akutním stádiu infekce. Jako základni metoda se pouŽivá komplement-fixační reakce (KFR' vazba komplementu),kterou se stanovujícelkovéprotilátky. Titr l :32 a vyšší signalizuje moŽnou akutní infekci. Doplřující vyšetŤení(imunoenzymovétesty ELISA, ISAGA), která rozlišujíjednotlivétŤídyspecifickych protilátek, IgG, IgM a IgA, zpŤesĎují určenífáze infekce. Pro akutní infekci svědčí vysoké titry IgM a IgA. Yyznamné je preventivní vyšetŤovánígravidních Žen. Protilátky by měly byt vyšetŤenyco nejdŤívepo je kromě stanovenícelkov;ich protilátek (KFR) i potvrzenítěhotenstvi.Základním vyšetŤením vyšetŤení IgM. Je.li na zaěátku těhotenstvíženanegativnínebo jsou-li pŤítomnyprotilátky IgM, je nutnévyšetŤení opakovat. PŤi vzestupu IgM a IgA během gravidity je nutnévyšetŤení a sledováni na specializovanémpracovišti(gynekologicko.porodnickém, infektologickém), kde je pŤípadnězvo|enai léčba. Po proběhléakutní toxoplasmÓze (léčené í bez léčby)celkové protilátky a protilátky IgG dlouhodobě (i léta)v nízkychtitrech pŤetrvávají. Lékem volby je kombinace pyrimethaminu (Daraprim) a sulfadiazinu s leukovorinem, u oční toxoplasmÓzy lze použítclindamycin' kteqi dobŤeproniká do oka. Pokud je nutná léčbagravidní Ženy,je lékemvolby spiramycin (Rovamycin), kten.ije také podáván pŤialergii na sulfonamidy. ošetŤovatelskápéče u toxoplasmové meningoencefalitidy záIeŽí na stavu vědomí a eventuelníchloŽiskovych pŤiznacíchu imunosuprimovanéosoby. U osob HIV/AIDS, které berou pravidelně chemoprofulaxi(kortimoxazol,pyrimetamin,klaritromycin, dapson aj.) se toto orgánovépostiŽenínevyskyuje. PrognÓza: dobrá, pokud nejde o vertikální pŤenosa septickf prriběh infekce u novorozence.U mozkovétoxoplasmÓzyje pŤivčasnédiagnosticea léčbětaképoměrně ptizntvá. nemoci ':asteho v}iskytu. Parazitárnr Jine uŽitÍ než pro Vlastní potiebu není dovoleno.
noporučene PosLupy' P!o'e}:t M3 ČP:pra..ovan7 ČLs .lEP:. náVštěvnÍt:u www stránel: ČLs.]EF,ihttp://wwN..:1s..::/dp.
Strana
2
Prevence: mytí rukou (zvlaště po manipulaci s kot'aty), dostatečnátepelná riprava masitych protilátek proti T.gondii pŤedplánovanym těhotenstvímnebo vjeho pokrmťraj. VyšetŤení ranémobdobí. Profesionalita mt e bÍ vzácné pŤíznána.pokud byla prokézána akutní primoinfekce a splněnakriteria stanovenápracovnímlékaŤstvím. 40 % Vzhledem k zjištěni,že se v ČR setkalos toxoplasmovouinfekcí(do 40 let věku) téměŤ *zdravych,, osob, tedy nevyjadŤujepouze vyše specifickych protilátkovych vyšetŤovanych hladin kriteria diagnostickáani prognostická. LARVÁLNÍ
ToxoKAnÓza
(privodce Toxocara canis, Toxocara catí)
tkářovou helmintÓzou v Čn. Jejími privodci jsou Laruá|ní toxokarÓza je nejrozšíŤenejší stŤevníškrkavky psti a koček, v CR dosti hojné. Clověk Se nakazi po polknutí vajíček škrkavek,která psi nebo kočky vylučujíse stolicí.Nákaza proto častějipostihuje děti nebo ženy,kterépŤi hŤenebo pŤi práci pÍicházejído styku s infikovanym substrátem(písek' p da na zahrádkách, pŤírodnívodní zďroje), a to zejména ve venkovsklch lokalitách, kde odčervovánípsri a zvláštěkočekneb;ivá běŽně prováděno. Po pozÍenise ve stŤevěčlověkaz vajíčekuvolní larvy, kterépronikají stŤevnístěnou a migrují,někdy do vnitŤníchorgán ' kde onemocnění závisi na stupni poškozeníorgán ' kterymi larvy migrují. dlouhodobě pŤeŽívají. Za typicképrojevy infekce jsou povaŽovány formy očnía viscerální. Viscerální toxokarÓza byvá provázena celkovou ťrnavou,nevolností,hepatomegalií , vzácně teplotou, laboratorně eozinofílií,vysokou hladinou celkov;i,chprotiláteka specifick1ichIgG' někdy zvyšenímAST. Diagnostika se opirá kromě očníhoná|ezu (u očníchforem) o pr kaz specifick1ich sérovych protilátek proti antigen m produkovanym larvami obou druhri škrkavek. Diagnosticky vyznam má pŤedevšímstanovení vysoké hladiny IgG V testu ELISA. Vzhledem k dlouhodobémupÍeživánílarev i protilátková odpověď pŤetrváváŤaduměsícri i let. odlišení akutnía chronickénákazyje proto značněobtíŽné. pŤedevšímderiváty benzimidazo|u, albendazol (Zente|) a tiabendazol Lékem volby "jsou (Mintezol, v CR není registrován), dále dietylkarbamazin. Léčba,zvláště očníchforem. je dlouhodobějšíapatŤina specializovaná očnía infektologická pracoviště. PrognÓza je dobrá, klinické pŤíznakypo léčběvymizi, protilátková odpověď (zvyšenéhladiny specifickfch protilátek) pŤetrváváaž|étapo ukončeníléčby. Prevence: odčervování psti a koček, kontroly vzorkťr sypkych substrátri na dětskych (zvláštěvelhich měst). pískovištích protilátek proti tétoinfekci u dětís hypereosinofilií,neprospíváním, VyšetŤování zvětšenymi uzlinami a pozitivníepidemiologickouanamnézou. MALÁRIE
(privo dce Plasmodium falc ip ar um, Pl.vivax, PI.ovale, P I.malariae)
Malárie je nejčastějiimportovanou parazitárníinfekcí.Tropickáma|árie (Pl'falciparum) mťrŽe mít smrtelny prriběh' rimrtí ale mriže zprisobit i tŤídennímalárie (Pl'vivax), donedávna povaŽovaná za naprostobenigní. plasmodií.Inkubační doba Člověkse nakazíběhem sánísamičekkomár , kteréjsou pŤenašeči závtsi na druhu plasmodia (od několika dn pŤi nákaze Pl.falciparum,, po několik tydnri aŽ měsícripŤinákaze ostatnímidruhy). K infekci mriŽedojíti transfuzíinfikovanékrve. Malaricky záchvat, ktery vznlkájako drisledekrozpadu erytrocyttiinfikovanych plasmodii, se vyznačujeprudk;fm vzestupem teploty, zvláště pŤiprvnim záchvatu u neimunní osoby. Bfvá
Strana
3
T0It0PlAsMÚzA o1|EmoGilĚili Privodcem onemocnění je paraziticky prvok Toxoplasma gondii, vyskytující se ve tŤech formách: tachyzoiti, tkářové cysty a oocysty. PŤenos se děje primárně infikovanou potravou (nedostatečnětepelně upravenémaso s tkářovlmi cystami), sekundárně kontaminovanou potravou (oocysty) nebo kontaktem . znečistěnlmi prsty či pŤedměty(oocysty).
Klin ickzicha ra ktcristika: o Získanátoxoplasm zaz U imunokompetentních jedincri probíhá akutní toxoplasmÓza subklinicky nebo se projevuje subfebrilií, navou, lymfadenopatií, obvykle bez závaŽnějšíchpŤíznakŮa následkŮ.
Jiné formy _ postiženíCNS, jaterniho parerrchymq karďovaslarlámího bulbu apmiltu, ďrrího q/piclctm (charakterizovano oftalmologrchjm nálezem). U imunokompromitovanj'ch jedincri (napŤ. HIV pozitivní pacienti) mriže probíhat generalízovaně, postihovat všechny orgány, včetně život ohroŽující encefalitidy. o Yrozená toxoplasm zaz Jde o pŤenosnákazy z matky na plod jako následek primoinfekce matky krátce pŤed otěhotněnímnebo v graviditě. Mriže vést k abortu, porodu mrtvého dítěte nebo porodu dítěte s niznlm stupněm pďkození (kalcifikace mozku, hydrocefalus, poruchy zraht, ovlivnění duševníhovjvoje).
l|lAGl|osTl KA o 1|Eil oGil ĚilÍ Diagnostika onemocněníje založenana klinickém obrazu, epidemiologickéanamnézea laboratorních testech. PŤímádetekce parazita není dosfupná pro rutinní diagnostiku, vhodnou možnosti prtkazu infekce je stanovení specifickfch protilátek tŤíd IgA, IgE, IgM a IgG v sérunebo plazmě metodou ELISA, pŤípadně konfirmační metodou WESTERN BLOT. ToxoplasmÓza je široce rozšíŤena po celém světě, v ČR jsou zjištěny protilátky zhruba u 25.40% dospělépopulace. Kinetika tvorby protilátckv prriběhuinfekce Toxoplasmegondii
Diagnostickf qfznam jednotlivych tffd protilátek: Protilátlcy tffd I8A' IgE a IgM jsou markery akutníinfekce. IgM protilátky je metoda velmi citlivá, nevyhodou je však dlouhodobépŤetrvávríní pozitivity, k poklesu dochrízíobvykle za 9-l2 měsícriod nitkazy. IgA protilátky pŤetrvávají obvykle 6-9 měsícri od nákazy. stanovení protilátek tŤídy IgE je velmi speciťrckou metodou k určení akutní toxoplasmÓzy,pozitivita u většiny pacientri nepňetrvávádélenež6 měsíc . IgG protilátky pŤetrvávajíléta,zajišťujíochranu pŤednovouinfekcí.
-l8E -lsc -lsM
Pro diagnostiku toxoplasm ry je vhodná kombinace stanoveníprotilátek tríd IgA' IgE' IgM a IgG včetnětestu avidity.
so uPRAUYTESr-UilEpno lllAGl{osil[U T0l(oplASiloUY \\,cstet.lt ItIrlÍ s()lll)|.:l\''\'
EIA Toxoplasma I
BLOT Toxoplasma IgA BLOT Toxoplasma IgG BLOT Toxoplasma IgM
EIA ToxoplasmaIsE EIA Toxoplasma I EIA Toxoplasma IgM BLOT Toxoplasma I BLOT Toxonlasma I BLOT Toxoplasma I
Soupravy s vysokou citlivostí a specifitou jsou určenyke konfirmaci ELISA qisledkrl.
l. l .lS,\ solrl)l'A\'\'
EIA Toxoplasma IgA EIA Toxoplasma IgE EIA Toxoplasma IgM Capture imunoenzymatickésoupravy jsou určeny pro detekci protilátek tŤídIgA, IgE a IgM (vnitŤní povrch jamek je potažen protilátkou proti lidskému imunoglobulinu IgA, IgE nebo IgM, docházi k vazbě proporcionálního množstvívšech protilátek pŤíslušnétŤídy ze vzorku, včetně specifickych antitoxoplasmovych, jsou-li ve vzorku pŤítomny, v následujícíchkrocíchse označí tracerem (antigen T. gondii + monoklonální protilátka proti povrchovému proteinu p30 I. gondii značenákŤenovouperoxidázou) a detekují se barevnoureakcís jednosložkovymsubstrátem). EIA Toxoplasma IgG Souprava je určena pro detekci IgG protilátek metodou ELISA, typ sandwich, tj. pevná fáze protilátka. Možnost antigen - protilátka - značená, vyhodnocenív!'sledkri v IU/ml. Souprava umožĎujestanoveníavidity protilátek (vazebná místa mezi protilátkami tŤídy IgG a antigenem mají z počátku nákazy slabší aviditu (pevnost specifické vazby) než v chronickém období.V pruběhuonemocněníimunitníodpověd' vyzrtvá a avidita narustá).
Antigeny Toxoplasma gondii jsou elektroforeticky rozděleny, poté pŤeneseny na nitrocelulÓzovou membránu (ednotlivé WB stripy).Jednotlivéstripy jsou inkubovány s vyšetŤovanym vzorkem, pŤičemž docházi k vazbě specifickych protilátek pŤítomnych ve vzorku na pŤíslušné antigennílinie. Po promytí j sou stripy dále inkubovány s konjugátem (SwAHu/IgG Px). Yizualizace je provedena inkubací Se substrátovym roztokem obsahujícím diaminobenzidin (DAB) jako chromogen. Po vybarvení jsou jednotlivé stripy vysušeny a vyhodnoceny pomocí pŤiloŽenéšablony,popŤípadě za pouŽitívyhodnocovacíhoprogramu. Za specificky ie považován antigen o M. : 30 kDa (P30) . Soupravy jsou schváleny NRL SZU Praha.
.|.|.,S.l.-|,I (.Iilric:rI l ) i : r g r l r r s Í i cs s; l. r l | s. r . ( ) . N|.,. K r ižilir lr lt (r Í l 6 1 2 l X f l fr n o \l \\'\l .Ít's|-|i ||('.(.l | . , - l t t i:|l : Í e s t - |ni c r r t Í c s Í - | i n e . c z 'l't'1./lirr: +J2l) 5-tl 2{3 J90 ( ) r | l r r l r . r ri cr r I r l :+ J 2 | ) 5 J | 2 J Í l J | | S p o l t ' ( ' n o s l . i e c c r ' l i l i k o r i i r r i tt l l c l S ( ) 9 ( X ) t: 2 ( X X )
E|A Toxop|asmalgG . aviditnítest V z o r k y p a c i e n t uA - M
0o
Euo s .lO
GCHIJ
pro toxoplasmÓzu,
časov odstupv měs|clch(2 . 1,|)od prvnlhoodběru(0)
