Jurnal Ilmu Kehutanan Journal of Forest Science https://jurnal.ugm.ac.id/jikfkt
Karyomorfologi dan Jumlah Kromosom Empat Grup Gyrinops versteegii (Gilg.) Domke. di Lombok Karyomorphology and Chromosome Number of Four Groups of Gyrinops versteegii (Gilg.) Domke. in Lombok Widya Iswantari*, Tri Mulyaningsih, & Aida Muspiah Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mataram. Jl. Majapahit No. 62, Mataram 83125 *Email:
[email protected]
CATATAN PENELITIAN Riwayat naskah: Naskah masuk (received): 14 Januari 2017 Diterima (accepted): 7 April 2017
KEYWORDS chromosome karyotipe eaglewood Gyrinops versteegii Lombok
ABSTRACT Lombok has four groups of Gyrinops versteegii i.e. Pantai, Buaya, Madu, and Beringin group. Studies of karyomorphology and the number of chromosomes could be very useful for taxonomy and plant breeding. In this study, the preparation used a root tip squash method. The results obtained from this study: groups of G. versteegii had similar chromosome number (n = 9), and similar metacentric chromosomes. Therefore, the karyotype formula of the four groups of G. versteegii was 2n = 18m. Each group of G. versteegii showed a variation of chromosome size: Pantai group has a size of 0.53 ìm which is the longest than the other three groups: Buaya (0.27 ìm), Madu (0.21 ìm), and Beringin (0.18 ìm).
INTISARI KATA KUNCI kromosom karyotipe gaharu Gyrinops versteegii Lombok
Lombok memiliki empat grup Gyrinops versteegii yang merupakan penghasil gaharu, yaitu grup Pantai, Buaya, Madu, dan Beringin. Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji karyotipe dan jumlah kromosom empat grup G. versteegii yang bermanfaat dalam taksonomi dan program pemuliaan. Dalam penelitian ini pembuatan preparat kromosom ujung akar menggunakan metode squash. Hasil yang diperoleh dari penelitian ini adalah semua grup G.versteegii memiliki jumlah kromosom yang sama (n = 9) dan bentuk kromosom yang sama, yaitu berbentuk metasentrik dan memiliki pola karyotipe yang sama (2n = 18m). Ukuran kromosom setiap grup bervariasi, yaitu grup Pantai memiliki ukuran yang paling panjang yaitu 0,53 µm dari ketiga grup yang lain: Buaya (0,27 µm), Madu (0,21 µm), dan Beringin (0,18 µm).
205
Jurnal Ilmu Kehutanan Volume 10 No. 2 - Juli-September 2016
© Jurnal Ilmu Kehutanan-All rights reserved
Pendahuluan
tanaman. Penelitian tentang kromosom gaharu seperti pada genus Aquilaria dan Wikstroemia sudah
Gaharu merupakan salah satu komoditas hasil
banyak dilakukan, namun untuk kromosom genus
hutan bukan kayu (HHBK) yang banyak diperjual-
Gyrinops, khususnya kromosom infraspesifik G.
belikan dalam bentuk bongkahan, chip, gubal, dan
versteegii belum pernah dilakukan. Oleh karena itu,
minyak gaharu. Kadar aromatik resin yang tinggi dan
penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jumlah,
khas menjadikan gaharu banyak dimanfaatkan
ukuran, dan bentuk kromosom serta karyotipe G.
sebagai wewangian dan obat-obatan (Mulyaningsih et
versteegii grup Pantai, Buaya, Beringin, dan Madu.
al. 2014). Hal ini yang menyebabkan harga gubal
Bahan dan Metode
gaharu kian tahun kian menanjak. Saat ini harga gubal gaharu dapat mencapai Rp. 251.000.000/kg (Anonim
Sampel G. versteegii yang berupa biji diambil di
2016). Uji fitokimia daun G. versteegii menunjukkan
Desa Spakek (Lombok Tengah) untuk grup Beringin,
bahwa daunnya mengandung senyawa metabolit
Mataram (Lombok Barat) untuk grup Pantai, Desa
sekunder yang dapat berfungsi sebagai anti radikal
Lembahsari (Lombok Barat) untuk grup Madu dan
bebas atau anti oksidan (Mega 2010).
Desa Menggala (Lombok Utara) untuk grup Buaya.
G. versteegii merupakan salah satu pohon peng-
Sampel ditanam hingga berumur 8 minggu, lalu
hasil gaharu yang tumbuh di Lombok (Mulyaningsih
diambil ujung akarnya. Ujung akar dipotong (0,5 cm)
& Yamada 2008). G. versteegii (Thymelaeaceae)
kemudian dimasukkan ke dalam larutan fiksatif asam
memiliki perawakan perdu-pohon, buahnya berwarna
asetat 45% dan diletakkan pada suhu -20oC selama 15
kuning-jingga dengan bentuk elips. Biji berbentuk
menit. Untuk penyimpanan sampel dalam jangka
bundar telur, bundar-pipih dengan daun elips-
waktu yang lama, sampel tersebut dipindahkan ke
menjorong (lanset) (Hou 1960).
dalam larutan fiksatif asam asetat 25% dan disimpan pada suhu 4o C.
Terdapat 5 grup G. versteegii di Pulau Lombok, yaitu grup Madu, Pantai, Buaya, Beringin, dan Soyun
Hidrolisis dilakukan dengan cara merendam
yang dibedakan berdasarkan fenotip (morfologi,
sampel dalam larutan HCl 10% dan diletakkan di
anatomi, dan fitokimia) serta letak geografis antar
dalam water bath pada suhu 60oC selama 30 menit.
masing-masing grup (Mulyaningsih et al. 2014).
Proses berikutnya adalah rehidrasi. Rehidrasi dilaku-
Fenotip dapat dipengaruhi perpaduan antara genetik
kan dengan cara merendam sampel dalam alkohol
(kromosom)
dapat
bertingkat (90%, 70%, 50%) masing-masing selama 2
berubah karena pengaruh habitat dan ekologi,
menit yang dilanjutkan dengan proses pewarnaan.
sedangkan kromosom bersifat tetap (stabil). Oleh
Pewarnaan dilakukan dengan cara merendam sampel
karena itu, perlu dilakukan penelitian tentang jumlah
dalam aceto-orcein dan diletakkan di dalam water
dan karyotipe kromosom G. versteegii untuk grup
bath pada suhu 50oC selama 30 menit, lalu sampel
Pantai, Buaya, Madu, dan Beringin.
ujung akar di-squash, diamati, dan didokumentasikan
dan
lingkungan.
Morfologi
(Mulyaningsih & Astuti 2015). Terakhir adalah
Individu dalam satu spesies dapat memiliki
pengukuran lengan kromosom menggunakan aplikasi
jumlah kromosom yang sama, namun pada kategori
scion-image dan menentukan bentuk kromosom
infraspesifik dapat terjadi variasi pada ukuran kromosom.
Penelitian
kromosom
akan
berdasarkan rasio lengan (r). Berdasarkan rasio
sangat
lengan (r= q/p) terdapat 4 bentuk kromosom, yaitu
berguna untuk ilmu taksonomi dan pemuliaan 206
Jurnal Ilmu Kehutanan Volume 10 No. 2 - Juli-September 2016
metasentrik: 1,0 µm < r £ 1,7 µm; submetasentrik: 1,7
spesies yang sama (sinonim) dari A. agallocha yaitu A.
µm < r £ 3,0 µm; akrosentrik: 3,0 µm < r £ 7,0 µm dan
malaccensis memiliki jumlah kromosom berbeda,
telosentrik > 7,0 µm (Tabur et al. 2012; Young et al.
yaitu 2n=14 (Suhaila et al. 2013 dalam Suhaila et al.
2012; Mursyidin et al. 2013).
2015). Hal ini berarti, pada tingkat infraspesies dapat terjadi perbedaan jumlah kromosom.
Hasil dan Pembahasan Perbedaan jumlah kromosom antara A. agalocha Hasil
penelitian
ini
menunjukkan
dan
waktu
A.
malaccensis
dapat
disebabkan
karena
pembelahan mitosis aktif G. versteegii adalah pukul
perbedaan letak geografis kedua spesies tersebut.
06.30–07.00 WITA. Setiap tumbuhan memiliki jam
Jumlah kromosom yang berbeda juga terdapat pada
biologis masing-masing untuk melakukan pembelah-
spesies dalam genus yang sama, seperti pada genus
an. Sebagian besar tumbuhan melakukan pembelahan
Thymelaea,
mitosis pada pagi hari (Setyawan & Sutikno 2000).
bulgaria dan T. passerina (Chesmadjiev 1997),
Pembelahan mitosis pada tumbuhan umumnya
memiliki jumlah kromosom 2n=18, sedangkan T.
berlangsung sekitar satu jam, namun dapat juga
hirsuta memiliki jumlah kromosom 2n= 36 (Denelle &
terjadi perubahan tergantung pada jenis tumbuhan-
Puech 1985). Pimelea prostrata memiliki jumlah
nya. Waktu pembelahan mitosis G. versteegii relatif
kromosom 2n = 38 (Dawson & Beuzenberg 2000)
singkat (30 menit) jika dibandingkan dengan
sedangkan P. drupacea memiliki jumlah kromosom
tumbuhan lain seperti Canna edulis yang tahapan
2n=108 (Fedorov 1997). Begitu juga yang terjadi pada
prometafase-nya berlangsung 1 jam (Ningsih 2015),
beberapa spesies dalam genus Vernonia, Vernonia
Dimocarpus melastianus pembelahan mitosis-nya
amigdalina 2n = 36, V. cinerea (2n = 18) sedangkan V.
berlangsung 2 jam (Ningsih 2011), Eleutherina
conferta memiliki jumlah kromosom diploid 2n = 20
americana pembelahan mitosis-nya 1 jam (Mursyidin
(Evans & Bosa 2013). Berdasarkan data tersebut,
2013), Allium ascalonicum waktu pembelahan mitosis
spesies dalam genus yang sama dapat memiliki
-nya 4 jam (Tyas 2014), dan Lycopersicon esculentum
jumlah kromosom yang berbeda yang dapat disebab-
Pimelea,
dan
Vernonia.
Thymelaea
waktu pembelahan mitosis-nya berlangsung lebih dari 4 jam (Darmawan 2010). Jumlah kromosom G. Versteegii untuk grup Pantai, Buaya, Madu, dan Beringin adalah tidak bervariasi dan jumlahnya sama, yaitu 2n = 18 (n = 9) (Gambar 1) dan merupakan kromosom diploid. Data jumlah
kromosom
beberapa
spesies
anggota
Thymelaeaceae adalah n = 9 (Anonim 1974, 2016). Jumlah kromosom G. versteegii ini sama dengan beberapa anggota Thymelaeceae lainnya seperti Kelliera croizatii, K. lyallii (de Lange et al. 2004), Wikstroemia forbesii (Gupta & Gillett 1969), W. conescens (Sandhu & Mann 1988). Namun jumlah kromosom beberapa spesies Thymelaeaceae lainnya juga ada yang berbeda, seperti Aquilaria sinensis dan
Gambar 1. Kromosom G. versteegii: a. grup Pantai; b. Buaya; c. Madu; d. Beringin Figure 1. Chomosom of G. versteegii: a. Pantai; b. Buaya; c. Madu; d. Beringin group
A. agallocha memiliki jumlah kromosom 2n=16 (Debnath et al. 1995; Shen & Zao 2007), sedangkan
207
Jurnal Ilmu Kehutanan Volume 10 No. 2 - Juli-September 2016
kan terjadinya poliploidi karena pada dasarnya setiap
yang ditunjukkan melalui fenotip- fenotip yang
spesies memiliki kromosom dasar yang sama dari
berbeda pada masing-masing grup (Mulyaningsih et
generasi ke generasi (Evans & Bosa 2013). Konsistensi
al. 2014; Setiawati 2013; Setyawan & Sutikno 2000).
ini membuktikan bahwa kromosom merupakan bukti
G. versteegii untuk grup Beringin memiliki
taksonomi yang penting.
morfologi jaringan kayu yang berwarna cream cerah
Bentuk kromosom grup dari G. versteegii, Pantai,
(paling cerah diantara ketiga grup lainnya) sedang-
Buaya, Madu, dan Beringin adalah sama yaitu
kan dari segi anatomi batang mempunyai lapisan
berbentuk metasentrik (Gambar 2.) sehingga didapat-
kambium yang paling tebal dan memiliki aromatik
kan pola karyotipe yang sama, yaitu 2n=18m.
resin yang paling tinggi. Ketiga fenotip tersebut
Tumbuhan umumnya memiliki kromosom berbentuk
merupakan hasil ekspresi dari ukuran lengan kromo-
metasentrik (Tabur et al. 2012; Young et al. 2012;
som grup Beringin yang relatif lebih pendek dari
Yulianti et al. 2006; Suminah et al. 2002).
ketiga grup lainnya. Berbeda dengan grup Pantai yang mempunyai morfologi jaringan kayu berwarna paling
Berdasarkan karyogram (Gambar 2), idiogram
gelap, lapisan kambium paling tipis, dan kandungan
(Gambar 3a-d.) dan Tabel 1 menunjukkan bahwa
aromatik resinnya paling rendah dari ketiga grup yang
kromosom G. versteegii memiliki ukuran kromosom
lain. Ketiga fenotip merupakan hasil ekspresi ukuran
yang kecil (<2µm). Young et al. (2012) menyatakan
lengan kromosom grup Pantai yang relatif lebih
ukuran lengan kromosom = 2,3 µm (kromosom kecil)
panjang dari grup yang lain. Grup Buaya dan Madu
dan = 4,35 µm (kromosom medium). Namun di antara
memiliki morfologi jaringan kayu yang berwarna
ukuran rata-rata kromosom yang kecil dari infra-
cream (grup Madu) dan agak kecoklatan (Buaya)
spesifik G. versteegii adalah bervariasi, yaitu ukuran
sedangkan ketebalan lapisan kambium kedua grup ini
kromosom yang relatif lebih panjang dari kromosom
tidak jauh berbeda. Begitu juga aromatik resin kedua
semua grup yang kecil tersebut adalah grup Pantai
grup ini tidak memiliki perbedaan yang signifikan.
(1,53 µm), selanjutnya Buaya (1,27 µm), Madu (1,21 µm)
Ketiga fenotip inilah yang merupakan hasil ekspresi
dan yang relatif lebih pendek dari grup lainnya adalah
dari perbedaan ukuran lengan kromosom keduanya
Beringin (1,08 µm). Perbedaan ukuran kromosom ini
yang tidak terpaut jauh (Mulyaningsih et al. 2014).
menunjukkan perbedaan kandungan genetik yang
Berdasarkan ketiga fenotip tersebut, ternyata data
dimiliki setiap grup G. versteegii dan perbedaan ini
Gambar 2. Karyogram G. versteegii: a. grup Pantai; b. Buaya; c. Madu; d. Beringin Figure 2. Karyogram of G. versteegii: a. Pantai; b. Buaya; c. Madu; d. Beringin group
208
Jurnal Ilmu Kehutanan Volume 10 No. 2 - Juli-September 2016
(b)
(a)
(d)
Gambar 3. Idiogram G. versteegii grup : Pantai (a), Buaya (b), Madu (c), Beringin (d) Figure 3. Idiogram of G. versteegii: Pantai (a), Buaya (b), Madu (c), Beringin (d) group Tabel 1. Jumlah kromosom, rata-rata ukuran lengan panjang (q), ukuran lengan pendek (p), panjang total (q+p), lengan kromosom, pola karyotipe. dan indeks asimetri intrakromosom (A1) dan indeks asimetri interkromosom (A2). Table 1. The average of number of chromosomes, the size of the long arm (q), the size of the short arm (p), the total arm length(q + p) of chromosome, karyotipe pattern, and intrachromosom asymmetry index (A1) and the interchromosom asymmetry index (A2). Grup
Jumlah Kromosom
Pantai Buaya Madu Beringin
2n=18 2n=18 2n=18 2n=18
Ukuran rata -rata lengan kromosom Pendek Panjang Total (q) (p) (q+p) 0,83 ± 0,35 0,71 ± 0,27 1,53 ± 0,61 0,68 ± 0,10 0,59 ± 0,10 1,27 ± 0,20 0,65 ± 0,13 0,56 ± 0,13 1,21 ± 0,28 0,55 ± 0,07 0,49 ± 0,05 1,03 ± 0,12
Formula Karyotipe
A1
A2
2n=18m 2n=18m 2n=18m 2n=18m
0,14 0,13 0,13 0,10
0,20 0,20 0,32 0,18
ukuran kromosom mengindikasikan warna jaringan
yang sama, berarti tingkat kekerabatan Madu dan
kayu, ketebalan lapisan kambium, dan produksi resin
Buaya paling dekat jika dibandingkan dengan grup
aromatik pada setiap grup, namun ekspresi yang
lainnya. Grup Beringin memiliki nilai A1 relatif lebih
ditunjukkan
rendah dengan selisih cukup jauh dari ketiga grup
berbanding
terbalik
dari
ukuran
kromosom setiap grup.
yang lain, artinya tingkat kekerabatan grup Beringin paling jauh dengan ketiga grup lainnya. Grup Pantai
Nilai indeks asimetri intrakromosom (A1) (Tabel
memiliki kekerabatan yang lebih dekat dengan Buaya
1) keempat grup memiliki nilai yang hampir sama
dan Madu dibandingkan dengan Beringin. Nilai A1
yaitu 0,14 (Pantai), 0,13 (Buaya dan Madu), dan 0,10
antara 0-1 menunjukkan semua kromosom tumbuhan
(Beringin). Menurut Tabur et al. (2012), nilai A1
tersebut berbentuk metasentrik (Ningsih et al. 2015).
menunjukkan hubungan evolusi antargrup. Berdasar-
Nilai interkromosom (A2) tiap grup berbeda dimana
kan nilai A1, grup Buaya dan Madu memiliki nilai A1
grup Pantai dan Buaya memiliki nilai A2 yang sama,
209
Jurnal Ilmu Kehutanan Volume 10 No. 2 - Juli-September 2016 Debnath B, Sil S, Sinha RK, Sinha S. 1995. Chromosome number and karyotipe of Aquilaria agallocha Roxb. (Thymelaeaceae). Cytologia 60:407-409. Denelle N, Puech S. 1985. Etude caryosystematic de Thymelaea hirsuta (L.) Endl. (Thymelaeaceae) dans deux stations du littoral Meditteraneen Francais (Camargue et Alberes). Taxon 34(4): 611-616. Evans KCI & Bosa O. 2013. Chromosome number and karyotipe in three species of genus Vernonia Schreber in Southern Nigerian. African Journal of Plant Science 7(11): 538-542. Fedorov AA. 1974. Chromosome number of flowering plants. Academy of Science of the USSR. http://ccdb.tau.ac.il/ Angiosperms/Thymelaeaceae/Pimelea/Pimelea%20dru paceae %20Labill. Diakses Januari 2017. Gupta S, Gillett GW. 1969. Observation on Hawaiian species of Wikstroemia (Angiospermae: Thymelaeaceae). Pacific Science 23:83-88. Hou D. 1960. Thymeleaceae. Dalam Van Steenis CGGJ, editor. Wolters-Noordhoff Publishing, Groningen. Mega M, Swastini AS. 2010. Screening fitokimia dan aktivitas antiradikal bebas ekstrak metanol daun gaharu (Gyrinops versteegii). Jurnal Kimia 4(2): 187-192. Mulyaningsih T, Yamada I. 2008. Notes on some species of agarwood in Nusa Tenggara, Celebes and West Papua. http://www.researchgate.net/publication/291347790. Diakses Juni 2016. Mulyaningsih T, Astuti SP. 2015. Diktat praktikum mikroteknik tumbuhan. Universitas Mataram. Mataram. Mulyaningsih T, Marsono D, Sumardi, Yamada I. 2014. Selection of superior breeding infraspecies gaharu of Gyrinops versteegii (Gilg.) Domke. Journal of Agricultural Science and Technology B 4:485-492. Mursyidin DH, Badrazsaufari, Kuntorini EM. 2013. Karakterisasi kromosom tanaman bawang dayak (Eleutherine americana Merr.) asal Kalimantan Selatan. Bioscientiae 10(1): 92-100. Ningsih H. 2011. Studi kromosom tanaman mata kucing (Dimocarpus malesianus Leenh.) dalam upaya peningkatan kualitas buah. Skripsi. Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Ningsih H, Yuniastuti E, Parjanto. 2015. Kajian sitogenetika tanaman ganyong (Canna edulis Ker.). El-vivo 3(2):41-49. Sandhu PS, Mann SK. 1988. SOCGI plant chromosome number reports – VII. Journal Cytology and Genetics 23: 219-228. Setyawan AD, Sutikno. 2000. Karyotipe kromosom pada Allium sativum L. (bawang putih) dan Pisum sativum L. (kacang kapri). BioSmart 2(1): 20–27. Shen YJ, Zhao SJ. 2007. Study on karyotipe and Giemsa C-binding of Aquilaria sinensis. Zong Yao Cai 30(7):762-765. Suhaila SAR, et al. 2015. Aquilaria malaccensis polyploid as improved planting materials. Journal of Tropical Forest Science 27(3):376-387. Suminah, Sutarno, Setyawan AD. 2002. Induksi poliploidi bawang merah (Allium ascaloncium) dengan pemberian kolkisin. Biodiversitas 3(1):174-180. Suryo. 2007. Sitogenetika. Gajah Mada University Press, Yogyakarta.
yaitu 0,20 sedangkan Madu adalah 0,32 dan Beringin adalah
0,18.
Hal
ini
menunjukkan
tingkat
penyimpangan ukuran kromosom relatif kecil. Spesies yang memiliki jumlah kromosom n = 9 memiliki nilai A2 yang relatif kecil (Tabur et al. 2012).
Kesimpulan Grup dari G. versteegii yaitu Pantai, Buaya, Madu, dan Beringin memiliki jumlah kromosom yang sama (n = 9) dan memiliki bentuk kromosom yang sama, yaitu berbentuk metasentrik sehingga keempat grup tersebut memiliki pola karyotipe yang sama, yaitu 2n = 18m serta keempat grup memiliki ukuran kromosom yang kecil. Meski demikian, ukuran kromosom keempat grup tersebut berbeda-beda yaitu 1,53 µm (Pantai), 1,27 µm (Buaya), 1,21 µm (Madu) dan 1,03 µm (Beringin). Nilai indeks asimetri intrakromosom (A1) grup dari G. versteegii yaitu Pantai adalah 0,14 sedangkan Buaya dan Madu memiliki nilai A1 yang sama yaitu 0,13 serta Beringin sebesar 0,10. Nilai indeks asimetri interkromosom (A2) G. versteegii untuk grup Madu adalah 0,32 dimana Pantai dan Buaya memiliki nilai A2 yang sama (0,20), sedangkan untuk Beringin adalah 0,18.
Daftar Pustaka Anonim. 2016. Hakusni baieido aloeswood chunks. Sakai. http://sensia.com/hakusui-baieido-aloeswood-chunks/. Diakses Agustus 2016. Anonim. 1974. IOPB Chromosome number report TS XLIII. Taxon 23(1): 193 -196. Anonim. 2016. The Chromosome counts database (CCDB). http://ccbd.tau.ac.il/Angiosperms/Thymelaeaceae. Diakses Desember 2016. Cheshmedjiev IV. 1997. Thymelaea bulgarica sp. Nova (Thymelaeaceae) anda related species. Bocconea 5(2): 607-611. Darmawan G. 2010. Karakterisasi kromosom tomat (Lycopersicum esculentum Mill.) varietas berlian dan varietas intan. Skripsi (Tidak dipublikasikan). Universitas Islam Sunan Kalijaga, Yogyakarta. Dawson MI, Beuzenberg EJ. 2000. Contribiutions to a chromosome atlas of the New Zealend. Journal of Botany 38: 1-24. de Lange PJ, Murray BG, Datson PM. 2004. Contribution to a chromosome atlas of the New Zealand flora – 38. counts for 50 families. New Zealand Journal of Botany 42: 873-904.
210
Jurnal Ilmu Kehutanan Volume 10 No. 2 - Juli-September 2016 Tabur S, Civelek S, Oney S, Ergun SBY, Kursat M, Turkoglu I. 2012. Chromosome counts and karyomorphology of some species of Artemisia (Astracea) from Turkey. Turkish Journal of Botany 36: 235-246. Tyas DA. 2014. Jumlah dan panjang absolut kromosom bawang merah kultivar samas (Allium Ascalonicum L. cv. Samas). Agronomika 9(2): 235-240. Young HA, Sarath G,Tobias CM. 2012. Karyotipe variation is indicative of subgenomic and ecotipic differentiation in switchgrass. BMC Plant Biology 12:117.
211
