Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc

*Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Faktory ovlivňující transport přes membrány Velikost molekul: Malé molekuly jako voda, kyslík, kysličník uhličitý mohou volně procházet přes membrány, na rozdíl od většiny větších molekul .

Rozpustnost v tucích: Látky rozpustné v tucích (nepolární, hydrofóbní) procházejí přes membrány snadno – glycerol, mastné kyseliny

Náboj: Fosfolipidová dvojvrstva je pro veškeré nabité částice (ionty) nepropustná.

Existence kanálů a přenašečů Tyto proteinové přenašeče transportují jsou nezbytné pro přenos polárních nabitých a v tucích nerozpustných molekul přes membránu *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Membranový transport: přehled A: Klasifikace z hlediska fyzikálního 1. Transport přímo přes membránu Difůze Osmóza 2. Transport prostřednictvím specializovaných membránových proteinů Kanály Přenašeče 3. Transport prostřednictvím membránových váčků Fagocytóza Endocytóza Exocytóza

B: Klasifikace na základě energetických požadavků 1. Pasivní transport Osmosa Prostá difůze Usnadněná difůze 2. Aktivní transport Primární aktivní transport Uniport Spřažený transport Symport Antiport Sekundární aktivní transport Transport prostřednictvím membránových váčků Fagocytóza Endocytóza Exocytóza *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

A. Membranový transport z hlediska fyzikálního 1. Přímo přes membránu

glycerol

Mastné kyseliny

Pomocí transportních proteinů

2.

Ionty Aminokyseliny -

kyslík

voda

+

++

-

++

+

-

+

++

++

+

difůze / osmóza *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

LDL,HDL

proteiny

++ +

ethanol

neurotronsmitery viry

+

++

CO2

Glukóza Nukleotidy

Prostřednictvím membránových váčků

3.

KANÁL

usnadněná difůze

-

PŘENAŠEČ přenašečový transport

Fagocytóza Endo-/Exocytóza

http://www.blackwellpublishing.com/matthews/neurotrans.html

B. Membránový transport na základě energetických požadavků

1.

Pasivní transport transport Pasivní Osmóza

Prostá difůze

ATP T

2.

Usnadněná difůze

ATP

Aktivní transport transport Aktivní

voda

P

kanály

přenašeče

přenašeče *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

DIFŮZE = pohyb molekul z místa vyšší koncentrace do místa nižší koncentrace


Základní pravidla prosté difůze: Molekuly se pohybují z místa vyšší koncentrace do místa nižší koncentrace. Rozdíl mezi koncentracemi obou složek nazýváme koncentrační spád (gradient). Molekuly obou složek se mísí dokud nenastane rovnováha Čím větší je rozdíl v koncentracích dvou složek větší, tím rychleji se molekuly pohybují

ATP

Difůze je samovolný proces – nevyžaduje přísun energie z jiného zdroje, využívá pouze kinetickou energii mísících se molekul Nízká teplota

Difůze je nepřímo úměrná velikosti molekul. Větší molekuly difundují pomaleji.

Pomalá difůze

Rychlá difůze

Difůze je přímo úměrná teplotě. Při vyšší teplotě je difůze rychlejší


Vysoká teplota

Pravidla specifická pro difůzi přes membrány: Rychlost difůze… …závisí na rozpustnosti

molekul v membránových lipidech

…je přímo úměrná ploše membrány

…je nepřímo úměrná tloušťce membrány

rozpustné

méně rozpustné

nerozpustné


Difůze molekul vody přes semipermeabilní membránu nazýváme…

OSMÓZA

Semipermeabilní membrána Rozpuštěná látka voda

je propustná pro vodu ale ne pro rozpuštěnou látku.


Jak poznáme, že mezi dvěma roztoky probíhá osmóza? Jak určíme směr pohybu molekul vody? Srovnáním koncentrace obou biologických roztoků (%, g/L)

Nižší koncentrace

Vyšší koncentrace

Osmóza

Stejná koncentrace

Osmóza neprobíhá *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Pokud srovnáváme koncentraci dvou roztoků s rozdílnými rozpuštěnými látkami, je v souvislosti s osmotickými ději správné používat termín

OSMOLARITA (Osm)

= počet osmoticky aktivních částic (molekul, resp. iontů) v 1 litru roztoku

U disociujících látek: 1 OsM =

1 M x počet iontů počet molekul

U nedisociujících látek: 1 OsM = 1 M 1 mol = 6.02 x 1023 molekul ( Avogadrova konstanta) *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

semipermeabilní membrána

Roztok A

Roztok B

H 2O H 2O

50 Částic v 1 litru roztoku

10 Částic v 1 litru roztoku

Vyšší osmolarita

Nižší osmolarita

(více částic v litru roztoku)

(méně částic v litru roztoku)

Voda se vždy bude pohybovat z roztoku B do roztoku A

Hyperosmotický

Hyposmotický

k roztoku B

k roztoku A *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*


Rozpuštěná látka

H2O rozpouštědlo

Nižší osmolarita (méně částic na objem. jednotku) Vyšší osmolarita (více částic na objem. jednotku)

Kg (pound)

Voda je (na základě koncentračního gradientu) nasávána do válce přes semipermeabilní membránu

Rozpuštěná látka

H2O rozpouštědlo

Nižší osmolarita (méně částic na objem. jednotku) Vyšší osmolarita (více částic na objem. jednotku)

Voda je (na základě koncentračního gradientu) nasávána do válce přes semipermeabilní membránu

OSMOTICKÝ TLAK

Kg (pound)

Sílá, která zvedá závaží, se nazývá..




kanály

ATP T Prostá difůze

Spojují přímo vnější a vnitřní prostředí buňky Tvoří vodou vyplněný pór

Transportují malé molekuly, především ioty a vodu Transport probíhá velmi rychle

přenašeče

ATP Aktivní transport ATP T Usnadněná difůze

Nikdy přímo nespojují vnější prostředí s vnitřním Vyskytují se ve dvou konformacích – jsou otevřeny buď ven z buňky nebo dovnitř buňky Transportují větší molekuly [glukóza, nukleotidy] Transport je pomalejší ale vysoce selektivní


ATP T Prostá difůze

Kanály:

Otevřené kanály Umožňují volný pohyb iontů oběma směry. Nazývají se póry. Otevřené kanály pro transport vody se nazývají akvaporiny.

Vrátkové kanály Součástí kanálu jsou tzv. vrátka – speciální proteinová oblast , která uzavírá vstup do kanálu. Otvírání vrátek je vyvoláno specifickými podněty a tím je regulován pohyb částic kanálem.

Membrána Intracelulární prostor

Vrátka otevřena

Vrátka uzavřena *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Vrátkové kanály - regulace

ATP T Simple diffusion

Otvírání vrátek je regulováno následujícími mechanismy: A. Elektrickým signálem B. Vazbou chemického mediátoru (Intracelulárně nebo extracelulárně) C. Fyzikálními vlivy [teplota, tlak]

A. Elektricky regulován +++

+++

---

---

Změna polarity membrány

B. Chemicky regulován

ligand mediátor

C. Mechanicky regulován

teplota tlak *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Většina kanálů jsou tzv.

Iontové kanály Funkce iontových kanálů: transportují výhradně anorganické ionty, především Na+, K+, Cl- a Ca2+ na zlomky sekund se otvírají a umožní tak transport iontů, pro které je jinak membrána nepropustná

Bacteriální K+ kanál Tvoří selektivní filtr, který kontroluje, jaké ionty mohou přes kanál projít a které ne.

Typické vlastnosti iontových kanálů: Iontově specifické: Kanálem mohou být transportovány pouze ionty, pro které je daný kanál specifický. Selektivita závisí na průměru, tvaru a typu aminokyselin ve vnitřní části kanálu Vrátkové: Iontové kanály se otvírají pouze na krátkou dobu, většinu času jsou uzavřeny


a jejich role při vzniku

NERVOVÉHO SIGNÁLU *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Na+ Na+

Na+ Na+

TRANSPORTNÍ MEMBRÁNOVÉ PROTEINY

Jsou zodpovědné za vznik elektrického impulzu (AP – akční potenciál)

Na

+

+

Na+ Na+

Na+

Na+

Na+

Na+ Na+ Na

+

Na+

Na+

+++

+++

- +-

- +-

+

... a tím šíření nervového vzruchu...


Nerovnoměrná distribuce iontů na membráně Hlavním kationtem vně buňky je sodíkový iont Na+. Vysoká koncentrace Na+ vně buňky a K+ uvnitř buňky je v buňce zajišťován tzv. sodno-draselnou pumpou Na+ K+ pumpa neustále transportuje Na+ ven z buňky a K+ dovnitř buňky. K činosti pumpy je potřeba energie

Uvnitř buňky je náboj mírně negativní: většina organických molekul [ bílkoviny] uvnitř buňky má negativní náboj; ten je vyrovnán sodíkovými kationty K+, hlavním intracelulárním kationtem *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

+ kationty vně buňky a

-

anionty uvnitř buňky jsou vzájemně přitahovány, ale jsou oděleny membránou

+ + + + +

-

- -

+

- - -

Pokud by se membrána stala pro tyto ionty dočasně propustná Ionty by se rychle pohybovaly směrem po koncentračním spádu.

Buněčná membrána plní funkci

přehradní hráze: Membrána odolává elektrochemickým silám, které navzájem ionty přitahují Ionty [podobně jako voda za přehradní hrází] mají potenciální energii.

Separací + a - nabitých částic je na membráně vytvořen

elektrický potenciál *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Membránový potenciál

Vyjadřuje rozdíl mezi: + nábojem vně buňky

-

nábojem uvnitř buňky

Buňka v klidovém stavu [transport iontů přes membránu je v rovnováze], má tzv.

klidový membránový potenciál. Membránový potenciál… je vyjádřen rozdílem napětí (volty, milivolty) vně a uvnitř membrány uvádí se v záporných hodnotách vzhledem k zápornému náboji uvnitř buňky. pohybuje se v rozpětí -20mV až -200 mV, v závislosti na organismu a typu buňky.


Elektricky řízené kanály a membránový potenciál Elektricky řízené kanály mají speciální proteinovou doménu, která je mimořádně citlivá na změny elektrického membránového potenciálu. Na+

Elektrické změny nad prahem citlivosti způsobí otevření kanálu Na+

Na+ Na+

Otevřený kanál umožní rychlý průtok iontů membránou. Tok iontů je zaznamenán jako elektrický proud, který náhlé změní polaritu membrány. Tento elektrický signál na membráně neuronů je nazýván nervový impulz nebo

Na

+

+

Na+ Na+

Na+

Na+

Na+

Na+ Na+ Na

+

Na+

Na+

+++

+++

- +-

- +-

+

akční potenciál [AP] ¾ AP je obvykle vyvolán elektricky řízenými Na+ kanály ¾ AP umožňuje rychlý přenos nervového signálu mezi vzdálenějšími místy.

Změna membránového potenciálu



Na+

+

Na+

Na+

Na+ Na+

Na+ Na+

+ +

_+

Na+

+

Na+

Na+ Na+

Na+ Na+

+

Na+ Na+

+

Na+

_

Na+ Na+

Na+

+ + +

++

Na+

+

Na+

Na+

+

+ +

_

+ _+

-

kanál

pčenašeč

_+

_

_

ENERGIE


Na+

+

Na+

+

Na+

Na+ Na+

+ +

Na+

_+

Na+

_

+ + +

Na+

_+

+

kanál

+ Na+

_+

Na+ Na+ Na+

Na+

Na+ Na+

+ Na+

Na+

_

+

pčenašeč Na+

Na+

+ +

Na+

Na+

++

Na+

_

+

+

depolarizace membrány

_

Porucha činnosti a vznik nemoci

CYSTICKÁ FIBRÓZA *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Cystická fibróza • Dědičné onemocnění • Postihuje nejvíce plíce a slinivku břišní • Vyznačuje se produkcí abnormálně hustého mukózního sekretu Hustý mukózní sekret ucpává vývod pankreatu

žaludek

Hustý mukózní sekret ucpává dýchací cesty, ztěžuje dýchání a je příčinou častých infekcía

Mukózní sekret omezuje vývod pankreatické šťávy a tím zhoršuje trávení a vstřebávání živin

vývod pankreatu

slinivka


CYSTICKÁ FIBRÓZA porucha chemicky regulovaného kanálu, který transportuje Cl- ionty ven z buňky Důsledek: • • • • •

Nepropustnost plazmatické membrány pro ClTím je porušen i transport sodíku NaCl se akumuluje v dýchacích cestách. Slané prostředí navíc inhibuje defensin – obrannou látku dýchacích cest proti vstupu baktérií. Vytvářejí se fibrózní cysty na plicích a v pankreatu, kde blokují sekreci enzymů.


Přenašeče

ATP

ATP T

Nikdy netvoří přímé spojení

mezi extracelulárním a intracelulárním buněčným prostorem

Přenašeče mají jedno nebo více specifických vazebných míst pro přenášenou částici. Vazebné místo se střídavě otevírá na jednu stranu Membrány a následně na druhou stranu..

Přenašeče se vyskytují ve dvou prostorových formách (konformacích): Forma “A” : vazebné místo pro přenášenou částici je otevřeno ven z buňky Forma “B” : vazebné místo pro přenášenou částici je otevřeno dovnitř buňky

A

B


Přenašeče:

ATP

Typ a počet transportovaných částic

ATP T

Uniport – přenašeč, který transportuje pouze jeden typ částice Spřažený transport – přenašeč transportuje dva typy molekul najednou ¾Symport: molekuly jsou transportovány stejným směrem ¾Antiport: molekuly jsou transportovány v opačném směru

uniport

symport

antiport *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Přenašeče

ATP

Aktivní transport ATP T

Usnadněná difůze Transport nevyžaduje energii Probíhá po koncentračním spádu (z místa nižší koncentrace do místa vyšší koncentrace).

Přenašečový transport, který vyžaduje energii Probíhá proti koncentračnímu spádu (z místa nižší koncentrace do místa vyšší koncentrace). Takové přenašeče nazýváme pumpy. ATP Aktivní transport - pumpa

ATP T Usnadněná difůze

P “Do kopce” “Dolů z kopce“ *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Na+ K+ pumpa

Neustále pumpuje Na+ ionty ven z buňky K+ dovnitř buňky A vytváří tak trvalý gradient, který je využíván k dalším Procesům v těle

Existuje několik cest, kterými je glukóza přiváděna do buněk *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

GLUKÓZA: Transport pasivní – - usnadněnou difůzí

ATP T

Transport glukózy z krve do buněk probíhá usnadněnou difůzí. (Aktivní spřažený glukózovy transport – viz dále)]

Rychlost usnandněné difůze glukózy přes membránu buněk je přímo závislá na koncentraci glukózy v plazmě (glykémii).

Pokud je koncentrace glukózy v plazmě abnormálně nízká [hypoglykémie], pak transport glukózy především do mozkových buněk může být nedostačující. Těžká hypoglykémie např. u diabetiků předávkovaných inzulinem může vést k bezvědomí (hypoglykemický šok) nebo dokonce ke smrti. *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

GLUKÓZA: Transport aktivní – spřažený Na+ transport

ATP

Sekundární aktivní transport: Na+ jsou transportovány po směru koncentračního spádu a s sebou „strhnou“ glukózu proti směru koncentračního spádu

Primární aktivní transport: Na+ a K+ jsou aktivně pumpovány Proti směru koncentračního spádu A vytváří tak trvalý gradient V koncentraci Na+ a K+ *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Glukózový přenašečový protein

je součástí buněčných membrán a zásadním způsobem ovlivňují metabolismus glukózy v těle

Při funkčních poruchách těchto membránových molekul dochází k onemocnění např.

Diabetes mellitus – „cukrovka“, úplavice cukrová


INZULIN Udržení fyziologické

GLYKÉMIE

(6 mmol/l)

Další GLUT 4

INZULÍNOVÝ RECEPTOR - STIMULACE BUNĚČNÁ MEMBRÁNA

GLUT 4

(přenašeč pro glukózu)

Transport glukózy do buňky

Přemístění váčku k membráně a zabudování glukózových přenašečů do membrány

GLUT 4 váček

Signální dráha inzulinu k membránovému váčku s GLUT 4 přenašeči

Normální stav *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

NEDOSTATEK inzulinu

vysoká

GLYKÉMIE

INZULÍNOVÝ RECEPTOR

GLUT 4


BUNĚČNÁ MEMBRÁNA

GLUT 4


Příjem glukózy buňkou je omezen

Glukózové přenašeče nejsou transportovány do membrány - NEDOSTATEK PŘENAŠEČU

GLUT 4 váček

Nedostatečná stimulace receptoru k inzulínu

SIGNÁL JE NEDOSTATEČNÝ

DIABETES I typu IDDM (insulin dependent Diabetes mellitus)


NADBYTEK inzulinu

vysoká

GLYKÉMIE

INZULÍNOVÝ RECEPTOR

GLUT 4


BUNĚČNÁ MEMBRÁNA

GLUT 4


Příjem glukózy buňkou je omezen

Glukózové přenašeče nejsou transportovány do membrány - NEDOSTATEK PŘENAŠEČU


GLUT 4 váček

Snížená citlivost receptoru k inzulínu

SIGNÁL JE NEDOSTATEČNÝ

DIABETES II typu IIDM (insulin independent Diabetes mellitus)



ATP

Membrane-bound vesicle

Endocytosis It is essential function, always taking place. The cellular uptake of particles, that are too large to cross the membrane

Cells use two basic mechanisms to move larger particles “in” or “out” of the cell.

Phagocytosis “ cell eatting “ process occurs only in certain type of white blood cells called phagocytes

It can be: 1. nonselective [pinocythosis – process when extracellular fluid droplets enter cell] 2. highly selective allows only specific molecules to enter the cell [receptor mediated endocythosis] Exocytosis - opposite of endocytosis. Cell uses it to export proteins synthesized within the cell and to get rid of waste, left in lysosomes.

Process by which cells engulfs a foreigner particle [or bacteria] into vesicles. Vesicles fuses with lysosome and digest enzyme destroy the particles.


SNAREs proteins SNAREs are transmembrane proteins which help direct transport vesicles to their target membrane. v-SNAREs are marker protein on the vesicles t-SNAREs are marker protein on the target membrane

v-SNAREs bind to complementary t-SNAREs on the target membrane

SNAREs proteins play a central role in membrane fusion Pairing of complementary v-SNAREs and t-SNAREs forces the two lipid bilayers fuse


Synapse: Endocytosis / exocytosis

Protein exocytosis


Receptor mediated endocytosis

ATP

By receptor mediated endocytosis are transported protein hormones, growth factors, antibodies, cholesterol.

Protein receptors on the cell surface bind to their specific ligand

Cell membrane creates little pit…

…and small vesicles which separate from membrane

Abnormalities in receptor-mediated removal of cholesterol Cholesterol must be bind to lipoprotein LDL for transport in the blood. Cholesterol is taken into cell by LDL-receptor endocythosis. Genetic defect [hypercholesterolemia] decreases number of LDL –receptors. Cholesterol cannot be normally transport into the cell and remains in the plasma. High blood level of LDL-cholesterol develop atherosclerosis *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

LDL HDL

lipoprotein ( = low density lipoprotein; „ZLÝ cholesterol“) – přivádí cholesterol do buněk lipoprotein ( = high density lipoprotein; „HODNÝ cholesterol“) odvádí cholesterol z periferie do jater

Přebytečný cholesterol je vylučován formou žlučových kyselin

Cholesterol z potravy

LDL

LDL-receptor

HDL receptor

LDL-receptor

Recyklace cholesterolu

JATERNÍ BUŇKY

HDL

SOMATICKÁ BUŇKA cholesterol




Membrane transport process according energy requirement

ATP T

ATP *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Active transport

Secondary active transport = coupled transport

Primary active transport Hydrolysis of ATP is directly required for the function of carrier protein

ATP

ADP

ATP energy is used as primary source

+ Pi [inorganic phosphate]

Antiport: Na+ K+ pump Uniport: H+ pump Ca+ pump

Couples the kinetic energy of one molecule moving down its concentration gradient to the movement of another molecule against its concentration gradient

Symport: Transported molecules go in the same direction across the membrane Antiport: molecules go in opposite direction 1. ATP ATP energy Is primarily used for pumping ions against concentration gradient [most commonly Na+ out of the cell] 2. Energy of ions moving down its concentration gradient is secondary used to move another molecules against concentration gradient.

Secondary energy

The most common secondary active transport systems are driven by the sodium concentration gradient.


Primary active transport: Model of proton pump M+ [A]

[B]

[C]

[D]

[A] Carrier protein binds the cationt on the inside of the cell [B] Carrier protein is phosphorylated by ATP [C] Phosphorylation leads to conformational change that expose the cation to the outside of the cell and make cation to diffuse away [D] Release of the phosphate ion from the protein into the cytosol an restore the initial configuration so new cycle pumping can to start *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Na+K+ pump Na+ Na+

Na+

Na+

Na+

Na+

K+ +

K

+

K +

K

Na+ Na+

K+

Na+

K+ *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Secondary active transport: [A]

[B]

[C]

[D]

[A] Initially concentration: The binding site of carrier protein is exposed to outside environment and can bind a proton [B] this binding results in conformational change that permits a molecule of S-substrate to be bound [C] The binding of substrate cause another conformational change that expose the binding sites inside of the cell [D] Release of a proton and substrate to the cell’s interior restore the original conformation of carrier and allows a new pumping cycle to begin *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*



Energy requirement ATP

ATP T

No energy

Energy from ATP

diffusion

Simple diffusion

Molecule goes Through lipid bilayer

Endocytosis

Facillited diffusion

Secondary Active transport

Primary Active transport

Transport requires membrane proteins

Exocytosis Phagocytosis

Membrane-bound vesicles

Physical requirement *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Příklady vybraných látek a způsobu jejich transportu přes membránu Aktivní transport

Pasivní transport přímo přes membrán u O2, CO2

xxx

mastné kyseliny

xxx

glycerol

xxx

močovina

xxx

voda

xxx

ionty (Na+, K+, H+, Ca+)

prostá difůze (kanály)

usnadněná difůze

unipo rt

(přenašeče)

spřažený transport

sekundár ní

membránový mi

(symport, antiport)

transport

váčky

xxx xxx

glukóza

xxx

nukleotidy

xxx

aminokyseliny

xxx

xxx

xxx

xxx

xxx

xxx

proteiny

xxx

cholesterol

xxx

neuromediátory

xxx *Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

difusion

H2O ions

Through membrane

Simple d. [channels]

x

x x

facilitate d. [channels]

uniport

cotransport

x

x

Secondary Membrane Active tr. vesicles

x


Hlavní funkce cytoplasmatické membrány Fyzikální bariéra: odděluje vnitřní obsah buňky od vnějšího prostředí. Regulace: membrána aktivně kontroluje pohyb molekul v obou směrech Biomembrany jsou selektivně permeabilní.

Komunikace mezi buňkou a okolním prostředí: Buněčná membrána obsahuje receptory kterými buňka rozpoznává změny v okolí a reaguje na ně.

Stavební a podpůrná funkce: Proteiny buněčného cytoskeletu zajišťují tvar buňky. Membránové proteiny tvoří mezibuněčná spojení


*Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

Recommend Documents

Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc