IDENTIFIKASI AKTIVITAS IMUNOGLOBULIN M (IG.M) EKSTRAK ETANOLIK DAUN CEPLUKAN (Physalis Minima Linn.) PADA MENCIT

Nurmaya Effendi, Harti Widiastuti

Identifikasi Aktivitas Imunglobulin M (IG.M) Ekstrak ...

IDENTIFIKASI AKTIVITAS IMUNOGLOBULIN M (IG.M) EKSTRAK ETANOLIK DAUN CEPLUKAN (Physalis Minima Linn.) PADA MENCIT Nurmaya Effendi*, Harti Widiastuti** *, **

Laboratorium Kimia Farmasi, Universitas Muslim Indonesia, Makassar Abstrak

Sistem imun adalah sistem yang sangat penting bagi tubuh untuk menghindari dan melawan berbagai penyakit. Keseimbangan sistem imun dapat dipengaruhi oleh faktor internal dalam tubuh dan faktor eksternal yang perlu dipertahankan untuk menjaga tubuh agar tetap sehat . Sistem imun ini berkaitan erat dengan adanya antibodi. Antibodi merupakan protein immunoglobulin yang disekresi oleh sel B yang terfiksasi oleh antigen. Tanaman ceplukan (Physalis minima Linn.) termasuk famili Solanaceae merupakan tanaman yang tidak banyak diketahui orang bahwa dapat menyembuhkan berbagai penyakit. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kemampuan ekstrak etanol daun ceplukan (Physalis minima Linn.) untuk meningkatkan aktivitas IgM. Daun ceplukan kering dimaserasi dengan etanol. Ekstrak etanolik cair yang diperoleh dikentalkan dengan rotavavor dan kemudian disuspensikan dengan Na-CMC sebagai pembawa. Ekstrak diberikan secara oral kekelompok mencit uji dengan menggunakan kontrol negatif Na-CMC dan selanjutnya diimunisasi dengan suspensi sel darah merah domba secara intraperitonial dan setelah lima hari selanjutnya darah mencit diambil secara intrakardial. Darah mencit selanjutnya digumpalkan, serumnya lalu diencerkan dengan PBS dan diuji lagi dengan sel darah merah domba, dan setelah diinkubasi selanjutnya diamati pengenceran tertinggi darah yang dapat mengaglutinasi sel darah domba. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanolik daun Ceplukan (Physalis minima Linn.) konsentrasi 4%, 8% dan 12% b/v dapat meningkatkan aktivitas Ig.M dengan titer imunoglobulin rata-rata masing-masing sebesar 1/32, 1/128 dan 1/64 sedangkan kelompok perlakuan kontrol, rata-rata titer imunoglobulinnya hanya 1/8. Kata Kunci : sistem imun, antibiotik, ceplukan, IgM Senyawa aktif yang terkandung dalam

PENDAHULUAN

S

istem imun adalah sistem yang

tumbuhan yang berefek memicu sistem

sangat penting bagi tubuh untuk

imun pada dekade terakhir ini mulai ban-

menghindari

yak

dan

melawan

diaplikasikan

sebagai

berbagai penyakit (Abbas et al, 2007).

’’immunotherapy’’ yaitu suatu cara pen-

Keseimbangan sistem imun dapat di-

gobatan yang mengkombinasikan pen-

pengaruhi oleh faktor internal dalam tubuh

gobatan konvensional dengan terapi imun

dan faktor eksternal yang perlu dipertahan-

untuk memperoleh hasil pengobatan yang

kan untuk menjaga tubuh agar tetap sehat.

maksimal

353

terhadap

berbagai

penyakit

Jurnal Kesehatan

Volume VII No. 2/2014

(Ma’at, 2010). Sistem imun ini berkaitan

satu tumbuhan yang berkhasiat obat adalah

erat dengan adanya antibodi. Antibodi

daun

merupakan protein immunoglobulin yang

(Physalis

disekresi oleh sel B yang terfiksasi oleh

tanaman yang tidak banyak diketahui

antigen. Semua molekul antibodi terdiri

orang

dari dua untaian peptida pendek yang sama

berbagai

yang dikenal dengan light chain, kappa

ditemukan, dapat tumbuh didataran rendah

dan lambda yang terdiri dari 230 asam

hingga dataran tinggi, sehingga bisa

amino, sedang yang terdiri dari untaian

dijumpai di pekarangan dan mendapat

peptida yang panjang disebut heavy chain

sinar matahari penuh dan tanahnya gembur

(imunoglobulin) yang terdiri dari lima jenis

(Siyok, 2002). Kandungan kimianya antara

yaitu IgG, IgA, IgM, IgD dan IgE

lain asam klorogenat, asam citrun, fisalin,

(Bratawidjaja, 2004). Memelihara daya

flavonoid,

tahan tubuh tidak cukup hanya dengan

(Winarno, 2003). Selain itu, daun ceplukan

keseimbangan gizi yang dilengkapi dengan

juga

vitamin, mineral dan asam amino esensial.

analgetik, diuretik, anti inflamasi dan

Daya tahan tubuh alami harus diciptakan

detoksifikasi (Wijayakusuma, 2004).

oleh kesehatan organ-organ tubuh yang

ceplukan. minima

bahwa

berkhasiat

ceplukan merupakan

menyembuhkan

dan

tidak

dan

sebagai

sulit

polifenol antipiretik,

Berdasarkan uraian tersebut, muncul

epitel

etanolik

kulit

dapat

saponin

permasalahan

jaringan

Linn.),

penyakit

terutama terdiri dari ketahanan permukaan yaitu

Tanaman

organ,

tentang

daun

apakah

ceplukan

meningkatkan

jaringan hati dan ginjal serta keseimbangan

mengandung

faktor-faktor

Organ-organ

diketahui aktif sebagai senyawa yang ber-

pendukung daya tahan tubuh alamiah ini

tanggung jawab untuk memicu sistem

dapat

imun tubuh, dengan alasan tersebut maka

dipelihara

dan

ditingkatkan

senyawa

polifenol

ini.

karena yang

fungsinya melalui konsumsi tanaman obat

dilakukanlah

(Winarno, 2003).

penelitian yang diperoleh nantinya di-

Upaya penemuan obat baru yang ber-

penelitian

Ig.M

dapat

keseimbangan faktor-faktor humoral yaitu seluler.

aktivitas

yang

ekstrak

Hasil

harapkan dapat memberi informasi kepada

sumber dari bahan alam telah banyak dil-

masyarakat

akukan secara eksploratif. Indonesia adalah

ceplukan sebagai imunoterapi yang dapat

negara yang kaya dengan tumbuhan (lebih

dipertanggungjawabkan secara ilmiah. Se-

kurang 30.000 spesies) dan baru 940 jenis

lanjutnya dapat diteliti golongan bioaktif

tumbuhan telah diketahui berkhasiat se-

yang bertanggung jawab sebagai pemicu

bagai obat (Soeksmanto et al., 2010). Salah

aktivitas IgM dan dapat digunakan sebagai 354

tentang

penggunaan

daun



senyawa pemandu yang dapat dikem-

cara diangin-anginkan pada tempat yang

bangkan sebagai obat baru.

tidak terkena sinar matahari langsung.

Tujuan penelitian ini adalah untuk

Penyiapan Hewan Coba Mencit

mengetahui kemampuan ekstrak etanol

Hewan coba yang digunakan adalah

daun ceplukan (Physalis minima Linn.)

Mencit jantan

(Mus

musculus) yang

untuk meningkatkan aktivitas IgM..

berbadan sehat dengan berat badan 25 – 30 gram. Jumlah Mencit yang digunakan

METODE PENELITIAN

sebanyak 16 ekor yang dibagi dalam 4

Alat dan Bahan

kelompok, yakni 1 kelompok kontrol dan 3

Alat-alat penelitian

ini

yang

digunakan

adalah

alat

dalam

kelompok perlakuan.

rotavapor,

Pembuatan

autoklaf, batang pengaduk, Erlenmeyer,

Ekstrak

Etanol

Daun

Ceplukan

gelas piala, labu alas bulat, mikropipet,

Daun Ceplukan (Physalis minima

pipet, piring Mikrotitrasi (Wheel plate) 96

Linn.) yang telah dikeringkan, dimasukkan

lubang, sendok tanduk, spoit, sentrifuge,

dalam

tabung reaksi, tabung venoject, timbangan

pelarut etanol hingga sampel terendam.

analitik, timbangan gram, tip pipet, wadah

Dibiarkan selama 5 hari dengan sesering

maserasi, water bath

mungkin diaduk. Setelah 5 hari, disaring

bejana

maserasi,

ditambahkan

Bahan-bahan yang digunakan da-

kemudian diperas dan ditambah cairan

lam penelitian ini adalah alumunium foil,

penyari lagi, penyaringan dilakukan tiga

Sel darah merah Domba, etanol, Mencit

kali. Sari yang diperoleh diuapkan dengan

(Mus musculus), Kertas saring, Na CMC,

rotavapor.

larutan PBS, daun Ceplukan (Physalis min-

Pembuatan Suspensi Na-CMC 1 %

ima Linn.)

Ditimbang Na.CMC sebanyak 1

Prosedur Penelitian

gram. Ditambahkan sedikit demi sedikit ke

Pengambilan Sampel Daun Ceplukan

dalam akuades panas sambil dikocok kuat

Sampel

berupa

daun

Ceplukan

dengan

batang

pengaduk.

Kemudian

(Physalis minima Linn.) diambil di kota

ditambahkan dalam larutan tersebut 50 ml

Makassar, pada pukul 10.00 dipetik daun

akuades yang tidak dipanaskan sedikit

kelima dari pucuk.

demi sedikit sambil diaduk. Akuades yang

Pengolahan Sampel Daun Ceplukan

digunakan adalah 100 ml.

Sampel daun Ceplukan (Physalis

Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun

minima Linn.) yang telah dikumpulkan,

Ceplukan

dipotong-potong kecil, dikeringkan dengan

Suspensi 355

ekstrak

etanol

daun

Jurnal Kesehatan


Ceplukan (Physalis minima Linn.) dibuat

yang

dengan menambahkan larutan koloidal Na-

mengencerkan 0,4 mL suspensi SDMD 50

CMC 1% b/v sebagai pembawa, dibuat

% dengan 9,6 mL PBS sehingga diperoleh

dalam konsentrasi 4% b/v, 8% b/v dan

10 mL suspensi antigen (SDMD 2 %).

12% b/v. Cara pembuatan konsentrasi 4%

Pembuatan

b/v adalah dengan menimbang ekstrak

Saline

sebanyak 4 gram kemudian digerus dalam

akan

Phospat

digunakan

Larutan

Phospate

Buffered

Saline

dengan

Buffer (PBS)

lumpang, lalu ditambahkan larutan Na-

disiapkan dengan terlebih membuat larutan

CMC 1% b/v dalam labu terukur 100 mL

A yaitu larutan KH2PO4.H2O 1,38 g/L dan

hingga tanda. Untuk membuat suspensi

KCl 8,3 g/L dan larutan B yaitu larutan

ekstrak dengan konsentrasi 8% b/v dan

NaH2PO4 1,42 g/L dan NaCl 8,5 g/L.

12% b/v dilakukan dengan cara yang sama

selanjutnya

dengan menimbang ekstrak masing-masing

ditambahkan pada 720 mL larutan B.

sebanyak 8 gram dan 12 gram. Suspensi

Perlakuan Terhadap Hewan Uji

dibuat segar setiap kali pertakuan.

Kelompok Kontrol

Penyiapan Suspensi Sel Darah Merah

280

mL

larutan

A

Mencit jantan diimunisasi dengan

(SDMD) 2 %

suspensi sel darah merah Domba 2%

Tampung darah Domba dalam wadah

dengan

volume

0,1

mL/ekor

secara

bersih dan kering yang berisi serbuk

intraperitonial. Selanjutnya diberi suspensi

EDTA sebagai antikoagulan. Untuk 1 mL

Na-CMC 1% dengan volume 1 mL secara

darah Domba, diperlukan 1 mg EDTA.

oral setiap hari selama 6 hari. Selanjutnya

Pisahkan sel darah merah Domba (SDMD)

pada hari kelima setelah imunisasi, darah

dan plasmanya dengan pemusingan pada

Mencit diambil secara intrakardial.

sentrifus 1500 rpm. Selanjutnya cuci sel

Kelompok II

darah merah dengan menambahkan PBS


( Phosphat Buffered Saline ) dalam jumlah


besar dan tabung berisi suspensi tersebut

dengan

dibolak-balik beberapa kali dan disentrifus

intraperitonial. Selanjutnya mencit jantan

kembali. Lakukan pencucian paling sedikit

diberi suspensi ekstrak etanolik daun

3 kali. Setelah selesai, PBS dibuang dan

Ceplukan (Physalis minima Linn.) dengan

diperoleh SDMD 100 %. Kemudian pada

konsentrasi 4% b/v dengan volume 1 mL

SDMD 100 %

tadi tambahkan PBS

secara oral setiap hari selama 6 hari.

dengan volume sama hingga diperoleh

Selanjutnya pada hari kelima setelah

suspensi SDMD 50 %. Siapkan antigen

imunisasi, darah Mencit diambil secara 356

volume

0,1

mL/ekor

secara



intrakardial.

menggunakan spoit.

Kelompok III

Pengujian Aktivitas IgM


Darah yang telah diambil selanjutnya


dibiarkan menggumpal pada suhu kamar

dengan

secara

selama 1-2 jam, selanjutnya disentrifus


dengan kecepatan 3000 rpm selama 10


menit dan diambil serumnya (supernatan).


Serum


”double dilution” 1/4, 1/8, 1/16, 1/32,


1/64, 1/128, 1/1256 dan 1/1512 dengan


PBS, sebanyak 50 L untuk setiap sumur

imunisasi, darah Mencit diambil secara

pada piring mikrotitrasi (wheel Plate 96)

intrakardial.

selanjutnya pada tiap sumur ditambahkan

Kelompok IV

50 L suspensi sel darah merah domba 2%

volume

0,1

mL/ekor

selanjutnya

diencerkan

secara


lalu diaduk rata (digoyang-goyang) selama


5 menit. Selanjutnya diinkubasi pada 370 C

dengan

secara

selama 60 menit dan didiamkan semalam


pada suhu kamar. Dilakukan pengamatan


pengenceran tertinggi dari serum darah


mencit yang masih dapat mengaglutinasi


sel darah merah domba.


Pengumpulan dan Analisis Data

volume

0,1

mL/ekor


Data pengamatan yang diperoleh,

imunisasi, darah Mencit diambil secara

diolah berdasarkan hasil aglutinasi dan

intrakardial.

dianalisis.

Teknik Pengambilan Sampel Darah Pengambilan sampel darah mencit

HASIL PENELITIAN

secara intrakardial pada jantung dengan Perlakuan Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

Kontrol 1/8 1/8 1/8

Aglutinasi Titer IgM Ciplukan 4% Ciplukan 8% 1/32 1/128 1/32 1/128 1/32 1/128

357

Ciplukan 12% 1/64 1/64 1/64

Jurnal Kesehatan


Data uji aktivitas immunoglobulin M

imunostimulator.

(IgM) setelah pemberian ekstrak etanol

Injeksi suatu substansi asing ke

daun Ceplukan (Physalis minima Linn.)

dalam binatang yang mampu membuat

4%, 8% dan 12% b/v berdasarkan titer im-

respon imun akan menghasilkan antibodi

munoglobulin M (IgM) pada mencit jantan

spesifik

5 hari setelah diberikan SDMD 2% dapat

sesudah beberapa waktu berlangsung.

dilihat pada tabel.

Imunogen tersebut akan menyebabkan

yang

muncul

dalam

serum

pengiriman sinyal pada sel-sel

yang

bertugas untuk membuat antibodi. Antigen

PEMBAHASAN Imunoglobulin merupakan substansi

yang digunakan dalam penelitian ini

molekul dalam serum yang menetralkan

adalah sel darah merah domba (SDMD)

dan

atau

karena merupakan antigen yang terbaik

infeksi.

untuk pengujian produksi antibodi pada

menghancurkan

mikroorganisme

antigen

penyebab

Molekul ini dibentuk oleh sel B dalam dua

hewan

bentuk yang berbeda yaitu sebagai reseptor

SDMD dari antigen yang lain adalah

permukaan untuk antigen dan sebagai

SDMD mudah diperoleh dalam suspensi

antibodi yang disekresikan ke dalam cairan

yang uniform dan dapat diukur, cukup

ekstraseluler.

stabil dan lisisnya dapat dilihat dengan

Imunoglobulin

memiliki

percobaan

mencit,

banyak persamaan dalam hal struktur dan

mudah.

sifat biologiknya, berbeda dalam susunan

aglutinasi yaitu pengenceran tertinggi dari

asam amino yang membentuk molekulnya.

serum

Antibodi yang dibentuk sebagai reaksi

memberikan

terhadap

Aglutinasi

salah

satu

jenis

antigen

Pengamatan

keutamaan

darah

dengan

mencit reaksi

terjadi

melihat

yang

masih

aglutinasi

positif.

bila

antigen

yang

mempunyai susunan asam amino yang

berbentuk partikel direaksikan dengan

berbeda dengan antibodi yang dibentuk

antibodi spesifik. Antibodi tersebut disebut

terhadap antigen lain dan masing-masing

spesifik

hanya dapat berikatan dengan antigen yang

antigen yang merangsang produksinya.

relevan dan antibodi berfungsi sebagai

Gumpalan yang terbentuk antara antigen

adaptor yang mengikat antigen melalui

dan antiserum spesifik akan bersatu dan

binding sitenya yang spesifik.

akhirnya mengendap sebagai gumpalan-

Ceplukan

mengandung

jika

hanya

bereaksi

dengan

asam

gumpalan besar dan mudah terlihat dengan

klorogenat, asam citrun, fisalin, alkaloid

cairan di atasnya tetap jernih. Hal ini

dan polifenol. Menurut Wagner, senyawa

terjadi karena pada umumnya antibodi

alkaloid, polifenol dan plavonoid bersifat

memiliki lebih dari satu reseptor pengikat 358



antigen sehingga antibodi bereaksi dengan

tertinggi pada konsentrasi 8% b/v dimana

molekul

mungkin

titer naik enam belas tingkat pengenceran

berikatan dengan salah satu molekul

dibanding kontrol tetapi seiring dengan

antibodi

peningkatan

konsentrasi

ekstrak,

titer

mengalami

penurunan

bahkan

pada

antigen dan

lain

yang

terbentuklah

gumpalan.

Reaksi aglutinasi dibantu oleh suhu yang tinggi

(370C),

oleh

yang

pemberian dengan konsentrasi 12% b/v

menambah kontak antigen dan antibodi

titer yang diperoleh hanya sebesar delapan

(misalnya

dan

tingkat pengenceran dibanding kontrol.

memusing) dan dengan adanya larutan

Hal ini diduga disebabkan karena respon

yang

imun

mengocok,

mengandung

gerakan mengaduk garam

(PBS)

menyebabkan berkumpulnya gumpalan.

sangat

ditentukan

kesetimbangan

Bila antigen pertama kali masuk ke

jumlah

oleh

antigen

dan

antibodi. Apabila jumlah dari antigen atau

dalam tubuh, terjadilah respon imun primer

antibodi

yang ditandai dengan dihasilkannya IgM

diantaranya

beberapa

pembentukan antibodi akan terganggu.

hari

setelah

pemaparan.

Sebaliknya IgG mulai diproduksi 6 – 7 hari

tidak

seimbang

(salah

berlebihan)

Berdasarkan

satu maka

pengamatan

setelah pemaparan antigen oleh karena itu

pengenceran tertinggi dari serum darah

pengambilan darah untuk pengukuran IgM

mencit yang masih dapat mengaglutinasi

dilakukan 5 hari setelah pemberian SDMD

sel

atau pemaparan antigen.

memperlihatkan bahwa pemberian ekstrak

Dari aglutinasi,

hasil

pengamatan

menunjukan

titer

darah

merah

domba

2%

etanol daun Ceplukan memberikan efek

peningkatan

terhadap

peningkatan

aktivitas

aktivitas imunoglobulin M (IgM). Hal ini

Imunoglobulin M (IgM) dan peningkatan

dapat dilihat pada kelompok perlakuan

aktifitas Imunoglobulin M (IgM) karena

pemberian ekstrak etanol daun Ceplukan

terjadi peningkatan titer.

(Physalis

minima

Linn.)

dengan

konsentrasi 4%, 8% dan 12% b/v titer

PENUTUP

imunoglobulin

Kesimpulan

rata-rata

masing-masing

sebesar 1/32, 1/128 dan 1/64 sedangkan

Ekstrak

etanol

Ceplukan

kelompok perlakuan kontrol, rata-rata titer

(Physalis

imunoglobulinnya hanya 1/8.

meningkatkan aktivitas Imunoglobulin M

Titer imunoglobulin M (IgM) dari

(IgM).

minima

daun

Konsentrasi

minimal

ceplukan

yang

dapat ekstrak

serum darah mencit yang diberikan ekstrak

etanolik

daun Ceplukan mengalami peningkatan

meningkatkan aktivitas IgM pada mencit 359

daun

Linn.)

dapat

Jurnal Kesehatan


adalah 4%, 8% dan 12%.

Siyok, D., “Morel Berry, Obat Kencing Manis”, (http : // www.dayakologi.com./kr/ ind/2002/87/kesehatan.html. Diakses 31 Januari 2012). Soekamanto, A., M.A. Subroto, H. Wijaya dan P. Simanjuntak., 2010. Anticancer activity for extracts of sarang semut plant (Myrmecodia pendens) to HeLa and MCM-B2 cells, Pakistan J. Biol. Sci., 13(3): 148-151. Wijayakusuma, H., (2004), Bebas Diabetes Mellitus ala Wijayakusuma, Penerbit Puspa Swara, Jakarta. Winarno, M., (2003), ”Penelitian Aktivitas Biologik Infus Benalu Teh (Scurulla atropurpurea Bl. Danser) Terhadap Aktivitas Sistem Imun Mencit”, Http://www.kalbefarma.com, diakses 20 Desember 2011.

Ucapan Terima Kasih Terima kasih penulis haturkan kepada Rektor Universitas Muslim Indonesia (UMI) Makassar dan Kepala LP2S Universitas Muslim Indonesia (UMI) Makassar DAFTAR PUSTAKA Abbas, K.A., Lichtman, A.H. dan Pillai, S., 2007, Celluler and Moleculer Immunology 6th Ed, Saunders, USA. Baratawidjaja, K. G., 2004, Imunologi Dasar, edisi ke-5, Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta. Ma’at, S., 2010, Imunomodulator Manfaat dan Bahayanya, dalam Seminar Nasional Farmasi 2010, Stipar ’’Yayasan Pharmasi, Semarang. 26.

360

IDENTIFIKASI AKTIVITAS IMUNOGLOBULIN M (IG.M) EKSTRAK ETANOLIK DAUN CEPLUKAN (Physalis Minima Linn.) PADA MENCIT

Recommend Documents