FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 Clone EP17/EP30 Ready-to-Use (Link) Kód: IR094 Felhasználási terület
In vitro diagnosztikai alkalmazás. A FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, Ready-to-Use (Link) az Autostainer Link készülékkel végzett immunhisztokémiai felhasználásra szolgál. A citokeratin 8/18 ellenes antitestek hasznosak lehetnek epithelialis eredető daganatok azonosításában (1). A festıdés, illetve a festıdés hiányának klinikai értékelését morfológiai vizsgálatokkal kell kiegészíteni megfelelı kontrollok alkalmazása mellett, és a páciens kórtörténetének és egyéb diagnosztikai vizsgálati eredményeinek figyelembevételével patológus szakorvosnak kell végeznie.
Az antigén szinonimái
Keratin 8/18 (K8/18) (1), CK8/18 (2).
Összegzés és magyarázat
A citokeratin 8/18 (CK8/18) az intermedier filamentumok családjába tartozik, amely heteropolimer fehérjék egy változatos csoportja, és 54 különbözı génbıl áll. A citokeratin polipeptidek (CK-k) savas (I. típusú) és neutrálisbázikus (II. típusú) alcsaládokba oszthatók. Az I. és II. típusú polipeptidek egy párt alkotva építik fel az érett tetramer heteropolimert. A CK18 egy 45 kDa-os CK, amely a I. típusú, savas CK alcsaládhoz tartozik, amely jellemzıen az 54 kDa-os, II. típusú CK8 citokeratinnal kapcsolódik. A CK8/18 együtt az alacsony molekulasúlyú citokeratinok egyikét (LMW-CK) építik fel. A CK8/18 az egyszerő, nem többrétegő epitheliumokban, az átmeneti epithelium bazális és felszíni sejtjeiben, az összetett epitheliumok luminalis/szekretoros sejtjeiben, valamint a mezotéliumban expresszálódik, illetve jelen lehet bizonyos mesenchymális sejttípusokban is (1). Egy adott sejtben egy citokeratincsalád több tagja is expresszálódhat, és azok a sejttípusra, valamint a differenciáltsági állapotra jellemzıek (1). Majdnem minden epithelialis eredető karcinóma és mezotelióma expresszál CK8/18-at (2), és így a CK8/18 ellenes antitestek hasznos segítséget nyújtanak az ismeretlen eredető tumorok és a gyengén differenciált karcinómák osztályozásában (1). A CK8/18 elleni antitestek citoplazma- és/vagy membránfestıdési mintázatot mutatnak. Gyenge fokális expresszió jelen lehet mesenchymalis tumorokban, beleértve a leiomiómákat, a rabdomioszarkómát, a malignus melanómát, a schwannómát, a Ewing szarkómát, a dezmoplasztikus kis kereksejtes tumort, a pikkelysejtes karcinómát és a limfómát (3, 4). Az alábbi témakörök áttekintéséhez lásd a Dako Általános útmutató az immunhisztokémiai festéshez c. kiadványát, vagy az IHC eljárás detektálórendszerének útmutatóját.
Biztosított reagens
Két monoklonális nyúl antitest keveréke, (sejtkultúra felülúszó) 0,015 mol/L nátrium-azidot tartalmazó 0,05 mol/L koncentrációjú Tris-HCl, pH 7,2 oldatban. Ez a termék stabilizáló fehérjét tartalmaz. Clone: EP17/EP30. Izotípus: Nyúl eredető IgG.
Immunogének
CK8: egy szintetikus peptid, amely megfelel a humán citokeratin 8 fehérje C-terminális részén lévı aminosavaknak. CK18: HT-29 sejtekbıl izolált humán citokeratin 18 fehérje.
Specifitás
A CK8/18 két monoklonális antitest koktélja. Az A431 sejtlizátum Western blot vizsgálata során az anti-CK8, EP17 klón egy 52 kDa-ból álló nagyobb sávot ismer fel, amely a CK8 várható molekulatömegének felel meg; és az anti-CK18, EP30 klón egy 45 kDa-os nagyobb sávot ismer fel, amely a CK18 várható molekulatömegének felel meg.
(124422-002)
P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 1/5
Óvintézkedések
Tárolás
Gyors útmutató
1.
Professzionális felhasználóknak.
2.
A termék nátrium-azidot (NaN3) tartalmaz, amely tiszta formában nagyon mérgezı vegyület. Bár a termékben található koncentráció besorolása alapján nem veszélyes, a nátrium-azid reakcióba léphet az ólom és réz vízvezetékekkel, ami során rendkívül robbanékony fém-azid lerakódások alakulhatnak ki. Kiöntéskor, a fém-azidok vezetékekben történı lerakódását megelızendı, nagy mennyiségő vízzel kell leöblíteni.
3.
A biológiai anyagokból elıállított egyéb termékekhez hasonlóan ennél is ügyelni kell a megfelelı kezelési eljárások betartására.
4.
A szemmel és bırrel való érintkezés elkerülésére viseljen megfelelı személyi védıfelszerelést.
5.
A fel nem használt oldatot a helyi és állami hatósági elıírásoknak megfelelıen kell megsemmisíteni.
2-8 °C h ımérsékleten tárolandó. Az üvegen feltüntetett lejárati idı után nem használható fel. Ha a reagenseket a megadottól eltérı körülmények között tárolják, a felhasználónak ellenıriznie kell az adott körülmények megfelelı voltát. A termék instabilitásának nincsenek egyértelmő jelei. Ezért a páciens mintájával együttesen egy pozitív és egy negatív kontrollvizsgálatot is el kell végezni. Ha nem várt festıdés jelenik meg, amely nem magyarázható a laboratóriumi technikákban rejlı eltérésekkel, és antitesttel kapcsolatos probléma gyanítható, forduljon a Dako Mőszaki szolgálatához.
Lépés
Megjegyzések
Fixálás Elıkezelés
Formalin EnVision FLEX™, High pH (kód: K8000/ K8004)
N/A 20 perc HIER, 3 az 1-ben PT Link és PT Link Rinse Station használatakor
Hígítás Hígítópuffer Negatív kontroll Megjelenítés
Használatra kész Elıre hígított FLEX Negative Control, Rabbit (kód: IR600) EnVision™ FLEX, High pH (kód: K8000)
20 perc inkubálás N/A 20 perc inkubálás 20 perc inkubálás, 2x5 perc DAB+ inkubálás
Kontrasztfestés
5 perc inkubálás
Kontroll szövet
EnVision™ FLEX Hematoxylin (kód: K8008/K8018) Normál máj
Lemezek
FLEX IHC Microscope Slides (kód: K8020)
A szövetmetszetek tárgylemezhez való tapadásának elısegítéséhez javasolt.
Rögzítés
Nem vizes, tartós rögzítıszer szükséges
A festést követıen a metszeteket dehidratálni kell, meg kell tisztítani, majd tartós rögzítıszer használatával fel kell vinni a tárgylemezre.
Készülék
Autostainer Link 48
Használja a készülékspecifikus üvegeket (kód: SK200-SK203)
Citoplazma/membránfestıdés
*A felhasználónak mindig el kell olvasnia a terméktájékoztatót a festési eljárásra és a termék kezelésére vonatkozó részletes utasításokért.
Minta-elıkészítés
Paraffinba ágyazott metszetek: Az antitest formalinban fixált, paraffinba ágyazott szövetmetszetek jelölésére alkalmazható. A szövetmintákból körülbelül 4 µm-es metszeteket kell készíteni. Elıkezelés: A formalinnal fixált, paraffinba ágyazott szövetmetszeteket elı kell kezelni hıindukált epitópfeltárási (HIER) technikával. A legjobb eredményeket a szövetek hígított EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kód: K8000/K8004) reagenst alkalmazó HIER technikával történı elıkezelésével lehet elérni. A deparaffinálás, rehidratálás és epitópfeltárás végrehajtható a Dako PT Link (kód: PT100/PT101) használatával. A részleteket illetıen lásd a PT Link Használati útmutatóját. A PT Link készüléknél az alábbi paramétereket kell alkalmazni: Elıhevítési hımérséklet: 65 °C; az epitóp feltáráshoz szükséges h ımérséklet és idı: 97 °C 20 (±1) percre; hőtés 65 °C-ra. Vegye ki a tartóállványt a PT tartály ából, és azonnal merítse a tárgylemezeket hígított, szobahımérséklető EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (kód: K8007) pufferoldatot tartalmazó edénybe/tartályba (pl. a PT Link Rinse Station (kód: PT109) edénybe). Hagyja a metszeteket 1-5 percen át a Wash Buffer pufferben. A szövetmetszeteknek a kezelés, illetve az azt követı immunhisztokémiai festési eljárás során nem szabad kiszáradniuk. A szövetmetszetek tárgylemezhez való tapadásának elısegítésére ajánlott a FLEX IHC Microscope Slides (kód: K8020) tárgylemezek használata. A festést követıen a metszeteket vízmentesíteni kell, meg kell tisztítani a reagens maradványoktól, majd tartós rögzítıszer segítségével fel kell vinni tárgylemezre.
(124422-002)
P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 2/5
Festési eljárás
Megjelenítés: Az ajánlott megjelenítı rendszer az EnVision FLEX, High pH (kód: K8000/K8010), 20 perces, szobahımérsékleten történı inkubációt használva. Kövesse a kiválasztott megjelenítırendszer(ek)hez mellékelt eljárási leírást. Program: A festési lépések és inkubálási idık az Autostainer Link szoftverében elıre be vannak programozva. A javasolt alkalmazandó reagenstérfogat tárgylemezenként 1 x 200 µL vagy 2 x 150 µL. Kérjük, a metszetek és a reagensek behelyezésével kapcsolatos részletes utasításokat illetıen tájékozódjon a megfelelı Autostainer Link készülék Használati útmutatójából. Amennyiben a protokollok nem állnak rendelkezésre az alkalmazott Autostainer Link platformon, kérjük, forduljon a Dako Mőszaki szolgálatához. Az Autostainer Link szoftvertelepítıt megtalálja az alábbi weboldalon: www.dako.com\Installer. A telepítı frissíti a DakoLink szoftvert az Anti-Human CK8/18, Clone EP17/EP30 termékhez tartozó protokollal és reagensinformációval. Az antitest protokoll rövid neve: CK8/18. Valamennyi inkubálási lépést szobahımérsékleten kell végezni. Kontrasztfestés: A javasolt kontrasztfesték az EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (kódok: K8008/K8018). Az optimális eredmény elérése érdekében nem vizes alapú, tartós rögzítıszer használata ajánlott. Kontrollok: Egyidejőleg pozitív és negatív kontrollokat is vizsgálni kell, ugyanazt a protokollt alkalmazva, mint a páciensmintákhoz. A pozitív kontrollszövetnek tartalmaznia kell normál májszövetet, és a sejteknek/struktúráknak a „Teljesítményjellemzık” részben az adott szövettípusra vonatkozóan ismertetett reakciómintázatot kell mutatniuk. Az ajánlott negatív kontroll reagens a FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (kód: IR600).
Festés értelmezése
A sejtfestıdési mintázat citoplazmatikus / membránhoz kötıdı.
Teljesítményjellemzık
Normál szövetek: Az epithelium sejtek közepes–erıs citoplazmatikus és/vagy membránhoz kötıdı festési reakciót mutatnak (5). Meg kell jegyezni, hogy a retikuláris sejtek festıdése elıfordulhat a limfoid szövetekben.
(124422-002)
Szövettípus (vizsgált #) Mellékvese (3) Csontvelı (3) Emlı (3)
Pozitív szövetelemek 3/3 0/3 3/3
Szövettípus (vizsgált #) Hasnyálmirigy (3) Mellékpajzsmirigy (3) Agyalapi mirigy (3)
Pozitív szövetelemek 3/3 3/3 1/3
Kisagy (3)
0/3
Prosztata (3)
3/3
Nagyagy (3)
0/3
Nyálmirigy (3)
3/3
Méhnyak (3)
1/3
Vázizom (3)
0/3
Vastagbél (3)
3/3
Bır (3)
3/3
Nyelıcsı (3)
3/3
Vékonybél (3)
3/3
Szív (3)
0/3
Lép (3)
3/3
Vese (3)
3/3
Gyomor (3)
3/3
Máj (3)
3/3
Here (3)
2/3
Tüdı (3)
3/3
Csecsemımirigy (3)
3/3
Mezoteliális sejtek (3)
2/3
Pajzsmirigy (3)
3/3
Perifériás ideg (3)
0/3
Mandula (3)
3/3
Petefészek (3)
3/3
Méh (3)
1/3
P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 3/5
Abnormális szövetek: Az epithelium sejtek közepes–erıs citoplazmatikus és/vagy membránhoz kötıdı festési reakciót mutatnak (41/56) (6). Szövettípus (vizsgált #) Hepatocelluláris karcinóma (3) Világossejtes vesekarcinóma (3) Papilláris vesekarcinóma (3)
Pozitív szövetelemek 3/3
Szövettípus (vizsgált #) Melanóma (3)
Pozitív szövetelemek 0/3
3/3
1/3
3/3
Differenciálatlan karcinóma (3) Leiomioszarkóma (1)
0/1
Tüdı adenokarcinóma (2)
2/2
Rabdomioszarkóma (1)
0/1
Tüdı pikkelysejtes karcinóma (1) Kissejtes tüdıkarcinóma (3)
1/1
Intesztinális karcinoid (2)
2/2
3/3
Ovarium karcinóma (2)
2/2
Gyomor adenokarcinóma (3)
3/3
Fibrotikus szövet (2)
0/2
Hasnyálmirigy adenokarcinóma (3) Pajzsmirigy papilláris karcinóma (3) Emlı ductalis karcinómája (3) Emlı lobuláris karcinómája (3) Prosztata adenokarcinóma (3) Vastagbél adenokarcinóma (3)
3/3
Teratóma - érett (1)
0/1
3/3
Teratóma - éretlen (1)
0/1
3/3
Leiomióma (2)
1/2
3/3
0/2
2/3
Diffúz nagy B-sejtes limfóma (2) T-sejtes limfóma (2)
3/3
Follikuláris limfóma (2)
0/2
0/2
Irodalomjegyzék 1. 2. 3. 4. 5. 6.
Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol 2008;129: 705-33. Dabbs DJ. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia,PA: Churchill Livingstone, 2002. Adams H, Schmid P, Dirnhofer S, Tzankov A. Cytokeratin expression in hematological neoplasms: A tissue microarray study on 866 lymphoma and leukemia cases. Pathol Res Pract 2008;204:569-73. Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis (review). Semin Cancer Biol 1990; 1:165-79. Yu J. Report of Normal Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30. 2013. Report on file, D19056. Yu J. Report of Cancer Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30. 2013. Report on file, D19756.
Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 (CK8/18), Clone EP17/EP30 has been created by Epitomics Inc., using Epitomics’ proprietary rabbit monoclonal antibody technology covered under Patent Nos 5,675,063 and 7,402,409.
(124422-002)
P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 4/5
Kiadás dátuma: 14/04
(124422-002)
P02832HU_02_IR094/2013.12 o. 5/5
