HODNOCENÍ KVALITY CERVIKÁLNÍHO HLENU
Řešitel: Ing. Jan Beran Spoluřešitelé: prof. Ing. Ladislav Štolc, CSc. Ing. Jaroslava Trnovská FOND ROZVOJE VYSOKÝCH ŠKOL – č. projektu 2395/2011/G4
© Katedra speciální zootechniky, FAPPZ, ČZU v Praze
Úvod • Vyšetření hlenu děložního krčku (cervikálního hlenu hraje u skotu významnou úlohu v prevenci poruch zabřezávání. • Je jedním z hlavních ukazatelů probíhající říje. • Může upozornit na některé hormonální poruchy, metabolické poruchy a zánětlivé procesy. • Včasným zachycením těchto změn je možno předat takové plemenice dříve k léčení a zamezit vzniku chronických a těžko léčitelných onemocnění.
Metody hodnocení cervikálního hlenu • Subjektivní metody: charakter hlenu tažnost • Objektivní metody: množství stanovení pH obsah acetonu obsah močoviny arborizace (krystalizace) test přežitelnosti spermií v hlenu
Subjektivní metody • Podle charakteru hlenu je možno přibližně určit údobí říje a prognózu provedení inseminace podle následujících kritérií: začátek říje charakter hlenu
střed říje
konec říje
čirý, vodnatý, vazký, lesklý, hustý, lepkavý, volně vytéká sklovitý, visí někdy krvavý
tažnost hlenu není
kolem 30 cm mizí
Subjektivní metody • Výraznější zákal hlenu poukazuje na zvýšenou přítomnost leukocytů při zánětlivých procesech – později se objevují bělavé, žlutavé, nazelenalé nebo hnědočervené vločky hnisu. • Změny konzistence poukazují na hormonální nebo metabolické poruchy. • Do cervikálního hlenu mohou pronikat různé toxické látky, které mohou působit spermiotoxicky.
Princip krystalizace • Zvýšená hladina estrogenů v krvi způsobí krystalizaci některých tělních tekutin: - (sliny, nosní sekret, slzy a hlen děložního krčku) • -
Podle krystalizace hlenu posuzujeme: Fyziologický průběh říje Hladinu estrogenů Metabolické poruchy, minerální poruchy Zánětlivé procesy
Praktické využití krystalizace hlenu • Specifická krystalizace hlenu děložního krčku – určení optimální doby pro inseminaci • Největší pravděpodobnost pro zabřeznutí je při kapraďovité krystalizaci • Při atypické krystalizaci je pravděpodobnost minimální
Hodnocení krystalizace
Arborizace (krystalizace)
Arborizace (krystalizace)
Nikon® Eclipse E200
Větvičkovitá krystalizace - proestrus
Větvičkovito – plavuňovitá krystalizace
Plavuňovitá krystalizace 1. polovina říje
Smíšené formy • Větvičkovito – plavuňovito – kapraďovitá krystalizace
• Plavuňovito – kapraďovitá krystalizace
Kapraďovitá krystalizace – 2. polovina říje (nejvhodnější)
Zbobtnalá krystalizace – (po skončení říje)
Atypická krystalizace (při metabolických poruchách)
Celularizace (při zánětech)
Test přežitelnosti spermií v cervikálním hlenu • Provádí se v případech poklesu plodnosti plemenic v chovu skotu. • Indikací těchto vyšetření je: - nízká březost po 1. i všech inseminacích, - přebíhání plemenic v prodloužených intervalech s podezřením na ranou embryonální mortalitu (v důsledku neadekvátní výživy nebo přívodu toxických látek do metabolismu plemenic)
Test přežitelnosti s permií v cervikálním hlenu
Test přežitelnosti spermií v cervikálním hlenu
Termoblock FALC® pro dva bloky analogový
Test přežitelnosti spermií v cervikálním hlenu
Množství
TB – 224A od firmy Denver Instrument®
pH
pH metr
pH metr 330i od firmy WTW
Měření pH
pH metr 330i od firmy WTW
Obsah acetonu • Stanovení obsahu acetonu – na plynové chromatografii, hade-space metodou • Příprava vzorku: – navážení vzorku cervikálního hlenu do 20 ml hade-space vialky – přidáme 10 ml nasyceného roztoku NaCl – vialky ponoříme do vodní lázně vytemperované na 70°C na dobu 1 hodiny
Obsah acetonu • Vlastní měření: – po vyjmutí vialek z lázně odpipetujeme 5 µl plynu z horní části vialky pomocí gas mikropipety do injektoru • Teplotní režim injektoru: – 50°C (1 minuta), po 10°C/1 min. až do 55°C – 30 metrová kolona typu FAMEWAX
Obsah acetonu • Vyhodnocení obsahu acetonu ve vzorku: – pro detekci vzorku se použije detektor FID – výsledky: vyhodnoceny v závislosti na kalibrační acetonové řadě programem Clarity
Obsah acetonu
plynový chromatograf (GLC) Master GC od firmy Dani®
Obsah acetonu – příprava vzorků
Obsah acetonu – příprava vzorků
Obsah acetonu – měření vzorků
Obsah acetonu – měření vzorků
Obsah acetonu - vyhodnocení [mV] C:\Documents and Settings\Okrouhla\data\aceton2010\aceton12042011\std36504 C:\Documents and Settings\Okrouhla\data\aceton2010\aceton12042011\std36512 20
1,273 aceton 1
voltage
15
10
1,0
1,1
1,2
1,3
1,4 Time
1,5
1,6
1,7 [min.]
Obsah acetonu - vyhodnocení [V] C:\Documents and Settings\Okrouhla\data\aceton2010\aceton12042011\std36504 C:\Documents and Settings\Okrouhla\data\aceton2010\aceton12042011\std36512
0,8
voltage
0,6
0,4
1,27 aceton 1
0,2
0,0
0
1
2
3 Time
4 [min.]
Obsah močoviny • Stanovení obsahu močoviny – spektrofotometrická metoda – upravená metodika pro stanovení močoviny v odpadní vodě (Katedra chemie ČZU v Praze, Ing. Matyáš Orsák, Ph.D.) • Příprava chemikálií: – Diacetylmonooxim (DMO) – 2,5 g rozpustit ve 100 ml vody – Thiosemikarbazid (TSC) – 0,25 g rozpustit ve 100 ml vody – Směs kyselin (SK) – 300 ml 85% H3 P04 + 10 ml H2SO4 – doplnit na 500 ml vody – Směsné činidlo – 10 ml DMO + 4 ml TSK + 200 ml SK – zásobní standard – 0,25 g močoviny do 500 ml – pracovní standard – 20x naředit – např. 5 ml do 100 ml
Obsah močoviny • Příprava vzorku: – navážení vzorku cervikálního hlenu do kádinky – nařědění 5 ml destilované vody – homogenizace vzorku – do 25 ml odměrné baňky napipetujeme 0,5 ml zhomogenizovaného vzorku a doplníme destilovanou vodou na objem 5 ml
Obsah močoviny • Příprava kalibrační řady – do 25 ml odměrných baněk se pipetuje: stand. roztok [ ml ]
dest. voda [ ml ]
konc. močoviny [ µg ]
0
5
slepý pokus
0,5
4,5
12,5
1
4,0
25,0
2
3
50,0
3
2
75,0
4
1
100,0
5
0
125,0
Obsah močoviny • Měření vzorku: – do všech baněk (včetně kalibračních vzorků a slepého pokusu) přidáme 15 ml činidla – baňky vložíme do sušárny vyhřáté na 120°C – po 40 min. baňky vyjmeme, ochladíme na 20°C a doplníme destilovanou vodou po rysku (na celkový objem 25 ml) – promícháme a měříme na spektrofotometru v 1 cm kyvetě při vlnové délce 528 nm – sestrojíme kalibrační křivku, hodnoty močoviny ve vzorku odečteme a přepočítáme na mg/l
Obsah močoviny - homogenizace
Silent Crusher M, Heidolph Instruments®
Obsah močoviny - měření
spektrofotometr Genesys 10vis
Obsah močoviny - měření
spektrofotometr Genesys 10vis
Obsah močoviny - měření
spektrofotometr Genesys 10vis
Zdroje • Hegedüšová, Z. a kol. (2010). Detekce říje v chovech skotu – cesta ke zlepšení úrovně reprodukce. Agrovýzkum Rapotín, s. r. o., ISBN: 978-80-87144-21-3. • Louda, F. a kol. (2001). Inseminace hospodářských zvířat se základy biotechnických metod. ČZU v Praze, ISBN: 80-213-0702-1. • Rob, O. a Stehlík, I. (1983). Cvičení z reprodukce hospodářských zvířat II. VŠZ v Praze. • Fotografie: Ing. Jan Beran Ing. Monika Okrouhlá, Ph.D.
