Diagnostická účinnost měření mědi v biologických materiálech u Wilsonovy choroby
M.Holečková1, M.Michajlíková1, B.Friedecký1, P.Dědek2 ÚKBD1, Dětská klinika2, Fakultní nemocnice, Hradec Králové Sympozium FONS, Pardubice, 23.-25.9.2012
Metabolismus mědi {
{
{
{
Absorpce Cu v tenkém střevě ve formě vazby na metalothionein, kompetice se zinkem Cu vazaná na albumin a transkuprein je transportována krví, vychytávána hepatocyty V játrech se měď zabuduje do metalothioneinu a ceruloplasminu CPL (90%), Cu vázaná na CPL je transportována krví do cílových tkání Exkrece Cu stolicí, močí, žlučí
Význam mědi v organismu {
{
{
{
součástí řady enzymů (aminooxidázy, cytochrom-c-oxidázy, Cu,Zn-SOD) antioxidační působení spolu s Fe nezbytná pro syntézu hemoglobinu, kolagenu součást faktoru V při srážení krve
Wilsonova choroba (WD) {
genetické autozomálně recesivní onemocnění způsobené poruchou metabolismu mědi (mutace genu ATP 7B)
{
kumulace Cu nejprve v játrech, později v rohovce a nakonec v bazálních gangliích CNS
{
bez terapie je fatální
{
v časných fázích vývoje je účinně léčitelná
{
prevalence 1 : 30 000
Klinický obraz Wilsonovy choroby {
{
{
{
Asymptomatická forma <10 let zvýšené hodnoty jaterních enzymů Hepatální forma > 10 let obraz akutní nebo chronické hepatitidy až jaterní cirhózy, fulminantní průběh Neurologická forma > 18 let anatomické změny v CNS postiženy somatosenzorické funkce - tremor, dyskoordinace - písmo, oblékání Oftalmologie - Kayser-Fleischerův prstenec
Terapie Wilsonovy choroby Dieta, léky – cílem je odstranění nahromaděné Cu v organismu, snížení její toxicity
{
Penicilamin – chelační látka, tvorba komplex s Cu v postižených orgánech, vylučován močí, rychlý nástup účinku – indukuce tvorby metalothioneinu v játrech, váže Cu do netoxické formy Zn - indukce tvorby metalothioneinu v buňkách sliznice GIT, blokuje resorpci Cu střevní sliznicí a zvyšuje tak vyloučení Cu stolicí - indukce tvorby metalothioneinu v játrech {
Transplantace jater u fulminantních stádií
Diagnostika Wilsonovy choroby { { { {
{ {
{
jaterní enzymy Cu a ceruloplasminu v séru Cu v moči test s použitím penicilaminu, kdy po jeho p.o. podání dojde k výraznému zvýšení vylučování Cu močí Cu v jaterní tkáni (z jaterní biopsie) histologické a elektromikroskopické vyšetření jaterní tkáně genetické vyšetření (potvrzení mutace genu ATP 7B)
Metodika {
CPL imunoturbidimetrické stanovení, Modular, Roche
Cu AAS DUO 280Z+240FS, Varian - plamenová technika (sérum) - elektrotermická technika {
Zeemanova korekce pozadí
(moč, jaterní biopsie)
{
Statistické hodnocení MedCalc, Belgie
Spolehlivost měření Cu {
Externí hodnocení kvality
SEKK RfB (Referenzinstitut für Bioanalytik, Bonn) {
Vnitřní kontrola kvality
kontrolní materiály: Bio-Rad Serum (FAAS) Bio-Rad Urine (ETAAS) CRM 185 Bovine Liver (ETAAS)
Období 1 rok: 40 stanovení CV 7-11% BIAS do 8%
Soubor pacientů {
{
{
100 pacientů s diagnózou Wilsonovy choroby získaných z 5 krajů ČR Brno, Olomouc, Ostrava, Plzeň, HK (průměrný věk 13,3 let ± 5,1) 131 pacientů s hepatopatiemi jiné etiologie (průměrný věk 13,8 let ± 3,8 ) porovnali jsme výsledky obou souborů a diagnostickou účinnost laboratorních testů jsme ověřili ROC analýzou
Výsledky Analyt
Počet měření
S CPL
100
S Cu
99
U Cu baz
92
U Cu baz
88
bez fulminantních
U Cu PNCA
44
Cu liver
74
Průměr ± SD
P
Hepatopatie
Wilson
0,26 ± 0,08
0,15 ± 0,09
g/l
g/l
17,6 ± 5,43
11,2 ± 6,07
umol/l
umol/l
0,5 ± 0,55
11,4 ± 53,47
umol/24
umol/24
0,5 ± 0,55
2,3 ± 1,4
umol/24
umol/24
5,2 ± 2,93
16,3 ± 11,18
umol/24
umol/24
54,7 ± 45,9
860,5 ± 463,5
ug/g s.t.
ug/g s.t.
< 0,0001 < 0,0001 0,0523 < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001
Výsledky – ROC analýza Analyte
Cut-off optim.
Senzitivity Specificity Plocha pod ROC % %
+PV
-PV
Cu liver ≥ 261,25
98,6
99,1
0,998
98,6
99,1
U Cu baz
≥ 0,75 umol/24
95,7
85,2
0,956
83,8
96,1
S CPL
≤ 0,2 g/l
83,0
77,6
0,863
76,1
84,1
S Cu
≤ 13,8 umol/l
82,8
77,0
0,839
78,1
81,9
U Cu PNCA
≥ 9,25 umol/24
70,6
93,2
0,837
94,1
67,2
ug/g s.t.
Výsledky - ROC analýza 100
Sensitivity
80
Bio Cu U_Cu_bazal S CPL S Cu U_Cu_PNCA
60
40
20
0 0
20
40
60
100-Specificity
80
100
Diagnostický postup při podezření na Wilsonovu chorobu ve FN HK {
{
1.krok bazální odpad Cu v moči /24 hod 2.krok stanovení obsahu Cu v jaterní biopsii
{ {
{
histologie, elektronová mikroskopie penicilaminový test nepřináší další výhody genetické vyšetření – potvrzení diagnózy, rodinný screening (negativní vyšetření nevylučuje diagnózu WN)
Závěr {
{
{
plocha pod křivkou ROC, která kvantifikuje klinickou efektivitu testu, byla největší u stanovení Cu v jaterní tkáni stanovení Cu v jaterní tkáni lze považovat společně s genetickými metodami za diagnostický zlatý standard biochemická laboratoř tak přístrojově, metodicky i personálně významně přispívá ke správné diagnostice Wilsonovy choroby a její úspěšné léčbě
Děkuji za pozornost http://ukbd.fnhk.cz/
