BUKU PANDUAN PRAKTIKUM REPRODUKSI IKAN
NAMA
:
NIM
:
KELOMPOK
:
PROGRAM STUDI BUDIDAYA PERAIRAN FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2017
i
KATA PENGANTAR
Syukur Alhamdulillah kami panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala limpahan Rahmat dan Karunia-Nya, sehingga Buku Panduan Praktikum Reproduksi Ikan ini dapat disusun. Memahami
akan
kekurangan
dan
keterbatasan
referensi
dalam
pelaksanaan praktikum Reproduksi Ikan, maka kami menyajikan suatu pedoman pelaksanaan praktikum yang pada dasarnya dirangkum dari berbagai referensi untuk menuntun praktikan. Buku ini merupakan revisi dan pembaruan dari penuntun-penuntun praktikum Reproduksi Ikan terdahulu (non-publicated). Besar harapan bahwa Buku Panduan Praktikum ini dapat bermanfaat bagi praktikan dan berbagai pihak. Kami menyampaikan rasa terima kasih yang sebesar-besarnya kepada pihak-pihak yang secara langsung maupun tidak langsung telah membantu dalam penyelesaian buku ini. Menyadari akan keterbatasan yang kami miliki, maka kami sangat mengharapkan saran atau kritik konstruktif bagi penyempurnaan buku panduan ini untuk kepentingan Praktikum Reproduksi Ikan yang akan datang.
Malang, 1 Maret 2017
TIM ASISTEN REPRODUKSI IKAN
ii
DAFTAR ISI
Halaman KATA PENGANTAR ........................................................................................... ii DAFTAR ISI ........................................................................................................iii TATA TERTIB PRAKTIKUM............................................................................... vi 1. PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang ........................................................................................... 1 1.2 Maksud dan Tujuan .................................................................................... 1 1.3 Waktu dan Tempat ..................................................................................... 2 2. TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Definisi Reproduksi..................................................................................... 3 2.2 Alur Hormonal Reproduksi.......................................................................... 3 2.3 Hormon-Hormon Reproduksi ...................................................................... 4 2.3.1 Releasing Hormone ............................................................................. 4 2.3.2 Gonadotropin Hormone ....................................................................... 5 a. FSH (Follicle Stimulating Hormone) ..................................................... 5 b. LH (Luteinizing Hormone) .................................................................... 6 c. ICSH (Interstitial Cell Stimulating Hormone) ........................................ 6 2.3.3 Steroid Hormone.................................................................................. 7 a. Definisi................................................................................................. 7 b. Macam-macam Steroid Hormone ........................................................ 7 2.4 Determinasi Seks ....................................................................................... 8 2.4.1 Seks Primer ......................................................................................... 8 2.4.2 Seks Sekunder .................................................................................... 9 2.4.3 Ciri-Ciri Matang Gonad ........................................................................ 9 a. Jantan.................................................................................................. 9 b. Betina ................................................................................................ 10 2.5 Histologi Gonad ........................................................................................ 10 2.5.1 Pengambilan Gonad Ikan .................................................................. 10 2.5.2 Fixation .............................................................................................. 11 2.5.3 Dehidration ........................................................................................ 11 2.5.4 Clearing ............................................................................................. 12 2.5.5 Embedding dan Blocking ................................................................... 12 2.5.6 Sectioning dan Peletakan pada Gelas Objek ..................................... 13 2.5.7 Staining dan Penutupan..................................................................... 13 iii
3. METODE PRAKTIKUM 3.1 Determinasi Seks ..................................................................................... 15 3.1.1 Ikan Nila (Oreochromis niloticus) ....................................................... 15 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 15 b. Skema Kerja ...................................................................................... 15 3.1.2 Ikan Lemon (Labidochromis caeruleus) ............................................. 16 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 16 b. Skema Kerja ...................................................................................... 16 3.1.3 Belut Sawah (Monopterus albus) ....................................................... 16 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 16 b. Skema Kerja ...................................................................................... 17 3.1.4 Udang Vannamei (Litopenaeus vannamei) ........................................ 17 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 17 b. Skema Kerja ...................................................................................... 18 3.1.5 Kepiting (Scylla sp.) ........................................................................... 18 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 18 b. Skema Kerja ...................................................................................... 18 3.2 Histologi Gonad ........................................................................................ 19 3.2.1 Pengambilan Gonad Ikan .................................................................. 19 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 19 b. Skema Kerja ...................................................................................... 19 3.2.2 Fixation .............................................................................................. 19 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 19 b. Skema Kerja ...................................................................................... 20 3.2.3 Dehidration ........................................................................................ 20 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 20 b. Skema Kerja ...................................................................................... 20 3.2.4 Clearing ............................................................................................. 21 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 21 b. Skema Kerja ...................................................................................... 21 3.2.5 Embedding dan Blocking ................................................................... 21 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 21 b. Skema Kerja ...................................................................................... 22 3.2.6 Sectioning dan Peletakan pada Gelas Objek ..................................... 22 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 22 b. Skema Kerja ...................................................................................... 22 3.2.7 Staining dan Penutupan..................................................................... 23 a. Alat dan Bahan .................................................................................. 23 b. Skema Kerja ...................................................................................... 23 DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................... 24 DAFTAR NAMA DAN ALAMAT ASISTEN REPRODUKSI IKAN 2017............. 27 iv
v
TATA TERTIB PRAKTIKUM
1.
Datang 15 menit sebelum praktikum dimulai dan tidak ada toleransi keterlambatan
2.
Mengerjakan tiket masuk yang telah ditentukan
3.
Memakai pakaian berkerah, sepatu tertutup dan berkaos kaki
4.
Memakai jas lab sesuai dengan identitasnya
5.
Menonaktifkan hp selama praktikum berlangsung
6.
Menjaga ketertiban dan kelancaran jalannya praktikum
7.
Dilarang makan dan minum selama praktikum berlangsung
8.
Dilarang menggunakan alat-alat yang ada di laboratorium selain yang dipergunakan untuk praktikum
9.
Membawa alat tulis dan obat pribadi
10. Dilarang meninggalkan pratikum tanpa seijin salah satu asisten 11. Menjalankan praktikum dengan baik.
vi
1. PENDAHULUAN
1.1
Latar Belakang Ikan merupakan salah satu makhluk hidup yang masuk dalam kelompok
pisces. Sebagai makhluk hidup, ikan mempunyai ciri-ciri seperti halnya yang dimiliki oleh mkhluk hidup lain. Salah satu ciri-ciri tersebut adalah bereproduksi. Bereproduksi mengakibatkan kehidupan makhluk hidup dapat berlanjut. Untuk melanjutkan keturunan, makhluk hidup melalui suatu proses yang dikenal dengan istilah perkawinan. Reproduksi mempunyai siklus yang membentuk pola reproduksi. Pola reproduksi merupakan gambaran tahapan reproduksi pada waktu tertentu, sedangkan siklus reproduksi, merupakan pola reproduksi yang terjadi secara teratur dan berulang seiring dengan putaran waktu. Pola reproduksi dan siklus reproduksi ditentukan berdasar kajian tahap-tahap kematangan gonad selama kurun waktu tertentu. Setiap spesies ikan memiliki kekhasan tersendiri dalam setiap tahap kematangan gonad, baik dalam struktur histologi jantan dan betina, serta memiliki sifat seksualitas yang berbeda. Seksualitas adalah ciri yang membedakan antara jantan dan betina. Sifat seksualitas terbagi menjadi 2 yaitu Sifat Seksualitas Primer dan Sifat Seksualitas Sekunder. Sifat seksualitas primer Pada ikan ditandai dengan adanya organ yang berhubungan secara langsung dengan proses reproduksi, sedangkan sifat seksualitas sekunder Adalah tanda-tanda luar yang dapat dipakai untuk membedakan ikan jantan dan ikan betina, baik secara dimorfisme maupun dikromatisme.
1.2
Maksud dan Tujuan Maksud dari dilaksanakannya praktikum Reproduksi Ikan yaitu untuk
mengetahui bagaimana determinasi seks rimer dan sekunder serta mengetahui struktur jaringan pada organ reproduksi. Tujuan dilakukannya praktikum Reproduksi Ikan yaitu agar praktikan dapat menambah keterampilan dalam mengetahui kematangan gonad dilihat dari seks primer maupun seks sekundernya, serta mengetahui struktur jaringan pada organ reproduksi. 1
1.3
Waktu dan Tempat Praktikum Reproduksi Ikan dilaksanakan pada tanggal 1 dan 2 April 2017
di Laboratorium Budidaya Ikan Divisi Reproduksi Ikan dan Divisi Parasit dan Penyakit Ikan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Malang.
2
2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1
Definisi Reproduksi Keberhasilan suatu spesies ikan dalam daur hidupnya ditentukan dari
kemampuan anggotanya untuk bereproduksi di lingkungan yang berfluktuasi dan menjaga keberadaan populasinya. Reproduksi sendiri merupakan suatu cara yang dilakukan oleh organisme untuk mempertahankan spesies dengan jalan pembentukan organisme baru oleh organisme yang ada dalam suatu cara yang teratur dan tertentu (Moyle dan Cech, 2004). Menurut Rahardjo et al. (2011), reproduksi pada ikan seperti halnya pada makhluk hidup lainnya, yaitu suatu proses alamiah yang dilakukan ikan untuk melestarikan spesiesnya. Ikan mengembangkan berbagai strategi reproduksi untuk mencapai keberhasilan reproduksi. Organ-organ yang terkait dengan proses reproduksi sangat berperan penting dalam keberhasilan reproduksi. Hal yang mempengaruhi keberhasilan reproduksi pada ikan salah satunya kondisi lingkungan perairan tempat hidup ikan. Perubahan lingkungan akan memberikan efek yang berbeda pada spesies ikan yang berbeda. Beberapa jenis ikan bahkan melakukan perjalan ruaya yang jauh untuk memijah. Sistem endokrin erat kaitannya dalam keberhasilan reproduksi.
2.2
Alur Hormonal Reproduksi Stimulasi Lingkungan
Hormon Steroid
Proses Pematangan
Susunan Syaraf
Ovarium/testis
Prostaglandin
3
Hipotalamus
Hormon Gonadotropin
Ovulasi /ejakulasi
Releasing Hormon
Kelenjar Hipofisa
Menurut Putra et al. (2013), pada proses vitellogenesis sinyal lingkungan seperti hujan, temperatur, media diterima oleh system syaraf pusat dan diteruskan ke hipotalamus. Hipotalamus merespons dengan melepaskan Gonadotropin Releizing Hormone (GnRH) untuk bekerja pada kelenjar hipofisa. Selanjutnya, hipofisa akan melepas hormon FSH yang bekerja pada lapisan teka pada oosit sehingga terjadi sintesis testosteron pada lapisan teka. Setelah itu, testosteron masuk ke dalam lapisan granulosa dan terjadi proses pengubahan testosteron menjadi estradiol-17² oleh enzim aromatase. Hormon estradiol-17² akan merangsang hati untuk mensintesis vitellogenin yang merupakan bakal kuning telur. Vitellogenin akan dibawa oleh aliran darah menuju gonad dan secara selektif terjadi penyerapan oleh lapisan folikel oosit. Akibat dari proses penyerapan vitellogenin adalah oosit akan tumbuh membesar sampai kemudian berhenti bila telah mencapai ukuran yang maksimum. Gonadotropin akan merangsang ovari untuk proses akhir pematangan telur pada gonad ikan.
2.3
Hormon-Hormon Reproduksi Menurut Kordi dan Tamsil (2010), hormon adalah suatu zat kimia organik
yang dihasilkan oleh sel atau sekelompok sel tertentu (kelenjar endokrin) yang normal dan sehat pada suatu organ. Di dalam tubuh jumlahnya terbatas dan dialirkan langsung kedalam pembuluh darah menuju tempat tertentu untuk mempengaruhi aktivitas koordinasi dan integrasi bagian-bagian organ seluruh tubuh. Ada beberapa jenis hormon reproduksi yang di produksi oleh kelenjar endokrin yakni hormon PMSG (pregnant mare serum gonadothropin) dan HCG (human chorionic gonadothropin). Keduanya merupakan jenis-jenis hormon gonadotropin yang sangat penting bagi proses reproduksi. PMSG merupakan hormon yang memiliki daya kerja merangsang terbentuknya folikel. Selain itu juga dapat
merangsang
pertumbuhan
sel-
sel
interestrial
dan
merangsang
terbentuknya sel-sel lutea. PMSG sangat banyak mengandung unsur daya kerja FSH dan sedikit LH (Basuki, 1990 dalam Tahapari dan Dewi, 2013). 2.3.1 Releasing Hormone Menurut Susane and Andrzej (1998) dalam Muslim et al. (2012), hipotalamus terdiri dari berbagai nukleus yang mampu mengatur keseimbangan dalam tubuh dan sangat peka terhadap steroid dan glukokortikoid, glukosa dan 4
suhu. Hipotalamus menghasilkan hormone berupa RH (Releasing Hormon) yaitu hormone yang dilepaskan untuk merangsang agar hormone lain bekerja dan IH (Inhibiting Hormon) yaitu hormone yang menghambat atau menghentikan hormone lain. Releasing hormon akan keluar jika hipotalamus menerima rangsangan dari lingkungan. RH dan IH berperan dalam menyampaikan pesan ke anterior pituitary untuk merangsang atau menghambat produksi hormone oleh anterior pituitary. Hormone yang dihasilkan hipotalamus antara lain Corticotropin releasing hormone (CRH), gonadotropin releasing hormone (GnRH), Thyrotropin releasing hormone (TRH), growth hormone releasing hormone (GHRH), Somatostatin dan Dopamine. Releasing
Hormon
adalah
hormon
yang
merangsang
keluarnya
gonadotropin. Susunan kimia hormon ini lebih sederhana dari gonadotropin sendiri, sehingga sintetisnya sudah dapat dibuat secara industri atau pabrikan. Hormon inilah yang digunakan secara luas dalam menstimulir ikan untuk ovulasi dan spermiasi pada pembuahan atau pemijahan buatan. Produk “ovaprim” adalah produk sintesis hormon GnRH terkenal yang dibuat tahan dan stabil dalam suhu kamar (Lesmana, 2015). 2.3.2 Gonadotropin Hormone a.
FSH (Follicle Stimulating Hormone) Hormon yang mengontrol perkembangan gonad (maturasi) adalah hormon
gonadotropin. Hormon gonadotropin terbagi dua jenis yaitu Folicle Stimulating Hormone (FSH) dan Luteinizing Hormone (LH). Hormon FSH merupakan gonadotropin yang berperan dalam proses vitellogenesis. Vitellogenesis adalah proses induksi dan sintesis Vitellogenin di hati oleh hormon estradiol-17², serta penyerapan vitellogenin yang terbawa aliran darah ke dalam oosit (Tyler et al., 1991 dalam Putra et al., 2013). Menurut Zultamin et al. (2014), aktivitas penyerapan vitelogenin oleh oosit menyababkan diameter telur bertambah besar. Penambahan diameter telur ikan sangat dipengaruhi oleh aktivitas hormonal. Peningkatan diameter oosit disebabkan oleh penyerapan lumen ovari akibat rangsangan hormonal yang sesuai. Perkembangan folikel dipengaruhi oleh aktivitas FSH (Folikel Stimulating Hormon) pada pituitary yang akan merangsang sekresi estrogen pada pituitary dan estrogen pada folikel. Folikel dapat meningkat sehingga diameter telur membesar. 5
b.
LH (Luteinizing Hormone) Berdasarkan pendapat Meenakern (1986) dalam Nuraini et al. (2012),
hormone hCG mengandung 90% LH (Luteinizing hormone) yang berfungsi untuk mempercepat terjadinya ovulasi dan 10% FSH yang berperan dalam pematangan gonad, sehingga bila ikan yang ber TKG rendah diberi suntikan yang mengandung FSH akan mempercepat pematangan telur sehingga volume telur akan bertambah dan menambah berat gonad. LH sendiri berfungsi sebagai hormone perangsang ovulasi. Biasanya LH dibutuhkan dalam jumlah yang kecil karena hanya berperan untuk memecah lapisan folikel oosit yang telah matang gonad untuk segera terjadi ovulasi. Proses pematangan akhir oosit sangat dipengaruhi oleh rangsangan lingkungan serta hormone LH. Bila rangsangan lingkungan mendukung, maka kelenjar pituitari akan mensekresikan hormon LH kemudian merangsang sekresi 17α-hidrosiprogresteron yang bersama hidroksisteroid dehirogenase membentuk 17α,20β hidroksipregnen yang diketahui sebagai MIH (maturation inhibitor hormone). Sinyal MIH akan diterima oleh permukaan oosit kemudian diteruskan ke sitoplasma untuk mendorong maturation promoting factor (MPF), sehingga inti ke tepi dan inti mengalami GVBD (Ramezani-Fard et al., 2012 dalam Arfah et al., 2013). c.
ICSH (Interstitial Cell Stimulating Hormone) Menurut Kordi dan Tamsil (2010), Interstitial Cell Stimulating Hormone
(ICSH) merupakan hormon yang dihasilkan oleh kelenjar hipofisa anterior. Hormon ICSH pada ikan betina berfungsi untuk membantu pematangan folikel, merangsang pembentukan esterogen dan proses ovulasi. Sedangkan pada ikan jantan dapat merangsang sel-sel leydig dari testis untuk mensintesa dan mensekresikan hormon testosteron. Interstitial Cell Stimulating Hormone atau biasa dikenal sebagai LH merupakan hormone yang bekerja pada steroidogenic interstitial cell (sel Leydig) pada testis. Salah satu fungsi hormone ICSH adalah untuk membantu kematangan spermatozoa dalam proses spermiasi. ICSH juga ditemukan pada betina meskipun dalam jumlah sedikit dan belum memiliki nama yang pasti (Norris, 1980).
6
2.3.3 Steroid Hormone a.
Definisi Menurut Marks et al. (2000), hormon adalah suatu zat yang di hasilkan oleh
suatu kelenjar endokrin, diekskresikan ke dalam darah dan sampai ke sel sasaran jaringan lain dalam tubuh tempat hormon tersebut menimbulkan efek fisiologis. Hormon steroid berasal dari kolestrol yang di sintesis di jaringan dari asetil KoA, di ekstraksi dari simpanan kolesterol ester intrasel, atau diserap oleh sel dalam bentuk lipoprotein yang mengandung kolesterol yang di internalisasi melalui proses yang diperantarai oleh reseptor membrane plasma. Hormon steroid ini mencakup hormon kortesk adrenal dan hormon gonad. Produk utama secara biologis aktif pada sintesis steroid korteks adrenal adalah glukortikoid kortisol dan mineralokortikoid aldosterone. Steroid utama yang di sintesis di ovarium adalah estradiol sedangkan hormone utama yang di sintesis di testis adalah testosterone. Menurut Melamen dan Sherwood (2004), hormon steroid adalah molekul kecil kolesterol yang secara umum ditemukan di chordata dan arthropoda. Pada kedua filum tersebut, adanya hormon steroid merupakan syarat mutlak untuk pengembangan, pemeliharaan homeostasis dan atau reproduksi. Dalam vertebrata dewasa ada tiga jenis hormon steroid yang berkaitan dengan reproduksi (estrogen, androgen dan progestin) yang diproduksi pada waktu yang tepat dalam sel steroid yang memproduksi khusus dalam gonad. Sel-sel ini mengekspresikan berbagai gen enzim steroidogenik yang produknya mengubah kolesterol dan turunannya. Hormon steroid mengarahkan perkembangan sel-sel germinal dan kelenjar aksesori dan organ, serta modifikasi perilaku, untuk memastikan bahwa reproduksi seksual dapat berlangsung. Meskipun banyak hormon steroid secara kimiawi identik di semua kelas vertebrata utama, peran steroid ini mungkin berbeda. Selain itu, hormon steroid yang unik telah berkembang dalam beberapa kelas vertebrata, terutama di kalangan ikan, untuk memenuhi fungsi tertentu. b.
Macam-macam Steroid Hormone Gonad menghasilkan dan mensekresikan tiga kategori utama hormon
steroid: androgen, estrogen, dan progestin. Ketiga tipe itu ditemukan pada kedua jenis kelamin baik jantan maupun betina, tetapi dalam perbandingan yang berbeda. Steroid yang dihasilkan dalam testes jantan dan ovarium betina tersebut mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan. Testes terutama mensintesis androgen. Estrogen, yang paling penting di antaranya adalah estradiol. Progestin 7
meliputi progesteron yang menyokong pertumbuhan dan perkembangan embrio (Campbell et al., 2004). Menurut Gusrina (2014), hormone steroid secara alamiah terlibat dalam proses diferensiasi seks. Ikan-ikan hasil sex reversal pada umumnya mengalami perubahan kelamin yang bersifat permanen dan berfungsi normal. Jenis-jenis hormone steroid yang digunakan dalam terapi hormone antara lain adalah: 1. Estrogen (hormone betina) : Estradiol 17ß, esteron, estriol atau ethynil estradiol. Hormone ini memberikan efek perubahan dari jantan menjadi betina (feminisasi). 2. Androgen
(hormone
jantan)
:
Testoteron,
17α-Metyl
Testoteron,
androstendion. Hormone ini memberikan efek perubahan dari betina menjadi jantan (maskulinasi). 2.4
Determinasi Seks Menurut Elrod dan Stansfield (2002), determinasi seks adalah penentuan
jenis kelamin jantan atau betina yang berada di bawah kontrol genetik. Mekanisme determinasi seks dikontrol oleh gen spesifik yang hanya mengendalikan initial decision dari fenotipe gonad. Pada individu jantan tersusun atas kromosom X dan Y, sedangkan pada individu betina tersusun atas kromosom X dan X. 2.4.1 Seks Primer Sifat seksual primer pada ikan ditandai dengan adanya organ yang secara langsung
berhubungan
dengan
proses
reproduksi,
yaitu
ovarium
dan
pembuluhnya pada ikan betina, dan pada ikan jantan testis dengan pembuluhnya. Salah satu cara untuk mengetahui perbedaan seks primer ikan jantan dan betina adalah dengan melakukan pembedahan. Tanpa adanya pembedahan ikan, maka akan sulit untuk menentukan seks primer pada ikan. Namun biasanya pada ikan yang masih muda, sifat seks primernya sulit dibedakan karena masih dapat berdiferensiasi (Effendie, 2002). Dilihat dari fungsi reproduksinya, ikan terbagi menjadi dua yakni jantan dan betina. Sebagian besar jenis ikan tidak menunjukkan perbedaan tubuh luar antara jantan dan betina. Kondisi ini dinamakan monomorfisme. Pembedaan kedua jenis kelamin ini secara nyata hanya dapat dilakukan dengan membedah ikan dan melihat ciri seksual primer. Ciri seksual primer ditandai oleh organ yang berhubungan langsung dengan proses reproduksi; yaitu testis dan salurannya 8
pada ikan jantan, dan ovarium dan salurannya pada ikan betina. Ciri ini tampak dengan jelas dan pasti pada ikan yang telah dewasa (Rahardjo et al., 2011). 2.4.2 Seks Sekunder Dimorfisme seksual dan dikromatisme seksual adalah karakteristik seksual sekunder ikan. Dimorfisme adalah mencakup morfologi ikan sedangkan dikromatisme adalah mencakup warna ikan. Karakteristik seksual sekunder ini ada yang bersifat permanen dan ada juga yang bersifat sementara. Karakteristik seksual bersifat sementara hanya muncul ketika musim ikan mijah, biasanya hanya dapat dijumpai pada ikan jantan saja (Lagler et al., 1977 dalam Palungan, 2015). Biasanya setiap spesies ikan akan memiliki karakteristik seksual sekunder yang berbeda – beda (Pulungan, 2015). Ikan nila jantan dan betina dapat dibedakan berdasarkan alat kelamin sekunder dan alat kelamin luarnya. Alat kelamin sudah dapat dibedakan dengan jelas bila ikan tersebut sudah mencapai berat badan antara 30-40 g/ekor atau kirakira berumur 2 bulan. Berdasarkan alat kelamin sekundernya, perbedaan jenis kelamin jantan dan betina dapat dilihat pada bagian perut, dagu, hidung, dan rahang. Ikan nila jantan memiliki perut dan dagu berwarna gelap, bentuk hidung dan rahang agak lebar, dan berwarna kebiru-biruan (biru muda). Sedangkan ikan nila betina memiliki perut dan dagu berwarna putih, hidung dan rahang berbentuk agak lancip dengan warna tidak jelas (Cahyono, 2010). 2.4.3 Ciri-Ciri Matang Gonad a.
Jantan Ikan nila mulai matang kelamin pada umur sekitar 4-5 bulan, dengan
kisaran berat 120-180 gr per ekornya. Ciri-ciri induk yang matang kelamin, pada individu jantan seluruh tubuhnya berwarna hitam, kecuali warna putih di bagian dagu dan merah cerah pada ujung sirip punggung, sirip dada, dan sirip ekor. Induk jantan yang matang gonad biasanya memperlihatkan warna hitam kelam, bagian dagu putih, alat kelamin meruncing dengan warna putih bersih dan ujung sirip ekor serta sirip punggung berwarna merah cerah. Ciri lain yaitu apabila bagian perutnya diurut kearah anus akan mengeluarkan cairan putih (sperma). Konsistensi sperma kental, berwarna putih susu dan pH 7,98 (Kurniawan et al., 2013). Menurut Condro et al. (2012), pemilihan ikan uji dilakukan dua minggu sebelum perlakuan stripping untuk mengambil sperma. Ciri induk jantan yang 9
sudah matang gonad yaitu bila perutnya di stripping ke arah lubang urogenitalnya, keluar cairan berwarna putih yaitu sperma. Sperma dikeluarkan dengan cara memberikan tekanan halus pada bagian perut ikan, yaitu dimulai dari bawah linea lateralis (di atas sirip perut) ke arah lubang genital. b.
Betina Menurut Prihatin (2014), ciri-ciri fisik induk betina yang telah matang gonad
apabila diraba perutnya membesar dan lunak. Kemudian bentuk alat kelaminnya membulat. Memiliki warna kemerahan. Kemudian ikan betina memiliki ciri – ciri alat kelaminnya berbentuk bulat telur terletak di dekat lubang dubur. Pada waktu musim pemijahan bentuk perutnya menjadi lebih besar dari biasanya karena berisi telur dan kalau diraba kenyal atau lembek. Menurut Burmansyah et al. (2013), ciri-ciri induk betina matang gonad yaitu tubuh besar dan lebar kesamping. Kemudian memiliki warna badan agak gelap. Memiliki sirip punggung lebih pendek. Pada bagian bawah perut agak melengkung. Apabila jika matang gonad pada bagian perut di stripping keluar telur bewarna transparan dan alat kelamin berwarna kemerah-merahan.
2.5
Histologi Gonad Menurut Mujimin (2005), dengan preparat histologi, jaringan gonad dapat
diamati dengan bantuan mikroskop dan dapat ditentukan tingkatan kematangan gonad secara tepat. Adapun tahapan dalam histologi gonad meliputi pengambilan gonad ikan, fixation, dehidration, clearing, infiltrasi, embedding dan blocking, sectioning dan peletakan pada gelas objek, staining dan penutupan. 2.5.1 Pengambilan Gonad Ikan Ikan kerapu yang telah diukur panjang dan beratnya serta sisiknya telah diambil. Dibedah dengan menggunakan gunting/scalpel dari arah anus ke operculum. Diambil gonadnya. Gonad dimasukkan ke dalam larutan bouins (fiksasi jaringan) (Widodo, 2006). Menurut Setyawati et al. (2011), pengamatan pertumbuhan dilakukan terhadap panjang dan bobot ikan. Setelah pembedahan dan penimbangan, sebagian ovarium dimasukkan ke dalam fiksatif Bouin (jika belum matang gonad) atau fiksatif Smith (telah matang gonad). Dilanjutkan preparasi dengan metode parafin dan pewarnaan Hematoxylin-Eosin. 10
2.5.2 Fixation Proses fixation merupakan salah satu tahapan persiapan histologi gonad. Fixation pada proses histologi gonad merupakan suatu proses yang bertujuan untuk menjaga kondisi gonad agar tidak rusak. Selain itu tujuan fiksasi adalah meminimalisir perubahan struktur sel seminimum mungkin, melindungi sel dari kerusakan selama proses embedding dan pengirisan, dengan cara meningkatkan kekerasan jaringan, maka struktur komponen-komponen dalam sel dapat dipertahankan dan mempersiapkan sel terhadap perlakuan selanjutnya, meliputi proses pewarnaan dan pemaparan sorotan/tembakan electron (Hariono, 2009). Umumnya, larutan fiksasi yang digunakan adalah larutan penyangga formalin, larutan Bouin, larutan Davidson, atau Glutaraldehid seperti yang dipaparkan oleh Latendresse dan rekan kerjanya. Apabila sampel yang difiksasi ditujukan untuk pengiriman maka dianjurkan untuk menggunakan fiksasi menggunakan larutan glutaraldehid dan sel atau organ tetap pada suhu dingin yaitu 4˚C, atau sampel difiksasi dengan larutan Bouin atau Davidson yang direndam pada larutan alkohol 70%. Pertimbangan dalam memilih metode fiksasi adalah dari segi tujuan penelitian dan penggunaan jaringan. Biasanya, fiksasi bertujuan untuk menyediakan atau mengawetkan bagian khusus dari suatu sel/jaringan (Dietrich dan Krieger, 2009). 2.5.3 Dehidration Menurut Widyastuti (2011), proses dehidrasi merupakan suatu proses perendaman jaringan kedalam larutan alkohol. Langkah pertama, yaitu menyipkan gonad yang tidak rusak untuk pembuatan preparat histology. Proses dehidrasi dilakukan setelah proses fiksasi dengan menggunakan alkohol secara bertingkat. Gonad yang telah melalui proses fiksasi dicuci dengan larutan alkohol 70% selama 1 jam. Langkah berikutnya ialah proses dehidrasi bertingkat dimana alkohol yang digunakan pada setiap tahap mempunyai konsentrasi yang berbeda-beda. Alkohol pertama 70% selama 1 jam, alkohol kedua 90% selama 1 jam, dan alkohol ketiga 100%. Masing-masing dari alkohol tersebut diulang selama tiga kali ulangan. Menurut Luna (1968) dalam Sembiring et al. (2014), sampel gonad ditimbang dengan ketelitian 0,001 g dan diawetkan dengan formalin 10%. Untuk membuat preparat histologi, sampel gonad yang telah diawetkan tersebut dikeringkan/ditiriskan, dipotong melintang dan direndam dalam alkohol 70%. Untuk proses histologi setiap sampel didehidrasi dengan menggunakan alkohol berseri, 11
dijernihkan dengan xylene, dan dipendam dalam parafin. Selanjutnya gonad diiris setebal 6 mikron. Kemudian diberi pewarnaan hematoxylen dan eosin. Histologi gonad yang sudah siap diamati dibawah mikroskop untuk ditentukan tingkat kematangannya. Gonad tersebut dikelompokkan menurut tingkatnya berdasarkan klasifikasi Hunter dan Goldberg (1980). 2.5.4 Clearing Menurut Kuswadi (2011), bahwa Clearing atau penghilangan warna pada organ dilakukan dengan memasukkan sediaan ke dalam larutan benzil benzoat selama 24 jam. Kemudian dipindah ke dalam benzol selama 15 menit sebanyak 2 kali. Clearing juga merupakan suatu upaya untuk menarik alkohol
dari
jaringan
dan
menggantikannya
dengan
xylol.
Clearing
(penjernihan/dealkoholisasi) menggunakan toluol (benzoate methylicus) atau toluen sehingga ovarium menjadi jernih selama 24 jam (over night). Tahapan dalam pembuatan preparat diantaranya meliputi nercose, sectio, labelling, fiksasi, washing, dehidrasi, clearing, infiltrasi, embeding, sectioning, affixing, staining, mounting, dan labelling. Menurut Widyastuti (2011), bahwa proses Clearing atau penjernihan dengan menggunakan toluene sebanyak tiga tahap. T a h a p i n i m a s i n g masing
1
jam,
1,5
jam
dan
yang
terakhir
1,5
jam.
Clearing
(penjernihan/dealkoholisasi) menggunakan toluol (benzoate methylicus) atau toluen sehingga ovarium menjadi jernih selama 24 jam (over night). Penjernihan pada organ dilakukan dengan memasukkan sediaan ke dalam
larutan
benzil benzoat selama 24 jam. Kemudian dipindah ke dalam benzol selama 15 menit sebanyak 2 kali. 2.5.5 Embedding dan Blocking Menurut Yakub (2015), pembenaman (embedding/impregnasi) adalah proses untuk mengeluarkan cairan pembening (clearing agent) dari jaringan dan diganti dengan parafin. Pada tahap ini jaringan harus benar-benar bebas dari cairan pembening karena sisa cairan pembening dapat mengkristal dan sewaktu dipotong dengan mikrotom akan menyebabkan jaringan menjadi mudah robek. Zat pembenam (impregnasi agent) yang dipakai adalah: 1. Paraffin cair panas yang mempunyai temperatur lebur (Melting temperature) kira-kira 56-59oC 12
2. Parafin histotek khusus (Tissue mat) dengan suhu 56oC 3. Paraplast yaitu campuran parafin murni dengan beberapa polimer plastik. Menurut Kurniasih (2008) dalam Pratiwi dan Manan (2015), pembuatan blok jaringan dilakukan untuk menjaga masing-masing bagian dari jaringan agar tidak berubah seperti pada kondisi tahap awal pemotongan dengan menggunakan alat yang disebut tissue embedding. Dalam proses ini digunakan cetakan anti karat atau basemold untuk pembuatan blok paraffin. Pada proses ini digunakan zat pembenam yaitu paraffin cair panas dengan suhu 70oC. 2.5.6 Sectioning dan Peletakan pada Gelas Objek Metode yang dilakukan pada tahap Sectioning (slicing) adalah blok yang dipasang pada pre-set mikrotom memiliki ketebalan 5-6 mikron. Pemotongan dilakukan untuk menetapkan dan memendekkan gonad, ketika irisan telah mencapai sampel, kemudian irisan dipindahkan ke dalam baskom berisi air dingin dan ditempatkan pada objek gelas yang telah dikodekan, dan dicelupkan ke dalam bak air agar sampel bias mengembang. Objek glass dikeringkan di atas hot plate dengan suhu 28oC (Shobikhuliatul et al., 2013). Setelah jaringan telah tertanam, blok parafin harus dipotong menjadi bagian yang tipis menggunakan mikrotom. Setelah itu setiap bagian yang telah diiris tipis diletakkan pada objek glass. Untuk memperjelas pengamatan jaringan, blok paraffin direndam lagi dalam water bath sebelum dilakukan pengirisan yang bertujuan untuk merehidrasi jaringan. Bagian tipis dari jaringan tersebut dapat digunakan untuk pengamatan morfologi gonad (Treuting et al., 2012). 2.5.7 Staining dan Penutupan Tahapan pewarnaan HE (Hematoxylin Eosin) metode Harris adalah sebagai berikut: preparat di letakkan di atas gelas objek, direndam dalam xylol I 5 menit, dilanjutkan xylol II, III masingmasing 5 menit. Kemudian preparat direndam dalam alkohol 100% I dan II masing-masing 5 menit, selanjutnya ke dalam aquades dan kemudian direndam dalam Harris Hematoxylin selama 15 menit. Celupkan ke dalam aquades dengan cara mengangkat dan menurunkannya. Preparat kemudian dicelupkan ke dalam acid alkohol 1% selama 7-10 celupan, direndam dalam aquades 15 menit, dan dalam eosin selama 2 menit. Selanjutnya preparat direndam dalam alkohol 96% I dan II masing-masing 3 menit, alkohol 100 % I dan II masing-masing 3 menit, dan dalam xylol IV dan V masing-masing 5 13
menit. Preparat dikeringkan dan dilakukan mounting dengan menggunakan entelan. Preparat diperiksa di bawah mikroskop untuk pemeriksaan terhadap perubahan histopatologi (Swarayana et al., 2012). Menurut Wagiman et aI. (2014), proses yang terakhir dalam histology gonad yaitu mounting. Proses ini dilakukan dengan cara menutup sampel dengan cover glass yang didekatkan dengan entelan. Kemudian preparat diamati menggunakan mikroskop. Setelah jaringan nampak jelas dibuat foto mikroskopis menggunakan fotomirografi. Proses ini biasa digunakan dalam proses penutupan histologi dengan menggunakan cover glass yang telah di preparasi.
14
3. METODE PRAKTIKUM
3.1
Determinasi Seks
3.1.1 Ikan Nila (Oreochromis niloticus) a.
Alat dan Bahan Alat
Sectio set
Seser
Nampan
Kolam
Pisau
Kamera digital
Talenan
Bahan Ikan Nila (Oreochromis niloticus)
Kertas saring
Gonad
Tisu
b.
Skema Kerja Ikan - diamati ciri seks sekunder - didokumentasikan - ditusuk medulla oblongata - dibedah bagian perut - diamati bentuk dan letak gonad - didokumentasikan Hasil
15
3.1.2 Ikan Lemon (Labidochromis caeruleus) a.
Alat dan Bahan Alat
Sectio set
Seser
Nampan
Akuarium
Pisau
Kamera digital
Talenan
Bahan Ikan Lemon (Labidochromis caeruleus)
Kertas saring
Gonad
Tisu
b.
Skema Kerja Ikan - diamati ciri seks sekunder - didokumentasikan - dibedah bagian perut - diamati bentuk dan letak gonad - didokumentasikan Hasil
3.1.3 Belut Sawah (Monopterus albus) a.
Alat dan Bahan Alat
Sectio set
Seser
Nampan
Drum
Pisau
Kamera digital
Talenan
16
Bahan Belut Sawah (Monopterus albus)
Kertas saring
Gonad
Tisu
b.
Skema Kerja Belut Sawah - diamati seks sekunder - didokumentasikan - dimatikan - dibedah bagian perut - diamati bentuk dan letak gonad - didokumentasikan Hasil
3.1.4 Udang Vannamei (Litopenaeus vannamei) a.
Alat dan Bahan Alat
Sectio set
Seser
Nampan
Akuarium
Pisau
Kamera digital
Talenan
Bahan Udang Vannamei (Litopenaeus vannamei)
Kertas saring
Gonad
Tisu
17
b.
Skema Kerja Udang Vannamei - diamati ciri seks sekunder - didokumentasikan - dibedah bagian abdomen - diamati bentuk dan letak gonad - didokumentasikan Hasil
3.1.5 Kepiting (Scylla sp.) a.
Alat dan Bahan Alat
Sectio set
Lap
Nampan
Akuarium
Pisau
Kamera digital
Talenan
Bahan Kepiting (Scylla sp.)
Kertas saring
Gonad
Tisu
b.
Skema Kerja Kepiting - diamati ciri seks sekunder - didokumentasikan - dipotong kaki dan capit - dibuka bagian abdomen - diamati bentuk dan letak gonad - didokumentasikan Hasil
18
3.2
Histologi Gonad
3.2.1 Pengambilan Gonad Ikan a.
Alat dan Bahan Alat
Sectio set
Kamera digital
Timbangan digital
Bahan Ikan jantan
Tisu
Ikan betina b.
Skema Kerja Ikan - diukur panjangnya - ditimbang beratnya - dibelah - diambil gonadnya - ditimbang gonadnya Hasil
3.2.2 Fixation a.
Alat dan Bahan Alat
Gelas
Stopwatch
Rak gelas kaca
Kamera digital
Gunting
Bahan Gonad jantan
Kertas label
Gonad betina
Benang
Formalin
Tisu
19
b.
Skema Kerja Gonad - dipotong melintang - direndam dalam larutan formalin 10% selama 24 jam - diangkat dari larutan formalin 10% - dicuci dengan air selama 30 menit Hasil
3.2.3 Dehidration a.
Alat dan Bahan Alat
Gelas
Stopwatch
Rak gelas kaca
Kamera digital
Bahan Gonad jantan
Alkohol 90%
Gonad betina
Alkohol 100%
Kertas label
Benang
Alkohol 70%
Tisu
b.
Skema Kerja Gonad - direndam dalam alkohol 70% selama 45 menit (1) - direndam dalam alkohol 70% selama 45 menit (2) - direndam dalam alkohol 90% selama 45 menit (1) - direndam dalam alkohol 90% selama 45 menit (2) - direndam dalam alkohol 100% selama 45 menit (1) - direndam dalam alkohol 100% selama 45 menit (2) Hasil
20
3.2.4 Clearing a.
Alat dan Bahan Alat
Gelas
Stopwatch
Rak gelas kaca
Kamera digital
Bahan Gonad jantan
Xylol
Gonad betina
Benang
Kertas label
Tisu
b.
Skema Kerja Gonad - direndam dalam larutan penjernih (xylol) selama 45 menit (1) - direndam dalam larutan penjernih (xylol) selama 45 menit (2) Hasil
3.2.5 Embedding dan Blocking a.
Alat dan Bahan Alat
Nampan
Blok paraffin (cassate)
Gelas
Kamera digital
Rak gelas kaca
Stopwatch
Hot plate
Bahan Gonad jantan
Parafin cair
Gonad betina
Benang
Kertas label
Tisu
21
b.
Skema Kerja Gonad - direndam dalam larutan parafin cair selama 45 menit (1) - direndam dalam larutan parafin cair selama 45 menit (2) - dimasukkan ke dalam blok parafin/cassete - dituangkan parafin cair - didiamkan hingga mengeras Hasil
3.2.6 Sectioning dan Peletakan pada Gelas Objek a.
Alat dan Bahan Alat
Microtom rotary
Nampan
Scalpel
Object glass
Waterbath
Kamera digital
Baskom
Bahan Gonad jantan
Air hangat
Gonad betina
Benang
Kertas label
Tisu
Air dingin
b.
Skema Kerja Gonad - dipotong menggunakan microtom rotary dengan ketebalan 4-6 µm - dimasukkan ke dalam air dingin - ditempelkan pada gelas objek - dicelupkan ke dalam water bath - ditiriskan Hasil
22
3.2.7 Staining dan Penutupan a.
Alat dan Bahan Alat
Gelas
Stopwatch
Rak gelas
Kamera digital
Object glass
Mikroskop binokuler
Cover glass
Bahan Preparat
Akuades
Kertas label
Hematoxylin
Alkohol 90%
Eosin
Alkohol 100%
Air
Xylol
Benang
Entellan
Tisu
b.
Skema Kerja Preparat - direndam dalam xylol selama 5 menit - direndam dalam alkohol 100% selama 1 menit - direndam dalam alkohol 90% selama 1 menit - direndam dalam akuades selama 1 menit - direndam dalam haemotoxylin selama 4 menit - dibilas dengan air mengalir selama 1 menit - direndam dalam eosin selama 2 menit - dibilas dengan air mengalir selama 1 menit - direndam dalam alkohol 90% selama 1 menit - direndam dalam alkohol 100% selama 2 menit - direndam dalam xylol selama 4 menit - ditutup cover glass menggunakan entellan (lem) - diamati dibawah mikroskop
Hasil 23
DAFTAR PUSTAKA
Arfah, H., Melati dan M. Setiawati. 2013. Suplementasi vitamin E pada pakan terhadap kinerja reproduksi ikan komet Carassius auratus auratus. Jurnal Akuakultur Indonesia. 12(1): 13-17. Burmansyah., Muslim dan M. Fitrani. 2013. Pemijahan ikan betok (Anabas testudineus) semi alami dengan sex ratio berbeda. Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia. 1(1): 23-33. Cahyono, B. 2010. Budi Daya Ikan Air Tawar. Kanisius: Yogyakarta. Campbell, N. A., J. B. Reece dan L. G. Mitchell. 2004. Biologi. Erlangga: Jakarta. Condro, H. S., A. S. Mubarak dan L. Sulmartiwi. 2012. Pengaruh penambahan madu pada media pengencer NaCl fisiologis dalam proses penyimpanan sperma terhadap kualitas sperma ikan komet (Carassius auratus auratus). Journal of Marine and Coastal Science. 1(1): 1-12. Dietrich, D. R. and H. O. Krieger. 2009. Histological Analysis of Endocrine Distruptive Effects in Small Laboratory Fish. John Wiley & Sons, Inc: Canada. Effendie, M. I. 2002. Biologi Perikanan. Yayasan Pustaka Nusantara: Yogyakarta. 163 hlm. Elrod, S. L. and W. D. Stansfield. 2002. Schaum’s Outlines of Theory and Problem of Genetics, Fourth Edition. The McGraw-Hill Companies: New York. 248 p. Gusrina. 2014. Genetika dan Reproduksi Ikan. Deepublish: Yogyakarta. 254 hlm. Hariono, B. 2009. Mikroskopi Elektron Pengenalan dan Teknik Preparasi. Kanisius: Yogyakarta. Hlm 20. Kordi, M. G. H. dan A. Tamsil. 2010. Pembenihan Ikan Laut Ekonomis Secara Buatan. Lily Publisher: Jakarta. 62 hlm. Kurniawan, I. Y., F. Basuki dan T. Susilowati. 2013. Penambahan air kelapa dan gliserol pada penyimpanan sperma terhadap motilitas dan fertilitas spermatozoa ikan mas (Cyprinus carpio L.). Journal of Aquaculture Management and Technology. 2(1): 51-65. Kuswadi, A. N. 2011. Kerusakan morfologis dan histologis organ reproduksi lalat buah Bactrocera carambolae (drew & hancock) (diptera; tephritidae) jantan yang dimandulkan dengan iradiasi gamma. Jurnal Ilmiah Aplikasi Isotop dan Radiasi. 7( 1). Lesmana, D. S. 2015. Ensiklopedia Ikan Hias Air Tawar. Penebar Swadaya: Jakarta. 316 hlm. 24
Marks, D. B., A. D. Marks dan C. M. Smith. 2000. Biokimia Kedokteran Dasar: Sebuah Pendekatan Klinis. EGC: Jakara. 770 hlm. Melamen, P. and N. Sherwood. 2004. Hormones and their Receptors in Fish Reproduction. World Scientific Publishing: Singapore. Moyle P. B. and J. J. Cech. 2004. Fishes: An Introduction to Ichthyology. Pearson Prentice Hall: New Jersey. 726 p. Mujimin. 2005. Teknik pembuatan preparat histologi gonad. Buletin Teknik Litkayasa Akuakultur. 4(2): 13-17. Muslim, R. A., Iskandar dan U. Subhan. 2012. Efektivitas tepung hipotalamus sapi dalam pakan buatan terhadap pertumbuhan benih ikan tambakan (Helostoma temminckii). Jurnal Perikanan dan Kelautan. 3(4): 127-132. Norris, D. O. 1980. Vertebrate Endocrinology. Bailliere Tidall: London. Nuraini., H. Alawi., N. Asiah dan A. T. Priyatama. 2012. Induced spawning of selais fish (Ompok hypopthalmus) under different doses of human chorionic gonadotropin hormon (hCG). Jurnal Perikanan dan Kelautan. 17(2): 1-10. Pratiwi, H. C. dan A. Manan. 2015. Teknik dasar histologi pada ikan gurami (Osphronemus gouramy). Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. 7(2): 153-158. Prihatin, E. S. 2014. Manajemen kualitas air pada pembenihan ikan lele sangkuriang (Clarias sp.) Desa Laladan Kecamatan Deket Kabupaten Lamongan. Jurnal Eksakta. 2(1): 91-98. Pulungan, C. P. 2015. Nisbah kelamin dan nilai kemontokan ikan tabingal (Puntioplites bulu Blkr) dari sungai Siak, Riau. Jurnal Perikanan dan Kelautan. 20(1): 11-16. Putra, W. K. A., A. O. Sudrajat dan N. Bambang P.U. 2013. Induksi maturasi belut sawah (Monopterus albus) dengan hormon human chorionic gonadotropin dan antidopamin. J. Ris. Akuakultur. 8(2): 209-220. Rahardjo, M. F., D. S. Sjafei., R. Affandi dan Sulistiono. 2011. Iktiology. CV. Lubuk Agung: Bandung. 396 hlm. Sembiring, S. B. M., R. Andamari., A. Muzaki., I. K. Wardana., J. H. Hutapea dan N. W. W. Astuti. 2014. Perkembangan gonad ikan kerapu sunu (Plectropomus leopardus) yang dipelihara dalam keramba jarring apung. Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis. 6(1): 53-61. Setyawati, I., N. I. Wiratmini dan J. Wiryatno. 2011. Pertumbuhan, histopatologi ovarium dan fekunditas ikan nila merah (Oreochromis niloticus) setelah paparan pestisida organofosfat. Jurnal Biologi. 15(2): 44-48. 25
Shobikhuliatul J. J., S. Andayani., J. Couteau., J. Risjani and C. Minier. 2013. Some aspect of reproductive biology on the effect of pollution on the histopathology of gonads in Puntius javanicus from Mas River, Surabaya, Indonesia. Journal of Biology and Life Science. 4(2): 191-205. Swarayana, I. M. I., I. W. Sudira dan I. K. Berata. 2012. Perubahan histopatologi hati mencit (Mus musculus) yang diberikan ekstrak daun ashitaba (Angelica keiskei). Buletin Veteriner Udayana. 4(2): 119-125. Tahapari, E. dan R. R. S. P. S. Dewi. 2013. Peningkatan peforma reproduksi ikan patin siam (Pangasianodon hypophthalmus) pada musim kemarau melalui induksi hormonal. Berita Biologi. 12(2): 203-209. Treuting, P. M., S. M. Dintzis., C. W. Frevert., D. Liggitt and K. S. Montine. 2012. Comparative Anatomy and Histology A Mouse and Human Atlas. Academic Press is an imprint of Elsevier: USA. 223 p. Wagiman., Yusfiati dan R. Elvyra. 2014. Struktur ginjal ikan selais (Ompok hypopthalmus Bleeker,1846) di perairan Sungai Siak Kota Pekanbaru. JOM FMIPA. 1(2): 1-9. Widodo, M. S. 2006. Deferensiasi gonad/seks (hermaprodit protogyni) pada ikan kerapu lumpur (Epinephelus coiodes Hamilton) pada kisaran berat tubuh yang berbeda di perairan Tanjung Luar, Lombok Timur, NTB. Jurnal Protein. 13(2): 168-171. Widyastuti, A. 2011. Perkembangan gonad kerang darah (Anadara antiquata) Di Perairan Pulau Auki, Kepulauan Padadido, Biak, Papua. Oseanologi dan Limnologi di Indonesia. 37(1): 1-17. Yakub, U. 2015. Gambaran Histopatologi Testis Ikan Opudi (Telmatherina celebensis) di Danau Matano Luwu Timur Sulawesi Selatan yang Tercemar Logam Berat Nikel (Ni) dan Besi (Fe). Skripsi. Universitas Hasanuddin: Makassar. Zultamin., Muslim dan Yulisman. 2014. Pematangan gonad ikan gabus betina (Channa striata) menggunakan hormon human chorionic gonadotropin dosis berbeda. Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia. 2(2): 162-174.
26
DAFTAR NAMA DAN ALAMAT ASISTEN REPRODUKSI IKAN 2017
No.
Nama
1.
Febby Hadi Setyawan
2.
Riyan Apriyanto
3.
Aliffia Sindra Novemma
4.
I Made Dedi
NIM
Alamat
135080501111020 New Villa Bukit Sengkaling C6-15 135080500111104 Jl. Kertoraharjo No. 55
No. HP 085733656524 085725786796
135080501111039 Jl. Bendungan Sigura-Gura Barat 2 No. 8 135080501111080 Jl. Kertoraharjo No. 55
083848064847 085738084447
Mahariawan 5.
Cucun Herlina
135080500111036 Jl. Kertorahayu No. 01
085795197085
6.
Wirdatus Sholiha
135080501111017 Jl. Watugilang 2 No. 18A
085236122306
7.
Rangga Idris Affandi
145080500111018 Puri Nirwana Gajayana Kav. 18
081233107332
8.
Bella Intan Wahyuni
145080501111052 Tirtasani Estate blok D-D2
085649344782
9.
Nur Laily Mila Atus
145080500111006 Jl. Salam Punten, Batu
Sholikhah 10.
Khalid Amjad
145080500111011 Jl. Kendalsari Gang 3 No.
085258724349 085731656205
26 11.
Ayu Retno Wulandari
145080501111042 Jl. Kertosari No. 6
085749466633
12.
Muh. Reza Pahlevi
145080501111038 Jl. Semanggi Barat No. 18
081945703891
27
