BAB III METODE PENELITIAN Penelitian ini menggunakan metode ekperimental meliputi penyiapan alat, bahan dan pereaksi, pengolahan simplisia, skrining fitokimia dan uji aktivitas antibakteri secara in vitro dengan metode difusi agar. 3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat-alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat- alat gelas, blender (Philips), oven listrik (Fisher scientitic), neraca kasar (O’Haus), neraca listrik (Vibra AJ), seperangkat alat destilasi penetapan kadar air, perkolator, cawan porselen berdasar rata, desikator, mortir, stamper, cawan porselen, Rotary evaporator (Buchi 461), inkubator (Fisher Scientific), oven (Gallenkam), autoklaf (Fison), kapiler, jarum ose, lampu spritus, lemari pendingin (Karl Kolb), pinset, rubber pump, hot plate, spatula, penangas air, mikro pipet, jangka sorong, kertas saring, aluminium foil, pencetak logam, spatula, mikroskop (Olympus), object glass, cover glass, lemari pengering, rak tabung reaksi, Freeze dryer (Edward). 3.1.2 Bahan-bahan Bahan tumbuhan yang dipergunakan adalah kulit buah (pericarp) jengkol, semua bahan yang digunakan berkualitas pro analisa kecuali disebutkan lain adalah; air suling, etanol 96% (hasil destilasi), asam klorida encer P, asam klorida pekat, kloroform, besi (III) klorida, timbal (II) asetat, asam asetat anhidrat, natrium klorida, barium klorida, kalium iodida, Merkuri (II) klorida, iodium, α-naftol, asam nitrat, bismuth nitrat, isopropanol, serbuk magnesium, metanol, n-heksan, asam sulfat pekat, amil alkohol, kloralhidrat, biakan bakteri
Universitas Sumatera Utara
Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC 25922, (Lab.Mikrobiologi FMIPA), Muller Hinton Agar (Difco), suspensi standar Mc.Farland, NaCl 0,9 %. 3.1.3 Pembuatan Larutan Pereaksi 3.1.3.1 Larutan Pereaksi Mayer Sebanyak 5 g Kalium Iodida dalam 10 ml air suling kemudian ditambahkan larutan 1,36 g merkuri (II) klorida dalm 60 ml air suling. Larutan dikocok dan ditambahkan air suling hingga 100 ml. 3.1.3.2 Larutan Pereaksi Dragendorff Sebanyak 8 g bismuth nitrat dilarutkan dalam asam nitrat 20 ml kemudian dicampur dengan larutan kalium iodida sebanyak 27,2 g dalam 50 ml air suling. Campuran didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan jernih diambil dan diencerkan dengan air secukupnya hingga 100 ml. 3.1.3.3 Larutan Pereaksi Bouchardat Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam 20 ml air suling kemudian ditambah 2 g iodium sambil diaduk sampai larut, lalu ditambah air suling hingga 100 ml. 3.1.3.4 Larutan Pereaksi Molish Sebanyak 3 g α- naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N secukupnya hingga diperoleh larutan 100 ml. 3.1.3.5 Larutan Pereaksi Liebermann-Burchard Sebanyak 20 g bagian asam asetat anhidrat dicampurkan dengan 1 bagian asam sulfat pekat dan 50 bagian kloroform. Larutan penyemprot harus dibuat baru.
Universitas Sumatera Utara
3.1.3.6 Larutan Pereaksi Besi (III) klorida 1% Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling hingga 100 ml kemudian disaring. 3.1.3.7 Larutan Pereaksi Timbal (II) asetat 0,4 M Sebanyak 15,17 g Timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air hingga 100 ml. 3.1.3.8 Larutan Pereaksi Asam Klorida 2 N Sebanyak 17 ml asam klorida pekat diencerkan dengan air suling sampai 100 ml. 3.1.3.9 Larutan Pereaksi Asam Sulfat 2 N Sebanyak 5,5 ml asam sulfat pekat diencerkan dengan air suling hingga volume 100 ml. 3.1.3.10 Larutan Pereaksi Asam Nitrat 0,5 N Sebanyak 3,4 ml asam nitrat pekat diencerkan dengan air suling hingga volume 100 ml. 3.2 Pengolahan Sampel 3.2.1 Identifikasi Sampel Identifikasi tumbuhan dilakukan di Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor, Indonesia. Hasil Identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada lampiran 1 halaman 49. 3.2.2 Pengambilan Sampel Pengambilan
sampel
dilakukan
secara
purposif,
yaitu
tanpa
membandingkan dengan daerah lain. Bahan penelitian ini adalah kulit buah jengkol yang merupakan limbah pasar, diambil langsung dari pasar tradisional di
Universitas Sumatera Utara
jalan Sei Kera, Pusat pasar, Kecamatan Medan Timur, Medan, Sumatera Utara. Gambar buah jengkol dapat dilihat pada lampiran 2 halaman 50 dan gambar kulit buah jengkol dapat dilihat pada lampiran 3 halaman 51. 3.2.3 Pembuatan Simplisia Kulit buah jengkol dicuci, ditiriskan kemudian ditimbang berat basahnya, yaitu 3,2 kg. Kulit buah jengkol selanjutnya dirajang dengan ukuran 1-3 cm, lalu dikeringkan di lemari pengering pada suhu 40-50 oC sampai simplisia kering dan mudah dipatahkan kemudian berat kering simplisia ditimbang, yaitu 850 g kemudian simplisia diblender sampai menjadi serbuk, lalu ditimbang beratnya, yaitu 820 g. Gambar simplisia dan serbuk simplisia dapat dilihat pada lampiran 4 halaman 52. 3.2.4 Karakterisasi Simplisia Karakterisasi simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik simplisia, pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia dan bahan segar, penetapan kadar air, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam, penetapan kadar sari yang larut dalam air, penetapan kadar sari yang larut dalam etanol. 3.2.4.1 Pemeriksaan Makroskopik Simplisia Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan cara mengamati warna, bau, rasa, bentuk, ukuran dan tekstur dari simplisia. Gambar simplisia dapat dilihat pada lampiran 4 halaman 52. 3.2.4.2 Pemeriksaan Mikroskopik Serbuk Simplisia dan Bahan Segar Untuk mengetahui jenis fragmen dari simplisia dilakukan pemeriksaan mikroskopik terhadap serbuk simplisia dengan cara menaburkan simplisia serbuk
Universitas Sumatera Utara
diatas kaca objek yang telah diteteskan dengan larutan kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup kemudian diamati dibawah mikroskop. Untuk mengetahui struktur anatomi kulit buah jengkol dilakukan pemeriksaan mikroskopik pada kulit buah jengkol segar dengan cara membuat irisan tipis melintang diatas kaca objek yang telah diteteskan dengan kloralhidrat panaskan sebentar diatas api spritus dan ditutup dengan kaca penutup kemudian diamati dibawah mikroskop. Hasil pengamatan mikroskopik terhadap serbuk simplisia dan penampang melintang kulit buah jengkol dapat dilihat pada lampiran 5 halaman 53. 3.2.4.3 Penetapan Kadar Air Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (Destilasi Toluen). Alat meliputi labu alas 500 ml, alat penampung, tabung penerima 5 ml berskala 0,05 ml pendingin, tabung penyambung, pemanas. Cara kerja: Ke dalam labu bulat dimasukkan 200 ml toluen dan 2 ml air suling, didestilasi selama 2 jam. Toluen didinginkan selama 30 menit dan volume air pada tabung penerima dibaca (WHO, 1992). Kemudian ke dalam labu dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama, lalu dipanaskan hati- hati selama 15 menit. Setelah toluen mulai mendidih, kecepatan tetesan diatur, kurang lebih 2 tetes tiap detik, hingga sebagian besar air tersuling. Kemudian kecepatan penyulingan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air tersuling, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen yang telah dijenuhkan. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin sampai suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang
Universitas Sumatera Utara
diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (Ditjen POM, 1989). Perhitungan penetapan kadar air dapat dilihat pada lampiran 6, halaman 54. 3.2.4.4 Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Air Sebanyak 5 g serbuk di maserasi selama 24 jam dalam 100 ml air kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling 1000 ml), dalam labu bersumbat sambil sesekali dikocok selam 6 jam pertama kemudian dibiarkan selama18 jam dan disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara. Sisa dipanaskan dalam oven pada 1050C sampai diperoleh bobot konstan kadar sari yang larut di dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1989). Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam air dapat dilihat pada lampiran 6, halaman 55. 3.2.4.5 Penetapan Kadar Sari Yang Larut Dalam Etanol Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol 96 % dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali 6 jam pertama dan dibiarkan selama 18 jam dan disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara. Sisanya
dipanaskan dalam oven pada 105oC sampai diperoleh bobot
konstan kadar sari yang larut di dalam etanol dihitung terhadap bahan yang dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1989). Perhitungan penetapan kadar sari yang larut dalam etanol dapat dilihat pada lampiran 6, halaman 56. 3.2.4.6 Penetapan Kadar Abu Total Sebanyak lebih kurang 2 g sampai 3 g zat yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukka dalam krus porselen yang telah dipijar dan ditara,
Universitas Sumatera Utara
kemudian diratakan. Krus dipijarkan perlahan-lahan hingga arang habis, kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu total dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1989). Perhitungan penetapan kadar abu total dapat dilihat pada lampiran 6, halaman 57. 3.2.4.7 Penetapan Kadar Abu Yang Tidak Larut dalam Asam Abu yang telah diperoleh dari penetapan kadar abu total dididihkan dengan 25 ml asam klorida encer P selama 5 menit. Bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring dipijarkan pada suhu 600oC sampai diperoleh bobot konstan, didinginkan kemudian ditimbang beratnya. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1989). Perhitungan penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam dapat dilihat pada lampiran 6, halaman 58. 3.2.5 Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Jengkol Sebanyak 300 g serbuk simplisia dimasukkan kedalam wadah kaca cairan penyari dituangi sampai semua simplisia terendam, biarkan sekurang-kurangnya selama 3 jam. Pindahkan massa sedikit demi sedikit ke dalam perkolator sambil tiap kali di tekan hati- hati, tuangi cairan penyari secukupnya sampai cairan mulai menetes dan di atas simplisia masih terdapat selapis cairan penyari, perkolator ditutup dan dibiarkan selama 24 jam. Cairan dibiarkan menetes dengan kecepatan 1 ml tiap menit, cairan penyari ditambahkan berulang-ulang secukupnya hingga selalu terdapat selapis cairan penyari diatas simplisia. Perkolasi dihentikan jika 500 mg perkolat yang keluar terakhir diuapkan, tidak meninggalkan sisa (Ditjen POM, 1986). Perkolat yang diperoleh dipekatkan dengan alat penguap rotary
Universitas Sumatera Utara
evaporator. Kemudian dikeringkan dengan freeze dryer pada suhu 40oC pada tekanan 2 atm selama lebih kurang 24 jam dan diperoleh ekstrak kental sebanyak 30,75 g (Voigt, 1994). 3.3 Skrining Fitokimia 3.3.1 Pemeriksaan Steroida/ Triterpenoida Sebanyak 1 g sampel dimaserasi dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan 2 tetes asam asetat glasial dan 1 tetes asam sulfat pekat. Timbul warna ungu atau merah kemudian berubah menjadi hijau biru menunjukkan adanya steroida triterpenoida (Harborne, 1978). 3.3.2 Pemeriksaan Alkaloida Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan air selama 2 menit, didinginkan lalu disaring. Filtrat dipakai untuk percobaan berikut : a. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer b. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat c. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendrof Alkaloida dianggap positif jika terjadi endapan atau paling sedikit dua atau tiga dari percobaan diatas ( Ditjen POM,1995). 3.3.3 Pemeriksaan Glikosida Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 3 g kemudian disari dengan 30 ml campuran 7 bagian volume etanol 96 % dan 3 bagian volum air suling ditambah dengan 10 ml HCl 2N. Direfluks selama 30 menit, didinginkan dan disaring. Diambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4
Universitas Sumatera Utara
M, dikocok, lalu didiamkan selama 5 menit dan disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran 3 bagian kloroform dan 2 isopropanol dilakukan berulang sebanyak tiga kali. Kumpulan sari air diuapkan pada temperatur tidak lebih dari 50oC. Sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sisa digunakan untuk percobaan berikut, yaitu 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan kedalam tabung reaksi, diuapkan di penangas air. Sisa dilarutkan dalam 2 ml air suling dan 5 tetes pereaksi Molish. Kemudian secara perlahan ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat. Glikosida positif jika terbentuk cincin ungu (Ditjen POM, 1995). 2.3.4 Pemeriksaan Flavonoida Sebanyak 10 g serbuk simplisia kemudian ditambahkan 100 ml air panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas. Filtrat yang diperoleh kemudian diambil 5 ml lalu ditambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml HCl pekat da 2 ml amil alkohol, dikocok, dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika terjadi warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol. (Farnsworth, 1966). 3.3.5 Pemeriksaan Tanin Sebanyak 0,5 g
sampel disari dengan 10 ml air suling, disaring lalu
filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna. Diambil 2 ml larutan lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi (III) klorida. Terjadi warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tannin (Farnsworth, 1966). 3.3.6 Pemeriksaan Saponin Sebanyak 0,5 g sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 ml air suling panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik, timbul busa yang mantap tidak kurang dari 10 menit setinggi
Universitas Sumatera Utara
1- 10 cm. Ditambahkan 1 tetes larutan asam klorida 2 N, bila buih tidak hilang menunjukkan adanya saponin ( Ditjen POM, 1995). 3.4 Uji Aktivitas Antibakteri 3.4.1 Sterilisasi Alat Alat - alat yang digunakan dalam penelitian uji aktivitas anti bakteri ini disterilkan terlebih dahulu sebelum digunakan. Alat - alat gelas disterilkan di dalam oven pada suhu 170oC selama 2 jam. Media disterilkan di autokaf pada suhu 121oC selama 15 menit. Jarum ose dan pinset dengan lampu bunsen (Lay, 1994) 3.4.2 Pembuatan Media Muller Hinton Agar (MHA) Komposisi : Beef, infusion form
300 mg
Bacto - casamino Acids, Technical
17,5 g
Starch
1,5 g
Bacto - agar
17 g
Cara Pembuatan : Sebanyak 38 g media disuspensikan dalam 1000 ml air suling steril, kemudian dipanaskan hingga mendidih dan semuanya larut. Disterilkan dalam autoklaf (Difco, 1977). 3.4.3. Pembuatan Larutan Natrium Klorida 0,9 % Komposisi: Natrium Klorida Air suling steril hingga
0,9 g 100 ml
Cara pembuatan: Natrium klorida ditimbang sebanyak 0,9 g lalu dilarutkan dalam air suling steril sedikit demi sedikit dalam labu takar 100 ml sampai larut sempurna
Universitas Sumatera Utara
Ditambahkan air suling sampai garis tanda, lalu disterilkan pada autoklaf suhu 121oC selama 15 menit. 3.4.4 Pembuatan Suspensi Standar Mc. Farland ( Anonim, 2008) Suspensi Standar Mc. Farland adalah suspensi yang menunjukkan konsentrasi kekeruhan bakteri sama dengan 108 CFU/ml. Komposisi : Larutan Asam sulfat 1 % b/v 9,5 ml Larutan Barium klorida v/v
0,5 ml
Cara Pembuatan : Dicampur kedua larutan tersebut dalam tabung reaksi dikocok dan dihomogenkan. Apabila kekeruhan suspensi bakteri uji adalah sama dengan kekeruhan suspensi standart, berarti konsentrasi suspensi bakteri adalah 108 CFU/ml. 3.4.5 Pembuatan Media Agar Miring 10 ml media agar yang telah dimasak dimasukkan kedalam tabung reaksi, ditutup dan di bungkus lalu disterilisasi di dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 oC pada tekanan 15 psi. Kemudian tabung yang berisi agar diletakkan pada kemiringan 30-45 oC. Diperhatikan bahwa agar tidak menyentuh tutup tabung. Agar dibiarkan menjadi dingin dan keras (Lay, 1994).
Universitas Sumatera Utara
3.4.5 Pembiakan Bakteri 3.4.5.1 Pembuatan Stok Kultur 3.4.5.1.1 Bakteri Streptococcus mutans Satu koloni bakteri Streptococcus mutans diambil dengan menggunakan ose steril, lalu diinokulasi pada media MHA agar miring dengan cara menggores. Setelah itu di inkubasi dalam inkubator pada suhu 36 ± 1oC selama 18-24 jam. 3.4.5.1.2 Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satu koloni bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 diambil dengan menggunakan ose steril, lalu diinokulasi pada media MHA agar miring dengan cara menggores. Setelah itu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 36 ±1oC selama 18-24 jam. 3.4.5.1.3 Bakteri Escherichia coli ATCC 25922 Satu koloni bakteri Escherichia coli ATCC 25922 diambil dengan menggunakan ose steril, lalu diinokulasi pada media MHA agar miring dengan cara menggores. Setelah itu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 36 ±1oC selama 18-24 jam. 3.4.5.2 Penyiapan Inokulum 3.4.5.2.1 Bakteri Streptococcus mutans Dari stok kultur bakteri Streptococcus mutans yang telah tumbuh diambil dengan jarum ose steril lalu disuspensikan kedalam tabung yang berisi 10 ml larutan NaCl 0,9% sampai didapat kekeruhan suspensi bakteri yang sama dengan kekeruhan standart Mc.Farland, ini berarti konsentrasi suspensi bakteri adalah 108 CFU/ml. Setelah itu dilakukan pengenceran dengan memipet 0,1 ml biakan bakteri (108 CFU/ml), dimasukkan kedalam tabung steril yang berisi larutan NaCl
Universitas Sumatera Utara
0,9% sebanyak 9,9 ml dan dikocok homogen. Maka diperoleh suspensi bakteri dengan konsentrasi 106 CFU/ml yang akan digunakan pada pengujian aktivitas antibakteri. 3.4.5.2.2 Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 Prosedur untuk bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 sama dengan prosedur bakteri Staphylococcus mutans. 3.4.5.2.3 Bakteri Escherichia coli ATCC 25922 Prosedur untuk bakteri Escherichia coli sama dengan prosedur bakteri Staphylococcus mutans ATCC 25923. 3.4.6 Pembuatan Larutan Uji dengan Berbagai Konsentrasi 5 g ekstrak kulit buah jengkol dilarutkan dengan etanol sampai garis tanda dalam labu takar 10 ml. Konsentrasi ekstrak adalah 500 mg/ml, kemudian dibuat pengenceran sampai diperoleh ekstrak dengan konsentrasi 400 mg/ml, 300 mg/ml, 200 mg/ml, 100 mg/ml, 90 mg/ml, 80 mgml, 70mg/ml, 60 mg/ml, 50 mg/ml, 40 mg/ml, 30 mg/ml, 20 mg/ml, 10 mg/ml, 5 mg/ml. 3.4.7 Metode Pengujian Efek Antibakteri Secara In vitro Metode ini menggunakan media padat dan pencadang logam yang digunakan untuk membuat lubang, kemudian hambatan pertumbuhan bakteri ditentukan dengan cara mengukur diameter zona bening disekitar lubang dengan menggunakan jangka sorong. Pada tabung yang berisi 15 ml media agar steril cair suhu + 45oC, tambahkan suspensi bakteri sebanyak 0,1 ml yang telah diukur kekeruhannya. Homogenkan dengan bantuan vortex selama + 10 menit. Tuang kedalam cawan petri steril berdiameter 9 cm dan dibiarkan memadat. Kemudian dibuat lubang
Universitas Sumatera Utara
dengan menggunakan pencadang logam berdiameter 7 mm lalu ditetesi 0,1 ml larutan uji dengan berbagai konsentrasi, pra inkubasi selama 15 menit, kemudian diinkubasi pada 35+ 2 oC selama 18-24 jam. Selanjutnya diukur diameter zona bening disekitar larutan uji dengan menggunakan jangka sorong. Dilakukan tiga kali pengulangan. Dilakukan blanko dengan menggunakan etanol 70%.
Universitas Sumatera Utara
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Berdasarkan identifikasi yang dilakukan oleh Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor, identitas sampel tumbuhan adalah Pithecellobium jiringa (Jack) Prain, famili Fabaceae. Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia kulit buah jengkol menunjukkan bahwa simplisia kulit buah jengkol berupa potongan-potongan dengan ukuran ± 13 cm, ujung-ujungnya menggulung, berwarna coklat tua,
rasa sepat, tekstur
permukaan licin. Dan hasil pemeriksaan mikroskopik bahan segar, pada penampang melintang menunjukkan bahwa kulit buah jengkol terdiri dari tiga lapisan yaitu eksokarp yang dibentuk oleh kutikula, sel epidermis dan sel hipodermis; mesokarp yang terdiri dari sel parenkim dan sklereid bernoktah, sklereid, sklereid berbentuk batang dan lapisan endokarp yang mencakup beberapa sel sklerenkim dan epidermis dalam. Simplisia serbuk menunjukkan bahwa simplisia serbuk memiliki fragmen pengenal berupa serabut sklerenkim dan sklereid bernoktah, sklereid dan sklereid berbentuk batang. Hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia kulit buah jengkol dapat dilihat pada tabel 1 dibawah ini. Tabel 1. Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Serbuk Simplisia No
Parameter
Kulit Buah Jengkol
Syarat MMI
6%
-
1
Kadar air
2
Kadar abu total
2,79 %
-
3
Kadar abu yang tidak larut asam
0,26 %
-
4
Kadar sari yang larut dalam air
13,45 %
-
5
Kadar sari yang larut dalam etanol
10,64 %
-
Universitas Sumatera Utara
Pada percobaan diperoleh bahwa kadar air dari simplisia kulit jengkol adalah 6 %. Ini berarti standarisasi simplisia memenuhi persyaratan Materia Medika Indonesia yakni tidak lebih 10 %. Monografi dari serbuk simplisia serbuk kulit buah jengkol tidak ditemukan di buku Materia Medika Indonesia. Hasil skrining fitokimia dari serbuk simplisia dan ekstrak etanol kulit buah jengkol dapat dilihat pada tabel 2 dibawah ini. Tabel 2. Hasil skrining fitokimia dari kulit buah jengkol Hasil NO
Parameter
Simplisia
Ekstrak
1
Alkaloida
+
+
2
Flavonoida
+
+
3
Tanin
+
+
4
Saponin
+
+
5
Glikosida
+
+
6
Steroid/ Triterpenoid
+
+
Keterangan : + = Memberikan hasil Berdasarkan hasil pemeriksaan skrining fitokimia dari simplisia dan ekstrak kulit buah jengkol menunjukkan hasil yang sama bahwa keduanya kaya akan kandungan senyawa kimia golongan alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, glikosida dan Steroid/triterpenoid. Senyawa tanin dan flavonoid merupakan golongan senyawa polifenol yang bersifat sebagai antibakteri. Selain senyawa kimia diatas, menurut Rahayu dan Pukan (1998) kulit buah jengkol juga mengandung asam fenolat yang juga merupakan golongan senyawa polifenol yang bersifat sebagai antibakteri.
Universitas Sumatera Utara
Hasil penyarian 300 g serbuk simplisia kulit buah jengkol dengan menggunakan pelarut etanol, perkolat diuapkan dengan rotary evaporator, kemudian dikeringkan dengan freeze dryer dan ditimbang. Ekstrak kental diperoleh sebanyak 30,75 g. Ekstrak ini kemudian digunakan untuk uji aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus mutans,
Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah jengkol terhadap bakteri Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dapat dilihat pada tabel 3 dibawah ini : Tabel 3. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah jengkol terhadap bakteri Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus dan Escherichia coli No
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Konsentrasi Ekstrak Etanol mg/ml 500 400 300 200 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 5 Blanko
Diameter hambat pertumbuhan mikroba (mm) * Streptococcus Staphylococcus Escherichia coli mutans aureus 19,80 20,69 22,33 18,22 19,66 19,75 17,53 17,98 19,27 16,86 16,35 17,63 16,53 15,51 17,32 15,66 14,26 16,65 13,61 13,48 16,04 12,91 12,41 15,58 12,46 11,73 14,67 11,28 11,37 13,60 10,63 10,86 12,90 9,75 10,65 12,51 9,74 10,85 -
Keterangan : * = Rata – rata pengukuran 3 x -
= Tidak ada hambatan
Universitas Sumatera Utara
Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah menentukan diameter zona hambat, diameter zona hambat yang semakin meningkat pada kenaikan konsentrasi. Hal ini membuktikan bahwa peningkatan konsentrasi terhadap ekstrak etanol kulit buah jengkol memiliki korelasi positif terhadap peningkatan diameter
zona
hambat
pertumbuhan
bakteri
Streptococcus
mutans,
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Dari data diatas menunjukkan bahwa ekstrak kulit buah jengkol dapat menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans,
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli sedangkan pada blanko
tidak menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap ketiga bakteri yang digunakan. Aktivitas antibakteri dapat disebabkan adanya kandungan senyawa kimia yaitu tanin dan flavonoida yang diperoleh dari hasil skrining fitokimia. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak kulit buah jengkol
mempunyai
daya
hambat
pada
bakteri Streptococcus
mutans,
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Hasil uji aktivitas dari ekstrak tersebut diperoleh konsentrasi terkecil pada bakteri Streptococcus mutans sebesar 30 mg/ml, konsentrasi terkecil bakteri Staphylococcus aureus sebesar 20 mg/ml dan konsentrasi terkecil pada bakteri Escherichia coli sebesar 20 mg/ml. Dengan demikian ekstrak kulit buah jengkol lebih kuat dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dibandingkan bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans. Bakteri Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif sedangkan bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans merupakan bakteri gram positif. Dari hasil penelitian terlihat bahwa ekstrak etanol kulit buah jengkol memberi daya hambat yang lebih besar terhadap bakteri gram negatif dibandingkan dengan bakteri gram positif. Hal ini disebabkan oleh perbedaan
Universitas Sumatera Utara
komposisi dan struktur dinding selnya. Dinding sel bakteri gram negatif mengandung jumlah peptidoglikan lebih sedikit dari pada dinding sel bakteri gram positif. Dinding sel itulah yang menyebabkan kedua kelompok bakteri ini memberikan respon yang berbeda terhadap perlakuan seperti pada pewarnaan (Pelczar, 1986). Dari data diatas dapat dilihat bahwa ekstrak etanol kulit buah jengkol memberikan batas daerah hambat yang efektif dengan diameter 15,66 mm pada konsentrasi 90 mg/ml untuk bakteri Streptococcus mutans,dengan diameter 14,26 mm pada konsentrasi 90 mg/ml untuk bakteri Staphylococcus aureus, diameter 14,67 mm pada konsentrasi 60 mg/ml untuk bakteri Escherichia coli. Batas daerah hambat dinilai efektif apabila memiliki diameter daya hambat lebih kurang 14 mm sampai 16 mm (Depkes RI, 1995).
Universitas Sumatera Utara
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1. Kesimpulan Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol kulit buah jengkol menunjukkan adanya kandungan senyawa kimia alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, glikosida dan steroid/triterpenoid. Tanin dan Flavonoid adalah senyawa aktif antibakteri. Ekstak etanol kulit buah jengkol dapat menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Hasil uji aktivitas dari ekstrak etanol diperoleh konsentrasi terkecil pada bakteri Streptococcus
mutans
sebesar
30
mg/ml,
konsentrasi
terkecil
bakteri
Staphylococcus aureus sebesar 20 mg/ml dan konsentrasi terkecil pada bakteri Escherichia coli sebesar 20 mg/ml. Ekstrak juga memberikan batas daerah hambat yang efektif dengan diameter 15,66 mm pada konsentrasi 90 mg/ml untuk bakteri Streptococcus mutans,dengan diameter 14,26 mm pada konsentrasi 90 mg/ml untuk bakteri Staphylococcus aureus, diameter 14,67 mm pada konsentrasi 60 mg/ml untuk bakteri Escherichia coli. Diameter hambat rata-rata tertinggi diperoleh pada pengujian terhadap bakteri Escherichia coli, kemudian diikuti oleh bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans. 5.2
Saran Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk melakukan uji aktivitas
antibakteri dari ekstrak kulit buah jengkol terhadap bakteri spesifik penyebab diare dan disentri.
Universitas Sumatera Utara
