AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN PEGAGAN (Centellae folium) DENGAN PELARUT METHANOL-AIR TERHADAP KLEBSIELLA PNEUMONIAE
KARYA TULIS ILMIAH
Oleh RISA ANGGRAINI NIM. 12.036
AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG JULI 2015
KARYA TULIS ILMIAH
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN PEGAGAN (Centellae folium) DENGAN PELARUT METHANOL-AIR TERHADAP KLEBSIELLA PNEUMONIAE
KARYA TULIS ILMIAH Diajukan kepada Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang Untuk memenuhi salah satu persyaratan Dalam menyelesaikan program D-3 Bidang farmasi
OLEH RISA ANGGRAINI NIM 12.036
AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG JULI 2015
LEMBAR PERSEMBAHAN
Sembah sujud serta syukur kepada Allah SWT. Taburan cinta dan kasih sayang-Mu telah memberikanku kekuatan dan membekaliku dengan ilmu. Atas karunia serta kemudahanNya Karya Tulis Ilmiah yang sederhana ini dapat terselesaikan. Sholawat serta salam selalu terlimpahkan kepada Rasulullah SAW.
Kupersembahkan karya Tulis Ilmiah ini untuk keluargaku tercinta. Terutama kupersembahkan untuk bapak dan ibuku yang selalu memberikan doa dan semangat tanpa lelah.
Ucapan terimakasih untuk dosen pembimbing saya, Bapak Dr. Sentot Joko. R., M.Si, yang selalu sabar menghadapi anak bimbingnya dan telah memberikan ilmunya kepada saya.
Ucapan terima kasih untuk kakak dan adik saya yang selalu memberi dukungan untuk menyelesaikan tugas akhir ini.
Kepada semua teman AKAFARMA 2012 yang saling membantu, mendukung satu sama lain. Terutama untuk sahabat-sahabat saya, terimakasih sudah memberikan semangat dan tidak pernah lelah untuk membantu. Terima kasih atas canda tawa kalian selama 3 tahun bersama. “ Don’t Ever Forget Who Was There For You When No One Else ” ~ Let Yourself Move To The Next Chapter In Life When The Time Comes. Don’t Remain Stuck On The Same Page ~
ABSTRAK
Anggraini, Risa. 2015. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Pegagan (Centellae folium) Dengan Pelarut Methanol-Air Terhadap Klebsiella Pneumoniae. Karya Tulis Ilmiah. Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. Pembimbing: Dr. Sentot Joko Raharjo., M.Si. Kata Kunci: Centella asiatica (L.) Urb, Klebsiella pneumoniae, antibakteri. Pegagan (Centella asiatica (L.) Urb) merupakan salah satu tanaman yang memiliki kandungan senyawa asiatikosida (triterpenoid) yang berpotensi sebagai antibakteri. Salah satu penyakit yang disebabkan oleh bakteri Klebsiella Pneumoniae adalah pneumonia. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui konsentrasi pelarut methanol-air yang lebih optimal dalam menghambat pertumbuhan Klebsiella pneumonia. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah ekstraksi maserasi, identifikasi triterpenoid dengan pereaksi Liebermann Burchard menggunakan kromatografi lapis tipis dan difusi cakram untuk pengujian aktivitas antibakteri dengan konsentrasi ekstrak pegagan sebesar 15 mg/ml, 22,5 mg/ml dan 30 mg/ml. Hasil ekstraksi menunjukkan rendemen sebesar yaitu 26,91% (0% methanol), 22,32% (30% methanol), 18,83% (50% methanol), 16,13% (70% methanol) dan 5,2% (100% methanol). Hasil KLT dari seluruh konsentrasi menunjukkan noda berwarna merah ungu kecoklatan pada sinar UV 254 nm. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak daun pegagan tidak dapat menghambat pertumbuhan Klebsiella pneumonia karena konsentrasi senyawa antibakteri jumlahnya kecil. Kesimpulan dari penelitian ini daun pegagan tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap Klebsiella pneumonia.
i
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah yang berjudul “Aktivitas Antibakteri Daun Pegagan (Centella Follium) Dengan Pelarut Methanol-Air Terhadap Klebsiella Pneumoniae” ini tepat pada waktunya. Tujuan penulisan karya tulis ilmiah ini sebagai persyaratan untuk menyelesaikan program D-3 di Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. Sehubungan dengan terselesaikannya karya tulis ilmiah ini, saya mengucapkan terima kasih kepada pihak-pihak sebagai berikut. 1. Ibu Dra. Wigang Solandjari, sebagai direktur Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra indonesia Malang. 2. Bapak Dr. Sentot Joko R., S.Si, M.Si, sebagai dosen pembimbing 3. Ibu Ria Dewi Andriani S.Pt, M.Sc, sebagai dosen penguji pertama 4. Ibu Wahyu Wuryandari, M.Pd, sebagai dosen penguji kedua 5. Bapak dan Ibu Dosen Akademi Analis Farmasi dan Makanan beserta seluruh staf. 6. Kedua orang tua yang telah memberikan motivasi dan doa. 7. Seluruh rekan mahasiswa dan pihak-pihak yang secara langsung maupun
tidak langsung telah memberikan bimbingan, bantuan, arahan, serta motivasi kepada penulis. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa Karya Tulis Ilmiah ini masih mempunyai banyak kekurangan. Oleh karena itu, kritik dan saran akan sangat diharapkan. Semoga Karya Tulis Ilmiah ini dapat bermanfaat dan berguna untuk seluruh pihak. Malang, Juli 2015
Penulis
ii
DAFTAR ISI
ABSTRAK ........................................................................................................... i KATA PENGANTAR ......................................................................................... ii DAFTAR ISI ......................................................................................................iii DAFTAR TABEL ................................................................................................ i DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... ii DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... iii BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 1 1.1 Latar Belakang ........................................................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah ...................................................................................... 3 1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................ 4 1.4 Kegunaan Penelitian ................................................................................... 4 1.5 Asumsi Penelitian ....................................................................................... 5 1.6 Ruang Lingkup dan Keterbatasan Penelitian ............................................... 5 1.7 Definisi Istilah dan Singkatan ..................................................................... 6 BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................... 7 2.1 Pegagan ...................................................................................................... 7 2.2 Senyawa Terpenoida................................................................................... 9 2.3 Methanol .................................................................................................. 10 2.4 Pneumonia ................................................................................................ 11 2.5 Antibakteri ............................................................................................... 14 2.6 Penentuan Aktivitas Antibakteri ............................................................... 16 2.7 Kloramfenikol .......................................................................................... 18 2.8 Ekstraksi................................................................................................... 18 2.9 Kromatografi Lapis Tipis .......................................................................... 21 2.10 Kerangka Konsep ................................................................................... 23 2.11 Hipotesis ................................................................................................ 23 BAB III METODE PENELITIAN ..................................................................... 24 3.1 Rancangan Penelitian................................................................................ 24 3.2 Populasi dan Sampel Penelitian ................................................................ 24
iii
3.3 Lokasi dan waktu penelitian ..................................................................... 24 3.4 Definisi Operasional Variabel ................................................................... 24 3.5 Instrumen Peneltitian ................................................................................ 26 3.6 Pengumpulan Data.................................................................................... 27 3.7 Analisa Data ............................................................................................. 31 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 32 4.1 Determinasi Tanaman ............................................................................... 32 4.2 Ekstraksi Komponen Aktif ....................................................................... 32 4.3 Uji Identifikasi Kromatografi Lapis Tipis ................................................. 35 4.4 Pengujian Aktivitas Antibakteri ................................................................ 37 BAB VI PENUTUP ........................................................................................... 41 5.1 Kesimpulan .............................................................................................. 41 5.2 Saran ........................................................................................................ 41 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 43 LAMPIRAN……………………………………………………………………...45
iv
DAFTAR TABEL
Tabel 3.1 Definisi Operasional Variabel.......................................................................... 26 Tabel 4.1 Hasil Ekstraksi…………………… .................................................................. 34 Tabel 4.2 Hasil Rendemen Ekstrak Dari Simplisia Daun Pegagan ................................... 35 Tabel 4.3 Hasil KLT Ekstrak Methanol Pegagan Dengan Eluen Kloroform :Methanol (3:2) ............................................................................................................... 36 Tabel 4.4 Pengujian Aktivitas Antibakteri ....................................................................... 37
i
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Daun Pegagan .............................................................................................. 7 Gambar 2.2 Struktur Kimia Asiatikosida ......................................................................... 10 Gambar 2.3 Skema Kerangka Konsep ............................................................................. 23
ii
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Hasil Determinasi ........................................................................................ 45 Lampiran 2. Perhitungan Rendemen Ekstrak ................................................................... 46 Lampiran 3. Perhitungan Kontrol positif ......................................................................... 46 Lampiran 4. Proses Ekstraksi Maserasi ........................................................................... 47 Lampiran 5. Identifikasi Kromatografi Lapis Tipis .......................................................... 48 Lampiran 6. Proses Sterilisasi dan Pembiakan Bakteri .................................................... 49 Lampiran 7. Proses Pembuatan Suspensi dan Penanaman Ekstrak ................................... 50 Lampiran 8. Hasil Pengamatan Aktivitas Antibakteri ...................................................... 51
iii
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Infeksi saluran pernafasan merupakan penyakit yang sering dijumpai di masyarakat. Penyakit ini merupakan salah satu penyebab tertingginya tingkat kematian di Indonesia yang menyerang anak-anak dan orang dewasa (Nugroho, Utami, & Yuniastuti, 2011). Pneumonia adalah proses infeksi akut yang mengenai jaringan para-paru (Alveoli)(Elfidasar, et al, 2013). Jawa Timur merupakan salah satu propinsi dengan
tingkat
pneumonia
balita
yang
tinggi.
Berdasarkan
laporan
Kabupaten/Kota di Jawa Timur, jumlah kasus pneumonia balita tahun 2009 sebanyak 64.100 kasus (Santoso, et al, 2012). Pneumonia disebabkan oleh bakteri Klebsiella pneumonia. Klebsiella pneumonia merupakan salah satu bakteri koliform yang dapat menyebabkan penyakit pada manusia dan hewan. Bakteri ini menginfeksi saluran pernapasan terutama paru-paru, nasal mucosa atrophy dan rhinoscleroma. Selain itu dapat pula menginfeksi saluran kemih pada manusia usia lanjut dan kelenjar susu pada hewan. Sumber utama penyebaran bakteri ini adalah feses, diikuti dengan kontak melalui bahan yang terkontaminasi. K. pneumoniae merupakan bakteri Gram negatif, non-motil, tak berkapsul, memfermentasi laktosa, anaerobik fakultatif,
1
2
selnya berbentuk batang, dan dapat ditemukan sebagai flora normal di mulut, kulit dan usus pada manusia atau hewan (Sugoro, et al, 2008). Saat ini, pengobatan penyakit pneumonia masih menggunakan obat-obat sintesis seperti antibiotik. Namun bakteri Klebsiella pneumoniae memiliki sifat resisten terhadap antibiotika tertentu.Berdasarkan banyaknya balita yang terserang pneumonia, untuk mencegah terjadinya efek samping yang berbahaya atau kelebihan obat kimia pada usia dini, maka perlu dikembangkan obat herbal yang sifatnya lebih aman dan tidak menimbulkan efek samping seperti obat-obat kimia. Salah satu upaya pengembangan obat baru untuk menanggulangi masalah pneumonia, yaitu resistensi obat dengan cara mengembangkan obat yang berasal dari tanaman yang berpotensi sebagai antibakteri pneumonia. Dengan adanya tanaman herbal sebagai anti pneumonia ini diharapkan tidak akan menimbulkan bahaya yang terlalu besar dan lebih efisien dalam penggunaannya, karena tidak sedikit
masyarakat
di
Indonesia
mengira
bahwa
tanaman
tidak
bisa
menyembuhkan penyakit peradangan paru-paru. Salah satu tanaman yang bersifat antibakteri adalah pegagan (Centella asiatica Urb.). Pegagan (Centella asiatica Urb.) merupakan tanaman obat yang kaya akan manfaatnya. Biasanya dalam pemanfaatannya digunakan sebagai obat batuk, tuberkulosa, radang tenggorokan, bronkhitis dan sebagai antibakteri (Mora & Fernando, 2012). Tanaman ini mempunyai kandungan kimia yaitu asiatikosida, asam asiatat, asam madekasat, steroid (madekasoid, sitosterol, dan sigmasterol) dan saponin (brahmosida, brahminosida, dan valerian) (Rasyid, et al. 2011 ;Wahyuno, et al. 2010). Salah satu senyawa di dalam ekstrak tersebut yang memiliki sifat sebagai antibakteri adalah senyawa asiatikosida yang termasuk
3
golongan triterpenoid. Cara kerja asiatikosida sebagai antibakteri yaitu dengan menembus dinding sel bakteri, menembus dinding sel bakteri Klebsiella pneumoniae. Senyawa asiatikosida bersifat polar karena adanya ikatan glikosida antara molekul gula dengan gugus benzena. Penelitian sebelumnya menjelaskan aktivitas antibakteri ekstrak pegagan dalam pelarut etanol 96% terhadap Mycobacterium tuberculosis terbukti menghasilkan hambatan pertumbuhan bakteri pada dosis 22,5 mg/mL (Gitawati, et al, 2005). Penelitian tersebut menjelaskan bahwa ekstraksi senyawa asiatikosida sebagai antibakteri Mycobacterium tuberculosis menggunakan pelarut etanol 96%. Pelarut etanol ini cenderung bersifat lebih non polar dibandingkan pelarut methanol. Sedangkan senyawa asiatikosida bersifat polar (reniza, 2003).Oleh karena itu, untuk mendapatkan senyawa triterpenoid (asiatikosida) yang lebih maksimal maka digunakan pelarut methanol dan air. Pemilihan methanol dan air sebagai pelarut karena sifat kepolarannya yang sama dengan sifat kepolaran senyawa asiatikosida, sehingga diharapkan mampu menarik senyawa triterpenoid (asiatikosida) lebih banyak dan kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri Klebsiella pneumoniae lebih besar. Berdasarkan uraian di atas, maka dilakukan penelitian ekstraksi asiatikosida (triterpenoid) menggunakan pelarut methanol (0%, 30%, 50%, 70% dan 100%) dengan cara maserasi dan diuji aktivitas antibakteri
Klebsiella
pneumoniae. 1.2 Rumusan Masalah Berdasarkan pendahuluan di atas, rumusan dalam penelitian ini sebagai berikut:
4
Adakah pengaruh ekstrak methanol (0%, 30%, 50%,70%, 100%) terhadap pertumbuhan bakteri Klebsiella pneumoniae? 1.3 Tujuan Penelitian Adapun tujuan penelitian dari penelitian ini adalah sebagai berikut: Untuk mengetahui adanya pengaruh methanol (0%, 30%, 50%,70%, 100%) terhadap pertumbuhan Klebsiella pneumoniae. 1.4 Kegunaan Penelitian Adapun kegunaan dari penelitian ini adalah sebagai berikut: 1.4.1 Kegunaan bagi Peneliti Adapun kegunaan dari penelitian ini untuk peneliti yaitu, sebagai berikut: 1. Menambah wawasan dan ilmu pengetahuan mengenai fungsi tanaman pegagan sebagai antibakteri 2. Mengetahui aktivitas ekstrak pegagan terhadap
bakteri Klebsiella
pneumonia 3. Dapat dijadikan sebagai dasar penelitian lanjut 1.4.2 Kegunaan untuk masyarakat Adapun kegunaan dari penelitian ini untuk masyarakat yaitu, sebagai berikut: 1. Mengetahui informasi mengenai daun pegagan yang mempunyai kandungan senyawa antibakteri untuk penyakit pneumonia 2. Dapat memanfaatkan tanaman pegagan sebagai obat herbal anti pneumonia 1.4.3 Kegunaan untuk instansi
5
Hasil dari penelitian ini dapat digunakan sebagai referensi dan informasi yang dapat digunakan sebagai ilmu pengetahuan baru di bidang kesehatan untuk pengembangan tanaman sebagai obat herbal khususnya obat anti pneumonia dari pegagan. 1.5 Asumsi Penelitian Asumsi penelitian dalam penelitian ini adalah: 1.
Ekstrak asiatikosida pada tanaman pegagan (Centella asiatica. Urb)
mampu larut dalam pelarut metanol dan air. 2.
Penghambatan bakteri Klebsiella pneumoniae pada metode difusi cakram
dapat digunakan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak asiatikosida pada tanaman pegagan (Centella asiatica Urb). 1.6 Ruang Lingkup dan Keterbatasan Penelitian 1.6.1 Ruang Lingkup Penelitian Ruang lingkup penelitian ini adalah eksraksi daun pegagan menggunakan pelarut methanol dan air. Ekstrak daun pegagan diuji aktivitas antibakteri terhadap Klebsiella pneumoniae. 1.6.2 Keterbatasan penelitian Keterbatasan penelitian ini adalah: 1. Tanaman pegagan diperoleh dari UPT Materia Medika Batu. 2. Tanaman pegagan yang dipakai adalah daun pegagan. 3. Tanaman daun pegagan yang digunakan sudah dalam bentuk serbuk kering.
6
4. Untuk mendapatkan ekstrak digunakan metode maserasi dengan beberapa pelarut yang digunakan yaitu methanol, methanol : air (70:30), methanol : air (30:70), metanol : air (50:50) dan air. 5. Ekstrak pegagan digunakan untuk menguji aktivitas antibakteri terhadap Klebsiella pneumoniae. 6. Metode yang digunakan untuk menguji aktivitas antibakteri yaitu metode difusi cakram. 1.7 Definisi Istilah dan Singkatan 1. Pneumonia adalah sebagai suatu peradangan paru yang disebabkan oleh mikroorganisme (bakteri, virus, jamur, parasit). 2. Klebsiella pneumoniae adalah bakteri yang menyebabkan terjadinya penyakit pneumonia. 3. Resistensi adalah perlawanan yang terjadi ketika bakteri, virus dan parasit lainnya secara bertahap kehilangan kepekaan terhadap obat yang sebelumnya membunuh mereka. 4. Antibakteri adalah suatu senyawa yang dalam konsentrasi kecil mampu menghambat bahkan membunuh proses kehidupan suatu mikroorganisme. 5. Ekstraksi adalah pemisahan suatu senyawa dari campuran-campuran senyawa dengan menggunakan pelarut. 6. Polar adalah senyawa yang mempunyai ikatan hidrogen lebih banyak. Ciriciri: dapat larut dalam air dan pelarut lainnya. 7. Nonpolar adalah senyawa yang terbentuk akibat adanya suatu ikatan antar elektron pada unsur-unsur yang membentuknya. Ciri-ciri: tidak larut dalam air.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 PEGAGAN Pegagan (Centella asiatica (L.)Urb) merupakan tanaman liar yang dapat tumbuh di ladang, perkebunan maupun di pekarangan. Biasanya tumbuh pada tanah yang lembab dan cukup sinar matahari di dataran rendah maupun dataran tinggi. Tanaman ini masih belum banyak digunakan oleh masyarakat sebagai obat herbal, karena tumbuhnya yang secara liar. 2.1.1 Klasifikasi Pegagan
Gambar 2.1 Daun Pegagan Pegagan diklasifikasikan sebagai berikut: Kingdom
: Plantae
Divisi
: Magnoliophyta
Kelas
: Dicotyledonae
7
8
Bangsa
: Umbellales
Suku
: Umbelliferae
Marga
: Centella
Jenis
: Centella asiatica (L.) Urban. (Materia Medika Batu)
2.1.2 Morfologi Pegagan Pegagan merupakan tanaman terna atau herba tahunan, batang berupa stolon yang menjalar diatas permukaan tanah, panjang 10-80 cm. Daun tunggal tersusun dalam roset yang terdiri atas 2-10 daun, kadang-kadang agak berambut. Tangkai daun panjang sampai 50 mm, helaian daun berbentuk ginjal, lebar dan bundar dengan garis tengah1-7 cm, tepi daun beringgit sampai bergerigi, terutama ke arah pangkal daun, perbungaan berupa bunga majemuk tipe payung tunggal, terdiri atas 3-5 anak bunga, bersama-sama keluar dari ketiak daun, ukuran ibu tangkai 5-50 mm, lebih pendek dari tangkai daun. Bunga umumnya 3, yang ditengah duduk, yang disamping bertangkai pendek; daun pelindung 2, panjang 34 mm, bentuk bulat telur; mahkota bunga berwarna merah lembayung, panjang 11,5 mm, lebar sampai 0,75 mm. Buah pipih, lebar lebih kurang 7 mm dan tinggi lebih kurang 3 mm, berlekuk dua, jelas berusuk, berwarna kuning kecoklatan, berdinding agak tebal (Dwiyatmoko et al., 2010). 2.1.3 Kandungan Pegagan Tanaman pegagan mengandung berbagai bahan aktif dan yang terpenting adalah glikosida triterpenoid.Triterpenoid meliputi asiatikosida, asam asiatat dan asam madekasat. Sedangkan kandungan kimia lainnya yaitu karotenoid, valerian, resin, tannin, minyak menguap dan garam-garam mineral seperti kalium, natrium,
9
magnesium, kalsium, besi, pektin, vitamin B (Rasyid et al., 2011;Musyarofah,et al, 2007) 2.1.4 Manfaat Pegagan Tanaman ini telah dimanfaatkan sebagai obat untuk anti pikun, anti stress, penyembuhan luka, radang, asma, wasir, tuberkulosis, lepra, disentri, demam, penambah selera makan, memperlancar sirkulasi darah, mengobati sakit kulit, syphilis, dan epilesi, antioksidan, antikanker, lupus, keloid, diuretic dan antihipertensi (Besung, 2009;Harwoko, et al, 2014; Musyarofah et al., 2007). 2.2 Senyawa Terpenoida Terpenoid merupakan produk alami dan metabolit sekunder dari tanaman yang mempunyai aktivitas sebagi obat. Terpenoid merupakan biosintesis dari isoprene. Terpenoida terdiri atas beberapa macam senyawa, yaitu isopren monoterpen, seskuiterpen, diterpen, sesterpen, triterpen, karotenoid dan politerpen (James & Dubery, 2009). 2.2.1 Senyawa Triterpenoida Merupakan senyawa turunan dari terpenoida dan memiliki struktur dengan kelipatan enam satuan isoprene. Senyawa ini berbentuk siklik atau asiklik dan seringmemiliki gugus alkohol, aldehida, atau asam karboksilat. Sebagian besar senyawa Triterpenoid mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol sehingga dalam kehidupan sehari-hari banyak dipergunakan sebagai obat seperti untuk pengobatan penyakit diabetes, gangguan menstruasi, patukan ular, gangguan kulit, kerusakan hati dan malaria. Sedang bagi tumbuhan yang mengandung senyawa Triterpenoid terdapat nilai ekologi karena senyawa ini bekerja sebagai anti fungus,
10
insektisida, anti pemangsa, anti bakteri dan anti virus (James & Dubery, 2009;Widiyati, 2006). Pada pegagan yang termasuk senyawa triterpenoid yaitu asiatikosida, madekasad dan asam asiatik. 2.2.1.1 Senyawa Asiatikosida Asiatikosida adalah senyawa golongan glikosida triterpenoid, yang mengandung molekul gula yang terdiri dari satu molekul ramnosa dan molekul glukosa. Aglikon triterpen dari asiatikosida ini disebut asam asiatikat yang mempunyai gugus alkohol primer, glikol dan satu buah karboksilat terseterifikasi dengan gugus gula. Asiatikosida merupakan salah satu senyawa aktif yang terkandung dalam pegagan. Senyawa ini bersifat polar karena adanya ikatan glikosida antara molekul gula dengan gugus benzene dan mempunyai BM 959,15 (Reniza, 2003).
Gambar 2.2 Struktur Kimia Asiatikosida 2.3 Methanol Pelarut metanol bersifat universal dimana dapat menarik senyawa yang bersifat non polar, polar, semi polar. Metanol memiliki titik didih yang rendah (65oC) sehingga mudah di uapkan. Metanol memiliki massa jenis 0,7915 g/ml (Mora & Fernando, 2012).
11
2.4 Pneumonia Pneumonia merupakan penyakit radang paru yang disebabkan oleh bermacam-macam etiologi sepertibakteri, virus, jamur dan benda-bendaasing. Pneumonia adalah proses infeksi akut yang mengenai jaringan paru-paru (alveoli). Pneumonia yang disebabkan oleh Klebsiella pneumonia. Pneumonia adalah penyakit saluran napas bawah (lower respiratory tract (LRT)) akut, biasanya disebabkan oleh infeksi. Sebenarnya pneumonia bukan penyakit tunggal. Penyebabnya bisa bermacam-macam dan diketahui ada sumber infeksi, dengan sumber utama bakteri, virus, mikroplasma, jamur, berbagai senyawa kimia maupun partikel. Penyakit ini dapat terjadi pada semua umur, walaupun manifestasi klinik terparah muncul pada anak, orang tua dan penderita penyakit kronis. 2.4.1 KlebsiellaPneumoniae Berikut adalah taksonomi dari K.pneumoniae Kingdom
: Bacteria
Phylum
: Proteobacteria
Class
: Gamma Proteobacteria
Order
: Enterobacteriales
Family
: Enterobacteriaceae
Genus
: Klebsiella
Species
: K.pneumoniae
Binomial name : Klebsiella pneumoniae 2.4.2 Morfologi Klebsiella Pneumoniae Klebsiella pneumoniae merupakan suatu bakteri gram negatif yang tidak bergerak (non motil), tidak berselubung, melakukan fermentasi laktosa, fakultatif
12
anaerob, ditemukan sebagai flora normal di mulut, kulit dan usus. Spesies Klebsiella menunjukkan pertumbuhan mukoid, simpai polisakarida yang besar, tidak ada pergerakan (Sugoro, et al, 2008). Morfologi khas dari Klebsiella dapat dilihat dalam pertumbuhan padat in vitro tetapi morfologinya sangat bervariasi dalam bahan klinik. Biasanya Klebsiella simpainya besar dan teratur. Selain itu Klebsiella koloninya besar, sangat mukoid dan cenderung bersatu apabila dieramkan. Anggota dari genus Klebsiella memiliki struktur antigen yang kompleks. Lebih khususnya, anggota genus Klebsiella memiliki 2 tipe antigen pada permukaan sel. Yang pertama adalah antigen O yang merupakan bagian terluar dari lipopolisakarida dinding sel dan terdiri atas unit polisakarida yang berulang. Beberapa polisakarida O-spesifik mengandung gula yang unik. Antigen O tahan terhadap panas dan alkohol dan biasanya dideteksi dengan aglutinasi bakteri. Antibodi terhadap antigen O terutama adalah IgM. Yang kedua adalah antigen K. Antigen K ini berada di luar antigen O dan merupakan suatu capsularpolysacharida. Antigen K dapat mengganggu aglutinasi melalui antiserum O dan berhubungan dengan virulensi. Klebsiella mempunyai simpai besar yang terdiri atas polisakarida (antigen K) yang menutupi antigen somatic (O atau H) dan dapat dikenali dengan pembengkakan simpai melalui tes pembengkakan simpai dengan antiserum khusus. Infeksi pada saluran nafas manusia disebabkan terutama oleh jenis simpai 1 dan 2, pada saluran kemih terutama disebabkan oleh jenis simpai 8, 9, 10, dan 24. 2.4.3 Gejala-gejala Penyakit Pneumonia Keluhan utama yang sering terjadi pada pasien pneumonia adalah sesak napas, peningkatan suhu tubuh, dan batuk. Pada pasien dengan pneumonia,
13
keluhan batuk biasanya timbul mendadak dan tidak berkurang setelah meminum obat batuk yang biasanya tersedia di pasaran. Pada awalnya keluhan batuk yang tidak produktif, tapi selanjutnya akan berkembang menjadi batuk produktif dengan mucus purulen kekuning-kuningan, kehijau-hijauan, dan seringkali berbau busuk. Pasien biasanya mengeluh mengalami demam tinggi dan menggigil. Adanya keluhan nyeri dada, sesak napas, peningkatan frekuensi pernapasan, lemas, dan kepala nyeri. 2.4.4 Penularan dan pengobatan Pneumonia dapat terjadi akibat menghirup bakteri yang ada di udara. Selain itu dapatjuga disebarkan melalui darah yang berasal dari tempat lain misalnya luka, dan perpindahan langsung bakteri dari infeksi di dekat paru-paru. Jika melalui saluran nafas, bibit penyakit yang masuk akan dilawan oleh berbagai macam sistem pertahanan yang dimiliki oleh tubuh kita. Yang dimaksud dengan sistem pertahanan tubuh, misalnya struktur kulit, proses batuk, hingga sel-sel pembunuh yang berada dalam darah maupun cairan limpa kita (sistem antibodi). Pada orang-orang yang terganggu pertahanan tubuhnya, misalnya kesadaran menurun, usia lanjut, menderita penyakit pernapasan kronik/PPOM, infeksi virus, diabetes mellitus, dan penyakit kronis lainnya, termasuk juga pada penderita penyakit payah jantung atau kanker, mereka itu menjadi mudah sakit. Selain itu, jumlah bakteri atau virus serta keganasan virus/bakteri tersebut yang masuk ketubuh calon penderita bisa mempengaruhi, apakah seseorang menjadi sakit atau tidak. Gejala-gejala yang biasanya timbul dari penderita peneumonia antara lain batuk berdahak dimana dahaknya seperti lendir berwarna hijau atau seperti nanah, nyeri dada, menggigil, demam, mudah lelah, sesak nafas, sakit kepala, nafsu
14
makan berkurang, mual, muntah, tidak enak badan, kekakuan sendi, kekakuan otot, kulit lembab, batuk darah, nyeri perut, dan pernafasan yang cepat. Untuk mendiagnosa diadakan berbagai macam pemeriksaan antara lain dengan menggunakan stetoskop, rontgen dada, pembiakan dahak dan penghitungan gas darah arteri. Untuk pengobatan dapat digunakan senyawa yang memiliki cincin β laktam. Ada artikel yang menyebutkan bahwa kombinasi antara ampisilin dan klorampenikol dapat menghambat pertumbuhan dari Klebsiella ini. Akan tetapi Klebsiella juga sudah resisten terhadap beberapa antibiotik. Sehingga sampai sekarang para peneliti masih banyak mengadakan eksperimen untuk mencari obat yang ampuh untuk jenis bakteri ini. 2.4.6 Obat Anti Pneumonia Penggunaan Obat Anti pneumonia yang dipakai dalam pengobatan pneumonia adalah antibakteri dan anti infeksi sintetis untuk membunuh kuman Klebsiella pneumoniae. Aktifitas obat pneumonia didasarkan atas tiga mekanisme, yaitu aktifitas membunuh bakteri, aktifitas sterilisaisi, dan mencegah resistensi. Obat yang umum dipakai gentamisin, siprofloksasin, norfloksasin dan amikasin (Muhtadi et al., 2012). 2.5 Antibakteri Antibakteri adalah suatu senyawa yang dalam konsentrasi kecil mampu menghambat bahkan membunuh proses kehidupan suatu mikroorganisme. Beberapa istilah yang digunakan untuk menjelaskan proses pembasmian bakteri yaitu: 2.5.1 Germisid
15
Germisid adalah bahan yang dipakai untuk membasmi mikroorganisme dengan mematikan sel-sel vegetatif, tetapi tidak selalu mematikan bentuk sporanya. 2.5.2 Bakterisid Bakterisid adalah bahan yang dipakai untuk mematikan bentuk-bentuk vegetatif bakteri. 2.5.3 Bakteriostatik Bakteriostatik adalah suatu bahan yang mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri tanpa mematikannya. 2.5.4 Antiseptik Antiseptik adalah suatu bahan yang menghambat atau membunuh mikroorganisme dengan mencegah pertumbuhan atau menghambat aktivitas metabolisme, digunakan pada jaringan hidup. 2.5.5 Desinfektan Desinfektan adalah bahan yang dipakai untuk membasmi bakteri dan mikroorganisme pathogen tapi belum tentu beserta sporanya, digunakan pada benda mati. Berdasarkan sifat toksisitas selektif, ada antibakteri yang bersifat menghambat pertumbuhan bakteri yang dikenal sebagai bakteriostatik,dan ada yang bersifat membunuh bakteri dikenal sebagai bakterisid. Kadar minimal yang diperlukan untuk menghambat atau membunuh bakteri , masing-masing dikenal sebagai kadar hambat minimal (KHM) dan kadar bunuh minimal (KBM). Antibakteri tertentu aktivitasnya dapat meningkat menjadi bakterisid bila kadar antimikrobanya ditingkatkan melebihi KHM.
16
2.6 Penentuan Aktivitas Antibakteri Pengujian terhadap aktivitas antibakteri dapat dilakukan dengan berbagai cara yaitu: 2.6.1 Agar difusi, media yang dipakai adalah agar Nutrient Broth. Pada metode ini ada beberapa cara, yaitu: 2.6.1.1 Cara Kirby Bauer Beberapa koloni kuman dari pertumbuhan 24 jam diambil, disuspensikan ke dalam 0,5 ml NB cair, diinkubasikan 5-8 jam pada suhu 37oC. Suspensi ditambah akuades steril hingga kekeruhan tertentu sesuai dengan standar konsentrasi bakteri 108 CFU/ml. Kapas lidi steril dicelupkan ke dalam suspensi bakteri lalu ditekan-tekan pada dinding tabung hingga kapasnya tidak terlalu basah, kemudian dioleskan pada permukaan media agar hingga rata. Kemudian diletakkan kertas samir (disk) yang mengandung antibakteri diatasnya, diinkubasikan pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Hasilnya diamati (Wiyarto, 2009). 2.6.1.1.1 Zona radikal yaitu suatu daerah disekitar disk di mana sama sekali tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri. Potensi antibakteri diukur dengan megukur diameter dari zona radikal. 2.6.1.1.2 Zona iradikal yaitu suatu daerah disekitar disk di mana pertumbuhan bakteri dihambat oleh antibakteri, tetapi tidak dimatikan. 2.6.1.2 Cara Sumuran Beberapa koloni kuman dari pertumbuhan 24 jam pada media agar diambil, disuspensikan ke dalam 0,5 ml NB cair, diinkubasikan 5-8 jam pada suhu 37oC. Suspensi ditambahkan akuades steril hingga kekeruhan tertentu sesuai dengan standar konsentrasi bakteri 108 CFU/ml. Kapas lidi steril dicelupkan ke dalam
17
suspensi bakteri lalu ditekan-tekan pada dinding tabung hingga kapasnya tidak terlalu basah, kemudian dioleskan pada permukaan media agar hingga rata.Media agar dibuat sumuran diteteskan larutan antibakteri, diinkubasikan pada suhu 37 oC selama 18-24 jam. Hasilnya diamati seperti cara Kirby Bauer (Wiyarto, 2009). 2.6.1.3 Cara Pour Plate Beberapa koloni kuman dari pertumbuhan 24 jam pada media agar diambil, disuspensikan kedalam 0,5 ml NB cair, diinkubasikan 5-8 jam pada suhu 37oC. Suspensi ditambah aquadest steril hingga kekeruhan tertentu sesuai dengan standar konsentrasi bakteri 108 CFU/ml. Suspensi bakteri diambil satu mata ose dan dimasukkan ke dalam 4 ml agar base 1,5% yang mempunyai suhu 50 oC. Setelah suspense kuman tersebut homogen, dituang pada media agar NB, ditunggu sebentar sampai agar tersebut membeku, diletakkan disk diatas media dan dieramkan selama 15-20 jam dengan suhu 37oC. hasilnya dibaca sesuai standar masing-masing antibakteri (Wiyarto, 2009). 2.6.2 Dilusi Cair/ dilusi padat Pada prinsipnya antibakteri diencerkan sampai diperoleh beberapa konsentrasi. Pada dilusi cair, masing-masing konsentrasi ekstrak ditambah suspensi kuman dalam media. Sedangkan pada dilusi padat tiap konsentrasi ekstrak dicampur dengan media agar, kemudian ditanami bakteri. Metode dilusi cair adalah metode untuk menentukan konsentrasi minimal dari suatu antibakteri yang dapat menghambat atau membunuh mikrorganisme. Konsentrasi terendah yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri ditunjukkan dengan tidak adanya kekeruhan disebut Kadar Hambat Minimun (KHM) atau Minimal Inhibitory Concentration (MIC) (Wiyarto, 2009).
18
2.7 Kloramfenikol Kloramfenikol merupakan penghambat sintesis protein yang kuat pada bakteri. Kloramfenikol diisolasi pertama kali pada tahun 1947 dari Streptomyces venezuelae. Karena ternyata mempunyai daya antibakteri yang kuat maka penggunaan obat ini meluas dengan cepat sampai pada tahun 1950. Kloramfenikol merupakan kristal putih yang sukar larut dalam air (1 : 400) dan rasanya sangat pahit. Antibiotik ini menghalangi pelekatan asam amino pada rantai peptida yang baru timbul pada unit 50S pada ribosom dengan mengganggu daya kerja peptidil transferase. Kloramfenikol pada dasarnya bersifat bakteriostatik tetapi pada konsentrasi tinggi kloramfenikol kadang-kadang bersifat bakterisid terhadap bakteri tertentu (Nikham & Erlinda, 2012). 2.8 Ekstraksi Ekstraski adalah penyarian zat-zat aktif dari bagian tanaman obat. Tujuan ekstraksi adalah untuk menarik seluruh komponen kimia yang terdapat dalam simplisia (Suryani, 2011). Ekstraksi adalah penarikan bahan aktif dari jaringan tumbuhan dengan menggunakan pelarut yang sesuai (Prawitasari, 2013). Ekstraksi dibagi menjadi dua. Pertama, berdasarkan campuran ekstraksi yaitu ekstraksi padat-cair dan cair-cair. Kedua, berdasarkan suhu pelaksanaan ekstraksi yaitu ekstraksi panas dan ekstraksi dingin (Prawitasari, 2013). 2.8.1 Jenis Ekstraksi 2.8.1.1 Ekstraksi Secara Dingin 2.8.1.1.1 Metode Maserasi Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana. Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari
19
akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antar larutan yang terpekat didesak ke luar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan diluar sel dan di dalam sel. Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat yang mudah mengembang dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, stirak dal lainlain. Cairan penyari yang digunakan dapat berupa air, ethanol, air-ethanol atau pelarut lain. Bila cairan penyari digunakan air maka untuk mencegah timbulnya kapang, dapat ditambahkan bahan pengawet, yang diberikan pada awal penyarian. Maserasi pada umunya dilakukan dengan cara 10 bagian simplisia dengan derajat halus yang cocok dimasukkan ke dalam bejana, kemudian ditunag dengan 75 bagian cairan penyari, ditutup dan dibiarkan selama 5 hari sari diserkai. Ampas diperas. Ampas ditambah cairan penyari secukupnya diaduk dan diserkai, sehingga diperoleh seluruh sari sebanyak 100 bagian. Bejana ditutup, dibiarkan ditempat sejuk, terlindungi dari cahaya, selama 2 hari. Kemudian endapan dipisahkan (Hargono, 1986). Keuntungan dari metode ini adalah cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan. Kerugian dari metode ini cara maserasi adalah pengerjaan dan penyariannya kurang sempurna (Hargono, 1986). Penyarian dengan metode maserasi perlu dilakukan pengadukan. Pengadukan diperlukan untuk meratakan konsentrasi larutan diluar butir serbuk
20
simplisia, sehingga dengan pengaduk tersebut tetap terjaga adanya derajat perbedaan kosentrasi yang sekecil-kecilnya anatara larutan di dalam sel dengan larutan di luar sel (Hargono, 1986). Hasil penyarian dengan cara maserasi perlu dibiarkan selama waktu tertentu. Waktu tersebut diperlukan untuk mengendapkan zat-zat yang tidak diperlukan namun ikut terlarut dalam cairan penyari sepert malam dan lain-lain (Hargono, 1986). Metode maserasi dapat dilakuakan modifikasi misalnya: 1. Digesti 2. Maserasi degan mesin pengaduk 3. Remaserasi 4. Maserasi melingkar 5. Maserasi melingkar bertingkat (Hargono, 1986) 2.8.1.1.2 Metode Perkolasi Perkolasi adalah cara penyarian yang dilakukan dengan mengalirkan cairan penyari melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi (Hargono, 1986) 2.8.1.1.3 Metode Infundasi Infundasi adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia dengan air pada suhu 900C selama 15 menit (Hargono, 1986) Infundasi adalah proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Penyarian dengan cara ini menghasilkan ekstrak yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh
21
kuman dan kapang, oleh sebab itu ekstrak yang diperoleh dengan cara ini tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam (Hargono, 1986). 2.8.1.2 Ekstraksi Secara Panas 2.8.1.2.1 Soxhletasi Soxhletasi merupakan penyarian simplisia secara berkesinambungan, cairan penyari dipanaskan sehingga menguap, uap cairan penyari terkondensasi menjadi molekul-molekul air oleh pendingin balik dan turun menyari simplisia dalam klongsong dan selanjutnya masuk kembali ke dalam labu alas bulat setelah melewati sifon. Cara ini lebih menguntungkan karena uap panas tidak melalui serbuk simplisa, tetapi melalui pipa samping (Hargono, 1986) 2.8.1.2.2 Destilasi Sederhana Destilasi sederhana adalah teknik pemisahan kimia untuk memisahkan dua atau lebih komponen yang memiliki perbedaan titik didih yang jauh. Pemisahan campuran dengan destilasi ini bertujuan untuk memperoleh senyawa murni. Senyawa yang terdapat dalam campuran akan menguap saat mencapai titik didih maisng-masing (Walangare, et al, 2013) 2.9 Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi adalah teknik pemisahan diantara dua fase, yaitu fase diam (padat atau cair) dan fase gerak (cair atau gas) (Mamoto & Citraningtyas, 2013). Kromatografi lapis tipis merupakan salah satu analisis kualitatif dari suatu sampel yang ingin diidentifikasi dengan memisahkan komponen-komponen sampel berdasarkan perbedaan kepolaran Kromatografi Lapis tipis (Mamoto & Citraningtyas, 2013). Prinsip dari kromatografi lapis tipis adalah untuk memisahkan komponen-komponen kimia yang ditentukan oleh fase diam
22
(adsorben) dan fase gerak (eluen), komponen-komponen kimia yang tidak sama sehingga komponen-komponen ini bergerak dengan kecepatan yang berbeda-beda tergantung pada tingkat kepolarannya yang menyebabkan terjadinya pemisahan komponen (Faskalia & Wibowo, 2014). Kromatografi pada KLT merupakan noda-noda yang terpisah setelah visualisasi dengan cara fisika atau kimia. Visualisasi cara fisika yaitu dengan melihat noda kromatogram pada radiasi ultraviolet. Sedangkan pada visualisasi cara kimia dilakukan denga cara menyemprot atau memberikan uap zat kimia pada kromatogram atau dengan cara pencelupan kedalam pereaksi penampakan warna. Pada kromatogram KLT dikenal istilah Retardation Faktor (Rf). Untuk tiap-tiap noda kromatogram di mana : Rf =
jarak yang ditempuh oleh komponen 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘𝑦𝑎𝑛𝑔𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝 𝑢𝑜𝑙𝑒 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡
Analisis dengan KLT dilakukan terhadap ekstrak methanol, methanol:air (30:70), methanol:air (50:50), methanol:air(70:30), dan air. fase diam yang digunakan
adalah
silica
kloroform:methanol (4:1).
gel
60
GF254
dan
fase
geraknya
adalah
23
2.10 Kerangka Konsep PEGAGAN
Kandungan kimia sebagai antibakteri
Triterpenoid (asiatikosida)
Sebagai Antibakteri
Ekstrak kasar daun pegagan (methanol:air (0%,30, 50%, 70%, 100%)
Diidentifikasi dengan KLT menggunakan pereaksi Lieberman Burchard
Aktivitas Antibakteri
Konsentrasi pelarut Optimal
Gambar 2.3 Bagan Aktivitas Atibakteri Asiatikosida Daun Pegagan terhadap Klebsiella pneumoniae 2.11 Hipotesis Terdapat pengaruh hambatan pertumbuhan bakteri Klebsiella pneumoniae pada ekstrak methanol-air pegagan dengan konsentrasi 0%, 30%, 50%, 70% dan 100%.
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Rancangan Penelitian Tahap penelitian ini meliputi determinasi tanaman pegagan (Centella asiatica (L.) Urb), ektraksi daun pegagan dengan metode maserasi menggunakan pelarut methanol:air (0%, 30%, 50%, 70% dan 100%). Tahap selanjutnya dilakukan pengujian aktivitas antibakteri dengan metode difusi. 3.2 Populasi dan Sampel Penelitian Populasi adalah wilayah generalisasi yang terdiri atas obyek/subyek yang mempunyai kualitas dan karakteristik tertentu yang ditetapkan oleh peneliti untuk dipelajari dan kemudian ditarik kesimpulannya. Sampel adalah bagian dari populasi yang juga memiliki karakteristik tertentu, jelas, dan lengkap yang dianggap bisa mewakili populasi. Maka populasi penelitian ini adalah ekstrak pegagan dan sampel penelitiannya adalah ekstrak pegagan dengan konsentrasi 15 mg/ml; 22,5 mg/ml dan 30 mg/ml. 3.3 Lokasi dan waktu penelitian Lokasi penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Mikrobiologi Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. Waktu pelaksanaan penelitian ini dilakukan pada bulan Mei 2015 sampai selesai. 3.4 Definisi Operasional Variabel Penelitian ini terdapat 2 variabel yaitu variabel bebas dan variabel terikat. Variabel bebas yaitu ekstrak pegagan dengan variasi konsentrasi pelarut yaitu
24
25
methanol:air (0%, 30%, 50%, 70% dan 100%). Variabel terikat yaitu zona hambat yang dihasilkan oleh ekstrak pegagan terhadap bakteri Klebsiella pneumonia.
26
Tabel 3.1 Definisi Operasional Variabel Variabel
Definisi
Indikator
Alat ukur
Skala
operasional Ekstrak
daun Ekstrak daun Ekstrak kental neraca
pegagan
pegagan yang daun pegagan analitik
dengan
didapatkan
konsentrasi
dari
pelarut:
maserasi
yang
Nominal
sudah
metode diidentifikasi
methanol:air
Senyawa terpenoidnya.
(0%,30%,50%, 70%dan100%) Zona Hambat Kemampuan ekstrak
ekstrak
pegagan
pegagan
Zona hambat
Jangka sorong Nominal
sebagai antibakteri
3.5 Instrumen Penelitian Pada penelitian ini membutuhkan beberapa alat dan bahan,antara lain: 3.5.1 Alat Penelitian Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi blender, seperangkat alat maserasi, erlenmeyer, beaker glass, tabung reaksi, rak tabung reaksi, alumunium foil, seperangkat alat rotary evaporator, waterbath, gunting, pisau, kertas saring, pensil, pengaris, plat KLT, chamber, botol semprot, kassa asbes, kaki tiga, lampu spirtus, kertas coklat, kapas, autoklaf, kawat ose, inkubator. 3.5.2 Bahan Penelitian
27
Bahan yang digunakan meliputi serbuk daun pegagan, pelarut methanol, aquades, air, H2SO4, NaCl, CMC, kloroform, kertas cakram, larutan Liebermann Burchard, Mac Conkey, Klorampenikol dan bakteri K.pneumoniae. 3.6 Pengumpulan Data Adapun beberapa tahap untuk pengumpulan data: 3.6.1 Determinasi Daun Pegagan Tujuan determinasi adalah untuk menetapkan kebenaran sampel yang digunakan dalam penelitian. Determinasi tanamaaaaan daun pegagan dilakukan dengan cara mencocokan ciri-ciri morfologi yang ada pada tanaman daun pegagan terhadap kunci determinasi tumbuhan kepustakaan Flora of Java. Tahapan determinasi daun pegagan adalah sebagai berikut: 1. Disiapkan tanaman yang akan dideterminasikan yaitu daun pegagan. 2. Dicatat bentuk dan susunan tubuh daun pegagan tersebut sebagai data. 3. Dicocokkan data yang sudah diperoleh dengan kunci determinasi tumbuhan sehingga ditemukan familli. 4. Dari familli diperoleh spesies, dan dilanjutkan ke atas sehingga diperoleh kingdom. 3.6.2 Prosedur Ekstraksi Pembuatan ekstrak dalam penelitian ini menggunakan metode maserasi yaitu sebagai berikut : 1. Ditimbang 500 gram serbuk daun pegagan.
28
2. Di maserasi dengan dimasukkan kedalam botol coklat direndam dengan pelarut sebanyak 500 ml (methanol, methanol:air (30:70), methanol:air (50:50), methanol:air (70:30) dan air) dibiarkan selama 5x24 jam. 3. Ektrak methanol, methanol:air (30:70), methanol:air (50:50), methanol:air (70:30) dan air dikeluarkan kemudian disaring. 4. Kemudian ekstrak disaring dan dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 60oC. 5. Ekstrak yang diperoleh ditimbang dan ditentukan rendemennya. 3.6.3 Identifikasi Kromatografi Lapis Tipis 3.6.3.1 Persiapan Plat Kromatografi 1. Disiapkan plat kromatografi silica gel 60 GF254 2. Disiapkan pensil dan penggaris untuk menandai garis bawah dan samping plat KLT serta titik-titik untuk penotolan sampel (penotolan sebanyak 5 titik). 3. Dikeringkan plat KLT kedalam oven dengan suhu 105 oC selama 10 menit untuk mengurangi kadar air pada plat KLT 4. Disiapkan eluen (kloroform:methanol, 3:2), dimasukkan kedalam chamber beserta kertas saring untuk penjenuhan 5. Diambil ekstrak pegagan dengan pipa kapiler 6. Ditotolkan pada plat KLT 7. Dimasukkan plat KLT pada chamber yang berisi eluen 8. Diamati berjalannya eluen dan sampel 9. Setelah sampai pada tanda batas, dikeluarkan dari chamber 10. Disemprot dengan pereaksi Liebermann Burchard
29
11. Diukur jarak sampel dan eluen dengan menghitung Rf 𝑅𝑓 =
𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘𝑦𝑎𝑛𝑔𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢𝑜𝑙𝑒𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘𝑦𝑎𝑛𝑔𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢𝑜𝑙𝑒𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡
3.6.4 Sterilisasi Alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian aktivitas antibakteri ini disterilkan terlebih dahulu. Jarum ose dan pinset dibakar dengan pembakaran diatas api langsung dan media disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit. 3.6 5 Pembuatan Media 3.6.5.1 Media Peremajaan Bakteri Media Mac Conkey sebanyak 0,7 g dimasukan ke dalam erlenmeyer kemudian dilarutkan dalam 20 ml aquadest (35g/1000ml) dan dipanaskan diatas hotplate sampai larut dan homogen. Kemudian dituang masing-masing 5 ml ke dalam 4 tabung reaksi. Setelah itu disterilkan kedalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit. Kemudian dimiringkan 30o dan dibiarkan mengeras. 3.6.5.2 Media Penanaman Pembuatan media penanaman yaitu Mac Conkey sebanyak 14 g dimasukkan ke dalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan dalam 400 ml aquadest (35 g/1000 ml). Setelah itu, masing-masing media dihomogenkan dengan stirer diatas penangas. Media yang sudah dihomogenkan disterilkan kedalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit. Kemudian didinginkan sampai suhu ±45 − 50oC. 3.6.6 Pembuatan larutan kontrol negative dan kontrol positif Larutan kontrol (-) digunakan larutan CMC 1% dibuat dengan cara:CMC ditimbang sebanyak 2 g dan ditambahkan aquadest sampai 200 ml kemudian dikocok sampai homogen. Sedangkan untuk kontrol positif dibuat dari sediaan
30
obat kapsul kloramphenikol 250 mg. Ditimbang serbuk kapsul kloramphenikol 15 mg, 22,5 mg dan 30 mg. Kemudian dilarutkan dengan CMC 1%. 3.6.7 Pembuatan Larutan Uji Dibuat larutan uji 15 mg/ml, 22,5 mg/ml, 30 mg/ml dengan cara ditimbang pada timbangan analitik. Setelah itu dilarutkan dengan CMC 1%. 3.6.8 Inokulasi Bakteri pada Media Agar Miring Koloni bakteri diambil dari biakan murni yang tersedia, dilakukan secara aseptis dengan jarum 2 ose dan digoreskan pada media agar miring dengan teknik sinambung. Kemudian diinkubasi dalam inkubator dengan suhu 37 oC selama 24 jam. 3.6.9 Pembuatan suspensi bakteri uji Biakan K.pneumoniae dalam media agar miring disuspensikan dengan 20 ml NaCl steril dan dilihat 25% T dengan panjang gelombang 580 nm pada spektrofotometri. Kemudian diambil secukupnya dan dimasukkan kedalam media agar penanaman. 3.6.10 Pengujian aktivitas bakteri 1. Dicampur suspensi bakteri ke dalam media agar Mac Conkey 2. Dituang media kurang lebih 10 ml ke dalam masing-masing cawan petridan dibiarkan sampai memadat. 3. Setelah memadat, diletakkan 3 kertas cakram yang masing-masing dimasukkan dalam konsentrasi 15 mg/ml, 22,5 mg/ml dan 30 mg/mlpada permukaan media dan diatur sedemikian rupa sehingga dapat mengamati daerah zona hambat yang terjadi dengan baik.
31
4. Dilakukan perlakuan sesuai dengan konsentrasi ekstrak sebagai kontrol (+) dan larutan kontrol (-). 5. Dilakukan pengulangan secara triplo dengan cara yang sama. 6. Diinkubasikan dalam inkubator pada suhu 37oC selama 1x24 jam. 7. Diamati zona hambat yang terjadi disekitar kertas cakram, kemudian diukur diameter zona hambat secara horizontal dan vertikal dengan menggunakan penggaris berskala. 3.7 Analisa Data Analisa data ditentukan dari uji aktivitas sebagai antibakteri dan data-data tersebut diuraikan secara jelas dan beruntun. Evaluasi aktivitas antibakteri ekstrak .pegagan yang diperoleh dengan metode maserasi dengan berbagai pelarut, yaitu methanol:air (0%, 30%, 50%, 70% dan 100%) dengan konsentrasi 15 mg/ml; 22,5 mg/ml dan 30 mg/ml dari masing-masing pelarut dengan mengamati zona hambat yaitu daerah jernih pada sekitar lubang sumuran. Analisis data dari penelitian ini menggunakan data SPSS 15 dengan melakukan uji Normality, Homogeneity, One way ANOVA.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian yang berjudul Aktivitas Antibakteri Daun Pegagan (Centella follium) dengan Pelarut Methanol-Air terhadap Klebsiella Pneumoniae melalui 4 tahap, yaitu meliputi determinasi tanaman, ekstraksi komponen aktif, identifikasi dengan menggunakan kromatografi lapis tipis dan pengujian aktivitas antibakteri. 4.1 Determinasi Tanaman Sampel daun pegagan yang diperoleh dari Materia Medika Batu, Jawa Timur.Hasil determinasi tanaman menunjukkan bahwa daun pegagan berasal dari jenis tanaman Centella asiatica (Linn.)Urbandari family Umbelliferae, seperti yang tertera pada Lampiran 1. 4.2 Ekstraksi Komponen Aktif Proses ekstraksi serbuk daun pegagan menggunakan pelarut methanol dengan cara maserasi. Pemilihan ekstraksi secara maserasi karena saat proses perendaman sampel akan terjadi pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan antara didalam dan diluar sel, sehingga metabolit sekunder yang ada pada tanaman akan larut dalam pelarut dan lebih maksimal mendapatkan senyawa yang diinginkan. Proses maserasi dilakukan selama 5 hari bertujuan untuk memaksimalkan penarikan asiatikosida. Pemilihan pelarut untuk proses maserasi akan memberikan efektifitas yang tinggi dengan memperhatikan kelarutan senyawa bahan alam terhadap pelarut tersebut. Menurut penelitian Mora & Fernando (2012), senyawa asiatikosida yang terdapat pada triterpenoid
32
33
memiliki sifat tahan terhadap panas, sehingga senyawa tersebut diekstraksi dengan menggunakan sokhletasi dan hasil yang diperoleh lebih maksimal karena penyarian yang berulang-ulang. Penggunaan pelarut methanol dan air berdasarkan asiatikosida yang bersifat polar (Reniza, 2003). Senyawa asiatikosida memiliki gugus aglikon triterpen dan glikosida. Gugus glikosida tersebut bersifat polar. Sehingga methanol dapat menarik senyawa asiatikosida. Hasil ekstraksi maserasi disaring untuk mendapatkan filtrat. Setelah itu filtrat dipekatkan dengan evaporasi yang bertujuan untuk memisahkan filtrat dari pelarut dan didapatkan ekstrak kental. Selanjutnya dilakukan proses waterbath agar proses penguapan pelarut lebih maksimal. Berdasarkan hasil ekstraksi dari penelitian Lestari dkk (2012), ekstrak methanol-air pegagan dari campuran pelarut yang memiliki kandungan air lebih besar bersifat lebih liat dan basah dibandingkan dengan pelarut yang lebih besar campuran methanolnya, sedangkan ekstrak yang memiliki kandungan methanol lebih tinggi bersifat lebih kental. Ekstrak yang dihasilkan berwarna coklat kehitaman dan berbau khas. Hasil yang diperoleh dari penelitian mempunyai karakteristik yang sama dengan penelitian sebelumnya. Ekstrak methanol-air yang memiliki kandungan air lebih besar bersifat lebih liat dan ekstrak yang memiliki kandungan methanol lebih tinggi bersifat lebih kental dan berbau khas. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak methanol 100% memiliki zat terlarut lebih banyak.
34
Tabel 4.1 Hasil Ekstraksi Sampel Methanol 0% 30% 50% 70% 100%
Tingkat Kekentalan Kental Kental Kental Lebih Kental Sangat Kental
Warna Coklat Coklat Kehitaman Coklat Kehitaman Coklat Kehitaman Hijau Kehitaman
Berdasarkan tabel diatas, pelarut yang didominasi methanol bentuknya lebih kental, karena pelarut methanol mudah menguap pada suhu ruang.Warna ekstrak kental yang dihasilkan sesuai dengan tingkat kepolaran pelarut yang digunakan. Ekstrak kental yang dihasilkan dihitung persen rendemennya. Persen rendemen menunjukkan kemaksimalan dari pelarut yang digunakan untuk menyari. Rendemen adalah presentase produk dari hasil perbandingan antara berat ekstrak kental dengan berat awal simplisia. Rendemen yang diperoleh dari masing-masing konsentrasi yaitu 26,91% (0% methanol), 22,32% (30% methanol), 18,83% (50% methanol), 16,13% (70% methanol) dan 5,2% (100% methanol). Perbedaan kadar rendemen disebabkan oleh konsentrasi pelarut yang berbeda-beda. Konsentrasi pelarut yang didominasi dengan methanol kadar rendemennya lebih sedikit karena methanol mudah menguap sehingga mengurangi jumlah berat ekstrak kental saat dievaporasi atau pemanasan dengan waterbath.
35
Tabel 4.2 Hasil Rendemen Ekstrak dari Serbuk Simplisia Daun Pegagan Bobot serbuk Bobot ekstrak Rendemen (%) Sampel Methanol simplisia (gram) (gram) 0% 500 134,5992 26,95 30% 500 111,613 22,32 50% 500 94,1839 18,83 70% 500 80,6627 16,13 100% 500 26,0225 5,2
Berdasarkan tabel diatas, dapat dilihat bahwa ekstrak yang mengandung air lebih banyak, menghasilkan rendemen yang lebih besar. Hal ini berarti, banyak senyawa selain asiatikosida yang larut dalam pelarut polar, sehingga senyawa asiatikosida yang terlarut hanya sedikit. Berdasarkan penelitian Reniza, hasil rendemen yang diperoleh adalah 64,71% dimaserasi dengan pelarut methanol:air (4:1) dan simplisia serbuk yang digunakan sebanyak 150 g (Reniza, 2003). Perbandingan hasil rendemen dari konsentrasi pelarut methanol 0%, 30%, 50%, 70% dan 100% yang telah dilakukan lebih sedikit dibandingkan dengan menggunakan pelarut methanol:air (4:1). Hal ini dapat diasumsikan bahwa jumlah simplisia yang dimaserasi terlalu banyak dan pelarut yang digunakan sedikit, sehingga menjadi salah satu penyebab faktor rendemen yang diperoleh sedikit. Hasil ekstrak kental methanol yang diperoleh digunakan untuk pengujian selanjutnya. Uji yang dilakukan selanjutnya adalah identifikasi senyawa asiatikosida dengan menggunakan kromatografi lapis tipis. 4.3 Uji Identifikasi Kromatografi Lapis Tipis Analisis KLT dilakukan untuk pemeriksaan kandungan senyawa kimia sehingga memperoleh gambaran mengenai golongan kandungan senyawa yang terdapat dalam ekstrak methanol daun pegagan. Keuntungan KLT adalah waktu
36
yang dibutuhkan lebih cepat, hasil pemisahan yang diperoleh lebih baik, dan diperlukan jumlah sampel yang sedikit. Uji identifikasi adanya senyawa triterpenoid (asiatikosida) menggunakan Kromatografi Lapis Tipis, fase diam yang digunakan adalah silica gel 60 F254 dengan fase geraknyakloroform : methanol (3:2). Plat KLT dipanaskan terlebih dahulu ke dalam oven dengan suhu 105o C selama ± 10 menit untuk mengurangi kadar air pada plat KLT. Untuk mengetahui bahwa adanya warna ungu yang menunjukkan bahwa warna tersebut golongan triterpenoid menggunakan pereaksi Lieberman Burchard. Nilai Rf masing-masing konsentrasi pelarut adalah 5,55 (0% methanol), 22,22 (30% methanol), 26,67% (50% methanol), 30,0% (70% methanol), 34,4% (100% methanol). Tabel 4.3 Hasil KLT Ekstrak Methanol Pegagan Dengan Eluen Kloroform : Methanol (3:2) Warna noda tanpa sinar UV Konsentrasi pelarut 0% methanol 30% methanol 50% methanol 70% methanol 100%methanol
Sebelum disemprot Lieberman burchard Kuning kecoklatan Kuning kecoklatan Kuning kecoklatan Kuning kecoklatan Kuning kecoklatan
Setelah disemprot Lieberman burchard Kuning kecoklatan Kuning kecoklatan Kuning kecoklatan Kuning kecoklatan Kuning kecoklatan
Warna noda dibawah sinar UV pada λ 254 nm Sebelum Setelah disemprot disemprot Lieberman Lieberman burchard burchard Coklat Merah ungu kecoklatan Coklat Merah ungu kecoklatan Coklat Merah ungu kecoklatan Coklat Merah ungu kecoklatan Coklat Merah ungu kecoklatan
Dalam pengujian identifikasi KLT dengan pereaksi Liebermann Burchard menampakkan noda berwarna coklat, hijau tua sampai ungu tua, merah ungu dan ungu menunjukkan adanya senyawa triterpenoid. Berdasarkan penelitian sebelumnya,
identifikasi
triterpenoid
pada
ekstrak
methanol
pegagan
37
menggunakan eluen kloroform : methanol (4:1) menampakkan bercak noda berwarna ungu merah muda setelah disemprot dengan pereaksi Lieberman Burchard (Mora & Fernando, 2012), sedangkan pada penelitan yang telah dilakukan, pemakaian eluen kloroform : methanol (3:2) menghasilkan noda berwana kuning kecoklatan dibawah sinar UV pada λ 254 nm. Setelah disemprot dengan reagen Lieberman burchard berwarna merah ungu kecoklatan.Kelima konsentrasi pelarut methanol (0%, 30%, 50%, 70% dan 100%) menghasilkan noda berwarna merah ungu kecoklatan. Hal ini membuktikan bahwa ekstrak methanol positif mengandung senyawa golongan triterpenoid.Namun, penelitian ini tidak dilakukan identifikasi senyawa asiatikosida pada ekstrak methanol pegagan, sehingga tidak diketahui dengan benar adanya senyawa asiatikosida yang terkandung didalamnya. 4.4Pengujian Aktivitas Antibakteri Hasil penelitian menunjukkan bahwa uji aktivitas ekstrak methanol (0%, 30%, 50%, 70% dan 100%) daun pegagan (Centella asiatica (L.)Urb)tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif Klebsiella pneumonia.Hal ini dapat dilihat pada tabel 4.4. Tabel 4.4 Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Luas Zona Hambat (mm)
Konsentrasi Pelarut Methanol (%) 0 30 50 70 100 kontrol + kontrol -
15 mg/ml Rep1 15,53 -
Rep2 15,53
22,5 mg/ml Rep3 Rep1 15,43 17,23
Rep2 17,16
Rep3 16,9
30 mg/ml Rep1 17,83
Rep2 Rep3 17,83 18,2
38
Larutan uji pada kadar 15mg/ml, 22,5 mg/ml dan 30 mg/ml dari seluruh konsentrasi pelarut methanol yang digunakan tidak menunjukkan adanya zona hambat, sedangkan pada antibiotik kloramphenikol pada kadar rata-rata 15mg/ml sebesar 15,43 mm, 22,5 mg/ml sebesar 17, 09 dan 30 mg/ml sebesar 17, 95 mm. Hal ini dapat diasumsikan bahwa aktivitas antibakteri larutan uji tidak ada, sedangkan pada antibiotik terdapat zona hambat. Hal ini disebabkan kurang maksimal dalam
proses ekstraksi untuk mendapatkan senyawa aktif.Ekstrak
methanol daun pegagan yang digunakan sedikit
mengandung senyawa
asiatikosida. Berdasarkan penelitian Roihanah, dkk (2011), menjelaskan bahwa senyawa triterpenoid larut dalam pelarut nonpolar.Menururt reniza (2003), senyawa asiatikosida bersifat polar, sedangkan pada penelitian Lestari et al., (2012), menjelaskan bahwa senyawa asiatikosida mengandung aglikon triterpen yang bersifat nonpolar dan glikosida yang bersifat polar. Kedua kandungan tersebut dapat diekstraksi menggunakan pelarut nonpolar dan pelarut polar. Menurut (Mora & Fernando, 2012), pelarut methanol merupakan pelarut universal yang dapat melarutkan hampir sebagian besar komponen senyawa yang terdapat pada daun pegagan, sehingga konsentrasi senyawa antibakteri terlalu kecil Akibatnya aktivitas terhadap bakteri gram negatif (Klebsiella pneumoniae) tidak terlihat. Selain itu, perlu adanya isolasi senyawa aktif untuk menghasilkan senyawa yang lebih spesifik, sehingga aktivitasnya akan lebih spesifik karena tidak ada lagi senyawa-senyawa pengotor yang bisa mengganggu aktivitas antibakteri larutan uji. Mekanisme dari senyawa asiatikosida (triterpenoid)sebagai antibakteri adalah bereaksi dengan porin (proteintransmembran) pada membran luar dinding
39
sel bakteri, membentuk ikatan polimer yangkuat sehingga mengakibatkan rusaknya porin. Rusaknya porin yang merupakan pintu keluar masuknya senyawa akan mengurangi permeabilitas dinding sel bakteri yang akan mengakibatkan sel bakteri akan kekurangan nutrisi, sehingga pertumbuhan bakteriterhambat atau mati. Mekanisme
kerja
kloramfenikol
melalui
penghambatan
terhadap
biosintesis protein pada siklus pemanjangan rantai asam amino, yaitu dengan menghambat pembentukan ikatan peptida. Antibiotika ini mampu mengikat subunit ribosom 50-S sel mikroba target secara terpulihkan, akibatnya terjadi hambatan pembentukan ikatan peptida dan biosintesis protein. Kloramfenikol umumnya bersifat bakteriostatik, namun pada konsentrasi tinggi dapat bersifat bakterisid terhadap bakteri-bakteri tertentu. Kloramfenikol pada dasarnya bersifat bakteriostatik. Pada konsentrasi tinggi kloramfenikol kadang-kadang bersifat bakterisid terhadap bakteri tertentu (Nikham & Erlinda, 2012). Berdasarkan sifat bakteri Klebsiella pneumoniae yang termasuk gram negatif, hal ini salah satu penyebab larutan uji tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri, karena pada dinding sel bakteri gram negatif bersifat kompleks terdiri dari tiga lapis, yaitu lapisan luar yang berupa lipoprotein, lapisan tengah lipopolisakarida yang berperan sebagai penghalang masuknya bahan bioaktif antibakteri, dan lapisan dalam berupa peptidoglikan dengan kandungan lipid tinggi (11-12%) (Sarjono & Mulyani, 2007). Penelitian ini tidak dilakukan identifikasi bakteri, sehingga tidak diketahui dengan benar apakah bakteri yang dipakai benar-benar bakteri Klebsiella pneumonia. Hal ini merupakan salah satu penyebab tidak adanya zona hambat
40
yang terlihat. Selain itu, perlakuan uji fase log juga tidak dilakukan sebelum pengujian aktivitas antibakteri, sehingga tidak mengetahui waktu mengetahui waktu pertumbuhan sel saat memperbanyak diri secara cepat. Dalam kondisi pertumbuhan yang optimum, sel membelah dalam jumlah yang luar biasa dalam waktu yang singkat. Berdasarkan hal ini, tidak diketahui waktu optimal ekstrak saat menghambat bakteri.
BAB VI
PENUTUP
5.1 Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa ekstrak methanol pegagan (0%, 30%, 50%, 70% dan 100%) terdapat senyawa asiatikosida (triterpenoid), tetapi tidak ada pengaruh hambatan terhadap bakteri Klebsiella pneumoniae. 5.2 Saran 1.
Perlu dilakukan isolasi, karakterisasi dan mengetahui senyawa kimia yang mempunyai aktivitas antibakteri.
2.
Perlu dilakukan identifikasi bakteri untuk memastikan bahwa bakteri tersebut benar-benar bakteri yang akan digunakan dalam penelitian.
3.
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai aktivitas antibakteri daun pegagan terhadap gram negative.
41
42
DAFTAR PUSTAKA Besung, I. N. K. (2009). PEGAGAN (Centella asiatica) SEBAGAI ALTERNATIF PENCEGAHAN PENYAKIT INFEKSI PADA TERNAK. Buletin Veteriner Udayana, 1(2), 61–67. Dwiyatmoko, B., Usia, T., Warsiati, Wijiasih, Febriani, A., & K.W, R. A. (Eds.). (2010). Pegagan Centella asiatica(L.) Urban. serial data ilmiah terkini tumbuhan obat. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan. Elfidasari, D., Noriko, N., Mirasaraswati, A., Feroza, A., & Canadianti, S. F. (2013). Deteksi Bakteri Klebsiella pneumonia pada Beberapa jenis Rokok Konsumsi Masyarakat. AL-AZHAR INDONESIA SERI SAINS DAN TEKNOLOGI, 2(1), 41–47. Faskalia, & Wibowo, M. A. (2014). SKRINING FITOKIMIA, UJI AKTIVITAS, ANTIOKSIDAN DAN UJI SITOTOKSIK EKSTRAK METANOL PADA AKAR DAN KULIT BATANG SOMA (Ploiarium alternifolium). JKK, 3(3), 1–6. Gitawati, R., Astuti, Y., & Winarno, W. (2005). HERBA PEGACAN (Centella asiatica, L): STUDI PENDAHtILtiAN EFEK ANTI MIKOBAKTERII.]M SECAIIA IN VITRO. Jurnal Bahan Alam Indonesia, 4(2), 286–291. Harwoko, S, P., & E, N. A. (2014). Triterpenoid-rich fraction of Centella asiatica leaves and in vivo antihypertensive activity. International Food Research Journal, 21(1), 149–154. James, J. T., & Dubery, I. a. (2009). Pentacyclic triterpenoids from the medicinal herb, Centella asiatica (L.) Urban. Molecules (Basel, Switzerland), 14(10), 3922–41. doi:10.3390/molecules14103922 Lestari, A. B. S., Susanti, L. U., & Dwiatmaka, Y. (2012). OPTIMASI PELARUT ETANOL-AIR DALAM PROSES EKSTRAKSI HERBA PEGAGAN (Centella. Bionatura Jurnal Ilmu-ilmu Hayati dan Fisik, 14(2), 87–93. Mamoto, L. V., & Citraningtyas, F. G. (2013). Analisis rhodamin b pada lipstik yang beredar di pasar kota manado. Jurnal Ilmiah Farmasi, 2(02), 61–67. Mora, E., & Fernando, A. (2012). Optimasi Ekstraksi Triterpenoid Total Pegagan ( Centella asiatica ( Linn .) Urban ) yang Tumbuh di Riau. Jurnal Penelitian Farmasi Indonesia, 1(1), 11–16. Muhtadi, Ambarwati, R., & Yuliani, R. (2012). DAN FRAKSI KULIT BATANG BELIMBING WULUH ( Averrhoa bilimbi Linn .) TERHADAP BAKTERI
43
44
Klebsiella pneumoniae DAN Staphylococcus epidermidis BESERTA. BIOMEDIKA, 4, 1–9. Musyarofah, N., Susanto, S., Aziz, S. A., & Kartosoewarno, S. (2007). Respon Tanaman Pegagan ( Centella asiatica L . Urban ) Terhadap Pemberian Pupuk Alami di Bawah Naungan. Bul. Agron, 224(35), 217–224. Nikham, & Erlinda, T. (2012). UJI BAHAN BAKU ANTIBAKTERI DARI BUAH MAHKOTA DEWA ( Phaleria Macrocarpa ( Scheff ) Boerl .) HASIL IRADIASI GAMMA DAN ANTIBIOTIK TERHADAP BAKTERI PATOGEN. Prosiding Pertemuan Ilmiah Ilmu Pengetahuan dan Teknologi Bahan 2012, 168–174. Nugroho, F., Utami, P. I., & Yuniastuti, I. (2011). EVALUASI PENGGUNAAN ANTIBIOTIK PADA PENYAKIT PNEUMONIA DI RUMAH SAKIT UMUM DAERAH PURBALINGGA. PHARMACY, 08(01), 141–154. Rasyid, R., Mahyuddin, & Agustin, M. (2011). PEMERIKSAAN KADAR KALIUM DAN NATRIUM PADA HERBA Centella asiatica (L) URBAN DENGAN METODA FOTOMETRI NYALA. Jurnal Farmasi dan Kesehatan, 1(2), 13–17. Reniza, afrina wati. (2003). isolasi dan identifikasi senyawa aiatikosida dari pegagan (Centella asiatica L. Urban) sebagai senyawa antibakteri. Bogor. Santoso, F. P., Pingit, S., & Purhadi, D. (2012). Faktor-Faktor Eksternal Pneumonia pada Balita di Jawa Timur dengan Pendekatan Geographically Weighted Regression. JURNAL SAINS DAN SENI ITS, 1(1), 0–5. Sarjono, P. R., & Mulyani, N. S. (2007). Aktivitas Antibakteri Rimpang Temu Putih ( Curcuma mangga Vall ). Jurnal Sains & Matematika (JSM), 15(April), 89–93. Sugoro, I., Windusari, Y., & Tetriana, D. (2008). DOSIS INAKTIF DAN KADAR PROTEIN Klebsiella pneumonia K5 HASIL IRADIASI GAMMA. A Scientific Journal for The Applications of Isotopes and Radiation, 4(1), 60–68. Wahyuno, D., Amalia, N., Rossiana, N., & Bermawie, N. (2010). RESPON LIMA AKSESI PEGAGAN TERHADAP Septoria centellae , PENYEBAB BERCAK DAUN. Bul. littro, 21(2), 156–170. Walangare, K. B. A., Lumenta, A. S. M., Wuwung, J. O., & Sugiarso, B. A. (2013). Rancang Bangun Alat Konversi Air Laut Menjadi Air Minum Dengan Proses Destilasi Sederhana Menggunakan Pemanas Elektrik. eJurnal Teknik Elektrodan komputer.
45
Widiyati, E. (2006). Penentuan Adanya Senyawa Triterpenoid Dan Uji Aktivitas Biologis Pada Beberapa Spesies Tanaman Obat Tradisional Masyarakat Pedesaan Bengkulu. Jurnal Gradien, 2(1), 116–122. Wiyarto, A. N. (2009). UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI MINYAK ATSIRI DAUN JERUK KEPROK ( Citrus nobilis Lour .) TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli (pp. 1–22). surakarta.
Hargono, D. (1986). sediaan galenik. jakarta: DEPARTEMEN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA. Prawitasari, D. C. (2013). Perbedaan Aktivitas Analgesik Ekstrak Daun ( Sesbaniae folium) Dan Ekstrak Daun Kulit Batang (Sesbaniae cortex) Turi Merah . Malang : Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia. Suryani, O. R. (2011). uji Aktivitas Antibakteri,Isolat Tanin Daun belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi linn) Terhadap StaphylococcusI Sebagai Pencegah Infeksi Pada Jerawat . Malang : Akademi Analis Farmasi Dan Makanan Putra Indonesia. Balai Materia Medika Batu.2014.
46
Lampiran 1. Hasil Determinasi
47
Lampiran 2. Perhitungan Rendemen Ekstrak 𝐴
R (%) = 𝐵 𝑥 100 % Keterangan: R= Rendemen (%) A= Berat ekstrak kasar (gram) B= Berat awal bahan (gram) 1. R. ekstrak air
=
2. R. ekstrak methanol:air (30:70) = 3. R. ekstrak methanol:air (50:50) = 4. R. ekstrak methanol:air (70:30) = 5. R. ekstrak methanol
=
134 ,5992 𝑔 500 𝑔 111 ,613 𝑔 500 𝑔 94,1839 𝑔 500 𝑔 80,6627 𝑔 500 𝑔 26,0225 𝑔 500 𝑔
𝑥 100% = 26,91%
𝑥 100% = 22,32% 𝑥 100% = 18,83% 𝑥 100% = 16,13% 𝑥 100% = 5,2%
Lampiran 3. Perhitungan Kontrol positif Replikasi I
II
III
Rata-rata
Konsentrasi Kontrol Positif (mm) 15 mg/ml 22,5 mg/ml 30 mg/ml 22,0±6 23,2±6 24,1±6 21,5±6
22,1±6
23,6±6
23,1±6
24,4±6
24,3±6
20,9±6
22,5±6
23,9±6
21,7±6
23,1±6
23,1±6
22,0±6
23,9±6
24,5±6
21,0±6
22,8±6
23,6±6
21,5±6
22,5±6
24,2±6
21,8±6
23,4±6
24,8±6
15,42
17,09
17,95
48
Lampiran 4. Proses Ekstraksi Maserasi
Penimbangan simplisia serbuk daun pegagan
Maserasi
Hasil penyaringan maserasi
Evaporasi hasil maserasi
Proses waterbath ekstrak methanol-air
Ekstrak kental methanol (0%,30%,50%, 70% dan 100%)
Penimbangan ekstrak kental
49
Lampiran 5. Identifikasi Kromatografi Lapis Tipis
Pengeringan plat KLT
Eluasi plat silica dengan eluen kloroform : methanol (3:2)
Warna noda tanpa sinar UV
Warna noda pada sinar UV
Warna noda tanpa sinar UV setelah disemprot Lieberman Burchard
Warna noda pada sinar UV setelah disemprot Lieberman Burchard
50
Lampiran 6. Proses Sterilisasi dan Pembiakan Bakteri
Pengenceran media Mc Conkey
Persiapan alat-alat gelas untuk disterilkan
Sterilisasi dengan autoklaf
Pengambilan bakteri dengan jarum ose
Inkubasi biakan bakteri
Hasil biakan bakteri
51
Lampiran 7. Proses Pembuatan Suspensi dan Penanaman Ekstrak
Larutan Suspensi bakteri
%T larutan supensi bakteri
Penimbangan konsentrasi ekstrak
Larutan CMC sebagai pengenceran ekstrak
Larutan ekstrak
Larutan suspensi dimasukkan kedalam tabung reaksi berisi media Mc Conkey
Penuangan larutan suspensi dan bakteri
Peletakan kertas cakram ke petridisk
52
Lampiran 8. Hasil Pengamatan Aktivitas Antibakteri Konsentrasi pelarut methanol (%) 0
30
50
70
100
kontrol +
kontrol -
Replikasi 1
Replikasi 2
Replikasi 3
