ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

TESIS

POTENSI MYCOTOXIN BINDERS TERHADAP KADAR ESTROGEN, EKSPRESI CASPASE 9 DAN GAMBARAN HISTOLOGI OVARIUM MENCIT BETINA (Mus musculus) YANG DIPAPAR ZEARALENON PENELITIAN EKSPERIMENTAL LABORATORIS

Oleh NOWO SISWO YUWORO NIM. 061214153008

PROGRAM STUDI MAGISTER ILMU BIOLOGI REPRODUKSI FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN UNIVERSITAS AIRLANGGA SURABAYA 2016 ii

TESIS

POTENSI MYCOTOXIN BINDERS ...

NOWO SISWO YUWORO


POTENSI MYCOTOXIN BINDERS TERHADAP KADAR ESTROGEN, EKSPRESI CASPASE 9 DAN GAMBARAN HISTOLOGI OVARIUM MENCIT BETINA (Mus musculus) YANG DIPAPAR ZEARALENON PENELITIAN EKSPERIMENTAL LABORATORIS

TESIS

untuk memperoleh gelar Magister dalam Program Studi Ilmu Biologi Reproduksi pada Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya

NOWO SISWO YUWORO NIM. 061214153008

PROGRAM STUDI MAGISTER ILMU BIOLOGI REPRODUKSI FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN UNIVERSITAS AIRLANGGA SURABAYA 2016

iii

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam Tesis berjudul :

Potensi Mycotoxin Binders Terhadap Kadar Estrogen, Ekspresi Caspase 9 Dan Gambaran Histologi Ovarium Mencit Betina (Mus Musculus) Yang Dipapar Zearalenon tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar Magister di suatu perguruan tinggi dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Surabaya, 16 Februari 2016

Nowo Siswo Yuworo NIM. 061214153008

iv

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


Lembar Pengesahan TESIS INI TELAH DISETUJUI Tanggal 16 Februari 2016 Oleh : Pembimbing Ketua

Dr. Abdul Samik, M.Si., drh. NIP. 19640508 199011 1 001 Pembimbing

Dr. Mirni Lamid, MP., drh. NIP. 19620118 199203 2 001

Mengetahui, Ketua Program Studi Ilmu Biologi Reproduksi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga

Dr. Rimayanti, M. Kes., drh. NIP. 19630312 198803 2 003 v

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


Hasil Penelitian Tesis ini telah diuji dan dinilai pada Tanggal 16 Februari 2016

KOMITE PENGUJI HASIL PENELITIAN TESIS Ketua

: Prof. Dr. Wurlina, MS., Drh

Anggota

: 1. Prof. Dr. H. Imam Mustofa, M.Kes., Drh 2. Dr. Tatik Hernawati., M.Si.,Drh 3. Dr. Abdul Samik, M.Si., Drh 4. Dr. Mirni Lamid, MP., Drh

Surabaya, 16 Februari 2016 Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Dekan,

Prof. Dr. Pudji Srianto, M.Kes., Drh NIP. 19560105 198601 1 001

vi

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


UCAPAN TERIMA KASIH

Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas limpahan rahmat, karunia, serta anugerah yang begitu Maha Agung sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis dengan judul “Potensi Mycotoxin Binders Terhadap Kadar Estrogen, Ekspresi Caspase 9 Dan Gambaran Histologi Ovarium Mencit Betina (Mus Musculus) Betina Yang Dipapar Zearalenon”. Penulis mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah banyak membantu baik secara langsung maupun tidak langsung dalam penyusunan tesis ini, antara lain : Dekan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Prof. Dr. Pudji Srianto, M.Kes., Drh., atas kasih sayangnya kepada penulis selama belajar di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya. Prof. Dr. Fedik Abdul Rantam, Drh selaku Wakil Dekan I, Dr. Mufasirin, drh., M.Si., selaku Wakil Dekan II, Prof. Dr. Suwarno, M.Si., Drh., selaku Wakil Dekan III, serta Ibu Dr. Rr. Sri Pantja Madyawati, M.Si., Drh., selaku Kepala Bagian Akademik atas bimbingannya kepada penulis selama menjalani pengabdian sebagai aktivis di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya. Bapak Dr. Abdul Samik, M.Si., Drh., selaku pembimbing utama dan Ibu Dr. Mirni Lamid, MP., Drh selaku pembimbing kedua atas segala saran, kritik serta kesabaran dalam membimbing penulis dari persiapan sampai akhir penelitian sehingga tujuan agar tesis ini terus bermanfaat dapat tercapai dengan baik.

vii

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


Ibu Prof. Dr. Wurlina, MS., Drh., selaku ketua komisi penguji, Ibu Dr. Tatik Hernawati., M.Si.,Drh., serta Bapak Prof. Dr. H. Imam Mustofa, M.Kes., Drh., selaku anggota penguji atas segala bimbingan, kritik, serta saran yang sangat bermanfaat dan banyak membantu penulis untuk menyempurnakan tesis ini. Ibu Dr. Rimayanti, M.Kes., Drh., selaku dosen wali sekaligus ketua program studi Ilmu Biologi Reproduksi yang selama ini banyak meluangkan waktu kepada penulis serta memberikan bimbingan. Seluruh bapak dan ibu dosen pengajar atas wawasan keilmuan serta pengalaman belajar selama penulis mengikuti pendidikan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Bapak dan Ibu staff kependidikan, Bagian Kemahasiswaan, Bagian Akademik, Bagian Keuangan, Bagian Tata Usaha dan Kerumahtanggaan serta Bagian Sistem Informasi yang telah banyak membantu selama penulis belajar di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya. Ayahanda, Dukut Wiyanto S. Pd dan Ibunda, Nur Fathonah S. Pd yang telah memberikan dukungan, bimbingan, pengorbanan, serta kasih sayang bagi penulis dari kecil sampai saat ini yang tak terhingga dan senantiasa memberikan motivasi bagi penulis untuk terus bisa bermanfaat bagi sesama. Tak lupa juga kepada, saudara serta sanak keluarga yang juga banyak memberikan dukungan bagi penulis. M. Thohawi Elziyad P, M.Si, drh., Ragil Angga Prastiya, M.Si, drh., Amung Logam Saputro, M. Si, drh., Dikky Eka Mandala P, M. Si. drh., Kartika Eka Paksi, drh., Caessaria Rosyida Bawaningrum, drh., yang telah menemani perjalanan penelitian dari awal sampai akhir.

viii

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


Semua teman-teman angkatan 2008, alumni sejawat Dokter Hewan angkatan 151, para mahasiswa S2 IBR dan keluarga besar FKH Unair serta seluruh civitas akademika yang telah banyak memberikan dukungan kepada penulis. Semua pihak yang tidak disebutkan tetapi sangat membantu dalam proses pelaksanaan penelitian dan penyusunan tesis ini. Penulis juga menyadari bahwa masih terdapat kesalahan dan kekurangan pada tesis ini, untuk itu mohon kritik dan saran yang membangun demi perbaikan di masa mendatang. Semoga tesis ini dapat bermanfaat bagi penulis khususnya dan semua pihak yang membutuhkan demi kemajuan dan perkembangan ilmu pengetahuan di bidang kedokteran hewan serta turut meningkatkan kualitas dan kuantitas ternak di Indonesia. Surabaya, 16 Februari 2016 Penulis

ix

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


RINGKASAN

Potensi Mycotoxin Binders Terhadap Kadar Estrogen, Ekspresi Caspase 9 Dan Gambaran Histologi Ovarium Mencit Betina (Mus Musculus) Yang Dipapar Zearalenon Pakan adalah bahan makanan tunggal atau campuran, baik yang diolah maupun yang tidak diolah, yang diberikan kepada hewan untuk kelangsungan hidup dan berkembang biak Jagung merupakan bahan pakan berenergi tinggi dengan kandungan protein yang relatif rendah jika dibandingkan dengan pakan biji-bijian lainnya. Zearalenon (ZEN) adalah mikotoksin yang dihasilkan oleh jamur Fusarium graminearum. Zearalenon dihasilkan ketika bahan pakan terutama jagung disimpan dalam lingkungan yang lembab. Zearalenon merupakan mikotoksin estrogen alami yang dapat menginduksi perubahan profil metabolik dan aktivitas sel dari organ uterus, hati, sumsum tulang belakang, otak, kelenjar mammae, dan sel granulosa dari cumulus oophorus pada hewan monogastrik. Zearalenon juga dapat memicu proliferasi sel yang tidak terkendali sehingga menginisiasi proses apoptosis jalur intrinsik. Mycotoxin binders mengandung bahan yang berpotensi besar untuk diserap termasuk karbon aktif aluminosilikat, selulosa, polisakarida, peptidoglikan, dan polimer sintetis seperti cholestryamine, polivinilpirolidon beserta turunannya sehingga diharapkan dapat mengurangi efek zearalenon. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh mycotoxin binders terhadap kadar estrogen, jumlah sel folikel primer, folikel sekunder, folikel tersier, folikel de Graaf, ekspresi proapoptotik antibodi caspase 9 organ ovarium mencit (Mus musculus) betina yang dipapar zearalenon. Hewan coba penelitian ini adalah mencit (Mus musculus) yang telah dibuntingkan sebanyak 20 ekor yang kemudian dibagi menjadi lima perlakuan dengan masing-masing empat ulangan, yaitu (K-) tidak dipapar zearalenon dan mycotoxin binders, (K+) dipapar zearalenon dosis 0,1 mg/ekor/hari, (P1) dipapar zearalenon dosis 0,1 mg/ekor/hari dan mycotoxin binders dosis 0,5 mg/ekor/hari, (P2) dipapar zearalenon dosis 0,1 mg/ekor/hari dan mycotoxin binders dosis 1 mg/ekor/hari, (P3) dipapar zearalenon dosis 0,1 mg/ekor/hari dan mycotoxin binders dosis 2 mg/ekor/hari. Pemberian perlakuan diberikan secara peroral dengan sonde selama 10 hari. Pengambilan sampel darah secara intracardia untuk pengukuran kadar estrogen dengan uji ELISA. Organ ovarium yang telah difiksasi kemudian diperiksa dengan menggunakan pewarnaan hematoksilin eosin dan uji imunohistokimia. Pengamatan dan skoring dilakukan secara mikroskopis dengan menggunakan mikroskop Olympus® CX-41 kemudian dianalisis statistik dengan uji normalitas Kolmogorov-Smirnov. Jika terdistribusi normal akan dilakukan uji ANOVA. Apabila terdapat perbedaan yang nyata dilanjutkan dengan uji Fisher’s LSD. Jika tidak terdistribusi normal akan dilakukan uji Kruskal-Wallis. Apabila terdapat perbedaan yang nyata dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney. x

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


Hasil uji statistik menunjukkan bahwa dosis minimal mycotoxin binders yang dapat mengurangi efek yang ditimbulkan zearalenon adalah sebesar 0,5 mg/ekor/hari. Mycotoxin binders dosis 2 mg/ekor/hari teruji secara total dapat mengeliminasi pengaruh zearalenon terhadap jumlah folikel. Penurunan ekspresi caspase 9 ditunjukkan oleh semua dosis mycotoxin binders. Zearalenon yang dimetabolisme di hati dapat memunculkan isomer metabolit α Zearalenol dan β Zearalenol. Kedua isomer tersebut memiliki struktur resorcyclic acid lactone yang berikatan dengan reseptor estrogen (E2) membentuk Zearalenone E2 Receptor Complex (ZEA-E2R). ZEA-E2R mengaktifkan respon mRNA yang akan menginduksi proses mitosis Granulose Cumulus Cells (GCs). GCs akan terus berkembang membentuk lapisan-lapisan sel granulosa mature dan memproduksi beberapa sitokin seperti, Insulin-like Growth Factor-1 (IGF-1), Fibroblastic Growth Factor Family-2 (FGF-2), dan Stem Cell Factor (SCF). IGF1 berperan penting dalam mengirimkan impuls menuju hipofisa anterior untuk meriliskan FSH sebagai inisiator proliferasi folikel. Peningkatan jumlah folikel akan berbanding lurus dengan kadar estrogen sehingga menimbulkan kondisi hiperestrogenisme. Hiperestrogenisme akan mengganggu Mitochondrial Parmeability Transmisible Pore (MPTP) sehingga menginisiasi apoptosis jalur intrinsik. Caspase 9 bertindak sebagai inisiator apoptosis akan terdimerisasi memicu umpan balik dengan menghambat rilis bcl 2 dan mengikat procaspase 3 untuk mengaktifkan caspase 3 yang akan memfragmentasi DNA. Hasil akhir pada proses fragmentasi akan terbentuk apoptotic bodies yang akan difagositosis oleh makrofag. Mekanisme kerja mycotoxin binders dengan mengeliminasi gugus metil pada struktur kimia zearalenon. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa mycotoxin binders dapat menurunkan jumlah folikel dan ekspresi caspase 9 organ ovarium mencit (Mus musculus) betina yang terpapar zearalenon akan tetapi tidak mempengaruhi kadar estrogen endogen dalam darah. Saran yang dapat dianjurkan agar dapat dilakukan penelitian mengenai potensi mycotoxin binders terhadap fisiologi dan patologi organ testis, ovarium, plasenta fetus, kadar testosteron, serta kadar ROS baik hewan jantan maupun betina yang terpapar zearalenon. Penelitian yang juga perlu dilakukan lebih lanjut mengenai potensi mycotoxin binders terhadap mikotoksin aflatoksin, deoksinivalenol, fumonisin, dan ochratoksin.

xi

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


SUMMARY

Potential of Mycotoxin Binders on The Estrogen Levels , Histology and Expression of Caspase 9 of Ovaries in Female Mice (Mus musculus) Exposed by Zearalenone

Animal feed was single food ingredient or a complete feed , whether treated or untreated , which is given to animals for survival and production Corn is a high energy feed ingredients with protein content is relatively low when compared to other feed grains. Zearalenon ( ZEN ) was a mycotoxin produced by Fusarium graminearum . Zearalenon produced when the feed material was stored in a moist environment. Zearalenone was a natural estrogen mycotoxins that can induce changes in the metabolic profile of the cells and the activity of the organs of the uterus, liver, bone marrow, brain, mammary gland, and granulosa cells of the cumulus oophorus in monogastric animals. Zearalenone also can trigger uncontrolled proliferation of cells that initiate the intrinsic pathway of apoptosis. Mycotoxin binders containing material that has great potential to be absorbed including activated carbon aluminosilicate, cellulose, polysaccharides, peptidoglycan, and synthetic polymers such as cholestryamine, polyvinylpyrrolidone and its derivatives that are expected to reduce the effect of zearalenone. This study aims to determine the influence of mycotoxin binders to estrogen levels, the number of cells primary follicles, secondary follicles, tertiary follicles, follicle de Graaf, as well as the expression of proapoptotic caspase 9 antibody organs ovaries of female mice (Mus musculus) with exposed zearalenone. Animal research were 20 female mice (Mus musculus), which is then divided into five treatments with four replicates each, ie (K-) are not exposed zearalenone and mycotoxin binders, (K+) zearalenone exposed to a dose of 0.1 mg/head/day, (P1) exposed zearalenone dose of 0.1 mg/head/day and mycotoxin binders dose of 0.5 mg/head/day, (P2) zearalenone exposed dose of 0.1 mg/head/day and mycotoxin binders dose of 1 mg/head/day, (P3) is exposed to a dose of zearalenone 0.1 mg/head/day and mycotoxin binders dose of 2 mg/head/day. Provision of treatment administered orally for 10 days with the sonde. Intracardia blood sampling for measurement of estrogen levels by ELISA. Ovarian organ that has been fixed and then examined using hematoxylin eosin staining and immunohistochemistry test. Observations and scoring is done microscopically using a microscope Olympus ® CX-41 and then analyzed statistically with the Kolmogorov-Smirnov normality test. If normally distributed ANOVA test will be conducted. If there is a significant followed by Fisher's LSD test. If not normally distributed will be performed Kruskal-Wallis test. If there is a significant followed by Mann-Whitney test.

xii

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


Statistical test results showed that the minimal dose of mycotoxin binders to reduce the effects zearalenone amounted 0.5 mg/head/day. Mycotoxin binders dose of 2 mg/head/day of total proven to eliminate the influence of zearalenone to count the number of follicles. Decreased expression of caspase 9 was shown by all the treatment doses were given mycotoxin binders. Zearalenone was metabolized in the liver can result metabolite isomers α and β Zearalenol Zearalenol. Both of these isomers have resorcyclic acid lactone structure that binds to the estrogen receptor (E2) formed Zearalenone E2 Receptor Complex (ZEA-E2R). ZEA-E2R activate mRNA response that will induce mitotic process granulosa Cumulus Cells (GCs). GCs will continue to evolve to form layers of granulosa cells mature and produce several cytokines such as Insulin-like Growth Factor-1 (IGF-1), Family fibroblastic growth factor-2 (FGF-2), and Stem Cell Factor (SCF). IGF-1 plays an important role in sending impulses to the anterior pituitary to release all follicles FSH as the initiator of proliferation. Increasing the number of follicles will be directly proportional to the levels of estrogen causing hiperestrogenisme conditions. Hiperestrogenisme would disrupt the consistency Mitochondrial Parmeability Transmisible Pore (MPTP) in the mitochondrial membrane that initiates the intrinsic pathway of apoptosis. Caspase 9 acts as an initiator of apoptosis would trigger feedback dimerized by inhibiting the release of bcl 2 and binds procaspase 3 to activate caspase 3 to be fragmented DNA. The final result in the fragmentation of apoptotic bodies will be formed which will fagocytosis by macrophages. Mechanism of action of mycotoxin binders to eliminate methyl group on the chemical structure of the compound zearalenone and bring charcoal, biotin, thiamine, aluminosilicate, and vitamins C and E, which are antioxidants to reduce the impact of exposure to residues of mycotoxins. Based on the research that has been done, it could be concluded that the mycotoxin binders can lower the amount of follicle count and ovarian expression of caspase 9 organs of female mice (Mus musculus) with exposed zearalenone. Suggestions might be recommended in order to do research on potential mycotoxin binders on the physiology and pathology of organ testes, ovaries, fetal placenta, testosterone levels, level of ROS in male and female animals with exposed zearalenone. Research is also needed to further the potential of mycotoxin binders against aflatoxin, deoxynivalenol, fumonisin, and ochratoxin.

xiii

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


POTENTIAL MYCOTOXIN BINDERS ON THE ESTROGEN LEVELS , THE HISTOLOGY AND THE EXPRESSION OF CASPASE 9 OVARIES IN FEMALE MICE (MUS MUSCULUS) WITH EXPOSED ZEARALENONE

Nowo Siswo Yuworo

ABSTRACT

Zearalenone was a resorcylic acid lactone compound that is produced by fungal Fusarium graminearum infection of edible grains and is believed to influence reproduction by binding to estrogen receptors. This study examined the potential of mycotoxin binders to eliminate the effect of zearalenone on estrogen levels, the histology and the expression of caspase 9 ovaries in pregnant mice (Mus musculus). We analyzed 20 female mices specimens randomly divided into 5 groups. All groups were given treatment per oral with sonde till 10 days. K+ as positive control weren’t treated zearalenone and mycotoxin binders, K- as negative control were treated with zearalenone 0,1 mg/mice/day, P1 were treated with zearalenone 0,1 mg/mice/day and mycotoxin binders 0,5 mg/mice/day, P2 were treated with zearalenone 0,1 mg/mice/day and mycotoxin binders 1 mg/mice/day, P3 were treated with zearalenone 0,1 mg/mice/day and mycotoxin binders 2 mg/mice/day. The data was analyzed by Kolmogorov-Smirnov normality test. If normally distributed ANOVA test will be conducted. If there is a significant followed by Fisher's LSD test. If not normally distributed will be performed Kruskal-Wallis test. If there is a significant followed by Mann-Whitney test. The result of total follicles showed a significant difference (p<0,05) between K- with P3. The result of caspase 9 showed a significant difference (p<0,05) between Kwith K+, P1, P2, and P3. And the estrogen level showed not significant (p>0,05) between K- with K+, P1, P2, and P3. The conclusion in this study, mycotoxin binders was effective to increase total follicles, decrease caspase 9’s expression and hadn’t influenced on estrogen level. Keywords : Mycotoxin binders, Zearalenone, Estrogen levels, Ovarian histology, Caspase 9, Female mice.

xiv

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


DAFTAR ISI Halaman HALAMAN SAMPUL DALAM ................................................................. ii PRASYARAT GELAR ................................................................................. iii PERNYATAAN............................................................................................ iv v PERSETUJUAN ........................................................................................... PENETAPAN PANITIA PENGUJI ............................................................. vi UCAPAN TERIMA KASIH ......................................................................... vii RINGKASAN ................................................................................................ x SUMMARY ................................................................................................... xii ABSTRACT ................................................................................................. xiv DAFTAR ISI .................................................................................................. xv DAFTAR TABEL ......................................................................................... xviii DAFTAR GAMBAR ................................................................................... xix DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xxi SINGKATAN DAN ARTI LAMBANG ...................................................... xxii BAB 1 PENDAHULUAN ............................................................................ 1.1 Latar Belakang ............................................................................ 1.2 Rumusan Masalah ....................................................................... 1.3 Tujuan Penelitian......................................................................... 1.3.1 Tujuan Umum ................................................................... 1.3.2 Tujuan Khusus................................................................... 1.4 Manfaat Hasil Penelitian ............................................................. 1.4.1 Manfaat Teoritis ................................................................ 1.4.2 Manfaat Praktis .................................................................

1 1 2 3 3 3 4 4 4

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ................................................................... 2.1 Zearelenon ................................................................................... 2.1.1 Sumber ............................................................................. 2.1.2 Sifat Kimia dan Fisik ........................................................ 2.1.3 Pengaruh Paparan Zearalenon ........................................... 2.2 Mycotoxin Binder .......................................................................... 2.3 Estrogen ......................................................................................... 2.4 Ovarium ....................................................................................... 2.4.1 Anatomi dan Fisiologi Ovarium ........................................ 2.4.2 Folikulogenesis.................................................................. 2.5 Apoptosis ..................................................................................... 2.6 Mencit (Mus musculus) ............................................................... 2.6.1 Sistem Reproduksi Mencit (Mus musculus) betina ........... 2.7 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ......................... 2.8 Uji Imunohistokimia ...................................................................

5 5 5 5 6 7 8 10 10 11 13 14 15 17 17

xv

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS .......................... 3.1 Kerangka Konseptual .................................................................. 3.2 Skema Kerangka Konseptual Penelitian ..................................... 3.3 Hipotesis Penelitian .....................................................................

19 19 21 22

BAB 4 MATERI DAN METODE ................................................................ 4.1 Rancangan Penelitian .................................................................. 4.2 Populasi, Sampel dan Besar Sampel ........................................... 4.2.1 Populasi ............................................................................. 4.2.2 Sampel ............................................................................... 4.2.3 Besar Sampel ..................................................................... 4.3 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional Variabel .............. 4.3.1 Variabel Bebas (Independent variable)............................. 4.3.2 Variabel Tergantung (Dependent variable) ...................... 4.3.3 Variabel Kendali ............................................................... 4.3.4 Definisi Operasional Variabel ........................................... 4.4 Bahan Penelitian .......................................................................... 4.5 Peralatan Penelitian ..................................................................... 4.6 Waktu dan Tempat Penelitian ..................................................... 4.7 Prosedur Penelitian ...................................................................... 4.7.1 Adaptasi Hewan Coba ....................................................... 4.7.2 Prosedur Pemberian Mycotoxin Binders dan Zearalenon 4.7.3 Prosedur Pembedahan Hewan Coba dan Pengambilan Sampel ......................................................... 4.8 Analisis Data ............................................................................... 4.9 Kerangka Operasional Penelitian ................................................

23 23 23 23 23 24 25 25 25 25 26 28 28 28 29 29 29

BAB 5 ANALISIS HASIL PENELITIAN ................................................... 5.1 Kadar Estrogen ............................................................................ 5.2 Ekspresi Caspase 9 ...................................................................... 5.3 Jumlah Folikel ............................................................................. 5.3.1 Folikel Primer.................................................................... 5.3.2 Folikel Sekunder ............................................................... 5.3.3 Folikel Tersier ................................................................... 5.3.4 Folikel de Graaf ................................................................ 5.3.5 Korelasi antara Folikel Primer, Folikel Sekunder, Folikel Tersier dan Folikel de Graaf……………………...

32 34 35 37 37 39 40 41 42

BAB 6 PEMBAHASAN ............................................................................... 6.1 Kadar Estrogen ........................................................................... 6.2 Ekspresi Caspase 9 ...................................................................... 6.3 Jumlah Folikel .............................................................................

43 43 44 47

BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................ 7.1 Kesimpulan.................................................................................. 7.2 Saran ............................................................................................

50 50 50

29 30 31

xvi

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................

51

LAMPIRAN ..................................................................................................

57

xvii

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


DAFTAR TABEL Tabel

Halaman

4.1 Metode skoring ekspresi caspase 9 dengan uji immunohistokimia ...

27

5.1 Rata-rata dan standart deviasi potensi mycotoxin binders terhadap kadar estrogen, ekspresi caspase 9 dan jumlah folikel mencit betina (Mus musculus) yang dipapar ZEN…………………………………

33

5.2 Korelasi pada folikel primer, folikel sekunder, folikel tersier dan folikel de Graaf.………………………………………………...

42

xviii

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


DAFTAR GAMBAR Gambar

Halaman

2.1

Jagung yang terinfeksi Fusarium graminearum ...................................

5

2.2

Struktur kimia zearalenon .....................................................................

6

2.3

Steroidogenesis ...................................................................................

10

2.4

Histologis ovarium ...............................................................................

11

2.5

Mekanisme apoptosis jalur intrinsik .....................................................

14

2.6

Mencit (Mus musculus) ........................................................................

15

3.1

Struktur kerangka konseptual penelitian ..............................................

21

4.1

Kerangka operasional penelitian..........................................................

31

5.1

Gambaran histologis ovarium mencit betina (Mus musculus) yang

5.2

5.3

terpapar ZEN dengan penambahan mycotoxin binders pada setiap perlakuan …..........……………………………………………………

33

Diagram batang kadar estrogen mencit (Mus musculus) yang terpapar ZEN dengan penambahan mycotoxin binders pada setiap perlakuan .................................................................. ……………… ….

35

Diagram batang ekspresi caspase 9 mencit (Mus musculus) yang terpapar ZEN dengan penambahan mycotoxin binders pada setiap perlakuan .................................................................. ……………… …. 36

5.4 Ekspresi caspase 9 sel granulosa mencit (Mus musculus) yang terpapar ZEN dengan penambahan mycotoxin binders pada setiap perlakuan .. 5.5

5.6

5.7

37

Diagram batang jumlah folikel primer ovarium mencit (Mus musculus) yang terpapar ZEN dengan penambahan mycotoxin binders pada setiap perlakuan................................... ……………… ….

38

Diagram batang jumlah folikel sekunder ovarium mencit (Mus musculus) yang terpapar ZEN dengan penambahan mycotoxin binders pada setiap perlakuan................................... ……………… ….

39

Diagram batang jumlah folikel tersier ovarium mencit (Mus musculus) yang terpapar ZEN dengan penambahan mycotoxin xix

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


5.8

binders pada setiap perlakuan................................... ……………… ….

40

Diagram batang jumlah folikel de Graaf ovarium mencit (Mus musculus) yang terpapar ZEN dengan penambahan mycotoxin binders pada setiap perlakuan................................... ……………… ….

41

xx

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran

Halaman

1

Tabel konversi perhitungan dosis untuk manusia dan berbagai jenis hewan .........................................................................

57

2

Perhitungan dosis ZEN ......................................................................

58

3

Analisa Kadar Hormon Estrogen dengan ELISA ...............................

59

4

Identifikasi Ekspresi Caspase 9 dengan Uji Imunohistokimia ...........

61

5

Pengamatan Gambaran Histologis Ovarium dengan Pewarnaan Hematoksilin Eosin ...........................................................

62

6

Hasil pengukuran kadar estrogen ......................................................

64

7

Hasil pengamatan dan skoring ekspresi caspase 9 ............................

65

8

Hasil pengamatan dan perhitungan jumlah folikel primer ................

66

9

Hasil pengamatan dan perhitungan jumlah folikel sekunder ............

67

10

Hasil pengamatan dan perhitungan jumlah folikel tersier.................

68

11

Hasil pengamatan dan perhitungan jumlah folikel de Graaf ............

69

12

Hasil analisis statistik jumlah folikel, ekspresi caspase 9, dan kadar estrogen ..............................................................................................

70

13

Dokumentasi kegiatan penelitian ......................................................

76

xxi

TESIS


NOWO SISWO YUWORO


SINGKATAN DAN ARTI LAMBANG

AIF ANOVA Apaf 1 Apaf 2 ATP Bax Bcl 2 Bid BSA C18H26O5 Ca2+ Caspase DAB E2 ELISA FSH HE H2O H2O2 HPLC IAP K+ KLH LSD MPTP NaCl P1 P2 P3 PAP PBS pH RAL SA-HRP Smac SPSS ZEA-E2R 3-HSD 17-HSD

= Apoptotic-Inducing Factor = Analysis of Variance = Apoptotic Protease Activating Factor 1 = Apoptotic Protease Activating Factor 2 = Adenosin triphosphate = Bcl-2-associated X protein = B-cell lymphoma 2 = Bcl 2 Interacting Protein Domain = Bovine Serum Albumine = zearalenon = kalsium = Cystein aspartyl-specific protease = Diaminbenzidine = estrogen = Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay = Follicle Stimulating Hormone = Hematoksilin Eosin = air = hidrogen peroksida = High Performance Liquid Chromatography = Inhibitor of Apoptosis Protein = kontrol positif = kontrol negatif = Luteinizing Hormon = Least Significant Difference = mitochondrial permeability transition pore = Natrium Chloride = perlakuan pertama = perlakuan kedua = perlakuan ketiga = Peroksidase-Anti Peroksidase = Phosphat Buffer Saline = Power of Hydrogen = Rancangan Acak Lengkap = Streptavidin-Horse Radish Peroksidase = Second Mitochondria-derived Activator of caspases = Statistical Product for Solution Service = Zearalenone E2 Receptor Complex = 3-hidroksisteroid dehidrogenase = 17-hidroksisteroid dehidrogenase

xxii

TESIS


NOWO SISWO YUWORO

ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

Recommend Documents