09

MINICAP Hb A1c

Ref. 2215

2016/09

MINICAP Hb A1c - 2016/09

ÚČEL POUŽITÍ

pour / for monitoring

Sada MINICAP Hb A1c je navržena pro separaci a kvantifikaci glykolizované frakce hemoglobinu HbA1c v lidské krvi kapilární elektroforézou v zásaditém tlumivém roztoku (pH 9,4) přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING. Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING je automatický analyzátor, který provádí kompletní profil hemoglobinu pro kvantitativní analýzu frakce HbA1c. Hemoglobiny dělené v křemenných kapilárách jsou přímo detekovány absorbancí při 415 nm. Analýza se provádí na hemolyzátu vzorků plné krve odebraných do zkumavek s obsahem K2EDTA nebo K3EDTA jako antikoagulantu. Kvantitativní stanovení hemoglobinu A1c je účinným prostředkem při střednědobém sledování krevní glukózy u diabetiků.

Postup MINICAP Hb A1c prováděný přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING byl certifikován v rámci Národního programu standardizace glykohemoglobinu (National Glycohemoglobin Standardization Program, NGSP). Pro diagnostické použití in vitro.

PRINCIP TESTU

Glykolování hemoglobinu je neenzymatická reakce mezi glukózou obsaženou v erytrocytech a koncovou N-amino skupinou hemoglobinového ß řetězce. Tato reakce probíhá během celého života červených krvinek. Rychlost vytváření glykolovaného hemoglobinu závisí na glykémii v míře, v jaké koncentrace glukózy v erytrocytech nezávisí na insulinu, ale pouze na glykémii. Hromadí se červených krvinkách během 120 dní jejich života. Hladina glykolovaného hemoglobinu odpovídá "integraci" všech glykemických odchylek během předchozích týdnů. Proto je možné ji použít jako ukazatel kontroly diabetu. Tato kvantifikace umožňuje vyhodnotit střednědobou účinnost léčby. Elektroforéza je dobře zavedená technika běžně používaná v klinických laboratořích pro měření složek v krevních tekutinách, včetně glykolyzované frakce HbA1c. Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING byl vyvinut ke kompletní automatizaci s rychlým dělením a přijatelným rozlišením. Tuto techniku lze z mnoha hledisek zařadit mezi klasickou zónovou elektroforézu a kapalinovou chromatografii. Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING používá princip kapilární elektroforézy ve volném roztoku. Elektricky nabité molekuly jsou děleny podle elektroforetické pohyblivosti v alkalickém tlumivém roztoku o určitém pH. Separace je rovněž závislá na pH elektrolytu a elektroosmotickém toku.

Zařízení MINICAP FLEX-PIERCING je vybaveno křemennými kapilárami pracujícími paralelně, které umožňují 2 simultánní analýzy kvantifikace HbA1c ze vzorků plné krve. Ředění vzorku hemolyzačním roztokem je připraveno a nastříknuto aspirací na anodovém konci kapiláry. Potom následuje vysokonapěťové dělení bílkovin a přímá detekce hemoglobinů se provádí na katodovém konci kapiláry při 415 nm, což je vlnová délka absorbance specifická pro hemoglobiny. Kapiláry jsou před každým stanovením promývány promývacím roztokem a promytím tlumivým roztokem připraveny k další analýze. Přímá detekce slouží k přesnému kvantitativnímu určení jednotlivých frakce hemoglobinu A1c. Kromě toho umožňuje postup MINICAP Hb A1c kvantifikaci HbA1c, a to dokonce i v přítomnosti labilního HbA1c, karbamylovaných a acetylovaných hemoglobinů a hlavních variant hemoglobinu. Za využití zásaditého tlumivého roztoku se normální a abnormální (nebo varianty) hemoglobinu detekují v následujícím pořadí od katody k anodě : A2/C, E, S/D, F, A0, jiné Hb (včetně menšího Hb A1) a potom A1c.

REAGENTY A MATERIÁLY DODÁVANÉ V SADĚ MINICAP Hb A1c VAROVANÍ : Viz bezpečnostní listy.

POLOŽKY Tlumivý roztok (připravený k použití) Hemolyzační roztok (připravený k použití) Promývací roztok (zásobní roztok) Reagenční nádobky Filtry Kontejnery na použité nádobky Štítky s čárovými kódy pro hemolyzační roztok

PN 2215 2 lahvičky, 250 mL každá 1 lahvička, 225 mL 1 lahvička, 25 mL 1 balení po 125 kusech 3 filtry 4 kontejnery 5 listů po 4 štítcích

Během přepravy může být souprava uchována bez zmražení (15 až 30 °C) až po dobu 15 dní bez nepříznivého vlivu na vlastnosti. OPTIMÁLNÍ ŘÍZENÍ VYSLEDOVATELNOSTI : Všechna činidla ze stejné sady se musejí používat společně. DOSAŽENÍ OČEKÁVANÝCH VÝKONŮ : Musí se dodržovat pokyny z příbalového letáku.

VAROVANÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda používaná k výrobě injekčních roztoků.

1. TLUMIVÝ ROZTOK

Příprava

Tlumivý roztok je připraven k použití. Obsahuje : tlumivý roztok s pH 9,4 ± 0,5 ; přídavné látky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných.

Použití

Tlumivý roztok k analýze HbA1c kapilární elektroforézou.

- 235 -

SEBIA NÁVOD - Czech


Skladování, stabilita a známky zhoršování


Tlumivý roztok skladujte v chladničce (2 až 8 °C). Roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky tlumivého roztoku. Neskladujte dlouhodobě při pokojové teplotě nebo v blízkosti okna nebo tepelného zdroje. NEZMRAZUJTE. DŮLEŽITÉ : Při skladování při 2 - 8 °C a před použitím je nutné nechat roztok temperovat na pokojovou teplotu. Pro plnou lahvičku to znamená dobu nejméně 3 hodiny. Pokud není tento pokyn dodržován, mohou být ovlivněny výsledky.

VAROVANÍ : Nepředehřívejte tlumivý roztok v horké vodě. Po každém použití musí být tlumivý roztok nutně ihned uložen do chladničky (2 až 8 °C), pak je stabilní do data exspirace vyznačeného na štítku lahvičky s tlumivým roztokem. Pokud se lahvička s tlumivým roztokem spotřebuje do 20 dnů, může se skladovat při pokojové teplotě. Po otevření lahvičky s roztokem a jejím vložení do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING je roztok stabilní při pokojové teplotě (15 až 30 °C) nejméně 20 dnů (akumulovaný). DŮLEŽITÉ : Akumulovaný čas skladování tlumivého roztoku při pokojové teplotě nesmí překročit 20 dní. Doba 20 dní zahrnuje i dobu potřebnou pro temperování tlumivého roztoku na pokojovou teplotu. Zředěný tlumivý roztok zlikvidujte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku bakteriální kontaminace. POZNÁMKA : Během skladování může mít tlumivý roztok mírné zabarvení bez jakéhokoli negativního vlivu na jeho vlastnosti.

2. HEMOLYZAČNÍ ROZTOK

Příprava

Hemolyzační roztok je připraven k použití. Obsahuje : složky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných.

Použití

K ředění a hemolyzaci celé krve.


Hemolyzační roztok skladujte při pokojové teplotě (15 až 30 °C) nebo v chladničce (2 až 8 °C). Roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky hemolyzačního roztoku. NEZMRAZUJTE. Hemolyzační roztok zlikvidujte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku bakteriální kontaminace. POZNÁMKA : Během skladování se může barva hemolyzačního roztoku změnit na žlutou, což nemá nepříznivý vliv na jeho vlastnosti.

3. PROMÝVACÍ ROZTOK

Příprava

Lahvička zásobního promývacího roztoku může být zředěna až do 250 mL destilovanou nebo deionizovanou vodou. Po zředění vznikne promývací roztok obsahující zásaditý roztok pH ≈ 12.

Použití

K promývání kapilár před a po elektroforéze HbA1c. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby na promývací se roztok se doporučuje vymýt otvor nádoby a zkumavku větším množstvím destilované nebo deionizované vody, aby se zabránilo srážení solí.


Zásobní i pracovní roztok skladujte v uzavřených nádobách při pokojové teplotě nebo v chladničce. Zásobní promývací roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíce. Pracovní promývací roztok zlikvidujte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku mikrobiální kontaminace.

4. REAGENČNÍ NÁDOBKY

Použití

Nádobky pro jedno použití pro ředění vzorků krve a migraci v automatizovaném zařízení. Umístnění nádobek MINICAP FLEX-PIERCING na automatický podávací systém. Jedna nádobka je zamýšlena pro analýzu dvou vzorků krve. VAROVANÍ : Při manipulaci s reagenčními nádobkami obsahujícími biologické vzorky je třeba si počínat se zvýšenou opatrností.

5. FILTRY

Použití

Jednorázové filtry k filtraci tlumivého roztoku pro analýzu, pracovního promývacího roztoku a destilované nebo deionizované vody (používá se k vyplachování kapilár). DŮLEŽITÉ : Při výměně soupravy systematicky vyměňte všechny filtry. Při manipulaci a instalaci filtrů noste čisté rukavice. Našroubujte jeden filtr na konektor umístěný na konci každé zkumavky ponořené do lahviček s tlumivým roztokem, promývacím roztokem nebo s deionizovanou vodou. Při vkládání filtrů do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING opláchněte konektory a zkumavky destilovanou nebo deionizovanou vodou.

Skladování

Filtry skladujte v originálních, utěsněných obalech, na suchém místě, při pokojové teplotě nebo v chladničce.

6. KONTEJNERY NA POUŽITÉ NÁDOBKY

Použití

Kontejnery slouží k automatickému sběru použitých reagenčních nádobek v systému MNICAP FLEX-PIERCING. Umístění v systému MINICAP FLEXPIERCING v místě zamýšleného použití. VAROVANÍ : S kontejnery obsahujícími reagenční nádobky s biologickými vzorky se musí nakládat s opatrností.

7. ŠTÍTKY S ČÁROVÝMI KÓDY PRO HEMOLYZAČNÍ ROZTOK

Použití

Štítky pro identifikaci zkumavek obsahujících hemolyzační roztok (HEMOLYZAČNÍ ROZTOK HbA1c). - 236 -


POTŘEBNÉ REAGENTY NEOBSAŽENÉ V BALENÍ


VAROVANÍ : Viz bezpečnostní listy.

1. KALIBRAČNÍ ROZTOKY Hb A1c CAPILLARY

Složení

Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY (SEBIA, kat. č. 4755) jsou získány ze zásobních vzorků lidské krve. Obsahují stabilizační a konzervační látky pro udržení stability frakcí hemoglobinu. Kalibrační roztoky jsou ve stabilizované lyofilní formě. Kalibrační roztok Hb A1c CAPILLARY 1 představuje normální hladinu HbA1c a kalibrační roztok Hb A1c CAPILLARY 2 má zvýšenou hladinu HbA1c.

Účel použití

Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 jsou určeny ke kalibraci a kontrole migrace lidského glycinem ošetřeného hemoglobinu A1c při kvantifikaci elektroforetickým postupem MINICAP Hb A1c prováděného na automatickém přístroji MINICAP FLEX-PIERCING na provádění kapilární elektroforézy s cílem dosáhnout výsledky u krevních vzorků pacientů, které jsou srovnatelné se studií DCCT a mají návaznost na referenční systém IFCC. Doporučení pro kalibraci jsou následující : • Proveďte 3 po sobě jdoucí série analýz s oběma kalibračními roztoky : - pro první použití programu analýzy "Hb A1c" přístroje MINICAP FLEX-PIERCING ; - po změně kapiláry ; - po změně čísla šarže kalibračních roztoků. • Proveďte 1 sérii analýz na obou kalibračních roztocích a potom s 1 ze 2 kontrolních roztoků před zahájením nové posloupnosti analýzy : - po změně čísla šarže tlumivého roztoku pro analýzu ; - po technickém zákroku ; - v případě, že analýzy kontrolních roztoků poskytnou hodnoty HbA1c mimo očekávané hodnoty (a po potvrzení této odchylky analýzou druhého kontrolního roztoku krve) ; - nejméně každé 2 měsíce. POZNÁMKA : Není zapotřebí kalibrovat přístroj po změně čísla šarže hemolyzačního roztoku.

Použití

DŮLEŽITÉ : - Pro optimální použití každého kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY s přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING je nezbytné použít jednu specifickou zkumavku navrženou pro krevní kontrolní roztoky a odpovídající víčko ("POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ", Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky) a označte tuto zkumavku odpovídajícím štítkem s čárovým kódem kalibračního roztoku. - Pro účinnou kalibraci je nezbytně nutné analyzovat oba kalibrační roztoky : pořadí analýzy obou kalibračních roztoků se může měnit, ale musí být analyzovány týž pracovní den.

- Nařeďte každou lahvičku s lyofilizovaným roztokem kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY Calibrator 1 a 2 přesným objemem destilované nebo deionizované vody a postupem uvedeným v příbalovém letáku kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY Calibrator. Lehce promíchejte lahvičku kalibračního roztoku, aby se rozpustila lyofilizovaná krve, přičemž by žádná kapalina neměla přijít do kontaktu s víčkem. Nechte 30 minut stát při teplotě 2 - 8 °C a lehce zamíchejte (zamezte tvorbu pěny). POZNÁMKA : Přesnost rekonstituovaného objemu by měla být udržována v rozmezí ± 1,0 %. -

Každý rozpuštěný kalibrační roztok použijte ve zkumavce určené pro kontrolní roztok krve. Zavřete zkumavku víčkem. Označte zkumavku štítkem se specifickým čárovým kódem kalibračního roztoku. Analýza každého kalibračního roztoku musí být prováděna stejným postupem, jaký je popsán níže. Pro každý kalibrační roztok umístěte zkumavku (identifikovanou čárovým kódem kalibračního roztoku), do pozice č. 28 v otočném automatického podavače vzorků systému MINICAP FLEX-PIERCING (pozice "kontrola" se středovým kroužkem). - Nalijte 5 mL hemolyzačního roztoku MINICAP Hb A1c do hemolyzační zkumavky (označené štítkem se stejným čárovým kódem hemolyzačního roztoku), bez vzduchových bublin a umístěte ji do pozice č. 27 v otočném automatického podavače vzorků (pozice "ředicího roztoku / roztoku" bez středového kroužku) (pokud zkumavka nebo hemolyzační roztok chybí, zobrazí se zpráva). DŮLEŽITÉ : Ověřte, že se nevytvořila žádná pěna dříve, než vložíte zkumavku do otočného automatického podavače vzorků. -

Nedávejte žádnou zkumavku do pozic č. 1 až 26 v otočném automatického podavače vzorků. Zasuňte otočný automatický podavač vzorků do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING. Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. Do okna, které se zobrazí na obrazovce, zadejte parametry analyzovaného kalibrátoru, uvedené v příbalovém letáku kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY : hladinu HbA1c v mmol/mol, číslo šarže a datum exspirace, zvolte počet analýz kalibrátoru, které se mají provést podle výše popsaných označeních, a validujte. POZNÁMKA : Koncentrace HbA1c je uvedena v jednotce IFCC (mmol/mol). VAROVANÍ : Nezadávejte hladinu HbA1c v procentech.

- Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat. - Jakmile se objeví okno označující vyjmutí zkumavky, vyjměte zkumavku s kalibračním roztokem z pozice č. 28. - Po dokončení analýzy prvního kalibračního roztoku proveďte stejně analýzu druhé kalibračního roztoku. VAROVANÍ : Po zavření dvířek přístroje se spustí analýza druhého kalibračního roztoku :

-

čekejte, dokud přístroj nezkontroluje nepřítomnost zkumavky v pozici č. 1, klikněte na blikající tlačítko pro otevření okna "Informačních zpráv", ukazujícího nepřítomnost zkumavky v pozici č. 1, zavřete okno "Informačních zpráv", tlačítkem "Klepnutí pro spuštění kontroly na pozici 28" spusťte analýzu. - 237 -



DŮLEŽITÉ : Pro nejlepší použití kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY je nutné použít jeden štítek s čárovým kódem pro identifikaci zkumavky, která obsahuje kalibrační roztok (před použitím zavřete zkumavku specifickým víčkem). Software zobrazí hodnotu HbA1c pro oba kalibrační roztoky, které byly zadané operátorem.


Viz příbalový leták kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY.

VAROVANÍ : Žádná zkušební metoda nemůže poskytnout absolutní důkaz o nepřítomnosti HIV, hepatitidy B nebo C a dalších infekčních činitelů. S kalibračními roztoky Hb A1c CAPILLARY je proto nutné zacházet jako s nebezpečným biologickým materiálem. Tyto šarže krví jsou negativní na základě zkoušek schválené FDA nebo ekvivalentním regulatorním orgánem EU : - proti povrchovému antigenu hepatitidy B ; - na protilátky k HCV ; - na protilátky k HIV1 a HIV2.

2. VÍCENÁSOBNÝ SYSTÉM KONTROLNÍ ROZTOKY Hb A1c CAPILLARY (2)

Složení

Kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 jsou určeny ke kontrole migrace a kvality lidského glycinem ošetřeného hemoglobinu A1c při kvantifikaci elektroforetickým postupem MINICAP Hb A1c prováděným na automatickém přístroji MINICAP FLEX-PIERCING na provádění kapilární elektroforézy. Získané hodnoty musí být v rozsahu poskytnutém pro každou šarži.

Účel použití

Kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 jsou určeny ke kontrole kvality lidského glycinem ošetřeného hemoglobinu A1c při kvantifikaci elektroforetickým postupem MINICAP Hb A1c prováděného na automatickém přístroji MINICAP FLEX-PIERCING na provádění kapilární elektroforézy. Získané hodnoty musí být v rozsahu poskytnutém pro každou šarži.

DŮLEŽITÉ : Pro optimální použití každého kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY s přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING je nezbytné použít jednu specifickou zkumavku navrženou pro krevní kontrolní roztoky a odpovídající víčko ("POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ", Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky) a označte tuto zkumavku odpovídajícím štítkem s čárovým kódem.

Určení vlastních hodnot pro kontrolní roztoky Hb A1c MINICAP : Každá laboratoř si musí stanovit hodnoty pro kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2, které jsou specifické pro automatický přístroj MINICAP FLEXPIERCING postupem uvedeným v příbalovém letáku kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY. VAROVANÍ : Vždy se musí provést určení kontrolních hodnot : - po první kalibraci přístroje MINICAP FLEX-PIERCING, - po výměně jedné nebo obou kapilár, - po změně čísla šarže kalibračních nebo kontrolních roztoků. Každý kontrolní roztok musí být analyzován 3krát v poloze č. 28, viz příbalový leták kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY.

Kontrola kvality : • Doporučení provést analýzu jednoho nebo dvou kontrolních roztoků na obou kapilárách jsou následující : - po aktivaci kapilár ; - po každé kalibraci přístroje provedené pomocí kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY ; - po sekvenci čištění kapilár roztokem CAPICLEAN ; - před zahájením nové posloupnosti analýzy ; - po analýze celého automatického podavače vzorků při střídání kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 v testovacích laboratořích s vysokými objemy.

• Nařeďte každou lahvičku s lyofilizovaným roztokem kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY Control 1 a 2 přesným objemem destilované nebo deionizované uvedeným v příbalovém letáku kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY Control. Nechte 30 minut stát a lehce zamíchejte (zamezte tvorbě pěny). POZNÁMKA : Přesnost rekonstituovaného objemu by měla být udržována v rozmezí ± 1,0 %. • • • • •

Každý rozpuštěný kontrolní roztok použijte ve zkumavce určené pro kontrolní roztok krve. Zavřete zkumavku víčkem. Označte zkumavku štítkem se specifickým čárovým kódem kontrolního roztoku. Analýza každé kontroly musí být prováděna stejným postupem, jaký je popsán níže. Pro každou kontrolu umístěte zkumavku (identifikovanou štítkem s čárovým kódem kontrolního roztoku) do pozice č. 28 v otočném automatického podavače vzorků systému MINICAP FLEX-PIERCING (pozice "kontrola" se středovým kroužkem). • Nalijte 5 mL hemolyzačního roztoku MINICAP Hb A1c do hemolyzační zkumavky (označené štítkem se stejným čárovým kódem hemolyzačního roztoku), bez vzduchových bublin a umístěte ji do pozice č. 27 v otočném automatického podavače vzorků (pozice "ředicího roztoku / roztoku" bez středového kroužku) (pokud zkumavka nebo hemolyzační roztok chybí, zobrazí se zpráva). DŮLEŽITÉ : Ověřte, že se nevytvořila žádný pěna dřív, než vložíte zkumavku do otočného automatického podavače vzorků. • • • • •

Zasuňte otočný automatický podavač vzorků do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING. Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. V okně, které se objeví na obrazovce, vyberte pro provedení a ověření počet analýz Hb A1c CAPILLARY. Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat. Jakmile se objeví okno označující vyjmutí zkumavky, vyjměte zkumavku s kontrolním roztokem z pozice č. 28. - 238 -



• Podle téhož postupu proveďte analýzu druhého kontrolního roztoku. VAROVANÍ : Po zavření dvířek přístroje, když probíhá analýza druhého kontrolního vzorku krve v týž den jako analýza prvního kontrolního vzorku krve, spusťte tuto analýzu tlačítkem "Klepnutí pro spuštění kontroly na pozici 28". Nedávejte žádnou zkumavku do pozic č. 1 až 26 v otočném automatického podavače vzorků.

• Zkontrolujte hladiny koncentrací a procenta frakce HbA1c získané z analýzy kontrolních roztoků s určenými uživatelskými hodnotami přístroje. Musí být v rozmezí stanoveném pro každou šarži. Pokud nikoli, proveďte novou kalibraci přístroje kalibračními roztoky Hb A1c CAPILLARY Calibrator (viz odstavec "Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY Calibrator"). POZNÁMKA : Koncentrace HbA1c zobrazená softwarem je uvedena v mmol/mol bez jakéhokoli desetinného místa v souladu s doporučením IFCC. Desetinná místa jsou však zvažována při charakterizaci vzorku (jako normální vzorek nebo vzorek se zvýšenou hladinou HbA1c), statistice a Levey Jenningsově grafech. DŮLEŽITÉ : Pro nejlepší použití kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY Control je nutné použít jeden štítek s čárovým kódem pro identifikaci zkumavky, která obsahuje kontrolní roztok krve (před použitím zavřete zkumavku specifickým víčkem).


Viz příbalový leták kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY Control 1 a 2.

VAROVANÍ : Žádná zkušební metoda nemůže poskytnout absolutní důkaz o nepřítomnosti HIV, hepatitidy B nebo C a dalších infekčních činitelů. Proto je nutné zacházet s kontrolními roztoky Hb A1c CAPILLARY Control jako s nebezpečným biologickým materiálem. Tyto šarže krví jsou negativní na základě zkoušek schválené FDA nebo ekvivalentním regulatorním orgánem EU : - proti povrchovému antigenu hepatitidy B ; - na protilátky k HCV ; - na protilátky k HIV1 a HIV2.

3. DESTILOVANÁ NEBO DEIONIZOVANÁ VODA

Použití

K vyplachování kapilár v automatickém přístroji MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, pro kapilární elektroforézu. Je doporučeno používat filtrovanou, destilovanou nebo deionizovanou vodu (na filtr o porozitě ≤ 0,45 μm) a s vodivostí nižší než 3 µS/cm, což odpovídá rezistivitě vyšší než 0,33 MΩ x cm. Vodu je nutno denně měnit, aby nedošlo k mikrobiální kontaminaci. Pro nejlepší provoz přidejte 35 μL/dL roztoku CLEAN PROTECT (SEBIA, KAT. Č. 2059, 1 lahvička o objemu 5 mL), do destilované nebo deionizované vody nebo použijte přímo roztok CAPIprotect připravený k použití (SEBIA, KAT. Č. 2061 : 2 nádoby o objemu 5 L destilované vody s CLEAN PROTECT). DŮLEŽITÉ : Před naplněním se doporučuje vyplachovací nádobu vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody.

4. MINICAP FLEX-PIERCING CAPICLEAN Složení

Lahvička koncentrovaného roztoku CAPICLEAN ((MINICAP FLEX-PIERCING CAPICLEAN, SEBIA, kat. č. 2251, 25 mL) obsahuje proteolytické enzymy, povrchově aktivní činidla a aditiva, která nejsou nebezpečná v používaných koncentracích, nezbytných pro optimální výkon.

Použití

K čištění vzorkovací sondy v automatickém přístroji SEBIA MINICAP FLEX-PIERCING pro kapilární elektroforézu během čištění CAPICLEAN. DŮLEŽITÉ : Čisticí sekvenci CAPICLEAN spusťte alespoň jednou týdně a nejvýše jednou denně nebo po každých 500 analýzách, pokud jsou provedeny za méně než jeden týden. Viz návod k MINICAP FLEX-PIERCING CAPICLEAN, SEBIA.

VAROVANÍ : Nepoužívejte zavíčkovanou zkumavku.

DŮLEŽITÉ : Pro správné použití roztoku CAPICLEAN v přístroji MINICAP FLEX-PIERCING je nutné použít jeden čárový kód určený pro označení 100 mm zkumavky, která obsahuje naředěný roztok CAPICLEAN.


Roztok CAPICLEAN skladujte v chladničce (2 až 8 °C). Je stabilní do data exspirace vyznačeného na štítku lahvičky. NEZMRAZUJTE. V lahvičce roztoku CAPICLEAN může být vidět sraženina nebo částice spojené v suspenzi (vločky) bez nežádoucích účinků na jeho použitelnost. Nerozpouštějte tuto sraženinu ani částice. Doporučuje se shromáždit pouze supernatant. Pro pozdější použití skladujte zkumavku s naředěným roztokem při teplotě 2 - 8 °C. Musí se použít během jednoho dne.

5. ROZTOK CHLORNANU SODNÉHO (k čištění vzorkovací sondy)

Příprava

Připravte 9° chlorovaný roztok chlornanu sodného (2 až 3 % chlorid) naředěním 250 mL 9,6 % chlorovaného koncentrovaného roztoku v 1 litru studené destilované nebo deionizované vody.

Použití

Pro čištění vzorkovací sondy přístroje MINICAP FLEX-PIERCING (týdenní údržba pro odstranění proteinů nasorbovaných na sondu ze vzorku). Viz návod k systému SEBIA MINICAP FLEX-PIERCING.

VAROVANÍ : Nepoužívejte zavíčkovanou zkumavku. • Aplikujte do 100 mm zkumavky 2 mL zředěného dříve připraveného chlorovaného roztoku. • Umístěte 100 mm zkumavku (se stejným čárovým kódem jako roztok chlornanu sodného) na otočný autosampler přístroje MINICAP FLEXPIERCING. • Novou reagenční nádobku umístěte na automatický podávací systém nádobek MINICAP (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva). - 239 -



• Zasuňte otočný automatický podavač vzorků do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING. • Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, čisticí sekvence se automaticky spustí. DŮLEŽITÉ : Pro správné použití roztoku chlornanu sodného v přístroji MINICAP FLEX-PIERCING je nutné použít jeden čárový kód určený k označení 100 mm zkumavky, která obsahuje roztok.


Pracovní chlorovaný roztok skladujte v uzavřené nádobě při teplotě místnosti. Roztok je stabilní 3 měsíce. Roztok neskladujte na slunečním světle, blízko tepelného nebo zápalného zdroje, kyselin a amoniaku.

6. PROMÝVACÍ ROZTOK CAPILLARYS / MINICAP

Příprava

Každá lahvička promývacího roztoku CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, kat č. 2052, 2 lahvičky, 75 mL) může být zředěna destilovanou nebo deionizovanou vodou na 750 mL. Po zředění vznikne promývací roztok obsahující zásaditý roztok pH ≈ 12. Pro systém MINICAP FLEX-PIERCING je vhodné naředit pouze 25 mL zásobního roztoku destilovanou nebo deionizovanou vodou na 250 mL.

Použití

Pro promývání kapilár systému MINICAP FLEX-PIERCING. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby na promývací se roztok se doporučuje vymýt otvor nádoby a zkumavku větším množstvím destilované nebo deionizované vody, aby se zabránilo srážení solí.


Zásobní i pracovní roztok skladujte v uzavřených nádobách při pokojové teplotě nebo v chladničce. Zásobní promývací roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíce. Pracovní promývací roztok zlikvidujte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku mikrobiální kontaminace.

POZNÁMKY : Zkoušky provedené pro ověření reagentů prokázaly, že pro různé roztoky a použití přizpůsobeného vybavení pro rekonstituci objemu, nemají odchylky objemu ± 5 % z konečného objemu vliv na výsledek analýzy. Destilovaná nebo deionizovaná voda používaná k ředění roztoků musí být prostá bakteriální proliferace a plísní (použijte filtr ≤ 0,45 µm) a musí mít vodivost nižší než 3 µS/cm, což odpovídá rezistivitě vyšší než 0,33 MΩ x cm.

POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ

1. Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, PN 1232. 2. Aktualizovaná sada HbA1c pro MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, PN 1238. 3. Otočný automatický podavač vzorků dodávaný se systémem MINICAP FLEX-PIERCING vybavený středovými kroužky pro MINICAP FLEX-PIERCING (specifické pro postup MINICAP Hb A1c) pro zkumavky s průměrem 13 mm. 4. Středové kroužky MINICAP FLEX-PIERCING pro zkumavky s průměrem 11 mm, SEBIA (27 jednotek), PN 1612. 5. Sada nádobek dodávaná se systémem MINICAP FLEX-PIERCING : Promývací nádobka (na destilovanou či deionizovanou vodu) a nádobka na odpad. 6. Odběrné zkumavky s průměrem 13 mm s odpovídajícími víčky (maximální délka zkumavky s víčkem : 100 mm, maximální průměr víčka : 17 mm) : například zkumavky BD Vacutainer, Terumo Venosafe 5 mL, Greiner Bio-One Vacuette 1, 2, 3 nebo 4 mL nebo zkumavky Sarstedt S-Monovette 4 mL (13 x 75 mm), nebo odběrné zkumavky s průměrem 11 mm s odpovídajícími víčky (maximální délka zkumavky s víčkem : 100 mm, maximální průměr víčka : 17 mm) : například zkumavky Sarstedt S-Monovette 2,7 mL nebo Kabe Labortechnik Primavette S 2,6 mL (11 x 66 mm), nebo zkumavky s ekvivalentními rozměry schválené pro klinické analýzy. 7. Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky, SEBIA, PN 9202 (20 jednotek) nebo PN 9205 (500 jednotek) : kónické zkumavky s víčky pro analýzu kalibračních roztoků, kontrolních roztoků krve a konkrétních vzorků (s objemem do 1 mL) na přístroji MINICAP FLEX-PIERCING. 8. Hemolyzační zkumavky (o průměru 8 až 16 mm a délce 50 až 100 mm). 9. Štítky s čárovým kódem "AUTOMATIC LOW VOLUME" (Automatický, nízký objem), SEBIA (20 kusů), kat. č. 9208 : štítky jsou určeny pro identifikaci vzorků s objemem nižším než 1 mL pro analýzu v režimu "automatického ředění". 10. Štítky s čárovým kódem "MANUAL LOW VOLUME" (Ruční, nízký objem), SEBIA (20 kusů), kat. č. 9209 : štítky jsou určeny pro identifikaci vzorků s objemem nižším než 1 mL pro analýzu v režimu "ručního ředění". 11. Reagenční nádobky MINICAP / 125 (3), SEBIA, kat. č. 2281. 12. Víčka na kontejnery na použité nádobky činidel, SEBIA (12 kusů), kat. č. 2286 : víka na uzavírání kontejnerů s použitými nádobkami.

VZORKY PRO ANALÝZU

Odběr a skladování vzorků

Pro analýzu jsou doporučeny čerstvě antikoagulované vzorky plné krve odebrané do zkumavek s obsahem K2EDTA nebo K3EDTA jako antikoagulantu. Odběr krve musí být v souladu se zavedenými postupy používanými pro testování v klinických laboratořích. Vzorky lze uchovávat maximálně 7 dní při teplotách mezi 2 °C a 8 °C nebo maximálně 18 hodin při pokojové teplotě (mezi 15 a 30 °C). Na delší skladování by měly být vzorky zmražené na - 70 / - 80 °C do 8 hodin po odběru bez jakékoli přípravy. Vzorky plné krve jsou při - 70 / - 80 °C stabilní 3 měsíce. DŮLEŽITÉ : Krevní vzorky se optimálně skladují při - 70 / - 80 °C. Neskladujte při - 20 °C.

- 240 -


Příprava vzorků


• Použijte přímo vzorky plné krve. • Zkontrolujte, že všechny zkumavky obsahují minimálně 1 mL krve a jsou dobře uzavřeny. • Krevní vzorky skladované při teplotě 2 - 8 °C jeden týden nebo při - 70 / - 80 °C míchejte 5 s (na vortexu). VAROVANÍ : Zkumavky musí být uzavřeny odpovídajícími víčky určenými pro postup MINICAP Hb A1c v přístroji MINICAP FLEX-PIERCING (viz POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ).

Zvláštní případy : DŮLEŽITÉ : Následující vzorky musí být označeny štítkem s čárovým kódem "LOW VOLUME AUTO" nebo "LOW VOLUME MANUAL" ; tyto štítky umožňují, aby přístroj použil příslušný režim automatického nebo ručního ředění podle postupu přípravy vzorku. Tyto vzorky musí být umístěny do otočného automatického podavače vzorků na počátku série analýz tak, aby byl čárová kód každé zkumavky vidět v průhledech na otočném automatického podavače vzorků. Bez štítku s čárovým kódem by mohly být ovlivněny výsledky analýzy.

Analýza vzorků s objemem pod 1 mL : - Míchejte vzorek plné krve na vortexu po dobu 5 sekund a připravte vzorek podle jeho objemu podle jednoho ze 2 protokolů.

1. Objem vzorku je od 200 µL do 1 mL : - Naneste nejméně 200 µL plné krve k analýze do kónické zkumavky na kontrolní roztok (označené štítkem s čárovým kódem "LOW VOLUME AUTO") a zkumavku zavíčkujte. - Dejte zkumavku na automatický podavač vzorků přístroje MINICAP FLEX-PIERCING na začátku série analýz a zasuňte automatický podavač vzorků do přístroje, abyste začali analýzu bez jakékoli prodlevy. - Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí.

nebo

2. Objem vzorku pod 200 µL : - Naneste nejméně 50 µL plné krve k analýze do kónické zkumavky na kontrolní roztok (označené štítkem s čárovým kódem "LOW VOLUME AUTO") a 250 µL hemolyzačního roztoku MINICAP Hb A1c a zkumavku zavíčkujte. - Míchejte (na vortexu) po dobu 5 sekund. - Dejte zkumavku na automatický podavač vzorků přístroje MINICAP FLEX-PIERCING na začátku série analýz a zasuňte automatický podavač vzorků do přístroje, abyste začali analýzu bez jakékoli prodlevy. - Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat.

POZNÁMKY : Minimální objem vzorku k analýze v konické zkumavce je 200 µL. Bez štítku s čárovým kódem na kónické zkumavce nemůže být vzorek identifikován a režim ředění (automatický nebo manuální podle postupu přípravy vzorku) se nemůže použít.

Vzorky, které není vhodné používat

• Vyvarujte se koagulovaným krevním vzorkům. • Nepoužívejte staré, nevhodně skladované krevní vzorky ; automatická hemolýza vzorků by mohla být narušena viskózními shluky červených krvinek. Rozkladné produkty (nebo jejich zbytky) by potom mohly ovlivnit elektroforetický záznam : další frakce při analýze takových vzorků může migrovat zejména do polohy Hb A2 nebo více k anodické straně než Hb A0 (v poloze "jiné než Hb A"). V těchto 2 předchozích případech by shluky červených krvinek mohly ovlivnit odběr vzorku sondou. • Neanalyzujte přímo zkumavky obsahující méně než 1 mL krevního vzorku, protože by mohla být ovlivněna analýza (viz konkrétní případy).

POSTUP

Systém MINICAP FLEX-PIERCING je multiparametrické zařízení určené k analýze hemoglobinů v paralelních kapilárách. Zkouška hemoglobinů používá pro analýzu vzorků 2 kapiláry. Sekvence automatizovaných kroků je následující : • Načtení čárového kódu (až 26 zkumavek) otočného automatického podavače vzorků a zkumavek se vzorkem (až pro 26 zkumavek) ; • Míchání vzorků krve před analýzou ; • Hemolýza vzorku a zředění pro primární zkumavky v reagenčních nádobkách ; • Promytí kapilár ; • Injekce hemolyzovaných vzorků ; • Dělení hemoglobinu a přímá detekce rozdělených hemoglobinů v kapilárách. Manuální kroky zahrnují : • Vložení zkumavek se vzorky (s víčky) do stojanů otočného automatického podavače vzorků v pozicích 1 až 26 ; • Vložení nezavíčkované zkumavky s hemolyzačním roztokem do otočného automatického podavače vzorků do pozice 27 ; • Vložení kalibračních a kontrolních roztoků Hb A1c do pozice 28 v otočném automatického podavače vzorků ; • Vložení otočného automatického podavače vzorků do zařízení MINICAP FLEX-PIERCING ; • Odstranění zkumavek se vzorky po analýze ; • Odstranění a uzavření kontejnerů s použitými nádobkami. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ PRO MINICAP FLEX-PIERCING. - 241 -


I. PŘÍPRAVA ANALÝZY MINICAP


1. Zapněte přístroj MINICAP FLEX-PIERCING a počítač. 2. Aby se přístroj spustil, umístěte alespoň jednu novou reagenční nádobku do automatického podávacího systému nádobek MINICAP FLEXPIERCING (pokud není nádobka přítomna, zobrazí se zpráva). 3. Nastavte program a přístroj se automaticky spustí. 4. Sada MINICAP Hb A1c slouží k provádění analýz podle programu "Hb A1c" na přístroji MINICAP FLEX-PIERCING. Pro volbu programu analýzy "Hb A1c" a umístnění lahvičky s tlumivým roztokem MINICAP Hb A1c v pozici "B2" v zařízení si přečtěte pozorně návod k obsluze zařízení MINICAP FLEX-PIERCING a postupujte dle pokynů zobrazených na obrazovce. 5. Novou reagenční nádobku umístěte do automatického podávacího systému nádobek MINICAP FLEX-PIERCING (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva). 6. Nový kontejner na použité nádobky umístěte na zařízení MINICAP FLEX-PIERCING do míst určených k tomuto účelu. 7. Zkontrolujte hladinu náplně reagenčních nádobek a pokud je to nutné, doplňte činidlo a vyprázdněte odpadní nádobu. V okně "Kontrola hladiny činidel", aktualizujte software posunutím tlačítek kurzoru. 8. Otočný automatický podavač vzorků má 28 pozic pro umístnění zkumavek se vzorkem : • Vložte až 26 zavíčkovaných zkumavek se vzorkem plné krve do otočného automatického podavače vzorků se specifickými středovými kroužky (polohy č. 1 až 26), musí být vidět čárový kód každé zkumavky v otevřeném otočném automatického podavače vzorků. • Nalijte hemolyzační roztok MINICAP Hb A1c do nezavíčkované hemolyzační zkumavky označené štítkem s čárovým kódem hemolyzačního roztoku, aniž by došlo ke vniknutí vzduchových bublin : 2 mL pro analýzu 1 nebo 2 vzorků, 5 mL pro analýzu 12 vzorků. Dejte tuto zkumavku do polohy č. 27 bez středového kroužku v rotačním automatického podavače vzorků (poloha "ředicího roztoku / roztoku"). POZNÁMKA : 5 mL hemolyzačního roztoku použitého ve zkumavce 13 x 75 mm umožňuje provádět 12 analýz ; 10 mL hemolyzačního roztoku použitého ve zkumavce 16 x 100 mm umožňuje provést 24 analýz. DŮLEŽITÉ : Ověřte, že se nevytvořila žádný pěna dřív, než vložíte zkumavku do otočného automatického podavače vzorků. • Do polohy č. 28 v rotačním automatického podavače vzorků (pozice pro "kontrolu") vložte jeden ze 2 kontrolních roztoků Hb A1c Capillary a zvolte počet analýz, které se mají provést, podle dříve popsaných indikací, viz oddíl "kontrolní roztoky Hb A1c Capillary", část "kontrola kvality". DŮLEŽITÉ : Chybí-li zkumavka v poloze č. 1 (zkumavka se vzorkem), v poloze č. 27 (hemolysing solution tube) zkumavka s hemolyzačním roztokem) a v poloze č. 28 (zkumavka s kontrolní krví), analýzu se nespustí a zobrazí se zpráva.

9. 10. 11. 12.

POZNÁMKA : Pro použití kontrolní krve nebo kalibračního roztoku je nutné použít specifický čárový kód.

Zasuňte otočný automatický podavač vzorků do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING. Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. Po skončení analýzy vyjměte otočný automatický podavač vzorků a s analyzovanými zkumavkami se vzorky. Pokud je to nutné, opatrně vyjměte kontejner obsahující použité reagenční nádobky, pevně jej uzavřete odpovídajícím uzávěrem a vyhoďte jej. VAROVANÍ : Při manipulaci s kontejnery obsahujícími reagenční nádobky s biologickými vzorky je třeba si počínat se zvýšenou opatrností.

ŘEDĚNÍ - MIGRACE - POPIS AUTOMATICKÝCH KROKŮ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Načtou se čárové kódy na otočném automatického podavače vzorků a na zkumavkách se vzorkem. Míchání zkumavek. Vzorky jsou naředěny hemolyzačním roztokem a vzorkovací sonda je po každém vzorku opláchnuta. Kapiláry jsou promyty. Zředěné vzorky jsou nastříknuty do kapilár. Migrace probíhá za konstantního napětí po dobu asi 9 minut a teplota se ovládá Peltiérovým jevem. Hemoglobiny se detekují přímo, skenováním při 415 nm a na obrazovce systému se objeví elektroforetický profil.

POZNÁMKA : Tyto automatizované kroky jsou popsány pro první dvě analyzované zkumavky se vzorky. Záznamy z elektroforézy se objeví asi za 20 minut po spuštění analýzy. Pro následující zkumavky se vzorky se první tři kroky (čtení čárového kódu, míchání a hemolýza vzorků krve), provádí během analýzy předchozích dvou vzorků.

II. VÝSLEDEK ANALÝZY

Ke konci analýzy je automaticky určeno relativní zastoupení frakce HbA1c. Koncentrace HbA1c jsou standardizované a uvedené v procentech (s jedním desetinným místem) a v mmol/mol (bez jakéhokoli desetinného místa) v souladu s doporučeními IFCC (Ragnar Hanas et al, 2010). POZNÁMKA : Protože je vzorek charakterizován jako normální nebo se zvýšenou hladinou HbA1c na základě skutečné hodnoty koncentrace HbA1c v mmol/mol (celé číslo vypočtené pro analýzu dat přístrojem), může se objevit nesoulad pro hladiny HbA1c blízko mezní hodnoty.

Identifikace normálních krevních vzorků a vzorků krve se zvýšeným HbA1c je prováděna automaticky a profily je možné rozpoznat v okně křivky podle záznamů modrou čarou pro normální vzorky a oranžovou barvou pro vzorky se zvýšeným HbA1c : - Normální krevní vzorky s "normální" koncentrací HbA1c nižší nebo rovnou 42 mmol/mol (6,0 %) jsou označeny modrou barvou. - Krevní vzorky se zvýšenou koncentrací HbA1c vyšší než 42 mmol/mol (6,0 %) jsou označeny oranžovou barvou. Elektroforetické záznamy s abnormalitou (například další frakce nebo smazání normální frakce mezi HbA1c, jiné frakce Hb A, Hb A0 a Hb A2) jsou označeny fialovou barvou s označením "Atypický profil" a "Hb A1c (*)". Záznam je automaticky upraven s ohledem na frakci Hb A0 pro usnadnění interpretace. Následující tabulka uvádí varovné a informační signály, které se zobrazují pro analyzovaný vzorek : - 242 -

Varovný signál

Analyzovaný vzorek Kalibrační roztoky označené čárovým kódem

Kontrolní roztoky označené čárovým kódem

Krevní vzorek od pacienta

!

Hodnota HbA1c mimo meze specifikací pro kalibrační roztoky

!


!

!


"Atypický profil" Hodnota HbA1c mimo meze Žádná detekce frakce Nedostatečná optická (přítomnost dalších očekávaných hodnot pro Hb A0 nebo HbA1c hustota pro frakci Hb A0 frakcí nebo smazání kontrolní roztoky analyzované normální frakce) v režimu Kontrola kvality (QC)

Zprávy s upozorněním : "analysis of the calibrator not in conformity" (analýza kalibračního roztoku není ve shodě) : analyzujte kontrolní vzorek krve v poloze 28 nebo opakujte kalibraci [v případě neplatné kalibrace na jedné kapiláře (nebo 2 kapilárách), kapilára(y) je (jsou) neaktivní, hladina HbA1c vzorků krve a kontrol na předmětné kapiláře (nebo kapilárách) se potom nezobrazí] /

/

Nezobrazila se žádná hodnota HbA1c (na ramenu HbA1c nebo Hb A0)

Nezobrazila se hodnota HbA1c

/

/

Zprávy s upozorněním : "analysis of the control not in conformity" (analýza kontrolního roztoku není ve shodě) : 1. Opakujte analýzu se stejnou lahvičkou v poloze 28, 2. Opakujte analýzu s novou lahvičkou, 3. Zavolejte Technické služby SEBIA, pokud je porucha potvrzena. Podezření na přítomnost varianty Hb nebo selhání úpravy elektroforetických záznamů, opakujte analýzu pro potvrzení.

Zprávy s upozorněním : "too low OD" (příliš nízké OD) (< 0,07) pro krevní vzorek, který není abnormální, zopakujte analýzu : Pokud je výsledek potvrzen, je možné oznámit hladinu HbA1c.

/ V režimu Kontrola kvality : Označení "+" nebo "-" podle hladiny HbA1c ve srovnání s vlastními hodnotami zadanými operátorem. V režimu kontroly kvality, pokud se zobrazí "analysis of the control not in conformity" (analýza kontrolního roztoku není ve shodě), zopakujte kalibraci.

"atypický profil" a "Hb A1c (*)" : podezření na přítomnost varianty Hb.

/

Když má vzorek více než 3,0 % Hb A2, zobrazí se u názvu frakce vykřičník ("Hb A2 !"). Pak může být podezření na syndrom beta-talasemie, který by mohl ovlivňovat syntézu HbA1c (v případě fyziopatologického rušení). Doporučuje se analyzovat vzorek postupem MINICAP HEMOGLOBIN(E), aby se ověřila procentuální hodnota Hb A2 a nastudovaly klinické údaje pacienta. Kvantifikace HbA1c však představuje užitečný relativní index pro stejného pacienta. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ PRO MINICAP FLEX-PIERCING.

III. UKONČENÍ SÉRIE ANALÝZ

Po ukončení každé sekvence analýzy musí operátor zahájit postup "stand by" (přepnutí do pohotovostního režimu) nebo "shut down" (vypnutí) přístroje MINICAP FLEX-PIERCING, aby se kapiláry uložily v optimálních podmínkách.

DŮLEŽITÉ : Novou reagenční nádobku umístěte na automatický podávací systém nádobek MINICAP FLEX-PIERCING (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva).

IV. PLNĚNÍ REAGENČNÍCH NÁDOB

Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING automaticky kontroluje přítomnost reagentů.

DŮLEŽITÉ : Dodržujte pokyny pro výměnu reagenčních nádob s ohledem na barevný kód pro lahvičky a spojovací části. V případě nezbytného provedení jednoho z následujících úkonů bude zobrazena zpráva : • Vložte novou lahvičku s tlumivým roztokem a / nebo • Naplňte nádobu pracovním promývacím roztokem a / nebo • Naplňte nádobu filtrovanou destilovanou nebo deionizovanou vodou k vyplachování kapilár a / nebo • Vyprázdněte odpadní nádobu.

VAROVANÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda používaná k výrobě injekčních roztoků.

DŮLEŽITÉ : Před naplněním se doporučuje vyplachovací nádobu vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ PRO MINICAP FLEX-PIERCING. - 243 -


KONTROLA KVALITY


Doporučuje se analyzovat kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2, SEBIA, kat. č. 4768, po každé aktivaci kapiláry, po provedení každé kalibrace přístroje kalibračními roztoky Hb A1c CAPILLARY, po sekvenci čištění kapilár roztokem CAPICLEAN a před zahájením nové sekvence analýz. Navíc se pro laboratoře s vysokou četností analýzy doporučuje analyzovat střídavě jeden ze dvou kontrolních vzorků Hb A1c CAPILLARY 1 nebo 2 po analýze celého otočného automatického podavače vzorků.

VAROVANÍ : Pokud kontrolní hodnoty spadají mimo rozsah vlastních hodnot, musí být vzorky analyzované na daných kapilárách od poslední validované kontroly kvality analyzovány znovu.

DŮLEŽITÉ : K optimálnímu použití krevních kontrolních roztoků v přístroji MINICAP FLEX-PIERCING je nezbytné používat specifické konické zkumavky na kontrolní roztoky s odpovídajícími víčky (viz "POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ") a štítky s čárovým kódem určené k označení zkumavek na kontrolní roztoky obsahující kontrolní vzorky krve k analýze.

VÝSLEDKY Hodnoty

Přímá detekce při 415 nm v kapilárách dává relativní koncentrace (procentuální hodnoty) pro jednotlivé zóny hemoglobinů a speciálně kalibrovaná koncentrace HbA1c. Normální hodnoty hemoglobinu A1c : ≤ 42 mmol/mol (6,0 %) (Geistanger et al, 2008).

VAROVANÍ : Hodnotu HbA1c získanou pro vzorek, představující variantu hemoglobinu, nelze srovnávat s normální hodnotou HbA1c k určování diagnózy. Normální hodnota byla ve skutečnosti stanovena, podle doporučení IFCC a NGSP, pro jedince bez jakékoli hemoglobinopatie. Pro atypické vzorky (s variantou a) software nezobrazí normální hodnotu HbA1c, ale kvantitativní stanovení HbA1c představuje užitečný relativní index pro stejného pacienta.

Interpretace

Viz ELEKTROFORETICKÉ TYPY.

Rušení

POZNÁMKA : Běžné rušivé faktory postupu MINICAP Hb A1c (triglyceridy, bilirubin, kyselina askorbová, močovina, revmatoidní faktor, glibenklamid, karbamylovaný a acetylovaný hemoglobin a labilní HbA1c) byly hodnoceny ve studiích založených na směrnici Institutu pro klinické laboratorní standardy (CLSI - USA) číslo EP7-A2 "Interference Testing in Clinical Chemistry" (Rušení při zkoušení v klinické chemii). Výsledky jsou sumarizovány dále. • Nebylo zjištěno žádné rušení postupu MINICAP Hb A1c v důsledku vysoké koncentrace vzorku krve následujících rušivých faktorů testovaných na stejných koncentracích uvedených níže : Faktor rušení

Koncentrace

Triglyceridy

3,07 g/dL (35,1 mM)

Bilirubin

25,8 mg/dL (442 µM)

Kyselina askorbová

60 mg/dL (3,41 mM)

Močovina

291 mg/dL (48,5 mM)

Revmatoidní faktor

2178 IU/mL

Glibenklamid

3 mg/dL

• Nebylo zjištěno žádné rušení postupu MINICAP Hb A1c v důsledku přítomnosti karbamylovaného hemoglobinu (≤ 8,7 %) a labilního HbA1c (≤ 14,8 %). • Acetylovaný hemoglobin může migrovat do menší zóny migrace hemoglobinů, přičemž nebylo pozorováno žádné rušení kvantifikace frakce HbA1c v důsledku přítomnosti acetylovaného hemoglobinu (≤ 3,0 %). • Hladiny Hb F (nebo varianty) ve vzorku krve do 23 % neruší kvantifikaci frakce HbA1c. V případě, že je hladina Hb F (nebo varianty) vyšší než 23 %, je softwarem nahlášen výsledek s varovným signálem "Atypical profile – Possible quantitative interference if Hb F or variant > 23 %"(Atypický profil – Možné kvantitativní rušení, je-li hladina Hb F nebo varianty > 23 %) .

• Analýza variant hemoglobinu : - Nebylo pozorováno žádné rušení kvantifikace frakce HbA1c v důsledku přítomnosti hlavních abnormálních hemoglobinů Hb S (≤ 40,5 %), Hb C (≤ 37,0 %), Hb D (≤ 41,0 %) a Hb E (≤ 24,7 %) (s výjimkou Bartova hemoglobinu). V důsledku množství variant je přesto možné pozorovat v migrační zóně HbA1c přítomnost jiné varianty hemoglobinu. V případě větve na HbA1c nehlásil software žádné výsledky. - Glykolyzované formy běžných variant hemoglobinu (například Hb S, Hb C, Hb D nebo Hb E) společně migrují s frakcí Hb A0 nebo menšími frakcemi Hb A1 ("jiné frakce Hb A") bez jakékoli úpravy výsledku HbA1c. - Některé varianty hemoglobinu se mohou jevit jako větev frakce Hb A0, kterou software nemusí detekovat. Detekci této větve umožní jedině vizuální posouzení elektroforetického záznamu. Je nezbytné analyzovat hematologický stav a provést doplňkové studie, aby se potvrdila přítomnost varianty. - Navíc mezi variantami, které migrují blízko Hb A0 nebo se připojují k Hb A0, se mohou některé vykazovat další frakci ("X1c"), která migruje odděleně od HbA1c. Elektroforetický záznam bude identifikován jako "Atypický profil". V tomto případě nehlaste žádný výsledek HbA1c. - Při analyzování vzorků bez jakéhokoli Hb A (například od pacientů homozygotních nebo s heterozygotními variantami S/S nebo S/C) a v přítomnosti Hb F, může dojít ke zmatení s Hb A0 vzhledem k podobným migračním pozicím. Software nenahlásí žádný výsledek HbA1c z důvodu absence HbA1c v tomto typu vzorku. - 244 -



• Osoby, u kterých došlo v nedávné době k velké ztrátě krve mohou vykazovat falešně nízké hodnoty HbA1c vzhledem k vyšší hladině nových erytrocytů. • Abnormální životnost červených krvinek, například v případě hemolytické anémie nebo polycytémie, může ovlivnit hladiny HbA1c. Tyto hodnoty však představují užitečný relativní index pro stejného pacienta. • U pacientů s hyperleukocytózou může být rychlost migrace vzorku urychlena, což může způsobit posun profilu a vést k tomu, že nedojde k rozpoznání zón.

Omezení použití

• Viz VZORKY PRO ANALÝZU. • Analyzujte pouze vzorky krve v odběrných zkumavkách uvedených v odstavci "POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ" nebo zkumavky s ekvivalentními rozměry schválenými pro klinické analýzy. Zavolejte technický servis SEBIA, pokud potřebujete další informace o těchto zařízeních. • Neanalyzujte přímo zkumavky obsahující méně než 1 mL krevního vzorku. • Vyvarujte se starým, nesprávně skladovaným krevním vzorkům ; rozkladné produkty (nebo jejich zbytky) mohou ovlivnit elektroforetický záznam po 7 dnech skladování. Další frakce při analýze takových vzorků může migrovat zejména do polohy Hb A2 nebo více k anodické straně než Hb A0 (v poloze "jiné než Hb A"). • Po 10 dnech skladování se mohou objevit viskózní shluky červených krvinek, které je před analýzou nutné odstranit. • V některých vzorcích krve A/C heterozogytoních pacientů s Hb F, může být frakce Hb A0 kvantifikována nepřesně. • Vzhledem k omezené rozlišovací schopnosti a citlivosti zónové elektroforézy je možné, že v přítomnosti všech variant hemoglobinu nemusí být HbA1c touto metodou kvantifikován. • Sada MINICAP Hb A1c by neměla být použita : - pro vyšetření "Point-of-Care" (u pacienta), - pro diagnózu diabetu mellitus, - pro každodenní sledování hladiny glukózy, - jako náhrada za každodenní domácí testování hladiny glukózy v moči a krvi, - pro analýzu vzorků pacientů s onemocněním způsobujícím zkrácení doby přežití červených krvinek, jako jsou hemolytická onemocnění, těhotenství a významná akutní nebo chronická ztráta krve a - pro analýzu vzorků pacientů s celkovou hladinou hemoglobinu méně než 2,5 nebo více než 31,1 g/dL a hemoglobinopatiemi které by mohli testy rušit. Varianty hemoglobinu sledované při postupech Hb A1c nebo HEMOGLOBIN(E) : V důsledku odlišného složení tlumicích roztoků Hb A1c a HEMOGLOBIN(E) se může lišit elektroforetická mobilita některých variant hemoglobinu.

Odstraňování závad a řešení problémů

Pokud při dodržení veškerých instrukcí pro přípravu, skladování a provedení testu uvedených v příbalovém letáku testy nevycházejí, kontaktujte technickou podporu společnosti SEBIA. Bezpečnostní datové listy soupravy činidel a informace o čištění a likvidaci odpadů, označování a bezpečnostní pravidla používaná společností SEBIA, obaly pro přepravu biologických vzorků a informace o čistění přístroje jsou k dispozici na webových stránkách SEBIA : www.sebia.com.

ÚDAJE O VÝKONU Přesnost

Přesnost postupu MINICAP Hb A1c byla ověřena podle směrnice Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP5-A2 "Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurements Methods" (Posouzení přesnosti metod kvantitativního měření). Průměry, standardní odchylky a koeficienty variace (CV %) (n = 120) byly spočteny pro koncentrace HbA1c (mmol/mol) a procento (%) pro každý vzorek statistickými nástroji doporučenými CLSI.

Reprodukovatelnost mezi šaržemi a přístroji

Bylo analyzováno osm (8) různých krevních vzorků postupem MINICAP Hb A1c na obou kapilárách 3 různých přístrojů MINICAP FLEX-PIERCING a 3 šarží ze sady MINICAP Hb A1c. Analyzované vzorky krve zahrnovaly 3 vzorky s normální hladinou HbA1c (č. 1, 2 a 3), 1 vzorek s hladinou HbA1c blízko mezní hodnoty (č. 4) a 4 vzorky se zvýšenou hladinou HbA1c (č. 5, 6, 7 a 8). V této studii byl každý vzorek krve analyzován na obou kapilárách každého přístroje, což představovalo 60 analýz během 10 pracovních dní (ve 2 různé denní doby). V každé analýze byly vzorky analyzovány duplicitně. Následující tabulky shrnují rozsah variačního koeficientu v % v rámci analýzy a v rámci přístroje a činidel pro koncentrace HbA1c (v mmol/mol) a procentech.

Č. vzorku 1 Č. vzorku 2 Č. vzorku 3 Č. vzorku 4 Č. vzorku 5 Č. vzorku 6 Č. vzorku 7 Č. vzorku 8

CV (%) rozsahy

Střední hodnota (koncentrace HbA1c mmol/mol) 33 36 37 47 63 76 87

110

Reprodukovatelnost v rámci analýzy

Celková reprodukovatelnost

CV min (%)

CV max (%)

Celkové CV min (%)

Celkové CV max (%)

0,0

3,0

1,4

3,3

0,9

3,5

1,1

4,0

1,2

2,6

0,7

1,6

0,0

1,4

0,3

1,3

0,4 0,0

1,4 - 245 -

4,0

0,9 1,2 1,3 0,7 0,0 0,3 0,6 0,0

3,5 4,0 2,6 2,2 1,4 1,4 2,2 4,0



Č. vzorku 1

Střední hodnota (% HbA1c) 5,2

Č. vzorku 2

Č. vzorku 6 Č. vzorku 7 Č. vzorku 8

CV (%) rozsahy

CV max (%)

Celkové CV min (%)

Celkové CV max (%)

0,9

2,1

0,9

2,1

0,9

5,5

Č. vzorku 4

Celková reprodukovatelnost

CV min (%)

5,4

Č. vzorku 3 Č. vzorku 5

Reprodukovatelnost v rámci analýzy 2,0

0,5

6,4

2,0

0,5

7,9

10,1 12,3

1,1

0,6

1,2

0,0

1,6

0,0

1,1

0,4

1,9

0,8

1,1

0,6

2,1

0,8

1,4

0,0

2,2

0,7

1,9

0,7

9,1

0,9

1,2

0,6

2,1

1,8

0,0

Reprodukovatelnost v rámci stejné kapiláry a mezi kapilárami na stejném přístroji

2,2

Bylo analyzováno osm (8) různých krevních vzorků postupem MINICAP Hb A1c na obou kapilárách stejného přístroje MINICAP FLEX-PIERCING a 1 šarže s použitím soupravy MINICAP Hb A1c. Analyzované vzorky krve zahrnovaly 3 vzorky s normální hladinou HbA1c (č. 1, 2 a 3), 1 vzorek s hladinou HbA1c blízko mezní hodnoty (č. 4) a 4 vzorky se zvýšenou hladinou HbA1c (č. 5, 6, 7 a 8). V této studii byl každý vzorek krve analyzován na obou kapilárách stejného přístroje, což představuje 40 analýz během 20 pracovních dní (ve 2 různé denní doby). V každé analýze byly vzorky analyzovány duplicitně. Výsledky pro koncentrace HbA1c (v mmol/mol) a procenta jsou sumarizována v následujících tabulkách. Pro reprodukovatelnost v rámci stejné kapiláry byly vypočítány maximální hodnoty CV pro každý vzorek krve z úhrnných hodnot získaných na každé kapiláře. Průměr (koncentrace HbA1c - mmol/mol)

Reprodukovatelnost v rámci analýzy (CV %)

Reprodukovatelnost v rámci kapiláry (CV %) Reprodukovatelnost mezi analýzami (CV %) Reprodukovatelnost během dne (CV %) Celkem (CV %)

Průměr (% HbA1c)

Reprodukovatelnost v rámci analýzy (CV %)

Reprodukovatelnost v rámci kapiláry (CV %) Reprodukovatelnost mezi analýzami (CV %) Reprodukovatelnost během dne (CV %) Celkem (CV %)

Linearita

Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. 1 2 3 4 5 6 7 8 33

34

38

46

62

75

87

106

0,4

0,0

1,7

1,9

1,7

1,1

0,8

1,2

0,8

1,3

0,0

0,6

0,5

0,0

0,6

0,3

2,5 0,0 2,2

2,8 1,4 2,3

2,4 0,3 1,8

1,3 0,5 1,3

0,8 0,0 0,8

1,2 0,0 1,3

1,0 1,0

1,2 0,9 0,2 1,2

Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. Č. vzorku. 1 2 3 4 5 6 7 8 5,2

5,2

5,7

6,4

7,8

9,0

10,1

11,9

1,4

1,4

1,5

1,1

0,7

0,8

0,8

0,9

1,0 0,0 0,7 1,2

1,1 0,3 0,0 1,1

1,0 0,7 0,5 1,3

0,9 0,0 0,6 1,1

1,1 0,0 0,2 1,1

0,9 0,0 0,4 1,0

0,7 0,3 0,3 0,8

1,1 0,0 0,1 1,1

Linearita postupu MINICAP Hb A1c byla ověřena podle směrnice Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP6-A "Evaluation of Linearity of Quantitative Measurements Methods: A statistical Approach" [Posouzení linearity metod kvantitativního měření : Statistický přístup]. Výsledky pro koncentrace HbA1c (mmol/mol) a procento (%) pro každý vzorek byly analyzovány statistickými nástroji doporučenými CLSI.

Dva charakteristické krevní vzorky, obsahující normální vzorek s koncentrací HbA1c 29 mmol/mol (4,8 % HbA1c) a vzorek se zvýšenou hladinou HbA1c s HbA1c o koncentraci 127 mmol/mol (13,8 % HbA1c) byly smíchány v různých poměrech a zředěné roztoky byly podrobeny elektroforéze postupem MINICAP Hb A1c. V každém zředění byly vzorky analyzovány duplicitně. Bylo zjištěno, že zkoušení je lineární v celém studovaném rozsahu frakce hemoglobinu HbA1c, do maximální koncentrace přibližně 127 mmol/mol (mezi 4,8 a 13,8 % HbA1c). Dále byly hemolyzačním roztokem sériově zředěny 3 charakteristické krevní vzorky, včetně normálního vzorku s koncentrací HbA1c 31 mmol/mol (5,0 % HbA1c), vzorku s hladinou HbA1c blízko mezní hodnoty 46 mmol/mol (6,3 % HbA1c) a vzorku se zvýšenou hladinou HbA1c s koncentrací HbA1c 79 mmol/mol (9,3 % HbA1c) a podrobeny elektroforéze postupem MINICAP Hb A1c. Bylo zjištěno, že zkoušení je lineární v celém studovaném rozsahu celkového hemoglobinu od 2,5 do 31,1 g/dL a frakce hemoglobinu HbA1c a procenta nebyly ovlivněny koncentrací hemoglobinu ve vzorku.

Přesnost - vnitřní korelace

Studie vnitřní korelace postupu MINICAP Hb A1c prováděného přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING byla ověřena podle směrnice Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP09-A2 "Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples ; Approved Guideline - Second Edition (Interim Revision)" [Metoda srovnání a odhad zkreslení pomocí vzorků pacientů ; schválené směrnice - druhé vydání (předběžná revize)]. Výsledky pro koncentrace HbA1c (mmol/mol) a procento (%) pro každý vzorek byly analyzovány statistickými nástroji doporučenými CLSI. - 246 -



POZNÁMKA : Níže uvedené výsledky byly získány z 1 studie interní přesnosti Analyzované vzorky krve byla poskytnuty 6 laboratořemi ve Francii, Nizozemsku a USA. Všechny vzorky byly zpracovány přesně stejným způsobem oběma technikami a podle stejných pokynů s ohledem na celistvost vzorku.

Hladiny HbA1c byly měřeny ve 101 vzorcích krve, včetně 28 vzorků s normálními hladinami HbA1c a 73 vzorcích se zvýšenými hladinami HbA1c, jak elektroforetickou separací postupem MINICAP Hb A1c na přístroji MINICAP FLEX-PIERCING a i komerčně dostupnou elektroforetickou technikou pro kvantifikaci HbA1c, která je standardizovaná NGSP. Naměřené hodnoty koncentrací a procent HbA1c z obou postupů byly statisticky analyzovány lineární regresí. Získané výsledky vykázaly perfektní korelaci mezi oběma postupy kvantifikace HbA1c. Výsledky lineární regrese jsou uvedeny v tabulce níže (y = MINICAP Hb A1c), citlivost a specificita postupu MINICAP Hb A1c porovnaná s referenčním postupem byla vypočítána doporučenou metodou (Wendling, 1986). HbA1c

Koncentrace (mmol/mol) Procento (%)

Korelační součinitel 0,998 0,998

Úsek na ose y

Sklon

0,165

0,982

1,262

0,985

Rozmezí hodnot MINICAP Hb A1c 29 - 122

4,8 - 13,3

Citlivost (%)

Specificita (%)

100,0

96,4

100,0

96,4

Přesnost - vnější korelace

Následující studie korelace postupu MINICAP Hb A1c, prováděného na přístroji MINICAP FLEX-PIERCING, byly ověřeny podle směrnice Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP09-A2 "Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline - Second Edition (Interim Revision)" [Metoda srovnání a odhad zkreslení pomocí vzorků pacientů; schválené směrnice - druhé vydání (předběžná revize)]. Výsledky pro koncentrace HbA1c (mmol/mol) a procento (%) pro každý vzorek byly analyzovány statistickými nástroji doporučenými CLSI.

POZNÁMKA : Výsledky prezentované níže byly získány z 2 externích studií přesnosti, provedených ve 2 nemocničních laboratořích umístěných v USA. Všechny vzorky byly zpracovány přesně stejným způsobem oběma technikami a podle stejných pokynů s ohledem na celistvost vzorku.

Ve studii č. 1 byly hladiny HbA1c měřeny ve 126 vzorcích krve, zahrnujících 53 vzorků s normálními hladinami HbA1c a 73 vzorků se zvýšenými hladinami HbA1c, elektroforetickou separací postupem MINICAP Hb A1c na přístroji MINICAP FLEX-PIERCING a i komerčně dostupnou elektroforetickou technikou pro kvantifikaci HbA1c, která je standardizovaná NGSP. Naměřené hodnoty koncentrací a procent HbA1c z obou postupů byly statisticky analyzovány lineární regresí. Dosažené výsledky vykázaly perfektní korelaci mezi oběma postupy kvantifikace HbA1c. Výsledky lineární regrese jsou uvedeny v tabulce níže (y = MINICAP Hb A1c), citlivost a specificita postupu MINICAP Hb A1c porovnaná s referenčním postupem byla vypočítána doporučenou metodou (Wendling, 1986). HbA1c



Úsek na ose y

Sklon

- 0,032

0,997

- 0,396

0,996


4,8 - 13,6

Citlivost (%)

Specificita (%)

90,4

98,1

91,8

94,3

Ve studii č. 2 byly hladiny HbA1c měřeny ve 140 vzorcích krve, zahrnujících 54 vzorků s normálními hladinami HbA1c a 86 vzorků se zvýšenými hladinami HbA1c, elektroforetickou separací postupem MINICAP Hb A1c na přístroji MINICAP FLEX-PIERCING a i komerčně dostupnou elektroforetickou technikou pro kvantifikaci HbA1c, která je standardizovaná NGSP. Naměřené hodnoty koncentrací a procent HbA1c z obou postupů byly statisticky analyzovány lineární regresí. Dosažené výsledky vykázaly perfektní korelaci mezi oběma postupy kvantifikace HbA1c. Výsledky lineární regrese jsou uvedeny v tabulce níže (y = MINICAP Hb A1c), citlivost a specificita postupu MINICAP Hb A1c porovnaná s referenčním postupem byla vypočítána doporučenou metodou (Wendling, 1986). HbA1c



Úsek na ose y

Sklon

- 0,057

1,019

- 0,316

1,023

- 247 -


4,8 - 13,1

Citlivost (%)

Specificita (%)

98,8

96,3

98,8

96,3


BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY


1. Abraham EC : Glycosylated hemoglobins - methods of analysis and clinical applications, Clinical and Biochemical Analysis 1985 ; Vol 19. 2. American Diabetes Association : Clinical practice recommendations : Standards of medical care for patients with diabetes mellitus. Diabetes Care 1999 ; 22 (suppl) : S32-41. 3. American Diabetes Association. Standards of medical care in diabetes - 2012. Diabetes Care. 2012 Jan, 35, Suppl 1 : S11-S63. 4. Bridges KR et al : The acetylation of hemoglobin by aspirin in vitro and in vivo. J Clin Invest 1975 ; 56 : 201-207. 5. Flückiger R et al : Hemoglobin carbamylation in uremia, N Engl J Med 1981 ; 304 : 823-827. 6. Garde AH, Hansen AM, Skovgaard LT et al : Seasonal and biological variation of blood concentrations of total cholesterol, dehydroepiandrosterone sulfate, hemoglobin Hb A1c, Ig A, prolactin, and free testosterone in healthy women. Clin Chem 2000 ; 46 : 551-559. 7. Geistanger et al. Statistical methods for monitoring the relationship between the IFCC reference measurement procedure for Hemoglobin A1c and the designated comparison methods in the United States, Japan, and Sweden. Clin. Chem., 2008, 54, 8 : 1379-1385. 8. Goldsland I : Intra-individual variation : Significant changes in parameters of lipids and carbohydrate metabolism in the individual and intraindividual variation in different test populations. Ann Clin Biochem 1985 : 22 : 618-624. 9. Goldstein DE et al : Glycated hemoglobin: methodologies and clinical applications, Clin Chem 1986 ; 32 : B64-B70. 10. Goldstein DE, Little R, England JD, Wiedmeyer H-M, Mc Kenzie EM. Methods for quantitating glycosylated hemoglobins: high performance liquid chromatography and thiobarbituric acid colorimetry: In: Clarke WL, Larner J, Pohl SL, eds. Methods of diabetes research, Vol. 2 Clinical methods. New York: John Wiley, 1986: 475-504. 11. Hanas R, John G. 2010 Consensus statement on the worldwide standardization of the Hemoglobin A1c measurement. Clin. Chem., 2010. 12. Hoelzel W, Weykamp C, Jeppsson JO, Miedema K, Barr JR, Goodall I, Hoshino T, John WG, Kobold U, Little R, Mosca A, Mauri P, Paroni R, Susanto F, Takei I, Thienpont L, Umemoto M, Wiedmeyer HM. IFCC Reference System for Measurement of Hemoglobin A1c in human blood and the national standardization schemes in the United States, Japan and Sweden: a method comparison study. Clin. Chem. 2004; 50: 166-174. 13. Jellum E et al. Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J. Chromatogr. B, 689, 155-164 (1997). 14. Jeppsson OJ, Kobold U, Barr J et al : Approved IFCC reference method for the measurement of Hb A1c in human blood. Clin Chem Lab Med 2002 ; 40 : 78-89. 15. Jorde R, Dundsfjord J : Intra-individual variability and longitudinal changes in glycaemic control in patients with type 1 diabetes mellitus. Diabet Med 2000 ; 17 : 451-456. 16. Kilpatrick ES, Meylor PW, Keevil BG : Biological variation of glycated hemoglobin. Implications for diabetes screening and monitoring. Diabetes Care 1998 ; 21 : 261-264. 17. Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495-509 (1995). 18. Little RR, Rohlfing CL, Wiedmeyer HM et al : for the NGSP Steering Committee. The national glycohemoglobin standardization program : A fiveyears progress report. Clin Chem 2001 ; 47 : 1985-1992. 19. Mayer TK and Freedman ZR : "Protein glycosylation in diabetes mellitus : a review of laboratory measurements and of their clinical utility" (critical review), Clinica Chimica Acta 1983 ; 127 : 147-184. 20. Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715-1723 (1997). 21. Phillipou G, Phillips PJ : Intraindividual variation of glycohemoglobin : Implications for interpretation and analytical goals. Clin Chem 1993 ; 39 : 2305-2308. 22. Ragnar Hanas, Garry John, and on behalf of the International HbA1c Consensus Committee : 2010 Consensus Statement on the Worldwide Standardization of the Hemoglobin A1c Measurement (Preamble). Clin. Chem., Aug 2010 ; 56, 8 : 1362-1364. 23. Rohlfing C, Wiedmeyer HM, Little R et al : Biological variation of glycohemoglobin. Clin Chem 2002 ; 48 : 1116-1118. 24. Rolandsson O et al : Hemoglobin A1c can be analyzed in blood kept frozen at - 80 °C and is not commonly affected by hemolysis in the general population. Metabolism, 2004 ; 53 (11) : 1496 - 1499. 25. Sacks DB, Bruns DE, Goldstein DE et al : Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002 ; 48 : 436-472. 26. Smaldone A : Glycemic control and hemoglobinopathy : When A1c may not be reliable. Diabetes Spectrum, 2008 ; 21 (1) : 46 - 49. 27. Schoos R et al : Les Hémoglobines Glycosylées, Bull Soc Lux Biol Clin 1981, No. 4. 28. Skeie S, Thue G, Sandberg S : Interpretation of hemoglobin A1c (Hb A1c) values among diabetic patients : Implications for quality specifications for Hb A1c. Clin Chem 2001 ; 47 : 1212-1217. 29. The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. The effect of intensive treatment of diabetes on the development and progression of long-term complications in insulin-dependant diabetes mellitus. N Engl J Med, 1993; 329: 977-86. 30. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97. 31. L. Guis, A. Chaumier, V. Le Gall, S. Havrez (Février 2013) Intégration du Capillarys 2 Flex Piercing (Sebia) dans un laboratoire de biologie médicale spécialisée. Revue Francophone des Laboratoires, 449, 47 - 56. 32. F.B. Aksungar, M. Serteser, A. Coşkun, İ. Ünsal (2013) A comparison between turbidimetric inhibition immunoassay and capillary electrophoresis in glycated hemoglobin (HbA1c) measurement. Clin. Chem. Lab. Med. DOI 10.1515/cclm-2013-0033. 33. F. Braga, A. Dolci, A. Mosca, M. Panteghini (2010) Biological variability of glycated hemoglobin. Clinica Chimica Acta, 411 : 1606 - 1610. 34. González-Borrachero M.L. et al (2013), Hemoglobin Jerez [α2 β2 95 (FG2) Lys? Gln]: Performance of HbA1c measurement with five analytical methods, Clin Chim Acta (2013), http://dx.doi.org/10.1016/j.cca.2013.07.022. 35. Heylen O et al (2014) Evaluation of the Sebia CAPILLARYS 2 Flex Piercing for the measurement of HbA1c on venous and capillary blood samples. Am. J. Clin. Pathol., 141 : 867 - 877. 36. S. Jaisson, N. Leroy, J. Meurice, E. Guillard, P. Gillery (2012) First evaluation of Capillarys 2 Flex Piercing® (Sebia) as a new analyzer for HbA1c assay by capillary electrophoresis. Clin. Chem. Lab. Med. DOI 10.1515/cclm-2012-0017. 37. S. Jaisson, N. Leroy, C. Desroches, M. Tonye-Libyh, E. Guillard, P. Gillery (2013) Interference of the most frequent haemoglobin variants on quantification of HbA1c: Comparison between the LC-MS (IFCC reference method) and three routinely used methods. Diabetes Metab. http://dx.doi.org/10.1016/j.diabet.2013.01.004. 38. Lin C-N et al. Effects of hemoglobin C, D, E, and S traits on measurements of HbA1c by six methods, Clin Chim Acta (2012), doi:10.1016/j.cca.2011.12.019. 39. R.R. Little, C.L. Rohlfing and D. B. Sacks (2011) Status of hemoglobin A1c measurement and goals for improvement: From chaos to order for improving diabetes care. Clinical Chemistry 57, 2 : 205 - 214. - 356 -


BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY


40. Little R.R., Rohlfing C. (2013) The long and winding road to optimal HbA1c measurement, Clin Chim Acta (2013), http://dx.doi.org/10.1016/j.cca.2012.12.026. 41. M. Marinova et al (2013) Multicenter evaluation of hemoglobin A1c assay on capillary electrophoresis. Clin. Chim. Acta. http://dx.doi.org/10.1016/j.cca.2013.06.014. 42. E. Urrechaga (2012) High-resolution HbA1c separation and hemoglobinopathy detection with capillary electrophoresis. Am. J. Clin. Pathol. ;138 : 448 - 456. 43. J.M. Rhea, R. Molinaro (2014) Rare presumptive Hb variant misidentification prevents appropriate Hb A1c result. Clin. Chim. Acta., 431, 111 - 112. 44. J.M. Rhea, R. Molinaro (2014) Pathology consultations on HbA1c methods and interferences. Am. J. Clin. Pathol., 141, 5 - 16. 45. D.B. Sacks et al (2011) Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of Diabetes Mellitus (Special report). Clinical Chemistry, 57 : 6, e1-e47. 46. C. Weykamp, H. Waenink-Wieggers, E. Kemma, C. Siebelder (2012) HbA1c : performance of the Sebia Capillarys 2 Flex Piercing. Clin. Chem. Lab. Med. DOI 10.1515/cclm-2012-0560. 47. A Woodworth et al (2014) Utilization of assay performance characteristics to estimate Hemoglobin A1c result reliability. Clinical Chemistry, 60 :8. 48. M. Dessi et al (2014) Performances of Capillary Electrophoresis and HPLC Methods in HbA1c Determination: Diagnostic Accuracy in HbS and HbD-Iran variants' Presence. J. Clin. Lab. Anal. DOI 10.1002/jcla.21728. 49. Zhao Z et al, Evaluation of hemoglobin A1c measurement by Capillarys 2 electrophoresis for detection of abnormal glucose tolerance in African immigrants to the United States, Clin Chim Acta (2015), http://dx.doi.org/10.1016/j.cca.2015.03.025. 50. K. Gariani, C. Tran, J. Philippe (2011) Hémoglobine glyquée : nouvel outil de dépistage ? Rev. Med. Suisse, 7, 1238 – 1242.

- 357 -

MINICAP Hb A1c - 2016/09 pour / for monitoring

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 1

Profil normal Normal pattern HbA1c : 5.1 % - 33 mmol/mol

Hb A0

Hb A1c 0

20

40

60

Hb A2

Other Hb A 80

100

120

140

160

180

200

220

240

260

280

300

260

280

300

Figure 2

Profil avec HbA1c augmentée Pattern with elevated HbA1c level HbA1c : 8.3 % - 68 mmol/mol

Hb A0

Hb A1c

Hb A2

Other Hb A 0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

- 358 -

200

220

240


SCHÉMAS / FIGURES


Profil avec variant (Hb S suspectée) Pattern with variant (suspected Hb S)

Hb S Hb A0

Hb A1c 0

20

40

60

Hb A2

Other Hb 80

100

120

140

160

180

200

220

240

260

280

300

280

300

Figure 4

Profil avec variant (Hb C suspectée) Pattern with variant (suspected Hb C)

Hb C+A2 Hb A0 + C1c

Hb A1c 0

20

40

60

Other Hb 80

100

120

140

160

180

- 359 -

200

220

240

260


SCHÉMAS / FIGURES


Profil avec Hb F Pattern with Hb F

Hb A0

Hb A1c

HbF or variant

Other Hb 0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

- 360 -

200

Hb A2 220

240

260

280

300

Benelux SCS / Comm. V Jan Olieslagerslaan 41 1800 Vilvoorde Belgique / België Tél. : 32 (0)2 702 64 64 Fax : 32 (0)2 702 64 60 e-mail : [email protected]

Brasil Edifício Baker Office Tower Rua Barão do Triunfo, 73, conjunto 51 CEP 04602-000 Bairro Brooklin Paulista, São Paulo - SP Brasil Tel. : 55 11 3849 0148 : 55 11 3841 9816 Fax e-mail : [email protected]

GmbH Münsterfeldallee, 6 36041 Fulda Deutschland Tel. : 49 (0)661 3 30 81 Fax : 49 (0)661 3 18 81 e-mail : [email protected]

Hispania S.A. C/Sicilia, n° 394 08025 Barcelona España Tel. : 34 93 208 15 52 Fax : 34 93 458 55 86 e-mail : [email protected]

Inc. 400-1705 Corporate Drive Norcross, GA 30093 U.S.A. Tel. : 1 770 446 - 3707 Fax : 1 770 446 - 8511 e-mail : [email protected]

Italia S.r.l. Via Antonio Meucci, 15/a 50012 Bagno a Ripoli (FI) Italia Tel. : 39 055 24851 Fax : 39 055 0982083 e-mail : [email protected]

UK Ltd River Court, Meadows Business Park Station Approach, Blackwater Camberley, Surrey, GU17 9AB United Kingdom Tel. : 44 (0)1276 600636 Fax : 44 (0)1276 38827 e-mail : [email protected]

Parc Technologique Léonard de Vinci CP 8010 Lisses - 91008 EVRY Cedex - France Tél. : 33 (0)1 69 89 80 80 - e-mail : [email protected]

Shanghai Representative Office Cross Tower, Room 2306-07 318 Fuzhou Road Shanghai 200001 China Tel. : 00 86 (21) 6350 1655 Fax : 00 86 (21) 6361 2011 e-mail : [email protected]

09

Recommend Documents