A hem-oxigenáz/VEGF rendszer indukciója nőgyógyászati tumorokban
Óvári László
HO-1, CO,VEGF biokémia rendszer
Gyulladások Sebgyógyulás Placentáció
HO-1, VEGF-onkológia-irodalom
HO-1 nagy mértékében expresszálódik a különböző tumorokban, egyidejűleg jelentős szövetspecificitás „is HO-1 a fals friend?” antiinflammatory antiapoptotic, antioxydative, angiopoetic effect VEGF jelen van a tumorban, szükséges a metasztázishoz, terápia
HO-1, VEGF-onkológia-irodalom
Jozkowicz et al.: Oxygenase-1 in Tumors: Is It a False Friend? Antioxid Redox Signal. 2007 December ; 9(12): 2099–2118
HO-1, VEGF-onkológia-irodalom
Nőgyógyászati onkológia
Cervix karcinóma Corpus karcinóma Ovarium karcinóma
Ovarium tumor
Gyors progresszió Lymphatikus terjedés Intrakavitális metasztázis Rossz prognózis PFS,OAS
Irodalmi háttér
Világszerte közel 200.000 nő betegszik meg évente ovárium carcinómában A petefészekrák rendkivül agresszív tumor, az esetek 70%-ában késői a diagnózis Többnyire előrehaladott stádiumban kerül felismerésre Magas mortalitás (75%-os a halálozás) Bár kemoszenzitív tumor, de gyakori recidiva Elsődleges kemoterápia: karboplatin és paklitaxel kombinációja Másodlagos terápia: karboplati és doxorubicin (50mg/testsúly kg) A tumor biológiai ismeretek minden bizonnyal segítik a klinikai munkát is. A különböző tumorok különböző módon expresszálják a Ho-1-t és VEGF-et. Az adatok gyakran ellentmondásosak. Általánosan elfogadott, hogy a tumor túlélésében, a direkt szöveti terjedésében és a metasztázis képzésben a tumor számára fontosak ezek a molekulák.
Korábbi patohisztológiai eredményeink (HO-1):
M60 Cystadenocarcinoma ovarii
M60 – Adenocarcinoma ovarii-G2 H-ferritin (AF488), HO-1 (TRITC), VEGF (AF647)
H-Ferritin
HO-1
VEGF
M108/2- Adenocarcinoma Ovarii-G3 H-ferritin (AF488), HO-1 (TRITC), VEGF (AF647)
H-Ferritin
HO-1
VEGF
M112/2-Adenocarcinoma Endometrioides G1 H-ferritin(AlexaF488), HO-1(TRITC),VEGF(AlexaF647)
H-ferriti
HO-1
VEGF
A2780,AD2780 – Ovarian cancer cell line Kontrol HUVEC – Human Umbilical Vein Endothelial Cells
HUVEC
A2780
Kezeletlen tumorsejtek HO-1 termelése
Kezeletlen tumorsejtek VEGF expressziója
Kezeletlen sejtek HO-1, VEGF termelése
HO-1 RT-PCR
VEGF ELISA
VEGF(pg/mL/mg protein)
HO-1/18S copy number
0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
250 200 150 100 50 0
HUVEC
A2780
HUVEC
A2780
A sejtkultúrák HO-1 expressziója hem kezelés hatására
HUVEC
A2780
Sejtkultúrák VEGF expressziója hem kezelés hatására
A2780 HUVEC
5µM hem kezelés VEGF ELISA
800 700
VEGF (pg/mL/mg protein)
3,5 HO-1/18S copy number
HO-1 RT-PCR
3
600
2,5
500
2
400
1,5
300
1
200
0,5
100
0
0 HUVEC
A2780
HUVEC
A2780
Hemoxigenase-1 indukció
Kezelés: 4h 1%-os mediumban.
Doxorubicin
A doxorubicin (C27H29NO11) citosztatikus hatású antraciklin-glikozid. Ismeretes, hogy az antraciklinek az eukarióták számos biokémiai és biológiai funkcióját befolyásolják, a doxorubicin citotoxikus és/vagy antiproliferatív tulajdonsága mégsem tisztázott teljesen. Amikor a vegyület bekerül a sejtbe, elsősorban annak kromatin állományához kötődik. A doxorubicin komplexet képez a DNS-sel és a bázispárok közötti interkaláció révén meggátolja a DNS és az RNS szintézist az osztódási ciklus „S” fázisában. A fenti hatásmechanizmus mellett szabadgyökök képződését segíti, amely citotoxikus és a legkomolyabb mellékhatások egyik oka. Például Myocardiopathia
A kemoterápia hatása a különböző sejtvonalak túléléseire
Életképesség-Doxo kezelés 1 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
A2780 HUVEC
0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM 3% Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Triton
Kezelés: 16h 1% FBS tart. DMEM-ben illetve CM199-ben, utána MTT assay
Doxorubicin dózisgörbe A2780 sejtvonalon
VEGF(pg/mL/mg protein)
400 350 300 250 200 150 100 50 0 0nM Doxo
2nM Doxo
5nM Doxo
10nM Doxo
25nM Doxo
50nM Doxo
A VEGF és az életképesség alakulása Doxorubicin kezelés hatására A2780 és HUVEC sejtkultúrákon
HUVEC
A2780 250
450 400 350 300 250 200 150 100 50 0
200
VEGF
150
VEGF
%
100
%
50 0
0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo
Kezelés: 16h 1%-os médiumban Három mérés átlaga
0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo
Vasular endothelial growth factor Quantikine ELISA
VEGF(pg/mL)/mg protein
350 300 250 200
A2780
150
HUVEC
100 50 0 0nM 2nM 5nM 10nM 25nM 50nM 2µM 5µM 10µM 25µM 50µM Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo Doxo
Kezelés: 16h 1% FBS tart. DMEM-ben illetve CM199-ben
Hemoxigenase-1 aktivitás a sejtkultúrákon:
HO-1 aktivitás
Pmol/h/ mg protein
250 200 150
A2780
100
HUVEC
50 0 0nM Doxo
2nM Doxo
5nM Doxo
10nM 25nM 50nM Doxo Doxo Doxo
2µM Doxo
5µM Doxo
10µM Doxo
Kezelés: 16h 1% FBS tart. DMEM-ben illetve CM199-ben
Biokémia markerek és életképesség a dózis függvényében A2780
700 600 500 aktivitás
400 VEGF
300 Életk.%
200 100 0 0nM Doxo
2nM Doxo
5nM Doxo
10nM Doxo
25nM Doxo
50nM Doxo
2µM Doxo
5µM Doxo
10µM Doxo
25µM Doxo
50µM Doxo
Doxorubicin kezelés 16-120 óra VEGF
VEGF(pg/mL/mg protein)
A2780-VEGF ELISA
600 500 400
0h
300
16h
200
120h
100 0 NK
2µM Doxo
2µM Doxo + 20µM DF
2µM Doxo + 20µM DFC
Az életképesség alakulása Doxorubicin és Desferal valamint Desferricoprogen együttes kezelésénak hatására
HUVEC
A2780 0,25
1,4
0,2
1 2µM Doxo
0,8
2µM Doxo + 20µM DF
0,6
2µM Doxo + 20µM DFC
0,4
OD-570nm
OD-570nm
1,2
2µM Doxo
0,15
2µM Doxo + 20µM DF
0,1
2µM Doxo + 20µM DFC
0,05
0,2 0
0
0.nap
1.nap
3.nap
5.nap
0.nap
1.nap
3.nap
5.nap
Konklúzió
HO-VEGF biokémiai markerek tumor biológiai expressziója HO-1,VEGF indukálhatósága fiziológiás stimulusokkal HO-1, VEGF indukálhatósága onkoterápiás beavatkozás során
