VALIDASI METODE ANALISIS PADA CAMPURAN EUGENOL DAN METIL SALISILAT DALAM SEDIAAN KRIM MEREK X MENGGUNAKAN METODE KLT-DENSITOMETRI SKRIPSI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

VALIDASI METODE ANALISIS PADA CAMPURAN EUGENOL DAN METIL SALISILAT DALAM SEDIAAN KRIM MEREK “X” MENGGUNAKAN METODE KLT-DENSITOMETRI

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Ilmu Farmasi

Oleh: Dhimas Bayu Kinasih NIM: 088114180

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i


ii


iii


Halaman Persembahan

Hidup itu pilihan.... Yang harus kita tentukan arah dan tujuannya... Dio has Belissimo piano nella mia vita, e’ credo io Aku persembahkan karya ku ini untuk: Papa dan mama ku tercinta beserta kakak dan adikku Almamaterku tercinta Universitas Sanata Dharma

iv


v


vi


PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala perlindungan dan berkat yang telah diberikan sehingga skripsi berjudul “Validasi Metode Analisis Pada Campuran Eugenol dan Metil Salisilat dalam Sediaan Krim Merek “x” Menggunakan Metode KLT-Densitometri” yang disusun untuk memenuhi persyaratan memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S.Farm.) dapat dikerjakan dengan baik dan lancar. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini tidak terlepas dari berbagai pihak. Kesempatan ini penulis pergunakan untuk mengungkapkan rasa terima kasih kepada: 1.

Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku dekan Universitas Sanata Dharma yang telah mengijinkan penulis menjalankan pembelajaran selama masa studi.

2.

Jeffry Julianus, M.Si., selaku Dosen Pembimbing Skripsi dan Dosen Pembimbing Akademik yang telah mendampingi dan memberikan saran selama pembuatan tugas akhir ini.

3.

Lucia Wiwid Wijayanti, M.Si., selaku dosen penguji yang bersedia memberikan waktu untuk diskusi serta kritik dan saran selama penyusunan skripsi.

4.

Dra. M. M. Yetty Tjandrawati, M.Si., selaku dosen penguji yang telah memberikan saran dan kritik selama penyusunan skripsi.

vii


5.

Mas Bimo, Mas Parlan, dan Mas Kunto selaku staff laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah membantu penulis dalam pengerjaan penelitian di laboratorium.

6.

Segenap dosen dan karyawan atas ilmu yang diberikan.

7.

A.J. Bambang Budiono, E. Ambar Setyaningsih, Purwaningtyas Permata Sari dan Intan Kurnia Christiani yang selalu memberikan semangat dan doa nya kepada penulis.

8.

Vica dan Seco sebagai sahabat dan rekan kerja yang telah menyediakan waktu untuk memberikan saran dan kritik baik dalam hal penyusunan tugas akhir maupun hal-hal lainnya serta bekerja bersama di laboratorium.

9.

Christiana Lambang Kristanti yang selalu mendukung penulis dalam pembuatan tugas akhir ini, terutama di saat penulis sedang kehilangan semangat.

10. Teman-teman FST dan FKK 2008 yang selalu menyemangati penulis dalam pembuatan tugas akhir ini. 11. Tante Usi, Satya, Brian, Kak Cos, Aga, Mbak Dju, Cici, yang selalu memberikan semangat dan penghiburan selama ini. 12. Happy, Velly, Paul, Adi yang selalu bersedia untuk berdiskusi. 13. Seluruh teman, baik di Fakultas Farmasi maupun teman-teman lain atas dukungannya. 14. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir ini dengan baik.

viii


Penulis menyadari bahwa tugas akhir ini belum sempurna dan masih banyak kekurangan sehingga penulis berharap kritik dan saran dari semua pihak. Akhir kata, penulis berharap semoga tugas akhir ini dapat bermanfaat bagi semua pihak terutama di bidang ilmu Farmasi.

Penulis

ix


DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL...................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .........................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN.....................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................

iv

PERNYATAAN KEASLIAN PENULIS ...................................................

v

LEMBAR PERNYATAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA .........

vi

PRAKATA..................................................................................................

vii

DAFTAR ISI...............................................................................................

x

DAFTAR TABEL.......................................................................................

xiv

DAFTAR GAMBAR ..................................................................................

xv

DAFTAR LAMPIRAN...............................................................................

xvii

INTISARI....................................................................................................

xix

ABSTRACT................................................................................................

xx

BAB I PENGANTAR .................................................................................

1

A. Latar Belakang .....................................................................................

1

1.

Rumusan Permasalahan ................................................................

4

2.

Keaslian Penelitian........................................................................

4

3.

Manfaat Penelitian ........................................................................

5

B. Tujuan Penelitian .................................................................................

5

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA..........................................................

6

A. Eugenol ..........................................................................................

6

B. Metil Salisilat ..................................................................................

8

x


C. Krim ................................................................................................

11

D. Kromatografi Lapis Tipis Densitometri ..........................................

15

a. Kromatografi Lapis Tipis ............................................................

15

b. Fase Diam ..................................................................................

16

c. Fase Gerak ..................................................................................

18

d. Penotolan sampel ........................................................................

18

e. Pengembangan.............................................................................

19

f. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif...............................................

19

g. Densitometri................................................................................

20

E. Validasi Metode Analisis………………………………………......

21

a. Selektivitas (selectivity)………………………………………...

23

b. Ketepatan (accuracy)…………………………………………. .

24

c. Ketelitian (precision)…………………………………………...

25

d. Linearitas (linearity)…………………………………………....

26

e. Rentang (range)………………………………………………...

27

f. Batas deteksi (limit of detection)……………………………. ....

27

g. Batas kuantifikasi (limit of quantification)…………………... ..

28

i. Ketangguhan metode…………………………………………....

28

j.Kekuatan (robustness)…………………………………………...

28

F. Landasan Teori ................................................................................

29

G. Hipotesis .........................................................................................

30

BAB III METODOLOGI PENELITIAN....................................................

31

A. Jenis dan Rancangan Penelitian......................................................

31

xi


1. Variabel Penelitian ................................................................

31

2. Variabel bebas .......................................................................

31

3. Variabel terkendali ................................................................

31

4. Variabel pengacau terkendali ................................................

31

B. Definisi Operasional .......................................................................

32

C. Bahan Penelitian .............................................................................

32

D. Alat Penelitian ................................................................................

33

E. Tata Cara Penelitian ........................................................................

33

1. Pembuatan Fase Gerak ...........................................................

33

2. Penjenuhan Chamber..............................................................

33

3. Pengaktifan fase diam.............................................................

34

4. Pembuatan larutan baku tunggal asam salisilat ......................

34

5. Pembuatan larutan baku tunggal eugenol ...............................

34

6. Pembuatan larutan baku campuran asam salisilat dan eugenol .................................................................................. 35 7. Penetapan panjang gelombang pengamatan ...........................

35

8. Penetapan kurva baku asam salisilat dan eugenol dan pengamatan nilai Retardation Factor (Rf) asam salisilat dan eugenol ...........

36

9. Validasi Metode ........................................................................

36

10. Preparasi sampel…………………………………………………. 37 F. Analisis hasil ...................................................................................

38

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................

40

A. Preparasi Sampel..................................................................................

40

xii


B. Fase Gerak ...........................................................................................

46

C. Pembuatan Larutan Baku .....................................................................

47

D. Penentuan Panjang Gelombang Pengamatan Asam Salisilat dan Eugenol 48 E. Analisa Kualitatif ................................................................................

49

F. Penetapan Kurva Baku Asam Salisilat dan Eugenol ...........................

51

G. Validasi Metode……………………………………………………….

54

1. Selektifitas...................................................................................

55

2. Uji Perolehan Kembali (Recovery) .............................................

56

3. Presisi……………………………………………………………… 57 4. Linearitas………………………………………………………….. 59 5. Rentang…………………………………………………………….. 59 BAB V KESIMPULAN..............................................................................

60

Kesimpulan .................................................................................................

60

Saran.......................................................................................................... .

61

DAFTAR PUSTAKA .................................................................................

62

LAMPIRAN................................................................................................

66

BIOGRAFI PENULIS ...............................................................................

106

xiii


DAFTAR TABEL Tabel I.

Tata Nama Lempeng KLT...................................................

16

Tabel II.

Nilai Indeks Polaritas Pelarut .............................................

17

Tabel III.

Elemen Data yang Dibutuhkan untuk Validasi Metode Analisis………………………………………………… ....

Tabel IV.

Kriteria Penerimaan Akurasi pada Konsentrasi Analit yang Berbeda .......................................................................

Tabel V.

21

24

Kriteria Penerimaan Presisi pada Konsentrasi Analit yang Berbeda................................................................................

25

Tabel VI.

Konsentrasi Asam salisilat vs AUC ....................................

53

Tabel VII.

Konsentrasi Eugenol vs AUC..............................................

54

Tabel VIII.

Perbandingan Nilai Resolusi dan Nilai Rf pada Baku Asam Salisilat dan Eugenol………………………………….......

56

Tabel IX.

Data % KV Asam Salisilat Tunggal……………………….

59

Tabel X.

Data % KV Eugenol Tunggal..............................................

59

Tabel XI.

Data % KV Campuran Asam Salisilat-Eugenol……………

59

xiv


DAFTAR GAMBAR Gambar 1.

Struktur Eugenol..................................................................

6

Gambar 2.

Struktur Metil Salisilat ........................................................

9

Gambar 3.

Struktur silika gel ................................................................

15

Gambar 4.

Interaksi hidrogen antara gugus silanol dengan air membentuk lapisan air multilayer .......................................

16

Gambar 5.

Alat densitometri .................................................................

20

Gambar 6.

Simulasi pemisahan peak ....................................................

22

Gambar 7.

Reaksi hidrolisis metal salisilat menjadi asam salisilat .......

42

Gambar 8.

Reaksi pembentukan garam natrium eugenol......................

43

Gambar 9.

Densitogram pemanasan sampel selama 1 jam ...................

44

Gambar 10.


44

Gambar 11.


45

Gambar 12.


45

Gambar 13.

Reaksi pembentukan eugenol dari garam natrium eugenol..

46

Gambar 14.

Profil spectra baku analit………………………………… .

49

Gambar 15.

Densitogram baseline, baku asam salisilat, baku eugenol dan baku campuran asam salisilat dan eugenol…………………… ..

Gambar 16.

51

Gambar bagian non polar dari eugenol dan asam salisilat……….....................................................................

52

Gambar 17.

Kurva baku hubungan konsentrasi asam salisilat vs AUC ..

54

Gambar 18.

Kurva baku hubungan konsentrasi eugenol vs AUC……...

55

xv


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1.

Certificate of Analysis Baku Asam Salisilat .......................

67

Lampiran 2.

Certificate of Analysis Baku Eugenol .................................

68

Lampiran 3.

Data Pengambilan Bahan dan Perhitungan Konsentrasi Sebenarnya……………………………………………... ..

68

Lampiran 4.

Perhitungan Indeks Polaritas Fase Gerak ...........................

73

Lampiran 5.

Spektra Panjang Gelombang Asam Salisilat dan Eugenol dengan Perbandingan 1,5 : 1 pada Tiga Tingkat Konsentrasi Rendah, Sedang, dan Tinggi .............................................................

74

Lampiran 6.

Standar Operasional Prosedur (SOP) Analisis Kuantitatif .

75

Lampiran 7.

Densitogram Seri Kurva Baku Asam Salisilat Replikasi 1

76

Lampiran 8.


79

Lampiran 9.


81

Lampiran 10. Data Penentuan Kurva Baku Asam Salisilat .......................

83

Lampiran 11.Persamaan Regresi Linear dan Gambar Grafik Seri Kurva Baku Asam Salisilat .....................................................................

84

Lampiran 12. Densitogram Seri Kurva Baku Eugenol Replikasi 1 ...........

85


88


91

Lampiran 15. Data Penentuan Kurva Baku Eugenol .................................

93

Lampiran 16. Persamaan Regresi Linear dan Gambar Grafik Seri Kurva Baku Eugenol ...............................................................................

xvi

93


Lampiran 17. Densitogram Baku Tunggal Asam Salisilat (Validasi Metode Analisis) .................................................

94

Lampiran 18. Densitogram Baku Tunggal Eugenol (Validasi Metode Analisis).................................................

99

Lampiran 19. Densitogram Baku Campuran Asam Salisilat dan Eugnol gfg (Validasi Metode Analisis) .......................

103

Lampiran 20. Perhitungan % Recovery ………………………………......

107

xvii


INTISARI Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Densitometri merupakan metode yang dapat digunakan untuk penetapan kadar asam salisilat dan eugenol dalam sediaan krim topikal. Validasi metode dilakukan ntuk memberikan hasil yang dapat dipercaya sebelum dilakukan proses penetapan kadarnya. Penelitian ini merupakan penelitian non eksperimental-deskriptif. Asam salisilat dan eugenol dipisahkan dengan metode KLT dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak toluena : etil asetat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4), serta dengan jarak pengembangan sejauh 15 cm. Setelah pemisahan senyawa dengan metode KLT, kemudian dilakukan analisis kuantitatif dengan densitometer pada panjang gelombang 288 nm. Parameter validasi metode yang diteliti adalah selektivitas, linearitas, perolehan kembali, presisi, dan range. Hasil penelitian menunjukkan metode ini memiliki selektivitas dengan nilai resolusi 5,125. Nilai linearitas untuk asam salisilat dengan nilai r 2 0,9972 dan untuk eugenol dengan nilai r2 0,9972, nilai rata-rata % recovery 91,958% untuk asam salisilat dan 42,595% untuk eugenol, nilai %CV untuk level kadar rendah, sedang dan tinggi berturut-turut adalah 2,3360%; 0,9778%; 0,8958% untuk asam salisilat dan untuk eugenol berturut-turut adalah 1,0065%; 1,2278%; dan 0,8365%. Berdasarkan hasil tersebut maka metode KLT-Densitometri ini memiliki kemampuan yang kurang baik untuk memisahkan asam salisilat dan eugenol. Kata kunci: KLT-densitometri, eugenol, metil salisilat, asam salisilat, krim, validasi metode

xviii


ABSTRACT

A simple and rapid thin layer chromatography (TLC) densitometry method can be use to determine the concentration of methyl salicilate and eugenol in topical cream. To guarantees the method used provide reliable results, it is necessary to validate this methode. In this non-experimental descriptive research. Salicylate acid and eugenol in the sample are determined by indirectly measure method. The sampel extracts were spotted on TLC silica gel F254 plates, which were developed with a mixture of toluene, ethyl acetate and methanol 65,2 : 2,4 : 32,4 (v/v). Quantitative spots at 288 nm. Validation parameters are selectivity, linearity, recovery, precision and range. The result showed resolution value 5,125, linearity which is showed on coefficient of determination 0,9972 for salicylic acid and 0,9972 for eugenol mean of recovery is 91,958% for salicylate acid and 42,595% for eugenol, the %CV value for low, medium and high concentration respectively are 2,3360%; 0,9778%; 0,8958% for salicylate acid and 1,0065%; 1,2278%; dan 0,8365% for eugenol. Base from the result, this method have not good capabilities for separate salicylate acid and eugenol. Keyword : TLC Densitometry, salicylate acid, methyl salicylate, eugenol, cream, and validation method.

xix


BAB I PENGANTAR

A.

Latar Belakang

Masalah otot yang sering menyerang banyak orang merupakan hal yang sudah sering terjadi. Hal tersebut dapat membuat ketidaknyamanan dari penderita. Untuk meredakan masalah tersebut biasanya digunakan obat gosok ataupun sediaan topikal yang dapat memberikan sensasi panas ketika digunakan dan dapat meredakan rasa sakit yang terjadi pada otot. Salah satu sediaan topikal yang sering digunakan untuk meredakan masalah otot tersebut adalah krim merek “x” yang didalamnya terdapat senyawa eugenol dan metil salisilat serta menthol yang dapat berfungsi sebagai analgesik sehingga dapat meredakan rasa sakit tersebut. Eugenol dan metil salisilat dapat memberikan efek analgesik, oleh sebab itu eugenol dan metil salisilat biasa digunakan dalam sediaan krim analgesik. Eugenol merupakan senyawa aktif bahan alam yang merupakan kandungan utama dari minyak cengkeh. Senyawa tersebut merupakan golongan fenol yang tak larut air, namun akan berubah menjadi bentuk garam fenolik yang larut air oleh penambahan basa seperti natrium hidroksida (NaOH) dan kalium hidroksida (KOH). Metil salisilat dapat diklasifikasikan sebagai analgesik topikal yang biasa ditambahkan dalam krim analgesik untuk mengurangi rasa nyeri yang merupakan golongan fenol ester yang dapat mengalami hidrolisis pada esternya karena adanya kandungan air.

1

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 2

Perlakuan yang dilakukan selama preparasi sampel dapat mengubah metil salisilat dalam sediaan menjadi asam salisilat karena metil salisilat dapat mudah terhidrolisis dengan adanya air. Hal ini menimbulkan permasalahan tersendiri sehingga perlu dilakukan penetapan kadar pada produk tersebut. Pemanasan menggunakan refluks serta pemecahan sampel menggunakan natrium hidroksida dapat membuat ester yang ada dalam metil salisilat tersebut terhidrolisis menjadi garam karboksilat melalui reaksi saponifikasi. Penetralan kembali menggunakan asam klorida (HCl) dapat merubah garam karboksilat tersebut menjadi suatu asam, sehingga senyawa metil salisilat tersebut dapat berubah menjadi asam salisilat. Oleh karena itu pada proses penetapan kadar metil salisilat ini merupakan penetapan kadar secara tidak langsung. Dalam krim merek “x” tersebut terdapat kandungan eugenol sebesar 13,6 mg dan metil salisilat sebesar 102 mg. Penggunaan eugenol dan metil salisilat yang tidak sesuai dengan dosis yang dianjurkan dapat menyebabkan iritasi pada kulit. Adanya cahaya dapat membuat kestabilan dari eugenol akan berubah sedangkan suhu akan mempengaruhi kestabilan dari metil salisilat. Akibat dari perubahan kestabilan dari eugenol dan metil salisilat maka akan menyebabkan perubahan kadar yang ada pada sediaan tersebut. Sehingga efek farmakologi yang diharapkan bisa tidak tercapai. Untuk menjamin mutu dan kualitas dari sediaan krim merek “x” tersebut perlu dilakukan penetapan kadar eugenol dan metil salisilat yang ada dalam produk krim merek “x” tersebut. Sebelum dilakukan penetapan kadar perlu dilakukan terlebih dahulu tahapan validasi metode untuk


menjamin metode yang akan digunakan telah memenuhi parameter yang dipersyaratkan sehingga hasilnya dapat dipercaya. Validasi metode yang dilakukan pada penelitian ini menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Densitometri. Dipilih metode KLTdensitometri karena merupakan metode yang sederhana dalam pemisahan suatu senyawa

dalam

campuran.

Dibandingkan

dengan

kromatografi

kolom,

kromatografi lapis tipis memberikan fleksibilitas yang lebih besar, dalam memilih fase gerak. Selain itu pada KLT semua komponen dalam sampel dapat dideteksi (Rohman, 2009). Pada penelitian ini, penulis mengacu kepada penelitian yang dilakukan oleh Ediningtyas (2012) dengan judul Optimasi Metode KLT-Densitometri pada Penetapan Metil salisilat

dan Eugenol dalam sediaan krim merek “x”. Pada

penelitian tersebut pemisahan asam salisilat dan eugenol yang optimum diperoleh dengan menggunakan fase gerak toluena : etil asetat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4) dan fase diam silika gel 60 F254. Untuk dapat memastikan apakah metode tersebut dapat digunakan untuk penetapan kadar perlu dilakukan validasi metode analisis. Metode tersebut harus sesuai dengan persyaratan yang telah ditetapkan berdasarkan parameter-parameter validasi yakni selektivitas, presisi, linearitas, dan nilai perolehan kembali (recovery). 1.

Rumusan Permasalahan Berdasarkan latar belakang di atas, maka dapat disusun permasalahan

sebagai berikut: apakah metode KLT-Densitometri dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak toluena : etil asetat : matanol (65,2 : 2,4 : 32,4) memiliki


validitas yang baik untuk menetapkan kadar metil salisilat dan eugenol dalam sediaan krim merek “x” yang didasarkan pada parameter selektivitas, akurasi, presisi, linearitas, dan rentang? 2.

Keaslian Penelitian Berbagai penelitian mengenai eugenol dan metil salisilat telah banyak

dilakukan namun penelitian mengenai penetapan kadar eugenol dan metil salisilat dalam sediaan krim merek “x” dengan menggunakan metode KLT-Densitometri belum pernah dilakukan. Penelitian yang pernah dilakukan adalah Perbandingan Kadar Eugenol Minyak Atsiri Bunga Cengkeh ( Syzygium aromaticum (L.) Meer. & Perry) dari Maluku, Sulawesi, Jawa dan Sumatra dengan Metode GC-MS oleh Harnani (2010). Penelitian selanjutnya yang pernah dilakukan adalah High-pressure liquid chromatographic determination of acetylsalicylic acid, salicylic acid, diflunisal, indomethacin, indoprofen and indobufen yang dilakukan oleh Boll et al., (1981). Namun metode Kromatografi Lapis Tipis densitometri menggunakan fase gerak toluena : etil asetat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4) belum pernah dilakukan untuk menetapkan kadar eugenol dan metil salisilat dalam krim merek “x”.

3.

Manfaat Penelitian a. Manfaat praktis. Dapat memberikan pengetahuan mengenai kualitas

dan mutu sediaan krim topikal yang berhubungan dengan keamanan dan khasiat penggunaannya.


b. Manfaat teoritis. Dapat menjadi salah satu acuan dalam penetapan kadar eugenol dan metil salisilat dalam sediaan krim dengan menggunakan metode KLT-Densitometri.

B.Tujuan Penelitian Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui validitas metode KLTDensitometri dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak toluen : etil asetat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4) yang digunakan untuk analisis kadar metil salisilat dan eugenol dalam sediaan krim merek “x” yang didasarkan pada parameter selektivitas, akurasi, presisi, linearitas, dan rentang.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Eugenol Komponen utama yang dimiliki oleh minyak cengkeh adalah eugenol yang merupakan minyak atsiri yang berbentuk cairan tidak berwarna atau kuning pucat, memiliki bobot molekul 164,20 g/mol. Kelarutan senyawa ini baik dalam etanol, kloroform, eter, dan minyak lemak, namun sukar larut dalam air. Senyawa ini memiliki bau khas cengkeh yang kuat, menusuk dan rasa pedas. Bobot jenis eugenol antara 1,064 g/mL - 1,070 g/mL (Budavari, 2001). Nilai

dari

eugenol dalam etanol sebesar 406 dengan λmaks 231,5 nm dan 193 pada λmaks 282 nm (Clarke, 1971). Eugenol memiliki nama lain 2-metoksi-4-(prop-2enil)fenol yang akan menghitam apabila terpapar oleh udara atau dengan bau yang sangat kuat. Rumus bangun dari eugenol adalah C10H12O2 (The Department of Health, 2010a ).

Gambar 1. Struktur eugenol (The Department of Health, 2010a)

Eugenol selain memiliki harum yang khas juga memiliki aktifitas sebagai analgesik (Thompson et al., 1988). Selain digunakan untuk bahan penambah aroma, eugenol juga mempunyai sifat stimulant, anestetik lokal, karminatif, antiemetik, antiseptik dan antispasmodik yang digunakan dalam sabun, detergen, 6


pasta gigi, parfum dan produk farmasi. Penggunaan eugenol dalam produk farmasi di antaranya balsam untuk mengurangi rasa nyeri, obat sakit gigi, dan bahan campuran untuk menambal gigi (Nurdjannah, 2011). Senyawa ini dapat dengan mudah dipisahkan dari senyawa-senyawa bukan fenolat dengan mengekstraksi minyak daun cengkeh dengan larutan natrium hidroksida. Pengasaman larutan alkali menghasilkan kembali eugenol (Nurdjannah, 2011). Eugenol memiliki nilai konstanta Henry sebesar 0,2 Pa.m3/mol (EFSA, 2012). Volatilitas dapat menyebabkan senyawa organik memiliki tendensi untuk melepaskan diri dari fase cairan menuju fase gas. Parameter volatilitas mengacu pada hukum Henry. Hukum Henry tersebut adalah: H’ = KD = Dari persamaan tersebut diketahui bahwa hukum Henry (H) atau bisa disebut sebagai perbandingan distribusi (KD) dipengaruhi oleh perbandingan antara fase gas suatu senyawa (Xg) dengan fase cairan dari suatu senyawa (Xl). Semakin besar fase gas suatu senyawa dibandingkan dengan fase cairan suatu senyawa akan membuat nilai hukum Henry akan semakin besar, sehingga kemungkinan senyawa tersebut menguap dari suatu larutan akan semakin besar. Menurut persamaan itu pula nilai hukum Henry dapat diperkirakan apabila konsentrasi senyawa pada fase gas berada dalam keadaan seimbang dengan fase cairannya. Kategori volatilitas menurut hukum Henry adalah sebagai berikut:


1. Nonvolatile: nilai volatilitas berdasarkan hukum Henry sebesar H < 3 x 10-7 atm.m3/mol. 2. Semivolatile: nilai volatilitas diantara 3 x 10-7 atm.m3/mol < H < 10-5 atm.m3/mol. 3. Volatile: nilai volatilitas antara 10-5 atm.m3/mol < H < 10-3 atm.m3/mol. 4. Highvolatile: nilai volatilitas sebesar H > 10-3 atm.m3/mol (Mitra, 2003). Hasil konversi satuan dari atm menjadi pascal (1 atm = 101325 pa) adalah sebagai berikut: 1. Nonvolatile: 3 x 10-7 atm.m3/mol menjadi 0,03039 Pa.m3/mol. Nilai H < 0,03039 Pa.m3/mol. 2. Semivolatile: 10-5 atm.m3/mol menjadi 1,013 Pa.m3/mol sehingga nilai volatilitas antara 0,03039 Pa.m3/mol < H < 1,013 Pa.m3/mol. 3. Volatile: 10-3 atm.m3/mol menjadi 101,325 Pa.m3/mol sehingga nilai volatilitas antara 3,0398 Pa.m3/mol < H < 101,325 Pa.m3/mol. 4. Highvolatile: H > 101,325 Pa.m3/mol. Dari hasil konversi tersebut, eugenol dapat dimasukkan dalam kategori semivolatile karena memiliki nilai volatilitas sebesar 0,2 Pa.m3/mol. B. Metil Salisilat Metil salisilat biasa ditemukan dalam tanaman wintergreen, namun untuk saat ini keberadaan dari metil salisilat telah banyak ditemukan karena sudah dapat dibuat sintesis dari asam salisilat (Astuti, 2006). Zat tersebut terdiri dari tidak kurang 99,0% b/b dan tidak lebih dari 100,5 % b/b metil 2-hidroksibenzoat, tidak berwarna atau kuning terang, sangat


larut dalam air, larut dalam alkohol, minyak lemak dan minyak esensial (The Department of Health, 2010b ). Senyawa ini berbentuk cair tak berwarna, kekuningan atau kemerahan dengan bau khas seperti gandapura (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995). Nilai

dari metil salisilat dalam etanol sekitar 570 pada λmaks 238

nm dan 280 pada λmaks 306 nm, sedangkan nilai

dari asam salisilat dalam

0,5 N natrium hidroksida (NaOH) sebesar 260 pada λmaks 300 nm (Clarke, 1971) dan dalam etanol 95% sebesar 262 pada λmaks 300 nm (Ahlneck and Alderborn, 1988). Dalam dunia pengobatan, metil salisilat digunakan sebagai analgesik topikal yang biasa digunakan untuk menghilangkan rasa nyeri arthritis dan biasa digunakan pada produk-produk farmasetik maupun kosmetik. Biasanya pada produk-produk farmesetik ini, penggunaan metil salisilat ditambahkan dengan mentol untuk memberikan daya analgesik yang lebih kuat. Produk akhirnya bisa berupa balsam, krim, minyak atau salep (Rhodia, 2011).

Gambar 2. Struktur Metil Salisilat ( The Departement of Health, 2010b)

Keberadaan air dalam sediaan metil salisilat dapat menyebabkan senyawa ini mengalami hidrolisis pada bagian ester pada senyawa tersebut. Asam karboksilat yang terbentuk antara ester dengan natrium hidroksida (basa) dikenal


sebagai hidrolisis basa. Prosedur umum pembentukan asam karboksilat melibatkan refluks ester dalam NaOH 6M sampai campuran menjadi homogen, menunjukkan garam karboksilat larut dalam air, RCO2-. Pengasaman campuran selama work-up

menghasilkan asam karboksilat (Newton, 2011). Hidrolisis

dilakukan dengan menggunakan refluks ketika senyawa yang akan dihidrolisis tersebut merupakan senyawa yang volatil sehingga dapat meminimalkan jumlah ester yang hilang (Gearien and Grabowski, 1969). Ester yang mengalami hidrolisis biasanya akan berubah menjadi alkohol ataupun asam bebas oleh adanya air. Kecepatan dari reaksinya akan meningkat oleh adanya peningkatan suhu dan dengan penambahan katalis asam atau basa. Penambahan basa tidak hanya mengkatalis proses hidrolisis, tapi juga bereaksi dengan produk asam bebas yang terbentuk dan menghasilkan bentuk garam (Gearien and Grabowski, 1969). Metil salisilat yang dihidrolisis dengan larutan basa, maka setiap mol garam salisilat yang terbentuk setara dengan jumlah mol ester yang terhidrolisis. Penambahan basa NaOH akan mengubah metil salisilat menjadi bentuk garam natrium salisilat. Penggunaan asam

dibutuhkan untuk

membentuk senyawa asam bebas hasil dari reaksi hidrolisis dan menetralkan sisa basa yang tidak bereaksi.

C. Krim Krim adalah sediaan setengah padat berupa emulsi yang mengandung bahan obat terlarut dan terdiri dari tidak lebih dari 60% air (Syamsuni, 2006).


Sediaan krim biasa digunakan untuk kulit dan mukus membran yang bertujuan untuk melindungi, terapi dan mencegah penyakit (The Department of Health, 2010c). Sediaan semisolid ini diformulasi sebagai emulsi minyak dalam air atau air dalam minyak. Saat ini krim lebih diarahkan untuk produk minyak dalam air atau dispersi mikrokristal asam-asam lemak atau alkohol berantai panjang dalam air yang dapat dicuci dengan tujuan estetika dan untuk penggunaan kosmetika (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995). Vanishing creams, merupakan salah satu basis yang sering digunakan dalam formulasi produk farmasetik dan kosmetik (ScienceLab, 2005a). Komponen-komponen vanishing creams terdiri atas asam stearat, basa, poli-ol dan air. Basa yang digunakan akan membentuk sabun dengan asam stearat sehingga membentuk emulsi. Poli-ol seperti gliserin akan membuat krim menjadi lebih mudah disebarkan (spreadable) dan juga berperan sebagai humektan yang menjaga kelembaban krim dan pecahnya krim selama penyimpanan dalam container. Packaging krim dilakukan dalam screwtop jar atau tube yang juga berperan dalam mempertahankan kandungan air dalam krim (Bennett, 2012). Komposisi dari vanishing creams adalah Stearyl alcohol, Cetyl alcohol, Myristic alcohol, Dodecyl alcohol, Glycerol monostearate, Polyoxyl 20 cetostearyl ether, Sorbitol, Isopropyl palmitate, Methyl paraben, Propyl paraben, Captan, Water (ScienceLab, 2005b).


Pada emulsi, pelepasan minyak dari emulsi oil in water (O/W) dan pemisahan minyak dengan air menjadi dua fase merupakan suatu proses yang biasa disebut demulsifikasi (Rajaković and Skala, 2004). Teknik demulsifikasi dapat dilakukan dengan beberapa metode sebagai berikut: 1. Pemanasan,

pendinginan,

penambahan

surface

active

material,

penyaringan, penambahan fase luar secara berlebihan. Adanya pemanasan dapat meningkatkan

driving force molekul emulsi sehingga bisa

menggabungkan molekul yang sejenis. Pendinginan menyebabkan lepasnya air dari emulsi. Penambahan surface active material dapat menyebabkan koalesensi karena adanya perubahan tegangan antar muka. Penyaringan akan menyebabkan butir-butir fase intern akan menggumpal menjadi satu. Penambahan fase luar secara berlebihan akan menyebabkan memodifikasi viskositas dari fase luar. Ketika viskositas fase luar menurun maka ukuran droplet akan meningkat sehingga proses koagulasi akan lebih mudah terjadi (Anief, 2000). 2. Pengadukan mekanis dan sentrifugasi dengan kecepatan tinggi. Adanya pengadukan mekanis dapat merusak struktur molekul emulsifier atau merubah posisi molekul emulsifier yang sudah mapan pada lapisan antarmuka sehingga hal ini memungkinkan terjadinya penggabungan kembali molekul-molekul fase yang sejenis. Sentrifugasi berkecepatan tinggi akan menyebabkan fase yang mempunyai berat jenis lebih rendah mengapung dan yang memiliki berat


jenis lebih besar berada di bawah. Hal ini mengakibatkan terbentuknya lapisan minyak di bagian permukaan krim (Beall, 1984). 3. Radiasi microwave. Radiasi ini ditujukan untuk tipe emulsi W/O dengan tujuan untuk memisahkan air dari minyak. Ketika emulsi W/O dipanaskan dengan radiasi maka peningkatan suhu mengakibatkan penurunan viskositas dan koalesensi. Viskositas minyak yang merupakan fase luar sangat sensitif terhadap perubahan suhu. Ketika viskositas menurun, ukuran droplet akan meningkat. Suhu yang meningkat dan viskositas yang menurun akan membuat proses koagulasi lebih mudah terjadi (Fang, Chang, Lai, and Klaila, 1988). 4. Pengaliran listrik bertegangan. Proses ini dilakukan dengan mengaliri listrik bertegangan pada emulsi sehingga menimbulkan panas. Adanya panas akan meningkatkan pergerakan molekul, tabrakan antara molekul sejenis akan menyebabkan terpecahnya emulsi (Larson, Raghuraman, and Wiencek, 1994). 5. Penambahan magnetik ampifilik. Proses demulsifikasi ini hanya dapat digunakan untuk tipe emulsi O/W. Magnetik ampifilik terdiri dari 2 matriks yaitu hidrofilik (SiO2 dan Al2O3) dan lipofilik yang berukuran nano (carbon nanotubes dan nanofibers). Partikel ampifilik akan terdifusi pada permukaan droplet emulsi O/W. Keberadaan dari magnet nanohybrid akan menarik dan membawa droplet minyak untuk menghasilkan demulsifikasi yang sempurna sehingga akan memisahkan minyak dari air (Oder, 2005). 6. Penambahan senyawa kimia. Proses ini hanya digunakan untuk tipe emulsi O/W. Senyawa kimia yang ditambahkan dalam emulsi dapat memecah emulsi. Mekanismenya meliputi menyeimbangkan atau melawan tegangan antar


muka, menetralkan muatan pada surfaktan, menarik fase air dan membuat presipitasi

surfaktan.

Senyawa

kimia

yang

biasa

digunakan

untuk

demulsifikasi adalah asam kuat, basa kuat (Beall, 1984). D. Kromatografi Lapis Tipis-Densitometri 1. Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan teknik pemisahan campuran dengan menggunakan suatu plat fase diam yang nantinya fase diam tersebut akan secara seragam tersebar diatas permukaan plat tersebut yang kemudian fase gerak akan bergerak sepanjang fase diam karena pengaruh gaya kapiler pada pengembangan

menaik

(ascending)

atau

karena

gaya

gravitasi

pada

pengembangan secara menurun (descending) (Gandjar dan Rohman, 2007). Perbedaan antara kromatografi lapis tipis (KLT) dengan kromatografi kolom dalam hal ini kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) adalah teknik utama dalam pemisahan analit daripada fenomena fisik dalam hal ini adalah adsorbsi dan partisi. Pada KLT, fase diam terdiri dari lapisan tipis yang mengandung silika gel atau serbuk selulosa yang bersifat inert dan rigid. Pada KLT terdapat banyak variasi dari material pelapis, namun yang sering digunakan adalah silika gel. Silika gel merupakan adsorben yang penyebarannya seragam diatas plat yang banyak digunakan untuk KLT. Kromatografi lapis tipis dapat digunakan jika: a. Senyawa yang akan dianalisis bersifat nonvolatile atau semivolatil.


b. Senyawa yang dianalisis memiliki kepolaran tinggi, sedang maupun kepolaran rendah atau ionic. c. Sampel yang akan dianalisis harus secara berkelanjutan. d. Sampel yang akan dianalisis dapat merusak kolom dari kromatografi cair atau kromatografi gas (Deinstrop, 2007). 2. Fase Diam Fase diam yang sering digunakan adalah silika gel. Silika gel yang digunakan diberi pengikat dengan tujuan memberikan kekuatan pada lapisan. Biasanya telah ditambahkan oleh industri sehingga tidak perlu ditambahkan sendiri, diberi nama dengan logo silika gel G (Sastrohamidjojo, 2005). Struktur dari silika gel adalah sebagai berikut

Gambar 3. Struktur silika gel (Braithwaite dan Smith, 1999)

Lapisan ketebalan adsorben yang dianjurkan adalah antara 150 - 250 µm, setelah dikeringkan semalam pada udara biasa atau pada pengeringan oven pada suhu 1050 C selama 30 menit lalu siap untuk digunakan sebagai fase diam dalam metode KLT (Vogel, 1989). Pemanasan ini dilakukan untuk mengaktivasi silika yang akan digunakan sehingga silika tersebut dapat digunakan dengan baik sebagai fase diam. Dengan ini diharapkan air yang menutupi silika dapat hilang dan silika dapat aktif kembali ( Gandjar dan Rohman, 2007).


Gambar 4. Interaksi hidrogen antara gugus silanol dengan air membentuk lapisan air multilayer (Wall, 2005)

Fase diam yang dijual dipasaran memiliki tata nama yang berbeda-beda. Tata nama lempeng KLT yang dijual di pasaran adalah sebagai berikut ini Tabel I. Tata nama lempeng KLT (Gandjar dan Rohman, 2007) Singkatan / simbol Arti “Sil” Produk mengandung silika gel seperti Anasil Pengikat (lapisan halus) gipsum (CaSO4. H2O) G F atau UV 254 dan 366

Ditambahkan bahan yang berfluoresensi seperti seng silikat teraktivasi mangan Setelah simbol F atau UV, untuk menunjukkan panjang gelombang eksitasi senyawa berfosforisensi yang ditambahkan

3. Fase Gerak Fase gerak merupakan salah satu bagian yang penting dalam analisis pemisahan senyawa menggunakan KLT karena polaritas dari fase gerak dapat menentukan pemisahan. Oleh karena itulah perlu dilakukan pencarian terhadap komposisi dan jenis fase gerak yang digunakan sehingga dapat memberikan pemisahan yang baik. Fase gerak tersebut bisa didapatkan dari pustaka mengenai senyawa yang akan dianalisis baru kemudian di optimasi lagi komposisinya agar mendapat hasil pemisahan yang baik. Dapat berupa senyawa tunggal atau campuran dengan komposisi tertentu (Stahl, 1985).


Tabel II. Nilai Indeks Polaritas Pelarut Menurut Snyder, et al. (1997) Pelarut Indeks Nilai Eluotopik UV cut off Polarits (nm) Alumina C18 Silika Gel Heksana 0,1 0,01 0,00 195 Sikloheksana 0,2 0,004 200 Toluena 2,4 0,29 0,22 284 Tetrahidrofuran 4,0 0,45 3,7 0,53 212 Etil Asetat 4,4 0,58 0,48 256 Aseton 5,1 0,56 8,8 0,53 330 Metanol 5,1 0,95 1,0 0,7 205 Asetonitril 5,8 0,65 3,1 0,52 190 Dimetilformamida 6,4 7,6 268 Dimetilsulfoksida 7,2 0,62 268 Air 10,2 190

4. Penotolan Sampel Pemisahan yang optimal diperoleh dengan cara menotolkan sampel dengan ukuran bercak sekecil dan sesempit mungkin. Jika sampel yang digunakan terlalu banyak maka akan menurunkan resolusi. Penotolan dapat dilakukan dengan cara manual maupun otomatis dengan instrumen tertentu (Gandjar dan Rohman, 2007). Misalnya Camag Linomat 5 (Wall, 2005). Volume penotolan sampel yang digunakan biasanya adalah 0,1-0,5 mm3. Apabila lebih dari itu maka dibutuhkan waktu yang lebih lama untuk mengelusi sampel. Selain itu dapat membuat bercak yang dihasilkan menjadi melebar (Braithwaite, 1999). Penotolan sampel yang tidak tepat akan menyebabkan kromatogram memiliki puncak ganda dan menyebabkan bercak yang menyebar. Jika volume sampel yang ditotolkan lebih besar dari 2–10 µL maka penotolan harus dilakukan secara bertahap dengan dilakukan secara bertahap dan dilakukan pengeringan


terlebih dahulu sebelum kemudian dicelupkan ke dalam fase gerak (Gandjar dan Rohman, 2007). 5. Pengembangan Plat yang telah ditotol oleh sampel kemudian dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah jenuh oleh fase gerak. Tinggi fase gerak dalam bejana harus di bawah lempeng yang telah ditotol oleh sampel. Bejana kromatografi harus tertutup dengan rapat saat sedang mengelusi sampel. Penjenuhan bejana dilapisi dengan kertas saring. ada beberapa macam teknik melakukan pengembangan yakni menaik (ascending) dan menurun (denscending) melingkar dan mendatar (Gandjar dan Rohman, 2007). 6. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Metode KLT dapat digunakan untuk uji identifikasi suatu senyawa dalam campuran (sampel). Parameter yang digunakan adalah nilai Rf. Dua senyawa dikatakan identik jika memiliki nilai Rf yang sama jika diukur pada kondisi KLT sama. Setelah

pengembangan

sampel

akan

diperoleh

nilai

Rf

yang

menggambarkan migrasi relatif komponen senyawa terhadap pelarut dan berhubungan dengan koefisien distribusi komponen (Braithwaite, 1999). Nilai R f dapat dihitung dengan cara sebagai berikut: Rf Dalam analisis kuantitatif dengan metode KLT, nilai Rf diharapkan berada antara 0,2 dan 0,8 (Kowalska, 2003).


Analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan dua cara yakni mengukur bercak secara langsung pada lempeng dengan menggunakan ukuran luas atau dengan menggunakan teknik densitometri. Cara yang kedua adalah dengan cara mengerok bercak kemudian menetapkan kadar senyawa dalam sampel dengan metode analisis lain, misalnya metode spektrofotometri. Tetapi terdapat kelemahan pada cara kedua yakni dapat terjadi kesalahan dalam pemindaian bercak sehingga kadar yang diukur bukan merupakan kadar sebenarnya (Gandjar dan Rohman, 2007). 7. Densitometri Dasar dari densitometri adalah berkas radiasi eletromagnetik dari panjang gelombang tertentu ( biasanya UV dari 190-800 nm) yang bergerak mendeteksi bercak analit pada fase diam, di mana fase gerak diletakkan pada suatu wadah yang digerakan oleh motor. Kromatogram yang terbentuk sangat mirip dengan yang diperoleh dalam HPLC, biasanya menampilkan serangkaian puncak dengan baseline (Sastrohamidjojo, 2005). Densitometri

dapat

mendeteksi

lokasi

puncak

secara

otomatis,

mengoptimasi kondisi pengukuran luas bawah kurva, scanning seluruh totolan pada plat secara langsung, merekam spektra analit, scanning λ analit, kompensasi baseline otomatis untuk menghilangkan sinyal

palsu

yang disebabkan

oleh interfensi pada plat fase diam, kalibrasi, pelaporan data, dan penyimpanan data untuk perhitungan kembali (Sherma, 1996). Densitometer memiliki sumber cahaya, monokromator untuk memilih λ yang cocok, serta sistem yang dapat memfokuskan sinar pada lempeng (Gandjar dan Rohman, 2007).


Gambar 5. Alat Densitometri

E. Validasi Metode Analisis Validasi metode analisis merupakan suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya (Harmita, 2004). Prosedur validasi metode analisis digunakan untuk membuktikan bahwa metode analisis tersebut dapat memberikan hasil seperti yang diharapkan dengan kecermatan dan ketelitian yang memadai. Metode analisis instrumen merupakan metode yang terpilih dan memadai untuk mengantisipasi persoalan analisis yaitu sangat kecilnya kadar senyawa yang dianalisis (Mulja dan Suharman, 1995). Metode uji yang berbeda membutuhkan validasi yang berbeda. Kategori metode pengujian dengan validasi metode yang diperlukan adalah sebagai berikut, seperti yang juga dicantumkan dalam Tabel III (United States Pharmacopeial Convention, 2005).


Tabel III. Elemen Data yang Dibutuhkan untuk Validasi Metode Analisis Kategori II Karakteristik Kategori Kategori Kategori analisis I III IV Kuantitatif Batas Tes Ketepatan Ya Ya * * Tidak Ketelitian Ya Ya Tidak Ya Tidak Spesifitas Ya Ya Ya * Ya Batas Deteksi Tidak Tidak Ya * Tidak Batas Kuantitasi Tidak Ya Tidak * Tidak Linearitas Ya Ya Tidak * Tidak Rentang Ya Ya * * Tidak Keterangan : * tergantung dari masing-masing uji 1. Kategori I: metode analitik yang digunakan untuk penetapan kadar komponen utama dalam bahan baku atau bahan aktif (termasuk pengawet) dalam produk akhir sediaan farmasi; 2. Kategori II: metode analitik yang digunakan untuk penetapan ketidakmurnian dalam bahan baku atau bahan aktif atau hasil degradasi senyawa dalam produk akhir sediaan farmasi; 3. Kategori III: metode analitik yang digunakan untuk penetapan karakteristik penampilan obat (misalnya disolusi, pelepasan obat); 4. Kategori IV: metode analitik yang digunakan untuk uji identifikasi (United States Pharmacopeial Convention, 2005). Beberapa parameter yang harus dipertimbangkan dalam validasi metode analisis meliputi antara lain selektivitas/spesifisitas, ketepatan, ketelitian, linearitas, rentang, batas deteksi, batas kuantitasi, ketangguhan metode dan kekuatan (Harmita, 2004). 1. Selektivitas (selectivity)


Selektivitas suatu metode analisis adalah kemampuan untuk mengukur analit secara cermat dan seksama dengan adanya komponen yang mungkin ada dalam matrik sampel (Yuwono dan Indrayanto, 2005). Selektivitas sering dapat dinyatakan sebagai derajat penyimpangan metode terhadap sampel yang mengandung bahan yang ditambahkan berupa cemaran, produk degradasi, senyawa sejenis, dan senyawa asing lain (Harmita, 2004).

Gambar 6. Simulasi pemisahan peak

Gambar 7 merupakan suatu simulasi pemisahan puncak kromatografi antara dua kurva Gaussian identik, yang terpisah secara perlahan-lahan. Dapat dilihat bahwa nilai resolution factor (R) akan sesuai dengan diagram. Dimana nilai R = 0,75 kedua puncak masih berhimpit sekitar 65%, pada R = 1, kedua puncak masih berhimpit sekitar 27%, dan pada R=1,5 kedua puncak dapat dianggap telah akan mencapai baseline dimana kedua puncak hanya berhimpit sekitar 2% (Rouessac and Rouessac, 2007). Selektivitas pada metode kromatografi ditunjukkan melalui nilai resolusi (daya pisah) antara analit yang dituju dengan pengganggu lainya harus > 1,5 (Gandjar dan Rohman, 2007). Harga R > I,5 disebut baseline


resolution, yaitu pemisahan sempurna dari dua puncak dengan ukuran yang sama (Pecsok, Shield, Cairns and McWilliam, 1976). 2. Ketepatan (accuracy) Ketepatan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analisis dengan kadar analit yang sebenarnya. Biasanya dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan (Harmita, 2004). Akurasi biasanya didemostrasikan dengan menambahkan sejumlah tertentu analit yang diketahui kedalam matriks sampel dan ditentukan hasil terukurnya menggunakan prosedur analisis yang dilakukan (The British Pharmacopoeia Commission, 2011). Kriteria penerimaan akurasi ditentukan berdasarkan kadar analit, dinyatakan dalam persen (%) perolehan kembali, seperti yang tertera pada tabel IV: Berbeda

Tabel IV. Kriteria Penerimaan Akurasi pada Konsentrasi Analit yang

Kadar Analit (%)

Analyte Ratio

Unit

100 ≥ 10 ≥1 ≥ 0,1 0,01 0,001 0,0001 0,00001 0,000001 0,0000001

1 101 102 103 104 105 106 107 108 109

100 % 10 % 1% 0,1 % 100 ppm 10 ppm 1 ppm 100 ppb 10 ppb 1 ppb

Mean Recovery (%) 98 – 102 98 – 102 97 – 103 95 – 105 90 – 107 80 – 110 80 – 110 80 – 110 60 – 115 40 -120


3. Ketelitian (precision) Pesisi atau keseksamaan asalah ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual dari rata-rata jika prosedur ditetapkan secara berulang pada sampelsampel yang diambil dari campuran yang homogen (Harmita, 2004). Presisi biasanya dinyatakan dalam coefficient of variation (CV). Suatu metode dapat dinyatakan memiliki presisi yang baik apabila memiliki CV < 2 % tetapi kriteria ini fleksibel tergantung dari kondisi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan kondisi laboratorium (Harmita, 2004). Ketelitian adalah derajat kesesuaian antara hasil uji individual yang diperoleh dari pengambilan sampel yang berulang suatu sampel yang homogen dengan menggunakan suatu metode analisis. Presisi umumnya dinyatakan dengan coefficient of variation (CV) atau standar deviasi relatif (RSD), seperti yang tertera pada tabel V (United States Pharmacopeial Convention, 2005): Tabel V. Kriteria Penerimaan Presisi pada Konsentrasi Analit yang Berbeda

Kadar Analit (%) 100 10 1 0,1 0,01 0,001 0,0001 0,00001 0,000001 0,0000001

Analyte Ratio 1 101 102 103 104 105 106 107 108 109

Unit 100 % 10 % 1% 0,1 % 100 ppm 10 ppm 1 ppm 100 ppb 10 ppb 1 ppb

CV (%) 1,3 1,8 2,7 3,7 5,3 7,3 11 15 21 30


4. Linearitas (linearity) Linearitas merupakan kemampuan metode untuk memberikan respon yang proporsional terhadap konsentrasi analit di dalam sampel (Snyder et al., 1997). Penggambaran linearitas secara visual biasanya dilakukan dengan memplotkan signal yang muncul sebagai fungsi dari konsentrasi analit. Apabila terdapat hubungan yang linier, hasil uji harus dievaluasi dengan bantuan metode statistik, misalnya dengan perhitungan garis regresi (The British Pharmacopoeia Commission, 2011). Regresi liner merupakan suatu metode statistik untuk mengevaluasi bagaimana pengaruh satu atau lebih variabel bebas (predictor) pada satu continuous dependent variable (respon) melalui suatu hubungan linear. Regresi linier melibatkan suatu garis lurus atau fungsi linier. Garis ini merupakan estimasi dari data sampel. Analisis dengan regresi linier dilakukan dengan menggambarkan garis yang tepat diantara titik-titik data. Dari sini kemudian akan diketahui kemiringan garis dan nilai dari y-interceptnya yang kemudian dapat digunakan untuk perhitungan, dirumuskan dengan y=Bx+A. Dimana y adalah variabel tergantung, B adalah nilai slope (kemiringan) garis, x adalah variabel bebas dan A adalah y-intercept (De Muth, 1999). Hubungan antara garis linear dengan regresi linear disebut sebagai koefisien determinasi (r2). Koefisien determinasi menggambarkan kedekatan titik dengan garis linear, semakin dekat titik dengan garis berarti semakin dekat hubungan korelasinya. Nilai r2 yang medekati satu maka data-data tersebut akan semakin linear (De


Muth, 1999). Suatu metode memiliki linearitas yang baik jika nilai koefisien determinasi (r2) ≥ 0,997 (Chan, 2004). Menurut De Muth (1999) linearitas ditunjukkan dengan nilai koefisien determinasi (r2) dan koefisien korelasi (r) yang didapat dari perhitungan regresi linear. Dimana koefisien determinasi (r2) menunjukkan hubungan antara garis linear dengan respon dan koefisien korelasi (r) menunjukkan hubungan antara konsentrasi dan respon pengukuran. Semakin dekat nilai respon dengan garis linear, semakin linear data tersebut dan semakin kuat hubungan korelasinya. Suatu metode dikatakan memiliki linearitas yang baik apabila memiliki nilai r2 ≥ 0,997 (Chan, 2004).

5. Rentang (range) Rentang dalam suatu metode analisis merupakan interval antara konsentrasi analit tertinggi dan konsentrasi analit terendah yang memenuhi persyaratan linearitas, akurasi, dan presisi. Dalam suatu assay biasanya menggunakan rentang tidak kurang dari 80%-120% dari konsentrasi sampel dan untuk penetapan keseragaman kadar biasanya digunakan rentang tidak kurang dari 70%-130% (The British Pharmacopoeia Commission, 2011). 6. Batas deteksi (Limit of Detection) Batas deteksi merupakan parameter uji batas yang diartikan sebagai jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blangko (Harmita, 2004).


7. Batas kuantifikasi (Limit of Quantification) Batas kuantifikasi (LOQ) merupakan parameter dari suatu quantitative assay untuk level rendah dari komponen didalam sampel, biasanya digunakan untuk penentuan impurities dan/atau produk yang telah terdegradasi. LOQ diartikan sebagai batas terendah dari jumlah analit dalam sampel yang masih dapat ditentukan secara kuantitatif dan memberikan akurasi dan presisi yang baik. (The British Pharmacopoeia Commission, 2011). Menurut Harmita (2004), Batas kuantitasi merupakan parameter pada analisis renik dan diartikan sebagai kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama. 8. Ketangguhan metode Ketangguhan metode adalah derajat ketertiruan hasil uji yang diperoleh dari analisis sampel yang sama dalam berbagai kondisi uji normal, seperti laboratorium, analisis, instrumen, bahan pereaksi, suhu, hari yang berbeda, dll. Ruggedness biasanya dinyatakan sebagai tidak adanya pengaruh perbedaan operasi atau lingkungan kerja pada hasil uji (Harmita, 2004). 9. Kekuatan (robustness) Robustness suatu prosedur analisis adalah ukuran kapasitas untuk tetap tidak terpengaruh oleh variasi kecil tapi disengaja dalam parameter metode dan memberikan indikasi keandalannya selama penggunaan normal. Biasanya ditunjukkan dengan melakukan perubahan kecil yang disengaja pada salah satu parameter operasi metode, menganalisis sampel dan


membandingkan hasilnya dengan yang diperoleh menggunakan metode yang sesuai prosedur (The British Pharmacopoeia Commission, 2011). Untuk memvalidasi kekuatan suatu metode perlu dibuat perubahan metodologi yang kecil dan terus menerus dan mengevaluasi respon analitik dan efek presisi dan akurasi. Identifikasi sekurang-kurangnya 3 faktor analisis yang dapat mempengaruhi hasil bila diganti atau diubah. Faktor orisinal ini dapat diidentifikasi sebagai A, B, dan C. Perubahan nilai faktor-faktor ini dapat diidentifikasi dengan a, b, dan c. Lakukan analisis pada kondisi yang telah disebutkan pada pemeriksaan ketangguhan (Harmita, 2004).

F. Landasan Teori Krim merek “x” merupakan salah satu obat yang sering digunakan oleh masyarakat sebagai analgesik untuk meredakan nyeri sendi, keseleo dan kram otot. Dalam setiap gram produk krim merek “x” tersebut mengandung senyawa aktif metil salisilat 102 mg, eugenol 13,6 mg dan mentol 54,4 mg. Metil salisilat dan eugenol merupakan senyawa golongan fenol yang terdapat dalam produk tersebut. Keduanya memiliki kelarutan yang baik dalam etanol, eter dan kloroform serta mempunyai serapan maksimum pada daerah UV yang berdekatan yaitu 300 nm dan 282 nm. Berdasarkan sifat fisika dan kimia senyawa, dan jumlah komponen zat aktif yang lebih dari satu maka analisis untuk menetapkan kadar dapat dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT)densitometri. Eugenol memiliki sifat yang merupakan semivolatil. Hal ini dapat dilihat dari nilai konstanta Henry yang sebesar 0,2 Pa.m3/mol.


Metode KLT dapat memisahkan beberapa campuran senyawa karena adanya perbedaan interaksi antara senyawa-senyawa tersebut dengan fase diam dan fase gerak yang digunakan. Metode KLT ini masih dapat digunakan untuk senyawa yang memiliki sifat semivolatil sehingga untuk menetapkan kadar dari eugenol yang besifat semivolatil masih dapat digunakan. Bercak analit hasil pemisahan KLT dapat dianalisis kuantitatif dengan Densitometer. Parameter validasi metode didasarkan antara lain pada selektivitas, nilai perolehan kembali, presisi dan linearitas. Dalam hal ini, selektivitas akan dianalisis berdasarkan perbandingan nilai Rf kedua campuran, yang ditunjukkan dengan nilai resolusi > 1,5, linearitas dianalisis berdasarkan koefisien determinasi (r2) ≥ 0,997, untuk asam salisilat perolehan kembali dianalisis berdasarkan mean % recovery antara 90-107% dan presisi dianalisis berdasarkan CV (Coefficient of Variation) ≤ 1,8%, sedangkan untuk eugenol ulangan standart dianalisis berdasarkan mean % recovery antara 90-107% dan presisi dianalisis berdasarkan CV ≤ 2,7%. G. Hipotesis Berdasarkan landasan teori di atas, dapat disusun hipotesis bahwa metode analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT)–Densitometri yang dikembangkan untuk analisis kadar metil salisilat dan eugenol dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak toluen : etil asetat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4) memiliki validitas yang baik untuk parameter selektivitas, akurasi, presisi, linearitas, dan rentang


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini merupakan jenis penelitian non eksperimental deskriptif, karena tidak dilakukan perlakuan pada subjek uji krim analgesik merek “x”. B. Variabel Penelitian 1. Variabel bebas Variabel bebas dalam penelitian ini adalah metode yang digunakan untuk melakukan analisis yaitu sistem KLT yang telah dioptimasi dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak toluena : etil asetat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4). 2. Variabel tergantung Variabel tergantung pada penelitian ini adalah parameter validasi yaitu selektivitas, akurasi, presisi, linearitas, dan rentang. 3. Variabel pengacau terkendali a. Pelarut, untuk mengatasinya digunakan pelarut pro analysis (p.a) yang memiliki kemurnian tinggi. b. Senyawa baku yang digunakan, untuk mengatasinya digunakan senyawa baku asam salisilat untuk sintesis dan senyawa baku eugenol untuk analisis.

30


c. Paparan cahaya terkait dengan sifat eugenol yang fotosensitif, untuk mengatasinya pada saat preparasi semua peralatan gelas yang akan digunakan dilapisi dengan aluminium foil. C. Definisi Operasional 1.

Krim merek “x” adalah sedian krim topikal dalam kemasan tube ukuran 5 gram mengandung senyawa aktif metil salisilat sebanyak 102 mg, eugenol sebanyak 13,6 mg dan mentol sebanyak 54,4 mg dengan nomor Batch 1K3161.

2.

Sistem KLT yang digunakan dalam penelitian adalah fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak toluena : etil asetat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4).

3.

Kadar metal salisilat, asam salisilat dan eugenol dinyatakan dalam part per million (ppm).

4.

Parameter validasi yang digunakan yaitu selektivitas, akurasi, presisi, linearitas, dan rentang. D. Bahan Penelitian Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah asam slisilat for

synthesis (E. Merck, kemurnian 99,8%), eugenol for R&D (Sigma-Aldrich, kemurnian 99%), metanol p.a (E. Merck), etanol p.a (E. Merck), toluen p.a (E. Merck), etil asetat p.a (E. Merck), NaOH 6M, HCl 6M, kloroform teknis (Bratachem), Krim merk X (netto : 5 gram, No. batch : 1K3161) , plat KLT silika gel 60 F254 (E. Merck).


E. Alat Penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat komputer merk Dell B6RDZ1S Connexant System RD01-D850 A03-0382 JP France S.A.S, printer HP Deskjet D2566 HP-024-000 625 730, seperangkat alat densitometer (CAMAG TLC Scanner 3 CAT. No. 027.6485 SER. No.160602), autosampler (CAMAG Linomat 5 CAT. No. 027.7808. SER. No. 170610), UV cabinet (CAMAG), perangkat lunak WinCats (V.1.4.4), chamber (DESAGA, Germany dimensi 23x23x10 cm), Oven (Marius Instrumenten, postbus 7018-3502 Utrecht, Hollantlaan 18-3526 Am utrech), mantel heater, pendingin alin, termometer, indikator pH, kertas saring, mikropipet 20 -200 µL dan 100-1000 µL (Socorex ACURA 825), makropipet 1-10 mL (Socorex ACURA 825), neraca analitik (Scaltec SBC 22 max 60/210 g; min 0,001 g; d=0,01/0,1mg; e=1mg), dan seperangkat alat gelas (Pyrex). F. Tata Cara Penelitian 1.

Pembuatan Fase Gerak Fase gerak yang digunakan adalah fase gerak yang telah didapat dari hasil optimasi pada penelitian sebelumnya yaitu toluena : etil aseat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4). Fase gerak ini dibuat sebanyak 25 mL menggunakan prinsip volume portion dengan teknik doubling (Shimadzu corporation, 2012).

2.

Penjenuhan Chamber Chamber dimensi 23x23x10 cm diisi dengan fase gerak yang telah dibuat kemudian dijenuhkan dengan bantuan indikator kertas saring. Kondisi


chamber dikatakan telah terjenuhkan apabila seluruh kertas saring telah terbasahi oleh fase gerak. 3.

Pengaktifan Fase diam Fase diam berupa plat KLT silika gel 60 GF254 dipanaskan dalam oven selama 30 menit dengan suhu optimal 1200C (Braithwait and Smith, 1999).

4.

Pembuatan larutan baku tunggal asam salisilat a. Pembuatan larutan stok asam salisilat 20 ppb. Serbuk baku asam

salisilat ditimbang sebanyak 0,2004 gram kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL. Serbuk tersebut kemudian dilarutkan dengan etanol p.a hingga tanda dan digojog agar homogen. b. Pembuatan seri larutan baku asam salisilat 816; 884, 952, 1020; 1088, 1156 dan 1224 ppm. Larutan stok asam salisilat 20 ppb diambil sebanyak 204, 221, 238, 255, 272, 289 dan 306 μL menggunakan mikropipet kemudian masingmasing dimasukkan ke dalam labu takar 5 mL. Larutan tersebut diencerkan dengan etanol p.a hingga tanda dan digojog agar homogen. Seri larutan baku dibuat sebanyak tiga replikasi. 5.

Pembuatan larutan baku tunggal eugenol a. Pembuatan larutan stok eugenol 20 ppb. Larutan baku eugenol diambil

sebanyak 189 μL dengan mikropipet kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL dan dilarutkan dengan etanol p.a hingga tanda dan digojog agar homogen. b. Pembuatan seri larutan baku eugenol 560, 600, 640, 680, 720, 760 dan 800 ppm. Larutan stok eugenol 20000 ppm diambil sebanyak 140, 150, 160, 170, 180, 190 dan 200 μL menggunakan mikropipet kemudian masing-masing


dimasukkan ke dalam labu takar 5 mL. Larutan tersebut diencerkan dengan etanol p.a hingga tanda dan digojog agar homogen. Seri larutan baku dibuat sebanyak tiga replikasi. 6. Pembuatan Larutan Baku Campuran Asam Salisilat dan Eugenol Larutan stok baku asam salisilat diambil sebanyak 204, 255 dan 306 μL dan larutan stok baku eugenol diambil sebanyak 140, 170 dan 200 μL menggunakan mikropipet kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 5 mL. Campuran larutan lalu diencerkan dengan etanol p.a hingga tanda dan digojog agar homogen. Pembuatan larutan campuran baku eugenol dan asam salisilat dilakukan sebanyak lima kali replikasi. 7. Penetapan Panjang Gelombang Pengamatan Larutan baku asam salisilat kadar 816; 952 dan 1224 ppm dan larutan baku eugenol kadar 560; 640 dan 800 ppm masing-masing tiga kali replikasi ditotolkan sebanyak 2 µL pada plat KLT dengan fase diam silika gel 60 F254. Hasil penotolan dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah jenuh dengan fase gerak, dengan jarak pengembangan 15 cm. Lempeng hasil pengembangan dikeluarkan dari bejana lalu dikeringkan. Plat hasil pengembangan discanning pada panjang gelombang pengamatan 250-330 nm menggunakan alat TLC scanner.

8. Penetapan kurva baku asam salisilat dan eugenol dan pengamatan nilai Retardation Factor (Rf) asam salisilat dan eugenol


Seri larutan baku masing-masing ditotolkan dengan volume penotolan 2 μL pada plat KLT dengan fase diam silika gel 60 F254 yang telah diaktifkan dan setelah kering dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhi dengan fase gerak dengan jarak pengembangan 15 cm. Setelah mencapai jarak rambat 15 cm, plat dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan. Plat hasil pengembangan diukur Area Under Curve (AUC) dan tinggi puncaknya dengan alat TLC scanner pada panjang gelombang pengamatan (288 nm). Replikasi dilakukan sebanyak tiga kali. Selanjutnya dihitung persamaan kurva baku, nilai koefisien determinasi dan nilai koefisien korelasinya, kemudian diplotkan dalam grafik kadar vs AUC. 9. Validasi Metode a. Penentuan nilai selektivitas, presisi, linearitas dan rentang. Seri larutan tunggal dan campuran baku asam salisilat dan eugenol ditotolkan dengan volume penotolan 2 µL pada plat KLT dengan fase diam silika gel 60 GF254 dan setelah kering dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhi dengan fase gerak. Setelah mencapai jarak rambat 15 cm, plat dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan. Plat hasil pengembangan diukur Area Under Curve (AUC) dan tinggi puncaknya dengan alat TLC scanner pada panjang gelombang pengamatan (288 nm). Replikasi dilakukan sebanyak lima kali. Kadar terukur dihitung dengan menggunakan persamaan kurva baku yang telah didapat. b. Penentuan nilai perolehan kembali. Konsentrasi rendah, sedang dan tinggi dari baku eugenol dan asam salisilat ditambahkan pada ± 1 gram sampel, kemudian ditambahkan 25 mL NaOH 6M. Dilakukan pemanasan dengan refluks


dengan menggunakan mantel heater dengan suhu di jaga antara 800C-1000C selama 3 jam. Larutan yang diperoleh disaring dengan menggunakan kertas saring dan ditambah HCL 6M hingga pH 2. Larutan diekstraksi sebanyak 4 x @ 10 mL kloroform. Hasil ekstraksi dikeringkan dan setelah kering dilarutkan kembali dengan 5 mL. Hasil tersebut ditotolkan sebanyak 2 µL pada plat KLT dengan jarak rambat 15 cm, plat dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan. Plat hasil pengembangan diukur Area Under Curve (AUC) dan tinggi puncaknya dengan alat TLC scanner pada panjang gelombang pengamatan (288 nm). Replikasi dilakukan sebanyak dua kali pada tiap konsentrasi baku. Kadar terukur dihitung dengan menggunakan persamaan kurva baku yang telah didapat. 10. Preparasi Sampel Sampel didapatkan dari 4 apotek pendidikan di Yogyakarta yang memiliki nomor batch yang sama sebanyak 50 sampel. Dari 50 sampel tersebut diambil 20 sampel secara acak yang akan mendapatkan perlakuan. Dari 20 sampel tersebut dikeluarkan semua kemudian diletakkan dalam satu wadah yang sama dan dihomogenkan. Sampel ditimbang lebih kurang 1 gram dengan seksama

kemudian

dimasukkan kedalam labu alas datar 100 mL, NaOH 6 M ditambahkan sebanyak 25 mL. Dilakukan pemanasan dengan refluks dengan menggunakan mantel heater dengan suhu di jaga antara 800C-1000C selama 3 jam. Larutan yang diperoleh disaring dengan menggunakan kertas saring dan ditambah HCL 6M hingga pH 2. Larutan diekstraksi sebanyak 4 x @ 10 mL kloroform. Hasil ekstraksi dikeringkan


dan setelah kering dilarutkan kembali dengan 5 mL etanol sehingga didapatkan sampel untuk eugenol tanpa pengenceran. Sampel dibuat sebanyak 5 kali. Sampel yang telah jadi tersebut digunakan untuk sampel eugenol, sedangkan untuk sampel asam salisilat didapatkan dari sampel eugenol yang akan diencerkan dengan mengambil 1 mL sampel eugenol menggunakan pipet volume kemudian dimasukkan kedalam labu takar 10 mL larutan tersebut diencerkan dengan etanol p.a hingga tanda dan digojog agar homogen. Sampel dibuat sebanyak 5 kali. G. Analisa Hasil Pada analisis campuran eugenol dan metil salisilat ini dilakukan pemisahan antara metil salisilat dengan eugenol berdasarkan parameter berikut ini: 1. Selektivitas Selektivitas ditentukan dengan membandingkan nilai Rf dari kedua senyawa. Selektivitas ditunjukkan dengan resolusi (R) > 1,5 (Gandjar dan Rohman, 2007). Resolusi dapat dihitung dengan cara berikut: Resolusi =

(Watson, 1999).

2. Linearitas Linearitas dilihat dari nilai r2 (koefisien determinasi) yang didapatkan dari persamaan kurva baku. Suatu metode memiliki linearitas yang baik jika nilai koefisien determinasi (r2) ≥ 0,997 (Chan, 2004). 3. Nilai perolehan kembali Nilai perolehan kembali pada analisis ini dapat dihitung dengan cara:


Nilai recovery didapatkan dari rumus

x 100%

4. Presisi Nilai presisi pada metode analisis dinyatakan dalam bentuk KV (koefisien variasi) yang dapat diperoleh dengan cara: KV =

x 100% (Harmita, 2004).

5. Rentang Rentang merupakan interval konsentrasi analit yang memenuhi persyaratan linearitas, % perolehan kembali, dan presisi.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Preparasi Sampel Pada penelitian ini sampel yang digunakan adalah krim merek “x” yang tiap 1 gram dari krim tersebut mengandung 102 mg metil salisilat dan 13.6 mg eugenol. Pada penelitian ini menggunakan sampel yang berasal dari nomor batch yang sama dan pengumpulan sampel dilakukan pada 4 apotek pendidikan yang berada di kota Yogyakarta. Pada penelitian ini digunakan nomor batch yang sama karena pada nomor batch yang sama dilakukan pada satu kali proses produksi sehingga nantinya akan mendapatkan hasil yang baik antara satu replikasi dengan replikasi lainnya. Sampel yang digunakan sebanyak 50 buah dengan nomor batch yang

sama, dari 50 sampel tersebut diambil 20 sampel secara acak yang

kemudian akan dilakukan penetapan kadar metil salisilat dan eugenol didalam sampel krim merek “x”. Teknik pengambilan sampel yang digunakan adalah probability sample khususnya simple random sampling, yaitu teknik pengambilan sampel dari populasi secara acak tanpa memperhatikan strata yang ada di dalam populasi tersebut sehingga setiap anggota populasi mempunyai peluang yang sama untuk dipilih menjadi anggota sampel (Sugiyono, 2008). Metode ini dilakukan karena setiap sampel yang digunakan memiliki kesempatan yang sama untuk dijadikan sampel dalam penetapan kadarnya sehingga hasil yang didapat lebih representatif. Dari 20 sampel tersebut, dikeluarkan dari wadah dan ditimbang berat seluruhnya

39


dari sampel yang akan dipakai. Sampel yang telah menjadi satu tersebut diaduk rata agar mendapatkan hasil yang homogen. Penetapan kadar dilakukan dengan menggunakan 5 replikasi untuk mendapatkan hasil penetapan kadar metil salisilat dan eugenol. Preparasi sampel dilakukan untuk memisahkan analit dari matriks sampel yang berupa basis krim merek “x” yang merupakan vanishing creams, adalah tipe emulsi O/W sehingga dapat dipecahkan dengan penambahan senyawa kimia seperti basa kuat (Beall, 1984). Basis vanishing creams meliputi stearyl alcohol, cetyl alcohol, myristic alcohol, dodecyl alcohol, glycerol monostearate, polyoxyl 20 cetostearyl ether, Sorbitol, isopropyl palmitate, methyl paraben, propyl paraben, captan, dan air sehingga pada penetapan kadar dari analit yang diteliti tidak terganggu oleh matriks sampel yang bisa berupa basis krim yang digunakan. Sehingga penetapan kadar yang dilakukan murni berasal dari analit tanpa adanya gangguan dari matriks sampel yang tidak diinginkan. Preparasi pada sampel meliputi pemecahan emulsi yang digunakan pada matriks sampel lalu dilakukan ekstraksi untuk mendapatkan analit yang akan digunakan untuk penetapan kadar. Untuk pemecahan emulsi pada sampel digunakan basa kuat NaOH 6M yang dapat memecah matriks sampel pada sediaan tersebut, selain itu untuk mengubah analit menjadi bentuk garam sehingga dapat lebih larut dalam air. Namun pada metil salisilat, penambahan NaOH 6M dapat mengubah metil salisilat menjadi bentuk garam yaitu natrium salisilat. Garam natrium salisilat ini akan lebih larut dalam air.


Ester yang mengalami hidrolisis biasanya akan berubah menjadi alkohol ataupun asam bebas oleh adanya air. Kecepatan dari reaksinya akan meningkat oleh adanya peningkatan suhu dan dengan penambahan katalis asam atau basa. Penambahan basa tidak hanya mengkatalis proses hidrolisis, tapi juga bereaksi dengan produk asam bebas yang terbentuk dan menghasilkan bentuk garam. Metil salisilat yang dihidrolisis dengan larutan basa, maka setiap mol garam salisilat yang terbentuk setara dengan jumlah mol ester yang terhidrolisis. Penambahan basa NaOH akan mengubah metil salisilat menjadi bentuk garam natrium salisilat. Penggunaan asam dibutuhkan untuk membentuk senyawa asam bebas hasil dari reaksi hidrolisis dan menetralkan sisa basa yang tidak bereaksi. Pada eugenol juga terjadi reaksi yang sama yaitu dengan penambahan basa NaOH 6M akan mengubah eugenol menjadi bentuk garam natrium eugenolat, namun setelah penetralan dengan HCl akan mengubah kembali bentuk garam natrium eugenolat menjadi eugenol.

O

O

OCH3

OH

Metil salisilat

ONa

NaOH/H2O 100oC

O

OH

HCl

OH

Garam Natrium Salisilat

OH

Asam salisilat

Gambar 7. Reaksi hidrolisis metil salisilat menjadi asam salisilat


OH

ONa

O

O

NaOH/H2O 100oC

Eugenol

Natrium eugenolat Gambar 8. Reaksi pembentukan garam natrium eugenol

Pada pemecahan emulsi ini dilakukan dengan bantuan pemanasan. Pemanasan juga bertujuan untuk memecah emulsi yang ada pada sampel. Pemanasan disini menggunakan mantle heater dengan bantuan refluks. Metode refluks dipilih selain untuk memaksimalkan pembentukan garam natrium dan pemecahan emulsi karena adanya pemanasan, juga untuk mengurangi kehilangan senyawa volatil yang mungkin terjadi, karena metil salisilat merupakan senyawa yang cukup volatil (Avantor Performance Material, Inc, 2011). Pemanasan dilakukan selama 3 jam. Dipilih waktu selama 3 jam karena pada waktu tersebut didapatkan nilai AUC dari sampel yang paling banyak apabila diteruskan sampai 4 jam hasil yang didapatkan kurang baik karena didapatkan penurunan nilai AUC dari sampel.


Gambar 9. Densitogram pemanasan sampel selama 1 jam





Tahap selanjutnya adalah menetralkan sisa basa yang telah digunakan untuk pemecahan sampel dengan menggunakan HCl. Penetralan ini bertujuan untuk mendapatkan kembali analit dalam molekul utuh bukan dalam bentuk garam atau ion sehingga tidak mengganggu pada proses elusi analit. Proses penetralan dengan menggunakan HCl akan membuat garam natrium salisilat yang terbentuk pada saat hidrolisis akan berubah menjadi asam salisilat sehingga pada penetapan kadar metil salisilat merupakan penetapan kadar secara tidak langsung karena pada prosesnya terjadi perubahan dari metil salisilat menjadi asam salisilat. Pada eugenol proses penetralan tersebut akan mengubah garam natrium eugenol menjadi bentuk eugenol mula-mula.


ONa

OH

O

O

HCl

Natrium eugenol

Eugenol

Gambar 13. Reaksi pembentukan eugenol dari garam natrium eugenol

Ekstraksi dilakukan secara partisi menggunakan corong pisah. Estrkasi partisi disini menggunakan pelarut yang tidak saling campur. Pelarut lain yang digunakan adalah kloroform. Dipilih kloroform karena analit yang akan digunakan dapat larut dalam pelarut kloroform dengan prisip like disolve like. Ekstraksi dilakukan 4 kali dengan setiap ekstraksi sebanyak 10 mL dengan tujuan untuk memaksimalkan hasil ekstraksi. Apabila langsung digunakan volume yang banyak maka ada kemungkinan analit tersebut belum terambil sehingga untuk memaksimalkan ekstraksi digunakan 4 kali ekstraksi dengan harapan analit tersebut sudah terambil semua. Setelah itu pelarut yang digunakan diuapkan dan setelah kering dilarutkan kembali dengan etanol untuk dilakukan proses selanjutnya yaitu proses elusi untuk validasi metode. B. Fase Gerak Pada penelitian ini menggunakan komposisi fase gerak yang didapatkan dari hasil optimasi yang dilakukan pada proses sebelumnya. Hasil optimasi dari komposisi fase gerak yang digunakan adalah toluena, etil asetat dan metanol dengan perbandingan toluene: etil asetat: metanol (65,2: 2,4: 32,4) (Ediningtyas,


2012). Campuran fase gerak ini bersifat lebih non polar apabila dibandingkan dengan fase diamnya, memiliki nilai indeks polaritas sebesar 3,3228 dan merupakan fase gerak yang dapat memisahkan asam salisilat dan eugenol secara optimal. Campuran fase gerak ini disebut non-polar karena memiliki nilai indeks polaritas yang rendah, dimana semakin rendah nilai indeks polaritas suatu fase gerak, maka semakin non-polar sifatnya. Fase gerak yang cenderung lebih non polar ini akan mampu mengelusi sampel sehingga akan didapatkan pemisahan dari analit karena memiliki sifat polaritas yang berbeda antara satu dengan yang lain. Prinsip pembuatan dan pencampuran ketiga larutan fase gerak tersebut menggunakan prinsip volume portion dengan teknik doubling dimulai dari fase gerak yang memiliki volum terkecil lalu ditambah larutan fase gerak selanjutnya sebanyak volum di dalam wadah, begitu seterusnya. Prinsip volume portion dengan teknik doubling dilakukan untuk mempermudah pencampuran ketiga jenis larutan fase gerak yang digunakan sehingga ketiganya dapat tercampur dengan sempurna. Pada optimasi pemilihan fase gerak yang telah dilakukan sebelumnya dihasilkan pemisahan metil salisilat dan eugenol yang baik dan optimal. Pembuatan fase gerak menggunakan bahan-bahan pro analisis karena diharapkan dengan menggunakan bahan-bahan dengan grade pro analsis ini tidak memiliki pengotor dibanding jika menggunakan bahan-bahan teknis. Adanya pengotor akan menganggu interaksi antara fase gerak dengan analit. Sistem kromatografi pada penelitian ini merupakan kromatografi fase normal karena fase gerak yang digunakan bersifat lebih non polar dari pada fase diam yang digunakan.


C. Pembuatan Larutan Baku Pada penelitian ini menggunakan larutan baku yang dibuat dalam 7 seri konsentrasi untuk masing-masing analit yang akan diuji pada penelitian ini. Pelarut yang digunakan adalah etanol karena asam salisilat dan eugenol larut dalam etanol. larutan baku digunakan untuk membuat persamaan kurva baku dari masing-masing analit yaitu asam salisilat dan eugenol. Konsentrasi kurva baku yang digunakan untuk persamaan kurva baku asam salisilat adalah 816, 884, 952, 1020, 1088, 1156, dan 1224 ppm. Sedangkan konsentrasi kurva baku untuk persmaan kurva baku eugenol adalah 560, 600, 640, 680, 720, 760 dan 800 ppm. Perbandingan yang digunakan dalam pembuatan konsentrasi kurva baku tersebut didasarkan pada perbandingan analit yang ada dalam sampel krim merek “x” yaitu 1 : 1,5 untuk eugenol : metil salisilat. D. Penentuan Panjang Gelombang ( λ ) Pengamatan Asam Salisilat dan Eugenol Penetapan panjang gelombang pengamatan bertujuan untuk menentukan λ optimum sehingga analit yang terdeteksi memberikan respon optimum. Penentuan  pengamatan eugenol dan asam salisilat sangat dipengaruhi oleh nilai yang merupakan nilai serapan suatu zat dalam larutan dengan konsentrasi 1% b/v di dalam kuvet yang tebalnya 1 cm.


B A

Gambar 14. Profil spektra baku analit. (a). Eugenol; (b). Asam Salisilat

Dari spektra yang ditunjukan pada gambar 15, panjang gelombang maksimum asam salisilat adalah pada panjang gelombang 300 nm. Sedangkan panjang gelombang maksimum eugenol adalah 282 nm. Berdasarkan gambar spektra di atas pada λ maksimum eugenol serapan asam salisilat sangat rendah sedangkan pada λ maksimum asam salisilat serapan eugenol sangat rendah. Oleh karena itu untuk menetapkan panjang gelombang pengamatan di pilih pada panjang gelombang perpotongan antara asam salisilat dan eugenol pada panjang gelombang 288 nm dimana eugenol dan asam salisilat masih memberikan serapan yang tinggi. E. Analisis Kualitatif Analisis kualitatif dari metode ini dilihat dari nilai R f (Retardation factor) yang bersifat spesifik pada setiap senyawa dalam fase gerak tertentu tergantung interaksinya antara fase diam dan fase gerak. Pengamatan nilai Rf ini


dilakukan untuk mengetahui apakah dalam sampel mengandung asam salisilat dan eugenol yang dilakukan dengan cara membandingkan nilai Rf dari senyawa baku asam salisilat dan eugenol dengan nilai Rf dari analit yang akan diteliti. Larutan baku yang digunakan adalah baku tunggal asam salisilat dan eugenol serta ditotolkan juga larutan baku campuran antara asam salisilat dan eugenol sebanyak 2 µL. Hasil densitogram antara baku dengan sampel yang digunakan adalah sebagai berikut:

a

b

c

d

Gambar 15 densitogram baseline (a); baku asam salisilat (b); baku eugenol (c) dan baku campuran asam salisilat dan eugenol (d)

Dari gambar diatas diketahui bahwa asam salisilat baku memiliki nilai Rf sebesar 0,25 dan eugenol memiliki niali Rf sebesar 0,66. Pada baku campuran terlihat bahwa nilai Rf dari asam salisilat sebesar 0,25 dan untuk eugenol sebesar


0,66. Dari gambar 11 tersebut dapat dipastikan pula bahwa asam salisilat dan eugenol tersebut sudah dapat terpisah secara sempurna dengan nilai resolusi (R) sebesar 5,125 yang sudah sesuai dengan syarat resolusi dari Gandjar dan Rohman, 2007 yaitu nilai R > 1,5. Perbedaan nilai Rf antara analit yang satu dengan yang lainnya disebabkan karena adanya perbedaan interaksi antara kedua analit dengan fase diam maupun fase gerak yang digunakan. Pada penelitian ini digunakan sistem KLT dengan fase normal yang artinya fase diam yang digunakan bersifat lebih polar daripada fase geraknya. Sehingga senyawa yang lebih bersifat non polar akan terelusi terlebih dahulu oleh fase gerak. Dalam hal ini kepolaran eugenol lebih kecil daripada asam salisilat sehingga eugenol akan terelusi terlebih dahulu.

A B

= bagian non polar Gambar 16. Bagian non polar dari (a) asam salisilat dan (b) eugenol

F. Penetapan kurva baku asam salisilat dan eugenol Persamaan kurva baku yang digunakan untuk mendapatkan hubungan linearitas antara konsentrasi baku yang digunakan dengan AUC (Area Under Curve) yang menggambarkan kadar dari tiap masing-masing konsentrasi baku yang digunakan. Hubungan antara konsentrasi dengan AUC dinyatakan sebagai


koefisien determinasi. Persamaan kurva baku disini menggunakan syarat nilai koefisien determinasi (r2) ≥ 0,997 (Chan, 2004). Pada penentuan persamaan kurva baku yang digunakan menggunakan 7 konsentrasi kurva baku dengan replikasi 3 kali untuk tiap analit yaitu asam salisilat dan eugenol. Hasil dari

baku asam salisilat diperoleh data sebagai

berikut:

Replikasi 1 Konsentrasi AUC (ppm) 816 17027,4 884 17980,4 952 19112,2 1020 20187,3 1088 20737,4 1156 21662 1224 23141,4 A b r r2

53370,0143 14,3542 0,9957 0,9914

Tabel VI. Konsentrasi Asam Salisilat vs AUC Asam Salisilat Replikasi 2 Replikasi 3 Konsentrasi AUC Konsentrasi AUC (ppm) (ppm) 816 18377,7 816 17893 884 19249,4 884 18781,1 952 20188,1 952 20102,6 1020 20932,4 1020 21305,5 1088 21992,4 1088 21901,7 1156 23125,2 1156 23068,7 1224 24054,1 1224 24463,3 a b r r2

6889,3107 13,9628 0,9986 0,9972

a b r r2

4956,6286 15,8010 0,9969 0,9938

Dari tabel diatas terlihat bahwa persamaan kurva baku untuk asam

salisilat yang digunakan adalah replikasi 2. Replikasi 2 dipilih karena nilai koefisien determinasi (r2) yang memenuhi syarat yaitu ≥ 0,997. Menurut De Muth (1999) koefisien determinasi menggambarkan kedekatan titik dengan garis linear, semakin dekat titik dengan garis berarti semakin dekat hubungan korelasinya. Nilai r2 yang medekati satu maka data-data tersebut akan semakin linear, yang berarti bahwa kenaikan konsentrasi kurva baku sebanding dengan kenaikan AUC tersebut sehingga hasilnya dapat dipercaya. Nilai linearitas menyatakan adanya hubungan respon pengukuran konsentrasi larutan dengan jumlah analit. Persamaan kurva baku yang digunakan untuk menetapkan kadar asam salisilat


adalah y = 13,9628 + 6889,3107 dengan nilai r2 sebesar 0,9972. Kurva hubungan antara konsentrasi dengan AUC dapat dilihat pada gambar berikut ini:

Gambar 17. Kurva baku hubungan konsentrasi asam salisilat vs AUC

Korelasi antara konsentrasi asam salisilat dengan AUC yang baik dapat dilihat dari kurva tersebut dimana dengan bertambahnya konsentrasi asam salisilat diiringi dengan kenaikan dari nilai AUC. Sehingga dari persamaan kurva baku tersebut dapat digunakan untuk menghitung kadar asam salisilat yang ada dalam sampel. Sedangkan untuk baku eugenol diperoleh data sebagai berikut:

Replikasi 1 Konsentrasi AUC (ppm) 560 6270,9 600 6463,9 640 6631,4 680 6847,1 720 7082,3 760 7307,1 800 7461 A b r r2

3400,9143 5,0961 0,9986 0,9972

Tabel VII. Konsentrasi eugenol vs AUC Eugenol Replikasi 2 Replikasi 3 Konsentrasi AUC Konsentrasi AUC (ppm) (ppm) 560 6099,7 560 5790,8 600 6371,7 600 6081,8 640 6687,6 640 6275,2 680 6838,6 680 6462 720 7271,2 720 6645,9 760 7341,3 760 6827,2 800 7634,4 800 7017,6 a b r r

2565,025 6,3633 0,9929 0,9858

a b r r2

3078,2036 4,9481 0,9971 0,9942


Dari tabel diatas diketahui bahwa persamaan kurva baku yang diperoleh untuk penetapan kadar eugenol adalah menggunakan replikasi 1 dimana persamaan yang digunakan adalah y = 5,0961x + 3400,9143 dengan nilai r2 sebesar 0,9972, hal ini memenuhi syarat yaitu nilai r2 ≥ 0,997. Kurva hubungan antara konsentrasi eugenol dengan AUC dapat dilihat pada gambar berikut ini.

Gambar 18. Kurva baku hubungan konsentrasi eugenol vs AUC

Korelasi antara konsentrasi eugenol dengan AUC yang baik dapat dilihat dari kurva tersebut dimana dengan bertambahnya konsentrasi eugenol diiringi dengan kenaikan dari nilai AUC. Sehingga dari persamaan kurva baku tersebut dapat digunakan untuk menghitung kadar eugenol yang ada dalam sampel. G. Validasi Metode Validasi metode sangat penting dilakukan dengan tujuan untuk membuktikan bahwa metode analisis yang digunakan telah memenuhi parameterparameter validasi yang ditetapkan, sehingga karakteristik kinerja metode ini terjamin dan hasil atau data yang didapat ketika menggunakan metode ini dapat dipercaya.


Validasi yang dilakukan menggunakan larutan baku tunggal bertujuan untuk memvalidasi metode analisis yang digunakan yaitu KLT-densitometri, sedangkan validasi yang dilakukan menggunakan baku campuran dan adisi baku untuk memvalidasi metode analisis pada saat pengaplikasian metode ini untuk penetapan kadar asam salisilat dan eugenol dalam sampel. Parameter validasi metode yang digunakan mengikuti kategori I yang meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range. Kategori I merupakan metode untuk analisis kuantitatif komponen utama bahan baku dalam produk jadi sediaan farmasi. 1. Selektivitas Parameter selektivitas digunakan untuk melihat kemampuan suatu metode tersebut untuk memisahkan dan membedakan suatu analit yang satu dengan analit yang lain dalam suatu campuran. Penentuan ini dapat dilihat dari pengamatan peak antara asam salisilat dengan eugenol pada densitogram. Pemisahan ini dinyatakan dalam nilai resolusi (R). Tabel VIII. Perbandingan Nilai Resolusi dan Nilai Rf pada Baku Asam Salisilat dan Eugenol Rf Asam Salisilat Rf Eugenol Resolusi Baku Tunggal

0,25

0,66

-

Baku Campuran

0,25

0,66

5,125

Pada tabel VII dapat terlihat bahwa Rf baku dan Rf analit dalam sampel menunjukkan nilai R sebesar 5,125 yang artinya kedua komponen terpisah relatif cukup jauh dihitung berdasarkan jarak peak asam salisilat dan eugenol. Nilai resolusi ini telah memenuhi persyaratan yang ditetapkan oleh Gandjar


dan Rohman (2007) yaitu R > 1,5. Maka dapat disimpulkan bahwa metode KLT densitometri ini memenuhi parameter selektivitas dalam menetapkan kadar asam salisilat dan eugenol. 2.

Uji Perolehan Kembali (Recovery) Dari hasil recovery ini akan menggambarkan akurasi atau ketepatan hasil. Hasil yang didapat dari perhitungan nilai recovery setelah ditambahkan larutan baku rata-ratanya adalah 91,958% untuk asam salisilat dan 42,595% untuk eugenol. Nilai recovery untuk asam salisilat sudah masuk dalam range recovery yang disyaratkan yaitu antara 90-107% sedangkan untuk eugenol tidak masuk dalam range yang dipersyaratkan. Dari hasil ini dapat diketahui bahwa metode ini dapat memberikan kecermatan hasil untuk senyawa asam salisilat namun tidak cukup cermat untuk senyawa eugenol. Faktor yang bisa membuat perolehan kembali untuk eugenol menjadi kurang baik dikarenakan berbagai macam faktor, salah satunya karena preparasi sampel yang kurang tepat untuk mengambil eugenol dalam matriks sampel sehingga hasilnya kurang begitu baik. Sifat dari eugenol yang semivolatile menyebabkan hilangnya sebagian dari eugenol akibat preparasi sample yang menggunakan pemanasan. Nilai konstanta Henry sebesar 0,2 Pa.m3/mol (EFSA, 2012) dan termasuk dalam katagori semivolatile. Sifat dari eugenol yang semivolatile ini dapat menyebabkan hialngnya sebagian dari eugenol sehingga akan mempengaruhi dari penetapan kadarnya. Dapat dilihat dari nilai %recovery yang tidak memenuhi syarat.


Volatilitas dapat menyebabkan senyawa organik memiliki tendensi untuk melepaskan diri dari fase cairan menuju fase gas. Parameter volatilitas mengacu pada hukum Henry. Hukum Henry tersebut adalah: H’ = KD = Dari persamaan tersebut diketahui bahwa hukum Henry (H) atau bisa disebut sebagai perbandingan distribusi (KD) dipengaruhi oleh perbandingan antara fase gas suatu senyawa (Xg) dengan fase cairan dari suatu senyawa (Xl). Semakin besar fase gas suatu senyawa dibandingkan dengan fase cairan suatu senyawa akan membuat nilai hukum Henry akan semakin besar, sehingga kemungkinan senyawa tersebut menguap dari suatu larutan akan semakin besar. Menurut persamaan itu pula nilai hukum Henry dapat diperkirakan apabila konsentrasi senyawa pada fase gas berada dalam keadaan seimbang dengan fase cairannya. 3. Presisi Presisi merupakan gambaran kedekatan hasil pengukuran satu dengan lainnya dalam kondisi analisis yang sama. Uji presisi dilakukan dengan menggunakan larutan baku tunggal dan larutan baku campuran. Penggunaan baku tunggal dimaksudkan untuk mengetahui presisi dari instrumen yang digunakan, sedangkan penggunaan baku campuran untuk mengetahui presisi dari metode penetapan kadar. Presisi dapat diukur dengan parameter % CV (coefficient of variation).


Pada penentuan nilai presisi dari larutan baku tunggal, konsentrasi senyawa dalam matriks sebesar 100% sehingga nilai % CV yang dipersyaratkan adalah % CV ≤ 1,3% (Huber, 2003).

Rata-rata SD % CV

Tabel IX. Data % CV Asam Salisilat Tunggal Rendah (816) Sedang (1020) Tinggi (1224) 835,9551 1002,9787 1217,1690 21,5985 10,8646 9,6606 2,5837 1,0832 0,7937

Rata-rata SD % CV

Tabel X. Data % CV Eugenol Tunggal Rendah (560) Sedang (680) 565,1350 680,6785 10,5828 7,1406 1,8726 1,0490

Tinggi (800) 794,6706 6,5145 0,8198

Dari tabel VIII dan IX didapatkan hasil bahwa yang memenuhi persyaratan % CV hanya pada konsentrasi tengah dan tinggi untuk asam salisilat (1020-1224 ppm) dan eugenol (680-800 ppm).

Rata-rata SD % CV

Tabel XI. Data % CV Campuran Asam Salisilat-Eugenol Kadar Asam Salisilat (ppm) Kadar Eugenol (ppm) Rendah Sedang Tinggi Rendah Sedang Tinggi (816) (1020) (1224) (560) (680) (800) 803,0820 1009,7080 1211,3435 562,0831 677,4856 796,7156 18,7600 9,8727 10,8516 5,6573 8,3180 6,6641 2,3360 0,9778 0,8958 1,0065 1,2278 0,8365

Pada senyawa campuran % CV yang dapat diterima untuk konsentrasi

analit 100-999 ppm % CV ≤ 5,3% sedangkan untuk konsentrasi di atas 10009999 ppm % CV ≤ 3,7% (Hurber,2003). Dari tabel X dapat dilihat bahwa semua memenuhi persyaratan % CV, baik untuk ketiga tingkat konsentrasi asam salisilat (816-1224 ppm) maupun ketiga tingkat konsentrasi eugenol (560-800 ppm). Hasil rentang asam salisilat memenuhi persyaratan ≤ 3,7% sedangkan eugenol memenuhi persyaratan ≤ 5,3%. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa metode ini memiliki presisi yang baik.


4. Linearitas Berdasarkan data yang diperoleh diketahui bahwa nilai koefisien determinasi untuk asam salisilat dan eugenol berturut-turut adalah 0,9972 dan 0,9972. Hal ini menunjukkan bahwa metode KLT-densitometri ini telah memenuhi parameter linearitas dan dapat digunakan dalam menetapkan kadar campuran asam salisilat dan eugenol. 5. Rentang Rentang merupakan konsentrasi analit pada level konsentrasi bawah dan level konsentrasi atas dalam suatu sampel, yang masih memenuhi persyaratan linearitas, % recovery dan presisi. Jika rentang dapat ditentukan untuk penetapan kadar, maka pada saat penetapan kadar jumlah analit yang dituju dapat diarahkan ke level analit yang memenuhi rentang sehingga dapat memberikan hasil yang baik. Dalam metode ini tidak dapat diperoleh rentang yang baik untuk penetapan kadar karena tidak memenuhi persyaratan dari nilai % recovery.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Penetapan kadar metil salisilat dilakukan secara tidak langsung dengan menghidrolisis metil salisilat menjadi asam salisilat. Metode KLT-densitometri yang digunakan dengan fase diam silika gel 60 F254, fase gerak toluena : etil asetat : metanol (65,2 : 2,4 : 32,4), volume penotolan 2,0 μl dan jarak pengembangan 15 cm. Penentuan validasi metode analisis metil salisilat yang dihitung dalam bentuk asam salisilat memiiki hasil selektivitas dengan nilai resolusi 5,125,

nilai

linearitas dengan nilai r2 sebesar 0,9972 dan untuk eugenol dengan nilai r2 sebesar 0,9972, nilai rata-rata % recovery 91,958% untuk asam salisilat dan 42,595% untuk eugenol, nilai %CV untuk level kadar rendah, sedang dan tinggi berturutturut adalah 2,3360%; 0,9778%; 0,8958% untuk asam salisilat dan untuk eugenol berturut-turut adalah 1,0065%; 1,2278%; dan 0,8365%. Berdasarkan hasil tersebut maka metode KLT-Densitometri ini tidak memenuhi persyaratan validasi karena syarat perolehan kembali (recovery) tidak terpenuhi.

59


B. Saran Metode ini masih bisa digunakan untuk penetapan metil salisilat namun tidak cukup baik untuk penetapan kadar dari eugenol yang sifatnya semivolatile sehingga untuk penetapan kadar eugenol menggunakan metode kromatografi gas yang dapat digunakan untuk senyawa yang volatile. Pemecahan matriks sampel dapat menggunakan cara penambahan senyawa kimia sehingga senyawa kimia tersebut dapat memecah emulsi yang ada dalam krim tersebut tanpa membuat analit yang akan di analisis berkurang. Senyawa kimia tersebut dapat berupa asam kuat maupun basa kuat.


DAFTAR PUSTAKA

Ahlneck, C., and Alderborn, G., 1988, Solid-state stability of acetylsalicylic-acid in binarymixtures with microcrystalline and microfine cellulose, Acta Pharm Suec 25(1): 41-52, cit., Mihranyan, A., Strømme, M., and Ek, R., 2006, Influence of cellulose powder structure on moisture-induced degradation of acetylsalicylic acid, Eur.J.Pharm.Sci., 2006 Feb;27(23):220-5. Anief, M., 2000. Farmasetika, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta, hal. 111, 125-136. Astuti, S. M, 2006, Isolasi dan Identifikasi Komponen Minyak Atsiri Umbi Teki (Cyperus rotundus L.), Skripsi, Universitas Sebelas Maret, Surakarta Avantor Performance Material, Inc, 2011, Material Safety Data sheet Methyl Salicylate, number M7257, http://www.avantormaterials.com/ documents/msds/usa/english/M7257_msds_us_Default.pdf, diakses tanggal 12 Novenber 2011. Beall, G.W., 1984, Method of breaking emulsion, number US4470912, United States Patent, United States, http://www.freepatentsonline.com/4470912.pdf, diakses tanggal 18 April 2012. Bennett, J., 2012, Vanishing Creams, http://cosmeticsandskin.com/aba/vanishingcream.php, diakses tanggal 4 Januari 2012. Braithwaite, A and F.J. Smith, 1999, Chromatographic Methods 5th Edition,Kluwer Academic Publishers, Netherlands, pp. 44 Budavari, S., 2001, Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biological, 13th ed., Merck & Co., Inc., USA, pp.239, 612. Chan, C.C., 2004, Potency Method Validation, in Chan, C.C., Lam, H., Lee, Y.C., and Zhang, X., (Ed.), Analytical Method Validation and Instrument Performance Verification, John Wiley & Sons, Inc., USA, pp.11-24. Clarke, E.G.C, 1971, Isolation and Identification of Drugs, The Pharmaceutical Press, London, pp. 42, 343, 539. De Muth, J.E., 1999, Basic Statistic and Pharmaceutical Statistical Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, USA, pp.295-364. Deinstrop, E.H., 2007, Applied Thin-Layer Chromatography: Best Practice and Avoidance ofMistakes, 2nd Edition, WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA,Weinheim, pp. 2. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope Indonesia, jilid IV, Departeman Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal.735-737. Ediningtyas, V.V.D., 2012, Optimasi Metode KLT-Densitometri Pada Penetapan Kadar Metil Salisilat dan Eugenol dalam Sediaan krim merek “x” , Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. EFSA, 2012, Conclusion on the peer review of the pesticide risk assessment of the active substance plant oils/clove oil, EFSA Journal, 10(1), 2506.

61


Environmental Protection Agency, 2005, Biopesticide Registration Action Document : Methyl Salicilate, US Environmental Protection Agency Office of Pesticide Programs, pp 2 Fang, C.S., Chang, B.K.L., Lai, P.M.C., and Klaila, W.J., 1988, Microwave Demulsification, Chemical Engineering Communications, Volume 73, Issue 1, 1988, DOI 10.1080/00986448808940444, pp.227-239 Gandjar, I. G., and Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp. 326, 359. Gearien, J.E. and Grabowski, B. F., 1969, Methods of Drug Analysis, Lea & Febiger, Philadelphia, USA, pp. 32,33, 72-77. Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya, Majalah Ilmu Kefarmasian, 1(3), hal.117-134. Harnani, E.D., 2010, Perbandingan Kadar Eugenol Minyak Atsiri Bunga Cengkeh (Szygium aromaticum (L.) Merr. & Perry) dari Maluku, Sumatera, Sulawesi, dan Jawa dengan Metode GC-MS, Skripsi, Univesitas Sumatera Utara, Sumatera. Huber, L., 2003, Validation of Analytical Methods and Processes, in Nash, R.A., and Wachter, A.H., Pharmaceutical Process Validation, an International Third Edition, Revised and Expanded, Marcell Dekker, Inc., USA, pp.518520. Larson, Raghuraman, and Wiencek, 1994, Electrical and chemical demulsification techniques for microemulsion liquid membranes, Journal of Membrane Science, Volume 91, Issue 3, 1 June 1994, pp.231–248 Kowalska, T., 2003, Encyclopedia of Chromatography, Marcell Dekker Inc, New York, pp.1524. Malahyde Information Systems, 1998, Counterpain® Balm, http://home.intekom.com/pharm/bm_squib/countpn.html, diakses 22 September 2011 Mitra, Somenath, 2003, Sample Preparation Techniques in Analytical Chemistry, Wiley-Interscience, New Jersey Mulja, H.M., dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, Airlangga University Press, Surabaya, hal. 225, 231, 232. T.A., 2011, Condensation Reactions of Esters, http://web1.uct.usm.maine.edu/~newton/Chy251_253/Lectures/EsterCon densations/ClaisenPrieviewFS.html, diakses tanggal 16 September 2011 Nurdjannah, N., Difersifikasi Penggunaan Cengkeh, Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pasca Panen Pertanian, Bogor Oder, R.R., 2005, Emulsions Breaking With Magnetic Fields, American Filtration Society, 18th Annual Conference, Atlanta, GA, April 10-13, 2005 Pecsok, R.L., Shield, L.D., Cairns, T., and McWilliam, I.G., 1976, Modern Methods of Chemical Analysis, 2nd Edition, John Wiley & Sons, Inc., Canada, pp. 51. Newton,

Rajaković, V.N and Skala, D.U, 2004, Demulsification based on the thermal treatment (cooling and heating) of W/O emulsions, Journal of Hemijska Industrija, ISSN 0367598X, Vol. 58, Issue 7-8, pp.343-350,


http://www.doaj.org/doaj?func=abstract&id=628719, diakses tanggal 18 April 2012. Rohman, A., 2009, Kromatografi untuk Analisis Obat, Graha Ilmu, Yogyakarta, hal.17-45. Rhodia, 2011, Methyl Salicylate, GPS Safety Summary, Rhodia Global product Strategy, pp.1-7. Rouessac, F. and Rouessac, A., 2007, Chemical Analysis : Modern Instrumentation Methods and Techniques, 2nd Edition, John Wiley & Sons Ltd., England, pp.17. Sastrohamidjojo, H., 2005, Kromatografi, Edisi ke-2, Liberty, Yogyakarta, pp. 2635. ScienceLab, 2005, Material Safety Data Sheet: Base - Vanishing Cream MSDS, Material Safety Data Sheet, pp.1-6. Secoadi, R., 2012, Uji Kemampuan Metode KLT-Densitometri Pada Penetapan Kadar Metil Salisilat dan Eugenol dalam Sediaan krim merek “x” , Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Sherma, J., and, Fried B., 1996, Handbook of Thin Layer Chromatography, 2nd Edition, Marcel Dekker, Inc.,pp.20. Snyder, L.R., Kirkland, J.J., and Glajch, J.L., 1997, Practical HPLC Method Development, 2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, pp.67, 161, 687- 691. Stahl, E., 1985, Drug Analysis by Chromatography and Microscopy, Penerbit ITB, Bandung, pp. 7. Syamsuni, 2006, Farmasetika Dasar dan Hitungan Farmasi ,102, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta Taisho Pharmaceutical Co., Ltd., 2010, New Markets, Growth Opportunities Annual Report 2010, Taisho Pharmaceutical Co., Ltd., Japan, pp.7. The British Pharmacopoeia Commission, 2011, British Pharmacopoeia 2011, Volume 3, The Department of Health, London, pp.A608-A610, A182A185, 2376. The Department of Health, 2010a, British Pharmacopoeia 2011, Volume 1, The Department of Health, London, pp. 871-872 The Department of Health, 2010b, British Pharmacopoeia 2011, Volume 2, The Department of Health, London, pp. 1425 The Department of Health, 2010c, British Pharmacopoeia 2011, Volume 3, The Department of Health, London, pp. 2376 Thompson, D., Norbeck, K., Olsson, L., Constantin-Teodosiu D., Van der Zee J., and Moldous P., 1988, Peroxidase-catalyzed Oxidation of Eugenol: Formation of a Cytotoxic Metabolite(s), The journal of biological chemistry, Vol. 264, No. 2, Issue of January 15, pp.1016-1021,1989. United States Pharmacopeial Convention, 2005, The United States Pharmacopeia, 28th edition, United States Pharmacopeial Convention Inc., Rockville, pp.2748-2751. Vogel, 1989, Textbook of Quantitative Chemical Analysis, 5th ed., Licensing Agency Ltd, 33-34 Alfred Place, London WClE 7DP


Wall, P. E., 2005, Thin-Layer Chromatography: a Modern Practical Approach, VWR International Ltd., Dorset, pp, 8, 10, 71, 79, 157. Watson, D.G., 1999, Pharmaceutical Analysis, Churchill Livingstone, London, pp. 202. Yuwono, M., and Indrayanto, G., 2005, Validation of Chromatographic Methods of Analysis, Profile of Drug Substances, Excipients, and Related Methodology, Elseiver Inc., pp 32, 243-259.


LAMPIRAN

61


Lampiran 1. Certificate of Analysis Baku Asam Salisilat


Lampiran 2. Certificate of Analysis Baku Eugenol


Lampiran 3. Data Pengambilan Bahan dan Perhitungan Konsentrasi Sebenarnya 1. Penimbangan Asam Salisilat (serbuk)

Kemurnian 99,8%

a. Perhitungan pengambilan asam salisilat Dibuat 20.000 ppm asam salisilat stok sebanyak 10 mL Maka asam salisilat yang diambil 20.000 mg = 0,2 g Menimbang setara 0,2 g asam salisilat :

b. Penimbangan stok kurva baku asam salisislat Asam Salisilat (g)

Kurva Baku

R1

R2

R3

Berat Kertas

0,2046

0,1966

0,2038

Berat Kertas + Zat

0,4050

0,3974

0,4047

Berat Kertas + Sisa

0,2046

0,1970

0,2047

Berat Zat

0,2004

0,2004

0,2000

0,1999992

0,1999992

0,1996

19999,9200

19999,9200

19960,0000

Berat Zat Murni (Berat Zat x 99,8%) Konsentrasi dalam 10 mL (ppm)

c. Penimbangan stok asam salisilat untuk validasi metode analisis baku tunggal dan campuran Asam Salisilat (g)

Validasi Metode Analisis

R1

R2

R3

R4

R5

Berat Kertas

0,1988

0,1940

0,1918

0,2020

0,2044

Berat Kertas + Zat

0,3995

0,3944

0,3922

0,4024

0,4048

Berat Kertas + Sisa

0,1991

0,1942

0,1919

0,2020

0,2046


Berat Zat Berat Zat Murni (Berat Zat x 99,8%) Konsentrasi dalam 10 mL (ppm)

0,2004

0,2007

0,2007

0,2004

0,2003

0,1999992

0,2002986

0,2002986

0,1999992

0,1998994

19999,9200

20029,8600

20029,8600

19999,9200

19989,9400

d. Penimbangan stok asam salisilat untuk baku adisi validasi metode analisis dalam matrik sampel Asam Salisilat (g)

Matriks Sampel

Berat Kertas

0,1966

Berat Kertas + Zat

0,3974

Berat Kertas + Sisa

0,1970

Berat Zat

0,2004

Berat Zat Murni (Berat Zat x 99,8%) Konsentrasi dalam 10 mL (ppm)

0,1999992 19999,9200

2. Pengambilan eugenol (cair)

Kemurnian 99% Berat jenis (ρ) =

a. Perhitungan pengambilan eugenol Dibuat 20.000 ppm eugenol stok dalam 10 mL Maka eugenol yang diambil 20.000 mg = 0,2 g Setara dengan

Mengambil setara dengan 0,187 μL :

b. Perhitungan konsentrasi eugenol Volume zat yang diambil 189 μL = 0,189 mL Volume zat murni (volume zat yang diambil x kemurnian) =


Berat zat murni (volume zat murni x ρ) = Konsentrasi dalam 10 mL = 19964,6370 ppm 3. Pembuatan seri konsentrasi a. Asam salisilat i. Perhitungan volume pengambilan pembuatan seri konsentrasi kurva

baku C1 x V1 = C2 x V2

Konsentrasi teoritis (C2) (ppm) 816 884 952 1020 1088 1156 1224

Konsentrasi Larutan Stok (C1) (ppm)

Volume Akhir (V2) (mL)

20.000

5

Volume Pengambilan (V1) (mL) 0,204 0,221 0,238 0,255 0,272 0,289 0,306

Volume Pengambilan (V1) (μL) 204 221 238 255 272 289 306

ii. Perhitungan volume pengambilan pembuatan seri konsentrasi baku

tunggal dan campuran (validasi) C1 x V1 = C2 x V2

Konsentrasi teoritis (C2) (ppm) 816 1020 1224



20.000

5

Volume Pengambilan (V1) (mL) 0,204 0,255 0,306

Volume Pengambilan (V1) (μL) 204 255 306

iii. Perhitungan volume pengambilan pembuatan konsentrasi baku adisi

pada matriks sampel (validasi) Konsentrasi adisi 5000 ppm C1 x V1 = C2 x V2 20000 ppm x V1 = 5000 ppm x 5 mL V1 = 1,250 mL = 1250 μL

b. Eugenol i. Perhitungan volume pengambilan pembuatan seri konsentrasi kurva

baku C1 x V1 = C2 x V2

Konsentrasi teoritis (C2) (ppm) 560 600 640



20.000

5




680 720 760 800

ii.

0,170 0,180 0,190 0,200

170 180 190 200

Perhitungan volume pengambilan pembuatan seri konsentrasi baku tunggal dan campuran (validasi) C1 x V1 = C2 x V2 Konsentrasi teoritis (C2) (ppm) 560 680 800



20.000

5



iii. Konsentrasi baku adisi pada matriks sampel (validasi)

Konsentrasi adisi 3000 ppm C1 x V1 = C2 x V2 20000 ppm x V1 = 3000 ppm x 5 mL V1 = 0,750 mL = 750 μL

4. Perhitungan konsentrasi yang sebenarnya a. Asam salisilat i. Konsentrasi kurva baku Replikasi 1 dan 2

C1 x V1 = C2 x V2

Konsentrasi terhitung (C2) (ppm) 815,9967 883,9965 951,9962 1019,9959 1087,9956 1155,9954 1223,9951



19999,9200

5



Volume Pengambilan (V1) (mL) 0,204 0,221 0,238 0,255 0,272 0,289

Volume Pengambilan (V1) (μL) 204 221 238 255 272 289

ii. Konsentrasi kurva baku Replikasi 3

C1 x V1 = C2 x V2

Konsentrasi terhitung (C2) (ppm) 814,3680 882,2320 950,0960 1017,9600 1085,8240 1153,6880



19960

5


1221,5520

0,306

306

iii. Konsentrasi baku tunggal dan campuran (validasi) Replikasi 1

dan 4 C1 x V1 = C2 x V2

Konsentrasi terhitung (C2) (ppm) 815,9967 1019,9959 1223,9951



19999,9200

5



iv. Konsentrasi baku tunggal dan campuran (validasi) Replikasi 2

dan 3 C1 x V1 = C2 x V2




20029,8600

5



v. Konsentrasi baku tunggal dan campuran (validasi) Replikasi 5

C1 x V1 = C2 x V2




19989,9400

5


vi. Konsentrasi baku adisi pada matriks sampel (validasi)

Konsentrasi adisi teoritis 5000 ppm C1 x V1 = C2 x V2 19999,9200 ppm x 1,250 mL = C2 x 5 mL C2 = 4999,98 ppm

b. Eugenol i. Konsentrasi kurva baku Replikasi 1, 2, dan 3

C1 x V1 = C2 x V2



Konsentrasi teoritis (C2) (ppm) 559,0098 598,9391 638,8684 678,7977 718,7269 758,6562 798,5855

ii.



19964,6370

5



Konsentrasi baku tunggal dan campuran (validasi) Replikasi 1, 2, 3, 4, dan 5 C1 x V1 = C2 x V2 Konsentrasi teoritis (C2) (ppm) 559,0098 678,7977 798,5855



19964,6370

5


iii. Konsentrasi baku adisi pada matriks sampel (validasi)

Konsentrasi adisi teoritis 3000 ppm C1 x V1 = C2 x V2 19964,6370 ppm x 0,750 mL = C2 x 5 mL C2 = 2994,6956 ppm

Lampiran 4. Perhitungan Indeks Polaritas Fase Gerak Komposisi fase gerak Toluena : Etil Asetat : Metanol (65,2 : 2,4 : 32,4) Nilai Indeks Polaritas Toluena

= 2,4

Etil Aseat

= 4,4

Metanol

= 5,1

Perhitungan Indeks Polaritas



Pelarut

Perhitungan

Nilai Polaritas Pelarut dalam komposisi

Toluena

1,5648

Etil Asetat

0,1056

Metanol

1,6524 TOTAL

3,3228

Lampiran 5. Spektra Panjang Gelombang Asam Salisilat dan Eugenol dengan Perbandingan 1,5 : 1 pada Tiga Tingkat Konsentrasi Rendah, Sedang, dan Tinggi

Lampiran 6. Standar Operasional Prosedur (SOP) Analisis Kuantitatif



Lampiran 7. Densitogram Seri Kurva Baku Asam Salisilat Replikasi 1











Lampiran 10. Data Penentuan Kurva Baku Asam Salisilat

Replikasi 1 Konsentrasi AUC (ppm) 816 17027,4 884 17980,4 952 19112,2 1020 20187,3 1088 20737,4 1156 21662 1224 23141,4

Asam Salisilat Replikasi 2 Konsentrasi AUC (ppm) 816 18377,7 884 19249,4 952 20188,1 1020 20932,4 1088 21992,4 1156 23125,2 1224 24054,1

Replikasi 3 Konsentrasi AUC (ppm) 816 17893 884 18781,1 952 20102,6 1020 21305,5 1088 21901,7 1156 23068,7 1224 24463,3

a b r r2

a b r r2

a b r r2

53370,0143 14,3542 0,9957 0,9914

6889,3107 13,9628 0,9986 0,9972

4956,6286 15,8010 0,9969 0,9938


Lampiran 11. Persamaan Regresi Linear dan Gambar Grafik Seri Kurva Baku Asam Salisilat 1. Replikasi 1 y= 14,3542x + 53370,0143

2. Replikasi 2 (yang digunakan) y= 13,9628x + 6889,3107


3. Replikasi 3 y= 15,8010x + 4956,6286

Lampiran 12. Densitogram Seri Kurva Baku Eugenol Replikasi 1











Lampiran 15. Data Penentuan Kurva Baku Eugenol Replikasi 1 Konsentrasi AUC (ppm) 560 6270,9 600 6463,9 640 6631,4 680 6847,1 720 7082,3 760 7307,1 800 7461 a 3400,9143 b 5,0961 r 0,9986 r2 0,9972

Eugenol Replikasi 2 Konsentrasi AUC (ppm) 560 6099,7 600 6371,7 640 6687,6 680 6838,6 720 7271,2 760 7341,3 800 7634,4 a 2565,025 b 6,3633 r 0,9929 r 0,9858

Replikasi 3 Konsentrasi AUC (ppm) 560 5790,8 600 6081,8 640 6275,2 680 6462 720 6645,9 760 6827,2 800 7017,6 a 3078,2036 b 4,9481 r 0,9971 r2 0,9942

Lampiran 16. Persamaan Regresi Linear dan Gambar Grafik Seri Kurva Baku Eugenol 1. Replikasi 1 (yang digunakan) y= 5,09607x + 3400,9143


2. Replikasi 2 y= 6,3633x + 2565,025

3. Replikasi 3 y= 4,9481x + 3078,2036

Lampiran 17. Densitogram Baku Tunggal Asam Salisilat (Validasi Metode Analisis)






Lampiran 18. Densitogram Baku Tunggal Eugenol (Validasi Metode Analisis)





Lampiran 19. Densitogram Baku Campuran Asam Salisilat dan Eugnol (Validasi Metode Analisis)





Lampiran 20. Perhitungan %Recovery %Recovery =

x 100%

a. Asam salisilat Baku yang ditambahkan sebanyak 816 ppm, 1020 ppm, 1224 ppm. Kadar sebelum ditambahkan adalah 243,0379 ppm Kadar total (ppm) 1083,901 1110,013 1120,033 1212,815 1225,864 1235,754

Recovery 103,047 106,247 85,979 95,076 80,296 81,104 91,958

Rata-rata %Recovery untuk asam salisilat adalah sebesar 91,958%

b. Eugenol Baku yang ditambahkan sebanyak 560 ppm, 680 ppm, dan 800 ppm. Kadar sebelum ditambahkan adalah sebesar 459,5474 ppm Kadar total (ppm) Recovery 690.9218 41.317 764.9396 54.534 777.8711 46.812 766.9804 45.211 729.5594 33.751 731.0194 33.943


42.595

Rata-rata %Recovery untuk eugenol adalah sebesar 42,595%


BIOGRAFI PENULIS Penulis skripsi yang berjudul “Validasi Metode Analisis pada

Campuran Eugenol dan Metil salisilat

dalam sediaan krim merek “x” Menggunakan Metode KLT Densitometri”, memiliki nama lengkap Dhimas Bayu Kinasih. Anak dari pasangan bapak A.J Bambang Budiono dan ibu Ester Ambar Setyaningsih yang lahir di Serang, 24 Januari 1991. Pendidikan formal yang ditempuh penulis meliputi: TK Maitreya (1994-1996), SDN Nagasari V Karawang (1996-2002), SMPN I Karawang (2002-2005), SMA Pangudi Luhur Van Lith Muntilan (2005-2008) dan melanjutkan kuliah di Fakultas farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2008. Selama menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, penulis pernah menjadi asisten praktikum Kromatografi, serta aktif dalam beberapa kepanitian, yaitu menjadi panitia seminar HIV AIDS pada tahun 2008, seksi Humas PPnEC 2010, seksi Bandzen Titrasi 2009, Seksi Perlengkapan Pelepasan Wisuda 2009.

106

VALIDASI METODE ANALISIS PADA CAMPURAN EUGENOL DAN METIL SALISILAT DALAM SEDIAAN KRIM MEREK X MENGGUNAKAN METODE KLT-DENSITOMETRI SKRIPSI

Recommend Documents