Validační protokol
Validační protokol LT CRP – HS II (ADVIA 1800)
Datum vydání: Zpracoval: Pracoviště:
9.5.2011 Ing. Luděk Šprongl Centrální laboratoř, Šumperská nemocnice a.s.
Validační protokol
Validační protokol LT CRP – HS II 1. CÍL, PŘEDMĚT A PROVEDENÍ VALIDACE Cíl:
Ověření analytických znaků soupravy LT CRP-HS II, které jsou uvedeny v pracovním návodu, při použití soupravy na biochemickém analyzátoru ADVIA 1800
Předmět validace: Použití reagencie LT CTP-HS II (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonsko) na analyzátoru ADVIA 1800 (Siemens Medical Solutions, Tarrytown, USA). Místo validace:
Centrální laboratoř, Šumperská nemocnice a.s.
Odpovědná osoba: Doba provedení:
Ing. Luděk Šprongl,
[email protected] duben 2011
2. POUŢITÝ MATERIÁL Přístroj: ADVIA 1800 (Siemens Medical Solutions, Tarrytown, USA). Validovaná reagencie: LT CRP-HS II (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonsko) Princip metody: Souprava na stanovení C-reaktivního proteinu imunoturbidimetrickou metodou je založena na reakci tohoto proteinu se specifickou protilátkou proti lidskému C-reaktivnímu proteinu za přítomnosti latexových částic. Vznikající imunokomplexy způsobují růst zákalu, který je přímo úměrný koncentraci C-reaktivního proteinu ve vzorku a lze jej měřit při 340 nm. Kalibrační materiál: LT CRP-HS Calibrator Set (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonsko) Kontrolní materiály: Liquicheck Immunology controls (BioRad, Irvine, USA) Reagencie pro srovnání: CRP II ADVIA (Siemens Medical Solutions, Tarrytown, USA). Reagencie pro hodnocení inerferencí: Hemoglobin (Sigma, USA), Bilirubin,mixed isomers (Sigma, USA), Intralipid (Infusia, ČR) Vzorky: Vybraná anonymní séra a jejich pooly z provozu CL Šumperské nemocnice a.s.
3. VÝSLEDKY Jednotlivé údaje jsou uvedeny v přílohách. Shrnutí výsledků: 3.1. MEZ DETEKCE
Změří se 20 krát v sérii blank, vypočte se směrodatná odchylka výsledků měření. Trojnásobek směrodatné odchylky přepočítaný pomocí kalibračního faktoru na koncentraci daného analytu je považován za mez detekce. LD = 3 sbl,
Sbl = 0,00026 tj. 0,04 mg/l
Validační protokol Výsledná mez detekce je 0,12 mg/l 3.2. MEZ STANOVITELNOSTI -
mez stanovitelnosti vyjádřena jako LQ = 9,12 sbl , (hodnota nejistoty = 10%)
Sbl = 0,00026 tj. 0,04 mg/l Výsledná mez stanovitelnosti je 0,39 mg/l
3.3. LINEARITA Jako vzorky se použily pacientské vzorky. Základem byl vzorek o nulové koncentraci měřeného analytu, označený jako L (low) a vzorek o extrémně vysoké koncentraci, která je v oblasti předpokládané horní meze pracovního rozsahu měření, označený jako H (high). Připravila se řada 5 vzorků: vzorek 1 vzorek 2 vzorek 3 vzorek 4 vzorek 5
jen H 75 % H + 25 % L 50 % H + 50 % L 25 % L + 75 % L jen L
Každý vzorek se změřil 3 krát. Vypočítány byly průměrné hodnoty každého ze 3 měření a byl sestrojen se graf (příloha) Zjištěná linearita byla minimálně do 420 mg/l 3.4. VÝTĚŢNOST K pacientskému vzorku o nízké koncentraci se přidalo známé jednak 10% objemu vzorku o známé vysoké koncentraci a jednak 10% nulového kalibrátoru Takto se připravil 5 dvojic vzorků, měřilo se v dubletu. Spočítána byla se výtěžnost R v procentech. Zjištěná výtěžnost je 99,5 % 3.5. OPAKOVATELNOST Použity pacientské vzorky - 20 měření každého vzorku během jednoho dne, v singletu - vypočten se průměr, směrodatná odchylka SD a variační koeficient CV Výsledky
Validační protokol INTRAASSAY n = 20 Vzorek 1 Vzorek 2
Průměr (mg/l)
SD (mg/l)
CV (%)
6,585 51,01
0,106 0,333
1,61 0,65
3.6. MEZILEHLÁ PRECIZNOST Měřeno na kontrolních materiálech s deklarovanou cílovou hodnotou na 2 různých koncentracích. Měření bylo provedeno v průběhu 10 všedních dnů po sobě ve dvou sériích s časovým rozdílem minimálně 2 hodiny. Následně vypočten průměr, SD a CV INTERASSAY
Průměr (mg/l)
SD (mg/l)
CV (%)
n = 20 Vzorek 1 Vzorek 2
6,48 49,30
0,089 0,36
1,38 0,74
3.7. PRAVDIVOST (bias) Využity výsledky z měření výtěžnosti Výsledky: -0,5 % 3.8. SROVNÁNÍ - měření na 40 vzorcích pacientů - Každý vzorek se oběma metodami analyzoval 2 krát, a to jako 2 různé vzorky ve 2 různých bězích (tj. ne hned za sebou). Doba měření byla 5 dní, - vyhodnocení: lineární regresní analýza podle Passing-Babloka Výsledky: N = 40 r = 0,999
y = 1,008x + 0,88 mg/l
3.9. INTERFERENCE Bilirubin – do 1,0 g/l Hemoglobin – do 10 g/l TG – do 5 mmol/l
3.10.STABILITA V PŘÍSTROJI Bylo prováděno měření kontrol na dvou hladinách s nedoplňovanou a neměněnou reagencií a hodnoceno, zda odchylka od cílové hodnoty nepřekračuje 10%. Stabilita reagencie v přístroji je minimálně 6 týdnů. Po celou dobu není nutné metodu rekalibrovat.
Validační protokol
4. ZÁVĚR Bylo ověřeno, ţe souprava LT CRP-HS II při pouţití na analyzátoru ADVIA 1800 splňuje všechny analytické znaky garantované výrobcem v pracovním návodu. Metoda současně odpovídá veškerým poţadavkům, kladeným na soupravu při jejím pouţití v laboratořích klinické biochemie.
Zpracoval:
Ing. Luděk Šprongl
V Šumperku 05.05.2011
