i
LAPORAN HASIL PENELITIAN DOSEN PEMULA
POTENSI TUMBUHAN MANGROVE DAUN JERUJU ( Acanthus ilicifolius ) SEBAGAI OBAT ANTIDIABETES Tahun ke 1 dari rencana 1 tahun
TIM PENGUSUL
1. Elmiawati Latifah, M.Sc., Apt (Ketua, NIDN: 0614058401) 2. Prasojo Pribadi., M.Sc. Apt (Anggota, NIDN: 0607038301) 3.
Dhuta Sukmarani, M.Si (Anggota, NIDN 0609088701)
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MAGELANG NOVEMBER 2016
i
ii
HALAMAN PENGESAHAN
ii
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan segala kenikmatan dan kemudahan sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan akhir penelitian ini. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan laporan akhir penelitian ini, penulis
banyak
mendapat arahan dari pembimbing dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis menyampaikan terima kasih kepada: 1. Puguh Widiyanto, S.Kp, M.Kep selaku Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Magelang yang telah memberikan kesempatan kepada penulis untuk mengadakan penelitian. 2. Dr. Suliswiyadi, M.Ag selaku Kepala LP3M yang telah membantu kelancaran penulisan Proposal laporan penelitian ini. 3. Semua pihak yang telah berperan dalam proses penyusunan laporan kemajuan penelitian ini dan tidak dapat penulis sebutkan satu persatu Penulis menyadari bahwa laporan kemajuan ini masih jauh dari sempurna, untuk itu saran dan kritik sangat peneliti harapkan demi kesempurnaan penelitian ini.
Ketua Peneliti
Elmiawati Latifah., M.Sc. Apt NIDN.0614058401
iii
iv
DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ......................................................................................................................................... i HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................................................................... ii KATA PENGANTAR ..................................................................................................................................... iii DAFTAR ISI ................................................................................................................................................... iv RINGKASAN ................................................................................................................................................... v BAB 1 PENDAHULUAN ................................................................................................................................ 1 A.
Latar belakang....................................................................................................................................... 1
B.
Rumusan masalah ................................................................................................................................. 3
C.
Tujuan Penelitian .................................................................................................................................. 3
D.
Manfaat Penelitian ................................................................................................................................ 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ....................................................................................................................... 5 A.
Jeruju (Acanthus ilicifolius L) .............................................................................................................. 5
B.
Diabetes Mellitus .................................................................................................................................. 7
C.
Streptozotocin (STZ) .......................................................................................................................... 10
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ....................................................................................................... 11 A.
Tahapan Penelitian .............................................................................................................................. 11
B.
Lokasi penelitian ................................................................................................................................. 14
C.
Perubahan yang diamati ...................................................................................................................... 14
D.
Model Penelitian ................................................................................................................................. 15
E.
Rancangan Penelitian.......................................................................................................................... 15
F.
Analisis Data ....................................................................................................................................... 15
BAB IV MANAJEMEN PENELITIAN ......................................................................................................... 16 B.
Jadwal Kegiatan Penelitian ................................................................................................................. 16
C.
Pendanaan ........................................................................................................................................... 17
BAB 5 HASIL YANG DICAPAI DAN PEMBAHASAN............................................................................. 19 A.
Organoleptis Ekstrak Daun Jeruju ...................................................................................................... 19
B.
Hasil Pengukuran Glukosa Darah & Identifikasi Saponin dan Tanin ................................................ 19
C.
PEMBAHASAN ................................................................................................................................. 21
BAB VI ........................................................................................................................................................... 31 KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................................................................................... 31 A.
Kesimpulan ......................................................................................................................................... 31
B.
Saran ................................................................................................................................................... 31
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................................................................... 32
iv
v
RINGKASAN Diabetes mellitus (DM) adalah sekelompok penyakit yang ditandai oleh tingginya tingkat glukosa dalam darah akibat dari kegagalan dalam produksi insulin atau kerja insulin, atau keduanya. Indonesia memiliki sekitar 25.000 - 30.000 spesies tumbuhan yang merupakan 80% dari jenis tumbuhan di dunia dan 90 % dari jenis tumbuhan di Asia. Keistimewaan Acanthus ilicifolius dibandingkan dengan spesies yang lain bila digunakan untuk obat antidiabetes yaitu A. ilicifolius memiliki kandungan metabolit sekunder lain yang juga baik untuk kesehatan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak daun Jeruju (A. illficolius) terhadap penurunan kadar glukosa darah puasa tikus serta mengetahui dosis yang paling efektif dari ekstrak A. ilcifolius terhadap penurunan kadar glukosa darah puasa tikus. Rancangan penelitian yang digunakan adalah metode eksperimental. Tahapan dari penelitian ini terdiri dari penyiapan sampel, identifikasi tumbuhan A. ilcifolius, ekstraksi daun A. ilcifolius, analisis kualitatif saponin dan tanin menggunakan metode kromatografi lapis tipis kemudian membagi ekstrak etanol A. ilcifolius dengan berbagai dosis, uji antidiabetes pada tikus yang diinduksi streptozotocin dengan mengelompokkan 15 sampel hewan uji menjadi 2 kelompok kontrol dan 3 kelompok perlakuan dan dilakukan pengukuran kadar glukosa darah, dilanjutkan analisis data menggunakan ANAVA. Aktivitas terendah terjadi pada kelompok kontrol negatif, meningkat pada dosis 500 mg/kgBB, kontrol positif dan dosis 250 mg/kgBB sedangkan yang tertinggi terjadi pada kelompok dosis 125 mg/kgBB. Hasil uji statistik dengan parameter penurunan kadar glukosa darah puasa tikus jantan galur wistar, pada kelompok ekstrak daun jeruju dengan dosis 125 mg/kgBB dan 250 mg/kgBB menunjukkan hasil yang berbeda bermakna dengan kelompok kontrol negatif (p<0.05), sehingga dapat diambil kesimpulan bahwa ekstrak daun jeruju dengan dosis 125 mg/kgBB dan 250 mg/kgBB mempunyai aktivitas antidiabetes. Kata kunci : Ekstrak, Daun Jeruju, Antidiabetes,Tikus Jantan Galur Wistar
v
1
BAB 1 PENDAHULUAN
A. Latar belakang Secara epidemiologi, diperkirakan bahwa pada tahun 2030 prevalensi Diabetes Melitus (DM) di Indonesia mencapai 21,3 juta orang (Diabetes Care, 2004). Sedangkan hasil Riset kesehatan Dasar (Riskesdas) tahun 2007, diperoleh bahwa proporsi penyebab kematian akibat DM pada kelompok usia 45-54 tahun di daerah perkotaan menduduki ranking ke-2 yaitu 14,7%. Pada daerah pedesaan, DM menduduki ranking ke-6 yaitu 5,8%.
Resiko
meningkatnya
penyakit
diabetes
mellitus
berhubungan
dengan
meningkatnya umur, obesitas dan kekurangan gerakan fisik atau olahraga. Diabetes mellitus (DM) adalah sekelompok penyakit yang ditandai oleh tingginya tingkat glukosa dalam darah akibat dari kegagalan dalam produksi insulin atau kerja insulin, atau keduanya (NDEP, 2014). DM adalah sindroma yang disebabkan oleh kekurangan insulin baik absolut maupun relatif. DM, secara klinik dikarakterisasi oleh gejala intoleransi glukosa dan perubahan dalam metabolisme lipid dan protein. Abnormalitas metabolisme, terutama hiperglikemia, dapat menyebabkan komplikasi lain seperti neuropati, retinopati, dan nefropati (Carlisle, 2005). Sasaran utama terapi DM adalah mencegah terjadinya komplikasi lebih lanjut baik pada makrovaskuler dan mikrovaskuler, serta meningkatkan kualitas hidup pasien dengan mengendalikan kadar glukosa darah (DiPiro et al., 2005). Pemakaian obat modern bagaikan pisau bermata dua, disatu sisi berfungsi sebagai obat disisi lain dapat berfungsi sebagai racun, sehingga saat ini perlu dikembangkan obat yang berasal dari bahan alam dengan efek samping yang lebih rendah dibandingkan obat modern. Pengobatan yang biasa digunakan untuk penderita diabetes misalnya dengan pengobatan herbal. Pengobatan berbasis tumbuhan telah menjadi tradisi dan budaya dalam suatu etnis di berbagai wilayah di dunia, misalnya pengobatan tradisional Cina, Ayurveda di India, Unani di Arab, dan Serat Centhini pada suku Jawa di Indonesia (Subbarayappa, 2001; Sukenti et al., 2004). Tidak hanya etnis-etnis lokal di wilayah yang
1
2
jauh dari pusat kesehatan, masyarakat modern di negara maju juga mengenal pengobatan tradisional. Sebanyak 75% populasi Perancis, 70% populasi Kanada, 48% populasi Australia, 42% populasi Amerika Serikat pernah menggunakan pengobatan tradisional berbasis tumbuhan setidaknya sekali dalam hidup mereka (WHO, 2002). Pengobatan tradisonal merupakan akar dari pengobatan modern sebab perkembangan industri farmasi modern dalam hal penemuan obat-obatan baru banyak berasal dari pengetahuan tradisional dari beragam masyarakat dan kebudayaan lokal (Mans, 2013). Beberapa spesies tumbuhan telah digunakan untuk pengobatan diabetes. Penelitian mengenai tumbuhan yang dapat digunakan untuk mengobati diabetes di asiapasifik, misalnya kayu manis (Cinnamomum cassia dan Cinnamomum zeylanicum) (Verspohl et al., 2005), Piper sarmentosum Roxb di Malaysia dan Thailand selatan (Peungvicha et al., 1998), teratai India (Nelumbo nucifera) (Mukherjee et al., 1997), di Filipina ekstrak batang kapuk randu (Ceiba petandra) (Ladeji et al., 2003), di Malaysia ekstrak daun nipit kulit (Memecylon malabaricum) diketahui dapat digunakan untuk obat diabetes (Amalraj dan Ignacimuthu, 1998), Toona sinensis (Yu, 2002) dan masih banyak spesies lain yang dapat digunakan untuk mengobati diabetes dengan berbagai cara. Beberapa spesies mangrove pun dilaporkan dapat digunakan untuk mengobati diabetes. Diantaranya adalah molekul polisakarida yang ada dalam ekstrak daun bogem (Sonneratia alba) diidentifikasi menggunakan beberapa teknik kromatografi dan protonNuclear Magnetic Resonance spectrometry (H-NMR) dan hasil bioassay antidiabetes menggunakan Glucometer (SIMPDO), menunjukkan bahwa polisakarida tersebut menurunkan kadar gula darah sekitar 19,2 % pada 6 jam pertama dan meningkat hingga 66,9 % setelah 12 jam. Molekul polisakarida dari ekstrak daun S. alba ini diisolasi menggunakan fase reverse kolom gel C18 dengan eluen yang sangat polar (Morada et al., 2011). Ekstrak daun tangi (Ceriops decandra) juga dilaporkan memiliki aktivitas antidiabetes pada mencit yang diinduksi aloksan (Nabeel et al., 2010). Ekstrak akar jeruju (Acanthus ilicifolius) yang diberikan secara oral dapat menurunkan kadar glukosa dalam darah dan meningkatkan regenerasi sel β pada mencit yang dinduksi aloksan. Dosis yang diberikan yaitu 200 dan 400 mg/kg berat badan. Kandungan yang ada dalam akar A. ilicifolius diantaranya flavonoid, alkaloid, terpenoid, tanin dan steroid (Venkataiah et al., 2013).
3
Keistimewaan A. ilicifolius dibandingkan dengan spesies yang lain bila digunakan untuk obat antidiabetes yaitu A. ilicifolius memiliki kandungan metabolit skunder lain yang juga baik untuk kesehatan diantaranya antibakteri, antioksidan, antivirus, dapat membersihkan darah, mempercepat penyembuhan luka dan lain-lain (Krisdaphong et al., 2013; Bandaranayake, 1998). Ketersediaan di alam juga lebih melimpah dibandingkan dengan spesies mangrove yang laian karena sifatnya yang mudah berkembangbiak. A. ilicifolius memiliki kemampuan untuk menyebar secara vegetatif karena perakarannya yang berasal dari batang horizontal, sehingga membentuk bagian yang besar dan kukuh. Juga dapat berkembangbiak secara generatif, dengan kemungkinan bunga diserbuki oleh burung dan serangga, sehingga biji tertiup angin dan menyebar (Noor et al., 2006). Selama ini A. ilicifolius dianggap sebagai tumbuhan perdu yang tidak memiliki fungsi ekologis maupun tumbuhan pangan. Oleh karena itu, penelitian pengembangan mengenai pemanfaatan A. ilicifolius sebagai obat perlu selalu dilakukan untuk meningkatkan eksistensinya dan memberikan manfaat yang lebih untuk manusia. B. Rumusan masalah Apakah ekstrak daun Jeruju (A. ilcifolius) mampu menurunkan kadar glukosa darah pada tikus jantan galur Wistar yang diinduksi streptozotocin ? C. Tujuan Penelitian 1. Tujuan Umum Mengetahui potensi tumbuhan mangrove daun Jeruju (A. ilcifolius) sebagai obat antidiabetes 2. Tujuan Khusus a. Mengetahui pengaruh ekstrak daun Jeruju (A. ilicifolius) terhadap penurunan kadar glukosa darah puasa tikus b.
Mengetahui dosis yang paling efektif dari ekstrak daun Jeruju (A. ilicifolius) terhadap penurunan kadar glukosa darah puasa tikus
4
D. Manfaat Penelitian 1. Akan didapatkan hasil berupa efek penurunan kadar glukosa darah 2. Akan didapatkan informasi mengenai kandungan tanaman obat, khususnya kandungan dalam ekstrak
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA A. Jeruju (Acanthus ilicifolius L) 1. Taksonomi Jeruju dapat diklasifikasikan secara ilmiah sebagai berikut : Divisi
: Magnoliophyta
Kelas
: Magnoliopsida
Bangsa : Scrophulariales Suku
: Acanthaceae
Marga
: Acanthus
Jenis
: Acanthus ilicifolius L.
Gambar 2.1. Tumbuhan A. ilicifolius (Anonim, 2015)
5
6 Uraian tumbuhan
A. ilicifolius memiliki nama setempat jeruju hitam, daruyu, darulu, merupakan herba rendah, terjurai di permukaan tanah, kuat, agak berkayu, ketinggian hingga 2m. Cabang umumnya tegak tapi cenderung kurus sesuai dengan umurnya. Percabangan tidak banyak dan umumnya muncul dari bagian-bagian yang lebih tua. Akar udara muncul dari permukaan bawah batang horizontal. Daun merupakan dua sayap gagang daun yang berduri terletak pada tangkai. Permukaan daun halus, tepi daun bervariasi: zigzag/bergerigi besar-besar seperti gergaji atau agak rata dan secara gradual menyempit menuju pangkal. Buah memiliki warna hijau cerah saat masih muda dan permukaannya licin mengkilat. Bentuk buah bulat lonjong seperti buah melinjo (Noor et al., 2006). A. ilicifolius termasuk ke dalam golongan tumbuhan mangrove sejati, berupa semak herba tumbuhan bawah berkayu yang memiliki kemampuan bereproduksi secara vegetatif dengan akar yang menyebar secara horizontal, sehingga perkembangbiakannya mudah dan meluas. Sedangkan reproduksi secara generatif yaitu melalui pembentukan biji dari bunga yang diserbuki oleh burung ataupun serangga (Tomlinson, 1886). Distribusi A. ilicifolius menurut Duke (2006) yaitu meliputi estuaria di benua Asia dari India hingga Polinesia dan bagian utara Australia, dari Sungai Daly di barat hingga Sungai Fitzroy Queensland di timur. Noor et al., (2006) menambahkan penyebaran A. ilicifolius juga di Filipina dan Kepulauan Pasifik barat. Di Indonesia, A. ilicifolius terdapat hampir di seluruh Indonesia. Hutan mangrove terdekat dari lokasi peneliti yaitu di pantai selatan Segara Anakan Cilacap, dan pantai utara di Rembang. 2. Potensi A. ilicifolius sebagai obat Beberapa metabolit sekunder antara lain adalah alkaloid, flavonoid, tanin, steroid, saponin, polifenolat dan kuinon. Dalam dunia medis, tanin memiliki kemampuan antibakteri karena dapat merusak membran sel, menginaktivasi enzim dan menginaktivasi atau menghancurkan fungsi materi genetik bakteri (Ajizah, 2004). Selain antibakteri, tanin juga mampu menghambat pertumbuhan virus, bakteri, dan jamur, serta mempercepat penyembuhan luka (Chung et al., 1998). Steroid merupakan komponen aktif dalam tumbuhan yang telah digunakan untuk penyakit diabetes, gangguan menstruasi, antibakteri dan antivirus (Robinson, 1995). Di bidang farmasi, steroid banyak dimanfaatkan terkait fungsinya pada hormon reproduksi (Savithramma et al., 2011). Di bidang farmasi dan medis, flavonoid berfungsi sebagai antimikroba,
antivirus,
7
antioksidan, antihipertensi, merangsang pembentukan estrogen dan mengobati gangguan fungsi hati (Robinson, 1995). Mukherjee dalam Meshram, et al., 2013 juga melaporkan bahwa flavonoid berperan penting dalam aktivitas antidiabetes, yaitu menurunkan kadar g lukosa darah secara signifikan. Lima bentuk flavonoid, yaitu myrciacitrin I-V yang diisolasi dari daun Myrcia multiflora D.C (Myrtaceae) semuanya menunjukkan aktivitas antidiabetes (Jung, et al., 2006). Doughari (2012) yang menyebutkan bahwa, saponin memiliki aktivitas hipolipidemik dan antikanker. Aktivitas hipolipidemik dari saponin akan menurun`kan kadar lipid dalam tubuh sehingga insulin dapat berfungsi normal sebab menurut Australian Centre for Diabetes Strategies, 2004), peningkatan lipid dalam tubuh menyebabkan kerja insulin terhambat sehingga terjadi diabetes. B. Diabetes Mellitus 1. Definisi Diabetes mellitus adalah sindroma klinis heterogen yang ditandai dengan adanya peningkatan kadar glukosa darah (hiperglikemia) akibat defisiensi insulin baik relatif maupun absolut, dan atau hiperglukagonemia yang berhubungan dengan abnormalitas metabolisme karbohidrat, lemak dan protein (DiPiro et al., 2005). 2. Epidemiologi diabetes mellitus Diabetes mellitus (DM) tipe 1 yang disebabkan karena adanya gangguan autoimun berkembang pada masa anak-anak maupun awal kedewasaan. Penderita DM tipe 1 mencapai 10% dari semua kasus DM yang ada. Faktor genetik dan juga lingkungan merupakan penyebab yang paling umum, sedangkan adanya autoimun sel beta pankreas hanya kurang dari 10% populasi dan yang berkembang menjadi diabetes mellitus hanya kurang dari 1% nya (DiPiro et al., 2005). DM tipe 1 idiopatik adalah suatu bentuk diabetes yang disebabkan nonautoimun yang memerlukan pengobatan insulin secara intensif. Secara genetik, diabetes ini disebut maturity onset diabetes of youth (MODY). Penyebab sekunder terjadinya DM tipe 1 bisa dikarenakan gangguan endokrin seperti penyakit Cushing’s syndrome. Prevalensi DM tipe 1 meningkat pada 100 tahun terakhir ini, tetapi etiologi yang tidak jelas ini hanya terjadi sekitar 1%-2% dari semua kasus DM yang ada (DiPiro et al., 2005). Prevalensi DM tipe 2 mencapai 90% dari semua kasus DM yang ada dan di Amerika
8
Serikat 8,7% penderita DM tipe 2 berusia 20 tahun. Faktor resiko terjadinya DM tipe 2 dapat diidentifikasi, meliputi riwayat keluarga (orang tua dan saudara kandung penderita DM), obesitas (kelebihan berat badan ideal 20%), kurang aktivitas, ras, sebelumnya pernah mengalami gangguan toleransi glukosa, hipertensi (140/90 mm/Hg pada orang dewasa), high density lipoprotein (HDL) kolesterol 35 mg/dL dan atau level trigliserida ≥250 mg/dL, riwayat mengalami diabetes gestasional atau melahirkan bayi dengan berat >9 pound, dan riwayat penyakit kardiovaskuler. Prevalensi DM tipe 2 meningkat seiring dengan pertambahan usia dan di Amerika Serikat lebih banyak terjadi pada wanita dibandingkan pria (DiPiro et al., 2005). 3. Etiologi (1) Diabetes mellitus tipe 1 Diabetes mellitus tipe 1 dicirikan dengan adanya destruksi dari sel beta pankreas yang (i) disebabkan suatu proses autoimun, contoh immune mediated type 1, atau (ii) etiologinya belum begitu diketahui secara pasti, contoh idiopathic type 1. Orang dengan penderita diabetes mellitus tipe 1 akan bergantung pada injeksi insulin yang seimbang, diet dan olahraga untuk mengontrol level kadar glukosa darahnya (Tuomehlito et al., 2001). Sebagai penanda untuk diabetes mellitus tipe 1 yang diperantarai oleh sistem imun (type 1 immune-mediated diabetes) meliputi autoantibodi pada islet cell (ICAs), insulin (IAAs), glutamic acid decarboxylase (GAD), dan tyrosine phosphatases IA-2a dan IA-2b. Pada orang Eropa, mayoritas diabetes mellitus tipe 1 adalah karena immune-mediated. Diabetes mellitus tipe 1 idiopathic lebih sering terjadi pada orang Afrika dan Asia (DiPiro et al., 2005). Diabetes mellitus tipe 1 khususnya berkembang pada anak-anak dan pada orang dewasa (Tuomehlito et al., 2001). (2) Diabetes mellitus tipe 2 Diabetes mellitus tipe 2 dicirikan dengan adanya gangguan aksi dan sekresi insulin pada sel beta pankreas, salah satunya biasanya dominan terhadap yang lain. Alasan spesifik perkembangan rusaknya aksi dan sekresi insulin belum begitu diketahui. Diabetes mellitus tipe 2 merupakan bentuk diabetes yang paling umum terjadi. Frekuensi kejadian diabetes mellitus tipe 2 ini bervariasi untuk tiap ras atau etnik. Seringkali diabetes mellitus tipe 2 ini berhubungan erat dengan predisposisi familial dan genetik (DiPiro et al., 2005).
9
Resiko meningkatnya penyakit diabetes mellitus tipe 2 berhubungan dengan meningkatnya umur, obesitas dan kekurangan gerakan fisik atau olahraga. Resiko ini lebih sering terjadi pada wanita yang sebelumnya mengalami gestasional diabetes dan pada individu yang hipertensi dan dislipidemia (DiPiro et al., 2005). 4. Tanda dan Gejala Pasien diabetes mellitus tipe 1 biasanya kurus dan mudah berkembang menjadi diabetes ketoasidosis jika insulin tidak diberikan atau jika pasien mengalami stress yang berat. Dua puluh sampai empat puluh persen pasien diabetes mellitus tipe 1 menunjukkan gejala klinis berupa ketoasidosis setelah beberapa hari sebelumnya mengalami poliura (banyak kencing), polidipsia (banyak minum), polifagia (banyak makan), dan terjadi penurunan berat badan. Tidak ada resistensi insulin, karena pasien mengalami defisiensi insulin secara absolut sehingga untuk terapi pengobatan mutlak diperlukan insulin. Onset terjadinya diabetes mellitus lebih cepat bila dibandingkan dengan onset pada pasien diabetes mellitus tipe 1. Pasien diabetes mellitus tipe 1 jarang terjadi komplikasi penyakit baik pada mikrovaskuler maupun makrovaskuler (DiPiro et al., 2005). Pasien diabetes mellitus tipe 2 sering tidak terdiagnosa karena hiperglikemia berlanjut secara bertahap, onsetnya berjalan lambat dan biasanya tidak menunjukkan sekumpulan gejala klinis, namun komplikasi penyakit pada makrovaskuler maupun mikrovaskuler sangat mungkin terjadi setelah beberapa tahun terdiagnosa. Diagnosis diabetes mellitus tipe 2 sama dengan gejala klinis yang nampak pada diabetes mellitus tipe 1 berupa kelelahan, poliuria, polifagia, dan polidipsia, tetapi penurunan berat badan yang signifikan tidak terlihat. Pada dasarnya pasien tidak memerlukan terapi insulin dengan segera jika kadar glukosa darah masih dapat dikendalikan dengan obat antidiabetes oral (DiPiro et al., 2005). 5. Pemeriksaan dan diagnosis Pemeriksaan darah memperlihatkan peningkatan kadar glukosa darah lebih dari 140 mg per 100 ml pada dua kali pengukuran terpisah. Glukosa darah meningkat karena sebagian besar sel tidak dapat memasukkan glukosa ke dalam sel tanpa insulin dan terjadinya perangsangan glukoneogenesis (Corwin, 2000). Di Amerika Serikat resiko terjadinya retinopati yaitu jika kadar glukosa darah pada saat puasa 99-116 mg/dL, 2 jam setelah makan 125-185 mg/dL dan kadar hemoglobin A1C (HbA1C) 5,9%-6% (DiPiro et al., 2005).
10
Kriteria untuk diagnosis diabetes mellitus menurut American Diabetes Association (ADA) meliputi pengamatan terhadap gejala-gejala diabetes (poliura, polidipsia, polifagia, dan terjadi penurunan berat badan) dan juga kadar glukosa darah 200 mg/dL, atau bila kadar glukosa darah saat puasa 126 mg/dL, atau kadar glukosa darah 2 jam setelah makan 200 mg/dL (DiPiro et al., 2005). Tabel 2.1. Tujuan utama terapi diabetes mellitus (DiPiro et al., 2005) Parameter biokimia
ADA (American Diabetes Association)
Hemoglobin A1C Kadar glukosa darah puasa Kadar glukosa darah setelah makan
<7% 90-130 mg/dL <180 mg/dL
ACE (American College of Endocrinology) dan AACE (American Association of Clinical Endocrinologys) 6.5% <110 mg/dL <140 mg/dL
C. Streptozotocin (STZ) Streptozotosin (STZ) atau 2-deoksi-2-[3-(metil-3-nitrosoureido)-D-gluko piranose] diperoleh dari Streptomyces achromogenes dapat digunakan untuk menginduksi baik DM tipe 1 maupun tipe 2 pada hewan uji. Dosis yang digunakan untuk menginduksi DM tipe 1 untuk intravena adalah 40-60 mg/kg, sedangkan dosis intraperitoneal adalah lebih dari 40 mg/kg BB. STZ juga dapat diberikan secara berulang, untuk menginduksi DM tipe 1 yang diperantarai aktivasi sistem imun. Untuk menginduksi DM tipe 2, STZ diberikan intravena atau intraperitoneal dengan dosis 100 mg/kg BB pada tikus yang berumur 2 hari kelahiran, pada 8-10 minggu tikus tersebut mengalami gangguan respon terhadap glukosa dan sensitivitas sel β terhadap glukosa. Di lain pihak, sel α dan δ tidak dipengaruhi secara signifikan oleh pemberian streptozotosin pada neonatal tersebut sehingga tidak membawa dampak pada perubahan glukagon dan somatostatin. Patofisiologis tersebut identik pada DM tipe II (Bonner-Weir et al., 1981; Szkudelski, 2001; Jackerott et al., 2006; Tormo et al., 2006).
BAB III METODOLOGI PENELITIAN
A. Tahapan Penelitian 1. Bahan Uji a. Identifikasi Tumbuhan Jeruju (A. ilicifolius) Jeruju (A. ilicifolius) diidentifikasi secara organoleptis dan mikroskopik dengan Jeruju yang telah diidentifikasi sebelumnya di laboratorium Taksonomi Tumbuhan Fakultas Biologi Universitas Jendral Soedirman Purwokerto. Jeruju Hitam dicocokkan secara mikroskopis dengan pedoman buku Powdered Vegetable Drugs “An Atlas of Microscopy For Use in the Identification and Authentication of Some Plant Materials Employed As Medicinal Agents” (Jackson dan Snowdon, 1968) untuk mengetahui kebenaran tumbuhan A. ilicifolius tersebut.
Gambar 3.1. Pengambilan tanaman daun Jeruju b. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun A. ilicifolius Daun A. ilicifolius yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari Cilacap. Pemilihan tumbuhan dan bagian yang akan digunakan dalam penelitian adalah daun A. ilicifolius yang berwarna hijau cerah. Daun A. ilicifolius yang sudah dikumpulkan disortasi
dan
dibersihkan
dari
kotoran 11
yang menempel.
Pencucian dilakukan
12
menggunakan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel pada daun. Selanjutnya, pengeringan dilakukan dengan menjemur di bawah terik sinar matahari selama 2 hari. Daun A. ilicifolius yang sudah kering dipotong menjadi lebih kecil untuk memudahkan proses pembuatan serbuk dengan blender. Potongan daun A. ilicifolius selanjutnya diblender hingga menjadi serbuk halus (Doughari dan Manzara, 2008). Ekstraksi daun A. ilicifolius dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Serbuk daun A. ilicifolius sebanyak 100 gram dilarutkan dalam 800 ml etanol 96% dan maserasi dilakukan selama lima hari. Larutan pelarut yang bercampur dengan serbuk daun A. ilicifolius disaring untuk mendapatkan larutan filtrate ekstrak daun A. ilicifolius. Filtrat ekstrak daun A. ilicifolius kemudian dievaporasi dengan rotary o
evaporator dengan suhu 75 C Daun A. ilicifolius yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari daerah Cilacap. Pemilihan tumbuhan dan bagian yang akan digunakan dalam penelitian adalah daun A. ilicifolius yang berwarna hijau cerah. Daun A. ilicifolius yang sudah dikumpulkan disortasi dan dibersihkan dari kotoran yang menempel. Pencucian dilakukan menggunakan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel pada daun. Selanjutnya, pengeringan dilakukan dengan menjemur di bawah terik sinar matahari selama 2 hari. Daun A. ilicifolius yang sudah kering dipotong menjadi lebih kecil untuk memudahkan proses pembuatan serbuk dengan blender. Potongan daun A. ilicifolius selanjutnya diblender hingga menjadi serbuk halus (Doughari dan Manzara, 2008). Ekstraksi daun A. ilicifolius dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Serbuk daun A. ilicifolius sebanyak 100 gram dilarutkan dalam 800 ml etanol 96% dan maserasi dilakukan selama lima hari. Larutan pelarut yang bercampur dengan serbuk daun A. ilicifolius disaring untuk mendapatkan larutan filtrate ekstrak daun A. ilicifolius. Filtrat ekstrak daun A. ilicifolius kemudian dievaporasi dengan rotary evaporator dengan
suhu
o
75 C.
dan
dilanjutkan dengan
mengentalkan ekstrak
o
menggunakan waterbath dengan suhu 75 C (Morsi dkk., 2010). Proses evaporasi pelarut dari ekstrak membutuhkan waktu 30 menit sedangkan untuk pengentalan ekstrak membutuhkan waktu 4 jam.
13
c. Analisis Kualititatif Saponin dan Tanin Analisis kualitatif saponin dan tanin dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT). Fase gerak yang digunakan ada dua, yaitu kloroform : metanol (3:7) dan kloroform : metanol (1:2). Penyemprot yang digunakan untuk identifikasi saponin adalah adalah reagen Liebermann-Burchard (LB) (Wagner dan Baldt, 1996) sedangkan untuk identifikasi tanin digunakan penyemprot FeCl3 (Bharti dan Vijaya, 2012). Identifikasi saponin dari ekstrak etanol daun A. ilicifolius dilakukan dengan mengelusikan lempeng KLT pada fase gerak kloform : metanol (3:7) dan menyemprotkan o
reagen LB dan memanaskan pada suhu 100 C selama 10 menit adalah bercak berwarna merah keunguan. Menurut Wagner dkk. (1984), suatu simplisia dikatakan mengandung saponin apabila dilakukan penyemprotan dengan LB memberikan noda berwarna biru, biru violet, kadang merah atau kuning coklat pada sinar tampak. Identifikasi tanin ekstrak etanol daun A. ilicifolius dilakukan dengan mengelusikan lempeng KLT pada eluen kloroform : metanol (1:2). Ekstrak yang ditotolkan adalah sebanyak 20 μl. Setelah dilakukan proses elusi, lempeng KLT dikeringkan selama 20 menit dan disemprot menggunakan larutan FeCl3 1%. Hasil yang didapatkan adalah spot berwarna hijau tua. Terjadinya pembentukan warna hijau ini karena terbentuknya senyawa kompleks antara logam Fe dan tanin. Senyawa kompleks terbentuk karena adanya ikatan kovalen koordinasi antara atom logam dan atom non-logam (Effendy, 2007).
2. Pengelompokkan dan Perlakuan Hewan Uji Pengujian aktivitas antidiabetes ekstrak daun A. ilicifolius pada tikus digunakan metode uji diabetes dengan induksi streptozotocin. Pengujian ini bertujuan untuk melihat pengaruh pemberian ekstrak etanol daun A. ilicifolius terhadap kadar gula darah sewaktu tikus induksi streptozotocin (STZ). Pasca induksi STZ, hewan coba diduga mengalami diabetes mellitus tipe 2, karena STZ tidak merusak pankreas secara total darah vena dan diduga pankreas masih menghasilkan insulin, tetapi sel reseptor mengalami resistensi insulin (Sulistyowati, 2009). Pada percobaan ini dilakukan pengukuran kadar glukosa pada hari ke -3, 5, dan 7. Penentuan hari dihitung sejak pemberian streptozotocin pertama kali. Jadi, hari ke-1 adalah hari pertama pemberian streptozotocin dan hari ke-3 adalah 48 jam setelah induksi streptozotocin, jika kadar glukosa darah puasa hewan coba belum naik
14
maka pada hari ke -3 semua hewan coba diinduksi streptozotocin lagi. Tikus dengan kadar glukosa darah di atas 100 mg/dl dianggap sudah mengalami diabetes tipe 2 (DiPiro dkk., 2005). Tikus dengan kadar glukosa darah di atas 100 mg/dl dibagi menjadi lima kelompok secara acak. Setiap kelompok terdiri dari 5 tikus. Hewan coba yang digunakan dalam penelitian adalah tikus jantan galur Wistar, berumur 2
– 3 bulan, dengan berat badan 20 –
30 gram. 1. Tabel. 3.1. Pengelompokkan hewan uji Kontrol
Kontrol Positif
Negatif Diberikan CMC Na 0,5% Selama 7 hari
Diberikan Glibenklamid Selama 7 hari
Kelompok
Kelompok
Kelompok
Perlakuan I Diberikan Ekstrak Etanol Daun A. Ilicifolius Selama 7 hari dengan Dosis 125 mg/KgBB
Perlakuan II Diberikan Ekstrak Etanol Daun A. Ilicifolius Selama 7 hari dengan Dosis 250 mg/KgBB
Perlakuan III Diberikan Ekstrak Etanol Daun A. Ilicifolius Selama 7 hari dengan Dosis 500 mg/KgBB
3. Penentuan Efek Penurunan Kadar Glukosa Darah Pengambilan darah tikus dilakukan dengan menusuk aliran darah vena pada ekor dengan bantuan disposable syringe. Darah yang keluar dari vena ekor tikus dianalisis kadar glukosanya dengan glucometer. Hari ke-0 dihitung pada saat kadar glukosa darah semua tikus telah mencapai diatas 100 mg/dl. Pengambilan darah dilakukan pada hari ke-7 setelah pemberian ekstrak etanol Daun A. ilicifolius secara berturut-turut. B. Lokasi penelitian Laboratorium Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Magelang dan LPPT Universitas Gadjah Mada Yogyakarta C. Perubahan yang diamati Pada penelitian ini perubahan yang diamati atau diukur oleh peneliti adalah hasil identifikasi senyawa tumbuhan saponin dan tanin, serta peningkatan dosis ekstrak etanol
daun
15
A. ilicifolius terhadap penurunan kadar glukosa darah pada hewan uji.
D. Model Penelitian Model penelitian ini adalah penelitian eksperimental yaitu suatu cara untuk mencari hubungan sebab akibat (hubungan kausal) antara dua faktor yang sengaja ditimbulkan oleh peneliti dengan mengeliminasi atau mengurangi faktor-faktor lain yang mengganggu. Eksperimen selalu dilakukan dengan maksud untuk melihat akibat suatu perlakuan (Arikunto, 2010). E. Rancangan Penelitian Rancangan penelitian yang digunakan adalah metode eksperimental. Tahapan dari penelitian ini terdiri dari penyiapan sampel, identifikasi tumbuhan daun A. ilicifolius, ekstraksi daun A. ilicifolius, analisis kualitatif saponin dan tanin menggunakan metode kromatografi lapis tipis kemudian membagi ekstrak etanol A. ilicifolius dengan berbagai dosis, uji antidiabetes pada tikus yang diinduksi streptozotocin dengan mengelompokkan 15 sampel hewan uji menjadi 2 kelompok kontrol dan 3 kelompok perlakuan dan dilakukan pengukuran kadar glukosa darah, dilanjutkan analisis data menggunakan ANAVA.
F. Analisis Data Dengan bantuan program SPSS 16 For Windows dilakukan uji normalitas dengan menggunakan uji Kolmogorov Smirnov untuk membuktikan bahwa data terdistribusi normal, dan homogenitas varian menurut uji Levene. Untuk analisis data, parameter yang digunakan adalah penurunan kadar glukosa darah pada hari ke-7 dari semua kelompok. Penurunan kadar glukosa darah dari kelompok kontrol, kelompok I, II dan kelompok III dianalisis dengan uji ANAVA pada tingkat kepercayaan 95%. Apabila hasil uji ANAVA menunjukkan adanya perbedaan bermakna, maka dilanjutkan dengan uji LSD untuk mengetahui kelompok mana saja yang mempunyai perbedaan bermakna (Sudjana, 1982).
BAB IV MANAJEMEN PENELITIAN A. Sumber Daya Manusia Tabel 4.1. Sumber Daya Peneliti No
Nama
Instansi Asal
Peneliti
1
Elmiawati Latifah, M.Sc, Apt
Universitas Ketua Muhammadiyah Peneliti Magelang
Alokasi Waktu (jam/minggu) 3x per minggu (4 jam)
2
Prasojo Pribadi, M.Sc, Apt
3
Dhuta Sukmarani, M.Si
Universitas Muhammadiyah Magelang Universitas Muhammadiyah Magelang
2x per minggu (4 jam) 2x per minggu (4 jam)
Anggota Peneliti Anggota Peneliti
Uraian Tugas/Peran Mengkoordinasi, mengevaluasi serta melakukan penelitian Melakukan penelitian Melakukan penelitian
B. Jadwal Kegiatan Penelitian Tabel 4.2. Jadwal Penelitian Uraian Kegiatan 1 Pengurusan persetujuan dan perijinan tempat Perencanaan penelitian Pelaksanaan penelitian Pengolahan data analisa data Pelaporan hasil penelitian
16
2
Bulan ke3 4
5
6
17
C.Pendanaan 1. HONOR OUTPUT KEGIATAN Volume
Satuan
Honor/Jam (Rp)
1. honorarium ketua
Item Honor
30.00
hari
25.000
750.000
2. honorarium anggota
24.00
hari
25.000
600.000
3. honorarium anggota
20.00
hari
25.000
500.000
4. honorarium teknisi
2.00
ORANG
150.000
300.000
Sub Total (Rp)
Total (Rp)
2.150.000,00
2. BELANJA BAHAN Item Bahan
Volume
Satuan
Harga Satuan (Rp)
1. Determinasi
1.00
tanaman
25.000
25.000
2. bahan ekstraksi dan klt
1.00
paket
914.000
914.000
3. glibenklamide
1.00
strip
1.200
4. uji aktivitas diabetes
1.00
paket
4.000.000
5. sewa laboratorium
7.00
hari
100.000
700.000
6. Jasa pengujian
1.00
uji glukosa
150.000
150.000
7. Jasa pengujian
1.00
uji glukosa
112.500
112.500
8. Jasa pengujian
1.00
uji glukosa
127.500
127.500
9. publikasi
1.00
seminar
1.000.000
10. dokumentasi
3.00
jilid
27.500
82.500
11. pulsa internet
15.00
gb
13.600
204.000
Sub Total (Rp)
Total (Rp)
1.200 4.000.000
1.000.000
7.316.700,00
3. BELANJA BARANG NON OPERASIONAL LAINNYA Item Barang
Volume
Satuan
Harga Satuan (Rp)
1. Konsumsi
1.00
hari
57.000
2. Konsumsi
1.00
hari
42.900
42.900
3. Konsumsi
1.00
hari
101.500
101.500
4. BBM
21.27
LITER
7.050
149.954
5. BBM
17.00
LITER
6.550
111.350
6. KONSUMSI
2.00
ORANG
29.425
58.850
7. KONSUMSI
2.00
ORANG
31.500
63.000
8. KONSUMSI
2.00
ORANG
30.250
60.500
Sub Total (Rp)
Total (Rp) 57.000
64.505.3.5,00
4. BELANJA PERJALANAN LAINNYA Item Perjalanan
Volume
Satuan
Biaya Satuan (Rp)
Total (Rp)
1. transportasi magelang banjarnegara
2.00
tiket
85.000
170.000
2. rental banjarnegara-cilacap
1.00
mobil
400.000
400.000
3. transportasi pemesanan bahan
1.00
mobil
153.000
153.000
4. rental pengambilan bahan
1.00
mobil dan sopir
428.000
428.000
5. nsportasi induksi diabetes
1.00
mobil
178.000
178.000
6. transportasi untuk uji aktivitas diabetes
1.00
mobil
178.000
178.000
Sub Total (Rp)
1.507.000,00
18
Total Pengeluaran Dalam Satu Tahun (Rp)
1.161.875.3.5,00
BAB 5 HASIL YANG DICAPAI DAN PEMBAHASAN
A. Organoleptis Ekstrak Daun Jeruju 1. Warna
: Warna ekstrak berwarna hijau kehitaman, setelah dibagi menjadi beberapa kelompok dosis berwarna kuning dimana semakin besar dosis maka larutan uji semakin pekat
2.
Rasa
: pahit.
3.
Bentuk
: cairan atau larutan kental dan tergantung tingkat dosis, semakin besar konsentrasi maka larutan uji semakin kental.
B. Hasil Pengukuran Glukosa Darah & Identifikasi Saponin dan Tanin Tabel 5.1. Kelompok Kontrol (-) Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
I.I
118.1
383.8
494.3
I.2
111.8
393.5
496.0
I.3
108.7
388.5
417.1
Tabel 5.2. Kelompok Kontrol (+) Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
I.4
105.0
403.8
143.0
II.2
129.1
342.3
330.7
II.3
118.0
231.6
201.6
Tabel 5.3. Dosis 125 mg/kgBB Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
III.1
120.5
429.4
149.9
III.3
93.8
358.0
41.6
III.4
111.2
286.7
80.3
19
20
Tabel 5.4. Dosis 250 mg/kgBB Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
IV.2
83.9
165.6
109.0
IV.3
100.3
400.2
194.0
IV.4
109.3
352.1
300.0
Tabel 5.5. Dosis 500 mg/kgBB Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
V.1
78.7
376.6
82.7
V.2
71.3
377.4
359.4
V.3
110.3
274.2
310.7
Tabel 5.6. Identifikasi Saponin dan Tanin Ekstrak Warna
Kesimpulan
Spot KLT 1
Identifikasi
Kesimpulan
Kualitatif
Merah
Positif
(+) LB
keunguan
Saponin
menghasilkan
Positif Saponin
warna merah violet 2
Merah keunguan
Negatif Tanin (+) FeCl3 menghasilkan warna hijau tua endapan hitam
Positif Tanin
21
C. PEMBAHASAN Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas ekstrak daun Jeruju terhadap penurunan glukosa darah pada hewan tikus jantan galur wistar yang telah diinduksi Streptozotosin. Ekstraksi daun A. ilicifolius dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Serbuk daun A. ilicifolius sebanyak 100 gram dilarutkan dalam 800 ml etanol 96% dan maserasi dilakukan selama lima hari. Larutan pelarut yang bercampur dengan serbuk daun A. ilicifolius disaring untuk mendapatkan larutan filtrate ekstrak daun A. ilicifolius. Filtrat ekstrak daun A. ilicifolius kemudian o
dievaporasi dengan rotary evaporator dengan suhu 75 C. Daun A. ilicifolius yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari daerah Cilacap. Pemilihan tumbuhan dan bagian yang akan digunakan dalam penelitian adalah daun A. ilicifolius yang berwarna hijau cerah. Daun A. ilicifolius yang sudah dikumpulkan disortasi dan dibersihkan dari kotoran yang menempel. Pencucian dilakukan menggunakan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel pada daun. Selanjutnya, pengeringan dilakukan dengan menjemur di bawah terik sinar matahari selama 2 hari. Daun A. ilicifolius yang sudah kering dipotong menjadi lebih kecil untuk memudahkan proses pembuatan serbuk dengan blender. Potongan daun A. ilicifolius selanjutnya diblender hingga menjadi serbuk halus (Doughari dan Manzara, 2008). Proses evaporasi pelarut dari ekstrak membutuhkan waktu 30 menit sedangkan untuk pengentalan ekstrak membutuhkan waktu 4 jam. Percobaan uji aktivitas dibagi menjadi lima kelompok perlakuan yaitu kontrol negatif yang diberikan CMC Na 0,5%, kontrol positif yang diberikan Glibenklamid dan tiga kelompok dari tiga produk ekstrak daun Jeruju dengan dosis masing masing 125 mg, 250 mg dan 500 mg.
22
Gambar 5.1. Pengentalan ekstrak
Gambar 5.2. Ekstrak daun Jeruju dengan konsentrasi 125 mg, 250 mg dan 500 mg Setelah didapatkan ekstrak dilanjutkan dengan melakukan analisis kualitatif saponin dan tanin dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT). Fase gerak yang digunakan ada dua, yaitu kloroform : metanol (3:7) dan kloroform : metanol (1:2). Penyemprot yang digunakan untuk identifikasi saponin adalah adalah reagen Liebermann-Burchard (LB) (Wagner dan Baldt, 1996) sedangkan untuk identifikasi tanin digunakan penyemprot FeCl3 (Bharti dan Vijaya, 2012).
23
Identifikasi saponin dari ekstrak etanol daun A. ilicifolius dilakukan dengan mengelusikan lempeng KLT pada fase gerak kloform : metanol (3:7) dan menyemprotkan o
reagen LB dan memanaskan pada suhu 100 C selama 10 menit adalah bercak berwarna merah keunguan. Identifikasi tanin ekstrak etanol daun A. ilicifolius dilakukan dengan mengelusikan lempeng KLT pada eluen kloroform : metanol (1:2). Ekstrak yang ditotolkan adalah sebanyak 20 μl. Setelah dilakukan proses elusi, lempeng KLT dikeringkan selama 20 menit dan disemprot menggunakan larutan FeCl3 1%.
Gambar 5.3. Proses Kromatografi Lapis Tipis Kemudian dilanjutkan dengan analisa kualitatif dengan menambahkan reagen LB dan FeCl3 pada ekstrak. Hasil yang didapatkan adalah warna hijau tua setelah ditambahkan Fe, terjadinya pembentukan warna hijau ini karena terbentuknya senyawa kompleks antara logam Fe dan tanin. Senyawa kompleks terbentuk karena adanya ikatan kovalen koordinasi antara atom logam dan atom non-logam (Effendy, 2007). Sedangkan pada penambahan pereaksi LB terjadi perubahan menjadi merah jingga yang menunjukkan bahwa ekstrak daun Jeruju mengandung saponin.
24
Gambar 5.4. Identifikasi Kualitatif Saponin dan Tanin Percobaan uji aktivitas menggunakan dosis terkecil yaitu 125 mg/kg BB, kemudian dosis ditingkatkan menjadi 250 mg dan 500 mg seperti terlihat pada gambar 5.2. Variasi ini dibuat untuk menentukan dosis yang paling efektif dalam penurunan glukosa darah. Pengujian aktivitas antidiabetes ekstrak daun A. ilicifolius pada tikus digunakan metode uji diabetes dengan induksi streptozotocin. Pengukuran kadar gula darah sebelum induksi streptozotosin, dilakukan sebagai kontrol acuan kadar gula darah untuk masing – masing tikus tiap kelompok perlakuan. Hasil pemeriksaan kadar gula darah puasa sebelum induksi streptozotosin menunjukan rata – rata kadar gula darah tikus masih berada dalam kisaran normal yaitu 50-109 mg/dL (Endah C, 2010). Pengujian ini bertujuan untuk melihat pengaruh pemberian ekstrak etanol daun A. ilicifolius terhadap kadar gula darah sewaktu tikus induksi streptozotocin (STZ). Pasca induksi streptozotosin, hewan coba diduga mengalami diabetes mellitus tipe 2, dimana semua hewan uji memiliki kadar glukosa darah lebih dari 100 mg/dl, dugaan diabetes tipe 2 ini karena streptozotosin tidak merusak pankreas secara total darah vena dan diduga pankreas masih menghasilkan insulin, tetapi sel reseptor mengalami resistensi insulin (Sulistyowati, 2009). Pada percobaan ini dilakukan pengukuran kadar glukosa pada hari ke -3, 5, dan 7.
25
2. Gambar 5.5. Pengukuran kadar glukosa setelah diinduksi STZ Penentuan hari dihitung sejak pemberian streptozotocin pertama kali. Jadi, hari ke1 adalah hari pertama pemberian streptozotocin dan hari ke-3 adalah 48 jam setelah induksi streptozotocin, jika kadar glukosa darah puasa hewan coba belum naik maka pada hari ke 3 semua hewan coba diinduksi streptozotocin lagi. Tikus dengan kadar glukosa darah di atas 100 mg/dl dianggap sudah mengalami diabetes tipe 2 (DiPiro dkk., 2005). Tikus dengan kadar glukosa darah di atas 100 mg/dl dibagi menjadi lima kelompok secara acak. Setiap kelompok terdiri dari 5 tikus. Hewan coba yang digunakan dalam penelitian adalah tikus jantan galur Wistar, berumur 2 – 3 bulan, dengan berat badan 20 – 30 gram.
Gambar 5.6. Uji aktivitas diabetes setelah pemberian ekstrak Daun Jeruju
26
Gambar 5.7. Rerata kadar glukosa darah Seperti terlihat pada Gambar 5.6, uji aktivitas antidiabetes yang paling rendah pada dosis 500 mg. Rata-rata kadar glukosa darah tikus pada kelompok pemberian ekstrak daun Jeruju dengan dosis 500 mg/kgBB lebih besar disebabkan karena adanya tikus yang memiliki kadar glukosa darah yang mencapai 359.4 mg/dl. Rata rata penurunan terbesar ada pada dosis 125 mg, selanjutnya pada dosis 250 mg dan kelompok kontrol positif. Terjadi penurunan kadar glukosa darah dikarenakan ekstrak daun Jeruju diidentifikasi mengandung saponin dan tanin. Penelitian yang dilakukan oleh Liu dkk. (2005), menunjukkan bahwa tanin mungkin mempunyai potensi sebagai senyawa utama untuk pengembangan obat diabetes tipe baru. Penelitian ini juga memperlihatkan mekanisme tanin dalam menurunkan kadar gula darah. Tanin mampu meningkatkan transpor glukosa dengan mengaktivasi insulin-mediated signaling pathway. Saponin yang berfungsi sebagai antidiabetes dibuktikan oleh Firdous dkk. (2009), setelah dilakukan pemeriksaan histopatologi, diketahui bahwa saponin mampu meregenerasi pankreas yang menyebabkan adanya peningkatan jumlah sel β pankreas dan pulau-pulau Langerhans sehingga sekresi insulin akan mengalami peningkatan. Peningkatan sekresi insulin tersebut akan membantu penurunan kadar glukosa darah. Regenerasi sel β pankreas itu terjadi karena adanya sel quiescent pada pankreas yang memiliki kemampuan beregenerasi. Berikut hasil pengujian kenormalan dan homogenitas berdasarkan Kolmogrof Smirnov seperti yang tercantum pada tabel 5.7 dibawah ini :
27
Tabel 5.7. Hasil Uji Distribusi Normal dengan Kolmogrof Smirnov Kontrolnegatif N
kontrolpositif
dosis125
dosis250
dosis500
3
3
3
3
3
Mean
469.1333
225.1000
90.6000
201.0000
250.9333
Std. Deviation
45.07020
96.03130
54.87978
95.69221
1.47715E2
Absolute
.378
.263
.241
.196
.324
Positive
.276
.263
.241
.196
.231
Negative
-.378
-.198
-.193
-.183
-.324
Kolmogorov-Smirnov Z
.655
.456
.418
.339
.561
Asymp. Sig. (2-tailed)
.784
.985
.995
1.000
.912
Normal Parameters
a
Most Extreme Differences
Ho pada uji Kolmogrov ini adalah : kelima data terdistribusi normal dan Ha : kelima data tidak terdistribusi normal. Berdasarkan output diatas pada semua kelompok perlakuan baik kelompok kontrol negatif, kontrol positif, kelompok dosis 125 mg/kgBB, 250 mg/kg BB dan 500 mg/kgBB mempunyai signifikansi sebesar 0.784, 0.985, 0.995, 1.000 dan 9.12 artinya Ho diterima dan Ha ditolak, hal ini menunjukkan keseluruhan data terdistribusi normal. Analisa dilakukan dengan uji homogenitas, untuk menguji apakah ada kesamaan varian penurunan glukosa darah antara lima kelompok perlakuan. Pengujian asumsi kesamaan varian dilakukan lewat uji F atau signifikansi. Ho : Tidak ada perbedaan varian penurunan glukosa darah antara lima kelompok perlakuan, Ha : Ada perbedaan varian penurunan kadar glukosa darah antara lima kelompok perlakuan. Pengambilan keputusan jika Sig < 0.05 maka Ho ditolak, jika sig > 0.05 maka Ho diterima. Tabel 5.8 Uji Homogenitas
Levene Statistic 1.735
df1
df2 4
Sig. 10
.218
Pada tabel 5.8 diatas terlihat nilai Sig.0.218 > 0.05, hal ini menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan varian penurunan kadar glukosa darah antara kelima kelompok perlakuan maka dapat disimpulkan bahwa data penelitian homogen. Berdasarkan uji kenormalan dan homogenitas
28
diketahui data glukosa darah tersebut terdistribusi normal dan homogen, maka telah memenuhi syarat untuk dilakukan uji menggunakan Anova. Uji hipotesis pada penelitian ini menggunakan Analysis of Variance (Anova). Anova merupakan lanjutan dari uji t-independen dimana kita memiliki dua kelompok percobaan percobaan atau lebih, yang digunakan untuk membandingkan mean dari dua kelompok atau lebih sampel independen (bebas). Berikut output uji Anova seperti yang tercantum
pada tabel
5.9 dibawah ini : Tabel 5.9. Hasil uji Anova Sum of Squares Between Groups Within Groups Total
Df
Mean Square
229243.904
4
57310.976
90483.773
10
9048.377
319727.677
14
F 6.334
Sig. .008
Hipotesis pada penelitian ini sebagai berikut Ho : Tidak ada perbedaan signifikan rata-rata prosentase penurunan kadar glukosa darah antar semua kelompok perlakuan, dan Ha : Ada perbedaan signifikan rata rata penurunan kadar glukosa darah antar semua kelompok perlakuan. Statistik uji F yang digunakan dalam One Way Anova dengan membandingkan nilai F hitung (hasil output) dengan nilai F tabel. Sedangkan derajat bebas yang digunakan dihitung dengan rumus (n-k), dimana k adalah jumlah kelompok sampel, dan n adalah jumlah sampel. F tabel yang didapatkan dengan nilai signifikansi 5%, Dk pembilang = 5-1 =4, dan Dk penyebut 15-5 =10, maka F tabel yang diperoleh sebesar 3.48 (F hitung > F tabel), kemudian diperkuat dengan Sig.0.008 lebih kecil dari nilai kritik α = 0.05. Berdasarkan uji ANOVA diatas, dapat disimpulkan bahwa Ha diterima dan Ho ditolak dimana terdapat perbedaan signifikan rata rata penurunan kadar glukosa darah antar semua kelompok perlakuan. Setelah Uji ANOVA dilakukan, dilanjutkan dengan Uji Post Hoc Tukey HSD dengan hasil output seperti tercantum pada Tabel 5.10.
29
Tabel 5.10. Hasil Uji Post Hoc Tukey HSD Perlakuan Kontrol Positif
Kontrol negatif
Perlakuan
Sig.
Hipotesis
Kesimpulan
Kontrol negatif
.043 p < 0.05
Berbeda bermakna
Dosis 125 mg
.458 P > 0.05
Tidak berbeda bermakna
Dosis 250 mg
.998 P > 0.05
Tidak berbeda bermakna
Dosis 500 mg
.997 P > 0.05
Tidak berbeda bermakna
Kontrol positif
.043 P < 0.05
Berbeda bermakna
Dosis 125 mg
.005 P < 0.05
Berbeda bermakna
Dosis 250 mg
.039 P < 0.05
Berbeda bermakna
Dosis 500 mg
.105 P > 0.05
Tidak berbeda bermakna
Tukey HSD digunakan untuk mengetahui perbedaan antar kelompok. Hasil uji Tukey HSD pada taraf kepercayaan 95% menunjukkan perbedaan nyata pada kelompok positif jika dibedakan dengan kelompok kontrol negatif. Pada kelompok kontrol positif menunjukan perbedaan yang nyata dalam uji Tukey terhadap kontrol negatif karena pemberian suspensi glibenklamid dapat merangsang sekresi hormon insulin dari granul sel-sel β Langerhans pankreas (Suherman, 2007). Adanya perbedaan bermakna tersebut menunjukkan bahwa glibenklamid (kontrol positif) mempunyai efek antidiabetes. Berdasarkan uji Post Hoc Tukey HSD diatas juga terlihat bahwa pada kelompok kontrol negatif menunjukkan perbedaan bermakna dengan kelompok dosis 125 dan 250 mg, maka dapat disimpulkan bahwa kelompok kedua dosis tersebut mempunyai efektifitas sebanding dengan glibenklamid (kontrol positif). Kelompok dosis 500 mg tidak menunjukkan perbedaan bermakna dengan kontrol negatif diduga disebabkan karena faktor internal dari tikus meliputi jumlah dan kualitas reseptor insulin, keadaan hormonal tikus, kondisi pankreas tikus maupun keadaan psikologis tikus selama perlakuan sehingga untuk mengantisipasi hal ini maka lama perlakuan perlu ditingkatkan. Efektifitas ekstrak daun Jeruju sebagai antidiabetes diduga karena kandungan kimia yaitu adanya tanin dan saponin. Tanin yang dapat terhidrolisis dibagi menjadi 2 yaitu ellagitanin dan gallotanin. Ellagitanin memiliki beberapa turunan yaitu lagerstroemi, flosin B dan reginin A dan memiliki sifat yang mirip dengan hormon insulin (insulin-like compound). Tiga senyawa ini mampu meningkatkan aktivitas transport glukosa ke dalam sel adiposa secara in vitro.
30
Sedangkan untuk gallotanin dapat meningkatkan fungsi penyerapan glukosa sekaligus dapat menghambat adipogenesis (Hernawan, 2004). Tanin diketahui dapat memacu metabolisme glukosa dan lemak sehingga timbunan kedua sumber kalori ini dalam darah dapat dihindari. Tanin mempunyai aktivitas antioksidan dan aktivitas hipoglikemik yaitu dengan meningkatkan glikogenesis. Selain itu, tanin juga berfungsi sebagai astringent atau pengkhelat yang dapat mengerutkan membran epitel usus halus sehingga mengurangi penyerapan sari makanan dan sebagai akibatnya menghambat asupan gula dan laju peningkatan gula darah tidak terlalu tinggi (Ridwan, 2012). Saponin merupakan senyawa kimia yang banyak terdapat pada tanaman. Strukturnya terdiri dari aglycone (triterpene atau steroid) dan gugus glukosa. Saponin memiliki banyak fungsi biologi
dan
farmakologi
diantaranya
sebagai
hemolisa,
kardiotonik,
hipoglikemik,
hipokolesterolemik, modulator imun, hepatoproteksi, antioksidan, dan antikardiogenik. Saponin dimetabolisme di dalam tubuh oleh mikroflora yang berada di usus halus dan metabolitnya akan diabsorbsi lewat gastrointestinal kemudian bekerja secara sistemik. Saponin berfungsi sebagai antihiperglikemik adalah triterpene saponin dengan mekanismenya yaitu untuk mencegah pengosongan lambung dan mencegah peningkatan uptake glukosa pada brush border membran di intestinal. Selain itu saponin juga bekerja untuk mencegah penyerapan glukosa dengan cara mencegah transport glukosa menuju brush border intestinal di usus halus yang merupakan tempat penyerapan glukosa (Yoshikawa, 2006).
BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Ekstrak daun Jeruju dengan dosis 125 mg/kgBB dan 250 mg/kgBB memiliki aktivitas antidiabetes 2. Ekstrak daun Jeruju dengan dosis 125 mg memiliki aktivitas sebagai antidiabetes yang paling efektif 3. Ekstrak daun Jeruju mengandung zat saponin dan tanin
B. Saran 1. Perlu dilakukan identifikasi saponin dan tanin pada ekstrak daun Jeruju secara kuantitatif 2. Perlu dilakukan uji toksisitas 3. Penelitian dilakukan dalam waktu yang lebih panjang sehingga dapat diamati lebih jauh efek ekstrak daun Jeruju terhadap kadar glukosa darah tikus
31
DAFTAR PUSTAKA Akpan, J.O., Wright, P.H., Dulin, W.E. 1987. A comparison of the effects of streptozotocin, Nmethylnitrosourea and alloxan on isolated islets of Langerhans, Diabetes & Metabolism, 13(2):122-128 Amalraj, T. and Ignacimuthu, S. 1998. Evaluation of the hypoglycaemic effect of Memecylon umbellatum in normal and alloxan diabetic mice. J. Ethnopharmacol., 62, 247. Anonim. 2000. Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 9-12. Anonim. 2015. Acanthus ilicifolius L. available at http://www.sith.itb.ac.id (diakses 14 April 2015). Arikunto, Suharsimi. 2010. Prosedur Penelitian Suatu Pendekatan Praktik. Rineka Cipta. Bandaranayake, W.M. 1998. Traditional and medicinal uses of mangroves. Mangroves and Salt Marshes. 2: 133-148. Bharti, S., dan Vijaya, S. 2012. Extraction of Tannin by Terminalia bellirica (Gaertner) Roxb Seed from Different Provenances. Journal of Phytology 4(6): 9-13. Bonner-Weir, S., Trent, D.F., Honey, R.N., and Weir, G.C.. 1981. Responses of Neonatal Rat Islets to Streptozotocin : Limited β-Cell Regeneration and Hyperglycemia. Diabetes. 30: 64-69. DiPiro, T., Joseph, Wells, G., Barbara, Hamilton, W., Cindy, Schwinghammer, l., Terry. 2005. Pharmacotherapy Handbook, Sixth Edition, New York Doughari, J.H., dan Manzara, S. 2008. In vitro Antibacterial Activity of Crude Leaf Extracts of Mangifera indica Linn. African Journal of Microbiology Research 2:067-072. Duke, N.C. 2006. Australia’s Mangrove. The Authoritative guide to Australia’s Evolvulus emerginatus. Int J Pharm Pharm Sci, Vol 6, Issue 6, 362-365 Endah W., C. (2010). Pengaruh Pemberian Ekstrak Bawang Merah (Allium ascalonicum) Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah pada Tikus Wistar dengan Hiperglikemia, Laporan Akhir Penelitian, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang Effendy. 2007. Perspektif Baru Kimia Koordinasi. Bayumedia Publishing, Malang. Firdous, M., Koneri, R., Sarvaraidu, C.H., dan Shubhapriya, K.H. 2009. NIDDM Antidiabetic Activity Of Saponins Of Momordica Cymbalaria In Streptozotocin-Nicotinamide NIDDM Mice. Journal of Clinical and Diagnosis Research 3: 1460-1465. Gayathri, G.A and M. Gayathri.. 2014. Preliminary Qualitative Phytochemical Screening and In Vitro Hypoglycemic Potential Of Acanthus ilicifolius and Evolvulus emerginatus. Int J Pharm Pharm Sci, Vol 6, Issue 6, 362-365 32
33
Hartono. 2009. Saponin. http://farmasi.dikti.net/saponin/. 4 April 2015. Jackson, B.P., Snowdon, D.W. 1968. Powdered Vegetable Drugs “An Atlas Of Microscopy For Use In The Identification And Authentication Of Some Plant Jakarta. Johnson, M. 1998. Diabetes; Terapi dan pencegahannya. Indonesia Publishing House, Jawa Barat. Kanchanapooma T., M.S. Kamelc, R. Kasaia,C. Picheansoonthonb, Y. Hiragad, K. Yamasakia. 2001. Benzoxazinoid glucosides from Acanthus ilicifolius. Phytochemistry 58:637–640. Ladeji, O., Omekarah, I., and Solomon, M. 2003. Hypoglycemic properties of aqueous bark extract of Ceiba pentandra in streptozotocin-induced diabetic rats. J. Ethnopharmacol., 84, 139. Liu, X., Kim, J.K., Li, Y., Li, J., Liu, F., dan Chen, X. Tannic Acid Stimulates Glucose Transport and Inhibits Adipocyte Differentiation in 3T3-L1 Cells. The Journal of Nutrition 135(2): 165-171. Moore, M. C. 1997. Buku Pedoman Terapi Diet dan Nutrisi. Hipokrates, Jakarta. Morada, N. .J, Ephrime B. M., Mylene M. U and Jose M. O. 2011. Anti-diabetic Polysaccharide from Mangrove Plant, Sonneratia alba Sm. International Conference on Asia Agriculture and Animal IPCBEE vol.13 (2011) © (2011)IACSIT Press, Singapoore Mukherjee, P. K., Saha, K., Pal, M., and Saha, B. P. 1997. Effect of Nelumbo nucifera rhizome extract on blood sugar level in rats. J. Ethnopharmacol., 58, 207. Nabeel, M.A., Kathiresan, K., Manivannan, S. 2010. Antidiabetic activity of the mangrove species Ceriops decandra in alloxan-induced diabetic rats. J Diabetes, 2(2), 97-103. Naidu, K. C. and V. Vadlapudi. 2010. In vitro bioactivity against important phytopathogens of Rhizophora mucronata (Lam.) and Acanthus ilicifolius Linn. Scholars Research Library, Der Pharmacia Ltre, 2(2): 107-110. NDEP (National Diabetes Education Program). 2014. Overview of Diabetes in Children and Adolescents. NDEP. Neonatal Rat Islets to Streptozotocin : Limited β-Cell Regeneration and Hyperglycemia. Diabetes. 30: 64-69. Noor, Y.R., M. Khazali dan N.N. Suryadiputra. 2006. Panduan Pengenalan Mangrove di Indonesia. Wetlands International Indonesia Programe. Bogor. Otsuka, H., Hirai, Y., Nagao, T., Yamasaki, K., 1988. Anti-inflammatory activity of benzoxazinoids from roots of Coix lachryma-jobi var. ma-yuen. Journal of Natural Products 51, 74–79.Place. London. Ridwan A, Astrian RT, Barlian A. 2012. Pengukuran efek antidiabetes polifenol (polyphenon 60) berdasarkan kadar glukosa darah dan histologi pankreas mencit (mus musculus l.) s.w. jantan yang dikondisikan diabetes mellitus. Jurnal Matematika dan Sains.;17(2):78-82. 28.
34
Hernawan UE, Sutarno, Setyawan AD. 2004. Aktifitas hipoglikemik dan hipolipidemik ekstrak air daun bungur (lagerstroemia speciosa [l.] Pers.) terhadap tikus diabetik. Biofarmasi.;2(1):15-23 Suherman, Suharti K. Insulin antidiabetik oral. Dalam : Gunawan,S.G., R.Setiabudy, Nafrialdi, Elysabeth. (2007). Farmakologi dan Terapi. Jakarta: Departemen Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia
Yoshikawa, Masayuki, Hisashi Matsuda.2006. Traditional Medicines for Modern Times Antidiabetic Plants: Saponin. CRC Press;.
35
Lampiran 1. Penggunaan Dana
36
38
Lampiran 2. Hasil uji glukosa darah Tabel 1. Kelompok Kontrol (-) Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
I.I
118.1
383.8
494.3
I.2
111.8
393.5
496.0
I.3
108.7
388.5
417.1
Tabel 2. Kelompok Kontrol (+) Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
I.4
105.0
403.8
143.0
II.2
129.1
342.3
330.7
II.3
118.0
231.6
201.6
Tabel 3. Dosis 125 mg/kgBB Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
III.1
120.5
429.4
149.9
III.3
93.8
358.0
41.6
III.4
111.2
286.7
80.3
Tabel 4. Dosis 250 mg/kgBB Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
IV.2
83.9
165.6
109.0
IV.3
100.3
400.2
194.0
IV.4
109.3
352.1
300.0
Tabel 5. Dosis 500 mg/kgBB Kode Tikus
Glukosa I
Glukosa II
Glukosa III
V.1
78.7
376.6
82.7
V.2
71.3
377.4
359.4
V.3
110.3
274.2
310.7
38
Lampiran III. Hasil output data SPSS Tabel 1. Uji Distribusi Normal dengan Kolmogrof Smirnov kontrolnegatif N
kontrolpositif
dosis125
dosis250
dosis500
3
3
3
3
3
Mean
469.1333
225.1000
90.6000
201.0000
250.9333
Std. Deviation
45.07020
96.03130
54.87978
95.69221
1.47715E2
Absolute
.378
.263
.241
.196
.324
Positive
.276
.263
.241
.196
.231
Negative
-.378
-.198
-.193
-.183
-.324
Kolmogorov-Smirnov Z
.655
.456
.418
.339
.561
Asymp. Sig. (2-tailed)
.784
.985
.995
1.000
.912
Normal Parameters
a
Most Extreme Differences
Tabel 2. Uji Homogenitas Levene Statistic 1.735
df1
df2 4
Sig. 10
.218
Tabel 3. Uji ANOVA KADARGULA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total
df
Mean Square
F
229243.904
4
57310.976
90483.773
10
9048.377
319727.677
14
Sig.
6.334
.008
Tabel 4. Uji Post Hoc Dependent Variable:KADARGULA 95% Confidence Interval
Mean Difference (I) PERLAKUAN (J) PERLAKUAN Tukey HSD
kontrol negatif
kontrol positif
Std. Error
(I-J)
Sig.
Lower Bound
Upper Bound
kontrol positif
244.0333
77.6676
.043
-11.577
499.644
dosis 125
378.5333
*
77.6676
.005
122.923
634.144
dosis 250
268.1333
*
77.6676
.039
12.523
523.744
dosis 500
218.2000
77.6676
.105
-37.410
473.810
-244.0333
77.6676
.043
-499.644
11.577
kontrol negatif
39
dosis 125
dosis 250
dosis 500
dosis 125
134.5000
77.6676
.458
-121.110
390.110
dosis 250
24.1000
77.6676
.998
-231.510
279.710
dosis 500
-25.8333
77.6676
.997
-281.444
229.777
kontrol negatif
-378.5333
*
77.6676
.005
-634.144
-122.923
kontrol positif
-134.5000
77.6676
.458
-390.110
121.110
dosis 250
-110.4000
77.6676
.629
-366.010
145.210
dosis 500
-160.3333
77.6676
.305
-415.944
95.277
kontrol negatif
-268.1333
*
77.6676
.039
-523.744
-12.523
kontrol positif
-24.1000
77.6676
.998
-279.710
231.510
dosis 125
110.4000
77.6676
.629
-145.210
366.010
dosis 500
-49.9333
77.6676
.964
-305.544
205.677
-218.2000
77.6676
.105
-473.810
37.410
25.8333
77.6676
.997
-229.777
281.444
dosis 125
160.3333
77.6676
.305
-95.277
415.944
dosis 250
49.9333
77.6676
.964
-205.677
305.544
kontrol positif
244.0333
77.6676
.105
-34.126
522.192
dosis 125
378.5333
*
77.6676
.006
100.374
656.692
dosis 250
268.1333
77.6676
.062
-10.026
546.292
dosis 500
218.2000
77.6676
.185
-59.959
496.359
-244.0333
77.6676
.105
-522.192
34.126
dosis 125
134.5000
77.6676
1.000
-143.659
412.659
dosis 250
24.1000
77.6676
1.000
-254.059
302.259
dosis 500
-25.8333
77.6676
1.000
-303.992
252.326
kontrol negatif kontrol positif
Bonferroni
kontrol negatif
kontrol positif
dosis 125
dosis 250
kontrol negatif
kontrol negatif
-378.5333
*
77.6676
.006
-656.692
-100.374
kontrol positif
-134.5000
77.6676
1.000
-412.659
143.659
dosis 250
-110.4000
77.6676
1.000
-388.559
167.759
dosis 500
-160.3333
77.6676
.659
-438.492
117.826
kontrol negatif
-268.1333
77.6676
.062
-546.292
10.026
kontrol positif
-24.1000
77.6676
1.000
-302.259
254.059
dosis 125
110.4000
77.6676
1.000
-167.759
388.559
dosis 500
-49.9333
77.6676
1.000
-328.092
228.226
40
dosis 500
-218.2000
77.6676
.185
-496.359
59.959
25.8333
77.6676
1.000
-252.326
303.992
dosis 125
160.3333
77.6676
.659
-117.826
438.492
dosis 250
49.9333
77.6676
1.000
-228.226
328.092
kontrol negatif kontrol positif
42
Lampiran IV. Dokumentasi Kegiatan Penelitian
43
43
