UNIVERSITAS INDONESIA

UNIVERSITAS INDONESIA

PENAPISAN FITOKIMIA EKSTRAK ETANOL BEBERAPA TANAMAN OBAT INDONESIA SERTA UJI AKTIVITAS ANTI DIABETES MELITUS MELALUI PENGHAMBATAN ENZIM α-GLUKOSIDASE

SKRIPSI

SITI MASITOH 0706264993

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI DEPOK JUNI 2011

Penapisan fitokimia ..., Siti Masitoh, FMIPA UI, 2011

UNIVERSITAS INDONESIA

PENAPISAN FITOKIMIA EKSTRAK ETANOL BEBERAPA TANAMAN OBAT INDONESIA SERTA UJI AKTIVITAS ANTI DIABETES MELITUS MELALUI PENGHAMBATAN ENZIM α-GLUKOSIDASE

SKRIPSI

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi

SITI MASITOH 0706264993

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI DEPOK JUNI 2011




KATA PENGANTAR

Tiada kata yang pantas diucapkan selain alhamdulillahirabbil’alamin kepada Allah Subhana wa Ta’ala, yang atas izin-Nya, penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi di Departemen Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia. Penulisan skripsi ini tidaklah mudah. Banyak sekali orang-orang di sekitar yang telah membantu, dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini diselesaikan. Untuk itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1) Bapak Dr. Abdul Mun’im, M.S., selaku dosen pembimbing skripsi yang telah

menyediakan

waktu,

bantuan,

tenaga,

dan

pikiran

untuk

mengarahkan penulis dalam penelitian dan penyusunan skripsi; 2) Ibu Prof. Dr. Atiek Soemiati M.S., selaku dosen pembimbing skripsi yang telah

menyediakan

waktu,

bantuan,

tenaga,

dan

pikiran

untuk

mengarahkan penulis dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini; 3) Ibu Prof. Dr. Yahdiana Harahap, MS, selaku ketua Departemen Farmasi FMIPA UI; 4) Bapak Dr. Harmita, Apt., selaku pembimbing akademik yang telah memberikan

bimbingan

dan

bantuan

selama

penulis

menempuh

pendidikan di Departemen Farmasi FMIPA UI; 5) Bapak dan Ibu staf pengajar Departemen Farmasi FMIPA UI atas ilmu pengetahuan dan bantuan yang telah diberikan selama menempuh pendidikan di Departemen; 6) Lembaga BPZIS (Bank Mandiri) yang telah memberikan beasiswa dari sejak sekolah menengah atas hingga memperoleh gelar sarjana; 7) Kedua orang tua, Bapak H. Enang Soma dan Ibu Hj. Aah Syapaah yang tak pernah henti mendoakan demi kelancaran dan kesuksesan skripsi yang telah dijalani; v


8) Kakak-kakak yang telah memberi masukan dan semangat tiada henti selama penelitian, Entin Mariah, S.Pd., Enjang Aang Abdul Jamil, SE., Enceng Ahmad Hidayat, Ihwan Nurdin, ST., keponakan, dan seluruh keluarga; 9) Sahabat seperjuangan, Ary Andriani, Kun Fitriana, dan M. Gama Ramadhan yang telah setia menemani dan berbagi suka, duka, canda, tawa, dan air mata selama penelitian ini, juga keluarga besar Farmasi 2007 yang melengkapi kebersamaan selama di Farmasi; 10) Sahabat terbaik, Akhira Wardah Dita, Triana Lestari, Sutarto, M.Si., Bagas Triyatmojo, juga teman-teman Kopdar, Bintang Kecil, Lingkaran Cahaya, yang senantiasa menyebut nama saya dalam lantunan doa; 11) Semua pihak yang tidak dapat disebutkan namanya satu persatu yang telah membantu proses penelitian dan penyusunan skripsi ini. Penulis sadar tak mampu memberikan sesuatu yang lebih berharga selain ucapan terima kasih dan berdoa semoga Allah membalas segala kebaikan mereka dengan sesuatu yang lebih baik lagi. Besar harapan terbentang semoga penulisan skripsi ini dapat berguna bagi ilmu pengetahuan khususnya bagi pengembangan ilmu kefarmasian sehingga manfaatnya dapat dirasakan oleh seluruh lapisan masyarakat.

Penulis

2011

vi



ABSTRAK Nama Program Studi Judul

: Siti Masitoh : S1 Farmasi : Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol Beberapa Tanaman Obat Indonesia serta Uji Aktivitas Anti Diabetes Melitus melalui Penghambatan Enzim α-Glukosidase.

α-Glukosidase merupakan enzim yang mengkatalisis tahap akhir proses pencernaan karbohidrat. Penghambat enzim tersebut merupakan salah satu cara pengobatan untuk diabetes melitus karena dapat menahan pelepasan glukosa dari oligosakarida dan disakarida. Hasil yang didapatkan adalah penundaan absorpsi glukosa dan penurunan kadar glukosa plasma postprandial. Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak etanol beberapa tanaman obat di Indonesia dan penapisan fitokimia pada ekstrak etanol. Tanaman obat diekstraksi dengan etanol 80 % dengan cara refluks. Uji aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase menggunakan metode Spectrophotometric Stop Rate Determination. Absorbansi p-nitrofenol yang dilepaskan dari p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa sebagai substrat diukur pada panjang gelombang 400 nm menggunakan Spektrofotometer UV-Vis. Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol herba Phyllanthus niruri L., akar Erythrina subumbrans (Hassk.) Merrill, dan akar Caesalpinia sappan L. memiliki aktivitas penghambatan paling kuat terhadap enzim α-glukosidase dengan nilai IC 50 masing-masing 2,32 ppm; 4,83 ppm; dan 8,82 ppm. Golongan senyawa yang terdapat pada ekstrak etanol herba Phyllanthus niruri L. adalah glikosida, flavonoid, terpen, dan tanin. Ekstrak etanol akar Erythrina subumbrans (Hassk.) Merrill mengandung glikosida dan saponin, sedangkan ekstrak etanol akar Caesalpinia sappan L. mengandung glikosida, tanin, dan saponin. Kata Kunci xiv + 93 halaman Daftar Acuan

: diabetes melitus, ekstrak etanol, α-glukosidase, penapisan fitokimia, tanaman obat. ; 25 gambar; 36 tabel; 6 lampiran : 52 (1961-2011)

viii

Universitas Indonesia


ABSTRACT Name : Siti Masitoh Program study : S1 Pharmacy Title : Phytochemical Screening from Ethanolic Extract of Several Medicinal Plants in Indonesia and Anti Diabetes Mellitus Activity Test as α-Glukosidase Inhibitor. α-Glucosidase is enzyme which catalyzes thefinal step in the digestive process of carbohydrates. Inhibition of this enzyme is one of treatment that available for diabetes mellitus becauses it can retard the liberation of glucose from oligosaccharides and disaccharides. The result is delay the glucose absorption and reducement of postprandial plasma glucose levels. The purpose of this research was to study α-glukosidase inhibitory activity of several medicinal plants in Indonesia and followed by phytochemical screening of ethanolic extract. Medicinal plants were extracted with 80 % ethanol under conditions of reflux. αGlucosidase inhibitory activity test was performed by Spectrophotometric Stop Rate Determination method. The absorbance of p-nitrophenol released from pnitrofenil-α-D-glukopiranosa as substrat was measured at 400 nm by UV-Vis Spectrophotometer. The result showed that ethanolic extract from the herbs of Phyllanthus niruri L., the roots of Erythrina subumbrans (Hassk.) Merrill, and the roots of Caesalpinia sappan L. have the strongest α-glucosidase inhibitory activity with IC 50 values of 2.32 ppm, 4.83 ppm, and 8.82 ppm. Phytochemical screening showed that ethanolic extract from Phyllanthus niruri L. contained glycosides, flavonoids, terpenoids, and tannins. Ethanolic extract of Erythrina subumbrans (Hassk.) Merrill roots contained glycosides and saponins, while Caesalpinia sappan L. roots contained glycosides, tannins, and saponins. Key Words xiv + 93 pages Bibliography

: diabetes mellitus, ethanolic extracts, α-glucosidase, phytochemical screening, medicinal plants. ; 25 pictures; 36 tables; 6 appendices : 52 (1961-2011)

ix



DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ................................................................................................... ii HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ........................................................ iii HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................................... iv KATA PENGANTAR ................................................................................................ v HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ............................... vii ABSTRAK .................................................................................................................. viii ABSTACT .................................................................................................................. ix DAFTAR ISI ............................................................................................................... x DAFTAR GAMBAR .................................................................................................. xii DAFTAR TABEL ....................................................................................................... xiii DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................... xiv BAB 1. PENDAHULUAN ........................................................................................ 1 1.1. Latar Belakang ..................................................................................... 1 1.2. Tujuan Penelitian ................................................................................. 3 BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................... 4 2.1. Diabetes Melitus .................................................................................. 4 2.2. Klasifikasi Diabetes melitus ................................................................ 4 2.3. Penatalaksanaan Diabetes melitus ....................................................... 5 2.4. Enzim α-Glukosidase ........................................................................... 7 2.5. Akarbose .............................................................................................. 8 2.6. Tanaman Obat Anti Diabetes Melitus ................................................. 9 2.7. Deskripsi Tanaman Obat Anti Diabetes Melitus…… ........................... 10 2.8. Proses Pembuatan Ekstrak ................................................................... 16 2.9. Penapisan Fitokimia ............................................................................ 17 2.10. Spektrofotometri UV-Vis .................................................................... 19 2.11. Pengukuran Aktivitas Penghambatan Enzim α-glukosidase… ............ 20 2.12. Kinetika Enzim .................................................................................... 21 BAB 3. METODE PENELITIAN ............................................................................ 24 3.1. Tempat dan Waktu ............................................................................... 24 3.2. Bahan.................................................................................................... 24 3.3. Alat ....................................................................................................... 25 3.4. Cara Kerja ............................................................................................ 25 BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................... 34 4.1. Penyiapan Bahan Uji ............................................................................ 34 4.2. Ekstraksi Simplisia ............................................................................... 34 4.3. Penapisan Fitokimia ............................................................................. 35 4.4. Optimasi Aktivitas Enzim .................................................................... 41 4.5. Uji Aktivitas Penghambatan Enzim α-Glukosidase ............................. 44 4.6. Kinetika Penghambatan Enzim α-Glukosidase .................................... 50 x



BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN .................................................................... 51 5.1. Kesimpulan .......................................................................................... 51 5.2. Saran .................................................................................................. 51 DAFTAR ACUAN ..................................................................................................... 52

xi



DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Mekanisme penghambatan enzim pencernaan oleh akarbose ............... 8 Gambar 2.2. Struktur kimia akarbose ........................................................................ 8 Gambar 2.3. Persamaan reaksi enzimatik α-glukosidase dan p- nitrofenil-α-Dglukopiranosa ....................................................................................... 21 Gambar 2.4. Plot resiprokal ganda atau Lineweaver-Burk ....................................... 22 Gambar 2.5. Plot Lineweaver-Burk yang menunjukkan inhibisi kompetitif klasik..................................................................................................... 22 Gambar 2.6. Plot Lineweaver-Burk yang menunjukkan inhibisi nonkompetitif reversibel .............................................................................................. 23 Gambar 4.1. Grafik optimasi aktivitas enzim dengan konsentrasi substrat 10 mM hingga 40 mM ............................................................................... 43 Gambar 4.2 . Grafik optimasi Aktivitas Enzim dengan Konsentrasi Substrat 1,25 mM hingga 20 mM ............................................................................... 44 Gambar 4.3. Grafik kinetika inhibisi enzim α-glukosidase pada ekstrak etanol herba meniran ....................................................................................... 53 Gambar 4.4. Cosmos Caudatus Kunth (Kenikir) ...................................................... 61 Gambar 4.5. Momordica charantia L. (Paria/Pare) .................................................. 61 Gambar 4.6. Sechium edule (Jacq.) Sw. (Labu Siam) ............................................. 61 Gambar 4.7. Cyperus rotundus L. (Rumput Teki) ................................................... 61 Gambar 4.8. Phyllanthus niruri L. (Meniran) .......................................................... 62 Gambar 4.9. Jatropha curcas L. (Jarak Pagar) ........................................................ 62 Gambar 4.10. Ricinus communis L. (Jarak) ............................................................... 62 Gambar 4.11. Abrus precatorius L (Saga Manis) ...................................................... 62 Gambar 4.12. Arachis hypogaea L. (Kacang Tanah)................................................ 63 Gambar 4.13. Caesalpinia sappan L. (Secang) .......................................................... 63 Gambar 4.14. Cassia alata L. (Ketepeng) .................................................................. 63 Gambar 4.15. Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit (Petai Cina) ............................ 63 Gambar 4.16. Phaseolus vulgaris L. (Kacang Buncis) ............................................... 64 Gambar 4.17. Erythrina subumbrans (Hassk.) Merrill (Dadap) ................................. 64 Gambar 4.18. Kurva serapan daun ketepeng pada panjang gelombang 400 nm ........ 65 Gambar 4.19. Kurva kalibrasi daun ketepeng dengan variasi konsentrasi ekstrak variasi konsentrasi 1 %; 0,5 %; 0,25 %; dan 0,125 % .......................... 66

xii



DAFTAR TABEL Tabel 2.1. Tanaman obat anti diabetes melitus .......................................................... 10 Tabel 3.1. Prosedur optimasi aktivitas enzim α-glukosidase ..................................... 30 Tabel 3.2. Uji aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase..................................... 32 Tabel 4.1. Hasil penapisan fitokimia ekstrak uji ........................................................ 36 Tabel 4.2. Nilai IC 50 pada ekstrak etanol tanaman obat Indonesia dan akarbose ..... 50 Tabel 4.3. Susut pengeringan tanaman uji ................................................................. 67 Tabel 4.4. Hasil ekstraksi dan rendemen ekstrak tanaman uji ................................... 68 Tabel 4.5. Penapisan fitokimia golongan Alkaloid .................................................... 69 Tabel 4.6. Penapisan fitokimia golongan Glikosida .................................................. 70 Tabel 4.7. Penapisan fitokimia golongan Flavonoid.................................................. 71 Tabel 4.8. Penapisan fitokimia golongan Terpen....................................................... 72 Tabel 4.9. Penapisan fitokimia golongan Tanin......................................................... 73 Tabel 4.10. Penapisan fitokimia golongan Saponin ..................................................... 74 Tabel 4.11. Penapisan fitokimia golongan Antrakuinon.............................................. 75 Tabel 4.12. Optimasi aktivitas enzim dengan konsentrasi substrat 10 mM, 20 mM, dan 40 mM ................................................................................................ 76 Tabel 4.13. Optimasi aktivitas enzim dengan konsentrasi substrat 1,25 mM, 2,5 mM, 5 mM, 10 mM, dan 20 mM .............................................................. 76 Tabel 4.14. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada akarbose............................. 77 Tabel 4.15. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun kenikir....................... 77 Tabel 4.16. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada buah pare ........................... 77 Tabel 4.17. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada buah labu siam................... 78 Tabel 4.18. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada herba teki ........................... 78 Tabel 4.19. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada herba meniran .................... 79 Tabel 4.20. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun jarak pagar ................ 79 Tabel 4.21. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun jarak .......................... 80 Tabel 4.22. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun saga manis ................ 80 Tabel 4.23. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada kacang tanah ...................... 80 Tabel 4.24. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada akar secang ........................ 81 Tabel 4.25. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun secang ....................... 81 Tabel 4.26. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun ketepeng.................... 81 Tabel 4.27. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun petai cina................... 82 Tabel 4.28. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada kacang buncis .................... 82 Tabel 4.29. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada akar dadap ......................... 83 Tabel 4.30. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada kulit batang dadap ............. 83 Tabel 4.31. Pengaruh penambahan substrat terhadap aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase tanpa adanya inhibitor ............................................. 84 Tabel 4.32. Pengaruh penambahan substrat terhadap aktivitas penghambata enzim α-glukosidase pada konsentrasi ekstrak Herba Meniran 13,15 ppm ......... 84 Tabel 4.33. Pengaruh penambahan substrat terhadap aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase pada konsentrasi ekstrak Herba Meniran 6,575 ppm ............................................................................................................ 85

xiii



DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Skema Kerja ............................................................................................ 86 Lampiran 2. Cara Perhitungan Unit Larutan Enzim α-Glukosidase ............................ 87 Lampiran 3. Shaking Bath Incubator ........................................................................... 88 Lampiran 4. Spektrofotometer UV-Vis........................................................................ 89 Lampiran 5. Surat Determinasi Tanaman .................................................................... 90 Lampiran 6. Sertifikat Analisis Enzim α-Glukosidase................................................. 93

xiv



BAB 1 PENDAHULUAN

1.1.

Latar Belakang Diabetes melitus (DM) adalah gangguan metabolisme yang ditandai

dengan hiperglikemia yang berhubungan dengan abnormalitas metabolisme karbohidrat, lemak, dan protein, yang disebabkan oleh penurunan sekresi insulin, atau penurunan sensitivitas insulin, atau keduanya. DM dapat menyebabkan komplikasi kronis, mikrovaskuler, makrovaskuler, dan neuropati (Sukandar, Andrajati, Sigit, Adnyana, Setiadi, & Kusnandar, 2010). Prevalensi DM pada semua kelompok usia di dunia diperkirakan meningkat 2,8 % pada tahun 2000 dan mencapai 4,4 % pada tahun 2030 dengan total jumlah penderita diabetes 171 juta jiwa pada tahun 2000 dan menjadi 366 juta jiwa pada tahun 2030. World Health Organization (WHO) memprediksi kenaikan pasien diabetes di Indonesia akan meningkat dari 8,4 juta pada tahun 2000 menjadi sekitar 21,3 juta pada tahun 2030. Berdasarkan data International Diabetes Federation (IDF) tahun 2002, Indonesia merupakan negara ke-4 terbesar untuk prevalensi DM (Wild, Roglic, Green, Sicree, & King, 2004). Untuk mengatasi tingginya prevalensi DM di Indonesia, tanaman herbal memegang peranan penting dalam pengobatan tradisional DM, khususnya pada DM tipe 2. Di banyak wilayah dunia, pengobatan herbal lebih diterima daripada pengobatan konvensional (Soumyanath, 2006). Hal ini didukung pula dengan semakin luasnya isu back to nature sehingga ketertarikan masyarakat terhadap pengobatan herbal semakin tinggi. Tujuan utama dari pengobatan DM tipe 2 adalah untuk mempertahankan kadar gula darah dalam kisaran normal dan mencegah perkembangan komplikasi jangka panjang (Champe, Harvey, & Ferrier, 2005). Adapun mekanisme yang dapat ditujukan untuk pengobatan DM tipe 2 antara lain penghambatan terhadap enzim α-glukosidase, melemahkan pengambilan glukosa dari usus halus, merangsang pelepasan insulin dari sel β pankreas, meningkatkan sensitivitas

1



2

insulin pada organ target, dan mengantagonis aktivitas glukagon (Soumyanath, 2006). Penghambatan enzim α-glukosidase merupakan anti diabetik oral paling aman dan tidak menyebabkan hipoglikemia. Selain itu, tidak ada laporan mengenai efek samping yang serius dari pasien DM yang menggunakan akarbose sebagai obat yang dapat menghambat aktivitas enzim α-glukosidase (Goldstein, 2008). Enzim α-glukosidase merupakan enzim yang mengkatalisis tahap akhir proses pencernaan karbohidrat. Penghambat enzim tersebut merupakan salah satu cara pengobatan DM karena dapat menahan pelepasan glukosa pada oligosakarida dan disakarida dari karbohidrat kompleks dan menunda absorpsi glukosa sehingga menurunkan kadar glukosa plasma postprandial (Hong & Jun, 2008). Beberapa tanaman telah diteliti dapat menghambat enzim α-glukosidase seperti tanaman Salacia reticulata, Myrcia multiflora, Commelina communis, dan Salacia oblonga (Soumyanath, 2006). Di Indonesia, telah dilakukan penelitian aktivitas antihiperglikemik pada tanaman mahkota dewa [Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl.] sebagai penghambat enzim α-glukosidase. Tanaman tersebut memiliki aktivitas penghambatan tertinggi dari ekstrak fraksi etil asetat sehingga dapat menurunkan hiperglikemia postprandial pada penderita DM. Ekstrak fraksi metanol dan air panas dari daun tua aktivitasnya lebih tinggi dari daun muda, sedangkan ekstrak fraksi n-butanol dari daun muda lebih tinggi aktivitasnya daripada daun yang sudah tua (Sugiwati, Setiasih, & Afifah, 2009). Mengingat Indonesia sangat kaya dengan tanaman obat, upaya untuk menguji aktivitas penghambatan α-glukosidase pada tanaman antidiabetik yang tumbuh di Indonesia menjadi penting dilakukan. Pada penelitian ini, dilakukan uji aktivitas penghambatan α-glukosidase terhadap beberapa tanaman obat di Indonesia yang berkhasiat sebagai antidiabetes dan identifikasi fitokimia beberapa golongan senyawa pada masing-masing ekstrak etanol. Pengukuran aktivitas penghambatan α-glukosidase dilakukan dengan menggunakan metode Spectrophotometric Stop Rate Determination. Hasil penghambatan reaksi enzimatik tersebut diukur serapannya pada panjang gelombang 400 nm (Sigma, 1996). Percobaan dilakukan dengan variasi



3

konsentrasi sediaan uji untuk mengetahui konsentrasi paling optimal yang dapat menghambat aktivitas α-glukosidase. 1.2.

Tujuan Penelitian

1.2.1. Mengetahui aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase pada ekstrak etanol tanaman obat Indonesia sebagai pengobatan diabetes melitus. 1.2.2.

Mengetahui golongan senyawa yang terkandung pada ekstrak etanol tanaman obat Indonesia.



BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Diabetes Melitus Diabetes melitus (DM) adalah gangguan metabolisme yang secara genetis dan klinis termasuk heterogen dengan manifestasi berupa hilangnya toleransi karbohidrat. Jika telah berkembang penuh secara klinis, DM ditandai dengan hiperglikemia puasa dan postprandial, aterosklerotik, dan penyakit vaskuler mikroangiopati dan neuropati (Price & Wilson, 2006). Penderita DM ditegakkan berdasarkan kadar glukosa puasa ≥126 mg/dL atau pada dua jam setelah makan ≥200 mg/dL atau HbA 1c ≥ 8%. Jika kadar glukosa dua jam setelah makan lebih dari 140 mg/dL tetapi lebih kecil dari≥ 200 mg/dL dinyatakan glukosa toleransi lemah (Sukandar, Andrajati, Sigit, Adnyana, Setiadi, & Kusnandar, 2010).

2.2. Klasifikasi Diabetes Melitus DM diklasifikasikan menjadi beberapa tipe, yaitu : a.

DM Tipe 1

DM tipe 1 disebabkan karena adanya gangguan produksi insulin akibat penyakit autoimun atau idiopatik. Tipe ini sering disebut dengan insulin dependent diabetes mellitus (IDDM) karena pasien mutlak membutuhkan insulin (Gunawan, Setiabudy, Nafrialdi, & Elysabeth, 2007). Hal ini disebabkan karena sel-sel βpankreas telah dihancurkan oleh proses autoimun sehingga tidak mampu untuk menghasilkan insulin (Price & Wilson, 2006). b.

DM Tipe 2

Pada tipe ini, tidak selalu dibutuhkan insulin, kadang-kadang cukup dengan diet dan antidiabetik oral. Karenanya, tipe 2 ini sering disebut non-insulin dependent diabetes mellitus (NIDDM) (Gunawan, Setiabudy, Nafrialdi, & Elysabeth, 2007). Pada DM tipe II, terdapat dua masalah utama yang berhubungan dengan insulin yaitu resistensi insulin dan gangguan sekresi insulin. Normalnya, insulin akan terikat dengan reseptor khusus pada permukaan sel. Sebagai akibat terikatnya insulin dengan reseptor tersebut, terjadi suatu rangkaian reaksi dalam metabolisme 4



5

glukosa di dalam sel. Resistensi insulin pada DM tipe II disertai dengan penurunan reaksi intrasel sehingga insulin menjadi tidak efektif untuk menstimulasi pengambilan glukosa oleh jaringan. Untuk mengatasi resistensi insulin dan mencegah terbentuknya glukosa dalam darah harus terdapat peningkatan insulin yang disekresikan. Pada penderita toleransi glukosa terganggu, keadaan ini terjadi akibat sekresi insulin yang berlebihan dan kadar glukosa akan dipertahankan pada tingkat yang normal atau sedikit meningkat. Namun, jika sel-sel tidak mampu mengimbangi peningkatan kebutuhan akan insulin, kadar glukosa akan meningkat dan terjadi DM tipe II (Price & Wilson, 2006). c.

Gestational Diabetes Melitus

Gestational Diabetes Melitus merupakan DM pada kehamilan akibat penyakit endokrin atau pankreas atau akibat penggunaan obat (Gunawan, Setiabudy, Nafrialdi, & Elysabeth, 2007). DM tipe ini terjadi pada wanita yang tidak menderita diabetes sebelum kehamilannya. Hiperglikemia terjadi selama kehamilan akibat sekresi hormon-hormon plasenta. Sesudah melahirkan bayi, kadar glukosa darah pada wanita yang menderita diabetes gestasional akan kembali normal (Price & Wilson, 2006).

2.3.

Penatalaksanaan Diabetes Melitus Penatalaksanaan DM berdasarkan pada regimen diabetik, yang meliputi diet,

olahraga, obat-obatan, edukasi mengenai diabetes, manajemen diri, dan pemantauan kadar glukosa (Price & Wilson, 2006). Untuk penderita DM Tipe 1, pengobatan dapat dibagi menjadi beberapa kategori yaitu insulin, kombinasi insulin dan thiazolidindion (ketika resisten terhadap insulin), diet, dan latihan fisik. Sedangkan untuk penderita DM tipe 2, pengobatan dapat dibagi menjadi beberapa kategori yaitu diet dan mengurangi berat badan, latihan fisik, agen hipoglikemik

oral

(termasuk

sulfonilurea

dan

meglitinid)

serta

agen

antihiperglikemik (termasuk metformin, thiazolidindion, dan penghambat αglukosidase) (Minneman & Wecker, 2005). Terapi farmakologi yang dapat diberikan bagi penderita DM

antara lain insulin, sulfonilurea, meglitinid,



6 biguanid, tiazolidindion, dan penghambat α-glukosidase (Minneman & Wecker, 2005).

2.3.1. Insulin Insulin dapat menurunkan kadar gula darah dengan menstimulasi pengambilan glukosa perifer dan menghambat produksi glukosa hepatik. Insulin digunakan pada pasien DM tipe 1, DM tipe 2 yang gula darahnya tidak dapat dikendalikan dengan diet dan antidiabetik oral, DM dengan berat badan yang menurun cepat, DM dengan komplikasi akut, DM pasca bedah pankreas, ketoasidosis dan koma hiperosmolar, dan DM dengan kehamilan (Sukandar, Andrajati, Sigit, Adnyana, Setiadi, & Kusnandar, 2010).

2.3.2. Sulfonilurea Senyawa sulfonilurea dibagi menjadi dua golongan atau generasi senyawa. Golongan pertama senyawa sulfonilurea mencakup tolbutamida, tolazamida, asetoheksamida, dan klorpropamida. Sedangkan generasi kedua meliputi glibenklamida (gliburida), glipizida, dan glimepirida. Obat-obat generasi kedua lebih kuat 10-100 kali dibanding senyawa sebelumnya (Minneman & Wecker, 2005). Sulfonilurea bekerja merangsang sekresi insulin pada pankreas sehingga hanya efektif bila sel β pankreas masih dapat berproduksi (Sukandar, Andrajati, Sigit, Adnyana, Setiadi, & Kusnandar, 2010).

2.3.3. Meglitinid Golongan ini terdiri dari 2 macam obat yaitu: repaglinid dan nateglinid. Strukturnya tidak ada hubungannya dengan golongan sulfonilurea tetapi memiliki mekanisme aksi yang sama. Meglitinid dapat menyebabkan depolarisasi membran dan pelepasan insulin (Minneman & Wecker, 2005).

2.3.4. Biguanid Satu-satunya senyawa biguanid yang masih dipakai sebagai antidiabetik oral saat ini adalah metformin. Obat ini mempunyai efek utama mengurangi produksi glukosa hati (glukoneogenesis), menghambat ambilan glukosa dari usus, dan Universitas Indonesia


7

meningkatkan ambilan glukosa oleh otot dan sel lemak. Metformin tidak menyebabkan kenaikan berat badan sehingga metformin sering menjadi pilihan obat pertama untuk pasien DM tipe 2 yang mengalami obesitas (Minneman & Wecker, 2005).

2.3.5. Tiazolidindion Tiazolidindion adalah kelas agen antihiperglikemik yang baru yang dapat menurunkan kadar glukosa darah dengan meningkatkan sensitivitas insulin. Obat yang termasuk golongan ini adalah rosiglitazon dan pioglitazon (Minneman & Wecker, 2005). 2.3.6. Penghambat α-Glukosidase Akarbose dan miglitol dapat menghambat α-glukosidase yang merupakan enzim yang terdapat pada saluran gastrointestinal yang berperan dalam degradasi kompleks karbohidrat (Minneman & Wecker, 2005).

2.4.

Enzim α-Glukosidase α-Amilase dan α-glukosidase termasuk dalam enzim metabolisme

karbohidrat (Shinde et al, 2008). Amilum dalam makanan dipecah menjadi oligosakarida oleh enzim α-amilase yang terdapat di saliva dan pankreas. αGlukosidase merupakan kumpulan enzim yang terikat pada membran usus halus villi yang memecah ikatan oligosakarida dan disakarida menjadi monosakarida. Adapun yang termasuk enzim ini adalah maltase, isomaltase, sukrase, laktase, trehalase, dan α-dextrinase (Soumyanath, 2006). Produk akhir dari pencernaan karbohidrat adalah monosakarida seperti glukosa, fruktosa, dan galaktosa. Normalnya, monosakarida dilepaskan dengan cepat untuk diserap oleh usus halus (Soumyanath, 2006). Penghambatan αglukosidase di usus akan membatasi level glukosa postprandial melalui keterlambatan proses hidrolisis dan absorbsi karbohidrat sehingga dapat digunakan dalam manajemen pengobatan DM tipe 2 (Shinde et al, 2008). Adapun beberapa senyawa yang telah diuji dapat menghambat α-glukosidase antara lain



8

akarbose, miglitol, dan N-buttyl-1-deoksinojirimisin (Melo, Gomes, & Carvalhob, 2006).

Tempat Kerja Akarbose amilum

[Sumber : “Diabetes,” n.d.] Keterangan : : Tempat penghambatan secara kompetitif (Gambar telah diolah kembali)

Gambar 2.1. Mekanisme penghambatan enzim pencernaan oleh akarbose

2.5.

Akarbose

[Sumber : Sugiwati, Setiasih, & Afifah, 2009]

Gambar 2.2. Struktur kimia akarbose

2.5.1. Nama Kimia O-1,4-amino-4,6-dideoxy-N-[(1S,4R,5S,6S)-4,5,6-trihydroxy-3(hydroxymethylcyclohex-2-enyl)-1-yl]α-D-glucopyranosyl-(1->4)-O-α-Dglucopyranosyl-(1->4)-D-glucopyranose (Reynolds, 1982). Universitas Indonesia


9

2.5.2. Farmakologi Akarbose merupakan oligosakarida yang diperoleh dari mikroba yang secara kompetitif menghambat glukoamilase dan sukrase. Akarbose paling efektif bila diberikan bersama makanan yang berserat, mengandung polisakarida, dengan sedikit kandungan glukosa dan sukrosa (Gunawan, Setiabudy, Nafrialdi, & Elysabeth, 2007).

2.5.3. Mekanisme Kerja Akarbose merupakan pseudotetrasakarida yang memiliki ikatan nitrogen diantara unit glukosa pertama dan kedua. Gugus nitrogen penting untuk afinitas akarbose terhadap α-glukosidase dan juga stabilitasnya. Akarbose bekerja sebagai penghambat kompetitif dengan menghalangi reaksi enzimatik khususnya karena adanya gugus nitrogen pada senyawa tersebut (Goldstein, 2008). Penghambatan α-glukosidase dapat menyebabkan perlambatan absorbsi polisakarida (starch), dekstrin, dan disakarida di dinding usus halus. Dengan menghambat kerja αglukosidase di brush border intestine, peningkatan glukosa plasma pada orang normal dan pasien DM dapat dicegah (Gunawan, Setiabudy, Nafrialdi, & Elysabeth, 2007).

2.5.4. Efek samping Efek samping sistemik jarang terjadi tetapi pemberian dosis tinggi dapat mengakibatkan peningkatan idiosinkratik kadar serum hepatik transaminase. Efek samping yang sering terjadi, terutama gangguan lambung, lebih banyak gas, lebih sering flatus, dan kadang-kadang diare. Efek samping ini meningkat dengan keberlanjutan terapi tetapi akan berkurang dengan pemberian dosis awal yang rendah dan titrasi dosis (Walker & Edwards, 2003).

2.6.

Tanaman Obat Anti Diabetes Melitus Pengobatan tradisional yang dilakukan melalui pemanfaatan tanaman

obat-obatan secara praktis telah dilakukan oleh masyarakat di Indonesia, khususnya di daerah-daerah pedalaman sejak zaman dahulu. Tanaman yang biasa digunakan sebagai pengobatan anti diabetes dan tumbuh di Indonesia dipilih Universitas Indonesia


10 untuk kemudian diuji aktivitasnya terhadap α-glukosidase (Soumyanath, 2006; PT Esai Indonesia, 1995). Berikut adalah beberapa tanaman antidiabetes Indonesia.

Tabel 2.1. Tanaman obat anti diabetes melitus No

Famili

1

Asteraceae

2

Cucurbitaceae

3

Cyperaceae

4

5

6

2.7.

Euphorbiaceae

Fabaceae

Papilionaceae

Bagian yang Digunakan

Nama Tanaman Cosmos Caudatus Kunth (Kenikir)

Herba

Momordica charantia L. (Paria/Pare)

Buah

Sechium edule (Jacq.) Sw. (Labu Siam)

Buah

Cyperus rotundus L. (Rumput Teki)

Herba

Phyllanthus niruri L. (Meniran)

Herba

Jatropha curcas L. (Jarak Pagar)

Daun

Ricinus communis L. (Jarak)

Daun

Abrus precatorius L (Saga Manis)

Daun

Arachis hypogaea L. (Kacang Tanah)

Kacang

Caesalpinia sappan L. (Secang)

Akar, Daun

Cassia alata L. (Ketepeng)

Daun

Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit (Petai Cina)

Daun

Phaseolus vulgaris L. (Kacang Buncis)

Kacang

Erythrina subumbrans (Hassk.) Merrill (Dadap)

Akar, Kulit Batang

Deskripsi Tanaman Obat Anti Diabetes Melitus

2.7.1. Cosmos caudatus Kunth (Kenikir) Kenikir merupakan perdu setinggi 75 cm sampai 100 cm. Kenikir memiliki bau yang khas serta batang yang tegak, segi empat, beralur membujur, bercabang banyak, muda berbulu, beruas, dan berwarna hijau keunguan. Tanaman ini memiliki daun majemuk, bersilang berhadapan, berbagi menyirip, ujung runcing, tepi merata, panjang 15-25 cm, dan berwarna hijau. Kenikir memiliki buah yang keras, berbentuk jarum, ujung berambut, serta warna ketika masih muda adalah hijau sedangkan jika telah tua menjadi coklat. Perdu ini memiliki akar tunggang. Kenikir mengandung saponin, flavonoid, polifenol, dan minyak atsiri. Daun cosmos caudatus berkhasiat sebagai penambah nafsu makan, obat lemah lambung, dan untuk mengusir serangga (Ristek, 2002).



11

2.7.2. Momordica charantia L. (Pare) Pare banyak terdapat di daerah tropika, tumbuh baik di dataran rendah dan dapat ditemukan tumbuh liar di tanah terlantar. Tanaman ini ditanam di pekarangan dengan dirambatkan di pagar, untuk diambil buahnya. Tanaman ini tidak memerlukan banyak sinar matahari sehingga dapat tumbuh subur di tempattempat yang agak terlindung sinar matahari. Tanaman setahun ini merambat atau memanjat dengan alat pembelit atau sulur berbentuk spiral, banyak bercabang, berbau tidak enak. Pare memiliki batang berusuk lima dengan panjang 2-5 m dan daun tunggal yang terletak berseling dengan panjang 3,5-8,5 cm serta berwarna hijau tua. Bunga pare berkelamin dua dalam satu pohon, bertangkai panjang, berwarna kuning dan buah bulat memanjang, dengan 8-10 rusuk memanjang, berbintil-bintil tidak beraturan dengan panjangnya 8-30 cm. Buah pare berasa pahit, berwarna hijau tetapi bila masak menjadi jingga yang pecah dengan 3 katup. Biji buah pare banyak, berwarna coklat kekuningan, bentuknya pipih memanjang, dan keras. Buah pare mengandung karantin, hydroxytryptamine, vitamin A,B dan C. Buah pare memiliki khasiat untuk mengobati penyakit batuk, radang tenggorokan, sakit mata merah, demam, malaria, menambah nafsu makan, kencing manis, rhematik, sariawan, bisul, abses, sakit lever, sembelit, dan cacingan (Ristek, 2002).

2.7.3. Sechium edule (Jacq.) Sw. (Labu Siam) Labu siam merupakan perdu yang merambat. Tanaman ini memiliki batang lunak, beralur, banyak cabang, terdapat pembelit berbentuk spiral, kasap, dan berwarna hijau. Labu siam memiliki daun tunggal, bentuk jantung, tepi bertoreh dan berwarna hijau. Bunga merupakan bunga majemuk, berada di ketiak daun, kelopak bertaju lima. Buah labu siam berbentuk buni bulat, menggantung dengan permukaan berlekuk dan berwarna hijau keputih-putihan. Biji labu siam berbentuk pipih, berkeping dua, dan berwarna putih. Labu siam memiliki akar berupa akar tunggang dan berwarna putih kecoklatan. Buah labu siam mengandung saponin, alkaloid, tanin, polifenol, antosianin, dan flavonoid. Labu siam mempunyai kegunaan sebagai penurun tekanan darah, mempunyai efek diuretik, dapat menyembuhkan gangguan sariawan, panas dalam, demam Universitas Indonesia


12

pada anak-anak serta baik digunakan oleh penderita asam urat dan memiliki efek hipoglikemik (Khikmawati, 2009).

2.7.4. Cyperus rotundus L. (Rumput Teki) Rumput teki merupakan terna menahun dengan tinggi 10 cm sampai 80 cm. Rumput teki memiliki batang tumpul segitiga dan tajam. Daun rumput teki berjumlah 4 sampai 10 helai berjejal pada pangkal batang dengan pelepah daun tertutup tanah. Rumput teki memiliki buah yang berbentuk memanjang sampai bulat telur sungsang dengan panjang lebih kurang 5 mm. Teki mengandung minyak atsiri, alkaloid, glikosida jantung, flavonoid, siperena, siperol, siperon, pinene, dan seskuiterpen. Tanaman ini dapat digunakan untuk mengobati penyakit kolera, disentri, kencing batu, dan batuk (Depkes, 1989).

2.7.5. Phyllanthus niruri L. (Meniran) Meniran berasal dari daerah tropis yang tumbuh liar di hutan, ladang, kebun maupun pekarangan halaman rumah. Pada umumnya, tanaman ini tidak dipelihara karena dianggap tumbuhan rumput biasa. Meniran tumbuh subur ditempat yang lembab pada dataran rendah sampai ketinggian 1000 meter di atas permukaan laut. Batang tanaman ini berbentuk bulat berbatang basah dengan tinggi kurang dari 50 cm. Meniran memiliki daun bersirip genap dan setiap satu tangkai daun terdiri dari daun majemuk yang mempunyai ukuran kecil dan berbentuk lonjong. Bunga meniran terdapat pada ketiak daun dan menghadap kearah bawah. Meniran mengandung filantin, kalium, damar, hipofilantin dan zat samak. tanin, flavonoid, alkaloid, triterpenoid, asam lemak, dan vitamin C. Tanaman ini dapat digunakan untuk mengobati penyakit sakit kuning (lever), malaria, demam, ayan, batuk, sakit haid, disentri, luka bakar, dan jerawat (Ristek, 2002).

2.7.6. Jatropha curcas L. (Jarak Pagar) Jarak pagar adalah semak pohon kecil, famili Euphorbiaceae. Jarak pagar tumbuh di daerah tropis dan subtropis. Tanaman ini memiliki banyak manfaat, seperti mencegah dan mengontrol erosi. Kayu dan buah dari jarak dapat Universitas Indonesia


13

digunakan untuk berbagai tujuan termasuk bahan bakar. Biji jarak mengandung minyak kental, yang dapat digunakan untuk pembuatan lilin dan sabun (Akbar, Yaakob, Kamarudin, Ismail, & Salimon, 2009).

2.7.7. Ricinus communis L. (Jarak) Jarak dapat tumbuh liar di hutan, tanah kosong, sepanjang pantai, atau ditanam sebagai komoditi perkebunan. Jarak dapat tumbuh di areal yang kurang subur asalkan pH tanahnya 6 - 7 dan drainase airnya baik karena akar jarak tidak tahan terhadap genangan air. Tanaman jarak merupakan perdu tegak yang tumbuh pada ketinggian antara 0 - 800 m di atas permukaan laut, tinggi 2 - 3 m, dan mudah dikembangbiakkan dengan biji-bijian yang telah tua. Jarak adalah tumbuhan setahun (anual) dengan batang bulat licin, berongga, berbuku-buku jelas dengan tanda bekas tangkai daun yang lepas, warna hijau bersemburat merah tengguli. Tanaman ini memiliki daun tunggal dan tumbuh berseling. Warna daun dari tanaman jarak berbeda bagian atas dan bawahnya, dimana di permukaan atas berwarna hijau tua sedangkan di permukaan bawah berwarna hijau muda. Jarak memiliki bunga majemuk, berwarna kuning jingga, dan berkelamin satu. Buah jarak berbentuk bulat berkumpul dalam tandan, berupa buah kendaga, dengan 3 ruangan dengan setiap ruang berisi satu biji. Buah jarak mempunyai duri-duri yang lunak dan berwarna hijau muda dengan rambut merah. Daun mengandung kaemferol-3-rutinoside, nicotiflorin, isoquercitrin, rutin, kaempferol, quercetin, astragalin, reynoutrin, ricinine vit.C. Penyakit yang dapat diobati antara lain kanker rahim, kanker kulit, sulit buang air besar, sulit melahirkan, TBC, bisul, luka gores, scabies, infeksi jamur, jerawat, lumpuh otot muka, gatal, batuk, hernia, bengkak, reumatik, tetanus, dan bronkhitis (Ristek, 2002).

2.7.8. Abrus precatorius L. (Saga Manis) Saga manis merupakan perdu yang merambat, melilit, dan tinggi 2 m sampai 5 m. Saga manis memiliki daun majemuk yang duduk berselang-seling. Buah saga manis berbentuk polong, lonjong, gemuk, panjang 2 mm sampai 5 cm, dan berisi 3 sampai 6 biji. Biji di dalam buah berbentuk bulat lonjong, panjang 6 mm sampai 7 mm dan tebal (garis tengah) 4 mm sampai 5 mm, keras, dan jika Universitas Indonesia


14

masih segar berwarna merah mengkilap (Depkes, 1989). Daun saga mengandung protein, vitamin A, B 1 , B 6 , C, kalsium oksalat, glisirizin, flisirizinat, polygalacturomic acid dan pentosan. Tanaman ini dapat digunakan untuk mengobati penyakit amandel, radang mata, sariawan (Ristek, 2002).

2.7.9. Arachis hypogaea L. (Kacang Tanah) Kacang tanah merupakan semak semusim dengan tinggi ± 60 cm. Tanaman ini berbatang tegak, bercabang, dan berwarna hijau keputih-putihan. Kacang tanah memiliki daun majemuk, menyirip, lonjong, tepi rata, ujung runcing, pangkal tumpul, berbulu, dan hijau. Bunga kacang tanah terletak di ketiak daun. Tanaman ini memiliki buah polong dan terdiri dari 1 sampai 3 biji. Akar kacang tanah berupa akar tunggang dan berwarna putih kecoklatan. Biji mengandung saponin, flavonoid, dan polifenol. Biji kacang berkhasiat untuk pencahar, memperkuat sperma, dan obat sakit sendi (Ristek, 2002).

2.7.10. Caesalpinia sappan L. (Secang) Secang merupakan semak atau pohon kecil dengan tinggi sampai 10 meter. Ranting-ranting secang berlentisel dan berduri dengan bentuk duri bengkok dan tersebar. Secang memiliki daun majemuk dengan panjang 25 sampai 30 cm, bersirip, setiap sirip mempunyai 10 sampai 20 pasang anak daun yang berhadapan. Anak daun tersebut tidak bertangkai, berbentuk lonjong, pangkal hampir rompang ujung bundar dan sisinya agak sejajar (Depkes, 1989). Kayu secang mengandung asam galat, tanin, resin, resorsin, brasilin, brasilein, d-alfaphellandrene, oscimene, minyak atsiri. Daun mengandung minyak atsiri yang berbau enak dan hampir tidak berwarna. Penyakit yang dapat diobati oleh tanaman ini antara lain diare, disentri, batu darah (TBC), luka dalam, sifilis, darah kotor, muntah darah, buang air besar berdarah, luka berdarah, memar berdarah, malaria, tetanus, tumor, dan radang selaput lendir mata (Ristek, 2002).

2.7.11. Cassia alata L. (Ketepeng) Ketepeng merupakan semak dengan tinggi sampai 5 m. Percabangan tanaman ini tidak terlalu banyak dan biasanya menggumpal diatas. Ketepeng Universitas Indonesia


15

memiliki daun yang tersusun majemuk, terdiri atas 8 sampai 24 pasang, bentuknya lonjong atau lonjong sampai bundar telur sungsang, pangkal dan ujungnya umumnya tumpul. Perbungaan ketepeng keluar di ujung cabang berupa tandan yang panjangnya sampai 70 cm. Bunga-bunga ini dewasanya tidak serentak, adakalanya bagian bawah sudah membentuk polong sedangkan diatasnya masih berupa kuncup-kuncup bunga. Masa berbunganya sekitar bulan Maret sampai dengan bulan Oktober. Tanaman mengandung asam krisofanik, krisarobin, oksimetil, antrakuinon, tanin, dan zat pahit (Depkes, 1989). Tanaman ini biasa digunakan untuk mengobati obat sakit kulit, laksan, obat demam, dan astrigen.

2.7.12. Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit (Petai Cina) Petai cina adalah tumbuhan yang memiliki batang pohon keras dan berukuran tidak besar. Daun petai cina majemuk terurai dalam tangkai berbilah ganda. Petai cina memiliki bunga yang berjambul dan berwarna putih yang sering disebut cengkaruk. Buah petai cina termasuk buah polong, berisi biji-biji kecil yang jumlahnya cukup banyak. Petai cina oleh para petani di pedesaan sering ditanam sebagai tanaman pagar, pupuk hijau dan segalanya. Petai cina cocok hidup di dataran rendah sampai ketinggian 1500 meter di atas permukaan laut. Penyakit yang dapat diobati oleh tanaman ini antara lain diabetes melitus, cacingan, meningkatkan gairah seks, luka baru dan bengkak (Ristek, 2002).

2.7.13. Phaseolus vulgaris L. (Buncis) Buncis merupakan semak menjalar dengan panjang 2 sampai 3 m. Buncis memiliki batang yang tegak, bulat, lunak, membelit, dan berwarna hijau. Semak ini berdaun majemuk, lonjong, berambut, ujung meruncing, pangkal membulat, tepi rata, pertulangan menyirip, tangkai persegi, beranak daun tiga, dan berwarna hijau tua. Buncis memiliki bunga majemuk, bentuk tandan, di ketiak daun, tangkai panjang ± 5 cm, hijau keunguan, kelopak segitiga, berambut, dan panjang 2 sampai 3 cm. Buah polong tanaman buncis memiliki panjang ± 10 cm, jika masih muda berwarna hijau kekuningan, tetapi setelah tua berwarna cokelat. Biji buncis berbentuk lonjong, mengkilat, permukaan licin, dan putih. Buncis memiliki akar Universitas Indonesia


16

tunggang dan berwarna kuning kotor. Buah, daun, dan batang mengandung saponin dan polifenol. Buah buncis berkhasiat untuk peluruh air seni dan daun mudanya untuk menambah zat besi (Ristek, 2002).

2.7.14. Erythrina subumbrans (Hassk.) Merrill (Dadap) Dadap merupakan pohon dengan setinggi 15 – 20 m. Dadap memiliki batang tegak, berkayu, bulat, percabangan simpodial, licin, dan berwarna hijau berbintik-bintik putih. Pohon ini memiliki daun majemuk, bersilang, segitiga, tepi rata, ujung meruncing, pangkal membulat hampir rata, bertangkai silindris, panjang 2-2,5 cm, dan berwarna hijau. Dadap memiliki buah polong, panjang 4-6 cm, dan berwarna hijau muda. Biji dadap berbentuk ginjal dan coklat, sedangkan akar berupa akar tunggang yang berwarna putih. Akar dan kulit batang dadap mengandung saponin, flavonoid, dan polifenol. Daun Erythrina lithosperma berkhasiat sebagai obat demam bagi wanita yang habis melahirkan (demam nifas) dan untuk memperlancar keluarnya air susu (Ristek, 2002).

2.8.

Proses Pembuatan Ekstrak Ekstrak adalah sediaan yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari

simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa serbuk yang diperoleh diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes, 1995a). Proses awal pembuatan ekstrak adalah tahapan pembuatan serbuk simplisia kering dengan peralatan tertentu hingga derajat kehalusan tertentu (Depkes, 2000). Cairan pelarut dalam proses pembuatan ekstrak adalah pelarut yang baik (optimal) untuk senyawa kandungan yang berkhasiat atau yang aktif sehingga senyawa tersebut dapat terpisahkan dari bahan dan dari senyawa kandungan lainnya, serta ekstrak hanya mengandung sebagian besar senyawa kandungan yang diinginkan. Cairan pelarut dipilih yang melarutkan hampir semua metabolit sekunder yang terkandung (Depkes, 2000). Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Terdapat Universitas Indonesia


17

beberapa metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut antara lain cara dingin yaitu maserasi dan perkolasi, serta cara panas yaitu refluks, sokletasi, digesti, infus, dan dekok. Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya, dilakukan pengulangan proses pada residu (Depkes, 2000).

2.9.

Penapisan Fitokimia Penapisan kimia merupakan suatu tahap seleksi awal guna mendeteksi

golongan senyawa kimia yang terdapat pada tumbuhan. Metode ini merupakan salah satu dari beberapa pendekatan yang lazim digunakan unutk mencari komponen senyawa kimia tumbuhan yang memiliki aktivitas biologis. Pemeriksaan diarahkan pada senyawa metabolit sekunder yang memiliki khasiat bagi kesehatan seperti, alkaloid, glikosida, flavonoid, terpen, tanin, saponin, dan antrakuinon.

2.9.1. Alkaloid Alkaloid merupakan senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen. Alkaloid biasanya tak berwarna, bersifat optis aktif, kebanyakan berbentuk kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan pada suhu kamar (Harborne, 1987). Pada umumnya, alkaloid larut dalam air jika berupa garam, misalnya dengan asam klorida dan asam sulfat, dan sukar larut dalam pelarut organik. Sebaliknya, bentuk basa atau bebasnya mudah larut dalam pelarut organik dan sukar larut dalam air (Sirait, 2007).

2.9.2. Glikosida Glikosida adalah suatu senyawa yang jika dihidrolisis akan terurai menjadi gula (glikon) dan senyawa lain (aglikon atau genin). Gula yang terkandung umumnya berupa glukosa, fruktosa, galaktosa, dan manosa. Genin merupakan senyawa yang mempunyai gugus –OH dalam senyawa alkoholis atau fenol (Sirait, 2007).



18

2.9.3. Flavonoid Flavonoid adalah senyawa yang terdiri dari C 6 -C 3 -C 6 . Flavonoid umumnya terdapat pada tumbuhan sebagai glikosida (Sirait, 2007). Glikosida flavonoid merupakan pigmen kuning yang sangat luas penyebarannya di dalam tanaman (Gunawan & Mulyani, 2004). Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Flavonoid dapat diekstraksi dengan etanol 70 % dan tetep ada dalam lapisan air setelah ekstrak ini dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa senyawa fenol sehingga warnanya berubah bila ditambah basa atau amonia (Harborne, 1987).

2.9.4. Terpen Terpen adalah suatu senyawa yang tersusun atas isopren CH 2 =C(CH 3 )CH=CH 2 dan kerangka karbonnya dibangun oleh penyambungan dua atau lebih satuan C 5 ini. Secara umum, senyawa ini larut dalam lemak dan terdapat dalam sitoplasma sel tumbuhan (Harborne, 1987).

2.9.5. Tanin Tanin merupakan senyawa yang terdapat dalam tumbuhan dan tersebar luas. Tanin memiliki gugus fenol, memiliki rasa sepat, dan mempunyai kemampuan menyamak kulit. Tanin secara kimia dikelompokkan menjadi dua golongan yaitu tanin terkondensasi dan tanin terhidrolisis. Tanin terkondensasi atau flavolan secara biosintesis dapat dianggap terbentuk dengan cara kondensasi katekin tunggal yang membentuk senyawa dimer dan kemudian oligomer yang lebih tinggi. Tanin terhidrolisis mengandung ikatan ester yang dapat terhidrolisis jika dididihkan dalam asam klorida encer (Harborne, 1987).

2.9.6. Saponin Saponin tersebar luas diantara tanaman tinggi. Keberadaan saponin sangat mudah ditandai dengan pembentukan larutan koloidal dengan air yang apabila dikocok menimbulkan buih yang stabil. Saponin merupakan senyawa yang berasa pahit menusuk, menyebabkan bersin, mengiritasi selaput lendir, menghancurkan butir darah merah, dan bersifat racun pada hewan berdarah dingin (Gunawan & Universitas Indonesia


19

Mulyani, 2004). Glikosida saponin dikelompokkan menjadi dua yaitu saponin steroid dan saponin triterpenoid. Kedua kelompok tersebut larut dalam air dan etanol, tetapi tidak larut dalam eter. Bagian aglikonnya disebut dengan sapogenin (Robinson, 1983).

2.9.7. Antrakuinon Antrakuinon merupakan kelompok kuinon yang paling besar. Semua antrakuinon memiliki titik leleh yang tinggi, senyawa berbentuk kristal yang larut dalam pelarut organik, dan berwarna merah, kuning, atau cokelat (Robinson, 1983). Antrakuinon merupakan golongan senyawa yang berfungsi sebagai pencahar. Antrakuinon bentuk bebas memiliki kelarutan dalam air yang rendah dan tidak dapat diabsorbsi. Sebaliknya, antrakuinon yang berbentuk glikosida mudah diabsorbsi dalam usus kecil (Gunawan & Mulyani, 2004).

2.10.

Spektrofotometri UV-Vis Radiasi elektromagnetik, dimana sinar ultraviolet dan sinar tampak

merupakan salah satunya, dapat dianggap sebagai energi yang merambat dalam bentuk gelombang. Sinar ultra violet memiliki panjang gelombang 200-400 nm, sedangkan sinar tampak memiliki panjang gelombang 400-750 nm. Molekul yang dapat memberikan absorpsi yang bermakna pada daerah panjang gelombang 200780 nm adalah molekul-molekul yang mempunyai gugus kromofor dan gugus auksokrom (Gandjar & Rohman, 2007). Gugus kromofor adalah semua gugus atau atom dalam senyawa organik yang mampu menyerap sinar ultra violet atau sinar tampak. Gugus auksokrom adalah gugus fungsional yang memiliki elektron bebas seperti -OH, -O, NH 2 , -OCH 3 yang memberikan transisi n  π*. Terikatnya gugus ausokrom pada gugus kromofor akan mengakibatkan pergeseran pita absorbansi menuju ke panjang gelombang yang lebih besar (pergeseran merah = pergeseran batokromik) disertai dengan peningkatan intensitas (efek hiperkromik). Jika radiasi elektromagnetik dengan panjang gelombang antara 200-380 nm dikenakan pada molekul-molekul yang mempunyai gugus-gugus tersebut, akan terjadi absorpsi dari radiasi elektromagnetik itu oleh molekul-molekul tadi dan mengakibatkan Universitas Indonesia


20

terjadinya transisi elektron dari tingkat energi yang lebih rendah ke tingkat energi yang lebih tinggi (Gandjar & Rohman, 2007). Ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam analisis dengan spektrofotometri UV-Vis, terutama untuk senyawa yang semula tidak berwarna yang akan dianalisis dengan spektrofotometri visible karena senyawa tersebut harus diubah terlebih dahulu menjadi senyawa yang berwarna. Waktu operasional harus diperhatikan. Semakin lama waktu pengukuran, kemungkinan senyawa berwarna tersebut menjadi rusak atau terurai sehingga intensitas warnanya turun dan absorbansinya juga turun. Pemilihan panjang gelombang yang digunakan adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Absorbansi tersebut dapat dipengaruhi oleh jenis pelarut, pH larutan, suhu, konsentrasi tinggi, dan zat-zat pengganggu. Selain itu, pembuatan larutan baku dan pembacaan absorbansi sampel atau cuplikan juga harus diperhatikan agar mengurangi presentasi kesalahan yang terjadi (Gandjar & Rohman, 2007). Spektrum serapan kandungan tumbuhan dapat diukur dalam larutan yang sangat

encer

dengan

pembanding

blanko

pelarut

serta

menggunakan

spektrofotometer yang merekam otomatis. Pelarut yang banyak digunakan untuk spektrofotometri UV ialah etanol 95% karena kebanyakan golongan senyawa larut dalam pelarut tersebut (Harborne, 1987).

2.11.

Pengukuran Aktivitas Penghambatan Enzim α-glukosidase Pengukuran

aktivitas

dilakukan

dengan

menggunakan

metode

Spectrophotometric Stop Rate Determination yang didasarkan pada pengukuran absorbansi p-nitrofenol (berwarna kuning) yang merupakan hasil reaksi hidrolisis substrat

p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa

oleh

α-glukosidase

disamping

menghasilkan glukosa (Sigma, 1996). Intensitas warna kuning yang terbentuk ditentukan absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer double beam pada panjang gelombang 400 nm (Soumnyanath, 2006). Berdasarkan nilai variabel dan nilai absorbansi, aktivitas enzim dapat dihitung dalam satuan U/ml atau U/mg enzim (Kikkoman, 2011). Jika terdapat aktivitas penghambatan terhadap α-glukosidase, pembentukan p-nitrofenol akan berkurang. Hal ini akan terlihat dari nilai absorbansi yang menurun. Universitas Indonesia


21

O N

HO

OH

O

OH

α-glukosidase

OH

HO

N

OH

O

O

+ OH

OH O

HO

OH

O

p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida

O

α-D-glukopiranosida

p-nitrof enol

[Sumber : Sugiwati, Setiasih, & Afifah, 2009]

Gambar 2.3. Persamaan reaksi enzimatik α-glukosidase dan p-nitrofenil-αD-glukopiranosa

2.12.

Kinetika Enzim Data kinetik dan termodinamik dari reaksi enzim pada umumnya,

menunjukan adanya pembentukan kompleks antar enzim (tempat aktif) dan reagen (substrat dan kofaktor), terjadinya reaksi dan kemudian pembentukan kompleks enzim-produk, dan disosiasi dari kompleks produk-enzim serta regenerasi tempat aktif menjadi bentuk yang sesuai untuk menerima reagen kembali (Manitto, 1992). Konsentrasi substrat yang menghasilkan separuh kecepatan maksimal disebut dengan konstanta Michaelis (Km). Nilai Km dapat ditetapkan secara eksperimental dengan membuat grafik dari v 1 sebagai fungsi [S]. Persamaan Michaelis-Menten dapat digambarkan sebagai berikut : V1 =

(2.1)

Persamaan tersebut menjelaskan banyak perilaku enzim seiring dengan variasi konsentrasi substrat. Selain itu, bentuk linier persamaan Michaelis-Menten dapat digunakan untuk menentukan nilai Km dan Vmaks dengan membalik dan menfaktorkan persamaan tersebut sehingga menjadi plot resiprokal ganda (Lineweaver-Burk): .

+

(2.2)



22

[Sumber : Murray, Granner, Mayes, & Rodwell, 2003]

Gambar 2.4. Plot resiprokal ganda atau Lineweaver-Burk

Berdasarkan persamaan regresi y = ax + b, dimana y =

dan x=

, dapat

dibedakan jenis inhibisi kompetitif dari inhibisi nonkompetitif (Murray, Granner, Mayes, & Rodwell, 2003).


Gambar 2.5. Plot Lineweaver-Burk yang menunjukkan inhibisi kompetitif klasik



23


Gambar 2.6. Plot Lineweaver-Burk yang menunjukkan inhibisi nonkompetitif reversibel.



BAB 3 METODE PENELITIAN

3.1.

Tempat dan Waktu Penelitian dilakukan di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Kimia

Farmasi Kuantitatif, Departemen Farmasi FMIPA UI selama bulan Desember 2010 sampai Mei 2011.

3.2.

Bahan

3.2.1. Bahan uji Buah pare, buah labu siam, kacang tanah, serta kacang buncis diperoleh dari pasar tradisional (Jakarta, Indonesia), daun jarak dari kebun Farmasi Universitas Indonesia (Depok, Indonesia), daun petai cina dan daun jarak pagar dari kebun perumahan (Jakarta, Indonesia), herba kenikir, herba teki, herba meniran, daun saga manis, daun secang, daun ketepeng, akar dadap, dan kulit batang dadap diperoleh dari Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik (Bogor, Indonesia), sedangkan akar secang diperoleh dari Kebun Percobaan Manoko (Lembang, Indonesia).

3.2.2. Bahan Kimia Enzim α-glukosidase dari rekombinan Saccharomyces cerevisiae (Sigma Ultra, USA), substrat p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida (PNPG) (Wako Pure Chemical Industries Ltd., Jepang), bovine serum albumin (BSA) (Merck, Jerman), akarbose, quersetin (Merck, Jerman), alumunium (III) klorida (Merck, Jerman), kalium dihidrogen fosfat (Merck, Jerman), dikalium hidrogen fosfat (Merck, Jerman), natrium karbonat (Merck, Jerman), dimetil sulfoksida (DMSO) (Merck, Jerman), etanol, asam klorida (Merck, Jerman), iodium (Merck, Jerman), kalium iodida (Merck, Jerman), raksa (II) klorida (Merck, Jerman), bismut (III) nitrat (Merck, Jerman), asam nitrat (Merck, Jerman), timbal (II) asetat, natrium sulfat anhidrat (Merck, Jerman), metanol, asam asetat anhidrat (Univar, USA), asam sulfat (Merck, Jerman), α-naftol, etil asetat, serbuk zink (Merck, Jerman), serbuk 24



25

magnesium (Merck, Jerman), aseton, serbuk asam borat (Merck, Jerman), serbuk asam oksalat (Merck, Jerman), eter, besi (III) klorida, natrium klorida (Mallinckrodt Chemicals, USA), gelatin (Merck, Jerman), natrium hidroksida (Univar, USA), wash benzen.

3.3.

Alat Lemari pengering, Oven (Hotpack vacuum oven), mesin penggiling

(Waring, USA), Rotary evaporator (Janke & Kunkel IKA, Jerman), timbangan analitik, pH meter (Eutech Instruments), Shaking bath incubator (Lab-Line Instruments), spektrofotometer (Shimadzu UV-265, Jepang), kuvet kuarsa (Quartz cells, Jerman), pipet mikro 10-100 µL dan 100-1000 µL (Eppendorf, Jerman dan Socorex, Swiss).

3.4.

Cara Kerja

3.4.1. Penyiapan Bahan Uji Pembuatan simplisia melalui tahapan seperti berikut (Depkes, 1985): a.

Pengumpulan bahan baku Bahan baku dipilih berdasarkan senyawa aktif yang terkandung dalam bagian

tanaman tersebut yang secara tradisional digunakan sebagai pengobatan antidiabetes. b.

Sortasi basah Memilih bagian tanaman yang akan digunakan untuk pengujian dan

memisahkan kotoran-kotoran atau bahan-bahan asing seperti tanah, kerikil, rumput, batang, daun, akar yang telah rusak, serta pengotor lainnya dari bahan simplisia. c.

Pencucian Bagian tanaman yang telah disortasi basah kemudian dicuci dengan air

hingga bersih. d.

Perajangan Bagian tanaman yang sudah bersih, ditimbang berat basahnya, dan kemudian

dipotong menjadi bagian yang lebih kecil untuk mempermudah proses pengeringan, dan penyerbukkan. Universitas Indonesia


26

e.

Pengeringan Bagian tanaman diangin-anginkan dalam suhu ruangan atau oven. Kemudian,

hasil pengeringan ditimbang kembali agar dapat diketahui bobot penyusutannya. f.

Sortasi kering Memisahkan benda-benda asing seperti bagian-bagian tanaman yang tidak

diinginkan dan pengotoran-pengotoran lain yang masih ada dan tertinggal pada simplisia kering. g.

Penyerbukan Bagian tanaman yang telah dikeringkan, dihaluskan menggunakan blender

atau mesin penggiling hingga menjadi serbuk. h.

Penyimpanan Serbuk simplisia disimpan di tempat yang terlindung cahaya.

3.4.2. Ekstraksi Sejumlah ± 20 gram serbuk simplisia diekstraksi menggunakan cara reflux dengan pelarut etanol 80% hingga batas 2 cm sampai 3 cm diatas serbuk simplisia dan diulang hingga 3 kali ekstraksi masing-masing selama 60 menit. Ekstraksi dilakukan pada suhu titik didih etanol yaitu sekitar 780C. Ekstrak etanol yang diperoleh diuapkan dengan menggunakan penangas air pada suhu 50oC hingga diperoleh ekstrak kental.

3.4.3. Penapisan Fitokimia 3.4.3.1. Alkaloid (Depkes, 1995b & Sirait, 2007) Ekstrak ditambahkan dengan 1 ml HCl 2N dan 9 ml akuadest, kemudian dipanaskan di penangas air selama 2 menit, dinginkan. Kemudian filtrat disaring dan ditampung. Filtrat digunakan sebagai larutan percobaan selanjutnya (larutan uji). a. Larutan uji diambil 1 ml dan dituang ke dalam kaca arloji, kemudian ditambahkan 2 tetes Bouchardart LP, terbentuk endapan coklat sampai dengan hitam (alkaloid positif).



27

b. Larutan uji diambil 1 ml dan dituang ke dalam kaca arloji, kemudian ditambahkan 2 tetes Mayer LP, terbentuk endapan menggumpal putih atau kuning yang larut dalam metanol (alkaloid positif). c. Larutan uji diambil 1 ml dan dituang ke dalam kaca arloji, kemudian ditambahkan 2 tetes Dragendorf LP, terbentuk endapan jingga coklat (alkaloid positif).

3.4.3.2. Glikosida (Depkes, 1995b) Ekstrak ditambahkan dengan 15 ml HCl 10 %, kemudian dipanaskan selama 10 menit dan disaring. Filtrat disari tiga kali, tiap kali dengan 5 ml larutan eter. Sari dikumpulkan dan ditambahkan natrium sulfat anhidrat, saring (larutan uji). Larutan uji diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50oC, kemudian ditambahkan dengan 2 ml metanol dan diuapkan. Hasil penguapan dilarutkan dengan 1 mL air dan 8 tetes Molisch LP. Kemudian ditambahkan dengan hati-hati 1 mL asam sulfat P. Hasil positif terbentuknya cincin berwarna ungu pada batas cairan (reaksi Molisch).

3.4.3.3. Flavonoid (Depkes, 1995b & Farnsworth, 1966) Ekstrak ditambahkan dengan 5 ml etil asetat hingga ekstrak larut (larutan uji). a. 1 ml larutan uji diuapkan dan ditambahkan 2 ml etanol 95% dan 0,5 gram serbuk seng, kemudian ditambahkan 2 ml HCl 2N, diamkan 1 menit. Setelah itu, ditambahkan 10 tetes HCl pekat. Kocok perlahan, kemudian didiamkan 2 sampai 5 menit. Terbentuk warna merah intensif (flavonoid positif). b. 1 ml larutan uji diuapkan dan ditambahkan 1 ml etanol 95% dan 0,1 gram serbuk magnesium. Kemudian ditambahkan 10 tetes HCl pekat dan kocok perlahan. Hasil positif jika terbentuk warna merah jingga hingga merah ungu (flavonoid positif) atau kuning jingga (flavon, kalkon, auron). c. 1 ml larutan diuapkan dan ditambahkan dengan 2 ml aseton, kemudian dilarutkan. Setelah itu, ditambahkan sedikit serbuk asam borat dan asam oksalat, panaskan hati-hati. Lalu, ditambahkan 10 ml eter. Amati dengan Universitas Indonesia


28

sinar ultraviolet 366 nm. Larutan akan berfluoresensi kuning intensif (flavonoid positif).

3.4.3.4. Terpen (Farnsworth, 1966) Ekstrak ditambahkan dengan 5 ml larutan eter, kemudian diuapkan dalam cawan penguap. Larutan uji kemudian ditambahkan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat (2:1). Pada pengamatan terbentuk merah-hijau atau violet-biru yang menunjukkan hasil positif.

3.4.3.5. Tanin (Farnsworth, 1966 & Trease, 1961) Ekstrak kental ditambahkan dengan 50 ml air panas. Kemudian dipanaskan hingga mendidih selama 5 menit. Filtrat disaring (larutan uji). a. Sejumlah 5 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan beberapa tetes FeCl 3 3%, terbentuk warna hijau violet (tanin positif). b. Sejumlah 5 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan beberapa tetes larutan gelatin 10%, terbentuk endapan putih (tanin positif). c. Sejumlah 5 ml larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan beberapa tetes larutan NaCl-gelatin (larutan gelatin 1% dalam larutan NaCl 10%), terbentuk endapan putih (tanin positif).

3.4.3.6. Saponin (Depkes, 1995b & Farnsworth, 1966) Ekstrak ditambahkan dengan 10 ml air panas dan kemudian didinginkan. Larutan uji dikocok vertikal selama 10 detik, kemudian diamkan selama 10 menit. Terbentuk buih setinggi 1 hingga 10 cm. Pada penambahan 1 tetes HCl 2N buih tidak hilang.

3.4.3.7. Antrakuinon (Depkes, 1995b) Ekstrak dilarutkan dengan 5 mL asam sulfat 2 N, dipanaskan sebentar kemudian didinginkan. Selanjutnya, ditambahkan 10 mL wash benzen P, kocok, diamkan. Lapisan wash benzen dipisahkan dan disaring, filtrat berwarna kuning Universitas Indonesia


29

menunjukkan adanya antrakuinon. Lapisan benzen dikocok dengan 1 mL sampai 2 mL natrium hidroksida 2 N, diamkan, lapisan air berwarna merah intensif dan lapisan benzen tidak berwarna.

3.4.4. Optimasi Aktivitas Enzim Optimasi dilakukan terhadap konsentrasi p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa sebagai substrat dengan variasi konsentrasi dari 40 mM sampai dengan 1,25 mM dan konsentrasi enzim 0,05 unit/ml. Larutan uji terdiri dari campuran reaksi 500 µl p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa dan 1000 µl dapar fosfat (pH 7,0). Campuran diinkubasi pada 37oC selama 5 menit. Untuk larutan uji, ditambahkan 500 µl larutan enzim dan selanjutnya diinkubasi selama 15 menit. Reaksi enzim dihentikan dengan penambahan 2000 µl natrium karbonat. Sedangkan untuk larutan kontrol, setelah diinkubasi 5 menit, ditambahkan 2000 µl natrium karbonat, dan selanjutnya diinkubasi kembali selama 15 menit. Kemudian tambahkan 500 µl larutan enzim. p-Nitrofenol yang dihasilkan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 400 nm. Aktivitas enzim yang optimum dapat dilihat dari nilai absorbansi dan nilai aktivitas enzim dalam unit/ml ataupun unit/mg enzim yang dibandingkan dengan label yang tertera pada kemasan enzim tersebut (Kikkoman, 2011).

3.4.4.1. Penyiapan Larutan Enzim Larutan enzim dibuat dengan melarutkan ± 4,2 mg enzim α-glukosidase (195,27 unit) dalam 100 ml dapar fosfat (pH 7,0) yang mengandung 200 mg bovine serum albumin sehingga diperoleh konsentrasi enzim 1,9527 unit/ml. Kemudian diencerkan dengan dapar fosfat (pH 7,0) hingga diperoleh konsentrasi enzim 0,05 unit/ml. 3.4.4.2. Penyiapan Larutan Substrat p-nitrofenil α-D-glukosida 20 mM Sejumlah 603 mg p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa dilarutkan dalam 100 ml akuadest.



30

3.4.4.3. Larutan Dapar Fosfat (pH 7,0) Dapar kalium fosfat 0,1 M (pH 7,0) dibuat dengan mencampurkan larutan 0,1 M kalium dihidrogenfosfat dan larutan 0,1 M dikalium hidrogenfosfat.

3.4.4.4. Larutan Natrium Karbonat Sejumlah 21,2 gram natrium karbonat dilarutkan dalam 1000 ml akuadest

Tabel 3.1. Prosedur optimasi aktivitas enzim α-glukosidase Volume (µl) Uji Kontrol Dapar fosfat (pH 7,0) 1000 1000 p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa 500 500 o Inkubasi 37 C, 5 menit Enzim α-glukosidase 500 Natrium karbonat 2000 o Inkubasi 37 C, 15 menit Enzim α-glukosidase 500 Natrium karbonat 2000 Reagen

Perhitungan Aktivitas (3.1) (3.2) Keterangan : V = Volume total df = Faktor pengenceran 18.1 = Ekstinsi milimolar p-Nitrofenol pada 400 nm = Volume enzim (ml) Ve t = Waktu inkubasi (menit) C = Banyaknya α-glukosidase dalam larutan uji (mg/ml)

Definisi Unit: Satu unit akan melepaskan 1,0 μmol D-glukosa dari p-nitrofenil α-D-glukosida per menit pada pH 7,0 dan suhu 37oC (Kikkoman, 2011).



31 3.4.5. Uji Aktivitas Penghambatan Enzim α-Glukosidase 3.4.5.1. Penyiapan Larutan Uji Ekstrak ditimbang sebanyak ±100 mg dan dilarutkan dengan dimetil sulfoksida (DMSO) hingga larut, kemudian ditambahkan dengan larutan dapar fosfat (pH 7,0) hingga diperoleh konsentrasi ekstrak 1%. Larutan ekstrak 1% diencerkan sehingga diperoleh konsentrasi ekstrak 0,5%; 0,25 %; dan 0,125 %.

3.4.5.2. Pengujian Blanko (B 1 ) Sejumlah 20 µL DMSO ditambah dengan 980 µL dapar fosfat (pH 7,0) dan 500 µL p-Nitrofenil α-D-glukopiranosida (PNPG), diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC. Kedalam larutan, ditambahkan 500 µL enzim 0,05 U/ml, dan kemudian diinkubasi kembali selama 15 menit pada suhu 37oC. Setelah masa inkubasi selesai, ditambahkan 2000 µL natrium karbonat. Blanko diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang sekitar 400 nm.

3.4.5.3. Pengujian Kontrol Blangko (B 0 ) Sejumlah 20 µL DMSO ditambah dengan 980 µL dapar fosfat (pH 7,0) dan 500 µL p-Nitrofenil α-D-glukopiranosida (PNPG), diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC. Kedalam larutan, ditambahkan 2000 µL natrium karbonat, dan kemudian diinkubasi kembali selama 15 menit pada suhu 37oC. Setelah masa inkubasi selesai, ditambahkan 500 µL enzim 0,05 U/ml. Kontrol blanko diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang sekitar 400 nm.

3.4.5.4. Pengujian Sampel (S 1 ) Sejumlah 20 µL larutan ekstrak ditambah dengan 980 µL dapar fosfat (pH 7,0) dan 500 µL p-Nitrofenil α-D-glukopiranosida (PNPG), diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC. Kedalam larutan ditambahkan 500 µL enzim 0,05 unit/ml, dan kemudian diinkubasi kembali selama 15 menit pada suhu 37oC. Setelah masa inkubasi selesai, ditambahkan 2000 µL natrium karbonat. Sampel diukur



32

absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 400 nm.

3.4.5.5. Pengujian Kontrol Sampel (S 0 ) Sejumlah 20 µL larutan ekstrak ditambah dengan 980 µL dapar fosfat (pH 7,0) dan 500 µL p-Nitrofenil α-D-glukopiranosida (PNPG), diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC. Ke dalam kontrol sampel ditambahkan 2000 µL natrium karbonat, dan kemudian diinkubasi kembali selama 15 menit pada suhu 37oC. Setelah masa inkubasi selesai, ditambahkan 500 µL enzim 0,05 U/ml. Kontrol sampel diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang sekitar 400 nm. Tabel 3.2. Uji aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase Reagen B1 Sampel Dimetil sulfoksida 20 Dapar fosfat (pH 7,0) 980 Substrat p-Nitrofenil α-D-glukopiranosida 500 o Inkubasi 37 C, 5 menit Natrium karbonat Enzim α-glukosidase 500 o Inkubasi 37 C, 15 menit Natrium karbonat 2000 Enzim α-glukosidase -

Volume (μl) B0 S1 20 20 980 980 500 500

S0 20 980 500

2000 -

500

2000 -

500

2000 -

500

Keterangan: B1

:

Blanko

B0

:

Kontrol Blanko

S1

:

Sampel

S0

:

Kontrol Sampel

Sampel yang digunakan adalah ekstrak etanol 80% dengan variasi konsentrasi 1%; 0,5%; 0,25%; dan 0,125%. Standar yang digunakan adalah akarbose. Larutan standar dibuat dengan konsentrasi dan pelarut yang sama dengan larutan uji. Universitas Indonesia


33

3.4.5.6. Perhitungan Aktivitas Penghambatan dengan Persen Inhibisi dan IC 50 Persen inhibisi dapat dihitung dari persamaan: (3.3)

Keterangan: = absorbansi blanko B1 = absorbansi kontrol blanko B0 = absorbansi sampel S1 = absorbansi kontrol sampel S0

IC 50 dihitung dengan menggunakan persamaan regresi linear, konsentrasi sampel sebagai sumbu x dan persen inhibisi sebagai sumbu y. Dari persamaan: y = a + bx dapat dihitung nilai IC 50 dengan menggunakan rumus (3.4)

3.4.5.7. Penentuan Kinetika Enzim Penentuan kinetika enzim diukur dengan meningkatkan konsentrasi pnitrofenil α-D-glukopiranosida sebagai substrat dengan menggunakan variasi konsentrasi ekstrak. Jenis inhibisi ditentukan dengan analisis data menggunakan metode Lineweaver-Burk untuk memperoleh tetapan kinetika Michaelis-Menten. Tetapan kinetika Michaelis-Menten dihitung berdasarkan persamaan regresi y = a + b x, dimana x adalah 1/jumlah subtrat dan y adalah 1/kecepatan pembentukan produk. Sehingga y = 0  x = - 1/K M

(3.5)

y = a + b (- 1/K M )  K M = b/a

(3.6)



BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1.

Penyiapan Bahan Uji Bahan uji terdiri dari 16 simplisia dari 14 tanaman yang berasal dari famili

Asteraceae,

Cucurbitaceae,

Cyperaceae,

Euphorbiaceae,

Fabaceae,

dan

Papilionaceae. Tanaman uji dapat dilihat pada Gambar 4.4 hingga Gambar 4.17. Bagian tanaman yang akan digunakan untuk pengujian, dipisahkan dari pengotorpengotor dan dicuci dengan air hingga bersih. Kemudian, bagian tanaman ditiriskan pada temperatur kamar dan ditimbang bobot sebelum dikeringkan. Pada daun, pengeringan untuk mengurangi kandungan air didalamnya dapat langsung dilakukan. Pada akar, kulit batang, dan kacang, perlu dirajang menjadi bagian yang lebih kecil, sedangkan pada buah dan buncis, perlu diiris tipis terlebih dahulu untuk mempercepat pengeringan. Pengeringan dilakukan dengan cara diangin-anginkan selama waktu tertentu tergantung dari jenis bagian tanaman yang digunakan. Pada daun, akar, dan kulit batang, pengeringan dapat diperoleh lebih cepat dibandingkan buah yang memerlukan waktu kurang lebih 7 hari karena kandungan airnya yang cukup besar. Simplisia yang sudah cukup kering, selanjutnya dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 60oC hingga benar-benar kering. Hasil pengeringan selanjutnya ditimbang kembali agar dapat diketahui bobot penyusutannya. Hasil susut pengeringan dapat dilihat pada Tabel 4.3. Simplisia yang telah kering disortasi kembali dari pengotor-pengotor yang tertinggal. Simplisia yang sudah disortir, dihaluskan hingga menjadi serbuk. Simplisia daun, herba, kacang, dan buah dapat dihaluskan dengan menggunakan blender, sedangkan simplisia akar dan kulit batang dengan menggunakan mesin penggiling. Untuk mencegah kerusakan dan kemunduran mutu, serbuk simplisia disimpan di tempat yang terlindung dari cahaya

4.2.

Ekstraksi Simplisia Serbuk simplisia sebanyak ± 20 gram diekstraksi dengan cara panas, yaitu

refluks dengan pelarut etanol 80 % sampai serbuk terendam 2-3 cm diatasnya. 34



35

Cara refluks dipilih karena golongan senyawa yang akan diuji tahan terhadap pemanasan sehingga tidak mengganggu kandungan aktif bahan dan juga tidak membutuhkan waktu yang relatif cukup lama. Selain itu, refluks sudah biasa digunakan untuk uji aktivitas α-glukosidase (Chan, Sun, Reddy, & Wu, 2010; Kim K. Y., Nam, Kurihara, & Kim S. M., 2008). Metode lain yang dapat juga digunakan antara lain sokhlet, perkolasi, dan maserasi (Dewi et al, 2007; Shinde et al, 2008; Shoei, Hsiao, Chien, 2008). Etanol 80% bersifat polar sehingga dapat menarik senyawa aktif yang diduga memiliki aktifitas penghambatan terhadap α-glukosidase, seperti layaknya akarbose (standar) yang juga bersifat polar (pseudotetrasakarida). Etanol juga dapat menginaktivasi enzim pengoksidasi karena beberapa senyawa golongan fenol yang akan diidentifikasi peka terhadap oksidasi enzim. Selain itu, etanol adalah pelarut yang biasa digunakan pada spektrofotometri UV-Vis dan tidak toksik (Harborne, 1987). Etanol juga merupakan salah satu pelarut yang biasa digunakan untuk uji aktivitas α-glukosidase (Chan, Sun, Reddy, & Wu, 2010; Shinde et al, 2008; Shoei, Hsiao, & Chien, 2008; Sio, Jhong, Chao, Chung, & Shoei, 2008). Selain etanol, dapat digunakan metanol untuk pelarut ekstraksi (Kim K. Y., Nam, Kurihara, & Kim S. M., 2008) Refluks dilakukan selama satu jam. Filtrat hasil ekstraksi kemudian disaring agar terpisah dari residunya. Residu kemudian diekstraksi kembali hingga tiga kali agar jumlah senyawa yang tersari dapat lebih banyak. Filtrat yang diperoleh ditampung dan diuapkan di penangas air menggunakan cawan penguap hingga didapatkan ekstrak kental. Ekstrak yang diperoleh kemudian ditimbang untuk menghitung persen rendemen dan disimpan dalam lemari pendingin suhu 40C untuk mencegah tumbuhnya mikroba yang tidak diinginkan (Depkes, 1985). Hasil ekstraksi dan rendemen ekstrak dapat dilihat pada Tabel 4.4.

4.3.

Penapisan Fitokimia Ekstrak kental diidentifikasi secara kualitatif untuk mengetahui golongan

senyawa

yang

tertarik

dengan

pelarut

etanol

80

%.

Berdasarkan

Pharmacodynamic Basis of Herbal Medicine, beberapa golongan senyawa diketahui memiliki efek hipoglikemik, seperti alkaloid, glikosida, terpen, Universitas Indonesia


36

flavonoid, dan lain sebagainya (Ebadi, 2002). Berikut ini adalah hasil identifikasi golongan senyawa dari seluruh ekstrak uji.

Tabel 4.1. Hasil penapisan fitokimia ekstrak uji No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Nama Tanaman Uji Herba Kenikir Buah Pare Buah Labu Siam Herba Rumput Teki Herba Meniran Daun Jarak Pagar Daun Jarak Daun Saga Manis Kacang Tanah Akar Secang Daun Secang Daun Ketepeng Daun Petai Cina Kacang Buncis Akar Dadap Kulit Batang Dadap

Keterangan : Alk : Alkaloid Glik : Glikosida Flav : Flavonoid Terp : Terpen Tan : Tanin Sapo : Saponin Antr : Antrakuinon

Alk + + + + + + +

Glik + + + + + + + + + + + + + + + +

+ -

Flav + + + + + + + + -

Terp + + + + + + + + + + -

Tan + + + + + + +

Sapo + + + + + + + + + +

Antr + -

: Terdeteksi : Tidak terdeteksi

4.3.1. Alkaloid Pada umumnya, senyawa alkaloid ditemukan dalam bentuk garam yang bersifat larut air di dalam tanaman, sehingga golongan senyawa ini seharusnya dapat tertarik dengan cukup baik dalam pelarut etanol 80% untuk kemudian diuji langsung dengan pereaksi-pereaksi alkaloid. Untuk menghindari hasil uji yang sifatnya positif atau negatif palsu, perlu dilakukan penarikan senyawa alkaloid terlebih dahulu. Tahap penarikan ini dilakukan dengan menggunakan pelarut air Universitas Indonesia


37

dalam suasana asam yaitu air dan HCl 2N dengan perbandingan 1:9. Setelah dimurnikan, larutan diuji dengan pereaksi Mayer, Dragendorf, dan Bouchardart. Larutan uji dengan pereaksi Mayer dan Dragendorf akan membentuk senyawa adisi yang tidak larut, sedangkan dengan pereaksi Bouchardart akan membentuk senyawa kompleks bebas (Depkes, 1995b). Pada Tabel 4.5, dapat terlihat bahwa ekstrak kental tanaman uji yang mengandung senyawa alkaloid adalah buah labu siam, herba rumput teki, daun jarak pagar, daun jarak, daun secang, daun petai cina, dan kulit batang dadap. Endapan berwarna yang terbentuk tidak terlalu banyak. Hal ini mungkin disebabkan karena jumlah ekstrak yang diuji sedikit sehingga endapan yang dihasilkan pun tidak terlalu banyak. Hasil negatif palsu ditemukan pada herba meniran untuk ketiga pereaksi alkaloid. Keragaman hasil uji ini dapat disebabkan oleh beberapa faktor seperti umur tanaman, iklim, daerah tumbuh, waktu pengumpulan bahan (panen), kepekaaan alkaloid terhadap jenis pereaksi yang diperiksa, dan atau kuantitas kandungan senyawa alkaloid dalam tanaman tersebut.

4.3.2. Glikosida Pengujian glikosida dilakukan dengan terlebih dahulu menghidrolisis senyawa tersebut dengan asam klorida 10 % dan pemanasan. Saat glikosida terhidrolisis, molekul akan terpecah menjadi gugus glikon dan aglikon (Gunawan & Mulyani, 2004). Keduanya terhubung oleh suatu ikatan glikosidik berupa jembatan O, jembatan S, jembatan N, dan jembatan C (Gunawan & Mulyani, 2004; Sirait, 2007). Jembatan antara glikon dan aglikon sangat mudah terurai oleh pengaruh asam, basa, enzim, air, dan panas. Semakin pekat kadar asam atau basa, maupun semakin panas lingkungannya, glikosida akan semakin mudah dan cepat terhidrolisis (Gunawan & Mulyani, 2004). Dalam bentuk glikosida, senyawa ini larut dalam pelarut polar seperti air, tetapi jika telah terurai menjadi aglikonnya, senyawa tersebut larut dalam pelarut organik nonpolar (Gunawan & Mulyani, 2004). Untuk menarik senyawa yang bukan gula, dilakukan penyarian dengan larutan eter sebanyak tiga kali. Penyarian



38

ini juga untuk mempermudah pengamatan dengan memisahkan pengotor-pengotor yang bersifat nonpolar. Setelah dilakukan penyarian, diperoleh larutan uji yaitu filtrat HCl untuk uji bagian gula. Filtrat HCl diuapkan dan ditambahkan natrium sulfat anhidrat untuk mengurangi kadar air yang tersisa di dalamnya. Filtrat kering yang didapatkan dilarutkan dengan metanol dan diuapkan kembali. Setelah diuapkan, filtrat dilarutkan dengan akuadest dan diuji dengan pereaksi Molisch. Reaksi positif ditandai dengan munculnya cincin ungu di purmukaan antara lapisan asam dan lapisan sampel. Hasil yang terlihat pada Tabel 4.6. menunjukkan bahwa semua ekstrak etanol larutan uji mengandung glikosida. Hal yang harus diperhatikan adalah banyaknya jumlah ekstrak untuk pengujian. Semakin banyak ekstrak yang diuji, semakin pekat warna cincin ungu yang dihasilkan dan semakin sulit pengamatan. Warna yang terlalu pekat akan seperti mendekati warna hitam sehingga sebaiknya jumlah ekstrak yang diuji tidak berlebihan.

4.3.3. Flavonoid Pada pengujian, ekstrak kental dilarutkan dengan etil asetat untuk menarik senyawa flavonoid yang terkandung di dalam tanaman uji. Kemudian, larutan diuji dengan ketiga pereaksi yaitu dengan serbuk Zn, serbuk Mg, dan serbuk asam borat-asam oksalat. Hasil menunjukkan tidak ada satu pun tanaman uji yang positif dengan ketiga pereaksi flavonoid tersebut. Untuk memastikan kembali keberadaan senyawa golongan flavonoid, dilakukan tambahan pengujian dengan flouresensi menggunakan pelarut AlCl 3 . Hasil positif dibandingkan dengan standar quersetin yang memberikan flouresensi berwarna kuning kehijauan. Berdasarkan Tabel 4.7, tanaman uji yang memiliki kandungan senyawa flavonoid adalah herba kenikir, herba rumput teki, herba meniran, daun jarak pagar, daun jarak, daun saga manis, daun ketepeng, dan daun petai cina. Hasil negatif palsu ditemukan pada buah labu siam, kacang tanah, akar dadap, dan kulit batang dadap. Hal ini mungkin disebabkan karena flavonoid yang terkandung dalam tanaman tersebut tidak larut dalam etil asetat dan atau kuantitas senyawa Universitas Indonesia


39

yang diuji tidak memenuhi batas deteksi dari metode yang digunakan. Untuk memperoleh

hasil

mengidentifikasi

yang golongan

akurat,

cara

flavonoid

terbaik sebaiknya

untuk

memisahkan

menggunakan

dan

metode

kromatografi lapis tipis (Harborne, 1987).

4.3.4. Terpen Sesuai dengan strukturnya, terpenoid pada umumnya merupakan senyawa yang larut dalam lipid dan berada dalam sitoplasma sel tumbuhan. Ekstraksi senyawa terpenoid dari jaringan tumbuhan biasanya dapat dilakukan dengan menggunakan pelarut petroleum eter, eter, atau kloroform (Sirait, 2007). Pada penapisan ini, senyawa terpenoid ditarik dengan menggunakan pelarut eter, yang kemudian diuji dengan reaksi Liebermann-Bouchard. Hasil pengujian pada Tabel 4.8 menunjukkan bahwa tanaman uji yang mengandung senyawa terpenoid adalah herba kenikir, buah labu siam, herba meniran, daun jarak pagar, daun jarak, daun saga manis, kacang tanah, daun ketepeng, daun petai cina, serta kacang buncis. Negatif palsu ditemukan pada rumput teki. Hal ini mungkin disebabkan karena kuantitas senyawa yang terkandung dalam tanaman tersebut.

4.3.5. Tanin Tanin merupakan senyawa fenol yang dapat bereaksi dengan protein membentuk kopolimer mantap yang tidak larut dalam air (Harborne, 1987). Ekstrak uji yang diteteskan dengan gelatin 10 % akan membentuk endapan putih atau adanya perubahan warna yang lebih keruh pada larutan uji. Endapan putih atau adanya perubahan warna yang lebih keruh tersebut menunjukkan hasil positif terhadap senyawa tanin. Larutan uji yang diteteskan NaCl-gelatin 1 % menghasilkan endapan yang lebih banyak dibandingkan dengan gelatin saja. Hal ini disebabkan karena NaCl pada pereaksi tersebut dapat mengakibatkan penjenuhan dan terjadinya proses salting out sehingga endapan yang dihasilkan lebih banyak. Larutan FeCl 3 pada pengujian tanin dapat membedakan tanin terhidrolisis (gallotanin) dan tanin terkondensasi (proantosianin). Pada tanin terhidrolisis, Universitas Indonesia


40

larutan akan berubah warna menjadi biru atau biru kehitaman, sedangkan pada tanin terkondensasi berubah menjadi hijau tua. Berdasarkan Tabel 4.9, ekstrak kental yang mengandung senyawa tanin adalah herba meniran, daun jarak pagar, daun jarak, akar secang, daun secang, daun ketepeng, dan kulit batang dadap. Hasil negatif palsu ditemukan pada buah labu siam. Hal ini mungkin disebabkan karena kuantitas senyawa yang terkandung dalam tanaman tersebut dan atau beberapa faktor lain yang mempengaruhi seperti umur tanaman, iklim, daerah tumbuh, dan waktu pengumpulan bahan (panen).

4.3.6. Saponin Golongan senyawa saponin mempunyai beberapa sifat yang dapat digunakan sebagai dasar untuk merancang metode penapisan yang sederhana. Sifat-sifat tersebut antara lain dapat menghasilkan busa setelah pengocokan yang kuat, kemampuan untuk menghemolisis sel darah merah, dan bersifat racun terhadap ikan (Robinson, 1983). Metode yang paling sederhana, cepat, sedikit peralatan yang dibutuhkan, dan murah adalah dengan menggunakan indeks buih/busa. Reaksi identifikasi ini akan memberikan lapisan buih setinggi 1 cm atau lebih bila larutan uji ditambah air dan dikocok dalam tabung reaksi selama 10-15 detik dan selanjutnya dibiarkan selama 10 menit sebelum dilakukan pengamatan. Penambahan 1 tetes asam klorida 2N yang tidak menghilangkan buih menunjukkan hasil positif terhadap saponin. Berdasarkan Tabel 4.10, ekstrak kental yang mengandung saponin adalah herba kenikir, buah pare, daun jarak, daun saga manis, akar secang, daun secang, daun ketepeng, kacang buncis, akar dadap, serta kulit batang dadap. Banyaknya buih yang terbentuk beraneka ragam dari mulai 0,3 cm hingga 1 cm. Memang buih yang terbentuk sedikit, tetapi buih tersebut tidak hilang setelah penambahan HCl 2N dan stabil dalam waktu lebih dari 10 menit sehingga disimpulkan hasil positif terhadap saponin. Buah labu siam, daun jarak pagar, kacang tanah, dan daun petai cina memberikan hasil negatif palsu. Hal ini mungkin dipengaruhi oleh kandungan senyawa saponin yang terdapat dalam tanaman dan atau beberapa



41

faktor lain yang mempengaruhi seperti umur tanaman, iklim, daerah tumbuh, dan waktu pengumpulan bahan (panen).

4.3.7. Antrakuinon Antrakuinon di alam kemungkinan dalam bentuk bebas, glikosida, atau antron

(bentuk

tereduksi).

Untuk

mengidentifikasi

antrakuinon,

perlu

ditambahkan asam sulfat 2N dan dipanaskan terlebih dahulu untuk menghidrolisis antrakuinon yang berada dalam bentuk glikosidanya. Kemudian, dilakukan pengujian terhadap senyawa antrakuinon. Pada Tabel 4.11, dapat terlihat bahwa senyawa yang mengandung senyawa antrakuinon adalah daun ketepeng. Hasil positif yang diberikan pada lapisan natrium hidroksida 2N berwarna jingga tua. Hal ini berbeda dengan hasil positif yang merujuk literatur yaitu merah intensif. Perbedaan hasil ini mungkin disebabkan karena adanya penggantian pelarut dari benzen menjadi wash benzen. Telah dilakukan juga pengujian terhadap blanko positif antrakuinon yaitu daun lidah buaya terhadap pelarut wash benzen, dan hasil yang diperoleh adalah warna merah muda yang juga berbeda dengan warna yang merujuk literatur.

4.4.

Optimasi Aktivitas Enzim Sebelum pengujian, perlu dilakukan terlebih dahulu optimasi enzim

sehingga dapat diketahui kondisi yang optimal agar enzim dapat bekerja secara optimal. Hal ini dilakukan untuk memastikan bahwa hasil yang diperoleh dari penghambatan aktivitas enzim merupakan kerja dari ekstrak yang memiliki aktivitas penghambatan terhadap enzim tersebut. Optimasi aktivitas enzimatis dilakukan terhadap variasi konsentrasi substrat p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa dengan konsentrasi enzim α-glukosidase 0,05 unit/ml. Konsentrasi enzim dipilih berdasarkan batas unit enzim yang digunakan untuk pengujian yaitu 0,05 – 0,1 U/ml (Kikkoman, 2011) Substrat p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa dan dapar fosfat (pH 7,0) diinkubasi pada 37oC selama 5 menit, kemudian ditambahkan larutan enzim αglukosidase 0,05 U/ml dan diinkubasi kembali selama 15 menit. Reaksi enzim dihentikan dengan penambahan natrium karbonat (Kikkoman, 2011). Produk yang Universitas Indonesia


42 dihasilkan dari reaksi antara α-glukosidase dan p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa diukur absorbansinya pada panjang gelombang yang memberikan absorbansi maksimum sekitar 400 nm. Untuk mengoreksi hasil serapan blanko (kontrol), pengamatan dilakukan terhadap aktivitas enzim dengan menukar posisi antara enzim α-glukosidase dan natrium karbonat. Pada kontrol, natrium karbonat ditambahkan setelah inkubasi substrat p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa dan dapar fosfat (pH 7,0). Setelah diinkubasi selama 15 menit, ditambahkan α-glukosidase pada campuran reaksi tersebut. Hasil yang diperoleh dari kontrol dapat digunakan untuk melihat apakah aktivitas enzim telah berhenti saat kondisi campuran telah dibasakan terlebih dahulu dengan natrium karbonat sehingga tidak ada lagi produk yang masih terbentuk. Variasi konsentrasi substrat yang digunakan adalah 10 mM, 20 mM, dan 40 mM (lihat pada Tabel 4.12). Jika konsentrasi substrat meningkat, sementara semua kondisi lain dipertahankan tetap konstan, kecepatan awal yang terukur akan meningkat hingga mencapai nilai maksimum dan tidak lebih jauh lagi. Kecepatan awal adalah absorbansi ketika masih sedikit sekali substrat yang telah bereaksi. Namun, hasil yang diperoleh menunjukkan terjadinya penurunan absorbansi dengan peningkatan konsentrasi substrat (lihat Gambar 4.1). Penurunan absorbansi ini mungkin dapat disebabkan karena terbentuknya produk berlebih yang bersifat inhibitor. Salah satu produk dari reaksi enzimatis ini adalah α-D-glukopiranosida yang sifatnya mirip seperti substrat p-nitrofenil-α-Dglukopiranosa yaitu analog karbohidrat sehingga mungkin saja kedua senyawa tersebut berkompetisi dalam menempati sisi aktif enzim sehingga absorbansi yang dihasilkan menurun.



43

Gambar 4.1. Grafik optimasi aktivitas enzim dengan variasi konsentrasi substrat 10 mM hingga 40 mM

Untuk mendapatkan aktivitas enzim yang optimal, perlu dilakukan penurunan konsentrasi menjadi 20 mM, 10 mM, 5 mM, 2,5 mM, dan 1,25 mM (lihat Tabel 4.13). Hasil yang diperoleh menunjukkan terdapat kenaikan absorbansi dari konsentrasi substrat 1,25 mM hingga 10 mM, dan terjadi penurunan absorbansi pada konsentrasi substrat 20 mM. Kecepatan reaksi akan bertambah seiring meningkatnya konsentrasi substrat hingga mencapai suatu keadaan yang enzimnya sudah dapat dikatakan jenuh oleh substrat. Dalam hal ini, enzim ditafsirkan telah jenuh pada konsentrasi substrat 10 mM, dimana konsentrasi tersebut memberikan aktivitas enzim tertinggi yaitu 2,0653 U/ml dibandingkan dengan konsentrasi yang lain dan tidak ada peningkatan kecepatan reaksi oleh peningkatan konsentrasi substrat lebih lanjut (lihat Gambar 4.2). Hal ini disebabkan karena substrat yang ada terdapat dalam molar berlebihan dan telah melampaui jumlah molar enzim sehingga tidak ada lagi enzim yang bebas bereaksi dengan substrat. Dengan demikian, untuk uji aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase dapat digunakan konsentrasi enzim 0,05 U/ml dan konsentrasi substrat 10 mM karena pada hakikatnya semua sisi aktif enzim sudah berikatan oleh substrat pada kondisi tersebut.



44

Gambar 4.2. Grafik optimasi aktivitas enzim dengan variasi konsentrasi substrat 1,25 mM hingga 20 mM

4.5.

Uji Aktivitas Penghambatan Enzim α-Glukosidase Metode yang digunakan pada uji aktivitas penghambatan enzim α-

glukosidase merupakan metode yang telah dimodifikasi dari penelitian Sugiwati, Setiasih, Afifah (2009) terhadap aktivitas mahkota dewa dan Dewi et al. (2007) terhadap ekstrak koji. Uji aktivitas dilakukan untuk mengetahui aktivitas penghambatan ekstrak etanol tanaman obat Indonesia terhadap α-glukosidase dari berbagai konsentrasi ekstrak dengan melihat nilai persen inhibisi serta mengetahui kekuatan penghambatannya terhadap enzim tersebut dengan melihat nilai IC 50 . IC 50 adalah konsentrasi yang dibutuhkan untuk menghambat 50 % aktivitas enzim. Konsentrasi ekstrak yang digunakan adalah 1 %; 0,5 %; 0,25 %; dan 0,125 % atau dari konsentrasi 5 ppm sampai dengan 55 ppm. Variasi konsentrasi ini ditujukan untuk melihat pengaruh penambahan konsentrasi ekstrak terhadap peningkatan aktivitas penghambatan terhadap α-glukosidase. Ekstrak ditimbang ± 100 mg dan ditambahkan DMSO beberapa tetes untuk mempermudah kelarutan. Setelah sudah cukup larut, larutan uji dilarutkan dengan menggunakan pelarut dapar fosfat (pH 7,0) hingga diperoleh konsentrasi ekstrak 1 %. Larutan uji tersebut diencerkan hingga konsentrasi 0,5 %; 0,25 %; dan 0,125 %.



45

Pengamatan aktivitas enzim dilakukan dengan membandingkan nilai absorbansi sampel (S) dengan blanko (B). Larutan sampel (S 1 ) diinkubasi selama 5 menit bersama dengan dapar fosfat (pH 7,0) dan substrat p-nitrofenil-α-Dglukopiranosa 10 mM. Setelah itu, campuran direaksikan dengan α-glukosidase 0,05 U/ml dan diinkubasi kembali selama 15 menit. Kemudian, ditambahkan natrium karbonat untuk menghentikan reaksi enzimatis tersebut. Untuk kontrol sampel (S 0 ), pengamatan dilakukan dengan kondisi menukar posisi penambahan enzim dan natrium karbonat. Kontrol sampel dilakukan untuk mengetahui apakah ada senyawa lain yang memberikan absorbansi pada panjang gelombang sekitar 400 nm selain dari p-nitrofenol. Larutan blanko (B 1 ) adalah larutan uji tanpa sampel dengan perlakuan yang sama dengan larutan uji sampel. Kontrol blanko (B 0 ) pun perlakuannya sama dengan kontrol sampel yaitu dengan menukar posisi penambahan enzim dan natrium karbonat, hanya saja dilakukan tanpa sampel (Tabel 3.2). Produk yang dihasilkan dari reaksi antara α-glukosidase dan pnitrofenil-α-D-glukopiranosa diukur absobansinya pada panjang gelombang yang memberikan absorbansi maksimum sekitar 400 nm. Masing-masing ekstrak uji memiliki panjang gelombang yang berbeda-beda dalam memberikan absorbansi maksimum pengukuran p-nitrofenol. Namun, panjang gelombang yang diperoleh masih sekitar 400 nm yaitu dari 395 nm sampai dengan 400 nm. Kurva serapan dan kurva kalibrasi pada salah satu ekstrak uji dapat dilihat pada Gambar 4.18 dan Gambar 4.19. Untuk standar, digunakan akarbose dimana senyawa ini telah teruji mampu menghambat aktivitas enzim α-glukosidase. Pada konsentrasi 1 %, akarbose dapat menghambat 8,56 % aktivitas enzim dalam membentuk produk pnitrofenol. Kekuatan penghambatannya berkurang dengan penurunan konsentrasi larutan uji akarbose, yaitu 6,76 %; 5,71 %; dan 4,27 % masing-masing pada konsentrasi ekstrak 0,5 %; 0,25 %; dan 0,125 %. Nilai IC 50 yang diperoleh adalah 503,91 ppm (lihat pada Tabel 4.14). Hasil ini hampir mendekati dengan hasil pada penelitian sebelumnya terhadap akarbose yang berasal dari khamir yaitu 677,97 µM atau sama dengan 437,70 ppm (Chan, Sun, Reddy, & Wu, 2010). Namun, kedua hasil pengujian tersebut berbeda jauh dengan hasil pengujian akarbose lainnya yaitu 40 nM atau sama dengan 0,026 ppm pada penelitian Sio, Jhong, Universitas Indonesia


46

Chao, Chung, Shoei (2008) dan 0,046 µM atau sama dengan 0,030 ppm pada penelitian Shoei, Hsiao, Chien (2008). Perbedaan mungkin disebabkan karena kondisi pengujian untuk penghambatan aktivitas enzim α-glukosidase berbeda, baik dari sumber enzim, volume total, dan lama inkubasi pengujian. Selain itu, dilihat dari nilai persen inhibisi, IC 50 , dan hasil pengujian akarbose sebelumnya , akarbose memiliki aktivitas penghambatan yang sangat rendah terhadap enzim α-glukosidase. Hal ini disebabkan karena enzim yang digunakan untuk pengujian berasal dari rekombinan Saccharomyces cerevisiae. Aktivitas penghambatan akarbose peka terhadap enzim yang berasal dari usus tikus, tetapi tidak ada aktivitas penghambatan terhadap enzim yang berasal dari khamir dan bakteri (Shinde et al., 2008). Hal ini terlihat juga pada pengujian akarbose pada penelitian sebelumnya dengan menggunakan enzim yang berasal bukan dari usus tikus. Konsentrasi untuk menghambat 50 % aktivitas enzim cukup besar, misalnya IC 50 >1000 ppm untuk enzim yang berasal dari bakteri atau pun khamir dan 1010±210 ppm untuk enzim yang berasal dari khamir (Schäfer & Högger, 2007; Shinde et al., 2008). Hasil yang serupa juga telah dilaporkan, dimana akarbose tidak memiliki aktivitas penghambatan pada enzim yang berasal dari S. cerevisiae dan B. stearothermophilus (Kim K. Y., Nam, Kurihara, & Kim S. M., 2008). Akarbose menunjukkan aktivitas penghambatan yang berbeda-beda jika menggunakan sumber enzim yang berbeda-beda pula. Untuk itu, standar yang digunakan sebaiknya diganti dengan 1-deoxynojirimycin yang peka terhadap ketiga sumber enzim baik dari usus tikus, khamir, maupun bakteri (Shinde et al., 2008). Pada beberapa ekstrak uji, diperoleh nilai IC 50 sampel uji lebih rendah dibandingkan dengan akarbose seperti herba meniran, akar secang, akar dadap, dan lain sebagainya (lihat Tabel. 4.2). Hal ini terjadi karena perhitungan IC 50 tidak melibatkan berat molekul (BM) dari senyawa yang diuji. BM tidak dapat ditentukan karena sampel uji masih berupa ekstrak kasar yang mengandung banyak senyawa aktif. Jika satuan nilai IC 50 menggunakan Molar (M) dengan memperhitungkan berat molekul (BM) dari senyawa uji, data yang diperoleh akan semakin akurat.



47

Hasil pengujian terhadap beberapa tanaman obat Indonesia menunjukkan adanya aktivitas penghambatan α-glukosidase pada ekstrak etanol herba kenikir, buah labu siam, herba teki, herba meniran, daun jarak pagar, daun jarak, daun saga manis, kacang tanah, akar secang, daun secang, daun ketepeng, daun petai cina, kacang buncis, akar dadap, dan kulit batang dadap dengan kekuatan penghambatan yang berbeda-beda, yaitu nilai IC 50 dari 2,32 ppm sampai dengan 483,62 ppm. Aktivitas penghambatan paling kuat diberikan oleh ekstrak etanol herba meniran, akar dadap, dan akar secang dengan nilai IC 50 masing-masing 2,32 ppm; 4,83 ppm; dan 8,82 ppm. Ekstrak etanol buah pare memiliki aktivitas penghambatan α-glukosidase yang sangat rendah karena nilai IC 50 diatas nilai IC 50 akarbose yaitu 1861,99 ppm. Hasil pengukuran absorbansi seluruh ekstrak uji dapat dilihat pada Tabel 4.15 sampai dengan Tabel 4.30. Sebagian besar sampel uji memiliki aktivitas penghambatan terhadap enzim α-glukosidase. Hal ini mungkin dikarenakan ekstrak uji merupakan ekstrak kasar yang masih mengandung banyak senyawa atau dalam ekstrak uji mengandung lebih dari satu senyawa yang dapat menghambat aktivitas enzim sehingga beberapa senyawa tersebut secara sinergis berkompetisi dengan substrat untuk menempati sisi aktif enzim. Hasil ini menunjukkan salah satu mekanisme kerja dari beberapa tanaman obat Indonesia yang memiliki aktivitas anti diabetes melitus yaitu sebagai penghambat α-glukosidase. Misalnya, pada herba meniran yang telah digunakan secara tradisional dalam pengobatan diabetes. Herba meniran dilaporkan tidak dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus yang telah diinduksi oleh STZ (Soumyanath, 2006). Pada pengujian ini, dapat terlihat bahwa efek anti diabetes melitus pada herba meniran disebabkan karena salah satu kemampuannya dalam menghambat α-glukosidase di usus halus. Selain itu, tanaman herba rumput teki telah dilaporkan dapat menghambat aktivitas α-amilase (Soumyanath, 2006). Pada uji ini, herba rumput teki pun memberikan hasil yang baik terhadap penghambatan α-glukosidase dengan IC 50 37,74 ppm. Jadi, herba rumput teki memiliki aktivitas anti diabetes dalam penundaan pemecahan oligosakarida dengan menghambat enzim α-amilase dan α-glukosidase. Universitas Indonesia


48

Berbagai tanaman yang telah dilaporkan memiliki aktivitas anti diabetes melitus berasal dari berbagai famili yang berbeda. Asteraceae, Cucurbitaceae, Cyperaceae, Euphorbiaceae, Fabaceae, dan Papilionaceae merupakan bagian dari famili yang berperan penting dalam pengobatan diabetes melitus (Jarald, Joshi, & Jain, 2008). Herba meniran, salah satu tanaman yang berasal dari famili Euphorbiaceae, adalah tanaman yang memiliki aktivitas penghambatan enzim αglukosidase terkuat dalam pengujian ini. Tanaman dari famili ini sudah banyak yang biasa digunakan sebagai pengobatan diabetes melitus secara tradisional. Beberapa diantaranya sudah terbukti memiliki efek hipoglikemik walaupun mekanisme aksinya sebagai pengobatan diabetes melitus belum diketahui secara pasti seperti Bridelia ferruginea Benth., Euphorbia prostrata Ait., dan Ricinus communis

L

(Soumyanath,

2006).

Namun,

diantara

tanaman

famili

Euphorbiaceae, Macaranga tanarius telah dilaporkan memiliki kemampuan dalam menghambat α-glukosidase (Puteri & Kawabata, 2009). Dadap merupakan tanaman yang berasal dari famili Papilionaceae. Laporan mengenai adanya aktivitas penghambatan terhadap enzim α-glukosidase dari famili tersebut masih terbatas. Namun, adanya efek hipoglikemik pada famili Papilionaceae telah dilaporkan ada pada tanaman Trigonella foenum graecum (Suharmiati, 2003). Nilai IC 50 yang diperoleh dari akar dadap lebih rendah daripada kulit batang dadap. Akar dadap memiliki nilai IC 50 4,83 ppm sedangkan kulit batang dadap memiliki nilai IC 50 272,04 ppm. Hasil ini menggambarkan bahwa senyawa yang berperan dalam menghambat enzim α-glukosidase pada akar konsentrasinya lebih tinggi daripada kulit batang. Sebagian besar ekstrak uji berasal dari famili Fabaceae dan seluruh tanaman dari famili tersebut memiliki aktivitas penghambatan terhadap enzim αglukosidase, yaitu daun saga manis, kacang tanah, akar secang, daun secang, daun ketepeng, daun petai cina, dan kacang buncis dengan nilai IC 50 8,82 ppm sampai dengan 459,24 ppm. Akar secang merupakan ekstrak etanol yang memiliki aktivitas penghambatan terbesar ketiga setelah herba meniran dan akar dadap dengan nilai IC 50 8,82 ppm. Dibandingkan dengan daun secang, yang juga memiliki aktivitas penghambatan, nilai IC 50 daun secang lebih tinggi daripada akar secang, yaitu 58,08 ppm. Hasil ini menggambarkan bahwa senyawa yang Universitas Indonesia


49 berperan dalam menghambat enzim α-glukosidase pada akar konsentrasinya lebih tinggi daripada daun. Famili Fabaceae berpotensial sebagai tanaman yang digunakan sebagai pengobatan diabetes melitus karena tanaman dari famili tersebut memiliki berbagai variasi mekanisme sebagai aksinya dalam mengobati penyakit diabetes melitus seperti Bauhinia forficata Benth. dapat merangsang ambilan glukosa oleh otot, Bauhinia variegata L. dapat merangsang pelepasan insulin, Erythrina indica Lam., Phaseolus coccineus L., Phaseolus multiflorus Willd., dan Phaseolus vulgaris L. dapat menghambat enzim α-amilase, dan lain sebagainya (Soumyanath, 2006). Selain itu, telah dilaporkan juga ekstrak metanol dari Alhagi camelorum memiliki potensi yang kuat dalam menghambat αglukosidase (Gholamhoseinian, Fallah, Sharifi-far, Mirtajaddini, 2008). Pada beberapa ekstrak uji, diperlukan pengenceran kembali terhadap konsentrasi larutan uji karena IC 50 yang diperoleh bernilai negatif. Hal ini dapat ditemukan pada ekstrak herba meniran dan akar dadap. Adanya nilai negatif pada IC 50 disebabkan karena ekstrak tersebut memiliki aktivitas penghambatan yang sangat besar pada konsentrasi 0,125 % hingga 1 %. Titik-titik yang akan diplot untuk menghasilkan persamaan regresi linear menjadi tidak cukup baik sehingga nilai a pada persamaan y = a + bx, lebih dari 50. Selain itu, dalam pengukuran IC 50 yang baik, konsentrasi yang digunakan dalam pengukuran sebaiknya adalah konsentrasi di bawah dan di atas konsentrasi yang diperkirakan memberikan nilai IC 50 . Misalnya, akar dadap, pada konsentrasi 1 %; 0,5 %; 0,25 %; dan 0,125 % memberikan aktivitas penghambatan masing-masing 96,96 %; 94,81 %; 87,78 %; dan 66,64 %. Pada konsentrasi 0,125 % hingga 1 %, ekstrak akar dadap tidak menunjukkan adanya aktivitas penghambatan sekitar 50 % terhadap α-glukosidase sehingga nilai IC 50 yang diperoleh adalah -45,16 ppm. Untuk mendapatkan nilai IC 50 yang tepat, diperlukan pengenceran kembali menjadi 0,063 % dan 0,031 %. Setelah dilakukan pengenceran, didapatkan aktivitas penghambatan 46,34 % pada konsentrasi 0,063 % dan 25,94 % pada konsentrasi 0,031 %. Data yang diperoleh dari konsentrasi 0,25 % hingga 0,031 % diolah sehingga didapatkan nilai IC 50 4,83 ppm.



50

Berikut ini adalah nilai IC 50 yang diperoleh dari ekstrak etanol tanaman obat Indonesia terhadap penghambatan α-glukosidase sebagai pengobatan diabetes melitus tipe 2.

Tabel 4.2. Nilai IC 50 pada ekstrak etanol tanaman obat Indonesia dan akarbose No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

Nama Tanaman Uji Herba Kenikir Buah Pare Buah Labu Siam Herba Rumput Teki Herba Meniran Daun Jarak Pagar Daun Jarak Daun Saga Manis Kacang Tanah Akar Secang Daun Secang Daun Ketepeng Daun Petai Cina Kacang Buncis Akar Dadap Kulit Batang Dadap Akarbose

Nilai IC 50 (ppm) 58,54 1861,99 484,05 37,74 2,32 29,67 22,17 231,05 459,24 8,82 58,08 27,54 50,54 73,31 4,83 272,04 503,91

Tanaman sering kali terkontaminasi oleh logam berat seperti Pb dan Hg, dimana kedua logam tersebut dapat mendenaturasi enzim dan bersifat penghambat terhadap enzim α-glukosidase (Kikkoman, 2011; Shinde et al, 2008). Ekstrak tanaman uji sebaiknya diperiksa kandungannya terhadap logam Pb dan Hg sehingga aktivitas enzim memang berasal dari ekstrak uji bukan dari kontaminasi logam berat tersebut.

4.6.

Penentuan Kinetika Penghambatan Enzim α-Glukosidase Kinetika enzim dilakukan untuk mengetahui jenis penghambatan yang

dilakukan oleh sampel terhadap enzim. Untuk menganalisis kinetika enzim, dapat digunakan plot Lineweaver-Burk, dimana sumbu x adalah satu per konsentrasi Universitas Indonesia


51

substrat (1/S) sedangkan sumbu y adalah satu per kecepatan reaksi enzim (1/V). Kinetika enzim dapat diketahui dengan melihat aktivitasnya terhadap kenaikan konsentrasi substrat, dimana konsentrasi yang digunakan adalah 1,25 mM, 2,5 mM, 5 mM, 10 mM, dan 20 mM. Penghambat yang dipilih adalah herba meniran. Hal ini didasarkan pada nilai IC 50 yang paling kecil diantara ekstrak uji yang lain atau dengan kata lain herba meniran merupakan tanaman yang paling kuat aktivitas penghambatannya terhadap enzim α-glukosidase dibandingkan tanaman uji yang lain. Konsentrasi herba meniran yang digunakan adalah 13,15 ppm dan 6,575 ppm. Plot Lineweaver-Burk, akan menunjukkan mekanisme dari penghambatan herba meniran terhadap enzim α-glukosidase. Mekanisme penghambatannya dapat berupa inhibisi kompetitif klasik, inhibisi nonkompetitif, ataupun gabungan dari dua mekanisme tersebut. Inhibisi kompetitif klasik akan memberikan perpotongan titik antara garis tanpa inhibitor dan garis berbagai konsentrasi ekstrak pada sumbu y (lihat Gambar 2.18), sedangkan inhibisi nonkompetitif akan berpotongan di sumbu x (lihat Gambar 2.19). Inhibisi kompetitif klasik terjadi pada tapak pengikatan subtrat. Kecepatan pembentukan produk bergantung hanya pada konsentrasi enzim (E)-substrat (S). Jika penghambat (I) berikatan sangat erat dengan enzim, akan hanya ada sedikit enzim bebas yang tersedia untuk berikatan dengan substrat untuk membentuk produk. Apabila penghambat tetap dan ditambahkan lebih banyak substrat, dapat meningkatkan probabilitas bahwa enzim akan lebih banyak berikatan dengan substrat dibandingkan dengan penghambat. Rasio E-S terhadap E-I dan juga kecepatan reaksi akan naik. Pada konsentrasi substrat yang cukup tinggi, konsentrasi E-I seharusnya kecil dan nyaris menghilang sehingga kecepatan reaksi yang dikatalisis akan sama seperti keadaan tanpa adanya penghambat (Murray, Granner, Mayes, & Rodwell, 2003). Pada inhibisi nonkompetitif, tidak terjadi persaingan antara substrat dan penghambat. Penghambat nonkompetitif reversibel menurunkan kecepatan reaksi maksimal yang diperoleh pada pemberian sejumlah enzim (Vmaks yang lebih rendah), tetapi biasanya tidak mempengaruhi nilai Km. Bila substrat mempunyai afinitas yang sama baiknya untuk enzim maupun untuk E-I, hasil yang terlihat Universitas Indonesia


52

akan diperoleh jika 1/V 1 diplot terhadap 1/[S] dalam keadaan dengan atau tanpa inhibitor menghasilkan nilai 1/Km yang sama (Murray, Granner, Mayes, & Rodwell, 2003). Berdasarkan nilai -1/Km atau perpotongan garis di sumbu x, persamaan garis untuk uji tanpa sampel menunjukkan nilai -1/Km adalah -0,69; untuk konsentrasi sampel 6,575 ppm; nilai -1/Km adalah -0,04; dan pada konsentrasi 13,15 ppm memiliki nilai -1/Km adalah 0,02. Hasil ini menunjukkan bahwa ada pergeseran nilai -1/Km ke arah sumbu x positif. Pada inhibisi kompetitif, terdapat pergeseran nilai -1/Km ke arah sumbu x positif, sedangkan pada inhibisi nonkompetitif tidak terjadi pergeseran nilai -1/Km (berpotongan di sumbu x). Berdasarkan nilai 1/Vmaks atau perpotongan garis di sumbu y, persamaan garis untuk uji tanpa sampel menunjukkan nilai 1/Vmaks adalah 0,4782; untuk konsentrasi sampel 6,575 ppm; nilai 1/Vmaks adalah 0,1824; dan pada konsentrasi 13,15 ppm memiliki nilai 1/Vmaks adalah -0,9509. Hasil ini menunjukkan bahwa ada pergeseran nilai 1/Vmaks ke arah sumbu y negatif. Pada inhibisi kompetitif, tidak ada pergeseran nilai 1/Vmaks (berpotongan di sumbu x) sedangkan pada inhibisi nonkompetitif terjadi pergeseran ke arah sumbu y positif. Hasil plot (lihat Gambar 4.3) menunjukkan bahwa ekstrak etanol herba meniran tidak memiliki titik potong baik pada sumbu x maupun sumbu y. Grafik ini menunjukan herba meniran memiliki mekanisme penghambatan kombinasi kompetitif atau nonkompetitif terhadap enzim α-glukosidase. Hal ini mungkin dikarenakan larutan uji yang digunakan masih berupa ekstrak kasar etanol dan belum terfraksinasi sempurna sehingga mungkin saja terdapat lebih dari satu senyawa yang memiliki aktivitas penghambatan terhadap enzim α-glukosidase (Dewi et al., 2007; Kim K. Y., Nam, Kurihara, & Kim S. M., 2008). Pengaruh penambahan substrat terhadap aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase pada konsentrasi ekstrak herba meniran dapat dilihat pada Tabel 4.31 sampai dengan Tabel 4.33.



53

Gambar 4.3. Grafik kinetika inhibisi enzim α-glukosidase pada ekstrak etanol herba meniran



BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN

5.1.

Kesimpulan

1.

Tanaman obat Indonesia yang memiliki aktivitas penghambatan terhadap enzim α-glukosidase adalah ekstrak etanol herba kenikir, buah labu siam, herba teki, herba meniran, daun jarak pagar, daun jarak, daun saga manis, kacang tanah, akar secang, daun secang, daun ketepeng, daun petai cina, kacang buncis, akar dadap, dan kulit batang dadap dengan kekuatan penghambatan yang berbeda-beda, yaitu nilai IC 50 dari 2,32 ppm sampai dengan 484,05 ppm. Aktivitas penghambatan paling kuat diberikan oleh ekstrak etanol herba meniran, akar dadap, dan akar secang dengan nilai IC 50 masing-masing 2,32 ppm; 4,83 ppm; dan 8,82 ppm.

2.

Hasil penapisan fitokimia menunjukkan bahwa semua ekstrak etanol mengandung glikosida, sepuluh ekstrak etanol mengandung terpen, sepuluh ekstrak etanol mengandung saponin, delapan ekstrak etanol mengandung flavonoid, tujuh ekstrak etanol mengandung alkaloid, tujuh ekstrak etanol mengandung tanin, dan hanya satu ekstrak etanol mengandung antrakuinon. Golongan senyawa yang terdapat pada ekstrak etanol herba meniran adalah glikosida, flavonoid, terpen, dan tanin. Akar secang mengandung glikosida, tanin, dan saponin sedangkan akar dadap mengandung glikosida dan saponin.

5.2.

Saran

1.

Untuk mendukung data penelitian ini, hendaknya dilakukan penelitian lebih lanjut dengan melakukan fraksinasi dan isolasi senyawa aktif pada herba kenikir, buah labu siam, herba teki, herba meniran, daun jarak pagar, daun jarak, daun saga manis, kacang tanah, akar secang, daun secang, daun ketepeng, daun petai cina, kacang buncis, akar dadap, dan kulit batang dadap

sehingga

tanaman

tersebut

lebih

dimungkinkan

untuk

dikembangkan dalam pengobatan penyakit diabetes melitus tipe 2. 54



55

2.

Standar yang digunakan sebagai penghambat α-glukosidase sebaiknya adalah 1-deoxinojirymycyn karena senyawa tersebut peka terhadap enzim α-glukosidase yang berasal dari khamir, bakteri, dan usus tikus.



56

DAFTAR ACUAN

Akbar, E., Z. Yaakob, S. K. Kamarudin, M. Ismail, & J. Salimon. (2009). Characteristic and Composition of Jatropha Curcas Oil Seed from Malaysia and its Potential as Biodiesel Feedstock Feedstock. Euro Journals Publishing, 29, 396-403. Champe, Pamela C., Richard A. Harvey, & Denise R. Ferrier. (2005). Lippincott’s illustrated reviews : Biochemistry. Baltimore : Lippincott Williams & Wilkins. Chan, Hsui-Hui., Han-Dong Sun, Mopur Vijaya Bhaskar Reddy, & Tian-Shung Wu. (2010). Potent α-glucosidase inhibitors from the roots of Panax japonicus C. A. Meyer var. major. Phytochemistry, 71, 11-12. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1985). Cara pembuatan simplisia. Jakarta: Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1989). Vademekum bahan obat alam. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1995a). Farmakope Indonesia. (Ed. ke-4, hal 7). Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1995b). Materia medika Indonesia VI. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (2000). Parameter standar umum ekstrak tumbuhan obat. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Dewi, Rizna T., et al. (2007). Inhibitory effect of Koji Aspergillus terreus on αglucosidase activity and postprandial hyperglycemia. Pakistan Bio. Sci., 18, 3131-3135. Diabetes

Mellitus

:

Alpha

Glucosidase

Inhibitors.

Mei

5,

2011.

http://www.rushakoff.com/inpatient%20diabetes%20course/Oral%20agent s/alpha/1.htm. Ebadi, Manuchair. (2002). Pharmacodynamic Basis of Herbal Medicine. USA: CRC Press LLC. Universitas Indonesia


57

Farnsworth, Norman R. (1966). Biological and phytochemical screening of plants. USA: American Pharmaceutical Association. Forest & Kim Starr. (2006). File:Starr 060416-7708 Cyperus rotundus.jpg. Juni 9,

2011.

http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Starr_060416-

7708_Cyperus_rotundus.jpg. Gandjar, Ibnu Ghalib & Abdul Rohman. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta : Pustaka Pelajar Yogyakarta. Gholamhoseinian, Ahmad., Hossein Fallah, Fariba Sharifi-far, Mansour Mirtajaddini. (2008). The Inhibitory effect of some Iranian plants extracts on the alpha glucosidase. Iranian J. of Basic Med. Sci., 11, 1-9. Gunawan, Didik., & Sri Mulyani. (2004). Ilmu obat alam (Farmakognosi Jilid 1). Jakarta: Penebar Swadaya. Gunawan, Sulistia G., R. Setiabudy, Nafrialdi, & Elysabeth (Ed.). (2007). Farmakologi dan terapi (Ed. ke-5). Jakarta: Gaya Baru. Goldstein, Barry J. (Ed). (2008). Type 2 Diabetes : Principles and Practice (2nd. Ed). Edition USA : Informa Healthcare. Harborne, J. B. (1987). Metode fitokimia: Penuntun cara modern menganalisis tumbuhan. Bandung: Penerbit ITB. Hong Gao & Jun Kawabata. (2008). 2-Amino resorcinol is a potent α-glucosidase inhibitor. Bioorganic Med. Chem. Lett.,18, 812–815. Ipteknet (Sentra Informasi Iptek). (2005a). Tanaman Obat Indonesia: Buncis (Phaseolus

vulgaris

L.).

Juni

8,

2011.

http://www.iptek.net.id/ind/pd_tanobat/view.php?mnu=2&id=279. Ipteknet (Sentra Informasi Iptek). (2005b). Tanaman Obat Indonesia : Dadap Serep

(Erythrina

subumbrans(Hask.)

Merr).

Juni

8,

2011.

http://www.iptek.net.id/ind/pd_tanobat/view.php?id=286. Jarald, Edwin., Joshi, Siddaheswar B., & Jain, Dharam C. (2008). Diabetes and Herbal Medicines. Iranian J. of Pharmacology & Therapeutics, 7, 97-106. Khikmawati, Wahidhah Nur. (2009). Pengaruh pemberian perasan buah labu siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap penurunan kadar glukosa darah pada kelinci jantan New Zealand yang dibebani glukosa. Surakarta : Universitas Muhammadiyah. Universitas Indonesia


58 Kikkoman. α-Glucosidase (αGLS-SE) from recombinant E.coli. Januari 6, 2011. http://202.239.155.79/bio/j/rinsyou/images/pdf/27 alphaglsse.pdf. Kim, K.Y., K. A. Nam, H. Kurihara, & S. M. Kim. (2008). Potent α-glucosidase inhibitors purified from the red alga Grateloupia elliptica. Phytochemistry, 69, 2820-2825. Manitto, Paolo. (1992). Biosynthesis of natural products (Koensoemardiyah, Penerjemah). Semarang : Penerbit IKIP. Melo, Eduardo Borgesde., Adrianeda Silveira Gomes, & Ivone Carvalhob. (2006). α- and β-glucosidase inhibitors: Chemical structure and biological activity. Tetrahedron, 62, 10277–10302. Minneman, Kenneth P., & Lynn Wecker. (2005). Brody’s human pharmacology moleculer to clinical (4th Ed.). Philadelpia: Mosby. Murray, Robert K., Daryl K. Granner, Peter A. Mayes, & Victor W. Rodwell. (2003). Biokimia harper. (Andry Hartono, Penerjemah). Jakarta: EGC. New

World

Encyclopedia.

Legume.

Juni

11,

2011.

http://www.newworldencyclopedia.org/entry/Legume. Price, Sylvia A., & Lorraine M. Wilson. (2006). Patofisiologi : Konsep klinis proses-proses penyakit (Ed. ke-6). Jakarta: EGC. PT Eisai Indonesia. (1986). Medicinal herb index in Indonesia (Indeks TumbuhanTumbuhan di Indonesia). PT Eisai Indonesia. Puteri, Maria D.P.T. Gunawan & Jun Kawabata. (2009). Novel α-glucosidase inhibitors from Macaranga tanarius leaves. Food Chem., 123, 384-389. Reynolds, James E.F. (Ed). (1982). Martindale : The extra pharmacopoeia. (28th Ed.). London: The Pharmaceutical Press. Riset dan Teknologi Indonesia. (2002). Inventaris tanaman obat jilid 1-5 seri ristek- Melestarikan warisan budaya bangsa seri ke-1). Kementerian Riset dan Teknologi. (CD-ROM) Robinson, Trevor. (1983). The organic constituents of higher plants (Their chemistry and interrelationships). Amherst : Cordus. Schäfer, Angelika., & Petra Högger. (2007). Oligomeric procyanidins of French maritime pine bark extract (Pycnogenol) effectively inhibit α-glucosidase. Diabet. Res. Clini. Pract., 77, 41-46. Universitas Indonesia


59

Schönfelder, Peter. Flora Canaria Zier- und Nutzpflanzen. Juni 11, 2011. http://www.biologie.uniregensburg.de/Botanik/Schoenfelder/kanaren/flora_canaria_NZ.html. Shinde, Jayantrao., et al. (2008). α-Glucosidase inhibitory activity of Syzygium cumini (Linn.) skeels seed kernel in vitro and in goto–kakizaki (GK) rats. Carbohyd. Res., 343, 1278–1281. Shoei-Sheng Lee, Hsiao-Ching, & Chien-Kuang. (2008). Acylated flavonol monorhamnosides, α-glucosidase inhibitors, from Machilus philippinensis. Phytochemistry, 69, 2347–2353. Sigma. (1996). Enzymatic assay of α-Gucosidase (EC.3.2.1.20). Januari 10, 2011. www.sigmaaldrich.com/.../alpha_glucosidase.../alpha_glucosidase_sed.pdf Sio-Hong Lama, Jhong-Min Chen, Chao-Jou Kang, Chung-Hsiung Chen, & Shoei-Sheng Lee. (2008). α-Glucosidase inhibitors from the seeds of Syagrus romanzoffiana. Phytochemistry, 69,1173–1178.

Sirait, Midian. (2007). Penuntun fitokimia dalam farmasi. Bandung : Penerbit ITB. Soumyanath, Amala. (2006). Traditional medicines for modern times: Antidiabetic plant. Boca Raton: Taylor & Francis Group. Sugiwati, Sri., Siswati Setiasih, & Efy Afifah. (2009). Antihyperglycemic activity of the Mahkota dewa [Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl.] leaf extracts as an alpha-glucosidase inhibitor. Makara Kesehatan, 13, 2, 74-78. Suharmiati. (2003). Pengujian bioaktivitas anti diabetes mellitus tumbuhan obat. Cermin Dunia Kedokteran No. 140. Sukandar, Elin Y., Retnosari Andrajati, Joseph I Sigit, I ketut Adnyana, A. A. P. Setiadi, & Kusnandar. (2010). ISO Farmakoterapi. Jakarta : PT. ISFI. Tanaman Obat. (n.d.). Kenikir (Cosmos caudatus H. B. K.). Juni 8, 2011. http://tanamanobat.org/443/kenikir-cosmos-caudatus-h-b-k/. Trease, George Edward. (1961). A textbook of pharmacognosy. London : Bailliere, Tindall, & Cox. Walker, Roger & Clive Edwards. (2003). Clinical pharmacy and therapeutics. (3rd ed.). London: Churchill Livingstone.



60

Wild, Sarah., Gojka Roglic, Anders Green, Richard Sicree, & Hilary King. (2004). Global prevalence of diabetes (Estimates for the year 2000 and projections for 2030). Diabet. Care, 27, 1047–1053.



61

[Sumber : “Tanaman Obat,” n.d.]

[Sumber : Ristek, 2002]

Gambar 4.4. Cosmos Caudatus Kunth (Kenikir)

Gambar 4.5. Momordica charantia L. (Paria/Pare)

[Sumber : Schönfelter, n.d.]

[Sumber : Forest & Starr, 2006]

Gambar 4.6. Sechium edule (Jacq.) Sw. (Labu Siam)

Gambar 4.7. Cyperus rotundus L. (Teki)


62


Gambar 4.8. Phyllanthus niruri L. (Meniran)


Gambar 4.10. Ricinus communis L. (Jarak)


Gambar 4.9. Jatropha curcas L. (Jarak Pagar)


Gambar 4.11. Abrus precatorius L (Saga Manis)


63

[Sumber : New World Encyclopedia, n.d]

Gambar 4.12. Arachis hypogaea L. (Kacang Tanah)


Gambar 4.14. Cassia alata L. (Ketepeng)


Gambar 4.13. Caesalpinia sappan L. (Secang)


Gambar 4.15. Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit (Petai Cina)


64

[Sumber: Ipteknet, 2005a]

Gambar 4.16. Phaseolus vulgaris L. (Kacang Buncis)

[Sumber: Ipteknet, 2005b]

Gambar 4.17. Erythrina subumbrans (Hassk.) Merrill (Dadap)


65

Gambar 4.18. Kurva serapan daun ketepeng pada panjang gelombang 400 nm Keterangan : Sumbu x menunjukkan panjang gelombang 300,0 nm sampai dengan 500,0 nm sedangkan sumbu y menunjukkan serapan yang terukur dari 0 sampai dengan 4 menggunakan spektrofotometer UVVis. Sampel yang diukur menggunakan variasi konsentrasi 1 %; 0,5 %; 0,25 %; dan 0,125 %.


Aktivitas Penghambatan (%)

66

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0

10

20

30

40

50

60

Konsentrasi (ppm)

Gambar 4.19. Kurva kalibrasi daun ketepeng dengan variasi konsentrasi ekstrak variasi konsentrasi 1 %; 0,5 %; 0,25 %; dan 0,125 %. Keterangan : Persamaan garis y = 7,1513 + 1,5557x, dengan r = 0,9991.


67

Tabel 4.3. Susut pengeringan tanaman uji No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16


Sebelum dikeringkan (g) 615 510 750 526 124 87 185 72 224 905 502 501 73 600 902 685

Setelah dikeringkan (g) 114 30 44 105 37 28 65 42 208 258 88 149 39 38 172 80


Susut Pengeringan (%) 81,46 94,12 94,13 80,04 70,16 67,82 64,86 41,67 7,14 71,49 82,47 70,26 46,58 93,67 80,93 88,32

68

Tabel 4.4. Hasil ekstraksi dan rendemen ekstrak tanaman uji No

Nama Tanaman Uji

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Herba Kenikir Buah Pare Buah Labu Siam Herba Rumput Teki Herba Meniran Daun Jarak Pagar Daun Jarak Daun Saga Manis Kacang Tanah Akar Secang Daun Secang Daun Ketepeng Daun Petai Cina Kacang Buncis Akar Dadap Kulit Batang Dadap

Berat Simplisia (g) 20,0722 20,2544 20,3305 20,1060 20,4081 20,0809 20,1999 20,0331 20,5016 20,3624 20,0021 20,0422 20,0666 20,0053 20,0212 20,2791

Volume Ekstraksi (ml) 130 150 130 280 130 150 170 160 120 150 150 170 150 120 250 150

Berat Ekstrak Kental (g) 2,4655 5,6758 8,7842 3,8217 3,7270 2,6025 5,8543 6,9634 2,3221 1,3485 6,2294 4,8956 3,1620 4,5223 3,1453 2,2747


Rendemen (%) 12,28 28,02 43,21 19,01 18,26 12,96 28,98 34,76 11,33 6,62 31,14 24,43 15,76 22,61 15,71 11,22

69

Tabel 4.5. Penapisan fitokimia golongan alkaloid No

Nama Tanaman Uji

1

Herba Kenikir

2

Buah Pare

3

Buah Labu Siam

4

Herba Rumput Teki

5

Herba Meniran

6

Daun Jarak Pagar

7

Daun Jarak

8

Daun Saga Manis

9

Kacang Tanah

10

Akar Secang

11

Daun Secang

12

Daun Ketepeng

13

Daun Petai Cina

14

Kacang Buncis

15

Akar Dadap

16

Kulit Batang Dadap

Mayer Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan putih Endapan putih Tidak ada endapan Endapan putih Endapan putih Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan putih Tidak ada endapan Endapan putih Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan putih

Bouchardart Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan cokelat Endapan cokelat Tidak ada endapan Endapan cokelat Endapan cokelat Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan cokelat Tidak ada endapan Endapan cokelat Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan cokelat

Dragendorf Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan Jingga Endapan Jingga Tidak ada endapan Endapan Jingga Endapan Jingga Tidak ada endapan Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan Jingga Tidak ada endapan Endapan Jingga Tidak ada endapan Tidak ada endapan Endapan Jingga

Keterangan : +

: Terdeteksi

-

: Tidak terdeteksi


Kesimpulan + + + + + + +

70

Tabel 4.6. Penapisan fitokimia golongan glikosida No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16


Filtrat HCl 10% cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu cincin ungu

Kesimpulan + + + + + + + + + + + + + + + +

Keterangan : +

: Terdeteksi

-

: Tidak terdeteksi


71

Tabel 4.7. Penapisan fitokimia golongan flavonoid Nama No Tanaman Uji Herba 1 Kenikir 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Buah Pare Buah Labu Siam Herba Rumput Teki Herba Meniran Daun Jarak Pagar Daun Jarak Daun Saga Manis Kacang Tanah Akar Secang Daun Secang Daun Ketepeng Daun Petai Cina Kacang Buncis

Kuning jingga

Merah jingga

Asam BoratAsam Oksalat Kuning kehijauan

Jernih

Jernih

Putih

Jernih

Jernih

Putih

Kuning muda

Jingga muda

Ungu muda

Kuning

+

Hijau

Kuning jingga

Kuning

+

Hijau

Kuning

Kuning

+

Kuning

Kuning

+

Kuning

+

Serbuk Zn

Kuning hijau Kuning jingga Merah muda Kuning jingga

Serbuk Mg

Flouresensi AlCl 3 Kuning Putih kebiruan Putih kekuningan

Kesimpulan + -

Kuning muda Kuning cokelat

Kuning hijau Merah keunguan Kuning muda Jingga cokelat Jingga cokelat Merah jingga

Kuning

Hijau

Kuning

Kuning

+

Jernih

Hijau

Merah muda

Putih Biru

-

Jernih Jernih

Kuning jingga Biru keunguan Biru muda Kuning kehijauan Hijau

Putih kebiruan Cokelat Kuning Kuning Jingga Kuning hijau

+ +

15

Akar Dadap

Jernih

Kuning cokelat

Biru ungu

Cokelat

-

16

Kulit Batang Dadap

Jernih

Jingga cokelat

Biru muda

Kuning Cokelat

-

Keterangan : +

: Terdeteksi

-

: Tidak terdeteksi


72

Tabel 4.8. Penapisan fitokimia golongan terpen No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16


Lieberman-Bauchartdart Hijau muda Cokelat Cokelat kehijauan Cokelat hitam Hijau Hijau Hijau Hijau Cokelat kemerahan Cokelat Hitam Hijau Hijau Hijau Hitam Cokelat

Keterangan : +

: Terdeteksi

-

: Tidak terdeteksi


Kesimpulan + + + + + + + + + + -

73

Tabel 4.9. Penapisan fitokimia golongan tanin

1

Nama Tanaman Uji Herba Kenikir

2

Buah Pare

No

3 4

Buah Labu Siam Herba Rumput Teki

Gelatin 10% Warna tetap Warna tetap Warna tetap Warna tetap Endapan Putih Endapan Putih Endapan Putih

NaClFeCl3 Gelatin Warna tetap Hijau tua Kuning Warna tetap kecoklatan Kuning Warna tetap kecoklatan Warna tetap Coklat Endapan Putih Endapan Putih Endapan Putih

5

Herba Meniran

6

Daun Jarak Pagar

7

Daun Jarak

8

Daun Saga Manis

Warna tetap

Warna tetap Coklat

9

Kacang Tanah

Warna tetap

Warna tetap

10

Akar Secang

11

Daun Secang

Endapan Putih Endapan Putih Endapan Putih

Endapan Putih Endapan Putih Endapan Putih

14

Daun Ketepeng Daun Petai Cina Kacang Buncis

15

Akar Dadap

Warna tetap

16

Kulit Batang Dadap

Endapan Putih

12 13

: Terdeteksi

-

: Tidak terdeteksi

-

Hijau tua

+

Hijau tua

+

Hijau tua

+ -

Kuning kehijauan

-

Hijau tua

+

Hijau tua

+

Hijau tua

+

Warna tetap

Warna tetap Coklat

-

Warna tetap

Warna tetap Coklat Jingga Warna tetap kecoklatan Endapan Hijau tua Putih

-

Keterangan : +

Kesimpulan


+

74

Tabel 4.10. Penapisan fitokimia golongan saponin No Nama Tanaman Uji 1

Herba Kenikir

2

Buah Pare

3

Buah Labu Siam

4

Herba Rumput Teki

5

Herba Meniran

6

Daun Jarak Pagar

7

Daun Jarak

8

Daun Saga Manis

9

Kacang Tanah

10

Akar Secang

11

Daun Secang

12

Daun Ketepeng

13

Daun Petai Cina

14

Kacang Buncis

15

Akar Dadap

16

Kulit Batang Dadap

Setelah 10 menit Busa setinggi 1 cm Busa setinggi 2 cm Busa setinggi 0,2 cm Busa setinggi 0,7 cm Busa setinggi 0,2 cm Busa setinggi 0,2 cm Busa setinggi 0,5 cm Busa setinggi 0,7 cm Busa setinggi 1 cm Busa setinggi 0,5 cm Busa setinggi 1,5 cm Busa setinggi 1 cm Busa setinggi 0,7 cm Busa setinggi 0,5 cm Busa setinggi 3 cm Busa setinggi 2,2 cm

Penambahan HCl 2N Busa setinggi 0,3 cm Busa setinggi 2 cm

: Terdeteksi

-

: Tidak terdeteksi

+ +

Busa hilang

-

Busa hilang

-

Busa hilang

-

Busa hilang

-

Busa setinggi 0,5 cm Busa setinggi 0,3 cm Busa hilang Busa setinggi 0,5 cm Busa setinggi 1 cm Busa setinggi 1 cm Busa hilang Busa setinggi 0,5 cm Busa setinggi 0,5 cm Busa setinggi 0,8 cm

Keterangan : +

Kesimpulan


+ + + + + + + +

75

Tabel 4.11. Penapisan fitokimia golongan antrakuinon No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16


Wash Benzene-NaOH 2N Kuning Kuning Jernih Kuning Kuning Kuning Jernih Kuning Kuning Jernih Kuning Jingga tua Kuning Kuning Jernih Jernih

Keterangan : +

: Terdeteksi

-

: Tidak terdeteksi


Kesimpulan + -

76

Tabel 4.12. Optimasi aktivitas enzim dengan konsentrasi substrat 10 mM, 20 mM, dan 40 mM Konsentrasi

Absorbansi

Substrat 10 mM 20 mM 40 mM

Absorbansi

A1

A2

Rerata

Uji (U)

1,919

1,905

1,912

Kontrol (K)

0,046

0,036

0,041

Uji (U)

1,828

1,796

1,812

Kontrol (K)

0,111

0,095

0,103

Uji (U)

1,764

1,761

1,7625

Kontrol (K)

0,234

0,220

0,227

U-K

Aktivitas Enzim U/ml

U/mg

1,871

1,9690

46,88

1,709

1,7985

42,82

1,5355

1,6160

38,48

Tabel 4.13. Optimasi aktivitas enzim dengan konsentrasi substrat 1,25 mM, 2,5 mM, 5 mM, 10 mM, dan 20 mM

Konsentrasi

Absorbansi (A)

Substrat 1,25 mM 2,5 mM 5 mM 10 mM 20 mM

Absorbansi

A1

A2

Rerata

Uji (U)

1,218

1,243

1,2305

Kontrol (K)

0,004

0,001

0,0025

Uji (U)

1,145

1,356

1,2505

Kontrol (K)

0,012

0,005

0,0085

Uji (U)

1,883

1,957

1,92

Kontrol (K)

0,007

0,013

0,01

Uji (U)

2,012

1,965

1,9885

Kontrol (K)

0,024

0,028

0,026

Uji (U)

1,846

1,858

1,852

Kontrol (K)

0,053

0,059

0,056

U-K

Aktivitas Enzim U/ml

U/mg

1,228

1,2923

30,77

1,242

1,3071

31,12

1,91

2,0101

47,86

1,9625

2,0653

49,17

1,796

1,8901

45,00


77 Tabel 4.14. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada akarbose Absorbansi A1 A2

Konsentrasi

Absorbansi Rerata

1%

Uji

1,84

1,776

1,808

( 50 ppm)

Kontrol

0,064

0,059

0,0615

0,50%

Uji

1,872

1,806

1,839

( 25 ppm)

Kontrol

0,056

0,06

0,058

0,25%

Uji

1,827

1,894

1,8605

( 12,5 ppm)

Kontrol

0,059

0,06

0,0595

0,125%

Uji

1,905

1,868

1,8865

Kontrol 0,054 0,062 B (Blanko)

0,058

( 6,25 ppm)

S1-S0

% Inhibisi

1,7465

8,56

1,781

6,76

1,801

5,71

1,8285

4,27

IC 50

503,91

1,910

Tabel 4.15. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada herba kenikir

S1

Absorbansi A1 A2 1,265 1,242

(50,75 ppm)

S0

0,213

0,225

0,219

0,50%

S1

1,738

1,65

1,694

(25,375 ppm)

S0

0,119

0,121

0,12

0,25% (12,6875 ppm) 0,125%

S1 S0

1,837 0,08 1,828

1,808 0,084 1,817

1,8225 0,082

1,7405

6,92

1,8225 0,0535

1,769

5,40

Konsentrasi 1%

(6,34375 ppm)

S1 S0

0,052 0,055 B (Blanko)

Absorbansi Rerata 1,2535

S1-S0

% Inhibisi

1,0345

44,68

1,574

15,83

IC 50 (ppm)

58,54

1,87

Tabel 4.16. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada buah pare

1% (53,3 ppm) 0,50% (26,65 ppm)

S1 S0 S1 S0

Absorbansi A1 A2 1,783 1,847 0,059 0,058 1,757 1,815 0,056 0,054

0,25%

S1

1,845

1,818

1,8315

(13,325 ppm)

S0

0,053

0,054

0,0535

0,125% (6,6625 ppm)

1,819 S1 1,843 S0 0,055 0,056 B (Blanko)

1,831 0,0555

Konsentrasi

Absorbansi Rerata 1,815 0,0585 1,786 0,055

S1-S0

% Inhibisi

1,7565

6,07

1,731

7,43*

1,778

4,92

1,7755

5,05

1,87

Keterangan *: data tidak digunakan dalam perhitungan


IC 50 (ppm)

1861,99

78 Tabel 4.17. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada buah labu siam Absorbansi

Konsentrasi

Absorbansi

1%

S1

A1 1,826

A2 1,83

Rerata

(54,15 ppm)

S0

0,051

0,047

0,049

0,50%

S1

1,882

1,867

1,8745

(27,075 ppm)

S0

0,046

0,046

0,046

0,25%

S1

1,889

1,911

1,9

(13,5375 ppm)

S0

0,047

0,044

0,0455

0,125%

S1

1,922

1,92

1,921

(6,76875 ppm)

S0

0,046

0,048

0,047

1,828

%

S1-S0

Inhibisi 1,779

5,09

1,8285

2,45

1,8545

1,07

1,874

0,03

B (Blanko)

IC 50 (ppm)

484,05

1,8745

Tabel 4.18. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada herba teki Absorbansi

Konsentrasi

Absorbansi

1%

S1

A1 0,649

(50,3 ppm)

S0

0,132

0,135

0,1335

0,50%

S1

1,356

1,359

1,3575

(25,15 ppm)

S0

0,098

0,098

0,098

0,25%

S1

1,618

1,737

1,6775

(12,575 ppm)

S0

0,082

0,083

0,0825

0,125%

S1

1,783

1,79

1,7865

(6,2875 ppm)

S0

0,075

0,076

0,0755

B (Blanko)

A2 0,678

0,6635

%

S1-S0

Rerata

Inhibisi 0,53

70,15

1,2595

29,06

1,595

10,17

1,711

3,63

1,7755


IC 50 (ppm)

37,74

79 Tabel 4.19. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada herba meniran Absorbansi

Konsentrasi

Absorbansi

S1

A1 0,207

(50,3 ppm)

S0

0,204

0,193

0,1985

0,50%

S1

0,195

0,197

0,196

(25,15 ppm)

S0

0,116

0,111

0,1135

0,25%

S1

0,167

0,165

0,166

(12,575 ppm)

S0

0,095

0,092

0,0935

0,125%

S1

0,598

0,73

0,664

(6,2875 ppm)

S0

0,075

0,076

0,0755

0,06%

S1

0,985

0,781

0,883

(3,38125 ppm)

S0

0,043

0,044

0,0435

0,031% (1,690625 ppm)

S1

1,163

0,941

1,052

0,04

0,04

1%

S0

A2 0,203

Rerata 0,205

%

S1-S0

Inhibisi 0,0065

99,67*

0,0825

95,80*

0,0725

96,31

0,5885

70,06

0,8395

55,11

1,012

45,88

IC 50 (ppm)

2,32

0,04

B 1 (Blanko)

1,9655

B 2 (Blanko)

1,87

Keterangan : * : Data tidak digunakan dalam perhitungan B 1 : Blanko untuk konsentrasi 1 % sampai 0,125 % B 2 : Blanko untuk konsentrasi 0,06 % dan 0,031 %

Tabel 4.20. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun jarak pagar Absorbansi

Konsentrasi

Absorbansi

S1

A1 0,477

(51,25 ppm)

S0

0,303

0,33

0,3165

0,50%

S1

1,032

1,047

1,0395

(25,625 ppm)

S0

0,168

0,171

0,1695

0,25%

S1

1,749

1,755

1,752

(12,8125 ppm)

S0

0,101

0,076

0,0885

0,125%

S1

1,742

1,742

1,742

(6,40625 ppm)

S0

0,078

0,076

0,077

1%

B (Blanko)

A2 0,478

0,4775

%

S1-S0

Rerata

Inhibisi 0,161

90,93

0,87

51,00

1,6635

6,31

1,665

6,22

1,7755


IC 50 (ppm)

29,67

80 Tabel 4.21. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun jarak

1%

S1


(52,05 ppm)

S0

0,204

0,197

0,2005

0,50%

S1

0,582

0,549

0,5655

(26,025 ppm)

S0

0,137

0,129

0,133

0,25%

S1

1,225

1,21

1,2175

(13,0125 ppm)

S0

0,125

0,095

0,11

0,125%

S1

1,755

1,797

1,776

(6,50625 ppm)

S0

0,083

0,08

0,0815

Konsentrasi


S1-S0

% Inhibisi

0,176

90,44

0,4325

76,52

1,1075

39,87

1,6945

8,01

B (Blanko)

IC 50 (ppm)

22,17

1,842

Tabel 4.22. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun saga manis

1%

S1


(52 ppm)

S0

0,171

0,173

0,172

0,50%

S1

1,882

1,876

1,879

(26 ppm)

S0

0,117

0,113

0,115

0,25%

S1

1,862

1,895

1,8785

(13 ppm)

S0

0,075

0,076

0,0755

0,125%

S1

1,903

1,915

1,909

(6,5 ppm)

S0

0,068

0,068

0,068

Konsentrasi


S1-S0

% Inhibisi

1,6505

10,40

1,764

4,23

1,803

2,12

1,841

0,05

B (Blanko)

IC 50 (ppm)

231,05

1,842

Tabel 4.23. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada kacang tanah Konsentrasi 1% (50,45 ppm) 0,50% (25,225 ppm) 0,25% (12,6125 ppm) 0,125% (6,30625 ppm)

S1 S0 S1 S0 S1 S0 S1 S0

Absorbansi A1 A2 1,735 1,754 0,08 0,08 1,706 1,776 0,068 0,071 1,821 1,766 0,065 0,065 1,785 1,81 0,066 0,063 B (Blanko)

Absorbansi Rerata

S1-S0

% Inhibisi

1,7445 0,08

1,6645

15,31

1,741 0,0695

1,6715

14,96

1,7935 0,065

1,7285

12,06

1,7975 0,0645

1,733

11,83

1,9655


IC 50 (ppm)

459,24

81 Tabel 4.24. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada akar secang

1%

S1


(50,3 ppm)

S0

0,183

0,19

0,1865

0,50%

S1

0,199

0,191

0,195

(25,15 ppm)

S0

0,107

0,105

0,106

0,25%

S1

0,49

0,488

0,489

(12,575 ppm)

S0

0,07

0,068

0,069

0,125%

S1

1,376

1,491

1,4335

(6,2875 ppm)

S0

0,055

0,052

0,0535

Konsentrasi


S1-S0

% Inhibisi

0,064

96,78*

0,089

95,53

0,42

78,89

1,38

30,65

B (Blanko)

IC 50 (ppm)

8,82

1,99

Keterangan : *

: Data tidak digunakan dalam perhitungan

Tabel 4.25. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun secang Absorbansi

Konsentrasi

Absorbansi

S1

A1 1,37

(50,1 ppm)

S0

0,189

0,171

0,18

0,50%

S1

1,940

1,976

1,958

(25,05 ppm)

S0

0,111

0,12

0,1155

0,25%

S1

2,14

2,212

2,176

(12,525 ppm)

S0

0,073

0,073

0,073

S1

2,188

2,189

2,1885

S0

0,053

0,053

0,053

1%

0,125% (6,2625 ppm)

A2 1,423

1,3965

%

S1-S0

Rerata

Inhibisi 1,2165

43,19

1,8425

13,95

2,103

1,78

2,1355

0,26

B (Blanko)

IC 50 (ppm)

58,08

2,1412

Tabel 4.26. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun ketepeng

1%

S1


(50,6 ppm)

S0

0,185

0,194

0,1895

0,50%

S1

1,100

1,034

1,067

(25,3 ppm)

S0

0,114

0,116

0,115

0,25%

S1

1,457

1,459

1,458

(12,65 ppm)

S0 S1 S0

0,09

0,086

1,611 0,068

1,585 0,065

0,088 1,598 0,0665

Konsentrasi

0,125% (6,325 ppm)

B (Blanko)


S1-S0

% Inhibisi

0,272

85,24

0,952

48,36

1,37

25,68

1,5315

16,92

IC50 (ppm)

27,54

1,8435


82 Tabel 4.27. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada daun petai cina Absorbansi

Konsentrasi

Absorbansi

1%

S1

A1 1,261

A2 1,169

Rerata

(50,25 ppm)

S0

0,265

0,258

0,2615

0,50%

S1

1,723

1,794

1,7585

(25,125 ppm)

S0

0,168

0,175

0,1715

0,25%

S1

1,948

1,918

1,933

(12,5625 ppm)

S0

0,12

0,116

0,118

0,125%

S1

1,93

1,95

1,94

(6,28125 ppm)

S0

0,095

0,104

0,0995

1,215

B (Blanko)

S1-S0

% Inhibisi

0,9535

51,49

1,587

19,26

1,815

7,66

1,8405

6,36

IC 50 (ppm)

50,54

1,9655

Tabel 4.28. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada kacang buncis Konsentrasi 1% (52,4 ppm)

S1



S0

0,086

0,088

0,087

0,50%

S1

1,557

1,589

1,573

(26,2 ppm)

S0

0,067

0,064

0,0655

0,25%

S1

1,644

1,6

1,622

(13,1 ppm)

S0

0,058

0,059

0,0585

0,125%

S1

1,693

1,743

1,718

(6,55 ppm)

S0

0,06

0,058

0,059

B (Blanko)

S1-S0

% Inhibisi

1,179

40,01

1,5075

23,30

1,5635

20,45

1,659

15,59

1,9655


IC 50 (ppm)

73,31

83 Tabel 4.29. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada akar dadap Absorbansi

Konsentrasi

Absorbansi

1%

S1

A1 0,185

(52,55 ppm)

S0

0,126

0,127

0,1265

0,50%

S1

0,168

0,177

0,1725

(26,275 ppm)

S0

0,08

0,079

0,0795

0,25%

S1

0,28

0,281

0,2805

(13,1375 ppm)

S0

0,063

0,06

0,0615

0,125%

S1

0,54

0,745

0,6425

(6,56875 ppm)

S0

0,046

0,043

0,0445

0,063%

S1

1,072

1,052

1,062

(3,284375 ppm)

S0

0,057

0,06

0,0585

0,031% (1,6421875 ppm)

S1

1,447

1,43

1,4385

0,054

0,053

S0

A2 0,177

Rerata 0,181

%

S1-S0

Inhibisi 0,0545

96,96*

0,093

94,81*

0,219

87,78

0,598

66,64

1,0035

46,34

1,385

25,94

IC 50 (ppm)

4,83

0,0535

B 1 (Blanko)

1,7925

B 2 (Blanko)

1,87

Keterangan : * : Data tidak digunakan dalam perhitungan B 1 : Blanko untuk konsentrasi 1 % sampai 0,125 % B 2 : Blanko untuk konsentrasi 0,06 % dan 0,031 %

Tabel 4.30. Aktivitas penghambatan α-glukosidase pada kulit batang dadap Absorbansi

Konsentrasi

Absorbansi

1%

S1

A1 1,63

(50,7 ppm)

S0

0,04

0,074

0,057

0,50%

S1

1,705

1,756

1,7305

(25,35 ppm)

S0

0,061

0,066

0,0635

0,25%

S1

1,789

1,75

1,7695

(12,675 ppm)

S0

0,055

0,051

0,053

0,125%

S1

1,787

1,759

1,773

S0

0,048

0,051

0,0495

(6,3375 ppm)

B (Blanko)

A2 1,663

1,6465

%

S1-S0

Rerata

Inhibisi 1,5895

11,32

1,667

7,00

1,7165

4,24

1,7235

3,85

1,7925


IC 50 (ppm)

272,04

84

Tabel 4.31. Pengaruh penambahan substrat terhadap aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase tanpa adanya inhibitor Konsentrasi

Absorbansi

Substrat 1,25 Mm

2,5 Mm

5 Mm

10 Mm

20 Mm

Absorbansi

A1

A2

Rerata

S1

1,008

0,879

0,9435

S0

0,015

0,009

0,012

S1

1,509

1,403

1,456

S0

0,023

0,02

0,0215

S1

1,886

1,894

1,89

S0

0,047

0,043

0,045

S1

1,72

1,979

1,8495

S0

0,064

0,073

0,0685

S1

1,74

1,901

1,8205

S0

0,126

0,127

0,1265

S1-S0 (V)

1/[Substrat]

1/V

0,9315

0,8

1,0735

1,4345

0,4

0,6971

1,845

0,2

0,5420

1,781

0,1

0,5615

1,694

0,05

0,5903

KM

1,45

Tabel 4.32. Pengaruh penambahan substrat terhadap aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase pada konsentrasi ekstrak Herba Meniran 13,15 ppm Konsentrasi

Absorbansi

Substrat 1,25 Mm

2,5 Mm

5 Mm

10 Mm

20 Mm

Absorbansi

A1

A2

Rerata

S1

0,049

0,047

0,048

S0

0,021

0,013

0,017

S1

0,089

0,086

0,0875

S0

0,017

0,014

0,0155

S1

0,22

0,13

0,175

S0

0,028

0,03

0,029

S1

0,352

0,316

0,334

S0

0,047

0,047

0,047

S1

0,563

0,754

0,6585

S0

0,087

0,087

0,087

S1-S0 (V)

1/[Substrat]

1/V

0,031

0,8

32,2581

0,072

0,4

13,8889

0,146

0,2

6,8493

0,287

0,1

3,4843

0,5715

0,05

1,7498


KM

42,73

85

Tabel 4.33. Pengaruh penambahan substrat terhadap aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase pada konsentrasi ekstrak Herba Meniran 6,575 ppm Konsentrasi

Absorbansi

Substrat 1,25 Mm

2,5 Mm

5 Mm

10 Mm

20 Mm

Absorbansi

A1

A2

Rerata

S1

0,309

0,187

0,248

S0

0,003

0,003

0,003

S1

0,692

0,664

0,678

S0

0,006

0,009

0,0075

S1

1,487

0,737

1,112

S0

0,019

0,019

0,019

S1

1,708

1,396

1,552

S0

0,062

0,04

0,051

S1

1,265

1,426

1,3455

S0

0,084

0,079

0,0815

S1-S0 (V)

1/[Substrat]

1/V

0,245

0,8

4,0816

0,670 5

0,4

1,4914

1,093

0,2

0,9149

1,501

0,1

0,6662

1,264

0,05

0,7911


KM

24,88

86

Lampiran 1. Skema Kerja Bagian Tanaman Uji Angin-anginkan hingga cukup kering, kemudian oven pada suhu 50ºC hingga bagian tanaman siap dihaluskan dengan blender/penggiling. Serbuk Simplisia Reflux dengan etanol 80% sebanyak 3 kali masing-masing selama 30 menit Ekstrak Cair Diuapkan dengan menggunakan penangas air

Ekstrak kental

Penapisan Fitokimia Alkaloid Glikosida

Uji Aktivitas Enzim α-glukosidase Optimasi Aktivitas Enzim

Uji Aktivitas Penghambatan Enzim

Flavonoid Penentuan Kinetika Enzim Terpen Tanin Saponin Antrakuinon


87 Lampiran 2. Cara Perhitungan Unit Larutan Enzim α-Glukosidase

Label yang terdapat pada kemasan enzim α-glukosidase adalah 16,5 mg; 26 % protein; 179 Unit/mg protein. Jumlah protein =

x 16,5 mg serbuk = 4,29 mg protein

Perbandingan jumlah protein dengan total massa serbuk =

 1 mg protein

3,85 mg serbuk

179 unit

x 179 Unit = 767,14 Unit Jadi, dalam 1 kemasan enzim α-glukosidase mengandung 767,14 unit. Penimbangan enzim α-glukosidase untuk pengujian sejumlah 4,2 mg serbuk. x 179 unit = 195,27 unit 4,2 mg enzim α-glukosidase dilarutkan dalam 100 ml dapar fosfat pH 7,0 sehinggga menjadi 1,9527 unit/ml. Pengenceran larutan enzim α-glukosidase Pengenceran pertama, diambil 4,0 ml larutan enzim dan dilarutkan dengan dapar fosfat pH 7,0 hingga volume 100,0 ml. x 1,9527 unit/ml = 0,078 unit/ml Pengenceran kedua, diambil 7,0 ml larutan enzim dan dilarutkan dengan dapar fosfat pH 7,0 hingga volume 10,0 ml. x 0,078 unit/ml = 0,05 unit/ml (unit enzim yang digunakan untuk uji aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase)


88

Lampiran 3. Shaking Bath Incubator

Gambar Shaking Bath Incubator Keterangan: Shaking Bath Incubator merupakan alat yang digunakan untuk menginkubasi larutan uji pada suhu 370C.


89

Lampiran 4. Spektrofotometer UV-Vis

Gambar Spektrofotometer UV-Vis


90

Lampiran 5. Surat Determinasi Tanaman


91

(lanjutan)


92

(lanjutan)


93 Lampiran 6. Sertifikat Analisis Enzim α-Glukosidase


UNIVERSITAS INDONESIA

Recommend Documents